糖柱使用注意
g-10葡聚糖凝胶色谱柱使用
g-10葡聚糖凝胶色谱柱使用
G-10葡聚糖凝胶色谱柱是一种常用的分离和纯化生物大分子
的柱子，特别适用于分离寡聚糖和多糖混合物。
该柱子采用葡聚糖作为固定相，具有一定的孔隙大小和分子筛效果。
G-10葡聚糖凝胶色谱柱通常用于分离多糖、寡糖和其他大分
子化合物。
在使用之前，需要将柱子进行激活和平衡，具体步骤如下：
1. 将G-10葡聚糖凝胶色谱柱放入柱子支撑架上，并连接到色
谱系统上。
2. 将适当的缓冲液（如适应于样品的缓冲液）通过柱子进行激活，以去除可能存在的杂质和污染物。
3. 进行柱子平衡：将适当的缓冲液通过柱子流经，直到柱子和系统达到平衡状态。
4. 加载样品：将待分离的样品按照柱子载样方法加载到柱子上。
5. 进行色谱分离：根据需要，控制缓冲液的流速和浓度梯度，使待分离的目标化合物在柱子上进行分离。
6. 收集分离物：根据其他方法（如按时间段收集、检测波长等）进行分离物收集和检测。
值得注意的是，G-10葡聚糖凝胶色谱柱通常用于相对较小的
生物大分子分离，如寡聚糖和多糖，对于更大分子的分离可能需要使用其他类型的色谱柱。
此外，在操作过程中需要根据具体样品的特性和需要进行柱子条件的调整。
[讲解]葡聚糖凝胶柱的使用方法
![[讲解]葡聚糖凝胶柱的使用方法](https://img.taocdn.com/s3/m/bdc082eb900ef12d2af90242a8956bec0975a509.png)
葡聚糖凝胶柱的使用方法：(1) 预处理称取Sephadex G-25（50－100目）约5g ，加入蒸馏水100ml ，置室温下3h 进行溶胀。
(2) 装柱凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。
柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧，用洗净的玻璃丝（约200目尼龙布）垫底或购买类似规格的商品柱。
然后将柱垂直安装好，先加入1/3柱体积蒸馏水，接着将溶胀好的凝胶边搅匀边连续装入，使它们在柱内自然沉降。
同时大开下口慢速流出蒸馏水。
装柱后的凝胶必须均匀，不能有气泡或明显条纹。
否则，必须到出重装，装好后，用蒸馏水平衡2－3h 即可加样品分离。
(3) 加样加样前，首先把柱内凝胶上面多余的蒸馏水放出，直到柱内液面与凝胶表面相齐（或留一极薄液层）为止。
然后，由柱的上端加水解液2ml ，注意不要让溶液把凝胶冲松浮起，加完样品后，打开下口缓慢放出液体至液面与凝胶面相齐，再用少量蒸馏水冲洗原来盛样品的容器2－3次，待全部进入层析柱后，即可进行洗脱。
(4) 洗脱与收集洗脱时，用蒸馏水作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。
本实验洗脱液流出的速度应控制在0.8－1.0ml/min 。
洗脱液的收集采用分管连续顺序收集，每管收集3ml ，共收集10管。
据经验，4或5号管核苷酸浓度最大，可作为层析鉴定的样品液。
但因层析柱长度的差异，管号会有变化，必要时可用紫外检测A260nm ，找出浓度最大的管号。
(5) 凝胶的再生和回收凝胶柱使用一次后，必须反冲疏松一次，平衡后再使用。
若使用数次，就需要再生处理。
用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl 溶液浸泡，然后用蒸馏水洗至中性备用。
若实验完毕，将再生后的凝胶在布氏漏斗上用蒸馏水洗涤抽干，再用95%乙醇洗两次，在60℃烘箱中烘干，回收保存。
实验五. 葡聚糖凝胶层析【实验目的】 1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。
2．学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。
糖柱分离原理、分类
糖柱糖柱专为糖和有机酸的高效分离设计。
顾名思义就是分析分离糖类物质的色谱柱，分离原理是基于配体交换反应，糖分子上每一个羟基都带有一个非常弱的负电荷，而端基异构碳上所带的羟基可被去质子化，从而带上一个很强的负电荷。
糖分子上的这些负电荷与树脂表面上的金属离子的正电荷之间的相互作用使糖被保留，从而达到分离。
目前使用较多的糖类分析柱有聚合物基质的磺化柱和氨基硅胶色谱柱，其中聚合物磺化色谱柱又分为磺化氢型（如UniPS 5-10H）、磺化钙型（如UniPS 5-10Ca）、磺化钠型（如UniPS 5-10 Na）等等，常见的糖柱有：Ca 柱——对于一般的甜味剂分析来说，钙型柱是首选的柱。
它已经过优化，可用于分析单糖类，还可提供二糖类、三糖类和四糖类的分离。
300 x 7.8 mm 柱主要用于定量高果糖玉米糖浆中的葡萄糖和果糖，以及进行单糖类常规分析。
250 x 4.0 mm 柱适合糖醇分离。
Pb 柱——铅型柱专门用于分离纤维素衍生单糖。
它用于分析木制品的戊糖和己醣，尤其是纤维二糖、葡萄糖、木糖、半乳糖、树胶醛醣和甘露糖。
它还可很好地分辨乳制品中的蔗糖、乳糖和果糖。
H 柱——氢型柱用于含有羧酸、挥发性脂肪酸、短链脂肪酸、醇类、酮类以及许多中性新陈代谢副产物的溶液中的碳水化合物进行分析。
最常用于有机酸分析，此柱还可用于发酵监测、生物流体分析和乙酰氨基糖分离。
Na 柱——钠型柱已针对含高浓度盐（例如甜菜糖）的样本中的糖分析进行优化。
它与盐相容，所以在分析前不需要对样品进行脱盐处理。
K 柱——钾型柱已针对玉米糖浆和酿造麦汁等样本中的单糖、二糖、三糖分析进行优化。
它可很好地分离葡萄糖、麦芽糖和麦芽三糖。
Ag 柱——银型柱可提供快速、高分辨率的寡糖分析。
它可在大约25 分钟的时间内对寡糖（Dp-11）进行分离。
氨基柱——氨基柱一般用于分离各种单糖，不宜分离含醛基，羰基的化合物，还原糖，可用于分离非还原糖。
糖柱所配套的检测器:示差折光、蒸发光散射检测器(ELSD)、脉冲安培检测器。
特色色谱柱应用介绍之一常见糖和糖醇类化合物的分析
特色色谱柱应用介绍之一----常见糖和糖醇类化合物的分析
糖类的分析涉及领域非常广，有工业、农业、生命科学、药学、医学、食品，大家会好奇为什么这么多领域都有糖呢？可以想象下，工业的发酵、造纸、纤维业都有糖的存在，农业的淀粉、酿造也都含有糖和糖醇，还有药用辅料中的药用糖蔗糖、乳糖、果糖、葡萄糖等等，食品行业更是离不开糖的。
我们分析糖大多数时候都使用氨基柱，但是大家都知道氨基键合相易流失，尤其分析葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖这些还原性糖时，糖上的醛基还会与氨基起反应，使氨基掉落或变性，色谱柱寿命会更短，这时可以使用碳水化合物分析专用色谱柱，也就是俗称的“糖柱”进行分析。
Thermo的HyperREZ XP色谱柱就属于这类色谱柱。
有图有真相，我们来看下常见糖类化合物使用糖柱的分离效果吧~
色谱条件：
色谱柱：HyperREZ Ca2+（P/N69208-307780）
流动相：水
流速：0.6ml/min
检测器：RI
柱温：80℃
色谱图一：乳糖、葡萄糖、半乳糖、果糖的分离
色谱图二：蔗糖、葡萄糖、麦芽糖醇、果糖、木糖醇的分离
我们对不同类型糖柱分析糖来个汇总吧~
色谱条件：
保留时间如下表所示：
以上是糖柱对糖和糖醇类化合物分析的应用分享，想了解这类柱更多的应用，敬请关注下期~
特色色谱柱应用介绍之二----2015版中国药典中甘露醇、山梨醇和利巴韦林颗粒的分析。
waters sugarpak1糖柱使用指南
Waters SugarPak1糖柱使用指南在使用Waters SugarPak1糖柱前，我们建议您仔细阅读使用说明书并考虑以下的忠告和建议：1）将Waters SugarPak1糖柱连接到ＨＰＬＣ系统上。
2）设置流速在0.1～0.2ml/min直到柱温达到70℃。
3）在柱温达到70℃时，流速增至0.6ml/min．改变流速应该以0.1ml/min为增量，待反压稳定后再继续增加事。
特别提示：最大流速不应超过0.6ml/min。
Waters SugarPak1柱是用分析糖产品（甜糖＼甘蔗＼淀粉等作物）在水解过程中的产物，以及用来做糖产品的质检查，能够将葡萄糖＼果糖＼麦芽糖＼麦芽多糖从典型的玉米糖浆的高聚物中分离出来，也可用于酒发酵过程中跟踪监控发酵糖的减少和酒精的产生。
流相的要求：此色谱柱由钙基树脂填装而成，氢离子或其它离子会取代钙离子，或是引起与柱中糖的转换，尤其是像蔗糖这样易于转换的糖，因此推荐在流动相中加入一定量的钙离子不保持平衡和防止与样品的转换。
推荐的流动相为去离子水的无菌水，大于2兆欧的电阻率，含EDTA 钙钠盐约0。
0001M（50mg/L）。
水中应不含多价离子，尤其是过渡金属元素和重金属离子。
使用前需要真空泵通过0.45um或更小孔径的滤膜除去细菌和其它颗粒。
如果系统连续使用不止一天，请将流动相置于锥瓶中放在搅拌器或电炉上，用铝箔封上瓶口以减小蒸发，用前将流动相烧至沸点几分钟，使用时保持温度70~90℃，这个操作能够保证气体（尤其是CO2）不再重新溶解到流动相中，同时也会防止微生物的滋生。
要保持装流动相的瓶子干净，有盖子，且新鲜，流动相需要每24小时重新配制。
平衡：为了保证新柱子能在分析使用之前得到足够的钙离子的平衡，我们推荐使用以下程序：1）将柱子按照通常使用的反方向安装（标签上的箭头指向柱子的入端口）；2）用至少100ml的0.001M EDTA钙盐溶液在90℃用0.5ml/min 流速反冲柱子，500mg/L的钙盐的浓度大约为0.001M；3）将柱子反过来（回到通常的流动方向）用分析所用流动相冲柱子，（用与上一上步骤同样的条件）直到基线平稳方可使用。
最新葡聚糖凝胶柱使用及注意事项
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。
其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。
虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。
此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。
2 Sephadex LH20 的原理。
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用(在反相溶剂中)。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3 Sephadex LH20 洗脱溶剂。
看完第2点后，就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。
用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇--水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100%甲醇冲柱。
正相系统以氯仿--甲醇最为常见，先用50%氯仿--甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100%甲醇冲柱。
4 Sephadex LH20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱(甲醇--水)，样品用最少体积的甲醇--水(尽可能甲醇少一些)溶解，过滤后，湿法上样(一定要滤喔!要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀)。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱(氯仿--甲醇)，样品用最少体积的氯仿--甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
5 Sephadex LH-20的步骤。
(1) 选择条件：梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。
美国SMA-CA糖柱使用注意事项
1.色谱柱:SMA-CA 300*7.8 column.厂家:System Material Analysis（简称：SMA） Part No:SCA3-501602.主要用于分离:甘露醇山梨醇3.流动相:超纯水4.流速:0.4-0.6ml/min.5.温度:80-85度.6.一般保存在冰箱冷藏室,防止冷冻.SMA-CA使用注意事项将SMA-CA连接在HPLC系统上.设置流速在0.2-0.3ml/min直到柱温达到70℃.在柱温达到70℃时,流速增至0.6ml/min,流速变化应该以0.1ml/min为增量,待反压稳定后再继续增加流速.最大流速不应超过0.6ml/min.流动相要求:此色谱柱由钙基树脂填装而成,氢离子或其它离子会取代钙离子,或是引起与柱中糖的置换,尤其是像蔗糖这样易于置换的糖.因此推荐在流动相中加入一定量的钙离子来保持平衡和防止与样品的置换推荐的流动相为去离子的无菌水,含EDTA钙盐约0.0001M(50mg/L).水应去离子化,大于2兆欧的电阻率,水中应不含多价离子,尤其是过渡金属元素和重金属离子.使用前需用真空泵通过0.45um或更小孔径的滤膜除去细菌和其它颗粒.虽然流动相已经在真空过滤时脱气,但还是应该通过以下程序来完全脱气.如果系统连续使用不止一天,请将流动相置于锥形瓶中,放在搅拌器/电炉上,用铝箔封上瓶口以减小蒸发,用前将流动相烧至沸点几分钟,使用时保持温度70-80℃.这个操作能够保证气体(尤其是CO2)不再重新溶解在流动相中,同时也会防止微生物的滋生.EDTA 钙盐通常有以下几个通用的名字Calcium di-sodium(ethylene dinitrilo)tetra-acetic acidCalcium di-sodium ethylene diamine tetraacetateCalcium di-sodium edentate要保持装流动相的容器干净,有盖,且新鲜,流动相需每24小时重新配制.平衡:为了保证新柱能在分析使用之前得到足够的钙离子的平衡,我们推荐使用以下程序.将柱子按照通常使用的反方向安装(标签上的箭头指向柱子的入口端).也可用反冲阀.用至少100ml的0.001M的EDTA钙盐溶液在80℃用0.5ml/min流速反冲柱子.500mg/L的EDTA钙盐的浓度大约为0. 001M.将柱子反过来(回到通常的流动方向)用分析所用的流动相冲柱子,(用与上一个步骤同样的条件)直到基线平稳方可使用. 注意事项:通常推荐压力不超过2000psi最大流速不超过0.6ml/min(70℃). 不要在流动相中使用氯化钙,硝酸钙以及其它的强酸的钙盐,这样会腐蚀柱子,破坏填料.. 流动相中有机相的最大含量为5%(V/V),样品中少量的乙腈,乙醇,甲醇和异丙醇不会影响柱子的性能.. 柱子的温度不要超过95℃.通常高温会带来高的分辨率,但在90-95℃之间几乎没有变化,70℃以下对于许多糖,就异构体的分离来说不能提供足够的分辨率,对于乙醇的定量,柱温应在75℃.. 柱温的快速变化不会对柱子带来什么反作用,如果柱子在60℃以下,那么最高的流速为0.2ml/min,由于水在低温时的高的粘度因此高的流速会带来很高的反压.. 定期反向冲洗色谱柱(在每5L流动相之后),这将会有效地延长色谱柱的寿命.. 流速的变化不能超过0.5ml/min,流速变化应该缓慢进行,建议改变流速时以0.1ml/min为增量,直到反压稳定后再继续增加流速.任何的流速变化均要在不超过0.5ml/min下进行.在溶剂输出系统中压力限制的设定应比普通的工作压力高出几百psi,从而避免任何仪器未被注意的额外压力升高.. 如果分析的是不易于置换的糖,那么就没有必要在流动相中使用EDTA Ca,纯水需过滤和脱气,如果要保持柱子适宜的性能,柱子的再生和流路的方向变化要经常进行.保存条件:(72小时以上不用). 关掉柱温箱,停泵.. 当柱子冷却,从系统中移出,换上起初随柱子的堵头,柱子在保存过程中要防止挥干,通常的流动相都可作为保存柱子的适宜溶剂.在冰箱中5℃保存(不要冷冻),以防止微生物的滋生.. 柱子拆掉后要用不锈钢堵头装在系统上,冲洗整个液相色谱系统先用水,然后用甲醇,最后系统保存在甲醇中.在关机后的重新启动当开启带有一个柱温很低的柱子的系统时,打开柱温箱,流速开始不要超过0.2ml/min.待系统在此条件下稳定至少二十分钟达到工作温度后再按通常的工作条件操作.整夜的停机(放置少于72小时)柱子留在系统中流速降到0.2ml/min.循环溶剂,将流出的管路插入流动相瓶中,如果不想开着柱温箱,那就关掉泵和柱温箱让其冷却.在整夜停机后的开启打开柱温箱,流动相的流速不要超过0.1-0.2ml/min,保持此流速至少二十分钟直到达到柱子工作所需温度,然后再按照通常分析条件来设置.故障检查SMA-CA是以树脂的膨胀形态紧密装填的,如果样品进行了很好的前处理,那么大部分产生的问题都和树脂填料有关,由于单向阀的损坏或是突然地反压增加, 脆弱的树脂填料可能被泵的波动冲到柱子的后筛板处.反压的增加是否会发生,要经常检查在线过滤器以及保护柱中是否截留了微粒.如果不是此问题,那么很可能是树脂部分地堵在了出口端的筛板处,检查这种情况是否发生需要关掉泵,将柱子的流路方向反过来,然后泵流速开到0.1ml/min,20分钟达到工作温度后再设至工作时的流速.柱子的再生步骤:SMA-CA柱子的再生方法根据相关的样品纯度有不同的变化,越是天然物,(尤其是含有那些重金属和过渡金属元素或是有机酸的样品)越需要经常地对柱子进行再生,因为它们会与柱子发生置换.可以通过注射蔗糖来测试柱子的置换,如果蔗糖的峰有拖尾,那么柱子需要做以下处理:配制500ml的再生溶液(500mgCa EDTA/L), 把柱子流路方向反过来,在85℃下以0.5ml/min的流速冲洗一整夜.再生之后回到正常方向使用.当柱子反冲时很重要的一点是需要保持溶剂的温度从而确保正确的冲洗,用冷的溶剂将会延缓冲洗的过程原理糖类分析柱保留基理：糖分析柱的分离原理是基于配体交换反应。
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项葡聚糖凝胶柱是一种常用的色谱柱，其主要由多糖聚合物构成，具有多孔结构以及极高的比表面积。
葡聚糖凝胶柱在生物分离、蛋白质纯化以及分析等方面有重要的应用。
下面将介绍葡聚糖凝胶柱的使用方法以及注意事项，并列举了几种常见溶剂的溶胀系数作为参考。
使用方法：1.预处理：新柱使用前需进行预处理。
首先，在使用前用适当的缓冲液再生柱子，一般推荐使用PBS缓冲液进行再生。
其次，用去离子水进行洗脱，去除缓冲液中的离子。
2.样品准备：准备好带有样品的溶液，可以是蛋白质溶液、核酸溶液或者其他需要分离的溶液。
3.进样：将样品溶液注入到柱子中，可以使用曲线尖管或者注射器进行。
4.溶剂流动：使用适当的流动缓冲液进行柱子的着色，常用的缓冲液有PBS缓冲液、甲醇和乙醇。
5.收集分离的组分：通过收集分离的组分，可以进行后续的实验操作或者分析。
注意事项：1.柱子的平衡：在使用柱子前，将柱子放入合适的缓冲液中，进行平衡处理，通常需要约30分钟。
2.柱子的保管：使用完毕后，需将柱子用适当的缓冲液保存，避免干燥。
3.柱子的温度：柱子的运行温度一般在室温下进行，避免过高温度的使用，以免影响柱子的性能。
4.溶液选择：在选择适当的缓冲液时，应根据样品的性质以及需求进行选择，不同的缓冲液对分离的效果会有影响。
5.柱子的清洗：使用完毕后的柱子需要进行彻底的清洗工作，尤其是对于经常使用的柱子，清洗工作要做得彻底。
下面是几种常见溶剂的溶胀系数参考值：1.水：溶胀系数为1，对于葡聚糖凝胶柱来说，水是适用的溶剂。
2.硫酸：溶胀系数为0.57，硫酸能够完全渗透葡聚糖凝胶柱。
3.乙醇：溶胀系数为0.44，适量的乙醇可以使用，但过高浓度的乙醇可能会影响柱子的性能。
4.甲醇：溶胀系数为0.65，甲醇也可以使用，但同样需要注意控制浓度。
总结：葡聚糖凝胶柱是一种常见的色谱柱，具有广泛的应用。
在使用葡聚糖凝胶柱时，需进行适当的处理以及注意事项，以保证柱子的性能和寿命。
凝胶柱的使用
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项葡聚糖凝胶柱使用及注意事项1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。
其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。
虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。
此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。
2 Sephadex LH20 的原理。
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3 Sephadex LH20 洗脱溶剂。
看完第2点后，就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。
用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
4 Sephadex LH20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
5 Sephadex LH-20的步骤。
(1) 选择条件：梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。
液相色谱使用说明
第一部分：手性柱的使用说明及注意事项1.流动相、进行适当稀释后的待测样品，用前均需通过0.45 µm 滤膜过滤，然后超声脱气。
2.两次实验间隔时间较长时，在使用前，系统须排气10分钟（流速设为5ml/ min），以冲洗管路杂质，排气结束时，将流速调为0.1 ml/min。
然后接手性柱进样一端（即有保护住一端），保持另一端断开，开泵冲洗手性柱5-10分钟，流速由低住逐步升高：0.1，0.3，0.5，1.0ml/min。
冲洗完毕后，将另一端接好，流速由低住逐步升高：0.1，0.3，0.5，1.0ml/min。
3.打开仪器后，需设置系统参数，系统主要参数如下：检测器：SPD(紫外分光检测)-20A柱温：30℃（如在夏天室内气温达到该温度可不开柱温箱）；进样流速：0.7 mL/min或1 mL/min；检测波长：254 nm；柱压：（新柱）压力一般为13～14MPa，最大保护柱压设为25MPa；测试时间：进样流速为 1 mL/min 时25min，进样流速为0.7mL/min 时30min；进样量：2 µL。
4.测试过程中，须打开柱温箱开关，保证柱子的实际温度和设定温度相同。
测样过程中，如发现同样物质的峰，两次出峰时间不一致，可能是柱子出问题了，须联系柱子厂家来解决。
5.测试过程中需更换流动相时，应先把泵流速调为0 mL/min，更换后，流速调为0.2 mL/min，排气2次，再进样。
6.样品测试结束后，需用流动相继续冲洗柱子30至60min。
取出柱子时应保证其内部充满流动相，以便长期保存，切忌空柱子存放。
7.测试范围：各种具有旋光异构体的有机酸类物质。
备注：测L、D-乳酸的流动相为2 mmol/L CuSO4溶液（溶剂为5 %的异丙醇溶液），使用前经0.45 µm滤膜过滤。
溶液配制，称取CuSO4〃5H2O0.49936 g，加50 mL双蒸水溶解，转移置1000 mL的容量瓶中，加入50 mL的色谱纯异丙醇，再用双蒸水定容至1000 mL,用0.45 µm 孔径的合成纤维素酯膜进行真空超滤，超声波脱气。
大赛璐手性柱使用注意事项
Normal Phase
CHIRALPAK® AD-3/AD-H/AD CHIRALPAK® AS-3/AS-H/AS CHIRALPAK® AY-3/AY-H CHIRALPAK® AZ-3/AZ-H CHIRALCEL® OD-3/OD-H/OD CHIRALCEL® OJ-3/OJ-H/OJ CHIRALCEL® OZ-3/OZ-H CHIRALCEL® OX-3/OX-H CHIRALCEL® OB-H/OB CHIRALCEL® OC-H/OC CHIRALCEL® OA CHIRALCEL® OG CHIRALCEL® OF CHIRALCEL® OK
Medium Pressure
CHIRALFLASH® IA CHIRALFLASH® IC CHIRALFLASH® ID
3
1.多糖涂覆型正相手性柱
Immobilized Type
CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® IA/IA-3 IB/IB-3 IC/IC-3 ID/ID-3 IE/IE-3 IF/IF-3
9/79
Part. 1-5
正相柱的冲洗与保存
实验完成后：如流动相中有酸性或碱性添加剂，先用不加添加剂的同 比例流动相冲洗柱子（20倍柱体积），再用出厂保存溶剂冲洗保存（ 20倍柱体积）。比如ADH柱实验用的流动相是正己烷：乙醇：二乙 胺=70:30:0.1，用完了以后先用正己烷：乙醇=70:30冲洗，最后用正 己烷：异丙醇=90:10冲洗保存。 柱子被污染：按照大赛璐《多糖涂覆型手性柱（正相流动相）冲洗方 法》进行冲洗 注意：醇的黏度大，注意冲洗时的流速； AYH不可以用100%异丙醇冲洗，否则柱效会下降，但这种损 伤是可修复的，用乙醇将异丙醇从柱子中置换出来即可恢复柱效。
Prevail Carbhydrate ES Column_使用说明
柱的安装
流动相的方向 安装使用 ES 糖柱需符合标记在柱标签上的流动 方向箭头。
连接管 使用能够使死体积尽可能最小的连接管是非常 重要的。对于分析柱，可以在进样器与柱进口处 以及柱出口处到检测器中间使用 0.005-0.010''i.d.连接管。连接管要尽量的短。尽 量不要在任何地方使用两通连接，因为这可能会 导致峰的加宽。
当配合 ELSD 使用时，Prevail™ ES 糖柱能够 达到其最大的使用潜力。这对色谱柱/检测器的 组合能够得到极好的灵敏度，总的梯度兼容性以 及稳定的没有噪音和漂移的基线。
流动相的预处理
1) 过滤 总是在使用前用 0.5µm 或更小规格的过滤膜过滤 流动相和样品溶液，因为它们也许可能会包含一些 不溶性物质或碎片而导致对柱的破坏或色谱噪音。
离子交换色谱 1) 缓冲液溶剂可以使用磷酸盐，醋酸盐，添加
或不添加氯化钠，氯化钾或硫酸钠的 Tris 缓冲液。
柱的清洗
长期不断使用色谱柱，可能会因为样品溶液中的细小物 质在色谱柱中的吸附积累而导致糖的洗脱行为发生相当 大的变化。在这种情况或其它某些情况下，可使用如下 方法来清洗色谱柱：
将总共10-20倍柱体积的0.01N硝酸水溶液按常规流速 或更低流速通过色谱柱进行冲洗。然后用蒸馏水将色谱 柱中所有的硝酸冲洗干净。然后将总共10-20倍柱体积的 0.01N氢氧化钠水溶液按常规流速或更低流速通过色谱 柱进行冲洗。然后用蒸馏水清洗除去柱中的所有氢氧化 钠。
存放于有阳光直射或有很大温度变化的地方可能回导致 对色谱柱的损害。
泵的选择 使用能够产生最小输出流脉冲。强脉冲会导致分 离度的降低并会损害色谱柱。可以通过在泵出口 动相
糖分析 1) 水，乙腈，乙醇，其任一单独或以任何比例
糖检测色谱柱使用时注意事项和保存方法 色谱柱维护和修理保养
糖检测色谱柱使用时注意事项和保存方法色谱柱维护和修理保养糖检测色谱柱特点：1.柱寿命更长：杂化键和相技术使得这款糖柱兼有硅胶柱的耐压性与聚合物柱的酸碱耐受性。
2.基线更稳定：与常规的用于分析糖的硅胶氨基柱比较，即使使用梯度洗脱也没有基线漂移问题。
3.可兼容使用在梯度洗脱条件下的ELSD检测。
糖检测色谱柱使用时注意事项：1.为避开管路中的有机溶剂和气泡进入糖检测色谱柱，先用水冲洗整个色谱系统,然后才能接入糖检测色谱柱。
2.不要让有机溶剂进入柱中，否则会使填料脱水，导致柱床损坏，要小流速开启泵，不要快速加大流速，以防止压力迅猛上升而导致柱床损坏。
15mm的柱子流速不要超过3ml/min。
3.每次使用后务必用蒸馏水冲洗干净将含盐的流动相置换干净，若较长时间不用请按保存方法保存。
糖检测色谱柱保存方法：1.将糖检测色谱柱用蒸馏水冲净后充上0.02%—0.05%的叠氮钠水溶液封存,或三氯丁醇（0.015%）苯基汞代盐（0.001—0.01%）将糖检测色谱柱封闭后低温保存（温度在5℃左右）在冰箱。
2.再次使用时,用蒸馏水将保护溶液冲洗掉即可使用。
3.假如第二天还要使用也要从系统中取下，将柱封闭后存于4～8度的冰箱中冷藏。
色谱柱再生问题分析当色谱柱使用一段时间以后，柱内由于各种原因，滞留了一些高沸点组分或氧化物等，除柱效有所下降外，还可能显现基线波动或“鬼峰”。
为了去除污染物，使柱效和基线恢复到原来的状态，称为色谱柱的再生。
色谱柱的再生和柱老化有确定区分和不同，它是柱在使用一段时间柱性能下降，经处理后尽量恢复到原来性能的过程。
A、色谱柱在以下几种情况必需再生处理a.使一段时间，柱效明显下降；b.柱被污染，特别是在程序升温时，基线漂移和噪声超过容忍程度或显现“鬼峰”；c.柱头塌陷，柱床短路或断位（在玻璃柱中简单发觉），而显现尖峰或双重峰；d.峰形展宽，保留时间明显变化；e.待分别组分和固定相表面非特异性相互作用，引起保留时间较短的峰拖尾或显现双峰；B、毛细管柱再生的几种方法a.用载气将色谱柱污染物冲洗出来；b.将柱头截去100mm 或更长一些；c.若使用交联的色谱柱，可在仪器上反复注射溶剂进行冲洗。
n糖纯化柱使用方法_概述说明以及解释
n糖纯化柱使用方法概述说明以及解释1. 引言1.1 概述本文旨在介绍和解释N糖纯化柱的使用方法，阐明其原理、优势以及应用领域与限制。
N糖纯化柱是一种常用的生物分离技术，广泛应用于生物医药领域。
它可以高效地纯化含有N糖结构的分子，并提供更精确和方便的分离步骤。
1.2 文章结构本文共分为五个部分，每个部分都涵盖了特定的主题内容。
首先是引言部分，概述了本文的目标和文章结构。
接下来是"N糖纯化柱使用方法"部分，详细介绍了该技术中所使用到的柱子、准备工作以及具体步骤。
然后是"解释N糖纯化柱使用方法的原理和优势"部分，深入探讨了该技术的工作原理、纯化效果优势以及应用领域与限制。
在最后一个"结论" 部分中，总结了N糖纯化柱使用方法的效果，并展望了其未来发展方向及改进措施，并给出了相应的注意事项和建议。
最后，如果有适用的参考文献则会列出在文末作为补充。
1.3 目的本文的目的是全面介绍N糖纯化柱的使用方法，并阐述其原理和优势，帮助读者了解该技术并正确地应用于实际工作中。
通过本文的阐述，读者可以获得关于N糖纯化柱的详细信息，并能够更好地进行相关实验操作和数据分析。
此外，我们也希望激发读者对该技术未来发展可能性的思考，并为进一步改进与提升N 糖纯化柱的性能提供启示。
2. N糖纯化柱使用方法2.1 柱子介绍N糖纯化柱是一种常用的生物分离技术工具，通过选择性吸附和洗脱的原理，在复杂混合物中将目标糖类分离纯化出来。
该柱子通常由填料和柱壁组成，填料具有对目标糖类高选择性吸附的特性。
2.2 准备工作在使用N糖纯化柱之前，需要进行以下准备工作：- 确保实验室卫生和安全：保持操作台面整洁，佩戴实验室手套、防护眼镜等安全装备。
- 准备所需试剂和溶液：根据实验要求准备好样品溶液、洗脱缓冲液等。
- 制备合适体积的N糖纯化柱：选择适量的N糖纯化柱，并在使用前进行预先等通。
2.3 使用步骤下面将详细介绍N糖纯化柱的使用步骤：步骤1: 样品制备将待分离的样品溶液调配好，并根据实验要求进行前处理，如去除杂质、调整pH值等。
糖柱使用注意
糖柱使用注意1.色谱柱:Sugar-P ak TM 1 6.5*300mm column.厂家:waters P art No:WAT0851882.主要用于分离:葡萄糖(glucose)\麦芽糖(maltose)\果糖(frutcose).3.流动相:超纯水4.流速:0.4-0.6ml/min.5.温度:80-85度.6.一般保存在冰箱冷藏室,防止冷冻.Sugar-pak1使用注意事项(网上找的)将Sugar-pak1连接在HP LC系统上.设置流速在0.2-0.3ml/min直到柱温达到70℃.在柱温达到70℃时,流速增至0.6ml/min,流速变化应该以0.1ml/min为增量,待反压稳定后再继续增加流速.最大流速不应超过0.6ml/min.Waters Sugar-pak1柱是用来分析糖产品,甜菜,甘蔗,淀粉这些作物在水解过程中的产物,以及用来做糖产品的质量检查,能够将葡萄糖,果糖,麦芽糖, 麦芽多糖从典型的玉米糖浆中的高聚物中分离出来.也可用于酒精的发酵过程中跟踪监控发酵糖的减少和酒精的产生.流动相要求:此色谱柱由钙基树脂填装而成,氢离子或其它离子会取代钙离子,或是引起与柱中糖的置换,尤其是像蔗糖这样易于置换的糖.因此推荐在流动相中加入一定量的钙离子来保持平衡和防止与样品的置换推荐的流动相为去离子的无菌水,含 E DTA钙盐约0.0001M(50mg/L).水应去离子化,大于2兆欧的电阻率,水中应不含多价离子,尤其是过渡金属元素和重金属离子.使用前需用真空泵通过0.45um或更小孔径的滤膜除去细菌和其它颗粒.溶剂过滤推荐使用溶剂过滤器(可从Waters公司获得:110V,部件号:W AT085113,. 220V, 部件号:WAT085102,)合适的滤膜为Millipore 的HAWP04700(Waters 部件号:W AT085117).虽然流动相已经在真空过滤时脱气,但还是应该通过以下程序来完全脱气.如果系统连续使用不止一天,请将流动相置于锥形瓶中,放在搅拌器/电炉上,用铝箔封上瓶口以减小蒸发,用前将流动相烧至沸点几分钟,使用时保持温度70-90℃.这个操作能够保证气体(尤其是CO2)不再重新溶解在流动相中,同时也会防止微生物的滋生.EDTA 钙盐通常有以下几个通用的名字Calcium di-sodium(ethylene dinitrilo)tetra-acetic acidCalcium di-sodium ethylene diamine tetraacetateCalcium di-sodium edentate要保持装流动相的容器干净,有盖,且新鲜,流动相需每24小时重新配制.平衡:为了保证新柱能在分析使用之前得到足够的钙离子的平衡,我们推荐使用以下程序.将柱子按照通常使用的反方向安装(标签上的箭头指向柱子的入口端).也可用反冲阀.用至少100ml的0.001M的E DTA钙盐溶液在90℃用0.5ml/min 流速反冲柱子.500mg/L的E DTA钙盐的浓度大约为0. 001M.将柱子反过来(回到通常的流动方向)用分析所用的流动相冲柱子,(用与上一个步骤同样的条件)直到基线平稳方可使用. 注意事项: 通常推荐压力不超过2000psi最大流速不超过0.6ml/min(70℃). 不要在流动相中使用氯化钙,硝酸钙以及其它的强酸的钙盐,这样会腐蚀柱子,破坏填料.. 流动相中有机相的最大含量为5%(V/V),样品中少量的乙腈,乙醇,甲醇和异丙醇不会影响柱子的性能.. 柱子的温度不要超过95℃.通常高温会带来高的分辨率,但在90-95℃之间几乎没有变化,70℃以下对于许多糖,就异构体的分离来说不能提供足够的分辨率,对于乙醇的定量,柱温应在75℃.. 柱温的快速变化不会对柱子带来什么反作用,如果柱子在60℃以下,那么最高的流速为0.2ml/min,由于水在低温时的高的粘度因此高的流速会带来很高的反压.. 定期反向冲洗色谱柱(在每5L流动相之后),这将会有效地延长色谱柱的寿命.. 流速的变化不能超过0.5ml/min,流速变化应该缓慢进行,建议改变流速时以0.1ml/min为增量,直到反压稳定后再继续增加流速.任何的流速变化均要在不超过0.5ml/min下进行.在溶剂输出系统中压力限制的设定应比普通的工作压力高出几百psi,从而避免任何仪器未被注意的额外压力升高.. 如果分析的是不易于置换的糖,那么就没有必要在流动相中使用E DTA Ca,纯水需过滤和脱气,如果要保持柱子适宜的性能,柱子的再生和流路的方向变化要经常进行.保存条件:(72小时以上不用). 关掉柱温箱,停泵.. 当柱子冷却,从系统中移出,换上起初随柱子的堵头,柱子在保存过程中要防止挥干,通常的流动相都可作为保存柱子的适宜溶剂.在冰箱中5℃保存(不要冷冻),以防止微生物的滋生.. 柱子拆掉后要用不锈钢堵头装在系统上,冲洗整个液相色谱系统先用水,然后用甲醇,最后系统保存在甲醇中.在关机后的重新启动当开启带有一个柱温很低的柱子的系统时,打开柱温箱,流速开始不要超过0.2ml/min.待系统在此条件下稳定至少二十分钟达到工作温度后再按通常的工作条件操作.整夜的停机(放置少于72小时)柱子留在系统中流速降到0.2ml/min.循环溶剂,将流出的管路插入流动相瓶中,如果不想开着柱温箱,那就关掉泵和柱温箱让其冷却.在整夜停机后的开启打开柱温箱,流动相的流速不要超过0.1-0.2ml/min,保持此流速至少二十分钟直到达到柱子工作所需温度,然后再按照通常分析条件来设置.故障检查Sugar-pak1是以树脂的膨胀形态紧密装填的,如果样品进行了很好的前处理,那么大部分产生的问题都和树脂填料有关,由于单向阀的损坏或是突然地反压增加, 脆弱的树脂填料可能被泵的波动冲到柱子的后筛板处.反压的增加是否会发生,要经常检查在线过滤器以及保护柱中是否截留了微粒.如果不是此问题,那么很可能是树脂部分地堵在了出口端的筛板处,检查这种情况是否发生需要关掉泵,将柱子的流路方向反过来,然后泵流速开到0.1ml/min,20分钟达到工作温度后再设至工作时的流速.柱子的再生步骤:Sugar-pak1柱子的再生方法根据相关的样品纯度有不同的变化,越是天然物,(尤其是含有那些重金属和过渡金属元素或是有机酸的样品)越需要经常地对柱子进行再生,因为它们会与柱子发生置换.可以通过注射蔗糖来测试柱子的置换,如果蔗糖的峰有拖尾,那么柱子需要做以下处理:配制500ml的再生溶液(500mgCa EDTA/L), 把柱子流路方向反过来,在90℃下以0.5ml/min的流速冲洗一整夜.再生之后回到正常方向使用.当柱子反冲时很重要的一点是需要保持溶剂的温度从而确保正确的冲洗,用冷的溶剂将会延缓冲洗的过程原理糖类分析柱保留基理：糖分析柱的分离原理是基于配体交换反应。
shodex糖类色谱柱使用说明书
Shodex使用说明书SUGARSUGAR 系列 SH 1011SH 1011，SH 1821SH 1821SH 1821，SC 1011SC 1011SC 1011，SC 1821SC 1821SC 1821，SP 0810SP 0810SP 0810，SC 1211SC 1211SC 1211，SZ 5532 SZ 5532 SZ 5532 感谢您购买Shodex系列色谱柱！在使用之前，请仔细阅读说明书，以保证色谱柱的最佳使用状态和使用寿命。
1 介绍色谱柱的填料为刚性的苯乙烯/DVB基质的强离子交换树脂，专用于糖类的分离。
Shodex SUGAR系列色谱柱在糖类的分离和分析上表现出优秀的性能，是应用于食品、生物化学品、天然产物中糖分析的首选。
Shodex SUGAR系列色谱柱的基本分离原理是体积排阻色谱，除此之外，还有分配色谱的原理和离子相互作用，比如配位交换，样品与抗衡离子互相作用，使得在精细结构上不同的各种单糖得以分离。
另外，SH系列的色谱柱由于具有显著的离子排斥作用，可同时分离有机酸和糖。
2 型号和特点Shodex SUGAR系列色谱柱有7种型号，每种型号在抗衡离子、孔径尺寸、孔结构以及糖的选择性上有所不同。
表一 型号和特点 型号1) 抗衡离子 分离模式 规格（mm） 排阻限 理论塔板数储存溶剂2)SH1011 H+ SEC+IE3) 8*300 1,000 ≥15,000 H2O SH1821 H+ SEC+IE 8*300 10,000 ≥15,000 H2O SC1011 Ca2+ SEC+LE4)8*300 1,000 ≥12,000 H2O SC1821 Ca2+ SEC+LE 8*300 10,000 ≥10,000 H2O SP0810 Pb2+ SEC+LE 8*300 1,000 ≥10,000 H2O SC1211 Ca2+ P5)+LE 6*250 ≥5,000 25%CH3CN/H2O SZ5532 Zn2+ P+LE 6*150 ≥5,000 70%CH3CN/H2O5）分配机理以下六种保护柱可用于表一中的色谱柱。
粮食工程技术《离子交换柱的使用注意事项》
离子交换柱的使用考前须知
1糖液的交换
1糖液交换流程一般是阳树脂一阴树脂一阳树脂一阴树脂。
阳离子树脂一般是732型，阴离子树脂那么一般是701型。
2翻开储糖的出料阀，将糖液泵入阳离子树脂和阴离子树脂，进行离子交换。
开始顶出来的水放掉不要，当浓度到达50°Bé时可以开始收集糖液。
3交换时糖液温度30～40℃，流速为每小时3～5倍树脂的体积。
4冲洗残糖：交换柱内残留的糖，需要及时用温水清洗干净，以防止染菌发酵，并防止使树脂污染而降低效力。
冲洗时用离子交换水或二次蒸汽冷凝水。
自上而下流经树脂柱，倒冲树脂洗去残糖，冲出沉积在树脂外表上的悬浮物质，使树脂疏松并排出气体。
2树脂再生
1阳离子树脂再生处理用树脂体积3～5倍的5%盐酸溶液，以每小时2倍量的流速自上而下流出，并浸泡数小时。
用离子交换水洗到pH 4，再进行反冲洗，并收集相对密度1．0以上的盐酸。
2阴离子树脂再生处理用树脂体积4～5倍的5%纯碱溶液，以每小时2倍流速自上而下通过，浸泡数小时，然后用水冲洗到pH 8以下。
3离子交换考前须知
1树脂在糖液交换、再生或水洗时，一定要保证液面高于树脂面，以防止降低交换能力。
2树脂层内假设有气泡，必须除去，否那么对气泡附近树脂再生不利。
水洗不净，糖液交换利用率低，最终使交换效率降低，影响了糖液的质量。
3柱内残糖必须要冲洗干净，以防止发酵变质。
4树脂假设长期不使用，需要经过再生，最后用酸碱浸泡，防止污染。
5假设树脂已污染，应及时处理。
可先用饱和食盐水浸泡3～4h。
sugarcolumn 索引
sugarcolumn 索引Sugarcolumn（糖柱）是一种常用的分离和纯化生物分子的方法。
它利用了糖的亲和性和分子大小的差异，通过将混合物通过填充了糖的柱子来分离和纯化目标分子。
糖柱是由固定在柱子内壁上的糖分子构成的。
这些糖分子可以是单一种类的糖，也可以是多种不同种类的糖混合而成。
当混合物通过糖柱时，目标分子会与糖分子发生特异性的相互作用，从而被留下来，而其他分子则被洗脱出去。
糖柱的选择是根据目标分子的性质和糖分子的亲和性来确定的。
不同的糖柱具有不同的分离效果和纯化能力。
例如，对于蛋白质的纯化，常用的糖柱有凝集素柱、亲和素柱和离子交换柱等。
这些糖柱可以选择性地结合特定的蛋白质，并将其与其他杂质分离开来。
糖柱的使用步骤一般包括样品的预处理、柱子的装填和样品的加载。
首先，需要将样品进行预处理，如去除杂质、浓缩等。
然后，将柱子装填好，并根据实验要求进行校验和平衡。
最后，将经过预处理的样品加载到糖柱上，并进行洗脱和收集。
糖柱分离的原理是基于糖与目标分子之间的相互作用。
糖分子与目标分子之间可以通过氢键、离子键、疏水作用等多种相互作用力发生结合。
这些相互作用力的强弱决定了目标分子在糖柱上的保留时间和洗脱时间。
糖柱的优点是具有选择性高、操作简单、分离效果好等特点。
它可以用于分离和纯化多种生物分子，如蛋白质、核酸、多糖等。
此外，糖柱还可以与其他分离方法结合使用，如层析、电泳等，以进一步提高分离和纯化效果。
然而，糖柱也存在一些局限性。
首先，糖柱只适用于具有糖分子结合位点的目标分子。
对于一些没有糖分子结合位点的分子，糖柱的分离效果可能不理想。
其次，糖柱对样品的纯度要求较高，因为杂质的存在可能会干扰目标分子与糖分子的结合。
此外，糖柱的分离效果也受到样品的性质、浓度和pH值等因素的影响。
总结一下，Sugarcolumn（糖柱）是一种常用的分离和纯化生物分子的方法。
它利用了糖的亲和性和分子大小的差异，通过将混合物通过填充了糖的柱子来分离和纯化目标分子。
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1.色谱柱:Sugar-Pak TM 1 6.5*300mm column.
厂家:waters Part No:WAT085188
2.主要用于分离:葡萄糖(glucose)\麦芽糖(maltose)\果糖(frutcose).
3.流动相:超纯水
4.流速:0.4-0.6ml/min.
5.温度:80-85度.
6.一般保存在冰箱冷藏室,防止冷冻.
Sugar-pak1使用注意事项(网上找的)
将Sugar-pak1连接在HPLC系统上.
设置流速在0.2-0.3ml/min直到柱温达到70℃.
在柱温达到70℃时,流速增至0.6ml/min,流速变化应该以0.1ml/min为增量,待反压稳定后再继续增加流速.
最大流速不应超过0.6ml/min.
Waters Sugar-pak1柱是用来分析糖产品,甜菜,甘蔗,淀粉这些作物在水解过程中的产物,以及用来做糖产品的质量检查,能够将葡萄糖,果糖,麦芽糖, 麦芽多糖从典型的玉米糖浆中的高聚物中分离出来.也可用于酒精的发酵过程中跟踪监控发酵糖的减少和酒精的产生.
流动相要求:
此色谱柱由钙基树脂填装而成,氢离子或其它离子会取代钙离子,或是引起与柱中糖的置换,尤其是像蔗糖这样易于置换的糖.因此推荐在流动相中加入一定量的钙离子来保持平衡和防止与样品的置换
推荐的流动相为去离子的无菌水,含EDTA钙盐约0.0001M(50mg/L).
水应去离子化,大于2兆欧的电阻率,水中应不含多价离子,尤其是过渡金属元素和重金属离子.
使用前需用真空泵通过0.45um或更小孔径的滤膜除去细菌和其它颗粒.
溶剂过滤推荐使用溶剂过滤器(可从Waters公司获得:110V,部件号:WAT085113,. 220V, 部件号:WAT085102,)合适的滤膜为Millipore的HAWP04700(Waters 部件号:WAT085117).
虽然流动相已经在真空过滤时脱气,但还是应该通过以下程序来完全脱气.
如果系统连续使用不止一天,请将流动相置于锥形瓶中,放在搅拌器/电炉上,用铝箔封上瓶口以减小蒸发,用前将流动相烧至沸点几分钟,使用时保持温度70-90℃.这个操作能够保证气体(尤其是CO2)不再重新溶解在流动相中,同时也会防止微生物的滋生.
EDTA 钙盐通常有以下几个通用的名字
Calcium di-sodium(ethylene dinitrilo)tetra-acetic acid
Calcium di-sodium ethylene diamine tetraacetate
Calcium di-sodium edentate
要保持装流动相的容器干净,有盖,且新鲜,流动相需每24小时重新配制.
平衡:
为了保证新柱能在分析使用之前得到足够的钙离子的平衡,我们推荐使用以下程序.
将柱子按照通常使用的反方向安装(标签上的箭头指向柱子的入口端).也可用反冲阀.
用至少100ml的0.001M的EDTA钙盐溶液在90℃用0.5ml/min流速反冲柱子.500mg/L的EDTA钙盐的浓度大约为0. 001M.
将柱子反过来(回到通常的流动方向)用分析所用的流动相冲柱子,(用与上一个步骤同样的条件)直到基线平稳方可使用. 注意事项:
通常推荐压力不超过2000psi
最大流速不超过0.6ml/min(70℃)
. 不要在流动相中使用氯化钙,硝酸钙以及其它的强酸的钙盐,这样会腐蚀柱子,破坏填料.
. 流动相中有机相的最大含量为5%(V/V),样品中少量的乙腈,乙醇,甲醇和异丙醇不会影响柱子的性能.
. 柱子的温度不要超过95℃.通常高温会带来高的分辨率,但在90-95℃之间几乎没有变化,70℃以下对于许多糖,就异构体的分离来说不能提供足够的分辨率,对于乙醇的定量,柱温应在75℃.
. 柱温的快速变化不会对柱子带来什么反作用,如果柱子在60℃以下,那么最高的流速为0.2ml/min,由于水在低温时的高的粘度因此高的流速会带来很高的反压.
. 定期反向冲洗色谱柱(在每5L流动相之后),这将会有效地延长色谱柱的寿命.
. 流速的变化不能超过0.5ml/min,流速变化应该缓慢进行,建议改变流速时以0.1ml/min为增量,直到反压稳定后再继续增加流速.任何的流速变化均要在不超过0.5ml/min下进行.
在溶剂输出系统中压力限制的设定应比普通的工作压力高出几百psi,从而避免任何仪器未被注意的额外压力升高.
. 如果分析的是不易于置换的糖,那么就没有必要在流动相中使用EDTA Ca,纯水需过滤和脱气,如果要保持柱子适宜的性能,柱子的再生和流路的方向变化要经常进行.
保存条件:(72小时以上不用)
. 关掉柱温箱,停泵.
. 当柱子冷却,从系统中移出,换上起初随柱子的堵头,柱子在保存过程中要防止挥干,通常的流动相都可作为保存柱子的适宜溶剂.在冰箱中5℃保存(不要冷冻),以防止微生物的滋生.
. 柱子拆掉后要用不锈钢堵头装在系统上,冲洗整个液相色谱系统先用水,然后用甲醇,最后系统保存在甲醇中.
在关机后的重新启动
当开启带有一个柱温很低的柱子的系统时,打开柱温箱,流速开始不要超过0.2ml/min.待系统在此条件下稳定至少二十分钟达到工作温度后再按通常的工作条件操作.
整夜的停机(放置少于72小时)
柱子留在系统中流速降到0.2ml/min.循环溶剂,将流出的管路插入流动相瓶中,如果不想开着柱温箱,那就关掉泵和柱温箱让其冷却.
在整夜停机后的开启
打开柱温箱,流动相的流速不要超过0.1-0.2ml/min,保持此流速至少二十分钟直到达到柱子工作所需温度,然后再按照通常分析条件来设置.
故障检查
Sugar-pak1是以树脂的膨胀形态紧密装填的,如果样品进行了很好的前处理,那么大部分产生的问题都和树脂填料有关,由于单向阀的损坏或是突然地反压增加, 脆弱的树脂填料可能被泵的波动冲到柱子的后筛板处.反压的增加是否会发生,要经常检查在线过滤器以及保护柱中是否截留了微粒.如果不是此问题,那么很可能是树脂部分地堵在了出口端的筛板处,检查这种情况是否发生需要关掉泵,将柱子的流路方向反过来,然后泵流速开到0.1ml/min,20分钟达到工作温度后再设至工作时的流速.
柱子的再生步骤:
Sugar-pak1柱子的再生方法根据相关的样品纯度有不同的变化,越是天然物,(尤其是含有那些重金属和过渡金属元素或是有机酸的样品)越需要经常地对柱子进行再生,因为它们会与柱子发生置换.
可以通过注射蔗糖来测试柱子的置换,如果蔗糖的峰有拖尾,那么柱子需要做以下处理:
配制500ml的再生溶液(500mgCa EDTA/L), 把柱子流路方向反过来,在90℃下以0.5ml/min的流速冲洗一整夜.再生之后回到正常方向使用.
当柱子反冲时很重要的一点是需要保持溶剂的温度从而确保正确的冲洗,用冷的溶剂将会延缓冲洗的过程
原理
糖类分析柱保留基理：糖分析柱的分离原理是基于配体交换反应。
糖分子上每一个羟基都带有一个非常弱的负电荷,而端基异构碳上所带的羟基可被去质子化,从而带上一个很强的负电荷.糖分子上的这些负电荷与树脂表面上的金属离子的正电荷之间的相互作用使糖被保留,从而达到分离。
平衡时间较长和反冲都是为了保证新柱能在分析使用之前得到足够的钙离子的平衡,只有柱子上面金属离子稳定且显活性才能对样品有保留。
将柱子按照通常使用的反方向安装(标签上的箭头指向柱子的入口端).也可用反冲阀.，用至少100ml的0.001M的EDTA 钙盐溶液在90℃用0.5ml/min流速反冲柱子.500mg/L的EDTA钙盐的浓度大约为0.001M. ，将柱子反过来(回到通常的流动方向)用分析所用的流动相冲柱子,(用与上一个步骤同样的条件)直到基线平稳方可使用。