高考生物复习 2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

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2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

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课堂合作探究
问题导学
一、研究思路
活动与探究 1 1.寻找目的菌株的思路是什么? 提示:根据目的菌株对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。
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2.阅读教材第 22 页第一段旁栏中的相关内容,并思考回答下列问题。
(1)在培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质?琼脂的作用是什么?
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•9、要学生做的事，教职员躬亲共做；要学生学的知识，教职员躬亲共学；要学生守的规则，教职员躬亲共守。2021/9/172021/9/17Friday, September 17, 2021 •10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。2021/9/172021/9/172021/9/179/17/2021 11:29:17 PM •11、只有让学生不把全部时间都用在学习上，而留下许多自由支配的时间，他才能顺利地学习……（这）是教育过程的逻辑。2021/9/172021/9/172021/9/17Sep-2117-Sep-21 •12、要记住，你不仅是教课的教师，也是学生的教育者，生活的导师和道德的引路人。2021/9/172021/9/172021/9/17Friday, September 17, 2021
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迁移与应用 1 用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数,在对应稀释倍数为 106 的培养基中,得到以下几种统计结果,正确的是( )。 A.涂布了一个平板,统计的菌落数是 230 B.涂布了两个平板,统计的菌落数是 215 和 260,取平均值 238 C.涂布了三个平板,统计的菌落数分别是 21、212 和 256,取平均值 163 D.涂布了三个平板,统计的菌落数分别是 210、240 和 250,取平均值 233

2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

是
分离只生长尿素尿素细
养基
细菌菌
对照组
牛肉膏蛋白胨培养
基
判断该培生长多
是
养基有无种微生选择性物
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数：
利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
优点：设备简单、能观察微生物的形态特征
缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；
DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，而此项技术的实施必须使用耐高温（93℃）的DNA聚合酶。
or ?
水生栖热菌Taq
Taq酶
因为热泉温度为70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有
Taq细菌被筛选出来。
1.启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境要求，到相应的环境中去寻找。
每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
菌落的特征：形状、大小、隆起程度和颜色等。
三、操作提示
[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。 [三]规划时间
石油分解菌
纤维素分解菌尿素分解菌
2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，
同时抑制或阻止其他微生物生长。
3.选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

【土壤中分解尿素的细菌的分离和计数】一、研究思路1．筛选菌株尿素是一种重要的肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为和CO2，才能被植物利用，土壤中的这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成。

可以利用这一特点，将其从土壤中筛选出来。

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于_____ _生长的条件(包括营养、、pH等)，同时____ _或其他微生物生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

2．统计菌落数目(1)常用来统计样品中数目的方法是__________ _______。

即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中。

通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。

例如每克样品中的菌株数= ,C代表 ,V代表 ,M代表。

通常统计出的菌落数比活菌的实际数目。

这是因为。

因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。

(2) 也是测定微生物数量的常用方法。

(3)细菌的数目还可以通过法来测定。

例如，测定饮水中大肠杆菌的数量，可将的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现色，可以根据培养基上的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。

在该实验中至少应取___个水样。

3．设置对照(1)设置对照的主要目的是排除实验组中___________对实验结果的影响，提高实验结果的。

例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需用______________________________ 作为空白对照。

(2)对照实验是指除了的条件外，其他条件都的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。

二、实验设计实验设计包括对实验方案，所需仪器、材料，用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。

关于土壤中某样品细菌的分离与计数的实验操作步骤如下：1．土壤取样土壤微生物约70%～80%为，主要分布在距地表的近性土壤中。

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

3.重复组的结果是否一致
如果各位同学选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，则需要从各项操作过程中去分析、寻找可能的原因。
六、课题延伸
能分解尿素的细菌的鉴定
鉴定的原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基
的pH升高。鉴定方法：
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。
三、设置对照
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响
A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是由于土样不同，二是由于培养基污染或培养基混有其它氮源。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。一种方案是可以接种其它菌种，看是否有菌落的出现，验证培养基是否混有其它氮源。另一种方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。
1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落
对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。Leabharlann 2.样品的稀释操作是否成功
如果得到了2个或2个以上菌落数目在 30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。
碳源是葡萄糖，氮源是尿素。
2.分析该配方的培养基对微生物是否具有筛选作用？如果有，又是如何进行筛选的？
有筛选作用，它的氮源只含有尿素，只有能合成分解尿素的脲酶的细菌才能生长。
二、统计菌落数目
原理
运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。
统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30 ～300的平板进行计数。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

需耐高温的DNA聚合酶，科学家从耐热菌Taq中分理得到耐高温的TaqDNA聚合酶。而Taq细菌是从热泉中发现的。
一、研究思路
自然界中目的菌株筛选的依据：根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
为什么Taq细菌能从泉中被筛选出来呢？热泉70-80℃的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而使耐热的 Taq细菌脱颖而出。
实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
【选择培养基】
允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其
他种类微生物生长的培养基。
【分析培养基】
下面是本课题将用到的培养基配方，请根据下表回答下面的问题。将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000 mL (1)在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的是________，提供氮源的是 ________。 (2)绝大多数微生物都能利用________，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解________。 (3)分析该培养基的配方，该培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？具有。以尿素为唯一氮源的培养基可以分离到产生脲酶的微生物 _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________。
放线菌： 25∼28℃， 5∼7 d ；
霉菌：25∼28℃， 3∼4 d。 2．观察：每24h统计一次菌落数目；以“稳定菌落”为观察对象。

实验03土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

专题03土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、实验原理：（1）土壤中的细菌之所以能分解尿素是因为它们能合成尿酶。

（2）配置以尿素为唯一氮源的培养基，能够在这个培养基上生长的细菌就是能分解尿素的细菌。

二、操作步骤：(1)土壤取样①土壤要求：酸碱度接近中性且潮湿。

②取样部位：距地表约3～8 cm的土壤层。

(2)样品的稀释测定土壤中细菌的数量，一般选用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养，当第一次做这个实验时可以将稀释的范围放宽一点。

(3)微生物的培养与观察①培养：根据不同微生物的需要，控制适宜的培养温度和培养时间。

细菌一般在30～37 ℃的温度下培养1～2 d。

②观察a．观察方法：每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。

b．记录菌落的特征：包括菌落的形状、大小和颜色等。

2、灭菌培养基：高压蒸汽灭菌法3、培养皿灭菌：干热灭菌法三、操作提示(1)无菌操作①取土样的用具在使用前都需要灭菌。

②实验操作均应在酒精灯火焰旁进行。

(2)做好标记：本实验使用的平板和试管较多，为避免混淆，最好在使用前做好标记。

例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。

(3)制定计划：对于耗时较长的生物实验，需要事先规划时间，以便提高实验效率，在操作时有条不紊。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数操作中需注意的问题(1)为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。

(2)恰当的稀释度是成功统计菌落数目的关键。

(3)为增强实验说服力与准确性，设计实验时，需要涂布至少三个平板作为重复组，目的是排除实验中偶然因素对实验结果的影响。

(4)分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。

(5)为防止培养时间不足导致菌落遗漏，在菌落计数时，每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

基础知பைடு நூலகம்：
（一）筛选菌株
KH2PO4
1.4g
NaH2PO4
2.1g
MgSO4`7H2O 葡萄糖
0.2g 10.0g
尿素琼脂
选择培养基
1.0g 15.0g
培养基配方
思考：该培养基对微生物具有选择作用吗？如果具有，是如何进行选择的？
只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长
选择培养基：在微生物学中，将允许特定种
• 2.提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外，还应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。
分析P22实例:
你认为哪个同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？
第一位同学没有重复实验(至少涂布3个平板)，结果不具有说服力。
第二位同学有重复实验，但结果不一致（误差较大），说明在操作过程中可能出现错误，需要重新实验。
【例1】为了计数微生物的数量，一位同学在4
1、酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增
强，PH升高→酚红指示剂，变红 2、伊红—美蓝培养基：鉴定大肠杆菌。原理：代谢产物与伊红-美蓝结合→菌落呈黑
色。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
大肠杆菌呈黑色中心 ,有或无金属光泽
本课题知识小结:
课后练习
——利用血球计数板在显微镜下直接计数。
（2）活菌计数法——统计菌落数目
方法：稀释涂布平板法。原理：
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

生物选修一2-2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、筛选菌株
自然界筛选生存环境寻找目的菌种时要根据它对________ 的要求，相应的环境中去寻找。到______ 实验室筛选目的菌株生长的条件（包括营养、人为提供有利于_________ 抑制或阻止温度、PH等），同时__________ 其他微生物生长。特定选择培养基：在微生物学中，将允许＿＿＿
脲酶
CO2 + 2NH3
（一）筛选菌株 KH2PO4 1.4g
NaHPO4 2.1g
MgSO4 H2O
葡萄糖
0.2g
10.0g
该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素
此配方能否筛选出产生琼脂 15.0g 脲酶的细菌？为什么？将上述物质溶解后，能。只有产生脲酶的用蒸馏水定容到细菌能利用尿素作为氮 1000mL。源而生存。
(四) 实验过程
2．1 根据图示2－7填写以下实验流程：配制土壤溶液系列稀释涂布平板与培养菌落计数
（五）操作提示（六）鉴定：鉴别培养基：不影响微生物的生存酚红培养基：原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性
甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值
（二）统计菌落数目为什么？ 1、活菌计数法（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此统计结果一般用菌落数表示。每克样品中的菌株数=（C/V)* M C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V:所用稀释液的体积；M:稀释倍数。当两个或者多个细胞连在一起时，平板上只能观察到一个菌落。
１．某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上ห้องสมุดไป่ตู้落数的平均值为234，涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL，那么每克样品中的菌落数是 (Ｂ ) A．2.34×108 B．2.34×109 C．234 D．23.4

2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。
（一）筛选菌株
3、选择培养基
根据微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不
同，配制的允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他
种类微生物生长的培养基。
本课题使用的选择培养基
物理特性：固体培养基功能特性：选择培养基
例：用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是
(D )
A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230
B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和261，取平均值238
C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163
【解析】稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。
（二）统计菌落数目
2.间接计数法→活菌计数法
（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
（2）常用Байду номын сангаас法：稀释涂布平板法。
葡萄糖
10.0g
不缺能乏分氮解源尿的素培，养缺基乏—氮—源分而离不固能氮生微长生物
尿素琼脂
1.0g 15.0g
发在育无繁氧殖条，件而下受的到普抑通制培，养所基以—用—此分培离厌氧型将和上兼述性物质厌溶氧解型后微，用生蒸物馏水
养基就能够选择出分解尿素的微生物。
定容到1000mL。
例：下列能筛选出分解尿素的细菌的培养基是( A )
但A同学认为自己选用土壤样品不同导致结果不同，但是A同学没有设计对照，拿不出让同学信服的证据。你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响因素吗？

选修一 2-2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

选修一2-2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.选择作用。

2.用稀释涂布平板法对微生物进行计数。

一、研究思路1.筛选菌株尿素是一种重要的农业___肥,但不能直接被农作物吸收利用,只有当土壤中的细菌将尿素分解成___之后,才能被植物利用。

土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为它们能合成______。

反应式为：___________________________________________。

(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于___________生长的条件(包括营养、_____、pH等),同时_____或_____其他微生物生长。

(2)选择培养基:在微生物学中,将允许__________的微生物生长,同时_____或_____其他种类微生物生长的培养基,称做____________。

思考1：分解尿素的细菌的培养基配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？答：碳源：______________氮源：___________。

思考2：此配方有什么特点？该培养基对微生物是否有选择作用？如果有，是如何进行选择的？答：特点：____________。

_______，_________________________________________________。

(3)选择培养基的类型：①利用培养基的特定化学成分分离特定微生物。

②通过某些特殊环境分离微生物。

③通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的。

④依据某些微生物对某种物质的抗性。

【辨一辨：下列例子属于哪一种类型的选择培养基？】①当尿素是唯一氮源时,可抑制不能利用尿素的微生物生长,使能够利用尿素的微生物生存,从而分离出能分解尿素的微生物。

利用培养基的_____________________分离特定微生物。

②在高温环境中可分离得到耐高温的微生物,其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。

通过某些____________________分离微生物。

2.2土壤中分解尿素的细菌的分离

尿素是一种重要的氮肥，农作物（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和CO2 ，这是因为细菌能合成脲酶。
尿素分子的立体结构
CO(NH2)2+H2O
CO2+NH3
（一）筛选菌株
水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高温的Taq DNA聚合酶美国微生物学科布鲁克（T.Brock) 1966年发现耐热细菌
一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。
〖思考3〗土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？土壤中营养物质含量丰富，环境条件适宜等。〖思考4〗在研究未知微生物时务必规范操作，以防被致病微生物感染，实验后一定要洗手。
[一]无菌操作
筛选原理
科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH 等），同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。
鉴定原理：
在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性增强，PH 升高。因此，我们可以通过检测培养基 pH 变化来判断该化学反应是否发生。
CO(NH2)2+H2O
CO2+NH3
练习：
1．从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有 A （1）尿素（2）有机氮化合物（3）无机盐（4）有机碳化合物（5）水（6）无机碳化合物 A （1）（3）（4）（5） B （2）（3）（4）（5） C （1）（3）（5）（6） D （2）（3）（5）（6）

人教版高中生物选修一专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学案含解析

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

2．统计菌落数目(1)活菌计数法：常用稀释涂布平板法。

①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C ÷V )×M 。

C ：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。

V ：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。

M ：代表稀释倍数。

③统计方法：为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取其平均值。

.1.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。

2．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

3．测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。

稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目低。

4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。

5．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，依据是否变红进行判断。

(2)显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。

3．设置对照(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。

(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

二、实验设计1．土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。

高三生物一轮复习 2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

【目标导航】 1.能利用选择培养基分离细菌。

2.能运用稀释涂布平板法测定土壤中分解尿素细菌的数量。

一、研究思路1．课题背景尿素是一种重要的农业氮肥，但农作物不能(能、不能)直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素在脲酶的催化下分解为氨之后，才能被植物吸收。

2．筛选菌株微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长，如可从热泉中将Taq细菌筛选出来。

3．统计菌落数目(1)测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。

(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目①为了保证结果准确，一般设置多于3个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均数。

②统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

4．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

二、实验设计1．操作步骤：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察。

2．土壤取样一般要铲去表层土，因为绝大多数细菌分布于距地表约3～8__cm的土壤层。

3．样品的稀释：不同的微生物需要稀释的倍数不同，请填写下表：4.微生物的培养与观察微生物的生长受温度的影响，菌落的数目和特征是观察的主要内容。

三、操作提示1．无菌操作：取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌。

称取土样要在火焰旁进行。

稀释样品要在火焰旁操作。

2．做好标记：要对平板和试管进行标记，尤其进行系列稀释时要按稀释度递增顺序将试管排列成行。

四、课题延伸分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，使培养基的碱性增强。

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可以初步鉴定该种细菌能够分解尿素。

判断正误：(1)选择培养基只允许特定的微生物生长，而抑制或阻止其他微生物的生长()(2)对活菌进行计数时，所做的平板越大越好()(3)设置对照实验可以排除一些非测试因素对实验结果的影响()(4)从土壤中取样时，土层越浅越好()(5)来自土壤的微生物稀释倍数越大越好()答案(1)√(2)×(3)√(4)×(5)×一、选择培养基相关问题分析1．概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数在我们生活的地球上，土壤是一个极其复杂而又充满生机的生态系统。

在这个生态系统中，存在着各种各样的微生物，它们在物质循环和能量流动中发挥着至关重要的作用。

其中，分解尿素的细菌就是一类非常特殊且具有重要功能的微生物。

尿素是一种常见的含氮化合物，广泛应用于农业生产中作为氮肥。

然而，植物并不能直接吸收和利用尿素，需要经过分解尿素的细菌将其转化为氨等植物能够吸收的形式。

因此，研究土壤中分解尿素的细菌对于提高氮肥的利用率、减少环境污染以及深入了解土壤生态系统的功能都具有重要意义。

要分离和计数土壤中分解尿素的细菌，首先需要采集合适的土壤样本。

我们通常会选择那些长期施用尿素肥料的农田、花园或者草地的土壤。

在采样时，需要使用无菌的工具，如无菌铲或者无菌勺，从不同的地点和深度采集土壤，以确保样本的代表性和多样性。

将采集到的土壤放入无菌的塑料袋中，并尽快带回实验室进行处理。

回到实验室后，第一步是制备培养基。

用于分离分解尿素的细菌的培养基通常是选择培养基，其中含有尿素作为唯一的氮源。

除此之外，还需要添加碳源（如葡萄糖）、无机盐、生长因子等营养物质，以及琼脂作为凝固剂。

在制备培养基的过程中，要严格遵守无菌操作，防止杂菌的污染。

接下来，将土壤样本进行稀释。

这是一个关键的步骤，目的是将土壤中的微生物分散开来，以便能够在培养基上形成单个的菌落。

我们可以使用无菌水对土壤样本进行一系列的梯度稀释，比如 10 倍、100 倍、1000 倍等。

稀释的程度要根据土壤中微生物的数量和实验的要求来确定。

然后，将稀释后的土壤溶液涂布在制备好的培养基上。

使用无菌的涂布棒，将溶液均匀地涂布在培养基的表面。

涂布完成后，将培养基倒置放入恒温培养箱中进行培养。

培养的温度和时间要根据所分离的细菌的特性来确定，一般来说，温度在 30℃至 37℃之间，培养时间为2 至 3 天。

在培养的过程中，分解尿素的细菌会在培养基上生长并形成菌落。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、理论基础1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。

例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

2．统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。

此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。

3．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。

例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。

二、实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。

应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。

2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基，将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

3．微生物的与观察将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液，转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102…… 依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。

每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。