淫羊藿苷和黄芪苷_对骨髓基质细胞增殖及成骨能力的影响
淫羊藿苷对体外培养骨髓基质细胞成骨性分化的影响
ＭＡ Ｘｉ ａ ｏ － ｎ ｉ ， Ｓ ＨＩ Ｗｅ ｎ — ｇ ｕ ｉ ，ＸＩ Ｅ Ｙａ ｎ — ｆ ａ ｎ ｇ ，Ｃ ＨＥＮ Ｋｅ — ｍｉ ｎ ｇ ，ＭＡ Ｈｕ ｉ — ｐ ｉ ｎ ｇ ，ＧＥ Ｂａ ｏ ・ ｆ ｅ ｎ ｇ ，ＺＨＥＮ Ｐｉ ｎ ｇ ，Ｚ ＨＯＵ ｊ ｉ —
马一 Ｊ 、 妮， 石 文贵 ， 谢艳芳， 陈克 明 ， 马 慧萍 ， 葛 宝丰 ， 甄 平 ， 周 建
［ 摘要］ 目的 探讨淫羊藿苷 （ ｉ ｃ ａ ｒ ｉ ｉ ｎ ， Ｉ Ｃ Ａ） 在 无 成 骨 分 化 诱 导 剂 存 在 的 条 件 下 对 体 外 培 养 大 鼠 骨 髓 基 质 细 胞
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１ ６・
解放军医药杂志 ２ ０ １ ５年 ３月 第 ２ ７卷 第 ３期 Ｍ ｅ ｄ＆ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ Ｊ Ｃ ｈ ｉ ｎ Ｐ Ｌ Ａ， Ｖ ０ Ｉ ． ２ ７ Ｎ ｏ ． ３ ．Ｍ ａ ｒ ． ２ ０ １ 体 外培 养 骨 髓 基 质 细 胞成 骨性 分 化 的 影 响
ｔ ｏ ｒ ２ ）ｗ ｅ ｒ ｅ ｍ ｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ（ ｒ ｅ ａ ｈ ｉ ｍｅ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ ｃ ｈ ａ ｉ ｎ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ） ．Ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ Ｃ ｏ ｌ ｌ ａ ｇ ｅ ｎ — Ｉ ａ ｎ ｄ Ｒ ｕ ｎ ｘ 一 ２
取 Ｗｉ ｓ ｔ ａ ｒ 大鼠 Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ ， 用 １×１ ０ ～ｍ ｏ １ ／ Ｌ Ｉ Ｃ Ａ对 Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ
（ ｂ ｏ ｎ ｅ ｍａ ｒ ｒ ｏ ｗ ｓ ｔ ｒ ｏ ｍ ａ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ，Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ ） 成 骨性 分 化 的影 响 。 方 法
淫羊藿苷对体外牙周膜细胞增殖、成骨分化以及成骨和破骨因子表达的影响
doi:10.3969/j.issn.1009-0002.2019.03.018研究报告淫羊藿苷对体外牙周膜细胞增殖、成骨分化以及成骨和破骨因子表达的影响李雪，朱勇，王丹杨，张耀超西安医学院口腔医学院，陕西西安710021［摘要］目的：明确淫羊藿苷对于体外分离培养的人牙周膜细胞的增殖、成骨分化以及成骨和破骨因子表达的影响。
方法：原代分离培养人牙周膜细胞，实验组细胞加入0.01mg/L淫羊藿苷溶液。
采用MTT法检测牙周膜细胞的增殖速率，采用碱性磷酸酶活性检测试剂盒评估牙周膜细胞的成骨分化能力，分别通过real-time PCR和Western印迹检测成骨相关的OCN、Runx2、BMP2以及破骨相关的RANKL的基因和蛋白表达。
结果：MTT结果揭示，淫羊藿苷显著提高了人牙周膜细胞的增殖速率（P<0.05），也显著促进了碱性磷酸酶活性的提升（P<0.05），揭示其对于牙周膜细胞的成骨分化具有促进作用；real-time PCR和Western印迹结果均表明，淫羊藿苷能够上调OCN、Runx2和BMP2的基因和蛋白表达（P<0.05），并下调RANKL的基因和蛋白表达（P<0.05）。
结论：淫羊藿苷能够促进体外牙周膜细胞的增殖、成骨分化潜能和成骨功能活性。
本研究有望为牙周炎治疗以及基于组织工程技术的牙周组织的损伤修复提供新思路。
［关键词］淫羊藿苷；牙周膜细胞；细胞增殖；成骨分化；碱性磷酸酶［中图分类号］R781.4;R285.5［文献标识码］A［文章编号］1009-0002（2019）03-0403-06 Effect of Icariin on the Proliferation,Osteogenic Differentia⁃tion,and Molecule Expression Associated with Osteoblasto⁃genesis and Osteoclastogenesis in Periodontal Ligament CellsLI Xue*,ZHU Yong,WANG Dan-Yang,ZHANG Yao-ChaoSchool of Stomatology,Xi'an Medical College,Xi'an710021,China*Corresponding author,E-mail:3438601740@［Abstract］Objective:To identify the effect of icariin on the proliferation,osteogenic differentiation,and mole⁃cule expression associated with osteoblastogenesis and osteoclastogenesis in periodontal ligament cells.Methods: The primary human periodontal ligament cells were extracted and cultured.The cells in the experimental group were treated with0.01mg/L icariin solution.The cell proliferation rate was measured via the MTT assays.The ability of osteogenic differentiation was determined using the alkaline phosphatase kits.The gene and protein ex⁃pression of osteoblastogenesis-related OCN,Runx2and BMP2and osteoclastogenesis-related RANKL were deter⁃mined using the real-time PCR and Western blotting technique,respectively.Results:Icariin significantly in⁃creased the proliferation rate of human periodontal ligament cells as revealed by the MTT assays（P<0.05）.Icariin also significantly stimulated the increase of the alkaline phosphatase activity（P<0.05）,demonstrating the promoting effects on osteogenic differentiation of periodontal ligament cells.The real-time PCR and Western blotting results 收稿日期：2019-03-29基金项目：陕西省教育厅科学研究计划（17JK0665）作者简介：李雪（1985-），女，讲师，（E-mail）3438601740@showed that icrariin up-regulated the OCN,Runx2and BMP2gene and protein expression,and down-regulated the RANKL gene and protein expression（P<0.05）.Conclusion:Icariin can promote the proliferation,the potential of osteogenic differentiation,and osteogenic activity and function.This study may provide new strategy for the peri⁃odontitis treatment and periodontal regeneration based on tissue engineering.［Key words］icariin;periodontal ligament cells;cell proliferation;osteogenic differentiation;alkaline phosphatase牙周炎是一种局部牙周组织慢性炎症性疾病，主要临床表现为牙龈炎症、出血、牙槽骨吸收、牙齿松动移位，严重者出现牙齿的自行脱落。
淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响
淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：蒋绍艳，宋丹妮，史玉朋，常宏【摘要】目的：探讨淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。
方法：采用差速贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，流式细胞仪鉴定表面标志。
取第3代细胞加入10 6 mol/L淫羊藿苷培养基，对照组仅加入等量普通培养基进行培养。
通过镜下观察细胞形态，流式细胞仪测定细胞表面标志，碱性磷酸酶试剂盒测定诱导细胞碱性磷酸酶活性，组织化学染色观察钙化结节形成能力。
结果：体外培养的细胞表达CD29、CD44、CD105、CD166。
淫羊藿苷诱导组细胞碱性磷酸酶呈阳性反应并有钙化结节形成，而对照组未见钙化结节形成。
结论：淫羊藿苷能够诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，可视为一种良好的骨诱导活性因子。
【关键词】淫羊藿苷;骨髓间充质干细胞;成骨分化[ABSTRACT] Objective: To study the effects of icariin on osteogenic differentiation of rat BMSCs.Methods: Rat BMSCs were isolated and cultured in vitro. At the third passage, ratBMSCs were treated with 106mol/L icariin medium. BMSCs in the control group were treated with an equal volume of medium. Cells were identified by flow cytometry.Alkaline phosphatase were detected by alkaline phosphatase kit, and Calcified nodules were observed using immunohistochemistry staining. Results: Flow cytometry analysis showed that BMSCs cultured in vitro expressed mesenchymal cell marker，including the positive expression of CD29、CD44、CD105 and CD166. The staining of the alkaline phosphatase and calcified nodules were positive after osteoinduction, but calcified nodules were not found in rat BMSCs in the control group.Conclusion: Icariin can induce osteogenic differentiation of rat BMSCs and can be used as an osteoinductive factor.[KEY WORDS] Icariin; Bone marrow mysenchymal stem cells; Osteogenic differentiation骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs) 是骨髓造血微环境中的一种重要细胞成分，具有多向分化潜能，在一定的诱导条件下可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞及神经细胞等[1]，在组织工程和细胞治疗等方面具有广阔的应用前景。
淫羊藿苷对骨髓问充质干细胞免疫调控能力的影响
【 Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ Ｉ ｃ ａ ｒ ｉ ｉ ｎ ｏ ｎ ｉ ｍｍ ｕ ｎ ｅ ｒ ｅ ｇ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｈ ｕ ｍ ａ ｎ ｂ ｏ ｎ ｅ ｍａ ｒ ｒ ｏ ｗ ｍ ｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ
羊藿苷 对 Ｍ Ｓ Ｃ ｓ 免 疫 抑 制 能 力 和 免 疫 调 控 相 关 基 因 表 达情 况 的 影 响 。 结 果 所 获 得 的 骨髓 贴壁 细胞 Ｃ Ｄ ３ ４和 Ｃ Ｄ ４ ５表
达 阴性 ， Ｃ Ｄ ４ ４ 、 Ｃ Ｄ ７ １ 、 Ｃ Ｄ ９ ０和 Ｃ Ｄ１ ０ ５阳性 表 达 ， 符 合 ＭＳ Ｃ ｓ 的特 征 。在 体 外 混 合 淋 巴细 胞 培养 体 系 中 ， 淫 羊藿 苷 处 理 后
ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ＭＳ Ｃｓ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅｄ ，ｔ ｈｅ ｎ ｔ ｈｅ ｃ ｈａ ｎｇ ｅ ｏ ｆ ＭＳＣｓ ｉ ｍｍｕｎ ｏ ｓ ｕｐ ｐｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｖ ｅ ｃ ａ ｐａ ｃｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｍｍｕｎ ｅ—ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｇ ｅｎ ｅ
的 ＭＳ Ｃ ｓ 对 淋 巴 细 胞增 殖 的抑 制 作 用 增 强 ， 且 淫 羊 藿 苷 处 理 后 的 ＭＳ Ｃ ｓ 中表达更多 的 Ｈ ＭＯ Ｘ 一 １ 、 Ｉ Ｌ 一 １ ０、 ｉ Ｎ Ｏ Ｓ和 Ｉ Ｌ 一 ２基
淫羊藿苷对细胞增殖作用的研究进展
［8 ］
（ ox － LDL） 诱导的兔血管平滑肌细胞增殖， 促进其凋 尚能抑制 IL － 1 β 刺激 RA 滑膜成纤维细胞的 亡［26］， 增殖及 TNF － α 、 RANKL 的分泌［27］。
促进 BMSCs 合成 ALP 从而增强其成骨能力
。吴
涛等［9］研究表明， Ica 在 0． 1 μmol · L － 1 可显著促进 羊骨髓基质干细胞增殖， 随浓度增加， 促进增殖活性 降低。谢玲玲等
3
Ica 对肿瘤细胞增殖的作用
Ica 能有效地抑制肝癌 HepG2． 2． 15 细胞增殖，
［14 ］
并有一 定 时 间 依 赖 效 应
， 也可抑制肝癌细胞株
［15 ］
SMMC － 7721 细 胞 增 殖 并 诱 导 其 凋 亡 强， 呈剂量依赖性
［16 ］
， 对肝癌
HepG2 细胞 的 增 殖 抑 制 率 随 着 药 物 剂 量 增 加 而 增 。 唐箐等
［10 ］
5
小
结
Ica 是淫羊藿抗骨质疏松的有效成分， 目前对 Ica 促进成骨细胞增殖的研究相对较成熟 。Ica 对骨髓基 质细胞增殖呈现促进与抑制双重作用可能与其浓度 有关， 具体机制尚有待于进一步研究。 Ica 能明显促 进人牙周膜细胞、 人外周血祖细胞的增殖， 抑制氧化 低密度脂蛋白诱导的兔血管平滑肌细胞增殖和 IL － 1 β 刺激 RA 滑膜成纤维细胞的增殖， 但其作用机制 尚不清楚， 有待于进一步的研究。 Ica 可以抑制多种 肿瘤细胞增殖， 诱导其凋亡， 可为其作用研究提供新 的方向。
淫羊藿对成骨细胞和破骨细胞作用的研究进展[0]
![淫羊藿对成骨细胞和破骨细胞作用的研究进展[0]](https://img.taocdn.com/s3/m/35a0b67149d7c1c708a1284ac850ad02de80078a.png)
食品与药品 Food and Drug 2012年第14卷第11期 453淫羊藿对成骨细胞和破骨细胞作用的研究进展盛华刚（山东中医药大学药学院，山东 济南 250355）摘 要：淫羊藿可促进成骨细胞增殖分化，抑制破骨细胞，其机制与调节多种骨相关蛋白质及其mRNA 表达等有关。
淫羊藿血清代谢物也可促进成骨细胞增殖分化。
现参考近年文献，综述淫羊藿对成骨细胞和破骨细胞作用的研究进展，为进一步研究淫羊藿提供新的思路。
建议加强淫羊藿体内作用试验及代谢物作用机制的研究。
关键词：淫羊藿；成骨细胞；破骨细胞中图分类号：R681.1 文献标识码：A 文章编号：1672-979X （2012）11-0453-03收稿日期：2012-05-09基金项目：国家“重大新药创制”科技重大专项“山东省重大新药创制中心建设”2009ZX09301-013作者简介：盛华刚（1979- ），男，讲师，博士，从事中药新制剂的研究，Tel:(0531)89628590Progress on Effect of Epimedii Folium on Osteoblasts and OsteoclastsSHENG Hua-gang(C ollege of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China )Abstract: To sum up the research survey of Epimedii Folium on osteoblasts and osteoclasts to provide a new way for the further research. The related literature was reviewed. Epimedii Folium can promote proliferation of osteoblasts, inhibit Osteoclasts function. Its mechanism is related to the regulation of various bone proteins and mRNA expression. The serum metabolites of Epimedii Folium can also promote proliferation of osteoblasts. Epimedii Folium shall be further investigated in vivo and the action mechanism of its serum metabolites shall be further research.Key Words: Epimedii Folium; osteoblast; osteoclast淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum (Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens .Maxim.或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai 的干燥叶[1]。
淫羊藿苷诱导骨膜细胞增殖构建组织工程骨修复骨缺损
《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research文章编号:2095-4344(2018)10-01477-06 1477www.CRTER .org·研究原著·钟秀霞，女，1986年生，广东省五华县人，汉族，2015年广州中医大学毕业，药师，主要从事药剂研究。
通讯作者：罗美兰，护师，深圳龙华区人民医院，广东省深圳市 518109中图分类号:R318 文献标识码:A稿件接受：2017-11-14Zhong Xiu-xia, Pharmacist, the People’s Hospital of Longhua of Shenzhen, Shenzhen 518109,Guangdong Province, ChinaCorresponding author: Luo Mei-lan, Senior nurse, the People’s Hospital of Longhua of Shenzhen, Shenzhen 518109,Guangdong Province, China淫羊藿苷诱导骨膜细胞增殖构建组织工程骨修复骨缺损钟秀霞，罗美兰(深圳龙华区人民医院，广东省深圳市 518109)DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.0704 ORCID: 0000-0001-7928-1017(钟秀霞)文章快速阅读：文题释义：淫羊藿苷：淫羊藿苷主要为柔毛淫羊藿、朝鲜淫羊藿、箭叶淫羊藿和巫山淫羊藿巫等植物的提取物，相对分子质量为676.65，为结晶状淡黄色粉末，有增加心脑血管血流、促进骨髓造血、增强免疫力等功能。
聚己内酯三维支架：是一种细胞培养的支架，主要成分是聚己内酯，具有标准的有利于细胞增殖的三维结构，其三维构造是由纵横交错的纤维构造而成，孔径一般是300 μm 或500 μm 。
可制成不同三维形态，可置于细胞培养板中并进行三维细胞培养。
淫羊藿甙对体外培养成骨细胞增殖和分化的影响
淫羊藿甙对体外培养成骨细胞增殖和分化的影响王俊勤;胡有谷;郑洪军;齐宗华【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2002(006)009【摘要】目的探讨淫羊藿甙对体外培养成骨细胞增殖和分化的影响及其作用机制.方法采用体外成骨细胞培养技术,进行细胞计数和碱性磷酸酶活性测定,观察淫羊藿甙对成骨细胞生长增殖和分化的影响.结果(1)不同浓度的淫羊藿甙对成骨细胞的生长增殖均有促进作用,以10ng/ml浓度时其作用最强(P<0.05);(2)淫羊藿甙可明显抑制分化早期成骨细胞内ALP活性,而对分化晚期成骨细胞内ALP活性具有促进作用;(3)淫羊藿甙对成骨细胞的作用与药物作用时间有关.结论淫羊藿甙促进成骨细胞增殖的同时,增强了成骨细胞活性.【总页数】2页(P1307-1308)【作者】王俊勤;胡有谷;郑洪军;齐宗华【作者单位】泰山医学院附属医院,山东,泰安,271000;青岛大学医学院附属医院,山东,青岛,266003;青岛大学医学院附属医院,山东,青岛,266003;青岛大学医学院附属医院,山东,青岛,266003【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.淫羊藿甙对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响 [J], 刘素彩;孔德娟;赵京山;李恩2.葛根素促进体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化过程中对cAMP/PKA信号通路的影响 [J], 邓银栓;樊宇;惠升明;杨小杰;董成辉3.葛根素促进体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化过程中对cAMP/PKA信号通路的影响 [J], 邓银栓;樊宇;惠升明;杨小杰;董成辉;;;;;4.川续断总皂苷对体外培养的大鼠成骨细胞增殖分化的影响 [J], 毛晴5.成骨生长肽对体外培养奶牛成骨细胞增殖分化的影响 [J], 王红;郭定宗;祝海宝;张耀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞免疫调控能力的影响
淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞免疫调控能力的影响目的研究淫羊藿苷对人骨髓间充质干细胞（MSCs）免疫调控能力的影响。
方法从人骨髓中分离MSCs并进行传代培养，通过流式细胞术观察其表型。
选取第5代MSCs进行研究，通过混合淋巴增殖反应和定量PCR方法检测淫羊藿苷对MSCs免疫抑制能力和免疫调控相关基因表达情况的影响。
结果所获得的骨髓贴壁细胞CD34和CD45表达阴性，CD44、CD71、CD90和CD105阳性表达，符合MSCs的特征。
在体外混合淋巴细胞培养体系中，淫羊藿苷处理后的MSCs对淋巴细胞增殖的抑制作用增强，且淫羊藿苷处理后的MSCs中表达更多的HMOX-1、IL-10、iNOS和IL-2基因，而IL-1α、IL-1β和IFN-γ基因的表达水平下降。
结论淫羊藿苷可提高骨髓MCSs的免疫抑制能力，淫羊藿苷处理后的MSCs免疫抑制相关基因表达增加，促炎相关基因表达减弱。
标签：间充质干细胞；淫羊藿苷；免疫调控间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）来源于中胚层，具有向成骨、软骨和脂肪细胞多向分化的潜能，另外还具有多种因子的分泌功能和表达多种胞外基质的特性。
已知MSCs能够分泌干细胞生长因子、肝细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子、巨噬细胞集落刺激因子和基质细胞衍生因子等多种细胞因子，在组织修复中发挥重要作用[1]。
因此，MSCs除可用于组织修复外，还可用于多种疾病的免疫抑制治疗，如系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎和移植后继发的移植物抗宿主病（GVHD）[2-4]。
淫羊藿（Icariin，ICA）具有强筋健骨、补肾壮阳之功效，是中医治疗骨质疏松方剂中使用频率最高的中草药之一[5]。
ICA的主要化学成分是黄酮类化合物，尤以淫羊藿苷的含量最高[6]。
近年来，随着中药ICA药理学的研究，其在临床上的用途也越来越广泛。
有文献证明ICA可促进骨髓MSCs的成骨性分化[7]，但ICA是否会影响MSCs的免疫调控能力尚未见报道。
淫羊藿苷对人牙周膜干细胞的增殖和成骨分化的影响的开题报告
淫羊藿苷对人牙周膜干细胞的增殖和成骨分化的影响的开题报告摘要：淫羊藿是一种传统中药，具有许多药理活性，包括促进骨形成。
然而，淫羊藿苷对人牙周膜干细胞的影响尚不清楚。
本研究旨在探讨淫羊藿苷对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响。
方法：使用MTT法和碱性磷酸酶（ALP）活性测定，分别测试淫羊藿苷对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响，并通过实时荧光定量PCR（qPCR）和酶联免疫吸附实验（ELISA）确定其对相关基因和蛋白质表达的调节作用。
结果：在浓度为5~50μM的淫羊藿苷处理下，人牙周膜干细胞的增殖和ALP活性均显著增加。
淫羊藿苷还可以显著增强人牙周膜干细胞的成骨分化，表现为促进成骨相关基因和蛋白质的表达。
结论：淫羊藿苷促进人牙周膜干细胞增殖和成骨分化，可能具有治疗牙周炎和其他骨代谢失调疾病的潜在应用价值。
关键词：淫羊藿苷；人牙周膜干细胞；增殖；成骨分化；骨代谢失调。
Introduction炎症是牙周病的主要表现，牙周病的发病机制与人体的生物学过程密切相关，包括细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡等多种细胞行为和信号通路。
骨代谢失调是牙周病发生的主要原因之一，导致牙周膜骨质吸收和牙齿松动。
近年来，越来越多的中药植物被证明具有改善骨代谢失调和促进骨形成的功能，这些植物可能成为开发新型牙周炎治疗药物的潜在来源。
淫羊藿（Epimedium brevicornum Maxim）是一种常见的传统中药材，拥有多种药理活性，如提高免疫力、延缓衰老、改善骨质疏松等。
淫羊藿内含有多种苷类化合物，其中最常见的是淫羊藿苷（icariin）。
研究表明，淫羊藿苷具有促进骨细胞增殖和成骨分化的效果，对骨代谢失调具有治疗潜力。
然而，淫羊藿苷对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells，hPDLSCs）的作用尚未得到深入研究。
本研究旨在探讨淫羊藿苷对hPDLSCs增殖和成骨分化的影响，以期为寻找治疗牙周病和其他骨代谢失调疾病的新药物提供科学依据。
淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞增殖、成骨和成脂分化的影响
淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞增殖、成骨和成脂分化的影响刘天麟;张学斌;张忻;潘汀;吴艳玲;黄远亮【摘要】Objective:To investigate the effects of icariin on the proliferation and osteogenic/adipogenic differentiation of canine bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). Methods:Canine BMSCs were treated and cultured with icariin in concentrations of 1×10-9, 1×10-8, 1×10-7,1×10-6, 1×10-5, 1×10-4 mol/L for experiment, and 0 mol/L was used as a blank control. To compare the in vitro osteogenic / adipogenic differentiation ability of BMSCs incubated in osteogenic /adipogenic medium, we performed a CCK-8 assay for cell proliferation, an alkaline phosphatase (ALP) activity assay, a calcium deposition assay (alizarin red staining, ARS), and a lipids deposition assay (oil red O staining). Results: Icariin promote d proliferation of canine BMSCs in 1 ×10-6 mol/L concentration, and 1 ×10-4 mol/L concentration icariin inhibited proliferation. The relation between canine BMSCs ALP activity and icariin concentration demonstrated in a dose-dependent manner. After culture in nonosteogenic / adipogenic medium, there were no significant difference between calcium deposition and lipids deposition in all groups. But after culture in osteogenic / adipogenic medium, proportion of calcium deposition in Icariin group (1×10-6mol/L) was higher than control group. On the contrary, proportion of lipid in icariin group (1 ×10-6mol/L) was lower than the control group. Conclusion: Icariin can promote the proliferation and osteogenic differentiation of canine BMSCs and inhibitadipogenic differentiation.%目的：研究淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells ，BMSCs)增殖和成骨、成脂分化的影响。
淫羊藿苷对衰老骨髓间充质干细胞成骨的影响
淫羊藿苷对衰老骨髓间充质干细胞成骨的影响蔡叶;王明飞;张磊;王健;石继祥;仇建军;刘铖祎;周旭【期刊名称】《中国骨质疏松杂志》【年(卷),期】2023(29)2【摘要】目的探究淫羊藿苷(icarrin,Ica)对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨的影响及机制。
方法通过全骨髓贴壁法提取BMSCs,采用流式细胞术及成骨、成脂诱导分化鉴定细胞。
通过CCK8法检测D-gal及Ica处理BMSCs的最适浓度,用D-gal诱导BMSCs衰老,药物干预48 h;6SA-β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;碱性磷酸酶试剂检上清液ALP水平;RT-PCR和Western Blot分别检测BMSCs中衰老相关P16、P53、P21及成骨相关Foxo3a、β-catenin的蛋白表达。
结果BMSCs表面标志物CD44和CD90表达大于95%;CD34、CD45表达小于5%,且能被定向诱导分化出钙结节及脂滴,鉴定细胞为BMSCs。
CCK8检测出30 mg/mL为D-gal的最适浓度,10-8、10-10mol/L为Ica最适浓度。
Ica能减少衰老BMSCs中P16、P53、P21 mRNA的表达;降低Foxo3a mRNA和蛋白表达,增加β-catenin mRNA和蛋白的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论D-gal能够诱导构建出衰老BMSCs模型;Ica增加了衰老BMSCs上清液中的ALP含量、降低了衰老BMSCs中P53的表达水平,可能通过调节成骨相关信号通路Foxo3a/β-catenin表达,起到对衰老BMSCs成骨分化能力的改善作用。
【总页数】6页(P162-167)【作者】蔡叶;王明飞;张磊;王健;石继祥;仇建军;刘铖祎;周旭【作者单位】上海中医药大学附属普陀医院;上海市浦东新区人民医院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞增殖、成骨和成脂分化的影响2.正常大鼠的骨髓间充质干细胞对去势大鼠骨髓间充质干细胞成骨成脂分化的影响3.3D打印技术制备聚磷酸钙/淫羊藿苷骨支架诱导骨髓间充质干细胞成骨分化治疗骨缺损4.3D打印技术制备聚磷酸钙/淫羊藿苷骨支架诱导骨髓间充质干细胞成骨分化治疗骨缺损5.淫羊藿苷与雌激素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
5种淫羊藿黄酮类成分对体外培养成骨细胞的影响
5种淫羊藿黄酮类成分对体外培养成骨细胞的影响蔡曼玲;季晖;李萍;王明权【期刊名称】《中国天然药物》【年(卷),期】2004(002)004【摘要】目的:观察5种淫羊藿黄酮--淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ、淫羊藿定B、淫羊藿定C对体外培养成骨细胞增殖、细胞基质钙及矿化结节钙的影响.方法:取新生1～3 d SD大鼠头盖骨用酶消化法分离成骨细胞,第3代细胞经MTT法、甲基百里香酚蓝(MTB)比色法观察5种黄酮对体外培养成骨细胞增殖、细胞基质钙及矿化结节钙的影响.结果:淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ和淫羊藿定C 0.1～10μmol/L浓度均能显著地促进成骨细胞增殖,淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ和淫羊藿定B 0.1～10μmol/L浓度均能显著增加细胞基质钙,淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ、淫羊藿定B 0.1～10μmol/L浓度、淫羊藿苷1μmol/L浓度及淫羊藿定C 0.1～1 μmol/L浓度均能显著增加矿化结节钙.结论:淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ、淫羊藿定B、淫羊藿定C具有增加细胞基质钙及促进体外培养成骨细胞增殖和矿化的作用.【总页数】4页(P235-238)【作者】蔡曼玲;季晖;李萍;王明权【作者单位】中国药科大学药理学教研室;中国药科大学药理学教研室;生药学教研室,南京,210009;生药学教研室,南京,210009【正文语种】中文【中图分类】R282.71;R962【相关文献】1.淫羊藿苷含药血清对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化的影响 [J], 程国政;李志锋;翟远坤;陈克明2.五种淫羊藿黄酮类成分对体外培养成骨细胞的影响 [J], 蔡曼玲;季晖;刘悦;王明权;毕志明;李萍3.淫羊藿对体外培养成骨细胞影响的研究进展 [J], 孙海涛;丁仁4.淫羊藿苷与BMP-2对体外培养成骨细胞增殖的影响 [J], 谢利娜;刘艳辉;赵波;景向东5.淫羊藿苷对体外培养的成骨细胞骨形态发生蛋白-2表达的影响 [J], 柯勇;张功礼;禹志宏;孔霞;郭凌郧;郑飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
淫羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响
淫羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响
殷晓雪;陈仲强;党耕町;马庆军;刘忠军
【期刊名称】《中国中药杂志》
【年(卷),期】2005(30)4
【摘要】目的:观察淫羊藿苷对人成骨细胞增殖和分化的影响。
方法:将人骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞,取第3,4代细胞,MTT法观察淫羊藿苷对人成骨细胞的增殖作用,碱性磷酸酶(ALP)比活性测定观察淫羊藿苷对人成骨细胞分化的影响,RT-PCR方法检测淫羊藿苷对人成骨细胞 BMP-2 mRNA表达的影响。
结果:浓度为20μg·mL-1的淫羊藿苷能够显著促进人成骨细胞的增殖和分化,且使BMP-2 mRNA的表达升高。
结论:淫羊藿苷具有促进人成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高人成骨细胞BMP 2 mRNA的表达有关。
【总页数】3页(P289-291)
【关键词】人成骨细胞;淫羊藿苷;增殖;BMP-2;分化;观察;升高;浓度;RT-PCR方法;RNA
【作者】殷晓雪;陈仲强;党耕町;马庆军;刘忠军
【作者单位】北京大学第三医院
【正文语种】中文
【中图分类】R318;R68
【相关文献】
1.淫羊藿苷对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响 [J], 姜文涛;梅伟;王庆德;张振辉
2.淫羊藿苷对聚乳酸/纳米羟基磷灰石支架上成骨细胞增殖与分化的影响 [J], 管明强;朱志霞;周观明
3.氯化锂联合淫羊藿苷对成骨细胞增殖分化的影响 [J], 付殷; 孙贵才; 欧阳玉龙; 温浙旭
4.淫羊藿苷可促进人成骨细胞增殖与分化 [J],
5.淫羊藿苷可促进人成骨细胞增殖与分化 [J], 本刊通讯员
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淫羊藿苷促进羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化
淫羊藿苷促进羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化吴涛;徐俊昌;南开辉;裴国献【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2009(013)019【摘要】背景:寻找一种简单有效、安全价廉且可替代生长因子的生物活性物质,是骨组织工程的客观要求,中药来源的植物黄酮淫羊藿苷可通过提高成骨细胞功能促进成骨,但是对骨髓间充质干细胞的作用尚未明确.目的:探讨淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-09/2009-02在南方医院创伤骨科实验室完成.材料:清洁级成年雄性中国青山羊3只,由南方医院实验动物中心提供.淫羊藿苷标准品由中国药品生物制品检定所提供,批号110737-200312,纯度98.3%.方法:体外分离培养羊骨髓间充质干细胞,传至第3代后,按2×103/孔接种至96孔板,分别加入100,10,1,0.1μmol/L淫羊藿苷培养基150μL进行培养;设立对照组,仅加入等量普通DMSO培养基.主要观察指标:采用MTT法检测细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,通过碱性磷酸酶试剂盒测定细胞碱性磷酸酶活性,放免法检测细胞骨钙素表达,茜素红染色观察钙化结节形成能力.结果:0.1 μ mol/L淫羊藿苷可明显促进羊骨髓间充质干细胞增殖,增加S期和G2/M期细胞数量:随着淫羊藿苷浓度的增加,促细胞增殖活性降低,100 μmo l/L淫羊藿苷表现为明显的抑制细胞增殖作用.淫羊藿苷呈剂量依赖性促进羊骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素表达.10,100 μ mol/L淫羊藿苷诱导钙化结节形成能力优于0.1和1μmol/L淫羊藿苷,对照组羊骨髓间充质干细胞未形成钙化结节.结论:淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化具有促进作用,可被视为一种良好的骨诱导活性因子.【总页数】5页(P3725-3729)【作者】吴涛;徐俊昌;南开辉;裴国献【作者单位】南方医院创伤骨科,广东省广州市,510515;南方医院脊柱骨科,广东省广州市,510515;温州医学院附属眼视光医院,浙江省温州市,325027;南方医院创伤骨科,广东省广州市,510515【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.17β-雌二醇联合淫羊藿苷促进SD大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化 [J], 杨燕兵;靳宪辉;王海萍2.淫羊藿苷促进骨髓间充质干细胞成骨分化 [J], 鲍远;黄俊明;靖兴志;李兴艳;董永辉;张津铭;郭风劲;陈安民3.淫羊藿苷促进骨髓间充质干细胞成骨分化 [J], 鲍远;黄俊明;靖兴志;李兴艳;董永辉;张津铭;郭风劲;陈安民;4.17β-雌二醇联合淫羊藿苷促进SD大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化 [J], 杨燕兵;靳宪辉;王海萍;;;5.大豆异黄酮上调Wnt-1基因表达促进骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的研究[J], 刘一栋;贾玉凤;王燕;刘扬;宁金月因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
淫羊藿苷对骨髓增生异样综合征模型大鼠骨髓细胞凋亡的影响
淫羊藿苷对骨髓增生异样综合征模型大鼠骨髓细胞凋亡的影响【摘要】目的探讨单味中药提取物淫羊藿苷对骨髓增生异样综合征（MDS）模型大鼠骨髓细胞凋亡的影响。
方式通过复制骨髓增生异样综合征（MDS）大鼠模型，用淫羊藿苷溶液灌胃。
实验结束后，检测大鼠外周血象、骨髓象，骨髓细胞总凋亡率。
结果淫羊藿苷组外周血白细胞计数、血红蛋白含量、红细胞计数灵敏、血小板计数高于模型生理盐水组，且有显著不同(P<；各模型组大鼠外周血和骨髓均能见到不同程度的病态造血，骨髓细胞凋亡指数显著升高，与空白对照组相较有极显著不同；淫羊藿苷组骨髓细胞凋亡指数比模型生理盐水组低，两组间有极显著性不同(P<。
结论淫羊藿苷有升高MDS模型大鼠外周血象、改善骨髓病态造血、降低骨髓细胞凋亡率的作用。
【关键词】骨髓增生异样综合征淫羊藿苷细胞凋亡骨髓增生异样综合征(MDS)是一组起源于造血髓系定向干细胞或多能干细胞的异质性克隆性疾患，主要特征是无效造血、外周血细胞减少和有明显向急性白血病转化的偏向，是临床常见的难治性血液病，其发病率正逐年增高。
MDS属祖国医学“虚劳”“血证”“内伤发烧”等范围，国内从中医角度对MDS研究较多，对其病因病机、辨证论治、中药复方药效等方面都进行了研究，取得了必然的成绩。
在医治方面主要从补肾益髓、益气活血、清热解毒等方面用复方进行研究，国内报导以中药为主医治MDS的总有效率为%～%［1～3］。
本文作者拟通过动物实验研究，探讨单味中药提取物淫羊藿苷对MDS模型大鼠骨髓细胞凋亡的影响，从而挑选医治MDS有效的中药，为淫羊藿苷的临床运用提供实验基础。
1 材料与方式动物与药物Wistar大鼠36只，体重80～100 g ，7周龄，清洁级，由贵阳医学院动物所提供〔合格证号：SCXK（黔）20020001〕。
二甲基苯蒽(DMBA)由美国Sigma公司生产。
FACS240型流式细胞仪（美国BD公司生产），OLYMPUS-BHB211显微镜（日本）。
淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞免疫调控能力的影响
淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞免疫调控能力的影响肖毅【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2013(10)30【摘要】目的研究淫羊藿苷对人骨髓间充质干细胞(MSCs)免疫调控能力的影响.方法从人骨髓中分离MSCs并进行传代培养,通过流式细胞术观察其表型.选取第5代MSCs进行研究,通过混合淋巴增殖反应和定量PCR方法检测淫羊藿苷对MSCs 免疫抑制能力和免疫调控相关基因表达情况的影响.结果所获得的骨髓贴壁细胞CD34和CD45表达阴性,CD44、CD71、CD90和CD105阳性表达,符合MSCs 的特征.在体外混合淋巴细胞培养体系中,淫羊藿苷处理后的MSCs对淋巴细胞增殖的抑制作用增强,且淫羊藿苷处理后的MSCs中表达更多的HMOX-1、IL-10、iNOS和IL-2基因,而IL-1α、IL-1β和IFN-γ基因的表达水平下降.结论淫羊藿苷可提高骨髓MCSs的免疫抑制能力,淫羊藿苷处理后的MSCs免疫抑制相关基因表达增加,促炎相关基因表达减弱.【总页数】4页(P4-7)【作者】肖毅【作者单位】山东中医药大学附属医院运动损伤骨科,山东济南250012【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.淫羊藿苷对微重力下骨髓间充质干细胞增殖与凋亡的影响 [J], 张芳;闫海洋;陈旭义;吕丹;李丽2.淫羊藿苷联合骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤区域炎症反应的影响 [J], 秦丰伟; 焦锋; 张兆飞; 黄荷; 唐望3.淫羊藿苷对高糖环境下骨髓间充质干细胞凋亡及成骨分化的影响 [J], 陈花英;周娟;吴焕成;张景童;王振国;涂悦;刘洋4.淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞铁死亡及向心肌样细胞分化的影响 [J], 李琦;孙贵才5.淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞铁死亡及向心肌样细胞分化的影响 [J], 李琦;孙贵才因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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Effect of W e i GanL i on Apoptosis and Expressi on of Bcl22、Bax Prote i n i n Bone M arrow Nuclea ted Cells of Ane m i c M i ceCHE N Yong 2feng 1,Z HU B i 2de 2,ZHANG Xin 2sheng 1,L ΒYan2(11School of Basic Medical Sciences of Sichuan University,Cheng Du 610041,China;21Cheng Du University of T C M ,Cheng Du610072,China )Abstract Objective:To study the effect ofW eiGan L i on apop t osis and exp ressi on of Bcl 22、Bax p r otein in bone marr ow nucleated cells (BMNCs )of ane m ic m ice and investigate its mechanis m,s o as t o find its ne w p linic use 1M ethods:Effects ofW eiGan L i on the a mount of the peri pheral bl ood cells and B MNCs were deter m ined on the model of myel osupp ressed ane m ic m ice .The cell cycle of B MNCs was analyzed by fl ow cyt ometer .The apop t osis of B MNCs was detected by T UNE L,and the exp ressi on of Bcl 22and Bax p r otein were detected by i m munohist oche m ical method 1Results:W eiGan L i could significantly increase the nu mber of RBC,WBC,HGb,Plt as well as the nu mber of BNMCs,significantly active BNMCs fr om stasis int o cell cycling and Markedly decrease the apop t osis of BN 2MCs after 210Gy 60Co γirraditi on while the exp ressi on of Bcl 22increased and Bax decreased 1Conclusi on:W eiGan L i can significantlyinhibit the apop t osis of B MNCs p r obably due t o its enhancing effects on Bcl 22exp ressi on,and inhibit ory effect on Bax exp ressi on 1I n this way,it p revents the bl ood cells fr om injury,and contributes t o the rehabilitati on of the organic bl ood p r oducti on 1Key words Ane m ic;Radiati on;Apop t osis;W eiGan L i;Bcl 22;Bax淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对骨髓基质细胞增殖及成骨能力的影响刘海江1,王小平13,林 娟1,余优成2,蒋欣泉3,张秀丽3,周曾同3,张卫东4(11同济大学口腔医学院,上海200072;21复旦大学附属中山医院,上海200032;31上海市第九人民医院,上海200011;41上海第二军医大学药学院,上海200433) 摘要 目的:探讨补肾药有效成分淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对实验犬骨髓基质细胞(B M S Cs )增殖及其成骨能力的影响。
方法:抽取犬BMSCs,诱导培养、传至第三代时于培养液中添加淫羊藿苷或黄芪苷Ⅰ使两种药物的终浓度为50ng/m l 。
设BMP 22阳性对照和空白对照组,分别于第1至第8天每天测细胞的MTT 值,绘制BMSCs 生长曲线、观察其增殖情况;于第1、3、6、10、14天检测B M S Cs 的ALP 和OD 值,绘制该OD 值变化曲线判断ALP 的活性。
结果:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ预处理后B M S Cs 的MTT 值从第1天至第7天均高于空白对照组;B M SCs 分泌ALP 的OD 值也均高于空白对照组,二者差异有显著性(P <0105)。
结论:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ能促进BMSCs 增殖、促进B MSCs 合成ALP 从而增强其成骨能力。
关键词 淫羊藿苷;黄芪苷Ⅰ;骨髓基质细胞;碱性磷酸酶;细胞增殖中图分类号:R28515 文献标识码:A 文章编号:100124454(2006)1021062204 3通讯作者:王小平,男,教授,Tel:(021)56032686转8113,Email:wxp990@hot m ail 1com 。
中医中药作为祖国文化的传统宝藏,有着自己独特的理论体系和诊疗方法。
其中以“肾补骨”理论为指导的补肾中药成骨作用机理的研究更是不断深入。
目前的研究主要集中在以下两个方面:一是中药方剂和成药对骨病如骨质疏松、牙周炎、骨折等临床疗效的验证;二是通过各类补肾药的含药血清观察其对成骨细胞的影响。
因为补肾药含药血清并非原药,用于实验可能造成结果失真。
本实验试图用高纯度的中药有效成分淫羊藿苷与植物激素黄芪苷Ⅰ对比,考察其作用于骨髓基质干细胞(BMSCs )的效果并探讨其对BMSCs 增殖和分化的影响。
1 材料与方法111 主要仪器与试剂 CO 2培养箱(Ther mo For 2ma,美国),DFC 2320型相差倒置显微镜(Leica,德国),培养皿(F ACON,美国),酶标仪(B i ohit,芬兰),淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ(上海第二军医大学天然药化研究所纯度>99%),BMP 22(Pep r otech,美国)MTT 、二甲基亚砜(DMS O )、对硝基磷酸苯酯(P NPP )、氯・2601・中药材第29卷第10期2006年10月化镁(Sig ma美国),细胞碱性磷酸酶(CALP)染液试剂盒(南京建成生物工程研究所),二乙醇胺(Trit on)X2100(上海凌峰化学试剂有限公司),叠氮钠(北京鼎国生物技术发展中心)。
112 实验方法11211 骨髓基质细胞的获得、体外培养和诱导:无菌条件于实验犬股骨近端大转子处抽取骨髓3±015m l,以4×105/c m2的密度接种于100mm的培养皿中,含双抗及105F BS的低糖DME M培养液于37℃、5%CO2及100%湿度条件下培养,第5天首次换液,以后每隔2～3天换液一次。
待细胞生长近会合时,P BS轻摇洗1～2次,用0125%胰蛋白酶+ 0102%E DT A消化,细胞以2×103/c m2的密度接种传代,改用含地塞米松(Dex)、β2甘油磷酸钠(β2 GP)和维生素2C(V it2C)的DME M培养液继续培养,第三代细胞用于实验。
11212 MTT法绘制细胞生长曲线:将第三代BM2 SCs制成细胞悬液,以5×103/孔的密度接种于96孔板,每孔加DME M培养液至200μl,37℃、5%CO2及100%湿度条件下培养24h使细胞贴壁。
24h 后,吸出原培养液,按实验设计分为4组,分别为淫羊藿苷组(50ng/m l)、黄芪苷Ⅰ组(50ng/m l)、BMP22(50ng/m l)阳性对照组和空白对照组(含地塞米松和β2甘油磷酸钠的DME M培养液),每孔加入相应培养液200μl,于正常条件下培养,每隔2～3天换液一次。
分别于细胞接种后第1、2、3、4、5、6、7和8天进行MTT检测。
具体方法如下:每天于同一时间取每个实验组5个复孔,先加入新鲜配制的MTT液(5mg/m l)20μl,继续培养4h后,吸尽培养液,每孔加入二甲基亚砜(DMS O)200μl,振荡器振荡10m in后,酶标仪在490nm波长下检测各孔的光密度值(OD值),每组取偏差较小的3个样本值的均数绘制细胞生长曲线。
11213 碱性磷酸酶(ALP)活性检测:将第三代BMSCs制成细胞悬液,以5×103/孔的密度接种于96孔板,每孔加DME M培养液至200μl,37℃、5% CO2及100%湿度条件24h使细胞贴壁。
24h后,吸出原培养液,按实验设计分为4组:淫羊藿苷组(50ng/m l)、黄芪苷Ⅰ组(50ng/m l)、BMP22(50ng/ m l)阳性对照组和空白对照组(仅含地塞米松和β2甘油磷酸钠的DME M培养液)。
每孔加入相应培养液200μl,于正常条件下培养,每隔2～3天换液一次。
分别于第1、3、6、10和14天进行碱性磷酸酶检测。
具体方法如下:每天于同一时间取每个实验组5个复孔,吸尽培养液,P BS溶液洗3次,每孔加入012%Trit on X2100100μl,振荡30m in后再加入反应液100μl,37℃,孵育30m in,最后每孔加入012 mol/L Na OH50μl终止反应,在酶标仪405nm波长下检测各孔的OD值,每组取偏差较小的3个样本值的均数绘制各组ALP随时间变化的曲线。
11214 实验数据进行统计分析:应用S AS6112软件包,对第1、3、5和7天各实验组的MTT值及第3和第10天各实验组的ALP的OD值进行方差分析,比较各组均数差别的显著性。
2 结果211 淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对BMSCs增殖的影响 从各实验组的MTT增殖曲线(图1)可看出,培养液中加入淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ后,从第1天起直至第8天,所测得的MTT平均值均高于空白对照组,大部分时间里也高于BMP22阳性对照组,但是淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ两组间的数值则相差不大。
分别取第1、3、5、7天的数值用方差分析的方法进行统计学分析(表1)。
淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ组的MTT平均值均高于空白对照组,差异有统计学意义(P< 0105);也高于BMP22阳性对照组,但仅个别时间段差异有统计学意义(P<0105);淫羊藿苷组和黄芪苷Ⅰ组间差异没有统计学意义(P>0105)。