亚栖热菌透性化细胞的耦合固定化研究
《生物工程导论》考试重点
生物工程导论1、生物工程的研究对象包括活的生物体或它们的一部分。
2、基因工程中一般都使用松弛型质粒载体。
两种常用的质粒载体为pBR322和pUC19.3、用于原核生物宿主的载体：①质粒载体。
②噬菌体载体。
③柯斯质粒：用于真核生物宿主的人工载体大多具有大肠杆菌质粒的耐药性或噬菌体的强感染力，同时还应满足携带真核生物目的基因大片段DNA的要求。
4、质粒载体：①质粒载体pBR322（原核质粒常见）②pUC195、用于真核生物宿主的载体：①YIP载体。
②YRP载体。
③YAC载体。
④其他质粒：BAC是以细菌F因子为基础组建的细菌克隆体系。
6、用于植物宿主的载体：①Ti质粒。
7、基因组文库的筛选：⑴DNA杂交法。
双链DNA分子可以通过热处理或碱变性的方法变性成单链DNA分子。
加热后缓慢冷却的过程称为退火。
退火后有的DNA分子的两条链分别来自于不同的DNA分子，即形成了杂合DNA分子。
⑵免疫反应法：若一个目的基因DNA序列可以转录和翻译成蛋白质、那么只要出现这种蛋白质，甚至只需要该蛋白质的一部分，就可以用免疫的方法检测。
⑶酶活性法：如果目的基因编码一种酶，而这种酶又是宿主细胞所不能编码的，那么就可以通过检查酶活性来筛选目的基因的重组子。
8、将外源重组分子导入受体细胞的方法很多，其中转化（转染）和转导主要适用于原核的细菌细胞和低等的真核细胞（酵母），而显微注射和电穿孔则主要应用于高等动植物的真核细胞。
转化过程包括制备感受态细胞和转化处理。
9、1982年，第一基因工程药物人胰岛素就在美国的EliLilly公司研究成功并投放市场。
第一类基因工程药物主要针对因缺乏天然内源性蛋白所引起的疾病。
第二类基因生物工程药物属于酶类。
第三类基因工程药物属于疫苗。
第四类产物单克隆抗体既能用于疾病诊断，又能用于治疗。
10、1989年我国第一个基因工程药物干扰素-alb上市，标志着我国基因工程制药实现了零的突破。
11、在基因组工程研究中，采用的载体是人工染色体。
微生物学思考题答案
微生物学思考题答案1、你如何使你的朋友相信微生物不仅仅是一种病原？尽管目前微生物仍在严重威胁人类的生存，但另一方面，我们必须强调，大多数微生物对人类是无害的。
事实上，大多数微生物对人类社会还有巨大的价值。
整个农业系统在许多方面都依赖微生物的活动。
许多主要的农作物属于豆科植物，它们的生长同专一性细菌紧密相连，这些细菌可在植物的根部形成根瘤结构。
根瘤结构中，大气中的氮转变成可用于生长的氮化物。
根瘤细菌的固氮活动，减少了昂贵肥料的需要。
微生物在农业上的另一个重要性在于，某些动物是反刍动物，这些主要的农业动物具有瘤胃，微生物在瘤胃中进行消化。
没有这些微生物牛羊的饲养是不可能的。
植物营养方面，微生物在碳、氮、硫这些重要营养成分的循环起着关键作用。
土壤和水中的微生物可见这些元素转化成植物容易利用的形式。
微生物与食品的关系，不仅仅是产生腐败变质等不利影响。
奶制品的制造至少部分是借助微生物的活动，包括乳酪、酸乳酪和黄油，都是主要的具有经济价值的产品。
泡菜、腌制食品和一些腊肠也归功于微生物的活动。
可烘焙的食品及乙醇的制造也基于酵母菌的发酵。
微生物在能源生产方面也起着重要作用。
天然气是细菌作用的产物，由甲烷细菌代谢产生。
光营养的微生物能够收集太阳能生产生命有机体中的储存物――生物量。
废物如生活垃圾、剩余谷物、动物废料等通过微生物转化微生物燃料――甲醇和乙醇。
利用微生物清理被人类活动污染的大气――生物整治。
利用微生物降解油污、溶剂、杀虫剂和其他环境污染物。
通过基因操纵技术，能在微生物种生产出人类胰岛素。
利用基因组学方法搜索带几百个目的蛋白的基因蓝图，然后将它们转入到合适的受体中由于生产重要的、有商业价值的蛋白质。
在自然界中，它无限小，但作用无限大。
2、胡克和列文虎克对微生物学的贡献有那些？科恩对微生物学的贡献有那些？1665年，罗伯特.胡克描述了霉菌的子实体结构，因此他是第一个描述微生物的人。
1676年，列文虎克在研究辣椒水渗出的过程中发现了细菌，因此他是首次描述细菌的人。
细胞生物学小题
《细胞生物学》复习题一、填空：1. 生命体是多层次、非线性、多侧面的复杂结构体系。
2. 细胞是生命体的结构与生命活动的基本单位，有了细胞才有完整的生命活动。
3. 细胞生物学的突出特点在于：研究内容之深刻（涉及生命机理的一切水平都要探讨）和研究范围之广泛（一切生命现象都要涉及到）。
4. 细胞生物学与分子生物学(包括分子遗传学与生物化学) 相互交叉渗透与融合是总的发展趋势。
5. 没有显微镜就不可能有细胞学诞生。
6. 光学显微镜是以可见光（或紫外线）为光源的。
电子显微镜是以电子束为光源。
扫描隧道显微镜是以隧道效应{隧道电流} 为光源的。
7. 在光镜（光学像）中由于被检物各部分结构不同，因而吸收或反射光线强弱程度差异而引起亮度差或色度差。
在电镜中，由于被检物各不同部位对入射电子具有不同散射度而引起浓淡差。
8.荧光显微镜光源为（紫外光或蓝紫光），波长较短，分辨力高于普通显微镜；有两个特殊的（滤光片）；照明方式通常为落射式。
9.偏光显微镜用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等。
10.当代显微镜的发展趋势是：采用组合方式，集普通光镜加相差、荧光、暗视野、DIC、摄影装置装置于一体；自动化与电子化。
11.超薄切片通常以锇酸和戊二醛固定样品，丙酮逐级脱水，环氧树脂包埋，以热膨胀或螺旋推进的方式切片，重金属（铀、铅）盐染色。
12.冰冻蚀刻的标本置于干冰或液氮中冰冻。
然后用冷刀骤然将标本断开，升温后，冰升华，暴露出了断面结构。
向断裂面上喷涂一层蒸汽碳和铂。
然后将组织溶掉，把碳和铂的膜剥下来，此膜即为复膜13.扫描电镜的图像富有立体感、真实感、易于识别和解释。
14.Feulgen（福尔根）反应可用于显示糖和脱氧核糖核酸。
15.放射自显影术将放射性同位素标记的化合物( 前体物 )导入生物体内，经过一段时间后，制取切片，涂上卤化银乳胶，经放射性曝光，使乳胶感光。
16.放射自显影术常用3H-TDR来显示 DNA ，用3H-UDR显示 RNA 。
2022-2023学年江苏省新高考基地学校高三12月第三次大联考生物试题
2022-2023学年江苏省新高考基地学校高三12月第三次大联考生物试题1.以碳链为骨架的多糖、蛋白质、核酸等大分子，构成了细胞生命大厦的基本框架，相关叙述错误的是（）A．大分子是单体的聚合物，元素组成不完全相同B．单体的种类不同导致纤维素和淀粉结构不同C．蛋白质结构的多样性决定了其功能的多样性D．核酸分子的多样性是生物多样性的根本原因2.图为人体细胞的电镜观察照片，乙为溶酶体，相关叙述错误的是（）A．细胞器甲、溶酶体均参与该细胞生物膜系统的组成B．清除衰老细胞器甲的过程与溶酶体作用密切相关C．细胞器甲内膜向内折叠有利于葡萄糖分解为丙酮酸D．溶酶体起源于高尔基体的过程需要细胞器甲参与3.下列关于细胞衰老、凋亡和癌变的叙述，正确的是（）A．都涉及到某些特定基因的表达B．都是由某些基因发生突变引起的C．都对个体的生长发育起有害作用D．都是细胞生命历程的必经过程4.下列关于“绿叶中色素的提取和分离”实验的相关叙述，正确的是（）A．选择木本植物的蜡质叶片有利于研磨和细胞中色素的释放B．颗粒较大的二氧化硅可能吸附较多的色素从而减少提取量C．为了保证分离效果，只能在滤纸条的一面连续画滤液细线D．为加快滤纸条上色素间相互分离，应在密闭的实验室中进行5.显微观察洋葱根尖细胞的有丝分裂和水稻未成熟花药的减数分裂，均能看到（）A．分裂前期染色体复制后形成的四分体B．分裂中期染色体排列在细胞的中央C．同源染色体的姐妹染色单体间发生互换D．分裂后期同源染色体分到细胞两极6.真核生物细胞核中某基因的转录过程如图所示。
下列叙述正确的是（）A．转录以细胞核中四种脱氧核糖核苷酸为原料B．转录不需要先利用解旋酶将DNA的双螺旋解开C．转录成的RNA链与不作为模板的DNA链碱基互补D．该基因的多个部位可同时启动转录以提高效率7.某品系果蝇体内的两对常染色体发生如下图所示的染色体易位，灰身（B）对照色（b）为显性，裂翅（D）对非裂翅（d）为显性。
细胞生物学重点
细胞生物学重点1、细胞生物学概念细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律的科学，它从不同层次(显微、亚显微与分子水平)上主要研究细胞结构与功能，细胞增殖、分化、衰老与凋亡，细胞信号转导，细胞基因表达与调控，细胞起源与进化等。
2、细胞生物学的主要研究内容。
当前细胞生物学研究内容大致归纳为以下领域:(一)细胞核、染色体以及基因表达的研究(二)生物膜与细胞器的研究(三)细胞骨架体系的研究(四)细胞增殖及其调控(五)细胞分化及其调控(六)细胞的衰老与凋亡(七)细胞的起源与进化(八)细胞工程 3、细胞的基本概念细胞是生命活动的基本单位，一切有机体都由细胞构成，细胞是构成有机体的基本单位，细胞具有独立的、有序的自控代谢体系，细胞是代谢与功能的基本单位，是有机体生长与发育的基础，是遗传的基本单位，细胞具有遗传的全能性，没有细胞就没有完整的生命。
4、原核细胞核真核细胞的区别:1原核细胞没有核膜真核有核膜2原核除了有核糖体没有其他细胞器3原核的细胞膜和真核的不一样4细胞分裂方式不一样5、植物与动物细胞的比较植物细胞特有的结构:细胞壁、液泡、叶绿体6、生物膜的结构模型目前对生物膜结构的认识可归纳为:(1)具有极性头部和非极性尾部的磷脂分子在水相中具有自发形成封闭的膜系统的性质。
磷脂分子以疏水性尾部相对，极性头部朝向水相形成脂分子层，它是组成生物膜的基本结构成分，尚未发现在生物膜结构中起组织作用的蛋白。
但在脂筏中存在某些有助于其结构相对稳定的功能蛋白(2)蛋白分子以不同的方式镶嵌在脂层分子中或结合在其表面，蛋白的类型、蛋白分布的不对称性菜其脂分子的协同作用赋予生物膜各自的特性与功能。
(3)生物膜可看成是双层脂分子中嵌有蛋白质的二维溶液。
然而膜蛋白与膜脂之间，膜蛋白与膜蛋白之间及其与膜两侧其他生物分子的复杂的相互作用，在不同程度上限制了膜蛋白和膜脂的流动性，同时也形成了赖以完成多种膜功能的脂筏等结构。
7、膜脂的成分;膜脂的运动方式膜脂的成分主要包括磷脂、糖脂和胆固醇。
甘肃2024普通高中学业水平合格性考试试题(生物学)
甘肃2024普通高中学业水平合格性考试试题（生物学）本试卷满分100分，考试时间60分钟。
一、选择题:本题共20小题,每小题3分,共60分。
在每小题给出的四个选项中,只有一项是符合题目要求的。
1.生命系统最基本的结构层次是（）A.细胞B.组织C.器官D.系统2.构成叶绿素分子的元素有（）A.钠B.镁C.铁D.钙3.检测豆浆中的蛋白质时,可选用的试剂是（）A.双缩脲试剂B.苏丹Ⅲ染液C.斐林试剂D.碘液4.糖尿病人需要限量摄入淀粉,因为淀粉彻底水解后的产物是（）A.氨基酸B.脂肪酸C.葡萄糖D.脱氧核糖5.精子和卵细胞识别的实例,说明细胞膜具有的功能是（）A.维持细胞形态B.将细胞与外界环境分隔开C.控制物质进出细胞D.进行细胞间的信息交流6.人体中二氧化碳通过细胞膜的方式是（）A.自由扩散B.协助扩散C.主动运输D.胞吞7.下图为某细胞亚显微结构示意图,图中标注的细胞器名称错误的是（）8.日常生活中细胞呼吸原理应用广泛,以下分析错误的是（）A.花盆里的土壤板结后要及时松土,有利于根细胞的有氧呼吸B.慢跑可以促进无氧呼吸,有利于细胞获得较多能量C.低温、低氧环境可减弱水果的呼吸作用,有利于延长保质期D.包扎伤口时选用透气的创可贴,可以抑制厌氧菌的繁殖9.有丝分裂是一个连续的过程,人们根据染色体行为把它分为前期、中期、后期、末期四个时期。
下列分裂时期与特点对应错误的是（）A.前期——每条染色体包括两条由一个着丝粒连接着的染色单体B.中期——每条染色体的着丝粒排列在赤道板上C.后期——姐妹染色单体分开成为两条染色体D.末期——每个着丝粒分裂成两个10.科学家研发出了一种类似肾脏的器官,该器官含有多种类型的细胞,这些细胞最初都中一种多能干细胞发育而来。
以上多种细胞形成的生理过程属于（）A.细胞癌变B.细胞分化C.细胞衰老D.细胞凋亡11.利用杂交育种技术毕生追求“禾下乘凉梦”的我国科学家是（）A.翟中和B.施一公C.屠呦呦D.袁隆平12.大熊猫前后代含有的染色体数目相同,对此起决定作用的过程是（）A.减数分裂B.减数分裂和受精作用C.无丝分裂D.有丝分裂和受精作用13.下图为果蝇X染色体上部分基因示意图,相关叙述正确的是（）A.一条染色体上有多个基因B.基因在染色体上不呈线性排列C.朱红眼和截翅是一对相对性状D.X染色体只存在于雄果蝇体内14.下列基因型中,属于纯合子的是（）A.aaBbB.AaBbC.AAbbD.Aabb15.下图所示的染色体结构的变异类型是（）A.染色体的某一片段缺失B.染色体中增加某一片段C.染色体的某一片段位置颠倒D.染色体的某一片段移接到另一条非同源染色体上16.下图表示母亲生育年龄与子女唐氏综合征发病率之间的关系。
云南热泉亚栖热菌质粒与其部分表型关系的初步研究
（ 昆明理工大学 清华大学生物 资源开发工程研究所 ， 云南 昆明 ６０ ２ ） ５ ２ ４ 摘 要 ： 从云南洱源 、 冲热泉分离到 １８株专性嗜热非芽孢 菌， 腾 ０ 经形态 、 革兰 氏染色及生理 生化实验初步
鉴定为亚栖热菌 。通过碱裂解及试剂盒｝Ｉ 『 ｆ 提质粒 ， 琼脂糖凝胶电泳检测 ，３株菌含有质粒 。用 Ａ Ｓ Ｓ对 Ｒ ７一 １ Ｏ、Ｄ Ｈ１ Ｈ进行化学 消除后对 比消除前后色素和耐高温性变化 ， 显示与质粒无决定性关系。 关键词 ： 亚栖热菌 ； 质粒 ； 消除
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２０ ０ ７年 ４月
云 南 化 工
Ｙ ｎ ａ ｈ ｍｉａ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ｕ ｎ ｎ Ｃ ｅ ｃ ｌＴ ｃ ｎ ｌ ｇ
Ａｐｒ ２ ０ ，０７
第３ ４卷 第 ２期
Ｖ０． ４． ．２ １ ３ Ｎｏ
云 南热 泉 亚栖 热 菌质 粒 与 其部分 表 型关 系的初 步研 究
Ｔ ｃ ｎｌ ｙ ｉｇ ｕ ｎｖｒｉ ， ｕ ｍｉ ５ ２４， ｈｎ ） ｅｈ ｏ ｇ —Ｑ ｎｈａＵ ｉ ｓ ｔ Ｋ ｎ ｎ ６ ０２ Ｃ ｉａ ｏ ｅ ｙ ｇ
Ａｂ ｔ ａ ｔ １ ８ ｓｒ ｉ ｓｏ ｈ ｒ ｐ ｉ ｅ Ｍｅ ｏｈ ｒ ｓｒ ｓ ｃ ｕ ｒ ｓ ｌ ｔｄ ｆｏ ｈ ｔ ｐ ｉ ｇ ｎ Ｅｒｕ ｎ ａ ｅ ｇ ｈ ｎ ｓ ｒ ｃ ： ０ ｔ ｎ ｆｔｅ ｍｏ ｈ ｌ ｉｔ ｅ ｍｕ ｏ ａ ｅ ｓｗｅ ｅｉｏ ａ ｅ ＇ ａ ｉ ｉ ｍ ｏ ｒｎ ｓｉ ｙ ａ ｎｄ Ｔ ｎ ｃ ｏ ｇ ｓ
中 图 分 类号 ： Ｑ ３ ９４ 文献标识码 ： Ａ 文章 编 号 ： １０ ０ ４—２５ ２ ０ ）２—０ ７ ｏ ７ Ｘ（０ ７ ０ ０ １一 ４
辽宁省东北育才学校高三高考适应性测试(二)生物
绝密★使用前东北育才学校2022-2023学年度高考适应性测试（二）高三生物考生注意：1.本试卷共100分,考试时间75分钟。
分三大题，25小题，共10页2.请将各题答案填写在答题卡上。
3.本试卷主要考试内容：高考全部内容一、选择题：本题共15小题，每小题2分,共30分。
在每小题给出的四个选项中,只有一项是符合题目要求的。
1．铁元素对机体氧的运输、储存具有重要作用。
血液中的铁离子和转铁蛋白形成复合物进行运输，当复合物与细胞膜上的转铁蛋白受体结合后，促进胞吞小泡的形成。
胞吞小泡主动从细胞质中吸收H+，便于铁离子在小泡内与转铁蛋白分离。
下列说法错误的是（）A．转铁蛋白受体是一种铁的载体蛋白B．形成胞吞小泡时需要消耗细胞的能量C．胞吞小泡的膜上具有H+的载体蛋白D．细胞内的亚铁离子可以参与血红蛋白的合成2．细胞代谢中某种酶与其底物、产物的关系如图所示。
下列叙述正确的是A．酶1有两种底物且能与产物B结合，因此酶1不具有专一性B．产物B与酶1变构位点的结合是不可逆的C．产物B浓度高低变化可调节酶1活性，有利于维持产物B含量的稳定D．增加底物的浓度能解除产物B对酶1活性的影响3．用打孔器在某植物的叶片上打出多个圆片并用气泵抽出叶片内气体直至沉底，然后将等量的叶圆片分别转至含有等浓度的NaHCO3溶液的多个培养皿中，然后给予一定的光照，在相同且适宜的条件下，测量不同温度下的叶圆片全部上浮至液面所用的平均时间，如图所示。
下列说法正确的是（）A．上浮至液面的时间可反映净光合速率的相对大小B．在ab段，随着水温的增加，净光合速率逐渐减小C．叶片真正光合作用的最适温度一定位于bc段D．在cd段，主要是由于NaHCO3浓度下降、CO2减少导致上浮时间延长4．下图甲表示细胞内某种物质的合成和转运过程，图乙表示胰岛素合成和分泌过程中的细胞膜、内质网膜和高尔基体膜的面积变化。
下列有关叙述错误的是（）A．图甲的C 物质是蛋白质，结构A 是核糖体，C 物质形成的方式是脱水缩合B．属于图甲C 类物质的是呼吸酶、线粒体膜的组成蛋白和血红蛋白C．若G 是合成D 物质的原料，则G 物质所经过的结构依次是细胞膜→内质网→高尔基体→ 细胞膜D．图乙中①②③分别表示内质网膜、高尔基体膜、细胞膜5．下图为人体某器官中血液的流动情况示意图。
江西省2024届新高考九省联考 生物试题(含解析)
有干燥的定性滤纸条（其一端剪去两角，并在这一端底部 1cm 处画有一条细的横线）、
天平、玻璃漏斗、尼龙布等充足的实验材料和用具，按步骤简要写出实验过程（根据需
要可自行加步骤，不限于 3 步）：
①
②将材料剪碎，分别置于不同研钵中，加入等量溶剂后充分研磨
③
20．体温相对稳定是内环境稳态的重要方面。机体在各系统和器官的协调下维持体温稳
极体（分裂过程正常）。下列关于这 3 个极体的叙述，正确的是（ ）
A．可能都不含色盲基因
B．可能都含色盲基因
C．可能有 1 个含色盲基因
D．可能有 2 个含色盲基因
三、非选择题：本题共 5 小题。
17．珊瑚礁生态系统可为海洋生物提供食物和栖息地，对海洋生态系统有重要的作用。
如果全球平均温度持续升高，会破坏珊瑚礁生态系统。回答下列问题：
比为 1：1）方式开展实验（所有实验组接种总量一致）结果如表，由表可以看出菌株 A
和 B 混合接种比单独接种对蒽的降解效果更好，其原因可能是
。
接种方式
单独接种 菌株 A 菌株 B
混合接种
降解率（%） 41.7 20.9
65.2
19．莲叶桐是修复海岸生态系统的优良树种之一、为探究光照强度对莲叶桐幼苗生理特 性的影响，研究人员选取生长状态良好且长势一致的莲叶桐幼苗，用一、二、三层造荫 网分别对莲叶桐幼苗进行遮前处理（记为 T1、T2、T3，网层数越多，遮荫效果越好）， 对照不遮荫处理，其他条件一致。一段时间后，测定相关数据见下表（表中叶绿素 SPAD 值越大，表示叶绿素含量越高）。回答下列问题：
rRNA 基因。为了验证提取基因组 DNA 是否成功，采用二苯胺试剂鉴定，其原理是
。
在 PCR 扩增 16SrRNA 基因过程中，反应体系中引物的作用是 。在 PCR 播环的 3
智慧树知到《微生物生物学》章节测试答案
智慧树知到《微生物生物学》章节测试答案第一章1、当今，一种新的瘟疫正在全球蔓延，它是由病毒引起的()。
A:鼠疫B:天花C:艾滋病(AIDS)D:霍乱答案: 艾滋病(AIDS)2、微生物在整个生物界的分类地位，无论是五界系统，还是三域(domain)系统，微生物都占据了( )的“席位”。
A:少数B:非常少数C:不太多D:绝大多数答案: 绝大多数3、微生物是人类生存环境中必不可少的成员，有了它们才使得地球上的物质进行循环，否则地球上的所有生命将无法繁衍下去。
A:对B:错答案: 对4、由于现代生物技术的应用，尤其是基因治疗和基因工程药物的产生，许多已被征服的传染病，例如：肺结核、疟疾、霍乱、天花等，不可能有“卷土重来”之势。
A:对B:错答案: 错5、当今研究表明：所有的细菌都是肉眼看不见的。
A:对B:错答案: 错第二章1、为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，并在使用前进行高温干热灭菌。
A:对B:错答案: 错2、所有的微生物都能在固体培养基上生长，因此，用固体培养基分离微生物的纯培养是最重要的微生物学实验技术。
A:对B:错答案: 错3、所有的培养基都是选择性培养基。
A:对B:错答案: 对4、细菌的下列哪项特性一般不用作对细菌进行分类、鉴定?A:球菌的直径B:球菌的分裂及排列C:杆菌的直径D:杆菌的分裂及排列答案: 杆菌的分裂及排列5、( )不是鉴别染色。
A:抗酸性染色B:革兰氏染色C:活菌染色D:芽孢染色答案: 活菌染色6、用稀释摇管法所获得的微生物都是厌氧微生物。
A:对B:错答案: 错7、与其他电子显微镜相比，扫描隧道电子显微镜可以对活体样本进行观察。
A:对B:错答案: 对8、科学家通过设计（）分离培养出特定环境中生长的微生物，尽管之前对这类微生物一无所知。
A:富集培养B:选择平板C:稀释摇管D:二元培养答案: 富集培养9、用于微生物传代保藏的方法有（）A:琼脂斜面B:培养平板C:摇瓶发酵D:半固体琼脂柱答案: 琼脂斜面,培养平板,半固体琼脂柱10、对光学显微镜影响最大的是（）A:目镜B:物镜C:聚光镜D:总放大倍数答案: 总放大倍数第三章1、在真核微生物的线粒体中，参与TCA循环的酶系存在于()中。
亚栖热菌产海藻糖合酶培养基的优化
地保 护生 物分 子结构 不被破 坏 ， 从而维 持 生命体 的生命 过 程和 生物特 征 ， 食 品 、 在 化妆 品、 分子 生物 学 、 医
学和农 业等领 域拥有 广 阔的应用前 景 ． 卅］
２ 世纪 ９ ０ ０年代初 ， 海藻糖 的制备 方法 主要是 提取 法和 微生 物发酵 法 ， 随着 一些可 生成海 藻糖 的新 但 型酶制 剂的发 现 ， 酶催 化法成 为研究 的热 点． ，９ ３ 日本 林原 生化研 究所 的科研 人员 首次从 节杆 菌 中 如 １９ 年
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分子 内转糖 苷反应 ， 即由 ａ１ ４键转 变为 ａ１１ ， 而可将 麦 芽糖转 化 为海 藻 糖 ， 一， 一，键 从 是大 规模 制备海 藻糖 的
另一个 新途径 ．
酶催化 法得 以实现 的前 提是 获得 有关 的酶 制剂 ， 目前 无论 国 内还是 国 际市场 均无 相关 的酶制 剂商 但 品 出售． 实 验 室筛选 出一株 产 海 藻糖 合 酶 的 嗜热 菌 一亚 栖 热菌 Ｃ Ｓ ０ 本 Ｂ 一 １菌株 ， 菌所 产 海 藻糖 合 酶在 该
Ｖ０． １ Ｎ １ １４ ９
Ｆｅ ２ ８ ｂ． ００
文 章 编 号 ：０ ６ — ９ ２ ２ ０ ） １ ０ ２ — ６ ４ ５７４ （０ ８ ０—０ ７０
亚 栖 热 菌产 海 藻 糖 合 酶培 养基 的优 化
陈晓云， 张 峻， 陈 颖， 齐 欣， 魏雪生
（天 津 市 园艺 工程 研 究 所 ， 津 ３ ０ ８ 天 ０ ３ ４）
摘要 ： 亚栖热菌 Ｃ Ｓ０ 对 Ｂ 一１菌 株 发 酵 生 产 海 藻 糖 合 酶 的 培 养 基 进 行 了优 化 ． 先 通 过 碳 源 、 源 实 验 ， 出 首 氮 选 了适 宜 的 碳 、 源 ， 氮 随后 采 用 Ｐａｋ ｔ Ｂ ｒ ｎ设 计 法 对培 养 基 中 的组 分 进 行 了筛 选 ， 出 影 响 产 酶 的 主 要 因 素 ｌｃｅｔ ｕｍａ — 找
东南大学农学院2021级《细胞生物学》考试试卷(343)
东南大学农学院2021级《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（35分，每题5分）1. α、β、和γ三种类型的肌动蛋白都存在于肌细胞中。
（）答案：错误解析：只有α肌动蛋白存在于肌细胞中。
2. 细胞外基质中的分泌蛋白主要是从高尔基体分泌小泡中分泌到细胞外的。
（）答案：正确解析：分泌蛋白细胞质主要在粗面内质网上合成，在进入高尔基体加工修饰，通过膜泡运输的方式分泌到细胞外基质中。
3. 经过流式细胞仪分离出来的细胞不能继续培养。
（）答案：错误解析：如果染色线粒体过程不影响细胞活性，经流式细胞仪分离出来的细胞可以继续培养。
4. 所谓Hayrick界限就是指细胞分化的极限。
（）答案：错误解析：Hayrick界限是指正常的体外培养的细胞寿命不是无限的，而只能进行有限系数依泉的增殖，即细胞分裂的极限。
5. 温度敏感突变体是研究细胞周期控制蛋白的有用突变体。
（）答案：正确解析：该实验利用了所谓的条件突变体。
条件突变体所稳定产生的核酸在某一温度下是稳定的、有功能的，但在其他温度市场条件下，则变得不稳定且失去介面。
细胞可以在突变蛋白正常工作的温度下培养，然后到蛋白质功能丧失的温度下培养。
6. 微管在着丝粒处成核然后连接至动粒。
（）答案：错误解析：微管在中心体处成核组装，然后连接到动粒。
7. 在生物发育过程中，DNA的甲基化是诱导相关基因活化表达的条件之一。
（）答案：错误解析：DNA乙酰化一般是诱导相关基因活化表达的条件之一，而前体一般与基因表达的阻抑有关。
2、名词解释（40分，每题5分）1. isodensity centrifugation答案：isodensity centrifugation的中文名称是等密度离心，是指根据指由被分离样品的密度差异来分离样品的方法。
纳米农药风险评价研究进展
农药是农业生产中重要的生产资料，目前依然是控制农作物病虫草害最直接、最有效的手段，在全球粮食生产过程中发挥着不可替代的作用。
据WHO统计，到21世纪80年代全球人口将超100亿，这要求全球粮食产量在当前的基础上至少增加50%。
不断减少的耕地面积和不断增加的粮食需求，要求更多的或更有效的植保产品投入使用。
但是，为了追求产量，盲目、不科学地使用农药，会给生态安全和人类健康安全带来不可估量的危害。
近年来，纳米科技在农业领域发展迅速，已经在新型农药制剂、肥料、生物传感器、植物生长调节剂、土壤修复等多个领域广泛应用。
纳米农药是指利用纳米材料或者纳米制备技术与设备，将原药、载体、助剂等配制成纳米尺度的新剂型。
目前，在纳米农药制备、表征及有效性方面已有大量的研究报道。
相对于传统常规农药，纳米农药可增加农药运输储藏过程中有效成分的稳定性，可提高田间喷施过程中有效成分的延展性、湿润性和靶标吸附性；另外结合纳米材料可实现有效成分的智能控释。
Melanie等系统分析了已经报道的78篇关于纳米农药有效性的文章，结果表明纳米农药对靶标生物的防治效果相对传统农药提高了20%～30%。
在农业生产中，纳米农药可通过提高药效和减少流失来提高农药利用率，减少有效成分施用量，符合农业可持续发展的要求。
任何一项新技术都有两面性，纳米农药也不例外。
虽然纳米农药可以通过减少农药有效成分施用量而减少环境和人群在农药中暴露量，但是纳米农药可能通过提高有效成分生物有效性、改变有效成分富集代谢行为或作用机制增加了潜在的环境风险和健康风险。
另外，纳米材料本身以及纳米材料与农药有效成分组成的复合物对环境安全和人类健康的影响也存在不确定性。
目前，我国还未有纳米农药取得登记和商业化，主要是由于目前现有的农药登记风险评价方法是否适用于纳米农药还有待商榷。
本文系统梳理了目前纳米农药研发及其环境风险和健康风险研究现状，旨在为纳米农药的科学使用和准确评价提供依据。
最新：第4章 固定化酶和固定化细胞-文档资料
有些情形下，由于产物分子在靠近膜面的位置逐渐积 聚而形成凝胶层，造成酶膜反应器中严重的产物抑制 降低了生产效率。 浓差极化和膜污染使酶膜反应器的传质速率和生产能 力急剧下降，膜孔堵塞、膜厚增加使膜的结构形态发 生不利变化，膜需要频繁地清洗或更换。
4.5.3.3 膜式反应器的应用
酶膜反应器把酶促反应与膜的选择性物质传递 有效地结合在一起，从而创造出有利的过程热 力学和动力学，在生物、医药、化工、环境等 领域得到了越来越广泛的应用。目前膜反应器 的应用主要有：辅酶或辅助因子的再生、有机 相酶催化、手性拆分与手性合成、反胶团中的 酶催化、生物大分子的水解等。
与酶的固定化相比，固定化细胞保持了胞内酶系 的原始状态与天然环境，有效地利用游离细胞完 整的酶系统和细胞膜的选择通透性，既具有固定 化酶的优点，又具有其自身的优越性：
固定化细胞的优越性
①无需进行酶的分离和纯化，减少酶的活力损 失，同时大大降低了成本； ②可进行多酶反应，且不需添加辅助因子，固 定化细胞不仅可以作为单一的酶发挥作用，而 且可以利用菌体中所含的复合酶系完成一系列 的催化反应，对于这种多酶系统，辅助因子再 生容易；
固定化细胞的优越性
③对于活细胞来说，保持了酶的原始状态，酶 的稳定性更高，对污染的抵抗力更强； ④细胞生长停滞时间短，细胞多，反应快等等。 正是由于固定化细胞的这些无可比拟的优势， 尽管其出现远远晚于固定化酶，但其应用范围 比固定化酶更为广泛。
当然，固定化细胞也有其自身的缺点，如：必须 保持菌体的完整，需防止菌体的自溶，否则影响 产物的纯度；必须抑制细胞内蛋白酶对目的酶的 分解；胞内多酶的存在，会形成副产物；载体、 细胞膜或细胞壁会造成底物渗透与扩散的障碍等。
（2）酶膜反应器可将目的产物分离出去，而 酶可以重复利用，可实现连续操作，并有可 能提高复杂反应的选择性。 （3）膜作为酶的固定化载体可以使酶在类似 生物膜的环境中高效发挥作用。
微生物的生长及影响因素
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1.温度
基础原理 温度经过影响蛋白质、核酸等生物大分子结构与功效以及细
胞膜流动性及完整性来影响微生物生长、繁殖和新陈代谢。 过高环境温度会造成蛋白质或核酸变性失活 过低环境温度会抑制酶活力，降低细胞新陈代谢活动。 应用: 高温灭菌，低温保藏菌种。
微生物的生长及影响因素
微生物的生长及影响因素
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一、微生物生长
个体生长: 细胞体积增大，重量增加。 个体生长→个体繁殖→群体生长 除了特定目标以外，在微生物研究和应用中提到“生长”，
均指群体生长。
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细菌繁殖方式
Binary fission-growth cycle
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单批培养与连续培养关系
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连续培养器类型
按控制方式分
内控制（控制菌体浓度）: 恒浊器 外控制（控制培养液续培养器 按培养器级数分
多级连续培养器
普通连续培养器 按细胞状态分
固定化细胞连续培养器
试验室科研用: 连续培养器 按用途分 发酵生产用: 连续发酵罐
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（3）培养温度影响
温度℃ 10 15 20 25 30
E.coli在不一样温度下代时
代时（分）
温度℃
860
35
120
40
90
45
40
47.5
29
代时（分） 22 17.5 20 77
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特征参数
繁殖代数 n: x2=x1·2n
2022-2023学年重庆市八中高三下学期高考适应性月考卷(五)生物试题
2022-2023学年重庆市八中高三下学期高考适应性月考卷（五）生物试题1.北京烤鸭是北京传统特色美食。
饲喂选做食材用的北京鸭时，主要以玉米、谷类和菜叶为饲料，使其肥育。
烤熟后取一张用小麦粉制作的荷叶饼，夹几片烤鸭片，放上几根葱条、黄瓜条或萝卜条，卷起食用。
下列说法错误的是（）A．一张鸭肉卷饼中至少包含了淀粉、纤维素、糖原三类多糖B．烤熟鸭子的过程中蛋白质变性不影响蛋白质的营养价值C．葱条、黄瓜条等蔬菜中含有的元素种类和含量与人体大体相同D．北京鸭食用玉米、谷类和菜叶能育肥的原因是糖类在体内转化为脂肪2.利用诱导多能干细胞（iPS细胞）培育出自身组织或器官，再进行自身移植是解决器官移植排异反应的理想方式，如图为科学家利用脱分化诱导因子处理成纤维细胞得到iPS细胞，然后培育出不同组织或器官的思路图，以及重新分化出的细胞可能发展的去向图。
下列说法错误的是（）A．经①过程后细胞核内遗传物质往往不改变B．iPS 细胞与成纤维细胞能表达某些相同的基因C．①~⑥过程中细胞形态和功能发生改变的是①③⑤⑥D．③过程产生的4种细胞中的mRNA、蛋白质等分子发生了差异3.使用染色剂染色是生物学实验常用的方法，某同学对有关实验做了如下表归纳，下列说法错误的是（）A．上述实验结果的归纳，正确的有①②B．实验③利用了细胞膜的选择透过性C．实验④中盐酸和酒精混合液主要起固定作用D．检测花生子叶切片中的脂肪时，需用体积分数为50%的酒精洗去浮色4.甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂是农业上广泛使用的一种广谱杀菌剂，其作用机理为通过抑制细胞色素b和C1间的电子转移从而抑制线粒体的呼吸作用。
它能抑制病原体的细胞呼吸，但对高等植物基本无害。
下列叙述正确的是（）A．甲氧基丙烯酸酯可能作用于病原体有氧呼吸的第一阶段B．高等植物细胞呼吸在有氧和无氧条件下都会产生丙酮酸和NADPHC．细胞呼吸不一定消耗氧气，但一定产生二氧化碳D．甲氧基丙烯酸酯可用于防治由需氧型真菌引起的农作物感染5.泡菜，古称“菹”，《齐民要术》中较为系统地介绍了泡渍蔬菜的加工方法：“收菜时，即择取好者，菅蒲束之。
生物-2021年高考打靶卷(江苏卷)(Word考试版)
2021年高考打靶卷（江苏卷）生物试卷注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、考生号等填写在答题卡和试卷指定位置上。
2．回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡对应题目的答案标号涂黑。
如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。
回答非选择题时，将答案写在答题卡上。
写在本试卷上无效。
3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。
第I卷（共45分）一、单选题（共15题，每小题2分，共30分)1．研究人员在某沿海水域发现了一种新型异常大病毒（TetV），它能感染海洋浮游植物（主要是指藻类）而对动物无影响。
TetV主要通过高度集中的浮游植物种群达到有效传播，当浮游植物感染TetV后，其细胞会自动分解。
下列叙述正确的是A．在培养TerV时，培养基中应加入葡萄糖、氨基酸、无机盐等便于病毒直接吸收利用B．TetV能够利用任何水生植物细胞中的核糖体合成自身蛋白质C．TetV与海洋浮游植物属于寄生关系，与海洋生态系统的平衡无关D．某些海洋浮游植物细胞中无成形的细胞核，不借助叶绿体进行光合作用2．核孔复合体是核质交换的特殊跨膜运输蛋白质复合体，它具有双功能和双向性。
双功能表现在两种运输方式：被动运输与主动运输；双向性表现在既介导蛋白质的入核运输，又介导RNA、RNP（含有RNA 的核蛋白）等的出核运输。
核孔对大分子的进入具有选择性，大分子凭借自身的核定位信号和核孔复合体上的受体蛋白结合而实现“主动转运”过程。
下列分析正确的是A．大分子物质进出细胞核的方式为需要载体、消耗能量的主动运输B．细胞核能控制细胞代谢和遗传与核孔的双功能、双向性密切相关C．RNP中含有的RNA和蛋白质均在细胞核内合成D．核质间的物质交换体现了细胞膜的信息交流作用3．能荷调节也称腺苷酸调节，指细胞通过调节ATP、ADP、AMP（一磷酸腺苷）两者或三者之间的比例来调节其代谢活动。
计算公式为：能荷=（A TP+1/2ADP）/（ATP+ADP+AMP）。
前景广阔的固定化细胞技术
前景广阔的固定化细胞技术
曹亚莉
【期刊名称】《太阳能》
【年(卷),期】2002(000)004
【摘要】@@ 固定化细胞技术是20世纪60年代发展起来的一门新兴生物技术,是近十余年来生物工程研究的重点领域之一.
【总页数】1页(P15)
【作者】曹亚莉
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】Q81
【相关文献】
1.固定化细胞技术及其应用前景 [J], 王人悦
2.微系统技术应用前景广阔--写在《微系统技术》栏目开辟之际 [J], 郝继山
3.前景广阔的废气净化技术——EnviNox废气净化技术：首次应用到己内酰胺生产设备中 [J],
4.毙量获取技术前景广阔物联网数据终端能量获取技术的现状与趋势 [J], 苏冠群; 宋玉洁; 刘丽梅
5.固定化细胞技术在有机废水处理中的应用与前景 [J], 陈铭;周晓云
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红色亚栖热菌海藻糖合酶在大肠杆菌中的表达及其酶学性质分析
红色亚栖热菌海藻糖合酶在大肠杆菌中的表达及其酶学性质分析王文文;张峻;王宇凡;朱玥明;张娟;刘艳超;邢来君;李明春【期刊名称】《南开大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(044)003【摘要】The previously cloned thermostable trehalose synthase gene (TreS) was used to construct a native protein heterogenous expression plasmid and transformed into E. Coli. Over-expression of this gene was achieved and the enzyme after isolation and purification showed the highest activity at pH 6. 5 and 50 ℃. Kinetic analysis showed that the enzyme had a 2. 5-fold higher catalytic efficiency (kCcat/Km) for maltose than for trehalose, which indicated that the maltose is the preferred substrate. The maximum conversion rate of maltose into trehalose by the enzyme was increase at lower temperatures, and reached 65% at 20 ℃. The enzyme could maintain very high activity (above 90%) at pH 3. 5~8. 5 and 60 ℃ for 5 h. Enzyme activity was activated by low concentration of Na+ and K+. These results provided that the stable TreS was suitable for the industrial production of trehalose.%利用前期克隆得到的红色亚栖热菌CBS-01 (Meiothermus ruber CBS-01)的海藻糖合酶基因(TreS),构建天然蛋白异源宿主表达载体并在大肠杆菌中获得较高的表达量.经纯化后测定该酶在pH 6.5,反应温度为50℃时活性最高.酶学性质的研究表明,TreS的最适底物为麦芽糖,其对麦芽糖的转化效率约是海藻糖的2.5倍；该酶在30～60℃、pH 3.5～9.0范围内都保留较高的酶活；2 mmol/L的一价阳离子Na+、K+对TreS有激活作用；低温有利于反应向海藻糖方向进行,并能减少葡萄糖副产物的生成；20℃时,几乎没有葡萄糖生成,麦芽糖至海藻糖的转化率可达65％.为工业化大规模生产海藻糖奠定了理论基础.【总页数】8页(P90-97)【作者】王文文;张峻;王宇凡;朱玥明;张娟;刘艳超;邢来君;李明春【作者单位】南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室,天津300071;天津市林业果树研究所,天津300112;南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室,天津300071;南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室,天津300071;南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室,天津300071;南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室,天津300071;南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室,天津300071;南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室,天津300071【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.红色亚栖热菌耐热木聚糖酶的克隆表达及生物信息学分析 [J], 俞洁琼;王洪成;何正文;乐易林;邵蔚蓝2.水生栖热菌FL-03海藻糖合酶基因的克隆及真核表达 [J], 刘俊梅;聂海彦;郑微微;胡耀辉3.亚栖热菌产海藻糖合酶培养基的优化 [J], 陈晓云;张峻;陈颖;齐欣;魏雪生4.芝田硫化叶菌麦芽寡糖基海藻糖合酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达 [J], 陈炜;刘莉;孙培钰;金城5.嗜热栖热菌热稳漆酶在大肠杆菌中的高效表达 [J], 郑志强;李华钟;邵蔚蓝因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2021年泉州实验中学高三生物二模试卷及答案解析
2021年泉州实验中学高三生物二模试卷及答案解析一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。
每小题只有一个选项符合题目要求。
1. 利用标志重捕法调查某丘陵地区4 km2区域中刺猬的种群密度，第一次捕获并标记50只刺猬，第二次捕获40只刺猬，其中有标记的5只。
下列叙述错误的是（）A. 标记个体与未标记个体被捕获的概率基本相同B. 迁入率和迁出率影响该种群数量变化C. 标记符号过分醒目可能增加刺猬被捕食的概率D.该种群的密度大约是400只/ km22. 下列关于细胞的结构和功能，叙述错误的是（）A.细胞膜的基本骨架是磷脂双分子层，而细胞的骨架是由蛋白质纤维构成B.水是细胞内含量最多的化合物，线粒体、核糖体都能产生水C.细胞膜和细胞器膜共同构成了真核细胞的生物膜系统，原核细胞没有生物膜系统D.细胞间信息交流的方式多种多样，某些植物可以通过胞间连丝进行信息交流3. 九价宫颈癌(HPV)疫苗可预防HPV引起的宫颈癌，中国内地首针预防宫颈癌的九价HPV疫苗于2018年5月30日在海南博鳌超级医院接种，该疫苗将分三次接种。
下列相关叙述错误的是A. 从免疫学的角度分析，九价HPV疫苗为抗原B. 初次接种九价HPV疫苗，会刺激一种B细胞分泌多种抗体C. 当机体再次感染HPV时，记忆B细胞的细胞周期会明显缩短D. 该疫苗分三次接种的目的是让机体产生更多的抗体和记忆B细胞4. 某渗透装置如图烧杯中盛有蒸馏，图中半透膜允许单糖透过。
倒置的长颈漏斗中先装入蔗糖溶液，一定时间后再加入蔗糖酶(能将蔗糖水解成单糖)。
从理论上分析，该实验过程中最可能出现的现象是A. 漏斗中液面开始时先上升，加酶后即下降B. 漏斗中液面先上升，加酶后继续上升，然后再下降C. 加酶前后，在烧杯中都可以检测出蔗糖D. 加酶后，可以在烧杯中检测出葡萄糖、果糖和蔗糖酶5. 下图是生态位关系图,其中完全符合竞争是不对等的,乙的生态位空间有较大比例被共占的一组是A. B.C. D.6. 在人体的内环境中，可以发生的生理过程是A.乳酸被NaHCO3中和B.剧烈运动时产生乳酸C.血浆蛋白质的合成D.食物中的淀粉经消化，最终形成葡萄糖7. 在生长素发现过程中，胚芽鞘是重要的实验材料，对于其尖端叙述错误的是A. 能够感受光的刺激B. 生长素能够在尖端内横向运输C. 生长素能够在尖端内极性运输D. 能够生长以使胚芽鞘伸长8. 白色盘状南瓜与黄色球状南瓜杂交，F1全是白色盘状，F1自交得到的F2中，杂合子白色球状南瓜200个，那么纯合子黄色盘状南瓜应是A.450个B.100个C.200个D.300个9. 腐乳和泡菜是我国独特的传统发酵食品，几百年来深受老百姓的喜爱。
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中图分类号 Ｑ ８ １ ４ ． ２ 海藻糖是由两个葡萄糖分子以 α １ ， １糖苷键连接 ? 而成的非还原性双糖， 广泛存在于低等植物、 藻类、 细 菌、 真菌、 酵母及昆虫中， 对生物膜和生物大分子具有 良好的非特异性保护作用， 在医药、 生物技术、 食品、 化
１ ， ２ ］ 妆品、 农业等领域拥有广阔的应用前景 ［ 。目前海
０ １ ２
５ ０ ４ ５ ４ ４
６ ０ ６ ３ ６ ２
５天后开始破裂 ２ ０天后开始破裂 ２ ０天后开始破裂
ａ ） 取一定量固定化细胞， 于７ ０ ℃保温 ６ ０ ｍ ｉ ｎ ， 冷却后检测 表中： 残留的海藻糖合酶活性， 以起始酶活为 １ ０ ０ ％； ｂ ） 固定化细胞 微球浸入 ｐ Ｈ ６ ． ９ ８ 、 ０ ． ０ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ的磷酸盐缓冲液中， ５ ０ ℃保温
中国生物工程杂志 Ｃ ｈ ｉ ｎ ａＢ ｉ ｏ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， ２ ０ ０ ７ ， ２ ７ （ １ １ ） ： ３ ２～ ３ ６
亚栖热菌透性化细胞的耦合固定化研究
张 峻 陈 颖 陈晓云 齐 欣 魏雪生
（ 天津市园艺工程研究所 天津 ３ ０ ０ ３ ８ ４ ）
摘要 将海藻酸盐凝胶包埋法与交联法和聚电解质静电自组装覆膜法相耦合， 对含有海藻糖合 酶活性的亚栖热菌的透性化细胞进行了固定化研究。结果表明， 利用重氮树脂和聚苯乙烯磺酸 钠对海藻酸凝胶微球交替覆膜， 可以显著提高凝胶微球在磷酸盐缓冲液中的稳定性， 以碳二亚胺 对固定化细胞进行交联处理则可以提高固定化细胞中海藻糖合酶的热稳定性。透性化细胞经包 埋－ 交联 － 覆膜耦合固定化后， 酶活回收率为 ３ ２ ％， 最适酶反应 ｐ Ｈ值由 ６ ． ５左右升至 ７ ． ０左右， ０ ℃。所得固定化细胞间歇反应时， 催化麦芽糖转化为海藻糖的转化率 最适反应温度未变， 仍为 ６ 可达 ６ ０ ％， 重复使用 ４次（ 每次 ５ ０ ℃、 反应 ２ ４ ｈ ） ， 酶活损失小于 ２ ０ ％， 转化率可保持在 ５ ０ ％以上。 关键词 亚栖热菌 海藻糖合酶 耦合固定化
５ ］ 活性的透性化细胞 ［ ， 并采用海藻酸锶凝胶包埋法对
收稿日期： ２ ０ ０ ７ ０ ８ ２ ２ 修回日期： ２ ０ ０ ７ ０ ９ ２ ４ ｊ ｕ ｎ ｚ ｈ ａ ｎ ｇ ６ ８ ＠１ ２ ６ ． ｃ ｏ ｍ 电１ １ ）
张 峻 等：亚栖热菌透性化细胞的耦合固定化研究
图４ 温度对游离细胞及固定化细胞酶活性的影响 Ｆ ｉ ｇ ． ４ Ｔ ｅ ｍｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅｄ ｅ ｐ ｅ ｎ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅｏ ｆ ｔ ｒ ｅ ｈ ａ ｌ ｏ ｓ ｅｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ａ ｓ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ｉ ｎｆ ｒ ｅ ｅａ ｎ ｄｉ ｍｍｏ ｂ ｉ ｌ ｉ ｚ ｅ ｄｃ ｅ ｌ ｌ ｓ
虑酶活回收率及热稳定性两项指标， Ｅ Ｄ Ｃ浓度２ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ ～ ５ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ ， 交联处理 ２ ｈ 为宜。 ２ ． ３ 固定化细胞的性质 ２ ． ３ ． １ ｐ Ｈ 值及温度对海藻糖合酶活性的影响 先以 Ｂ Ｓ ０ １菌株的透性化细 海藻酸锶包埋法对亚栖热菌 Ｃ ? 胞进行包埋固定化， 再将所得凝胶微球置于 ２ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ 的 Ｅ Ｄ Ｃ溶液中交联处理 ２ ｈ ， 最后以 Ｄ Ａ Ｒ和 Ｐ Ｓ Ｓ 在凝胶微 球表面交替覆膜 １次， 并进行光交联处理， 所得固定化 细胞经检测酶活回收率为 ３ ２ ％。取一定量固定 化 细 Ｈ条件下测海藻糖合酶活性， 与游离细胞 胞， 在不同 ｐ 相比较， 结果见图 ３ 。另取一定量固定化细胞， 在不同 温度下测酶活， 以确定最适反应温度， 结果见图 ４ 。
３ ］ 产， 因需两种酶制剂协同使用， 通常称为双酶法 ［ 。另
１ 材料与方法
１ ． １ 试 剂 碳二亚胺（ Ｅ Ｄ Ｃ ） ， 上海延长生化科技发展有限公
６ 司； 聚苯乙烯磺酸钠（ Ｐ Ｓ Ｓ ） ， 分子量 １× １ ０ ， Ａ ｌ ｄ ｒ ｉ ｃ ｈ公
一种方法是利用海藻糖合酶， 即麦芽糖 ? Ｄ 葡萄糖基 α ? ? Ｅ Ｃ５ ． ４ ． ９ ９ ． １ ６ ） ， 催化麦芽糖发生分子内转糖 变位酶（ 苷反应， 生成海藻糖， 该法只需一种酶制剂， 通常称为
５ ］ 相色谱法 ［ 测定生成的海藻糖含量。酶活力单位定义
很大。因此与覆膜前相比， 覆膜后固定化细胞的酶活 ０ ％左右。此外， 由表 １还可看出， 虽然 回收率仅下降 １ 覆膜处理对固定化细胞中海藻糖合酶的热稳定性无明 显影响， 但却大幅度提高了固定化细胞微球在磷酸盐 缓冲液中的稳定性， 这对固定化细胞的重复使用非常 有利。增加覆膜 次 数 则 对 固 定 化 细 胞 的 性 能 无 显 著 影响。
Ｅ Ｄ Ｃ可以使酶蛋白中的羧基与氨 基 发 生 缩 合 反 应， 从而使酶蛋白发生分子间或分子内交联。由图 １ 和图 ２可知， 与未交联处理相比（ 即Ｅ Ｄ Ｃ浓度为 ０ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ ） ， 当Ｅ Ｄ Ｃ浓度为 ０ ． ５ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ 时， 对所得固定化细胞 的酶活回收率及热稳定性均无明显影响， 说明此时未 起到有效交联作用。当 Ｅ Ｄ Ｃ浓度 ≥１ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ 时， 随着交 联剂浓度的提高及交联时间的延长， 固定化细胞中酶 的热稳定性也随之增 强， 但当 Ｅ Ｄ Ｃ浓 度 达 到 ５ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ 时， 所得固定化细胞的热稳定性不再提高， 说明交联剂 浓度在 ５ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ 以内即可起到有效交联作用。综合考
该透性化细胞进行了固定化， 提高了酶的利用率， 但同 时也发现所制备的固定化细胞凝胶颗粒在磷酸盐缓冲 液中稳定性不高。为了解决该问题， 本文将海藻酸盐 包埋法与聚电解质静 电 自 组 装 覆 膜 法 及 交 联 法 相 耦 合， 对含有海藻糖合酶活性的透性化细胞进行了固定 化研究。
藻糖的制备方法主要有两种， 一种是利用麦芽寡糖基 海藻糖合成酶和麦芽 寡 糖 基 海 藻 糖 水 解 酶 的 协 同 作 用， 以淀粉为底物生产海藻糖， 该法已经用于工业化生
２ ． ２ 交联处理对固定化效果的影响 先以海藻酸锶包埋法制备固定化细胞， 再将固定 化细胞微球置于不同浓度的 Ｅ Ｄ Ｃ溶液中处理一定时 间， 检测所得固定化细胞的酶活回收率及热稳定性， 结 果分别见图 １和图 ２ 。
为： 在上述反应条件下， 每分钟形成 ｌ ｍ ｏ ｌ 海藻糖所需 μ 的酶量为 ｌ 单位。 １ ． ９ 固定化效果评价 固定化细胞的酶活回收率以固定化细胞的表观酶 活与固定化时所用细胞的酶活的比值表示。固定化细 胞催化麦芽糖转化为海藻糖的转化率（ ％）＝（ 反应终 止时海藻糖浓度 × １ ０ ０ ） ／ 反应起始时麦芽糖浓度。
２ 结 果
２ ． １ 覆膜处理对固定化细胞的影响 先以海藻酸锶包埋法制备固定化细胞， 再以 Ｄ Ａ Ｒ 和Ｐ Ｓ Ｓ 在固定化细胞微球表面交替覆膜， 不同覆膜次 数对固定化细胞酶活回收率及稳定性的影响见表 １ 。 以聚电解质在固定化细胞微球表面覆膜后， 会增 加凝胶微球的传质阻力， 影响凝胶微球对内外物质的 通透性， 从而降低固定化细胞的表观酶活， 降低酶活回 收率。不过由于海藻糖合酶的底物与产物（ 麦芽糖和 海藻糖） 均为小分子物质， 在传质方面受到的影响不会
Ｆ ｉ ｇ ． ２ Ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｃ ｒ ｏ ｓ ｓ ｌ ｉ ｎ ｋ ｉ ｎ ｇｏ ｎｔ ｈ ｅｔ ｈ ｅ ｒ ｍｏ ｓ ｔ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ? ｏ ｆ ｔ ｒ ｅ ｈ ａ ｌ ｏ ｓ ｅｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ａ ｓ ｅｉ ｎｉ ｍｍｏ ｂ ｉ ｌ ｉ ｚ ｅ ｄｃ ｅ ｌ ｌ ｓ
表１ 覆膜处理效果 Ｔ ａ ｂ ｌ ｅ １ Ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｃ ｏ ａ ｔ ｉ ｎ ｇｏ ｎａ ｌ ｇ ｉ ｎ ａ ｔ ｅｂ ｅ ａ ｄ ｓ ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇｔ ｒ ｅ ｈ ａ ｌ ｏ ｓ ｅｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ａ ｓ ｅ
ａ ） ） 覆膜次数 酶活回收率（ ％） ７ ０ ℃残存酶活（ ％） 凝胶微球稳定性ｂ
３ ］ 单酶法 ［ 。与双酶法相比， 单酶法操作比较简单， 可以
Ｄ Ａ Ｒ ） ， 按文献［ ６ ］ 制备。 司； 重氮树脂（ １ ． ２ 菌 株 亚栖热菌 Ｃ Ｂ Ｓ ０ １菌株： 本实验室分离。 ? １ ． ３ 摇瓶产酶培养基（ ｇ ／ Ｌ ） 多蛋白胨 ５ ， 酵母膏 １ ， Ｎ ａ Ｎ Ｏ ． ７ ， Ｎ ａ Ｈ Ｐ Ｏ ． １ ， ３０ ２ ４０ Ｍ ｇ Ｓ Ｏ Ｈ Ｏ０ ． ２ ， Ｃ ａ Ｃ ｌ ． １ ， ｐ Ｈ７ ． ５ ， １ ２ １ ℃灭菌 ４· ７ ２ ２０ ３ ０ ｍ ｉ ｎ 。 １ ． ４ 透性化细胞的制备 将已活化的 Ｃ Ｂ Ｓ ０ １菌种接入已灭菌的摇瓶产酶 ? 培养基中， ５ ０ ℃～ ５ ５ ℃， ２ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ ， 摇瓶培养 ３ ６ ｈ ， 离心， 清洗后得湿菌体， 湿菌体悬浮于水中 （ 每 ｇ湿 菌 体 加 １ ０ ｍ ｌ 水） ， 加入 ２ ％ 甲苯， ５ ０ ℃ 搅拌处理 ２ ０ ｍ ｉ ｎ ， 离心后
３ ３
去除上清， 所得沉淀清洗后即得透性化细胞。 １ ． ５ 透性化细胞的包埋固定化 取一定浓度的海藻酸钠溶液与一定量透性化细胞 ％， 滴入 ３ ％的 Ｓ ｒ Ｃ ｌ 混合， 使海藻酸钠终浓度为 ２ ２ 于溶 液中， 所得凝胶微球固化一定时间， 分离、 洗涤， 即得固 定化细胞。 １ ． ６ 交 联 将凝胶微球置于不同浓度的 Ｅ Ｄ Ｃ溶液中， 室温下 搅拌处理一定时间， 彻底清洗， 即得交联处理的固定化 细胞。 １ ． ７ 凝胶微球表面覆膜 将凝 胶 微 球 浸 入 １ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ 的 重 氮 树 脂 水 溶 液 中， ２ ０ ｍ ｉ ｎ 后分离凝胶微球， 充分清洗， 再浸入 １ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ 的 Ｐ Ｓ Ｓ 溶液中， ２ ０ ｍ ｉ ｎ后分离凝胶微球， 水洗， 即为 １次覆 膜， 重复上述过程， 可在凝胶微球表面多次覆膜， 覆膜 ０ ｍ ｉ ｎ ， 进行光交联， 即得覆膜 后再置于紫外光下照射 ２ 处理的固定化细胞。 １ ． ８ 海藻糖合酶的酶活分析 取 ｌ ｍ ｌ 适当稀释的细胞悬浮液（ 或一定量固定化细 胞） 加入到 ｌ ｍ ｌ 以１ ０ ｍ ｍ ｏ ｌ ／ ｌ 、 ｐ Ｈ ７ ． ０的磷酸缓冲液配制 ０ ％（ ｗ ／ ｖ ） 的麦芽糖溶液中， 混匀后， 将该混合物溶 的２ 液于 ６ ０ ℃保温 ６ ０ ｍ ｉ ｎ ， 然后于 １ ０ ０ ℃ 加热 １ ０ ｍ ｉ ｎ中止酶 反应。反应混合物冷却后， 离心， 取上清液， 用高效液