青海上北山林场野生桃儿七根部内生真菌群落组成及多样性研究
不同生境春季核桃内生真菌分离及其多样性
生境 中 ， 山阳核 桃 内生真 菌的 多样 性 指 数 最 高， 为 １ ． ３ Ｏ ， 说 明春 季 核 桃 内 生真 菌具 有 丰 富的 多样
Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｄｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｅｎ ｄ ｏ ｐ ｈ ｙ ｔ ｉ ｅ Ｆ ｕ ｎ ｇ ｉ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｊｕ ｇ ｌ ａ ｎ ｓ ｒ ｅ ｇ ｉ ａ ｉ ｎ
Ｓｐ ｒ ｉ ｎ ｇ ｕｎ ｄｅ ｒ Ｄｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎｔ Ｈａ ｂ ｉ ｔ ａ ｔ ｓ ＹＩ ＭＡＥ Ｒ ‘Ａ 。 ｙ ｉ － ｊ ｉ ａ － ｍａ ‘ ｌ ｉ ， Ｌ Ｉ Ｕ Ｚｅ － ｘ ｉ ｎ ｇ ， ＭＡＯ Ｇｕ ａ ｎ ｇ － ｒ ｕ ｉ ， ＺＨＡＩ Ｍｅ ｉ 。 ｚ ｈ ｉ
（ Ｗａ ｌ ｎ ｕ ｔ Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ， Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆＦ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｙ， Ｎｏ ｒ ｔ ｈ ｗｅ ｓ ｔ Ａ＆Ｆ ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， ｇ ａ ｎ ｇ ｌ ｉ ｎ ｇ， Ｓ ｈ ａ ａ ｎ ｘ ｉ ７ １ ２ １ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｆｕ ｎ ｇ ａ ｌ ｅ ｎ ｄ ｏ ｐ ｈ ｙ ｔ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｊ ｕ ｇ ｌ ａ ｎ ｓ ｒ ｅ ｇ ｉ ａ ｆ ｒ ｏ ｍ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｈ ａ ｂ ｉ ｔ ａ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ ｐ ａ ｒ ｔ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｅ ｘ —
不同地区桃树根际土壤微生物群落结构及多样性分析
第44卷,第1期2024年1月栽培生理Cultivation Physiology中国果菜China Fruit &Vegetable不同地区桃树根际土壤微生物群落结构及多样性分析徐海忠2，薛彦华2，丁洪发2，戚恒瑞1，李天昊1，毛伟健1*，程凡升1*（1.青岛农业大学食品科学与工程学院，山东青岛266109；2.山东天同食品有限公司，山东临沂276000）摘要:植物根际土壤微生物群落能够加速根际营养元素的循环，调节土壤肥力。
分析桃树根际土壤微生态结构，可以为桃树种植土壤改良提供依据。
利用高通量测序技术对临沂市李官、汤头、沂水3个地区桃园根际土壤微生物多样性和群落组成进行分析。
经筛选和去除嵌合体后，得到了425267条优质序列，这些序列的长度主要集中在400～450bp 。
在3个地区的样品中共鉴定出4175个操作性分类单元（OTU ）。
物种分类结果显示，细菌包括25个门、54个纲、145个目、272个科、497个属和577个物种。
在临沂不同地区的桃树根际土壤样品中，细菌群落组成和结构存在一定差异，细菌丰富度和多样性的顺序为汤头＞沂水＞李官。
细菌群落中，线菌门和变形菌门的丰度之和达到50.37%～66.07%，属于绝对优势菌门。
根据COG 功能分类统计，土壤细菌的功能基因主要集中在新陈代谢、遗传信息和细胞信号传导等方面。
总体而言，桃根际土壤的细菌多样性和群落组成在不同地区之间存在差异。
关键词:桃树；土壤；根际微生物；16S rRNA 测序中图分类号：TS201.3文献标志码：A文章编号：1008-1038(2024)01-0072-08DOI：10.19590/ki.1008-1038.2024.01.015Microbial Community Structure and Diversity of Peach RhizosphereSoil in Different RegionsXU Haizhong 2,XUE Yanhua 2,DING Hongfa 2,QI Hengrui 1,LI Tianhao 1,MAO Weijian 1*,CHENG Fansheng 1*(1.College of Food Science and Technology,Qingdao Agricultural University,Qingdao 266109,China;2.Shandong Tiantong Food Co.,Ltd.,Linyi 276000,China)Abstract:Plant rhizosphere soil microbial community can accelerate the circulation of rhizosphere nutrients andregulate soil fertility.The analysis of rhizosphere soil microecological structure of peach trees can effectively improve the planting soil of peach trees.The rhizosphere soil microbial diversity and community composition of收稿日期:2023-06-11基金项目:山东省重点研发计划-乡村振兴科技创新提振行动计划（2022TZXD0012）；青岛特种食品研究院揭榜挂帅项目（6602422201）第一作者简介:徐海忠（1983—），男，工程师，本科，主要从事果蔬深加工方面的研究工作*通信作者简介:毛伟健（2000—），男，硕士，主要从事食品生物技术方面的研究工作程凡升（1983—），男，教授，博士，主要从事食品生物技术方面的教学与研究工作人类活动引起的全球变化包括大气二氧化碳浓度升高、气候变暖、降水变化、干旱和大气氮沉降增加，是全球范围内生物多样性丧失的主要因素[1]。
青海高原禾草内生真菌资源的调查和分离
３２卷１２期V o l．３２,N o．１２草㊀业㊀科㊀学P R A T A C U L T U R A LS C I E N C E１９９７－２００７１２/２０１５D O I:１０．１１８２９/j．i s s n．１００１Ｇ０６２９．２０１５Ｇ０１０４鲍根生,张兴旭,李秀璋,魏小星,李春杰．青海高原禾草内生真菌资源的调查和分离[J]．草业科学,２０１５,３２(１２):１９９７Ｇ２００７．B A O G e nＧs h e n g,Z HA N G X i n gＧx u,L IX i uＧz h a n g,W E IX i a oＧx i n g,L IC h u nＧj i e．I n c i d e n c e a n d i s o l a t i o no f e n d o p h y t e i nn a t i v e g r a s s e s o fQ i n g h a i P l a t e a u[J]．P r a t a c u l t u r a l S c i e n c e,２０１５,３２(１２):１９９７Ｇ２００７．青海高原禾草内生真菌资源的调查和分离鲍根生１,２,张兴旭１,李秀璋１,魏小星２,李春杰１(１．草地农业生态系统国家重点实验室兰州大学草地农业科技学院,甘肃兰州７３００２０;２．青海省畜牧兽医科学院,青海西宁８１００１６)摘要:青海高原的高寒特性决定其生境内禾草植物的多样性和特异性,然而有关青海高原地区禾草内生真菌的研究报道较少,本研究对青海高原地区４８个样点内禾草植物内生真菌带菌率和内生真菌分离进行了研究.结果表明,１４种禾本科植物内生真菌平均感染率低于５０％,而１２种植物内生真菌平均感染率大于５０％.其中,缘毛鹅观草(R o e g n eＧr i a p e n d u l i n a)㊁紫花针茅(S t i p a p u r p u r e a)㊁醉马草(A c h n a t h e r u mi n e b r i a n s)㊁中华羊茅(F e s t u c a s i n e n s i s)㊁硬质早熟禾(P o a s p h o n d y l o d e s)㊁微药羊茅(F．n i t i d u l a)㊁毛稃羊茅(F．k i r i l o w i i)和紫羊茅(F．r u b r a)的平均带菌率均超过８０％.同时,同属禾草植物内生真菌带菌率存在差异.禾草内生真菌分离率较低,其中紫花针茅㊁麦宾草(E l y m u s t a n g u t oＧr u m)㊁光稃早熟禾(P．p s i o l e p i s)和异针茅(S．a l i e n a)内生真菌在菌落和分生孢子形态上存在差异.可见,青海高原禾草内生真菌带菌率较高,同时不同禾草内生真菌可能存在多样性.关键词:青海高原;内生真菌;带菌率;分离率;形态;禾草种类中图分类号:Q９４９．３２㊀㊀㊀文献标识码:A㊀㊀㊀文章编号:１００１Ｇ０６２９(２０１５)１２Ｇ１９９７Ｇ１１∗I n c i d e n c e a n d i s o l a t i o no f e n d o p h y t e i nn a t i v e g r a s s e s o f Q i n g h a i P l a t e a uB A O G e nＧs h e n g１,２,Z H A N G X i n gＧx u１,L IX i uＧz h a n g１,W E IX i a oＧx i n g２,L IC h u nＧj i e１(１．S t a t eK e y L a b o r a t o r y o fG r a s s l a n dA g r oＧE c o s y s t e m s,C o l l e g e o fP a s t o r a lA g r i c u l t u r eS c i e n c e a n dT e c h n o l o g y,L a n z h o uU n i v e r s i t y,L a n z h o u７３００２０,C h i n a;２．Q i n g h a iA c a d e m y o fA n i m a l a n dV e t e r i n a r y M e d i c i n e,X i n i n g８１００１６,C h i n a)A b s t r a c t:T h e c h a r a c t e r i s t i c s o f h i g h a l t i t u d e a n d l o wt e m p e r a t u r e d e t e r m i n e d t h e d i v e r s i t y a n d h e t e r o g e n e i t y o f g r a s s i nQ i n g h a i P l a t e a u,h o w e v e r,t h e r ew e r e f e w e r s t u d i e s a b o u t g r a s s e n d o p h y t e s i nQ i n g h a iＧT i b e t P l a t e a u．T h e e n d o p h y t i c i n f e c t i o n o f n a t i v e g r a s s e s c o l l e c t e d f r o m４８l o c a t i o n s i nQ i n g h a i P l a t e a uw e r e e x a m i n e d,m e a nＧw h i l e,e n d o p h y t ew e r e a l s o i s o l a t e df r o mi n f e c t e d g r a s s e s s p e c i e s．T h e r e s u l t sd e m o n s t r a t e dt h a t t h ea v e r a g e i n c i d e n c e o f e n d o p h y t e i n f e c t i o n i n１４t e s t e d g r a s s s p e c i e sw e r e a b o v e５０％,h o w e v e r,t h a t i n１２t e s t e d g r a s s e s w e r eb e l o w５０％．T h e a v e r a g e i n c i d e n c e o f e n d o p h y t e i n f e c t i o n i n s e v e r a l g r a s s e s,s u c h a s R o e n e r i a p e n d u l i n a, S t i p a p u r p u r e a,A c h n a t h e r u mi n e b r i a n s,F e s t u c a s i n e n s i s,P o a s p h o n d y l o d e s,F．n i t i d u l a,F．k i r i l o v i i a n d F．r u b r a,w e r e a b o v e８０％．M e a n w h i l e,i n c i d e n c eo f e n d o p h y t e i n f e c t i o nv a r i e d i ns a m e g e n u s．T h e i s o l a t i o n f r e q u e n c y o f e n d o p h y t ew a s r e l a t i v e l o w e r,t h em o r p h o l o g y o f c o l o n i a l a n d c o n i d i a l v a r i e d a m o n g S．p u r p u r e a,∗收稿日期:２０１５Ｇ０２Ｇ１４㊀㊀接受日期:２０１５Ｇ０４Ｇ２１基金项目:国家９７３计划课题(２０１４C B１３８７０２);国家自然科学基金项目(３１３７２３６６);教育部创新团队发展计划项目(I R T１３０１９);公益性行业(农业)科研专项经费项目(２０１２０３０４１)第一作者:鲍根生(１９８０Ｇ),男,青海乐都人,助理研究员,在读博士生,主要从事高寒草地植物保护学研究.EＧm a i l:b a o g e n s h e n g２００８＠h o t m a i l．c o m通信作者:李春杰(１９６８Ｇ),男,甘肃镇原人,教授,博导,博士,主要从事禾草内生真菌学研究.EＧm a i l:c h u n j i e＠l z u．e d u．c nP R A T A C U L T U R A LS C I E N C E(V o l．３２,N o．１２)１２/２０１５E l y m u s t a n g u t o r u m,P．p s i l o l e p i s a n d S．a l i e n a．I tw a s c o n c l u d e d t h a t t h e e n d o p h y t e i n f e c t i o n i nn a t i v e g r a s s w e r eh i g h e r i nQ i n g h a i P l a t e a ua n d t h e e n d o p h y t em i g h t d i v e r s i f i e d a m o n gg r a s s s s p e c i e s．K e y w o r d s:Q i n g h a i P l a t e a u;e n d o p h y t e;i n c i d e n c e o f i n f e c t i o n;i s o l a t i o n r a t e;m o r p h o l o g y;g r a s s s p e c i e s C o r r e s p o n d i n g a u t h o r:L IC h u nＧj i e㊀EＧm a i l:c h u n j i e＠l z u．e d u．c n㊀㊀青海高原地处青藏高原东北部,位于３１ʎ３９ᶄ－３９ʎ１９ᶄN,８９ʎ３５ᶄ－１０３ʎ０４ᶄE,平均海拔４０００m以上[１].涵盖亚热带常绿阔叶林㊁温带草原㊁亚非荒漠和高寒草甸等多种植被类群,在这种特殊的环境中禾本科植物分布广泛,以禾本科植物为建群种或伴生种构建了这一地区具有高寒特征的高寒草原和高寒草甸植物群落[２Ｇ４].据相关资料记载,青海高原有禾本科植物５５属２４６种３１个亚种和变种,其中青海特有种１０种２亚种[５Ｇ６].禾草内生真菌(E p i c h o lёs p．)宿主种类丰富,主要分布于温带和寒带地区,许多冷季型禾草与其共生的内生真菌建立了密切的互惠共生关系[７Ｇ９];在一定程度上,内生真菌和宿主禾草之间存在着较为严格的宿主特异性[１０Ｇ１１].全世界范围内至少有８０个属２９０多种禾本科植物感染内生真菌,其中研究主要集中在多年生黑麦草(L o l i u m p e r e n n e)和高羊茅(F e s t u c ae l aＧt a)[１２Ｇ１７].Wäl i等[１６]研究表明,细羊茅(F．a r u n d i n aＧc e a)带菌率低于２０％;R o l s t o n等[１８]对新西兰禾草带菌率进行检测,发现除羊茅属(F e s t u c a)植物外其他禾草带菌率较低;K i r k b y等[１９]发现,澳大利亚地区硬直黑麦草(L．r i g i d u m)内生真菌带菌率随生境而变化,带菌率介于４％~９８％;̇Z u r e k等[２０]检测发现,瑞士境内天然草地禾草内生真菌带菌率普遍较高,平均达７０％;E k a n a y a k e等[２１]利用S S R分子标记技术对全世界范围内的高羊茅和草甸羊茅(F．p r a t e n s i s)带菌率进行检测发现,平均带菌率为３３％;M a r s h a l l等[２２]对土耳其境内小麦族禾草内生真菌进行了检测发现,小麦族禾草带菌率高于６０％.在国内,W e i等[２３]对中国北方禾草资源带菌情况开展调查,结果表明,大约６０％禾草植物感染内生真菌;纪燕玲等[２４]检测黄山景区禾草植物感染内生真菌的情况发现,内生真菌带菌率为３９％,其中,拂子茅(C a l a m a g r o s t i s e p i g e i o s)带菌率高达６７％;南志标等[２５Ｇ２７]发现,中国西北部许多禾本科植物也感染内生真菌.虽然,上述研究也涉及部分青海高原地区禾草资源带菌率的检测,然而青海高原地处北半球寒温带,依据禾草内生真菌共生体主要分布在寒带和温带,而赤道和极地尚未发现禾草内生真菌共生体分布的特点[７],可以推测青海高原禾草资源感染内生真菌潜力较高;同时当地禾草资源丰富且部分的禾草品种为青藏高原所特有,这就表明青海高原禾草内生真菌资源可能存在较大的多样性和丰富性.然而,迄今为止,针对青海高原天然草地禾草内生真菌资源尚未展开较为系统的调查和研究.因此,本研究主要对青海高原禾草内生真菌资源进行调查,探寻青海高原地区禾草内生真菌的多样性,以期为今后高寒地区禾草内生真菌资源深入研究提供基础资料.１ 材料与方法１．１㊀采样地点及概况２００７㊁２００９和２０１２年,在青海高原地区天然草地选取４８个样品采集点,于牧草成熟季节(９月份)在每个样点分别以单株或单丛禾草为单位,采集样点内禾草植物以供后续的带菌率检测.每个样点出现的禾草被认为该样地的禾草样品,同时齐地面收获单株(丛)禾草并按采集点㊁禾草种名㊁采集时间和重复数进行编号记录.其中,每个单株(丛)间间隔５~１０m,共采集２０单株(丛).并对各个采集样点进行编号,记录采集时间㊁地理位置㊁海拔和草地群落类型等信息(表１).１．２㊀内生真菌检测及分离禾草内生真菌检测采用种子苯胺蓝染色检测的方法,具体方法为:在室温条件下(１５~２２ħ)将种子置于５％氢氧化钠溶液过夜,第２天用蒸馏水冲洗种子数次以去除种子表面的氢氧化钠,然后将种子置于有苯胺蓝溶液(配方为０．３２５g苯胺蓝溶于表１㊀青海高原禾草内生真菌检测样品采集点信息T a b l e１㊀T h e d e t a i l s o f c o l l e c t i o n s i t e s i n v e s t i g a t e d f o r d e t e c t i o no f e n d o p h y t e s a m o n g g r a s s e s i n Q i n g h a i P l a t e a u ８９９１１２/２０１５草㊀业㊀科㊀学(第３２卷１２期)编号N o．采集地点S i t e 采集年份Y e a r北纬(N)L a t i t u d e东经(E)L o n g i t u d e海拔E l e v a t i o n/m草地类型G r a s s l a n d t y p e１湟源县湟源峡乡H u a n g y u a n x i aT o w n,H u a n g y u a nC o u n t y ２００９３６ʎ４０ᶄ１０．８８ᵡ１０１ʎ２３ᶄ４３．２７ᵡ２６４７高寒草原A l p i n e s t e p p e２湟源县日月乡R i y u eT o w n,H u a n g y u a nC o u n t y２００９３６ʎ３５ᶄ２９．１２ᵡ１０１ʎ１４ᶄ２３．７４ᵡ２８０５高寒草原A l p i n e s t e p p e３海晏县西海镇X i h a iT o w n,H a i y a nC o u n t y２００９３７ʎ０１ᶄ１１．５０ᵡ１００ʎ４６ᶄ５２．２９ᵡ３２０１高寒草原A l p i n e s t e p p e４海晏县青海湖乡Q i n g h a i l a k eT o w n,H a i y a nC o u n t y２００７３６ʎ３７ᶄ１８．８２ᵡ１００ʎ１７ᶄ０２．４０ᵡ２７２８高寒草原A l p i n e s t e p p e５刚察县三角城种羊场S a n j i a oT o w n,G a n g c h aC o u n t y２００９３７ʎ０８ᶄ１７．７１ᵡ１００ʎ２９ᶄ０５．３３ᵡ３２４０高寒草原A l p i n e s t e p p e６刚察县G a n g c h aC o u n t y２００７３７ʎ０８ᶄ２３．６７１００ʎ０８ᶄ３２．９９ᵡ３３６８高寒草甸A l p i n em e a d o w７刚察县沙柳河镇S h a l i u r i v e rT o w n,G a n g c h aC o u n t y２０１２３７ʎ２０ᶄ１５．４ᵡ１００ʎ０８ᶄ５４．７ᵡ３３４１高寒草甸A l p i n em e a d o w８青海湖鸟岛B i r d s i s l a n do fQ i n g h a i L a k e２００９３６ʎ５８ᶄ２１．８８ᵡ９９ʎ４６ᶄ３１．８９ᵡ３４７５高寒草原A l p i n e s t e p p e９刚察县沙柳河镇S h a l i u r i v e rT o w n,G a n g c h aC o u n t y２０１２３７ʎ１１ᶄ５０．７ᵡ９９ʎ４２ᶄ５４．１ᵡ３２５７高寒草原A l p i n e s t e p p e１０刚察县沙柳河镇S h a l i u r i v e rT o w n,G a n g c h aC o u n t y２０１２３７ʎ１９ᶄ３５．０ᵡ１００ʎ０７ᶄ２０．８ᵡ３２９０高寒河谷灌丛A l p i n e r i p a r i a n s h r u b１１刚察县泉吉乡Q u a n j iT o w n,G a n g c h aC o u n t y２０１２３７ʎ１２ᶄ２７．８ᵡ９９ʎ４９ᶄ０８．４ᵡ３２３５高寒草原A l p i n e s t e p p e１２海晏县西海镇X i h a iT o w n,H a i y a nC o u n t y２０１２３６ʎ５８ᶄ１００ʎ５２ᶄ３１０３高寒草原A l p i n e s t e p p e１３河南县优干宁镇Y o u g a n n i n g T o w n,H e n a nC o u n t y２０１２３４ʎ４７ᶄ２９．７ᵡ１０１ʎ３３ᶄ０４．０ᵡ３６５４高寒草甸A l p i n em e a d o w１４河南县赛尔龙乡S a i e r l o n g T o w n,H e n a nC o u n t y２０１２３４ʎ３７ᶄ０２．７ᵡ１０１ʎ４９ᶄ００．９ᵡ３６５４高寒草甸A l p i n em e a d o w１５河南县赛尔龙乡S a i e r l o n g T o w n,H e n a nC o u n t y２０１２３４ʎ３９ᶄ０５．６ᵡ１０１ʎ４５ᶄ１５．７ᵡ３６０５高寒草甸A l p i n em e a d o w１６河南县托叶玛乡T u o y e m aT o w n,H e n a nC o u n t y２０１２３４ʎ３５ᶄ４２．８ᵡ１０１ʎ３２ᶄ１９．８ᵡ３５９０高寒草甸A l p i n em e a d o w１７河南县多松乡D u o s o n g T o w n,H e n a nC o u n t y２０１２３４ʎ２１ᶄ２７．０ᵡ１０１ʎ２０ᶄ１５．２ᵡ３５０５高寒草甸A l p i n em e a d o w１８泽库县麦秀林场F o r e s t r y c e n t r e o fM a i x i u,Z e k uC o u n t y２０１２３５ʎ１５ᶄ４７．５ᵡ１０１ʎ５２ᶄ５９．８ᵡ３１６７河谷草甸A l p i n em e a d o w１９泽库县泽曲镇Z e q uT o w n,Z e k uC o u n t y２０１２３５ʎ０６ᶄ０９．６ᵡ１０１ʎ２７ᶄ５０．４ᵡ３７６３高寒草甸A l p i n em e a d o w２０称多县ⅠC h e n d u oC o u n t yⅠ２０１２３３ʎ２７ᶄ４８．８ᵡ９７ʎ０５ᶄ２８．５ᵡ４０６９高寒草甸A l p i n em e a d o w２１称多县ⅡC h e n d u oC o u n t yⅡ２０１２３３ʎ２２ᶄ２０．７ᵡ９７ʎ００ᶄ５７．１ᵡ３６９０高寒草甸A l p i n em e a d o w９９９１P R A T A C U L T U R A LS C I E N C E (V o l ．３２,N o ．１２)１２/２０１５续表１(１)编号N o ．采集地点S i t e采集年份Y e a r 北纬(N )L a t i t u d e东经(E )L o n g i t u d e 海拔E l e v a t i o n/m 草地类型G r a s s l a n d t y p e ２２称多县通天河沿岸ⅡB a n ko fT o n gt i a n r i v e rⅡ,C h e n d u oC o u n t y ２０１２３３ʎ１９ᶄ５０．７ᵡ９７ʎ００ᶄ５４．２ᵡ３６１５高寒草甸A l p i n em e a d o w ２３称多县通天河沿岸ⅢB a n ko fT o n g t i a n r i v e rⅢ,C h e n d u oC o u n t y ２０１２３３ʎ１９ᶄ０６．５ᵡ９７ʎ００ᶄ０９．３ᵡ３６０７高寒草甸A l p i n em e a d o w ２４称多县通天河沿岸ⅣB a n ko fT o n g t i a n r i v e rⅣ,C h e n d u oC o u n t y ２０１２３３ʎ１８ᶄ４４．２ᵡ９７ʎ０１ᶄ５２．２ᵡ３６５０高寒草甸A l p i n em e a d o w ２５称多县称文镇C h e n w e nT o w n ,C h e n d u oC o u n t y ２０１２３３ʎ２１ᶄ３１．０ᵡ９７ʎ０８ᶄ３６．７ᵡ３９０４高寒草甸A l p i n em e a d o w ２６称多县珍秦乡Z h e n q i nT o w n ,C h e n d u oC o u n t y ２０１２３３ʎ２７ᶄ３５．６ᵡ９７ʎ１５ᶄ４２．９ᵡ４３０４高寒草甸A l p i n em e a d o w ２７玉树县巴塘乡B a t a n g T o w n ,Y u s h uC o u n t y ２０１２３２ʎ４５ᶄ３８．２ᵡ９７ʎ１９ᶄ４４．５ᵡ３９３２高寒草甸A l p i n em e a d o w ２８称多县通天河沿岸ⅤB a n ko fT o n gt i a n r i v e rⅤ,C h e n d u oC o u n t y ２０１２３３ʎ２０ᶄ３３．６ᵡ９６ʎ５８ᶄ５３．５ᵡ３６４６高寒荒漠草原A pl i n e Ｇd e s e r t s t e p p e ２９称多县成武乡C h e n g w uT o w n ,C h e n d u oC o u n t y ２０１２３３ʎ２１ᶄ０３．８ᵡ９７ʎ０８ᶄ３１．９ᵡ３９０４高寒草甸A l p i n em e a d o w ３０玉树县巴塘乡B a t a n g T o w n ,Y u s h uC o u n t y ２０１２３２ʎ４９ᶄ３８．０ᵡ９７ʎ１０ᶄ１５．４ᵡ３９０４高寒草甸A l p i n em e a d o w ３１玉树县巴塘乡B a t a n g T o w n ,Y u s h uC o u n t y ２０１２３２ʎ５２ᶄ９６ʎ５２ᶄ３９７２高寒草甸A l p i n em e a d o w ３２兴海县河卡镇H e k aT o w n ,X i n g h a i C o u n t y ２０１２３５ʎ５５ᶄ１５．７ᵡ１００ʎ０２ᶄ２８．５ᵡ３２３１高寒草甸A l p i n em e a d o w ３３兴海县河卡镇H e k aT o w n ,X i n g h a i C o u n t y２０１２３５ʎ５１ᶄ２５．０ᵡ９９ʎ５５ᶄ０９．６ᵡ３５３４高寒草甸A l p i n em e a d o w ３４兴海县子科镇Z i k eT o w n ,X i n g h a i C o u n t y ２０１２３５ʎ３８ᶄ３３．９ᵡ９９ʎ５５ᶄ３２．４ᵡ３４１９高寒草原A l p i n e s t e p p e ３５共和县二塔拉E r t a l a ,G o n g h eC o u n t y ２０１２３６ʎ０４ᶄ４４．９ᵡ１００ʎ２２ᶄ０２．３ᵡ３００７高寒草原A l p i n e s t e p p e ３６共和县倒淌河镇D a o t a n g r i v e rT o w n ,G o n g h eC o u n t y ２０１２３６ʎ２２ᶄ４１．５ᵡ１００ʎ５５ᶄ４４．３ᵡ３４６２高寒草原A l p i n e s t e p p e ３７共和县倒淌河镇D a o t a n g r i v e rT o w n ,G o n g h eC o u n t y ２００９３６ʎ２５ᶄ３０．２０ᵡ１００ʎ５６ᶄ２４．７５３３０１高寒草原A l p i n e s t e p p e ３８共和县黑马河乡H e i m a r i v e rT o w n ,G o n g h eC o u n t y ２００９３６ʎ４３ᶄ５０．６８ᵡ９９ʎ４６ᶄ０７．９８ᵡ３２９９高寒草原A l p i n e s t e p p e ３９共和县倒淌河镇D a o t a n g r i v e rT o w n ,G o n g h eC o u n t y２０１２３６ʎ５１ᶄ０７．２ᵡ１００ʎ４５ᶄ２３．３ᵡ３２２７高寒草甸A l p i n em e a d o w ４０共和县石乃亥乡S h i n a i h a iT o w n ,G o n g h eC o u n t y ２００９３６ʎ５６ᶄ３７．４０ᵡ９９ʎ３４ᶄ５７．６２ᵡ３２８２高寒草甸A l p i n em e a d o w ４１同德县城T o n g d eC o u n t y ２０１２３５ʎ１６ᶄ１９．４ᵡ１００ʎ５１ᶄ０１．８ᵡ３１５９高寒草原A l p i n e s t e p pe ０００２１２/２０１５草㊀业㊀科㊀学(第３２卷１２期)续表１(２)编号N o．采集地点S i t e 采集年份Y e a r北纬(N)L a t i t u d e东经(E)L o n g i t u d e海拔E l e v a t i o n/m草地类型G r a s s l a n d t y p e４２同德县宁秀乡N i n g x i uT o w n,T o n g d eC o u n t y２０１２３５ʎ１５ᶄ２４．７ᵡ１００ʎ５１ᶄ３２．２ᵡ３３３１高寒草原A l p i n e s t e p p e４３贵南县黄沙头乡H u a n g s h a t o uT o w n,G u i n a nC o u n t y２０１２３５ʎ２５ᶄ５３．２ᵡ１００ʎ５９ᶄ３４．１ᵡ３４２１高寒草原A l p i n e s t e p p e４４同德县同德牧场T o n g d e p a s t u r e,T o n g d eC o u n t y２０１２３５ʎ１４ᶄ４５．９ᵡ１００ʎ４３ᶄ２５．６ᵡ３３０２高寒草甸A l p i n em e a d o w４５贵南县黄沙头乡H u a n g s h a t o uT o w n,G u i n a nC o u n t y２０１２３５ʎ３２ᶄ１２．７ᵡ１０１ʎ０５ᶄ４１．４ᵡ３３６７高寒草原A l p i n e s t e p p e４６贵南县过马营镇G u o m a y i n g T o w n,G u i n a nC o u n t y２０１２３５ʎ４７ᶄ２２．４ᵡ１０１ʎ１７ᶄ４２．７ᵡ３３２３高寒草原A l p i n e s t e p p e４７贵南县森多乡S e n d u oT o w n,G u i n a nC o u n t y２０１２３５ʎ３１ᶄ１３．１ᵡ１００ʎ５５ᶄ１２．３ᵡ３３２４高寒草原A l p i n e s t e p p e４８贵德县热水乡R e s h u iT o w n,G u i d eC o u n t y２０１２３５ʎ４８ᶄ３５．０ᵡ１０１ʎ１８ᶄ５２．４ᵡ３０５２高寒草原A l p i n e s t e p p e１００m L的蒸馏水,并添加５０m L乳酸)的培养皿中静置２h,镜检前将种子外稃去除.将种子放置到载玻片上,用盖玻片轻按使种子糊粉层和种皮分离,在４０倍目镜下观察内生真菌菌丝.如果种皮或糊粉层中出现大量的深蓝色的菌丝,就认为该种禾草感染内生真菌,每种禾草种子检测量为２０粒[１７,２３].挑选单株(丛)带菌禾草的种子２０粒用７０％酒精消毒１m i n,无菌水冲洗两次,然后用１％次氯酸钠消毒３m i n,用无菌水冲洗３次,然后用消毒的滤纸吸干种子表面的无菌水.将消毒后的种子均匀地摆放到装有P D A培养基的培养皿中,在２５ħ黑暗培养条件下培养３~４周,期间每周检查培养物的生长情况,把出现污染的培养皿及时清除.当内生真菌从种子表面出现后,挑取少许菌落进行培养.待内生真菌产孢后,挑取单个孢子进行纯培养,根据上述培养条件进行４周生长速度测定,并在第４周生长速度测定后选取５０个孢子测定孢子形态㊁大小及分生孢子梗的长度[２３,２８Ｇ３０].样点内禾草内生真菌感染率按某种禾草带菌种子占该禾草供试种子百分比计算,其中不同样点同一禾草内生真菌感染率是所用样点带菌率的平均值.２ 结果与分析２．１㊀青海高原内生真菌带菌率对青海高原４８个样点禾草植物内生真菌带菌率的检测结果表明,披碱草属(E l y m u s)㊁鹅观草属(R oＧe n e r i a)㊁芨芨草属(A c h n a t h e r u m)㊁艹洽草属(K o e l e rＧi a)㊁冰草属(A g r o p y r o n)㊁赖草属(L e y m u s)㊁早熟禾属(P o a)㊁针茅属(S t i p a)㊁羊茅属(F e s t u c a)㊁拂子茅属(C a l a m a g r o s t i s)㊁野青茅属(D e y e u x i a)和狗尾草属(S e t a r i a)植物均感染内生真菌(表２).其中,披碱草属(３种)㊁针茅属(４种)㊁早熟禾属(５种)和羊茅属(５种)感染内生真菌概率较高.１４种禾本科植物内生真菌平均感染率低于５０％,而１２种植物内生真菌平均感染率大于５０％.其中,缘毛鹅观草(R．p e n d u l iＧn a)㊁紫花针茅(S．p u r p u r e a)㊁醉马草(A．i n e b r i a n s)㊁中华羊茅(F．s i n e n s i s)㊁硬质早熟禾(P．s p h o n d yＧl o d e s)㊁微药羊茅(F．n i t i d u l a)㊁毛稃羊茅(F．k i r i l o vＧi i)和紫羊茅(F．r u b r a)的平均带菌率均超过８０％(表２).其中,１０个样点紫花针茅带菌率高达１００％.相反,赖草(L．s e c a l i n u s)㊁冷地早熟禾(P．c r y m o p h iＧl a)㊁长芒草(S．b u n g e a n a)㊁拂子茅(C．e p i g e i o s)㊁青藏野青茅(D．h o l c i f o r m i s)㊁狗尾草(S．v i r i d i s)㊁光叶糙毛草(R．l e i o p h y l l a)㊁羊茅(F e s t u c a s p．)内生真菌感染率均低于３０％.同属的禾草植物内生真菌带菌率也存在差异,例如:早熟禾属的硬质早熟禾㊁光稃早熟禾(P．p s i l o l e p i s)和西藏早熟禾(P．t i b e t i c a)带菌１００２P R A T A C U L T U R A LS C I E N C E (V o l ．３２,N o ．１２)１２/２０１５率高于５０％,而冷地早熟禾带菌率只有１３％.表２㊀青海高原禾草植物内生真菌带菌率检测结果T a b l e s ２㊀G r a s s s p e c i e s f r o m Q i n gh a i P l a t e a u t h a tw e r e e x a m i n e da t a l l s i t e s 属G e n u s禾草种类G r a s sS pe c i e s 带菌植株采集样点S i t e sw i t h i nf e c t i o n 带菌率范围R a n ge of i n f e c t i o n r a t e /％平均带菌M e a n i n f e c t i o n r a t e /％披碱草属E l ym u s 麦宾草E l y m u s t a n g u t o r u m １,１８,２５,３４,４１,４５㊀１７~１００㊀６７披碱草E l y m u sd a h u r i c u s １,２,５,８,３７,３８,４６㊀５~１００㊀４４垂穗披碱草E l ym u s n u t a n s ３,４,９,１０,１１,１５,１６㊀１０~１００㊀３５鹅观草属R o e gn e r i a 缘毛鹅观草R o e g n e r i a p e n d u l i n a ２４㊀３０~７０㊀８３．４光叶糙毛草R o e g n e r i a l e i o p h yl l a ８㊀３０㊀３０芨芨草属A c h n a t h e r u m 醉马草A c h n a t h e r u mi n e b r i a n s２,４,７,９,１１,２２,２５,２８,２,３４,３５,４１,４２,４３,４４,４５,４７㊀０~１００㊀８９．９艹洽草属K o e l e r i a艹洽草K o e l e r i a c r i s t a t a２,５,７,９,㊀３０~８０㊀４９．８冰草属A g r o p y r o n 冰草A g r o p y r o n c r i s t a t u m ６,８㊀５．６~１００㊀５２．８赖草属L e y m u s 赖草L e y m u s s e c a l i n u s １,８㊀１１~２８㊀１１．２羊草L e y m u s c h i n e n s i s ６㊀７０㊀７０早熟禾属P o a草地早熟禾P o a p r a t e n s i s １,４０㊀１４．３~５０㊀３２．２硬质早熟禾P o a s p h o n d y l o d e s ８㊀１００㊀１００西藏早熟禾P o a t i b e t i c a ７,１９㊀１０~１００㊀５５光稃早熟禾P o a p s i l o l e p i s １３,２２㊀１６．７~１００㊀５８．４冷地早熟禾P o a c r y m o ph i l a １７㊀１３㊀１３针茅属S t i p a 长芒草S t i p ab u n g e a n a １,６㊀２０~２５㊀２２．５紫花针茅S t i p a p u r p u r e a ７,１１,２３,２５,３４,３９,４２,４４,４５,４６㊀１００㊀１００异针茅S t i p aa l i e n a ２１,３３,４３㊀６７~１００㊀７５针茅S t i p a c a pi l l a t a ４０㊀４８㊀４８羊茅属F e s t u c a 紫羊茅F e s t u c ar u b r a ４３㊀１００㊀１００毛稃羊茅F e s t u c ak i r i l o v i i ７,２０,２４,２６,３０,４２㊀１７~１００㊀８０．６微药羊茅F e s t u c an i t i d u l a １８㊀１００㊀１００羊茅F e s t u c ao v i n a １４㊀１４㊀１４中华羊茅F e s t u c a s i n e n s i s３,５,１７,２５,２９,３０,４８㊀３３~１００㊀８３拂子茅属C a l a m a g r o s t i s 拂子茅C a l a m a g r o s t i s e p i g e i o s ８㊀２１．４３㊀２１．４３野青茅属D e y e u x i a 青藏野青茅D e y e u x i ah o l c i f o r m i s ３０㊀１３．６㊀１３．６狗尾草属S e t a r i a狗尾草S e t a r i av i r i d i s１㊀１０㊀１０表３㊀青海高原部分禾草内生真菌菌落生长速度及分生孢子生长情况T a b l e ３㊀C o l o n i a l g r o w t ha n d l e n g t ho f c o n i d i a o f e n d o p h yt e i s o l a t e s o b t a i n e d f r o mf o u r g r a s s s p e c i e s o f c o l l e c t i o n s i t e i n Q i n gh a i P l a t e a u ２００２１２/２０１５草㊀业㊀科㊀学(第３２卷１２期)寄主H o s t菌落生长速度S p e e do fr a d i a l g r o w t h/mm w e e k－１菌落形态C o l o n i a lm o r p h o l o g y孢子形态C o n i d i a lm o r p h o l o g y孢子大小C o n i d i a ls i z e/μm分生孢子梗C o n i d i o p h o r e s i z e/μm长度L e n g t h基宽W i d t h紫花针茅S．p u r p u r e a ６．８菌落正面白色,背面中央黑褐色C o l o n y i sw h i t e,C o l oＧn y r e v e r s e i sb r o w n弯月形㊁椭圆形㊁肾形㊁梨形L u n a t e,O v a l,R e n iＧf o r m,P y r i f o r m(３．２~７．３)ˑ(２．６~３．３)８．４~２８．０１．５~２．９异针茅S．a l i e n a ８菌落正面白色,反面淡黄褐色C o l o n y i sw h i t e,C o l oＧn y r e v e r s e i s f a w n椭圆形㊁肾形㊁弯月形O v a l,R e n i f o r m,L uＧn a t e(４．５~８．９)ˑ(２．５~３．７)１９．１~３４．５２．２~３．４光稃早熟禾P．p s i l o l e p i s １０．８菌落正面白色,背面中央黄褐色C o l o n y i sw h i t e,C o l oＧn y r e v e r s e i s t a w n y弯月形㊁肾形㊁椭圆形㊁圆形L u n a t e,O v a l,E l l i pＧs o i d,R o u n d n e s s(３．８~５．０)ˑ(２．６~２．７)１５．４~１９．１２．０~２．４麦宾草E．t a n g u t o r u m ３．８菌落正面白色,背面中央暗棕色C o l o n y i sw h i t e,C o l oＧn y r e v e r s e i sb u r g u n d y圆形㊁梨形㊁椭圆形R o u n d n e s s,P y r iＧf o r m,O v a l(３．４~４．５)ˑ(２．５~２．６)１５．５~１９．１２．２~２．５２．２㊀青海高原禾草内生真菌菌落生长特性２６种感染内生真菌的禾草植物中,只有紫花针茅㊁麦宾草㊁光稃早熟禾和异针茅４个物种中成功分离得到内生真菌(表３).其中,光稃早熟禾菌落生长速度最快(１０．８mm 周－１),而麦宾草菌落生长速度最慢(３．８mm 周－１).紫花针茅菌落正面边缘形成明显的棕色晕圈(图１A),而其他内生真菌菌落边缘未发现晕圈.同时,分离的内生真菌菌落反面质地颜色也存在差异,例如:麦宾草和紫花针茅菌落反面颜色较暗(图１B㊁E),主要以褐色和棕色为主;而异针茅和光稃早熟禾菌落反面颜色较浅,以黄色为主(图１H㊁K).麦宾草分生孢子长度明显低于异针茅和紫花针茅,与光稃早熟禾分生孢子长度相近.异针茅分生孢子梗长度明显长于其他３种,光稃早熟禾和麦宾草分生孢子梗长度相近.而紫花针茅分生孢子梗基部宽度明显小于其他３种禾草内生真菌的分生孢子梗基宽.可见,分离的内生真菌具备生长速度较慢㊁菌落正面白色㊁分生孢子着生在分生孢子梗顶端等特性,符合E p i c h l oë属内生真菌菌落的基本特征,确定分离所得４种内生真菌为E p i c h l oë属内生真菌.３ 讨论青海高原地处青藏高原东北部,由于海拔高㊁昼夜温差大和植物生长期较短等特征,导致该地域禾草植物的生长和分布出现特异性[６,３１Ｇ３２];本研究首次较为系统地对青海高原地区禾草植物感染内生真菌情况开展调查,结果表明,青海高原禾草感染内生真菌率较高,同时各物种间也存在差异,其中醉马草和紫花针茅带菌率在各样点均较高(表２).根据协同进化地理镶嵌假说,自然选择对不同物种群落的作用效应存在差异.基因流㊁基因漂移㊁基因缺失或出现等因素共同作用,形成了同一物种的不同种群在地球板块间呈现镶嵌分布的现象[３３].内生真菌与其宿主禾草相互作用,导致不同基因型的禾草－内生真菌共生体在不同空间范围内存在较大差异[３４].因此,在不同的环境条件下,垂直传播的禾草内生真菌感染同一宿主的能力在不同地理区域存在明显的差异.例如,在发达的无性分蘖和强大的种子生产能力的共同作用下,群落中处于优势地位３００２P R A T A C U L T U R A LS C I E N C E (V o l ．３２,N o ．１２)１２/２０１５图１㊀青海高原部分禾草内生真菌P D A 菌落形态、分生孢子梗和分生孢子结构F i g ．１㊀P h o t o g r a p h s o f Q i n g h a i P l a t e a u e n d o p h y t e c u l t u r e s s h o w i n g c o l o n y a n d c o n i d i a lm o r p h o l o gi e s 注:其中:A ＧC ㊁D ＧF ㊁G ＧI ㊁J ＧL 分别表示麦宾草㊁紫花针茅㊁光稃早熟禾和异针茅内生真菌菌落正反面及分生孢子梗形态.N o t e :F i g u r e sA ＧB ,D ＧE ,G ＧHa n d J ＧK w e r e d e m o n s t r a t e d t h em o r p h o l o g y o f c o l o n y o nu p pe r a n d t h e r e v e r s e ,m e a n w h i l e ,C ,F ,I a n dL i n d i c a t e d t h e c o n i d i a lm o r p h o l o g i e s of E ．t a ng u t o r u m ,S ．p u r p u r e a ,P ．p s i l o l e p i s a n d S ．a l i e n a ,r e s p e c t i v e l y ;S c a l e b a r f o r c o l o n yp i c t u r e s i s １０mm ,a n d f o r c o n i d i a p i c t u r e s i s １０μm．的多年生禾草可在稳定的生境条件下获得较高的带菌率[３４].相反,如果内生真菌和宿主间介于中性或者敌对关系时,群落中禾草资源的带菌率往往较低或者不带菌.本研究中带菌率较高的醉马草通过与其侵染的内生真菌相互作用产生次生代谢物(麦角碱)使草食家畜和昆虫产生拒食性;同时醉马草种子产量较高,平均４００２１２/２０１５草㊀业㊀科㊀学(第３２卷１２期)单株种子量就超过８００粒,从而有效提高整个种群的带菌率[３５Ｇ３９],这与国外黑麦草和高羊茅种群具有较高带菌率的研究结果相似[７,９,１５,４０Ｇ４１].同时,本研究中带菌率最高的紫花针茅作为青藏高原特有的禾本科植物,在高寒草地中形成了以紫花针茅为单一优势种的植物群落[４２Ｇ４４],紫花针茅具有较强的分蘖和种子生产能力,同时在牧草种子成熟期,种子形成的芒针能对家畜体表造成伤害,降低家畜在种子形成期对紫花针茅采食,从而使其种群不断更新和扩大[４５Ｇ４７].㊀㊀另外,禾草内生真菌带菌率受到种子传播能力和环境温度的严格控制.例如,紫花针茅种子成熟期,芒两侧密被羽状毛极易粘附到家畜体表,从而不断扩大带菌种群分布面积.本研究样点主要分布在北半球高寒地带,海拔介于３００７~４３０４m(表１),在海拔最高点只有毛稃羊茅带菌,随着海拔降低,温度逐渐升高,带菌植物种类也明显增加,这种现象在其他植物中也得出相似的结果.如,巴拿马地区热带森林中树叶单位面积上内生真菌的多样性远远高于北极周围生长树木叶片内生真菌的多样性[４８].在本次调查中,虽发现有４８种禾本科植物感染内生真菌,但其中能纯培养分离得到内生真菌的禾本科植物只有４种(表３,图１),表明内生真菌分离率较低.这可能由以下原因造成:一方面植物或种子材料存放时间较长,造成内生真菌活力丧失[２３,４９];另一方面不同植物感染的内生真菌分离条件和培养基质存在差异[５０Ｇ５１].L i等[５０]研究表明,醉马草内生真菌在不同培养条件(温度㊁p H值)㊁营养配比和培养基上生长情况存在差异.本研究中,只采用P D A培养基和常规培养条件,可能是造成禾草内生真菌分离率较低的主要原因,所以,在今后开展的研究中尝试使用不同培养基㊁不同培养及营养条件来探索适合不同内生真菌分离的最佳条件,为进一步开展禾草内生真菌分类学鉴定提供保障.综上所述,青海高原感染禾草内生真菌宿主较为丰富,调查草地的主要建群种和特有种,如:针茅属㊁芨芨草属㊁早熟禾属和羊茅属等禾草均不同程度地被禾草内生真菌侵染,其中紫花针茅和醉马草带菌率最高;然而内生真菌分离率较低,同时,分离得到的内生真菌之间存在形态上的差异,这可能与其感染内生真菌种类不同有关.由于本研究只涵盖青海高原的部分地区,后续的研究需要进一步扩大检测范围,从而总结禾草内生真菌共生体在高原地区分布特点;另外,需对分离内生真菌,尤其是高寒草地建群种 紫花针茅开展分子标记试验,确定其感染内生真菌的分类地位,并对内生真菌的宿主特异性进行研究,为今后利用禾草内生真菌作为育种材料提供基础资料.参考文献[１]㊀张镱锂,李炳元,郑度．论青藏高原范围与面积[J]．地理研究,２００２,２１(１):１Ｇ８．[２]㊀W uGL,D uGZ．G e r m i n a t i o n i s r e l a t e d t os e e d m a s s i n g r a s s e s(P o a c e a e)o f t h e e a s t e r nQ i n g h a iＧT i b e t a nP l a t e a u,C h i n a[J]．N o r d i c J o u r n a l o fB o t a n y,２００７,２５(５Ｇ６):３６１Ｇ３６５．[３]㊀Z h o uQP,J iYJ,D eB r u i j nK,L i a n g GL,Y a nH B．P r e l i m i n a r y e v a l u a t i o n o f n a t i v e g r a s s e s c o l l e c t e d f r o ma l p i n e r a n g e l a n d s i n Q i n g h a i P r o v i n c e,C h i n a,a sm a t e r i a l s f o r b r e e d i n gg r a z i n gＧt o l e r a n t f i n eh e r b a g e[J]．G r a s s l a n dS c i e n c e,２００９,５５(１):４１Ｇ４５．[４]㊀T a n g L,D o n g SK,S h e r m a nR,L i uSL,L i uQ R,W a n g X X,S uX K,Z h a n g Y,L iY Y,W uY,Z h a o H D,Z h a oC,W uX Y．C h a n g e s i nv e g e t a t i o n c o m p o s i t i o na n d p l a n t d i v e r s i t y w i t h r a n g e l a n dd e g r a d a t i o n i n t h e a l p i n e r e g i o no fQ i n g h a iＧT i b e t P l a t e a u[J]．T h eR a n g e l a n d J o u r n a l,２０１４,３７(１):１０７Ｇ１１５．[５]㊀刘尚武．青海植物志[M]．西宁:青海人民出版社,１９９９．[６]㊀孙海群．青海禾本科植物的生物多样性分析[J]．草业科学,２００２,１９(２):７Ｇ１２．[７]㊀S e mm a r t i n M,O m a c i n iM,G u n d e lP E,H e r nán d e zＧA g r a m o n t e H M．B r o a dＧs c a l ev a r i a t i o no f f u n g a lＧe n d o p h y t e i n c i d e n c e i n t e m p e r a t e g r a s s e s[J]．J o u r n a l o fE c o l o g y,２０１４,１０３:１８４Ｇ１９０．[８]㊀M a l i n o w s k i DP,B e l e s k y DP．A d a p t a t i o n s o f e n d o p h y t eＧi n f e c t e d c o o lＧs e a s o n g r a s s e s t o e n v i r o n m e n t a l s t r e s s e s:M e c h a n i s m so fd r o u g h t a n dm i ne r a l s t r e s s t o l e r a n c e[J]．C r o p S c i e n c e,２０００,４０(４):９２３Ｇ９４０．[９]㊀C l a y K,S c h a r d l C．E v o l u t i o n a r y o r i g i n s a n d e c o l o g i c a l c o n s e q u e n c e s o f e n d o p h y t e s y m b i o s i sw i t h g r a s s e s[J]．T h eA m e r i c a nN a tＧ５００２P R A T A C U L T U R A LS C I E N C E(V o l．３２,N o．１２)１２/２０１５６００２u r a l i s t,２００２,１６０(S４):S９９ＧS１２７．[１０]㊀S c h a r d l CL,L e u c h t m a n nA,S p i e r i n g MJ．S y m b i o s e s o f g r a s s e sw i t h s e e d b o r n e f u n g a l e n d o p h y t e s[J]．A n n u a l R e v i e wo f P l a n tB i o l o g y,２００４,５５:３１５Ｇ３４０．[１１]㊀S c h a r d l CL．T h eE p i c h l o a e,s y m b i o n t s o f t h e g r a s s s u b f a m i l y P oöi d e a e１[J]．A n n a l s o f t h eM i s s o u r i B o t a n i c a l G a r d e n,２０１０,９７(４):６４６Ｇ６６５．[１２]㊀L e u c h t m a n nA,B a c o nC W,S c h a r d l CL,W h i t e JFa n dT a d y c h M．N o m e n c l a t u r a l r e a l i g n m e n t o f N e o t y p h o d i u m s p e c i e sw i t hg e n u sE p i c h l oё[J]．M y c o l o g i a,２０１４,１０６(２):２０２Ｇ２１５．[１３]㊀R e e dKF M,L e o n f o r t eA,C u n n i n g h a m PJ,W a l s h JR,A l l e nDI,J o h n s t o n eGR,K e a r n e y G．I n c i d e n c e o f r y e g r a s s e n d o p h y t e (N e o t y p h o d i u ml o l i i)a n dd i v e r s i t y o f a s s o c i a t e d a l k a l o i d c o n c e n t r a t i o n s a m o n g n a t u r a l i s e d p o p u l a t i o n s o f p e r e n n i a l r y e g r a s s (L o l i u m p e r e n n e L．)[J]．C r o p a n dP a s t u r eS c i e n c e,２０００,５１(５):５６９Ｇ５７８．[１４]㊀J e n s e nA M D,R o u l u n dN．O c c u r r e n c e o f N e o t y p h o d i u m e n d o p h y t e s i n p e r m a n e n t g r a s s l a n dw i t h p e r e n n i a l r y e g r a s s(L o l i u m p e r e n n e)i nD e n m a r k[J]．A g r i c u l t u r e,E c o s y s t e m s&E n v i r o n m e n t,２００４,１０４(３):４１９Ｇ４２７．[１５]㊀R u d g e r s JA,A f k h a m iM E,RúaM A,D a v i t tAJ,H a mm e r S,H u g u e tV M．Af u n g u s a m o n g u s:B r o a d p a t t e r n s o f e n d o p h y t ed i s t r i b u t i o n i n t he g r a s s e s[J]．E c o l o g y,２００９,９０(６):１５３１Ｇ１５３９．[１６]㊀Wäl i PR,A h l h o l mJU,H e l a n d e rM,S a i k k o n e nK．O c c u r r e n c e a n d g e n e t i c s t r u c t u r e o f t h e s y s t e m i c g r a s s e n d o p h y t e E p i c h l oёf e s t u c a e i n f i n e f e s c u e p o p u l a t i o n s[J]．M i c r o b i a l E c o l og y,２００７,５３(１):２０Ｇ２９．[１７]㊀L a t c hGC M,P o t t e rLR,T y l e rBF．I n c i d e n c e o f e n d o p h y t e s i n s e e d s f r o mc o l l e c t i o n s o f L o l i u m a n d F e s t u c a s p e c i e s[J]．A nＧn a l s o fA p p l i e dB i o l o g y,１９８７,１１１(１):５９Ｇ６４．[１８]㊀R o l s t o n M P,S t e w a r tA V,L a t c hGC M,H u m eDE．E n d o p h y t e s i nN e wZ e a l a n d g r a s s s e e d s:O c c u r r e n c e a n d i m p l i c a t i o n s f o rc o n s e r v a t i o no f g r a s s s p e c i e s[J]．N e wZ e a l a nd J o u r n a l o fB o t a n y,２００２,４０(３):３６５Ｇ３７２．[１９]㊀K i r k b y K A,P r a t l e y JE,H u m eDE,A n M,W uH．I n c i d e n c e o f e n d o p h y t e N e o t y p h o d i u m o c c u l t a n s i n L o l i u m r i g i d u mf r o mA u s t r a l i a[J]．W e e dR e s e a r c h,２０１１,５１(３):２６１Ｇ２７２．[２０]㊀̇Z u r e k M,W i e w iór aB,̇Z u r e kG,P r ońc z u kM．O c c u r r e n c e o f e n d o p h y t e f u n g i o n g r a s s e s i nP o l a n d R e v i e w[J]．F u n g a l E c o l oＧg y,２０１２,５(３):３５３Ｇ３５６．[２１]㊀E k a n a y a k ePN,H a n dM L,S p a n g e n b e r g GC,F o r s t e r JW,G u t h r i d g eK M．G e n e t i c d i v e r s i t y a n dh o s t s p e c i f i c i t y o f f u n g a l e nＧd o p h y te t a x a i nf e s c u e p a s t u r eg r a s s e s[J]．C r o p S c i e n c e,２０１２,５２(５):２２４３Ｇ２２５２．[２２]㊀M a r s h a l lD,T u n a l iB,N e l s o nL R．O c c u r r e n c eo f f u n g a l e n d o p h y t e s i ns p e c i e so fw i l d[J]．C r o p S c i e n c e,１９９９,３９(５):１５０７Ｇ１５１２．[２３]㊀W e iY K,G a oYB,X uH,S uD,Z h a n g X,W a n g Y H,L i nF,C h e nL,N i eLY,R e nAZ．O c c u r r e n c eo f e n d o p h y t e s i n g r a s s e s n a t i v e t on o r t h e r nC h i n a[J]．G r a s s a n dF o r a g eS c i e n c e,２００６,６１(４):４２２Ｇ４２９．[２４]㊀纪燕玲,孙相辉,王志伟．禾本科植物内生真菌研究１１:黄山景区禾本科植物内生真菌的检测与分布[J]．南京农业大学学报,２０１１,３４(１):１４７Ｇ１５０．[２５]㊀南志标．内生真菌在我国部分国产和引进禾草品种的幼苗及成株中的分布[J]．草业学报,１９９６,５(３):１３Ｇ１７．[２６]㊀N a nZB,L i CJ．R o l e s o f t h e g r a s sＧN e o t y p h o d i u m a s s o c i a t i o n i n p a s t o r a l a g r i c u l t u r e s y s t e m s[J]．A c t aE c o l o g i c aS i n i c a,２００４,２４(３):６０５Ｇ６１６．[２７]㊀N a nZB,L i CJ．N e o t y p h o d i u mi n n a t i v e g r a s s e s i nC h i n a a n d o b s e r v a t i o n s o n e n d o p h y t e/h o s t i n t e r a c t i o n s[A]．P a u l V H,D a pＧp r i c hP D．P r o c．４t hI n t e r n a t i o n a l N e o t y p h o d i u m/G r a s sI n t e r a c t i o n sS y m p o s i u m[C]．S o e s t,G e r m a n y:F a c h b e r e i c h A g r a rＧw i r t s c h a f t,２０００:４１Ｇ５０．[２８]㊀L i CJ,N a nZB,P a u lV H,D a p p r i c hPD,L i uY．A n e w N e o t y p h o d i u ms p e c i e ss y m b i o t i cw i t hd r u n k e nh o r s e g r a s s(A c hＧn a t h e r u mi n e b r i a n s)i nC h i n a[J]．M y c o t a x o n,２００４,９０(１):１４１Ｇ１４７．[２９]㊀L a t c hGC M,C h r i s t e n s e nMJ,S a m u e l sGJ．F i v e e n d o p h y t e s o f L o l i u m a n d F e s t u c a i nN e wZ e a l a n d[J]．M y c o t a x o n,１９８４,２０:５３５Ｇ５５０．[３０]㊀K a n g Y,J iYL,Z h uKR,W a n g H,M i a oH M,W a n g Z W．An e w E p i c h l oёs p e c i e sw i t h i n t e r s p e c i f i c h y b r i d o r i g i n s f r o m P o a p r a t e n s i s s s p．p r a t e n s i s i nL i y a n g,C h i n a[J]．M y c o l o g i a,２０１１,１０３(６):１３４１Ｇ１３５０．。
桃儿七
桃儿七【拉丁名】Sinopodophullum hexandrum(Sinopodophyllum emodi (Wall. ex Royle) Ying)【中文名】桃儿七【拉丁科名】Berberidaceae【中文科名】小檗科【保护级别】3【分布】陕西、甘肃、青海、西藏、四川、云南【现状】稀有种。
桃儿七残存于东亚，呈零星分布。
由于根状茎与果实入药，而被任意采挖，天然繁殖能力较弱，随着植被的破坏而导致其生境的改变，植株日益稀少，分布区日渐缩减。
海拔下限(米) (1500 ) 2400海拔上限(米) 3400 (4300)【形态特征】多年生草本，高40一80厘米；根状茎粗壮，横走，通常多少结节状；不定根多数，长达30厘米以上，直径2一3毫米，红褐色或淡褐色；茎直立，基部具抱茎的鳞片，上部有2（一3）叶。
叶具长达30厘米的柄；叶片轮廓心脏形，长13一20厘米，宽16一30厘米，3或5深裂几达基部，顶生裂片3浅裂，侧生裂片2中裂，小裂片先端渐尖，边缘具尖锯齿，下面被柔毛。
花两性，6基数，单生茎端，先叶开放；萼片早落；花瓣粉红色，倒卵状长圆形，外轮大，内轮较小；雄蕊长约9毫米，花药线形，长约4毫米，具四合花粉；子房1室，生多数胚珠。
浆果卵圆形，熟时红色，长5.5－6.5厘米，直径约3.5厘米；种子多数。
【特性】桃儿七通常生于海拔较高的平坦山谷及透光度好的林下、林缘或草灌丛中。
高山草丛中或疏林下及林缘。
适于寒冷而湿润，夏季低温多雨，冬春干冷的气候，最低气温在-10℃以下，年降水量400--900毫米，多集中在6--9月。
所在地为高山草地乱石缝隙腐殖质丰富的山地灰化土、暗灰钙土、灰褐土及山地棕壤。
在太白山的糙皮桦Betula utilis D.Don.林下，多与大花糙苏Phlomis megalantha Diels、落新妇Astilbe chinensis (Maxim.) Franch. et Sav.、升麻Cimicifuga foetida L.、无距耧斗菜Aquilegiaecalcarata Maxim.、赤芍Paeonia veitchii Lynch.等伴生。
珍稀药用植物桃儿七
２ ０ １ ０ ， ３ ０ （ １ １ ）
杨 晖 等：珍稀药用植物桃儿七细胞工程及内生菌研究进展
９ ５
先端渐尖， 边缘具尖锯齿， 下面被柔毛； 花两性， ６基数， 单生茎端， 先叶开放； 萼片早落； 花瓣粉红色， 倒卵状长 圆形， 外轮大， 内轮小； 雄蕊长 ６～ ９ ｍ ｍ ， 花药线形， 长３ ， 具四合花粉； 子房 １室， 生多数胚珠； 浆果卵圆 ～ ６ ｍ ｍ ９ ｍ ｍ ， 直径 ２～ ５ ｃ ｍ ； 种子多数， 每 形， 熟时红色， 长 ４～ 株平均 ６ ０粒， 多可至 １ ８ ０粒。自然状况下， 桃儿七主要 通过种子进行有性繁殖， 但是种子需要经过 ６～ ９个月 的休眠期才能完成生理后熟， 从种子萌发到长成商品 ６年。植株通常 ５月中上旬出苗， ５月 苗一般需要 ５～ 下旬 ～ ６月上旬开花， ８～ ９月果实成熟。 桃儿七的生长及植株中的鬼臼毒素含量与其生境 （ 海拔、 土壤、 温度、 湿度、 ｐ Ｈ 等） 、 季节及采收时间有 ａ ｄ ｅ ｅ ｍ 关。Ｎ
［ １ ３ ］
发现在 ４种不同生态型的
Ｐ ．ｈ ｅ ｘ ａ ｎ ｄ ｒ ｕ ｍ 中， 叶片数目与根茎中鬼臼毒素含量呈 反相关， 即 ４片叶植物中鬼臼毒素含量低于三片叶、 两 片叶和一片叶植物。说明植株的营养生长与作为次生 代谢产物的鬼臼毒素积累呈反相关。鬼臼毒素含量最 高时是在开花期， 通常越是成熟的植株鬼臼毒素含量 越高。
１ ６ ］ Ｕ ｄ ｅ ｎ 等［ 以Ｐ ．ｈ ｅ ｘ ａ ｎ ｄ ｒ ｕ ｍ 种子萌发获得的无菌苗根
等对生长在印度喜马拉雅中部 Ｋ ｕ ｍ ａ ｕ ｎ
地区不同海拔高度 （ ２７ ４ ０～ ３３ ５ ０ ｍ ）的 Ｐ ．ｈ ｅ ｘ ａ ｎ ｄ ｒ ｕ ｍ １ １个种群的研究表明， 植物生长量， 如植株高度、 茎的 直径、 叶面积等指标与其生长的海拔高度呈负相关， 而 根茎中的鬼臼毒素随海拔高度上升而增加。环境条件 越干燥， 植物生长速度越慢， 植物体内鬼臼毒素含量越 高， 而湿润条件下的植株由于生长速度相对较快， 鬼臼 ｕ ｒ ｏ ｈ ｉ ｔ 等 毒素含量较低。Ｐ
手参内生真菌及根际土壤真菌多样性研究进展
手参内生真菌及根际土壤真菌多样性研究进展阿拉坦存布尔1，2曹乌吉斯古楞1，2*包金花3宝音图1，2胡红霞1，2王秀兰1（1内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古通辽028000；2内蒙古民族大学/蒙医药研发工程教育部重点实验室，内蒙古通辽028000；3内蒙古民族大学农学院，内蒙古通辽028000）摘要手参为二级珍稀濒危植物，具有极高的药用价值。
真菌对手参生长具有重要影响，应筛选获取有效促进手参幼苗生长的共生真菌，开展恢复生态资源栽培已成为必然趋势。
本文通过文献研究整理统计了涉及中国8个地区和其他4个国家的手参内生真菌和根际土壤真菌多样性及其生物学功能研究现状，统计了手参内生真菌共隶属于79属，其中角担菌属、青霉菌属、曲霉属、背芽突霉属、木霉属和Zymoseptoria为手参内生真菌优势类群。
从手参不同器官中分离得到的内生真菌属数从多到少依次为块茎>地上茎、叶>果荚>原球茎>幼苗，花中未分离到；隶属产地排序依次为西藏>北京>甘肃>四川>吉林>河北、黑龙江。
手参内生真菌在植物不同器官及不同产地间存在明显差异。
手参根际土壤真菌隶属于43属，其中镰刀菌属、木霉属、耙齿菌属为优势类群。
手参根际土壤真菌群落结构在不同产地间也存在明显差异，并且各产地手参根际土壤真菌优势类群各不同。
手参内生真菌对手参种子萌发及幼苗生长发育有着重要影响，并具有明显抑菌活性。
应全面了解手参内生真菌，进一步扩大手参分布范围，考虑手参不同生长期内生真菌群落结构变化，开展内生真菌分离鉴定技术的优化与提升以及生物功能的研究与评价等工作，为手参人工繁殖、内生菌资源的开发与利用提供参考。
关键词手参；内生真菌；根际土壤真菌；多样性；生物活性中图分类号S567.23+9文献标识码A文章编号1007-5739（2023）21-0076-08DOI：10.3969/j.issn.1007-5739.2023.21.020开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Research Progress on Diversity of Endophytic Fungi and Fungi in Rhizosphere Soil ofGymnadenia conopseaAltancunbuer1,2CAO Wujisiguleng1,2*BAO Jinhua3Baoyintu1,2HU Hongxia1,2WANG Xiulan1(1Mongolian Medical College,Inner Mongolia Minzu University,Tongliao Inner Mongolia028000;2Key Laboratory of Mongolian Medicine Research and Development Engineering,Ministry of Education,Inner Mongolia Minzu University,Tongliao Inner Mongolia028000;3Agricultural College,Inner Mongolia Minzu University,Tongliao Inner Mongolia028000) Abstract Gymnadenia conopsea is listed as a Class II rare and endangered plant and has high medicinal value. Fungi have an important effect on the growth of G.conopsea,so it is necessary to select and obtain symbiotic fungi that can effectively promote the growth of G.conopsea seedlings,and it has become an inevitable trend to carry out the cultivation of restoring ecological resources.This paper summarized the research status of G.conopsea endophytic fungi and rhizosphere soil fungi diversity and their biological functions involving8areas in China and4other countries through literature research,a total of79genera G.conopsea endophytic fungi were identified,among which, Ceratobasidium,Penicillium,Aspergillus,Cadophora,Trichoderma and Zymoseptoria were the dominant groups of G.conopsea endophytic fungi.The number of endophytic fungi isolated from different organs of G.conopsea ranged from more to less as follows:tuber>above-ground stem,leaf>pod>protocorm>seedling,and no fungi were isolated from基金项目内蒙古自治区科技计划项目（2021GG0003）；内蒙古民族大学博士启动基金（BS509）。
青海省互助北山林区主要野生木本植物资源调查与分析
第55卷第3期2021年6月Vol55No3Jun2021华中师范大学学报(自然科学版)JOURNAL OF CENTRAL CHINA NORMAL UNIVERSITY(Nat Si)DOI：10.19603/ki.1000-1190.202103.012文章编号：1000-1190（2021）03-0407-09青海省互助北山林区主要野生木本植物资源调查与分析胡樱，魏晶晶，贾慧萍，王志鸽，张浩然，王慧春（青海师范大学生命科学学院/青海省青藏高原药用动植物资源重点实验室/青海省青藏高原生物多样性形成机制与综合利用重点实验室，西宁810008）摘要：该研究采用线路调查、样方调查、访谈等方法，调查青海省互助北山野生木本植物资源现状.结果表明，研究区有208种野生木本植物，分属32科66属.其中，乔木类占比17.79%，灌木类占比74.04%;科属分布集中在少种科（37.50%）、单种科（31.25%）以及单种属（50.00%）、少种属（33.33%）中，说明研究区野生木本植物科属分布具有狭窄性；在属的区系分布中，研究区野生木本植物具北温带特性（50.00%）.在用途分类中，观赏类占总种数比最高（35.10%）,其次为药用类（31.25%）和食用类（12.98%）.观赏类中灌木占比87.67%，乔木占比12.33%，观赏部位主要是株形；药用类资源中，叶入药（30.77%）、寒性（32.31%）、苦味（44.62%）、清热类药（1&46%）占优势;食用植物以果实类（77.78%）为主.调查结果可为青海省互助北山野生木本植物资源综合开发利用提供参考•关键词：互助北山林区；野生；木本植物；资源现状；开发利用中图分类号：S78文献标志码：A开放科学（资源服务）标志码（OSID）：林木种质资源是生态系统的重要组成部分，在维持生态系方面具要意义，同时也在人类社会的和发展等方面发挥重要作用青藏高原地处“第三极”，是长江、黄河、的源，也是中华民族繁衍生息的，更是中华民族文化的.青海省位于青原东北部，是其重要的部分之一.近年来，关于青海省植物本底的调查报道逐渐增多，幻调查报道了青物为主的478药物，其中菊科；拉本等旧对青:区的生用物调，调了81种土族野生食用植物，这些植物主要被用作为野生（食用）、调味品、药用、饲料、香料等；徐智玮等⑷针红景天属的药用植物展开调，发现大花红景天、狭叶红景天和红景天为药用红景天的主要基原，且蕴含量较为丰，应合理利用开发这一宝贵具大开：力.本文通过文献调查发现，近20年来针对青海省林木的文料相对较少，大中在药用植物调及个别的育种方面.因此，非常有必要对青海省林木种质资源进行进一步调，家.青海省北山林区属青藏—黄土高原过渡带，具两大高原的地理与气候特性，因其丰富的植物为“植物王国”具有较为典型的代表性，但关于该地野生木本植物调查的文 少.因此，本文以青海省北山林场为研究对象，调查分析林区生林木种质，以期为青海省林业发展一考.1调查地概况与方法1.1调查地概况互助北山林区位于祁连山系达坂山南坡，大通河中下游，地理坐标为36°42'〜37°6'N,102°6'〜102°43'E,海拔2100〜4308m,地处青海省互助县东北部，属于青藏和黄土高原的过渡属温带大气候，干旱少雨，由于杂，高差悬，热量平分均衡，垂直分明显，年平均气温3.4C，各地均以夏季（6〜8月）气温，10〜17C，（12〜2月），-5〜-12C6.收稿日期:2020-02-09.基金项目：青海省自然科学基金项目（2019-ZJ-913）;青海师范大学创新创业训练项目. *通信联系人.E-mail：whch_66@163.com.408华中师范大学学报(自然科学版)第55卷1.2调查方法采用线路调查法、样方调查法和访问法进行调查，其中线路调查法是指查阅资料掌握研究区基本情况，并在卫星地图上设计13条路线调查，路线需具全面性、整体性、合理性等特点，记录线路及两侧3m内的野生木本植物.样方调查法是指在研究区设置13个样地，每个样地分别在阳坡与阴坡设置3个乔木样方，样方间隔500m,乔木样方大小20mX20m,另设5个大小为5mX5m的灌木样方,设置要符合随机性和全面性，记录样点内所有野生乔木、灌木、半灌木、藤本类植物[56].访问调查法是指访问研究区林业管理人员和当地居民林木的一些基本情况，例如分布、利用以及保护等.2结果与分析共调查到研究区有208种野生木本植物，分属32科66属.如表1所示.表1研究区野生木本植物统计Tab1Statisticsofwildwoodyplantsinthestudyarea序号Serial number科Families属数Genusnumber数Speciesnumber序号Serialnumber科Families属数Genusnumber数Speciesnumber1科PinaceaeLindl&2318科Aceraceae11 2科CupressaceaeBartling3519无患子科Sapindaceae11 3科Ephedraceae Dumortier1420科Rhamnaceae11 4科Salicaceae23621科Tamaricaceae34 5木科Betulaceae3522瑞香科Thymelaeaceae126科Ulmaceae2423科Elaeagnaceae23 7生科Loranthaceae1224五力口科Araliaceae128蓼科Polygonaceae1125山茱萸科Cornaceae119藜科Chenopodiaceae1126鹃科Ericaceae28 10毛萇科Ranunculaceae1927木犀科Oleaceae13 11小（科Berberidaceae1928马钱科Loganiaceae11 12虎耳草科Saxifragaceae31729马鞭草科Verbenaceae13 13蔷薇科Rosaceae134330茄科Solanaceae1114豆科Leguminosae41031忍科Caprifoliaceae312153藜科Zygophyllaceae1132科Compositae58 16芸香科Rutaceae11总计6620817卫矛科Celastraceae162.1物种组成本次调查初步记录了研究区野生林木树种32科66属208种，如表2所示，其中裸子植物3科5属12种，包括油松CPinus tabuliformis C3m.)、青海玄杉(Picaa crassifolia Kom.)、青6(Picea xilsonii Mast)、侧柏(PlaH'adus orientalss(L.•Franco)等；被子植物29科61属196种，包括青杨(Populus cathayana)、虎榛子(Ostryopsis daidiana)、白桦(9€£ula platyphylla Suk.)、紫色悬钩子(Rubus irritans Focke.•等.2.2生活型统计研究区野生木本植物中，乔木占比17.79%，包括柏科、松科、桦木科等；74.04%为灌木，主要有小麋科、蔷薇科、杜鹃花科、忍冬科等；相对于以上两种类型来说，半灌木、藤本类占比较低，共占比8.18%.可以看出灌木物种占绝对优势，如图1示&2研究区木本物计物Tab2Statisticalspeciescompositionofforestplantsinthestudyarea类群Classgroup裸子植物Gymnosperm物Angiosperm木本植物ForestPlants 科Family32932属Genus56167 Species12196208第3期胡樱等：青海省互助北山林区主要野生木本植物资源调查与分析409&、u.2=odo.IdM£图1研究区野生木本植物生活性统计Fig.1Statistics of life of wild forestplants in the study area 2.3科属分布情况2. 3.1科的分布表3统计了研究区野生木本植物科的数量及%出，少种科和单一，科68.75%；种的：方面，大科〉中等科〉少中科〉较大科〉单科，大科、中等科•大科中仅科、蔷薇科，较大科含有虎耳草科、忍冬科•说明该林场野生木本物科的分布具有一定的狭窄2.3.2属的分布研究区野生木本植物属内种的数量及计分析中，20上的大属只有柳属；11〜20种的较大属只有茶薦子属；有9个中等属，占13.64%；22个少种属，占33.33%,33个单属%50.00%%属上%单属及少属分%明本区物科属具一的狭窄性，如表4所示.3研究区生木本物科计Tab3Speciesstatisticsofwildforestplantsinthestudyarea类比/% Analogy/%单种科Singlefamilies少科Fewerfamilies中科Mediumfamilies大科Largerfamilies大科Bigfamilies合计Total科Family10(31.25"12(37.50"6(18.75"2(6.25"2(6.25"32(100) Species10(4.81"40(19.23"50(24.04"29(13.94"79(37.98"208(100)注：少种科：2〜5种，中等科：6〜10种，较大科：11〜20种，大科：〉20种.表4研究区野生木本植物属内种统计Tab.4Internal species statistics of wild forest plants in the study area类比/% Analogy/%单属Singlegenus少属Fewergenu中属s Mediumgenus大属Largergenus大属Biggenus合计Total属Genus3350.00"22(33.33"9(13.64"1(1.52"1(1.52"66(100"Species33(15.87"62(29.81"70(33.65"14(6.73"29(13.94"208(100"2.4区系分布情况研究区木本植物有11种区系分布类型⑺，如表5所示，北温带分布占比最高，达50.00%，包括圆柏属、杨属、榆属等33属木本植物；其次为泛热分布，包括属、苦马豆属等7属木本植物，占比10.61%;在旧世界温带分布中，鲜卑花属、瑞香属等6属，占总属9.09%;世界分布仅含悬钩子属、属等5属，占比7.58%;其他类型分布，总22.72%，说明该区木本植物具北温带分布特表5研究区木本植物属的区系分布统计Tab5Floristicdistributionstatisticsofforestplantsinthestudyarea序号Serial number分布类型Distribution pattern属数Number of genus占比/%Proportion1 2 3 4 5 6分Cosmopolitan57.58泛热带Pantropic710.61热带亚洲Tropical Asia1 1.52北温带North Temperate3350.00东亚及C美间断East Asiaand North America disjunction3 4.55旧世界温带Old World Temperate69.09410华中师范大学学报(自然科学版)第55卷续表5序号Serialnumber分类型Distribution pattern属数Numberofgenus:/%Propor<ion7温带亚洲Temperate Asia3 4.558地中海、西亚至中亚Mediterranean,West Asia to Central Asia2 3.039中Cen<ralAsia1 1.5210东亚East Asia2 3.0311中国特有Endemic to China3 4.55合计Total66100.002.5按用途分类统计种野生木本植物按用途分为药用、食用、饲料、观赏中国植物志⑻等文献资料，将研究区20812种类型，如表6所示.表6研究区野生木本植物用途分类统计Tab.6Use classification statistics of wild forest plants in the research area数 用途Numberof Usespecies总/% Accoun<for a l<hespecies药用Medicinal6531.25用Edible2712.98料Fodder83.85Ornamen<al7335.10绿化Greening2913.94生态Ecology188.65油料Oil7 3.37糅质Tannin20.96染料Dye3 1.44蜜源Nectariferous4 1.92用材Material2612.50其他Others5124.52重要种Importancespecies草麻黄Ephedra sinica Stapf、金露梅Gotentilia fruticosa L.冰川茶薦子Ribes glaciate Wall、紫色悬钩子Rubus irritans Focke 沙枣Elaeagnus angustifolia L.、蒙古A Caryopteris mongholica Bunge天山花楸Sorbus tianschanica Rupr、毛樱桃Cerasus tomentosa(Thunb.)Wall 油松、甘青铁线莲Cl ema i i s tangu t ica(Maxim.)Korsh陕甘花楸Sorbus koehneana Schneid、中国沙棘Hippophae rhamnoides L.subsp.sinensis Rouii.虎榛'樱桃虎榛子、金露梅天山花楸Sorbus iianschanica Rupr、甘青鼠李Rhamnus tangutica J.Vass 匙叶柳Salix spathulifolia Seemen ex Diels、沙枣油松、青海云杉、青6葱皮忍冬Lonicera ferdinandi Franchet、三春水木白枝Myricaria paniculata P.Y.Zhang et Y.J.Zhang注：由于同种植物有不同功效，故占比超过100%.2.5.1观赏类野生观赏植物是指具有美丽的及价的植物⑼，研究区73生木本物，占总数比35.10%.其中，灌木类87.67%，包括山: (Philadelphus incanus Koehne)、高山绣线菊(Spiraea alpina Pall.)A千里香杜鹃{Rhododendron thymifolium Maxim.)等；乔木类占比12.33%，包括青海云杉(Picea crassi f olia Kom.)、圆柏QJuniperus chinensis L.)等，如图2示表7估算了该区部分重要观赏植物的资源储量％出小(储量，达到3.2X 106kg・km-2，研究区面积约为1125km2，该种总储量达到3.6X109kg；此外，其他具 价图2研究区观赏植物生活型统计Fig.2Statistics of life forms of ornamental plants in the studyarea第3期胡樱等：青海省互助北山林区主要野生木本植物资源调查与分析411的山梅花、扁刺蔷薇、鲜卑花、匍匐枸子、天山花楸要的储量分别达到14X104、2.1X104、6.4X105、8.2X103、2.9X104k g・km—2，说明研究区观赏类植物储量较大,可以支撑适度的引种驯化开发，例如利用养、压条等熟的殖人工驯化,环境影响下实现资源最大利用.Tab7Reserveestimationtableofimportantornamental表7研究区观赏重要种资源储量估算表species resources in the study area要Importance species资源储量Resourcereserve/(k g・km—2)要Importancespecies储量Resourcereserve/(kg・km—2"鲜黄小( 3.2X106高山绣线菊 5.5X104山梅花 1.4X104匍匐枸子8.2X103扁刺蔷薇 2.1X104烈香杜鹃2.8X103毛樱桃 1.7X103美丽茶；子 6.2X104卑 6.4X105天山花楸 2.9X104图3展示了研究区野生观赏木本植物观赏价值主要集中部位数量，其中,高，占97.26%;其次为花部，占比49.32%；叶部略于花部，占比43.84%；；的为果实部，占12.33%.从占比上看，株形【guoEodog£注：部分植物有多个部位具有美学价值，因此总超100%3研究区部数量Fig3Proportionofthenumberofornamentalpartsinthestudyarea2.5.2药用类如图4所示，按中药学分类方法(0「12),该区野生木本药用植物中，叶入药植物I 齿稠李CPadus obtusata(Koehne)Yu et Ku.)(3.5X 103kg・km—2)、金露梅(9.5X107kg・km—2)等，占30.77%，根入药植物有秦岭小((Berbens circumserrata Schneid.)(7.6X105kg・km—2)、沙枣(2.4X103kg・km—2)等，占2154%，茎入药植物有桝寄生(1.2X103kg・km—2"木藤蓼(1.6X 103kg・km—2)等，占20.00%，果实入药植物有冰川茶薦子(3.6X104kg・km—2"峨眉蔷薇(Rosa omeiensis Rolfe.)(6.9X103kg・km—2)等，占18.64%，花入药的有金露梅(9.5X107kg・km—2)等，占16.92%，全草入药的有苦马豆(Sphaerophysa salsula(Pall.)DC.)(2.1X103kg・km—2)、柳叶亚菊(Ajania salicifolia(Mattf.)Poljak.)(8.9X103kg-km—2)等，占6.15%，其他入药的有油松(5.3X1012kg・km—2)、具鳞水柏枝(皿尹込血squamosa Desv.)(7.2X104kg・km—2)等，占6.15%，种子入药的有北方枸杞(Lycium chinense Mill.var.p o^an z ni(Pojark.) A.M.Lu.)) (3.0 X103kg・km—2)，占145%，表明该地区药用植物资源储量较大，可适度开类eq二它.TOJlunooov24^,症込药用部位Medicinal parts注：由于有些植物有多个药用部位又分别统计，故占比超过100%.图4研究区药用木本植物药用部位占比情况Fig.4The proportion of medicinal parts ofmedicinal woody plants in the study area研究区野生木本药用植物药性分类中(0),紫丁香(Syringa oblata Lindl.)、山生柳(Salix oritrepha Schneid.)等寒性类最多，占32.31%，木藤蓼QFallopia aubertii(L.Henry)Holub)、冰川茶薦子等凉性和桝寄生(Viscum coloratum (Kom.)Nakai.)、天山花楸等平性类次之，占23.08%,温性药占2154%，如甘肃山楂(Crataegus kansuensis Wils.)、烈香杜鹃(Rhododendron anthopogonoides Maxim.)等，未412华中师范大学学报(自然科学版)第55卷药物，5示8，12.31%，c药，6示35药'性Property of a medicine50二一BJOJlunooov^£注：由于有些植物药分别统注：由于有些植物有多种药性又分别统计％故占比超过100%.图5研究区药用木本植物药性占比情况Fig.5TheproportionofmeRicinalpropertiesofwooRyplantsinthestuRyarea该区野生木本植物药味统计中「10),苦味药有木藤蓼(Fa'o aubetii(L.Henry)Holub)、甘青铁线莲{Clematis tangutica(Maxim.•Korsh.)、秦岭小((Berberss circumserrata(Schneid.•Schneid.•等29种，占比44.62%.辛味药有红毛五加(Acathopana,giraldii Harms.)、烈香杜鹃等18种，占比27.69%、甘味药有蒙古A、北方枸杞等15种，占比23.08%，酸味药有中国沙棘、冰川茶薦计，故占比超过100%.图6研究区药用木本植物药味占比情况Fig6Theproportionofmedicinalflavorofmedicinalwoodyplantsinthestudyarea如图7所示，该区野生木本药用植物中，冰川茶薦子、银露梅、北方枸杞药，达15.79%$血满草(Sambucus adnata Wall.ex DC.)、密毛白莲蒿(Artemisia gmelinii var. messerschmidiana(Besser)Poljakov)、鲜卑花等祛风除湿药占比12.31%$陇蜀鹃{Rhododendron przexalskii Maxim.)A细齿稠李、蒙古A等止咳化痰平喘药占10.53%，其余类型药物均低于10%.7-89%10.53%药喘平药药药药咳透瘀风药湿止渗化药药药药药药息药药药药热风痰水血寒气食虫下血肝湿表窍神清祛化利活驱理消驱泻止平化解开安二二二Hilli注：由于有些植物有多种药效又分别统计，故占比超过100%.图7研究区木本药用植物药效统计分析Fig7Statisticalanalysisofmedicinale f ectofforestplantsinthestudyarea2.5.3食用类从图8中可以看出，研究区食用类木本植物中，果实类有21种，占比77.78%，中国棘是分的食用类木本植物，因其含有酮类化合物、菇类、m类化学成分「13),具有增强免疫力、抗氧化、抗衰老、治疗心血管疾病、血糖、保护肝脏、治疗胃肠道疾病等功效「13「14),常用来制作保品.金露梅、冰川茶薦子、虎子榛、毛樱桃要食第3期胡樱等：青海省互助北山林区主要野生木本植物资源调查与分析413用资源也在该区具有较大储量，金露梅储量达到9.5X107kg•km-2,冰川茶薦到3.6X104kg•km-2等.此夕卜，食用类大多具有药用价值，可加大该类资源药理成分与活性研究，用科技力量推动具有“药食同源”潜力的基物发展,动相业发展，助力精准扶贫工作.注：部分植物有不同的食用部位，故比例超过100%.图8研究区食用植物食用部位统计Fig.8Statistics of edible parts ofedible plants in the study area食用种子类有4种，占比14.81%，例如虎子榛、毛樱桃等，其中，毛樱桃叶中含有(+"-丁t 脂醇((+)-syringaresinol,1)、(+)-丁香树脂醇-4-O--D-毗喃葡萄糖｛((+)-syringaresinol-4-O-|3-Dglucopyranoside、山奈酚kaempferol、Y皮素quercetin、(一)-表儿茶素-epicatechin等10种化合物「15)，桃籽中含有脂类成分，具 自由基的力「16)•食用叶类有2种，占比7.41%；花类和块茎均有1种，占比3.70%;在叶类木本植物中，金露的物与乙酸乙酯部抑制+-、+—葡萄糖｛酶和醛糖还原酶，具 血糖「17)的功效•3讨论与结论青海互助北山林区位于青藏高原东部，属于祁连山山系山，在该区木类植物为主的208野生木本植物中，植物的科属分布具有一!窄性，这是由青原、昼夜温差大、缺氧物候期的.这些植物中北温分(50.00%)，追溯青原变现,在其隆升过程中的上(百万〜12百万年)时期，高度可能达到3000m左右，植物以温带种类「18),现在的区系成分植物是上t 遗留下来的，还一步考证.在该区野生植物资的用途分类中，药用、食用、饲料、12种类型均有分布，说明该区野生木本植物为丰富，具有一定的开力，但由于地理条件较为特，故在开发利用开发利用方式，可以采用以现代开发手段为主，传统开发手段为辅的方式，具 ，应加大该区药用植物的引种驯化殖、药理活分研究与现代化手段的研究，同时，针对目未有合理手段的,用为传的利用方式,主要为生植物，但传统的利用方式建立持续开发利用上，应建立相应的保护机制「6)・本文调理了青海互助北山林区木本药用植物65种，较青海互助南门峡木本药用植物多18 [11),其中主要包括冰川茶薦子、甘肃山楂、木藤蓼、细齿稠李等，这些药用木本植物在研究区的储量均大于2.0X107kg•km-2.互助北山林场木本食用植物27种，高于的南门峡地区19种⑶，主要包括北方枸杞、中国沙棘、毛樱桃、虎子榛、红北、冰川茶薦子、天山花楸等，尤其是沙棘作为青海特色保材，具有巨大的开力.目前青棘产业具规模/现出青业开司、青生物科司、青海特健生物科司等28家相关企业在生产与研发沙棘产品，沙棘年加工量达到2.6X 104t左右，研 品棘籽囊、沙棘酵素粉、沙棘茶、沙棘酒、沙棘果汁等20，具[好的动能力，在助力精准扶贫方面颇大.，金露梅茶、翁布精品的相继问世，有望.尽管，目前大：品依然“浅层”利用方面，科技含量，在产品深加工方面大潜力•研究区可在引种驯化，集约化生产的同时，加大科技与人才引进，拓展品销售与利用，为精准脱贫开辟“科技路5上,本文出下.1"青北:林区具为丰的生木本植物种类分布；2)引种驯化野生木本植物资源，以为资源开发“开源节流53)加大现代化利用技术，以增加资源利用度；4"青北:林区生木本物科属分具一,区系分具北温特,变414华中师范大学学报（自然科学版）第55卷化是其重要影响因素；5)青海互助北山林区野生木本植物在可持续开发利用方面具有较大应用潜力.参考文献：(1)廖正武，苏跃，廖嬪琳.贵州省平坝县林木种质资源与利用口).种子，2014,33(8)：55-58.LIAO Z W,SU Y,LIAO J L.Forest germplasm resources and utilization in pingba county,guizhou province[J).Seed, 2014,33(8)：55-58.(Ch).：2)亢俊骅，龙主多杰，苏旭，等.青海班玛县藏药植物资源现状的调查研究()•生物学杂志,2020,37(2):65-67.KANGJH,LONG Z DJ,SU X,etal Investigationand studyonthestatusquoofTibetan medicinalplantresources in banma county,qinghai[J).Journal of Biology,2020,37(2)：65-67(Ch)()拉本，马燕，马晓玲，等.青海互助南门峡土族野生食用植物资源调查与分析:J).中国野生植物资源，2020,39(6)：61-67LA B,MA Y,MaX L,etal Investigationandanalysisof wildedibleplantresourcesoftunationalityinnanmengorge, Qinghai[J).Wild Plant Resources of 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on+-amylase,+-glucosidaseandald$sereductase[J).ChinaPharmaceuticalUniversity%2008%49(4):470-475.(Ch).第3期胡樱等：青海省互助北山林区主要野生木本植物资源调查与分析41!(8)张进升.青海林业变迁史研究:D).杨凌：西北农林科技大学%2013.ZHANGJS.Researchonforestrytransformationhistoryin Qinghai[D).Yangling：Northwest AbF Universty,2013. (Ch).Survey and analysis of main wild forest plants resources in the Beishan Forett Area of Huzhu County in Qinghai ProvinceHU Ying,WEI Jingjing,JIA Huiping,WANG Zhige,ZHANG Haoran,WANG Huichun (College of life sciences,Qinghai Normal University/Key laboratory of Dedicinal animal andplant resources on the Qinghai-tibet plateau/Key Laboratory of Tibet Plateau Biodiversity Formation Mechanism and Comprehensive Utilization,Xining810008,China；)Abstract:Wild woody plants resources in the Beishan Forest Area of Huzhu County in Qinghai Province were investigated with the line,quadrat and interview methods in this word.Theresultsshowedthattherewere208speciesofwildwoodyplantsinthestudy area%belongingto32familiesand66genera.Amongthem%thearboraccountedfor 17.79%,and the shrub accounted for74.04%.The distribution of families and genera wasconcentratedinthefewspeciesfamily(37.50%)singlespeciesfamily(31.25%) single species family(50.00%)and few species family(33.33%),respectively,which indicatingthatthedistributiono wild woodyplantsinthestudyarea wasnarrow.In the loristic distribution o genus the wild woody plants in the study area hadthe characteristico northtemperatezone50.00%).When classi ied by use ornamental type(35.10%)accounted for the highest percentage of total species,followed by medicinal(3125%)and edible(12.98%).Among the ornamental woody plants,the shrub accounted for87.67%and the arbor accounted for12.33%.The ornamental sites weremainlyplantVorms.Amongthemedicinalresources leaveswereusedasmedicine (30.77%),cold(32.31%),bitter taste(44.62%)and heat-clearing drugs(18.46%) had<headvan<age.Themainedibleplan<swerefrui<s(77.78%).Theseresul<swould providereferencefor<hecomprehensivedevelopmen<andu<iliza<ionofwildwoodyplan< resources in Huzhu Beishan Forest Area in Qinghai Province.Key words:Beishan Forest Area of Huzhu County;wild;woody plant；resources current situation；exploitation and utilization。
濒危药用植物桃儿七野生居群遗传多样性与遗传结构的SCoT分析
濒危药用植物桃儿七野生居群遗传多样性与遗传结构的SCoT分析目的：揭示珍稀濒危药用植物桃儿七的遗传多样性水平及居群遗传结构特点。
方法：采用新型分子标记SCoT对来源于我国的6个桃儿七野生居群共45个个体进行遗传多态性检测。
运用POPGENE软件计算相关遗传参数，UPGMA 方法聚类，结合MEGA5软件生成树状图。
结果：筛选出的27条引物，共检测到350个位点，其中284个为多态位点，平均每条引物扩增所得多态条带为10.52条。
物种水平上，桃儿七6个野生居群的遗传多样性较为丰富，PPB 79.27%，Ne 1.332 7，H 0.210 9，Hsp0.328 6。
在居群水平上，遗传多样性水平较低：PPB 10.48%（4.00%～23.71%），Ne 1.0487（1.020 7～1.103 7），H 0.029 7（0.012 9～0.063 1），Hpop 0.046 2（0.019 9～0.098 6）。
Nei′s 基因多样性指数计算的居群间遗传分化系数Gst=0.841 1与Shannon′s居群分化系数（Hsp-Hpoppop）/Hsp=0.849 4基本一致，均说明大部分遗传变异存在于居群间。
基因流Nm= 0.094 4，表明桃儿七居群间基因交流处于低等水平。
Nei′s遗传一致度（I）范围为0.570 8～0.978 7。
聚类分析将供试居群分为2 类，相同地理来源或相似生境的材料具有聚为一类的倾向。
结论：供试野生桃儿七具有较丰富的遗传多样性，为有效保护和改良种质资源奠定了一定的基础。
标签：桃儿七；SCoT；遗传多样性；遗传结构桃儿七Sinopodophyllum emodi（Wall.）Ying为小檗科桃儿七属多年生草本植物，《神农本草经》中以“鬼臼”之名收载，药用历史悠久，其根及根状茎、果实均可药用，具有祛风除湿、活血化瘀、化痰止咳、解毒的功效，用于风湿痹痛、肢体麻木、胃脘疼痛、跌打损伤、劳伤咳嗽等证，并可解铁棒锤中毒。
西藏林芝不同居群桃儿七表型多样性分析
西藏林芝不同居群桃儿七表型多样性分析丹曲;张艳福;方江平;郭其强;李慧娥【摘要】[Objective]The present experiment analyzed phenotypic diversity of Sinopodophyllum hexandrum from dif-ferent populations in Nyingchi, Tibet, in order to provide reference for germplasm resource identification, protection and utilization. [Method]Twelve phenotypic traits of S. hexandrum from four different populations(DWZ,DJC,LZQ and NYG) in Nyingchi were measured, then diversity indexes were calculated, and mathematical statistical analysis was conducted for average values of those 12 trait indexes. [Result]Diversity of leaves, stems, fruits, seeds of S. hexandrum from 4 popula-tions were high, and Shannon-Wiener diversity index was 0.16-1.76. The rank of the diversity indexes were as follows: leaf transverse diameter>leaf longitudinal diameter>leaf transverse diameter/leaf longitudinal diameter>fruit transverse diameter>fruit longitudinal diameter >stem colour >seed number >fruit transverse diameter/fruit longitudinal diameter >1000 -seed weight>leaf indumentum=leaf incision>leaf crack depth. The variation of leaf area was large, followed by fruit size and seed characteristics, variation of leaf indumentum and leaf incision was relatively stable. Rank of genetic diversity of different populations was as follows: DJC=LZQ>NYG>DWZ. Principal component analysis results showed that: eigenvalue of the first principal component was 6.799 with contribution rate of 56.662%,which was mainly determined by fruit transverse diame-ter/fruit longitudinaldiameter, fruit transverse diameter, stem color, leaf crack depth, leaf transverse diameter and leaf longitudinal diameter. Eigenvalue of the second principal component was 3.024 with contribution rate of 25.200%, which was mainly determined by fruit transverse diameter, seed number, leaf transverse diameter/leaf longitudinal diameter. Ac-cording to correlation analysis, there were significant correlation(P<0.05) and extremely significant correlation(P<0.01) among partial traits of S. hexandrum(between leaf transverse diameter and leaf longitudinal diameter, leaf indumentum and leaf incision, fruit transverse diameter/fruit longitudinal diameter and stem colour). Cluster analysis results showed that, the four populations can be divided into two groups at euclidean distance 9, where DJC population first separated from the four provenances.Hence it belonged to the first category and the other three populations grouped into the second category. At euclidean distance 2,the second category was divided into two subgroups: LZQ population was in one category, DWZ and NYG populations were in the other category. [Conclusion]The phenotypic diversity of S. hexandrum from different populations in Nyingchi is high, and the variation of phenotypic traits is discontinuous.%[目的]分析西藏林芝不同居群桃儿七的表型多样性,为桃儿七种质资源鉴定、保护和利用研究提供参考.[方法]对西藏林芝4个不同居群桃儿七(DWZ、DJC、LZQ和NYG)的12个表型性状进行测定,计算其多样性指数,并对12个性状指标的平均值进行数理统计分析.[结果]4个不同居群桃儿七的叶、茎、果实、种子等表型性状多样性较高,Shannon-Wiener多样性指数在0.16~1.76,按其多样性指数排序为叶横径>叶纵径>叶横径/纵径>果横径>果纵径>茎色>种子数>果横径/纵径>种子千粒重>叶被毛=叶裂缺>叶裂深浅;不同居群桃儿七叶片大小变异较大,其次为果实大小和种子特性,叶被毛和叶裂缺变异最小.不同居群桃儿七的遗传多样性水平依次为DJC=LZQ>NYG>DWZ.主成分分析结果显示,第一主成分特征值为6.799,贡献率为56.662%,主要由果横径/果纵径、果横径、茎色、叶裂深浅、叶横径、叶纵径决定;第二主成分的特征值为3.024,贡献率为25.200%,主要由果横径、种子数、叶横径/叶纵径决定.相关性分析发现,桃儿七部分性状(叶横径与叶纵径、叶被毛与叶裂缺、果横径/纵径和茎色间)间表现出显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)相关.聚类分析结果显示,4个居群可划分为两大类群,即在欧氏距离9处,DJC居群首先从4个种源中分离出来,归为一类,其余的3个居群归为第二类;在欧氏距离2处,第二类又分为两个亚类,LZQ居群自成一类,DWZ和NYG居群为一类.[结论]西藏林芝不同居群桃儿七具有较高的表型多样性,且表型性状的变异具有间断性.【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2017(048)003【总页数】7页(P386-392)【关键词】桃儿七;居群;表型多样性;西藏林芝【作者】丹曲;张艳福;方江平;郭其强;李慧娥【作者单位】西藏大学农牧学院, 西藏林芝 860000;西藏高原森林生态教育部重点实验室, 西藏林芝 860000;西藏林芝高山森林生态系统国家野外科学观测研究站, 西藏林芝 860000;西藏大学农牧学院, 西藏林芝 860000;西藏高原森林生态教育部重点实验室, 西藏林芝 860000;西藏林芝高山森林生态系统国家野外科学观测研究站, 西藏林芝 860000;西藏大学农牧学院, 西藏林芝 860000;西藏大学农牧学院, 西藏林芝 860000;西藏高原森林生态教育部重点实验室, 西藏林芝 860000;西藏林芝高山森林生态系统国家野外科学观测研究站, 西藏林芝 860000;贵州大学,贵阳 550025【正文语种】中文【中图分类】Q994.3【研究意义】桃儿七（Sinopodophyllum hexandrum）为小檗科（Berberidaceae）桃儿七属（Sinopodpphyllum）多年生草本植物，在西藏林芝分布广泛。
大青沟自然保护区大型真菌区系多样性的研究
大青沟国家级自然保护区位于内 蒙 古 自 治 区 科 左 后 旗 境 内， 地 理 位 置 #$%\#4] 5 #$$\#=] *、 >$\>=] 5 >>"]) ， 总面积 "#"4 DS $ 。保护区内有大小两条沟， 分别叫大青沟和小青沟： 大青沟 长 $% ^S ， 沟深约 >% 5 =% S ， 沟宽平均 $=% S ， 沟坡坡度 4C\ ； 小青沟长 #% ^S ， 沟深 =% 5 3% S ， 沟 宽平均 $%% 5 4%% S ， 坡度 $C\ 。根 据 地质 部 门 勘察， 沟 内有 #%%% 多个泉 眼， 流水常 年不冻， 两 沟下为 #34 5 $%% S 。属于森林草原 条沟内的溪流汇合后流入柳河。沟外海拔为 $$= 5 $=% S ， 性气候， 年降水量为 =%% SS 左右， 蒸发量 #B%% 5 $%%% SS ， 全年无 霜期 为 #>= 天， 年平均温度 =? " _ 。土壤属黑沙土， V’ 值为 C? $ 5 3? % 。
摘 ! 要 ! 本文对内蒙古大青沟自然保护区内的真菌区系进行了多样性分析。结 果： 含 #% 种 以 上 的 科 为 小皮 口蘑科、 革盖菌科、 丝膜菌科、 蘑菇科、 球盖菇科、 蜡 伞 科 和 炭 角 菌 科； 含 = 种 以 上 的 属 为 丝 盖 伞 属、 钅 舌 囊 蘑 属、 栓 伞属、 多孔菌属、 鳞伞属、 光柄菇属、 炭角菌属、 蘑菇属、 赤 褶 菌 属、 蜡 伞 属、 湿 伞 属、 靴 耳 属、 菌属和马鞍菌属； 从种 的 组 成 上 可 划 分 为 世 界 分 布 种 （ 4>? ##@ ） 、 北温带分布种 （ >$? %=@ ） 、 北温带 A 澳 、 温带 A 亚热带、 热带 分 布 种 （ 4? 4#@ ） 、 欧亚大陆分布种 （ $? B"@ ） 、 东亚 A 北美 大利亚分布种 （ =? 4%@ ） 间断分布种 （ $? 4$@ ） 、 东亚分布种 （ #? B3@ ） 、 中国 A 日本共有种 （ >? C>@ ） 和特有成分 （ 4? B3@ ） 等B个 分布型， 表现出鲜明的温带区系特征。在区系亲缘 关 系 上 与 长 白 山 较 为 接 近， 而 与 热 带、 亚热带的区系 较为疏远。 区系， 多样性 关键词 ! 大型真菌， "#$%& ’( )$(*+, ),’-+ %./0-1.#& .( 2+3.(**’$ 4+#$-0 5010-/0 6 7’,*’- ， 89 :$ ;<1#-+=# ! 1D7 97E:FG HI GD7 IFH9; JKL79EKG< EG:J< KMJKN;G7J GD;G GD797 O797 9KND I:MP;F IFH9; KM GD7 .;QKMPPH: &H9KHF;N7;7 ， &H9GKM;9KT );G:97 07E79L7 KM (MM79 RHMPHFK; HI &DKM;? 1D7 JHSKM;MG I;SKFK7E ;97 19KNDHFHS;G;N7;7 ， ;N7;7 ，UP;9KN;N7;7 ， +G9HVD;9K;N7;7 ， ’<P9HVDH9;N7;7 ;MJ W<F;9K;N7;7 ，ODKF7 GD7 JHSKM;MG P7M79; ;97 !"#$%&’ ， ()*)+,-.+ ， /#0%1#*.+ ，/2#0-#3) ， /0.3’.+ ，4%0)*-) ，56)*-$.+ ，72#8#12%00.+ ，9%6*#12#*.+ ，9%6*#$%&’ ，:*’1-8#; 3.+ ，(’0)"#0’.$) ，<*),’3’+ ;MJ 9’0=’00) ? 07P;9JKMP GD7 NHSVHEKGKHM ，GD7 EV7NK7E O797 P9H:V7J KMGH ： &HESHVHFKT G;M （ 4>? ##@ ） ，)H9GD 17SV79;G7 XHM7 （ >$? %=@ ） ， )H9GD 17SV79;G7YU:EG9;FK; （ =? 4%@ ） ，17SV79;G7YE:8G9HVKT （ 4? 4#@ ） ， *:9;EK;M （ $? B"@ ） ， *;EG79M UEK; Y )H9GD US79KN; （ $? 4$@ ） ， *;EG79M UEK; （ #? N;F H9 19HVKN;F B3@ ） ，+KMHYZ;V;M KM NHSSHM （ >? C>@ ） ，;MJ 7MJ7SKN （ 4? B3@ ） ? (M ;FF MKM7 JKEG9K8:GKHM;F G<V7E ， NHESHVHFKT G;M ;MJ )H9GD 17SV79;G7 XHM7 ;97 ND;9;NG79KEGKNE HI GDKE 97PKHM? 1D7 I:MP;F IFH9; HI .;QKMPPH: KE L79< EKSKF;9 GH GD;G HI GD7 &D;MP8;K RH:MG;KME KM )H9GD7;EG &DKM;? 1DKE E:PP7EGE GD;G GD7 H9KPKME HI GD7E7 GOH IFH9;E S;< D;L7 ; N79G;KM 97F;GKHMEDKV ，8:G GD7< D;L7 MH NFHE7 97F;GKHMEDKV OKGD GD7 I:MP;F IFH9; KM E:8G9HVKN;F ;MJ G9HVKN;F 97PKHME? >0& ?’-%1@ S;N9HI:MPK ，IFH9; ，JKL79EKG< ;$#A’- ’ 1 +%%-011 ! (MEGKG:G7 HI R<NHFHP< ，ZKFKM UP9KN:FG:9;F [MKL79EKG< ，&D;MPND:M! #4%##"
玛可河林区野生濒危植物——桃儿七资源现状调查及保护
青 海省 玛可 河林 区位 于 青海 省 东 南 部 ， 长 属 江 一级 支 流 大 渡 河 源 头 流 域 高 山峡 谷 地 带 的 原 始 林 区 。 界 于 东 经 １０ ０ 一 １１ ５ 、 ０ 。４ ０ 。１
北 纬 ３ 。６ 一３ 。８之 间 ， 拔 ３４ ５ ０ ｍ， ２３ ２ ５ 海 １ ７— ３ ０ 东 西 长 ４ｋ ９ ｍ，南 北 宽 ２ ｋ ５ ｍ。 林 区 总 面 积 １．６ ｋ ０ １０ ｍ 。受 北 方 寒 冷 气 候 的影 响 ， 季 寒 冷 冬 干 旱 ， 季 湿 润 多 雨 ， 夜 温 差 大 ， 绝 对 无 霜 夏 昼 无
Ｐｌ ｎ ｓＭ ａ ｈｅＳｉ ｏ ｄ ｐｈ ｌｍ ｘａ ｄ ｕ ａ ｔ ｋｅ － ｎ ｐｏ ｏ ｙｌ ｕ ｈｅ ｎ ｒ ｍ
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（ ａ ｅ ｅＦ ｒｓ ｙＢ ｒａ ， ａｍａＱ ｎｈ ｉ １ ３ ０ Ｃ ｉ ） Ｍ ｋ ｈ ｏｅｔ ｕｅｕ Ｂ ｎ ｉｇ ａ ８４ ０ ， ｈｎ ｒ ａ Ａｂｔａｔ Ｗｉ ｎ ｎ ａ ｇｒｄｐａ ｔ ｒｓｕｃ ｓＭａｅ ｅＦ ｒｓ Ｑｎ ｈ ｉ ｒｖ ｃ ｅｅｓｒｅ ，ｉ ｅ ｔ ｓ ｃ ： ｌ ａ ｄｅｄ ｎ ｅｅ ｌｎｓ ｅｏ ｒｅ ｋ ｈ ｏｅｔ ｉ ａ Ｐｏｉ ｅｗ ｒ ｕｖｄ ａｍ ｄ ａ ｒ ｄ — ｇ ｎ
青海 农林 科技
・ 资源保 护 与利 用 ・
２１ ０２年第 ２期
玛 可河 林 区野 生 濒 危 植 物 桃儿七资源现状调查及保护
一
黄向东
（ 可河林 业局 ， 玛 青海
摘
班玛
８４ ０ ） １ ３ ０
要： 通过 对 青 海 省 玛 可 河 林 区野 生 濒 危 植 物 — — 桃 儿 七 资 源 状 况调 查 ， 对 野 生 资 源 现 状 ， 出针 针 提
浅析桃儿七内生真菌的分离及其活性产物的初步探究
目前国内外已有一些从不同产地和不同植物中分离的内生真菌中筛选出能产生鬼臼毒素和其他药用活性成分菌株的报道［5，6］，例如从桃儿七［8］、川八角莲（dysosma veitchii） ［9］和南方山荷叶（diphylleia sinensis）［10］等植物中都分别分离得到了产鬼臼毒素或其类似物的内生真菌。由此可见，内生真菌有着产生和它的宿主植物相同或相似成分的能力，是具有一定普遍性的现象，这些都显示出利用内生真菌培养生产相关植物药用成分（包括鬼臼毒素）的可能性。但是目前这类探究还处于起步阶段，且从内生真菌提取物中获得的活性成分含量还很低，尚不能满足进行工业化生产所需的水平。因此，有必要对此作更深入、全面的探究，以解决资源、环境保护和人类需求之间的矛盾。
浅析桃儿七内生真菌的分离及其活性产物的初步探究
日期： 2010年07月26日
［摘要合物的菌株。方法 用常规微生物学方法从桃儿七植株中分离出其内生真菌，分别对各菌株的提取物进行薄层层析，通过在紫外检测仪下观察和用浓硫酸-乙醇显色定性。结果 从桃儿七根、茎中共分离出21株内生真菌，其中编号为T8的菌株的菌丝体和发酵液提取物经TLC分析，都出现了和标准品颜色和Rf值相同的斑点。结论 该菌株应该具有产生鬼臼毒素或其类似木脂素类化合物的能力。
2 实验结果和讨论
2.1 内生真菌的分离及初步薄层分析 从桃儿七根、茎中共分离得到21株真菌。经分别培养和初步的TLC分析，有3种真菌的菌丝体提取物和鬼臼毒素标准品的Rf值基本相同，而且编号为T8的菌株发酵液提取物也出现了和标准品相同Rf值的斑点，说明该菌种不仅可能产鬼臼毒素或类似的代谢产物，而且在胞内外均有产生。因此，进一步的工作以T8为材料进行扩大培养，合并菌丝体和发酵液的氯仿提取物再进行TLC分析。
长白山林木内生真菌多样性的研究的开题报告
长白山林木内生真菌多样性的研究的开题报告
研究题目：长白山林木内生真菌多样性的研究
研究目的：了解长白山林木内生真菌的多样性，探究其分布规律和生态特征。
研究内容：
1. 采集长白山不同林木的内生真菌样品。
2. 通过分子生物学技术，筛选出内生真菌的16S rRNA基因序列。
3. 利用多样性分析方法，分析内生真菌的多样性和相对丰度。
4. 探究长白山内生真菌的分布规律和生态特征，包括不同树种、不同海拔高度、不同土壤类型等因素对内生真菌的影响。
研究意义：长白山是我国东北地区最大的自然保护区，拥有丰富的生物多样性和自然景观资源。
内生真菌是森林生态系统中重要的组成部分，对循环生态过程起着重要作用。
本研究可以为长白山森林生态系统的保护和管理提供科学依据。
同时，对内生真菌的研究也将有助于加深人们对生物多样性的认识，促进生物资源的可持续利用。
研究方法：本研究采用野外调查、实验室分子生物学技术和多样性分析方法。
通过对采集的内生真菌样品进行筛选、分析和评估，可以获得丰富的数据和结果，从而开展对内生真菌多样性的深入研究。
桃儿七内生菌及产鬼臼类物质菌株的筛选
性。随着鬼 臼毒素 医用潜 力 的进一步被挖掘 ， 人们 对它的需求量与 日俱增 。但 是 ， 鬼臼毒 素在植物 中 的含量约为 １ １ ０ ， ／００ ０ 过度采挖会导 致物种枯竭。 大量 研 究发 现 一些植 物 内生 真菌 对植 物某 些药 效成
分 的形 成有 重要 影 响 ， 至 会 直 接 产 生 和 其 寄 主相 甚
维普资讯
西北 大学学报 （ 自然科 学版） ２ ０ 年 ６月 ， ３ 卷第 ３期 ， ｎ ，０ ８ Ｖ １３ ， ｏ ３ ０８ 第 ８ Ｊ ．２ ０ ， ｏ．８ Ｎ ． ｕ Ｊｕｎｌ ｆ ｏ ｈ ｅｔ ｎ ｅｓ ｙ（ ａ ｒｌ ｃｅｃ ｄｔ ｎ ｏｒａ ￣ ｗ ｓ Ｕ ｉ ｒｉ Ｎ ｔ ａ ｉｎｅＥ ｉｏ ） ｏＮ ｖ ｔ ｕ Ｓ ｉ
具 有悠 久应 用 历 史 的药用 植 物 。桃 儿七 （ ｏｏｈｌ Ｐ ｄｐ ｙ— ｌｒ ｅ ｏｉｗａ ． Ｙｎ ） 其 中 的一种 ， 根状 茎 等 ｕ ｍ ｄ（ ｌ ） ｉｇ 是 ｅ １ 其
１ 材 料 与 方 法
１ １ 样 品来 源 ．
部位含有 的鬼 臼毒素 （ ｏｏｈｌｔ ｉ） ｐｄｐｙ ｏ ｘ 是其 主要 的 ｌｏ ｎ
养、 生长周期短的特点 ， 可以通过育种和优化培养条 件等措施来提 高其有效成分 的含量 。由此可见 ， 利
用植物内生菌发酵法生产鬼 臼类物质具有 十分广阔 的开发前景。因此 ， 我们对 生长于陕西省太 白山的 ｓ Ｊ 七地下茎 内生菌进行了分离、 ￣ Ｌ ［ 鉴定 ， 并对可产鬼
臼类物质的菌株进行筛选。
物质 ， 株真菌（ ｈ Ｉ） ２ Ｍ ， 可产鬼 臼毒 素单糖 甙。结论 ｄ
同或相 似 生理 活性 成分 的 能力 。
桃 儿七部分 内生真菌具有产生与其宿主相
一株桃儿七的内生真菌及其应用[发明专利]
![一株桃儿七的内生真菌及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3dd1eed2580216fc710afd3c.png)
专利名称：一株桃儿七的内生真菌及其应用专利类型：发明专利
发明人：杨涛,王治业,魏亚琴,李珊,李鑫,方彦昊申请号：CN201910282640.9
申请日：20190410
公开号：CN110172408A
公开日：
20190827
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一株桃儿七内生真菌，粉红粘帚霉fhnzm(Clonostachys rosea)，保藏号CGMCC No.17070，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
该菌株能够提高桃儿七根中鬼臼毒素的含量，抑制桃儿七根的生长，抑制植物种子的萌发和胚根的伸长，能够作为核心菌株来生产用于促进桃儿七鬼臼毒素积累的菌剂，对于绿色防治桃儿七病虫害和提高人工栽培桃儿七的品质，有效提高桃儿七鬼臼毒素的积累具有重大意义。
申请人：甘肃省科学院生物研究所
地址：730000 甘肃省兰州市城关区定西南路197号
国籍：CN
代理机构：兰州振华专利代理有限责任公司
代理人：张晋
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北山国家森林公园野生木本植物中药学研究
第40卷第3期2021年3月中国野生植物资源Chinese Wild Plant Resources Voe.40 No.3Mae.2021di ：10. 3969/j. imn. 1006 -9690.2021.03. 012北山国家森林公园野生木本植物中药学研究胡 樱「埠，甘禹鑫J 贾慧萍，魏晶晶，王志鸽J 张浩然，王慧春「“**收稿日期：2020 -08 -19,录用日期:2021 -03 -23基金项目：青海省自然科学基金（2019-ZJ -913）%作者简介:胡樱（1996 -），男，硕士研究生，研究方向为化学生态学％ E-mail ： ******************通讯作者:王慧春# 1974 -）,女，博士，教授，主要研究方向为青藏高原生物质资源的可持续利用％ E - mvl : whch_66@163 .com(1.青海师范大学生命科学学院，青海西宁810008； 2青海省青藏高原药用动植物资源重点实验室，青海西宁810008；3.青海省青藏高原生物多样性形成机制与综合利用重点实验室，青海西宁810008)摘 要 目的：为摸清青海省互助北山国家森林公园野生木本药用植物资源现状。
方法：采用线路调查、样方调查、访谈等方法开展调查％结果:研究区有62种野生木本药用植物，分属26科39属%其中，藤本占6. 45%，灌木 占80. 65%，乔木占12.9% ；以叶入药(30. 77%)、寒性(32.31%)、苦味(44. 62%)、清热药(18.46%)类野生木本药 用植物占优势％结论:调查结果可为青海省互助北山国家森林公园野生木本药用植物资源综合开发利用提供参考％关键词 北山国家森林公园；野生木本植物；药用资源；青海省；中药学中图分类号:Q949. 95 文献标识码:A 文章编号:1006 -9690(2021)03 -0070 -05Traditional Chinese MeCicine Strdy of WillWoody Planis in Beishan National Forest ParkHu Ying 1，2,3，Gan Yuxin 1，Jia Huiping 1，2,3，Wei Jingjing 1，2,3，WangZhoge 1 ， Zhang Hao ean 1，2，3 ， WangHuochun 1，2，3*(1. Collexe of Life Sciences ，Qinghai Normal Unfd/ty , Xining 810008，China ；2.KeyLab.oeMedoconaeAnomaeand PeantResoueceson theQonghao-TobetPeateau ， Xonong810008， Chona ； 3.KeyLab.oeTobetPeateau BoodoeeesotyFoematoon Mechanosmand Comprehensive Utilization ，Xining 810008，China )Abstract Objection : In o rder to find out the status of wild woody medicinal plant resources of HuzhuBeoshan NatoonaeFoeestPaek on Qonghaopeoeonce.Methods : Theeone ， sampee ， onteeeoewand otheemeth-ods were utilized to ceirg out the investigation. Results : There were 62 wild woody medicinal plants in the study area ，falling within 39 genera and 26 families. Among them ，vines ，shrubs ，trees accounted for 6- 45%，80. 65%，12- 9% ; The leaf as medicine (30- 77% )，cea (32- 31% )，bkter (44. 62% ) andheat - clex/ng medicine (18- 46% ) were dominant with the wild woody medicinal plants. Conclusion :The results cen provide a reference for the comprehensive development and utilization of wii woody plant eesoueceon Huehu Beoshan NatoonaeFoeestPaek on Qonghaopeoeonce.Key woi C s Beishan National Forest Park & Wil woody plant & Medicinal resource & Qinghai province &Tead tonaeCh0neseMed c0ne青藏高原（下称高原）被誉为“第三极”，是我国乃至亚洲的生态屏障，受高寒、缺氧、年均温度低、昼 夜温差大等因素影响，高原具生态脆弱且破坏后修 复难度大的特点。
桃儿七地下茎的显微结构及内生真菌分布
第 ｌ 卷 第 ３期 ９ ２０ ０ ７年 ９月
甘 肃 科 学 学 报
Ｊ ｕ ｎ ｌｏｆＧａ ｓ ｃｅ ｃ ｓ ｏ １ ＮＯ ３ ．９ ．
ｃ ． ０ ７ Ｓ ｐ ２ ０
桃 儿 七 地 下 茎 的显 微 结 构 及 内生真 菌 分 布
ｃ ｋ， ｃ ｋ ａ ｏｒ ｏｒ ｃ ｍｂｉ ， ａ ｐ ｌｏ ｒ ． Ｔｈｅ ｕｍ ｎｄ ｈｅ ｌ ｄｅ ｍ ｐａ ｅ ｃ ｙｍａ ｃ ｌｓ ｆ ｅ ｏ ａ ｙ ｒｎ ｈ ｓ ｅ ｌ ｏ ｓ ｃ ｎｄ ｒ ｐｈｌ ｅ ｏ ｍ ｈａ ａ ｄ ｂｕｎ ａ ｄ ｎｔ ｉｃｕ ｉ ｓ ｎ ｌ ｓｏｎ ．Ｔｈｅｓ ｃ ｎｄ ｒ ｙｌｍ ｏｎ ｉ ｔ ｄ ｏｆｖ ｓ ｅ ｓ，ｘ ａ ｙ ｒ ｄ ａ ｓａ ｒ ｎｃ ｍ ａｃ ｌｓ ｏｍｅｓ ｇ ｎ ｓ ｅ ｏ ａ ｙ ｘ ｅ ｃ ｓｓ ｅ ｅ ｓ ｌ ｙｌｒ ａ ｉ ｌ ｎｄ ｐａ ｅ ｈｙ ｅ ｌ ．Ｓ ｅ ｍｅ ｔ
赵小锋 ， 杨 晖 ，陈欣 欣 ， 剑 平 周
（ 肃 省 科 学 院 生物 研 究 所 ， 甘 甘肃 兰 州 ７０ ０ ） ３０ ０
摘 要 ： 采 用 石蜡 永 久制 片和 光 学显 微观 察 的 方 法对桃 儿七 （ ｉｏ ｏ ｏ ｈ ｌ ｍ ｈ ｘ ｎ ｒｍ） Ｓ ｎｐ ｄ ｐ ｙｌ ｅ ａ ｄ ｕ 地下 ｕ
菌只在 皮层 和次 生韧 皮部 细胞 中的一定 区域 分布．
关 键词 ： 桃 儿七 ； 下 茎的显微 结构 ； 地 石蜡切 片 ； 内生真 菌 中图分 类号 ： Ｑ９ ９ ７ ６ ７ Ｑ９ ９ ５ 文献标 识 码 ： Ａ ４ ．４ ． ， ３． 文章 编号 ： ０ ４０ ６ （ ０ ７ ０ —０ ６０ １ ０ ～ ３ ６ ２ ０ ） ３０ ８ — ２
HPLC分析桃儿七中鬼臼毒素的含量
HPLC分析桃儿七中鬼臼毒素的含量
熊文勇;魏朔南;岳明
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2010(032)005
【摘要】目的:建立桃儿七鬼臼毒素含量的HPLC测定方法,并比较研究桃儿七不同生长地、不同营养器官中鬼臼毒素的含量.方法:筛选适当提取方法,采用Diamonsil C18色谱柱,0.04%甲酸水-乙腈梯度洗脱,流速0.5 mL/min,检测波长290nm,柱温30℃条件下,记录液相色图谱.结果:鬼臼毒素的线性范同在0.2～1.4 μg,r2=0.999 4,平均回收率为99.32%,RSD小于1.97%,表明该法适用于不同生长地桃儿七中鬼臼毒素含量测定.结果显示宁夏六盘山的桃儿七样品根中鬼臼毒素含量最高,云南纳帕海的含量最低;而茎中的含量以云南纳帕海的样品为最高.结论:该方法准确、快速、简便.
【总页数】4页(P875-878)
【作者】熊文勇;魏朔南;岳明
【作者单位】西北大学,西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,陕西,西安,710069
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.藏药桃儿七的快繁体系及其鬼臼毒素含量分析 [J], 叶耀辉;张文雪;张寿文;黄慧莲;马越兴
2.HPLC法测定桃儿七中鬼臼毒素的含量 [J], 刘世巍;丁建海
3.濒危植物桃儿七中鬼臼毒素的提取分离及分析 [J], 陈开凤;梁耀光;周丽敏;吕巧莉
4.HPLC法测定青海栽培与野生桃儿七中2种木脂素类的含量 [J], 李艳玲;徐文华;周国英;刘何春;陈晨;宋文珠
5.植物桃耳七中鬼臼毒素的提取及HPLC分析 [J], 王宝玺;王日升;汪青;苏薇;刘茜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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青海上北山林场野生桃儿七根部内生真菌群落组成及多样性研究作者：宁祎李艳玲周国英杨路存徐文华来源：《中国中药杂志》2016年第07期[摘要]该研究通过应用第二代测序技术（NGS），即高通量测序方法测序青海野生桃儿七根内真菌宏基因组ITS 1区，并依据RDP中设置的分类阈值对处理后的序列进行物种分类，鉴定内生真菌的群落组成。
研究结果显示，测序结果经过质量控制共获得有效条带22 565条，依据97%的序列相似性做聚类相似性分析，获得全部样品的可分类操作单元（OTUs）共517个，RDP分类依据08的分类阈值鉴定出的全部真菌可归类为13纲、35目、44科、55属。
3个样品LD1，LD2，LD3中共同的优势属真菌为Tetracladium属（所占比例分别为3549%，6855%，1296%），样品的香浓多样性指数和辛普森多样性指数分别在175～292，011～032。
研究结果表明，青海上北山林场野生桃儿七根内内生真菌具有较高的多样性和较复杂的群落组成，蕴含着丰富的内生真菌资源，且高通量测序技术对于研究植物内生真菌群落组成及多样性具有显著的优势。
[关键词]桃儿七；内生真菌；高通量测序；群落组成；多样性[Abstract]High throughput sequencing technology is also called Next Generation Sequencing （NGS）， which can sequence hundreds and thousands sequences in different samples at the same time In the present study， the cultureindependent high throughput sequencing technology was applied to sequence the fungi metagenomic DNA of the fungal internal transcribed spacer 1（ITS 1）in the root of Sinopodophyllum hexandrum Sequencing data suggested that after the quality control，22 565 reads were remained Cluster similarity analysis was done based on 97% sequence similarity，which obtained 517 OTUs for the three samples （LD1， LD2 and LD3） All the fungi which identified from all the reads of OTUs based on 08 classification thresholds using the software of RDP classifier were classified as 13 classes， 35 orders， 44 family， 55 genera Among these genera，the genus of Tetracladium was the dominant genera in all samples（3549%， 6855% and 1296%）The Shannon′s diversity indices and the Simpson indices of the e ndophytic fungi in the samples ranged from 175～292， 011～032， respectivelyThis is the first time for applying high through put sequencing technologyto analyze the community composition and diversity of endophytic fungi in the medicinal plant， and the results showed that there were hyper diver sity and high community composition complexity of endophytic fungi in the root of ShexandrumIt is also proved that the high through put sequencing technology has great advantage for analyzing ecommunity composition and diversity of endophtye in the plant[Key words]Sinopodophyllum hexandrum； endophytic fungi； high throughput sequencing；community composition； diversitydoi：10.4268/cjcmm20160712桃儿七Sinopodophyllum hexandrum又名鬼臼、小叶莲等，属小檗科Berberidaceae桃儿七属Sinopodophyllum多年生草本植物，我国珍稀濒危物种，属国家三级保护植物。
桃儿七分布在海拔2 700～4 300 m的林下或灌丛中，在我国主产于青海、甘肃、四川西部、西藏、云南西北部、陕西等地，此外尼泊尔、不丹、印度北部、巴基斯坦、阿富汗东部和印控克什米尔等地也有分布[1]。
桃儿七作为中国传统中药具有悠久的用药历史。
藏医以桃儿七果实入药，可调经活血、保胎、消肿、止痛。
中医以其根及根状茎入药，具有祛痰止咳，抗肿瘤，抗免疫等作用[2]。
近年来国内外学者对其深入研究发现，桃儿七根茎内含有较高的抗肿瘤活性物质——木脂素类化合物，如鬼臼毒素、4′去甲基鬼臼毒素等。
植物中获取天然活性化合物治疗人类疾病，在现代医学史上占据着重要的地位，但随着现代社会的高速发展，带来的一系列问题导致某些包括野生植物资源在内的自然资源日益枯竭。
因此，许多的科研工作者将生产天然活性化合物的视角转向了微生物方向，桃儿七内生真菌即为当今的研究热点之一。
内生真菌是指其生活史的一定阶段或全部阶段定殖在宿主植物体内，而不引起植物发生明显病变的一类真菌总称[3]。
目前认为，地球上生存的所有高等植物都有内生真菌的定殖，纯培养研究结果显示，定殖的内生真菌种类少则十几种多则上百种。
内生真菌与宿主植物之间的相互作用也多种多样，如抗逆促生、抗虫害、抗病害、环境修复及产活性产物等等[4]，因此研究宿主植物体内的内生真菌群落组成和多样性对研究内生真菌与宿主间的相互作用具有重要的生态学意义。
高通量测序技术（HTS）起始于2005年，又被称为第二代测序技术[5]，此技术能够一次并行对几百万到上千万条的DNA序列分别进行测序，对于研究环境样品中微生物群落组成具有巨大的应用价值。
目前高通量测序技术在水环境及土壤微生物群落研究领域已得到广泛应用。
但此技术应用在植物内生真菌群落组成中的研究却少有报道[68]，尤其在民族药用植物宿主内的内生真菌群落组成的研究中尚未见报道。
目前对于桃儿七植株内生真菌群落组成的研究仅局限于纯培养模式开展，取得了一些现有的结论[911]，但此方法具有一定的局限性，据统计利用培养基分离的内生真菌种类总数不超过全部真菌总数的1%，甚至更低，因此利用纯培养模式研究宿主植物内生真菌的群落组成，其结果将会低估不能培养分离的内生真菌对宿主植物的贡献[12]。
本文通过第二代测序技术——高通量测序对桃儿七根内内生真菌的群落组成及多样性进行了研究，主要的目的有以下3个方面：①运用高通量测序技术掌握青海上北山林场桃儿七内生真菌的群落组成及多样性；②比较免培养测序结果与前人研究的纯培养分离结果之间的关联差异；③探讨桃儿七优势种内生真菌的生态学功能。
基于以上研究目的，期许发现青海野生桃儿七宿主内新的有价值真菌资源，为抗肿瘤药物的获取开辟一条新途径，以期为其工业化生产奠定基础。
1材料与方法11采样于2014年9月初，样品采挖自青海省乐都区境内的引胜沟上北山林场（102°23′540′′，36°42′172′′），海拔2 835 m。
采样时选取成年健康植株3株，根据随机取样原则，取样的株距在30～50 m。
样品采挖后连带根际土一并装入干净塑料袋，置入便携式保温箱中，编号标记后带回实验室备用。
12样品预处理新鲜样品采回后，洗净桃儿七根部表面泥土，自来水下冲洗30 min，取出样品置于无菌烧杯中用大量无菌水漂洗，待样品干燥后置于无菌操作台中。
无菌操作台中的样品表面灭菌处理操作参照纯培养模式下[13]的灭菌过程，具体方法如下：将样品浸入70%乙醇1 min，再浸入5%的次氯酸钠5 min，无菌水漂洗3次，待样品干燥后剪切成小段置于无菌2 mL离心管中保存在冰盒中送样。
样品送至生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序。
13DNA提取及引物筛选样品中真菌总DNA的提取采用OMEGA公司生产的真菌提取试剂盒，依据生产商的说明提取。
提取的DNA用Qubit 20 DNA检测试剂盒检测DNA浓度，琼脂糖凝胶检测DNA完整性。
实验选取3对真菌特异性引物2F/2R[14]，3F/3R[15]，ITS1/ITS2[16]，分别对应扩增ITS 区域的58S，ITS2，ITS1区。
随机挑选一个样品LD1进行扩增，每对引物设置4个生物学重复，筛选出最佳引物。
14高通量平台测序PCR扩增引物为真菌特异性引物扩增真菌的ITS1区，扩增时引物融合测序平台的通用标签序列以区分样品，引物序列为：前置引物5′CCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNCTTGGTCATTTAGAGGAAGT AA3′，后置引5′GTGACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCAGCTGCGTTCTTCATCGATGC3′。
其中，斜体序列为特异性引物序列，其他序列为添加的测序标签序列。
PCR扩增产物用Illumina Miseq 2×300测序平台进行双端测序分析。
15数据处理151序列质量控制对测序所得的序列进行质量控制，质量控制包括3个部分，首先根据标签序列区分样本后，将样本中所得的标签序列去掉；其次，去除较短的片段序列，短片段的定义为小于50 bp；最后，应用Prinseq软件去除低复杂度的序列。