激光显微切割技术切割棉花单条染色体的研究
He—Ne激光对棉花生长发育,产量和品质影响的研究
He—Ne激光对棉花生长发育,产量和品质影响的研究
许玉璋;傅志东
【期刊名称】《陕西农业科学》
【年(卷),期】1990(000)001
【摘要】用He^(-Ne)激光15111W60′和2mW10′处理可使棉花提早吐絮,缩短生育期10天左右。
激光处理棉子有降低株高、减少脱落、增加单抹结铃数的作用,以2mw10′和15mw60′为好。
3种激光处理对衣分和铃重均没有明显的影响,而对纤维品质的影响与激光处理的方法、强度和时间有关。
15mw30′扩散处理可提高纤维的强度、细度、整齐度、长度和断裂长度,而2mw10′点处理对纤维的主要经济性状有降低的趋势。
【总页数】3页(P15-17)
【作者】许玉璋;傅志东
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S562.01
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Ahmad;SALEEM Muhammad Farrukh;王龙昌;薛兰兰;SHAHID Muhammad Qasim;ALI Shafaqat
5.棉花萎蔫综合症对棉花生长发育及产量品质的影响观察 [J], 许爱玲;吴霞;马冬菊;吴秀峰;沈红星;解广田;张林水;李燕娥
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《染色体显微操作》
纳米微操作机器人在10×10微米的基片上刻出的字样 精选ppt
3、扩增产物的原位杂交分析
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• 利用荧光原位杂交技术可直接将某个区 段的DNA直接定位在染色体上，进行 PCR产物的鉴定。同时还可以将某个区 段DNA定位到相关的其它植物染色体上， 进行染色体“一对一”的杂交和进行单 条染色体之间的比较作图研究。
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• 优缺点
• 除具有激光微切割的优点之外，还在一种环境 中操作，避免了污染；
• 激光波长为337nm，远离DNA最大吸收波长 260nm，无热效应产生，不会损坏材料；样 品可长时间保存。
• 但仪器及薄膜价格极为昂贵。
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• PALM激光显微切割系统 • 由德国PALM公司研发的一套高级精确的实验
• 单条染色体DNA模板含量较低，为扩增增 添了不稳定因素
• 染色体标本制备及分离过程中可能会对 DNA造成损伤
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Thank you!
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结束放映
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1.玻璃针的制备
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玻璃针拉制器将玻璃精管选p拉pt 成合适粗细的玻璃针
利用弯针器将玻璃精选针pp弯t 成合适的弯度
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2.染色体的微切与分离
①全细胞染色体的分离 ②特定单条染色体的分离 ③染色体特定区的显微切割
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① 水稻基因组全细胞染色体的分离
• 1983年至1986年，美国的两个实验室用流式 细胞分类器和分子生物学染色体。
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• 优缺点 • 使实验过程机械化，可用于处理大批染色体。工操作法的主要差别在于：用激光束代 替玻璃针，将染色体标本上不需要的片段剔除， 然后将剩余染色体片段消化、扩增。Fukui等利 用此法成功地切割了植物染色体片段，但是该方 法对设备要求较高，激光切割区域对DNA分子 也有损伤。
激光辅助显微切割技术分离植物细胞研究进展
激光辅助显微切割技术分离植物细胞研究进展摘要LAM是一种强大的工具，可用于从获取的生物标本中分离特定的组织、细胞型甚至器官，这有益于RNA、DNA、蛋白质的提取。
分析该技术的原理及在植物研究中的重要性和优越性，介绍了LAM的工作原理及发展概况，并对其发展前景进行了展望。
关键词LAM；激光辅助显微切割；分离植物细胞植物体是由彼此相互联系的多种类型细胞所构成，正是由于这种结构上的复杂性，目前多数的研究都是通过分析混合组织样品来获得数据。
虽然这些研究提供了一些有用的信息，但是有时对某些结果却不能做出很好的解释，尤其是某一种类型细胞占组织的主要部分，而研究对象只是暂时存在其中或细胞数量相对较少的时候，具有很大的局限性。
因此，为了获得特定类型细胞的准确信息，分离出同质的目标细胞就显得非常重要。
1激光辅助显微切割（LAM）的优越性已报道过的从植物中分离同质细胞样品的方法至少有3种。
一种是从其中分离原生质体，这种方法能够获得很多同一种类型的细胞，但可能导致基因或蛋白表达发生未知的变化。
另一种是用毛细管从植物活体中获得植物细胞组，所获得的细胞样品虽然能进行部分代谢、基因表达和蛋白表达的分析，但数量上的限制使得应用这种方法很难采集到足够数量的单纯种类细胞样品来进行全局分析（尤其对RNA和蛋白质）。
此外，为了保持细胞特定的生理状态，样品可以在固定、包埋、切片后，从冰冻或者石蜡包埋的组织中分离，分离技术包括直接手工分离和激光显微切割分离。
激光捕获显微切割技术与以上其他方法相比，能够精确、快捷地获得大量的特定种类细胞样品，显现出极大的优越性。
LAM是一种强大的工具，可用于从获取的生物标本中分离特定的组织、细胞型甚至器官，这有益于RNA、DNA、蛋白质的提取。
LAM在生物研究的许多领域已经是一个常规技术，现在也已经成功用于植物组织的研究。
2LAM的基础原理及发展自1996年激光捕获显微切割技术首次采用以来，已经有多种激光捕获显微切割系统得到开发，文献报道中经常使用的是Arcturus Engineering公司的PixCell II系统和P.A.L.M.Microlaser Technologies公司的PALM Microbeam系统。
染色体核型分析及染色体显微分离技术研究进展1.
生物技术通报ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＢＵＬＬＥＴＩＮ・技术与方法・２００８年第４期收稿日期：２００７－０１－０７作者简介：闫素丽（１９８２－），女，汉族，在读硕士研究生，研究方向：作物遗传育种；Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｓｕｌｉ２００５＠１２６．ｃｏｍ通讯作者：安玉麟（１９５４－），男，研究员，硕士生导师；Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｋｙａｎｙｕｌｉｎ＠１６３．ｃｏｍ染色体核型是指某一物种所特有的一组染色体或一套染色体的形态特征。
核型分析是对生物细胞核内全部染色体的形态特征进行分析，是物种分类的基本依据。
以核型为基础的染色体微分离、微克隆技术是指在显微镜下对特定染色体进行显微分离或显微切割，随后进行ＰＣＲ扩增、ＤＮＡ鉴定和克隆，进而可以快速的建立相应的ＤＮＡ文库、筛选有用探针、构建特定区域分子连锁图谱等。
目前该技术已经在动植物遗传与进化研究中显示出了独特作用。
对近年来核型分析和染色体显微切割技术的方法进行了综述，并简要介绍了其应用和前景。
１核型分析核型是根据细胞分裂中期浓缩的染色体形态结构建立的，核型模式图通常是将显微拍摄的染色体照片剪贴、整理、绘制而成。
不同的物种具有不同的核型，因此核型是区别物种的基本遗传学依据，也对分子生物学的研究具有指导意义。
１．１染色体标本的制作过程１．１．１取材核型分析多以初生根的根尖为材料，因为根尖易培养、不受季节影响，且细胞分裂旺盛、集中、容易辨别。
李懋学［１］认为凡能进行细胞分裂的植物组织或单个细胞都可以作为取材的对象。
植物分生组织的生长具有一定周期性，这就限制了取材时间，一般认为取材应选在细胞分裂中期最为合适，研究表明，植物细胞分裂中期高峰一般出现在上午８：３０￣１１：３０，但也有植物分裂中期的时间段不只一个，如阿拉伯茶［２］１ｄ至少出现２个分裂高峰，因此，取材时要根据材料选择合适的时间。
１．１．２预处理核型分析的关键是预处理，合理的预处理能得到分裂相高，形态好的中期染色体。
棉花染色体制片三种方法比较研究
棉花染色体制片三种方法比较研究
詹少华;刘玉潭;蔡永萍;林毅
【期刊名称】《皖西学院学报》
【年(卷),期】2003(019)005
【摘要】对棉花染色体三种制片方法进行了比较研究,结果表明:涂片法方便快速,一张载玻片有较多可观察的细胞,但容易发生染色体丢失,因此不适合染色体计数和组型分析.滴片法制备的染色体标本,染色体的清晰度和分散度都较理想,但是如果酶解法,成本较高,如果用盐酸水解,技术难度比压片法更大.压片法制备的染色体标本,完全符合计数和组型分析的要求,用盐酸水解的难度要求相对较小,因此是棉花染体制备最为实用的方法.本文同时对每一种制片方法关键技术进行了探讨.
【总页数】3页(P69-71)
【作者】詹少华;刘玉潭;蔡永萍;林毅
【作者单位】皖西学院,生物系,安徽,六安,237012;安徽农业大学,生命科学学院,安徽,合肥,230036;安徽农业大学,生命科学学院,安徽,合肥,230036;安徽农业大学,生命科学学院,安徽,合肥,230036
【正文语种】中文
【中图分类】Q3-3
【相关文献】
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2.大麻染色体制片技术的比较研究 [J], 许艳萍;杨明;郭孟璧;张庆滢;梁淑敏;陈璇;郭
鸿彦
3.棉花组织培养染色体制片方法的探讨及其染色体稳定性研究 [J], 张宝红;丰嵘
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5.水稻染色体制片技术的比较研究 [J], 谢国生;马平福;祝虹;徐海力;蔡得田
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激光显微切割技术切割棉花单条染色体的研究
进而表明所切割和收集的单条染色体的DNA来自亚洲棉基 因组DNA.DOP-PCR微量扩，经过琼脂糖电泳和Southern杂 交的验证，充
分表明了利用SLuCUT全自动激光显微切割系统能够简单 快速高效地完成植物染色体的微切割、微分离和微收集。 3讨论SLuCUT全自动激光
显微切割系统（以下简称切割系统）具有操作简单、快 速准确、轻污染等特点，主要表现在选择切割路径方便， 该切割系统可通过鼠标勾画各种不规则
的形状或者利用多种绘图图形来选择切割目标，因此可 实现任意勾画切割目标，而且所切割的样本（目标染色 体）不会被降解。该切割系统的激光直径
小于1激光能量、聚焦和切割速度由软件控制，采用的是 冷激光切割，激光不与分离样本直接接触，不会因热效 应而对DNA、RNA和蛋白等造成降
解并且通过有黏性的收集管盖黏附分离下来的膜和样本 提取过程不需要激光轰击，所以对样本没有损伤，且污 染较轻。整个操作过程，从切割系统载物
台的移动、切割路径的任意勾画、切割长度的测量、聚 焦、激光能量、切割速度，到拍照、保存、收集等都是 通过简便易用的UVCUT软件来完成，
所以操作简单易掌握；但镜检细胞不方便，因为该切割 系统是通过移动鼠标来控制载物台上下左右移动，移动 鼠标远不如普通显微镜的旋转螺钮控制载
物台移动方便。因此，为节省时间必须先在普通显微镜 下把镜检到的理想细胞做好标记，以便切割时查找。单 条染色体分离和扩使得部分遗传研究从全
一种演示非闭合导体中传导感应电流的实验，加深对感 应电流的理解。
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二极管的发光程度来判断感应电流的强弱。通过这个实 验，学生可以直观地观察到感应电流的形成和传输放大 的过程，以及天线不同的放置状态对感应
SLuCUT—A全自动激光显微切割系统植物染色体切割的研究
进行染色体切割 、 分离和收集研究 ， 但这三种仪器设 备操作 复杂 、 技术难度大 、 污染较重 、 分离 的 目标染 被
植物染色体微切割、微收集及微扩增技术应用
第29卷第7期2010年7月实验室研究与探索R ESE A R C H A N D E X P LO R A TI O N I N L A B O R A T O R YV01．29N o．7J ul，2010植物染色体微切割、微收集及微扩增技术应用高居荣，崔法，封德顺，李兴锋，王洪刚(山东农业大学农学院，国家小麦改良中心泰安分中心，作物生物学国家重点实验室，山东泰安271018)摘要：为使染色体微切割、微收集、微扩增技术在植物精细遗传图谱及物理图谱构建中有效应用，利用S LuCU T全自动激光显微切割系统对普通小麦“中国春”和中间燕麦草染色体进行了微切割、微收集和微克隆研究。
结果表明，SL uCU T．A全自动激光显微切割系统使植物染色体的微切割、微分离和微收集技术操作简单、快速准确、污染轻、样本不被降解等；D O P—PC R微量扩增条件适于普通小麦和中间燕麦草微量染色体的高效扩增，通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可以快速、准确地分析判断微扩增产物的来源。
关键词：染色体；微切割；微收集；微克隆中图分类号：Q78l文献标识码：A文章编号：1006—7167(2010)07—001l一03T e chni que A ppl i ca t i on of Pl a nt C hr om os om e M i cr odi s sec t i on，M i cr oc el l ec t i on a nd M i cr ocl oni ngG A O Ju—r ong，C U I Fa，F E N G D e—s h un，L I X i ng-f eng，，W A N G l t ong—ga ng(A gr onom y C ol l e ge of Shand ong A gr i cul t ur a l U ni vers i t y，Sh andon g Tai’an Sub cent r e of N a t i ona l W hea tI m p r ovem en t C ent r e，St a t e K e y Labor a t ory of C r op B i ol ogy。
显微切片论文
激光显微切割技术及其在植物细胞研究中的应用激光显微切割(Laser mierodisseetion，LM或LMD)是显微观察和分子生物学研究之间的桥梁。
它将在显微镜下观察到的目标细胞直接用激光取出，从而与旁邻的其他细胞分开，并且可以将目标细胞放入试管中进行分子生物学的分析研究。
从激光类型和技术原理上分，目前主要存在基于近红外激光(810nm波长)的激光捕获显微切割和基于紫外激光(337~355nm波长)的激光显微切割两种。
一激光显微切割技术1 发展历史利用激光分离细胞的研究开始得较早[1]，但是直到1996年基于近红外激光熔膜原理的激光捕获显微切割(laser capture mierodissection，LCM)成功应用于动物细胞的切割和DNA、RNA分析[2]后，这一技术才在生物研究中迅速发展并被广泛应用。
而在植物研究中的成功应用，则又滞后了6年[3-4]。
2003~2005年间，激光显微切割技术在植物研究中的应用逐渐发展，越来越受重视[5-7]。
2 LM的基础原理激光捕获显微切割技术(LCM)是在组织切片上方悬着机械臂控制的收集管,收集管的塑料帽表面有一层乙烯乙酸乙烯酯(Ethylene Vinyl Acetate,EV A)的热塑膜,在显微镜下选择好目标细胞后,发射低能红外激光脉冲,瞬间升温使EV A膜融化与目标细胞黏合再迅速凝固。
接着目标细胞就粘附在塑料帽表面的EV A膜上并随着塑料帽一起移走。
将塑料帽盖在装有缓冲液的离心管上,分离的细胞就转移至离心管中,从而可以分析出目标细胞的分子生物学特征,用于进行后续研究[2, 8]。
激光显微切割技术(LMD)需要将标本切片装片在薄膜载玻片或者薄膜覆盖的玻璃载玻片上[9]。
脉冲紫外激光(UV-A)通过物镜聚焦在切片上,沿着目标区域的边缘移动切割,使选择区域内的细胞脱离下来且周围组织完好[10]。
德国PALM公司出售的LMD系统采用的是倒置显微镜,切割后目标细胞群由激光微切割弹射系统(Laser Microdissection and Pressure Catapulting, LMPC)弹进放在样品之上的微型管中[11]。
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泳，然后进行Southern杂交，其Southern杂交图谱见。 Southern杂交图谱由可见，在311泳道和阳性对照12泳道 （亚洲
棉基因组DNA）中，亚洲棉单条染色体DNA和亚洲棉基因 组DNA的微扩产物分别与亚洲棉基因组DNA探针产生了较 强的杂交信号，而阴性对照
泳道1（无菌水）中却未观察到与亚洲棉基因组DNA探针 的杂交信号，由此说明所切割和收集的单条染色体DNA与 亚洲棉基因组DNA有同源性，
泳道1（阴性对照水）中未观察到DNA产物；由（b）可 见，在泳道211和第12泳道中均有DNA产物可见，而泳道 1中未观察到DNA产物，
由此表明，在211泳道中所观察到的DNA产物有可能是来 自所切割和收集的亚洲棉单条染色体DNA，同时也验证了 DOP-PCR微量扩条件适
于亚洲棉微量DNA扩。2.3单条染色体扩增产物的验证对 亚洲棉单条染色体DNA、亚洲棉基因组DNA和无菌水的第 2次微扩产物进行琼脂糖电
欲切割的目标染色体未被切割；（b）箭头所示为切割路 径，表明目标染色体己经被切割分离；（c）箭头所示为 目标染色体被切割收集后留下的空白
处，表明目标染色体己经被黏性Eppen-光显微切割系统 切割植物染色体时，能清楚地判断所切割的目标染色体 是否被切割、分离和收集。2.2
单条染色体DNA的DOP-PCR微量扩增对所收集的亚洲棉单 条染色体、亚洲棉基因组dof管盖收集。由图枳可，利用 SLuCUT全自动sh
的形状或者利用多种绘图图形来选择切割目标，因此可 实现任意勾画切割目标，而且所切割的样本（目标染色 体）不会被降解。该切割系统的激光直径
小于1激光能量、聚焦和切割速度由软件控制，采用的是 冷激光切割，激光不与分离样本直接接触，不会因热效 应而对DNA、RNA和蛋白等造成降
解并且通过有黏性的收集管盖黏附分离下来的膜和样本 提取过程不需要激光轰击，所以对样本没有损伤，且污 染较轻。整个操作过程，从切割系统载物
in纪N>AS和无菌水丨ts首先进行第轮/DOFPCR微扩，利用 第1轮DOP-PCR扩增产物，再进行第2轮DOP-琼脂糖电泳， 其电泳
图谱见。PCR微扩增，用第1轮和第2轮微扩增产物分别进 行DOI-PCR微扩增产物电泳图谱1通过对1亚洲棉单条染色 体的切割1分1离荆收
集1ishingHouse.由（a）可见，在2―11泳道（亚洲棉单条 染色体）中，多数泳道和第12泳道（阳性对照）均可见 DNA产物，而
台的移动、切割路径的任意勾画、切割长度的测量、聚 焦、激光能量、切割速度，到拍照、保存、收集等都是 通过简便易用的UVCUT软件来完成，
所以操作简单易掌握；但镜检细胞不方便，因为该切割 系统是通过移动鼠标来控制载物台上下左右移动，移动 鼠标远不如普通显微镜的旋转螺钮控制载
物台移动方便。因此，为节省时间必须先在普通显微镜 下把镜检到的理想细胞做好标记，以便切割时查找。单 条染色体分离和扩使得部分遗传研究从全自诞生以来，一直受到世界范围 内的广泛关注。因为可以根据效得多，所以该切割系统将成为基因 定位、基因克隆的有利武器，在细胞遗传
学及分子生物3，以手机作为发射机，接收天线为单导线， 由天线接收到的感应电流经放大器放大后驱动二极管发 光。当手机通话或挂断的时候，通过
二极管的发光程度来判断感应电流的强弱。通过这个实 验，学生可以直观地观察到感应电流的形成和传输放大 的过程，以及天线不同的放置状态对感应
电流强度的影响。实验原理结束语本文从电场是导体传 输电流的条件出发，分析了直流电流只能在闭合回路中 传输的原因是为了维持恒定的电场；感应
电流可以在任意形状的导体结构中传输，只要导体内部 有时变电常进一步对直流电流和感应电流做了比较，总 结了两者的相同点和不同点。最后提出了
进而表明所切割和收集的单条染色体的DNA来自亚洲棉基 因组DNA.DOP-PCR微量扩，经过琼脂糖电泳和Southern杂 交的验证，充
分表明了利用SLuCUT全自动激光显微切割系统能够简单 快速高效地完成植物染色体的微切割、微分离和微收集。 3讨论SLuCUT全自动激光
显微切割系统（以下简称切割系统）具有操作简单、快 速准确、轻污染等特点，主要表现在选择切割路径方便， 该切割系统可通过鼠标勾画各种不规则
一种演示非闭合导体中传导感应电流的实验，加深对感 应电流的理解。
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