多环芳烃对体外培养小鼠卵巢中卵泡及其凋亡的影响
低环多环芳烃对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性机制-细胞生物学论文-生物学论文
低环多环芳烃对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性机制-细胞生物学论文-生物学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——多环芳烃(Polycyclic aromatic hydrocarbons,简称PAHs) 是存在于环境中且含有两个以上苯环的碳氢化合物,包括菲、芘、苯并芘(BaP) 等150 余种. 近年来,人类活动的加剧,特别是煤、石油等化石燃料和木材的不完全燃烧,破坏了其在环境中原有的平衡,使环境中PAHs 大量增加. 作为一种典型的持久性有机污染物,PAHs 类化合物已在世界各地被检出,此外PAHs 类化合物还具有强烈的致癌作用、致畸作用和致突变作用,可以通过呼吸道、消化道和皮肤进入人体,是最早发现也是数量最多的致癌物之一.由于PAHs 独特的性质,其也具有生物蓄积性和半挥发性,因此是大气污染监测的重要目标之一.肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophage,简称AM) 是存在于肺泡隔中较大的圆形或卵圆形巨噬细胞,可吞噬、清除外来的尘粒或病原,参与肺的防御和免疫,还可产生大量的生物活性物质,维持肺和机体的正常生理活动.菲是一种典型的三环芳香烃,易挥发,很多条件下以气态存在,可经呼吸系统进入人体,对动物有致癌作用.目前关于菲对植物生长发育的影响有一些报道,研究结果表明氧化损伤为菲毒性的可能机制,而关于菲对动物毒性作用的报道并不多.本文以菲为研究对象,测定了染毒后细胞中谷胱甘肽(Glutathione,GSH) 、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD) 和丙二醛(Malondialdehyde,MDA) 含量,观察了线粒体融合/ 状态,以此探讨低环多环芳烃对大鼠AM 的毒性机制.1、材料和方法1.1 仪器和主要试剂CO2培养箱(Thermo Forma 公司) 、低温高速离心机(Thermo Forma 公司) 、TU-1810 紫外可见分光光度计( 普析通用仪器公司) 、HZQ-F100 振荡培养箱、酶标仪、激光共聚焦显微镜.RPMI1 0 培养液、小牛血清、MDA 试剂盒、SOD 试剂盒、GSH 试剂盒、二甲基亚砜(DMSO) 、0.4%的台盼蓝、四甲基偶氮唑盐(MTT) 、考马斯亮蓝G-250、0.18%胰蛋白酶、菲母液(5 mgmL-1甲醇) 、线粒体荧光试剂(Mito-Tracker Green) .1.2 实验方法1.2.1 大鼠AM 的提取和培养每次实验选体重220250 g 的雄性、清洁Wistar 大鼠4 只,腹腔注射1%戊巴比妥那 1.0 mL,腹主动脉放血致死,打开胸腔,用灭菌的磷酸盐缓冲液(PBS,pH = 7.0) 灌洗双肺,灌洗液(BLAF) 于3000 rmin-1、4 ℃离心10 min,弃上清液,沉淀用含10%小牛血清的RPMI1 0 培养液洗涤,台盼蓝拒染法计数,稀释(21063106个mL-1) ,将细胞稀释液按每皿3 mL 分装于细胞培养皿中,置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养2 h,小心弃原培养液,用PBS 轻轻洗涤12 次,去除非贴壁的细胞.用不同浓度的菲(20、40、60、80、100 gmL-1) 染毒,同时设对照组(只加培养液) .染毒 4 h,去培养液,以PBS 清洗后用0.18%的胰蛋白酶消化细胞,30 s 后弃消化液,用含小牛血清的RPMI1 0 培养液终止消化,轻轻吹打贴壁的细胞,将悬液转移到10 mL 离心管中,于3000 rmin-1、4 ℃离心10 min,用PBS 清洗两次,之后加少许PBS 冻存,备用.1.2.2 细胞毒性的测定采用MTT 分析法.活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为溶解于二甲基亚砜(DMSO) 的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan) ,用酶标仪在490 nm 波长处测其吸收值,可间接反映活细胞数量.将稀释好的细胞悬液(12105个mL-1) 按每孔100 L 加到96 孔培养板中,贴壁2 h 后,用不同浓度的含菲培养液100 L 染毒,同时设一对照组(只加培养液) 、空白组(只加甲醇) 和一标准组(只加MTT 和DMSO) ,每个浓度设 5 个平行,染毒 4 h 后,去原培养液,每孔加100 L RPMI 1 0 培养液和20 L MTT(5 mgmL-1) 继续培养,4 h 后去上清液,每孔加150 L DMSO,振荡10 min,将液体平行转移到另一96 孔板中,在酶标仪上测OD 值,计算细胞的相对存活率.1.2.3 AM 线粒体融合/ 的观察观察线粒体融合/ 所用的荧光试剂为Mito-Tracker Green.不同浓度菲染毒4 h 后,用0.18%的胰酶消化细胞,30 s 后,用含小牛血清的 1 0 培养液终止消化,终止液转移到10 mL 离心管中,3000 rmin-1、4 ℃ 离心10 min,去上清液,沉淀加入37 ℃ 预温育的染色工作液1 mL,浓度为25 nmolL-1,孵育30 min 后,3000 rmin-1、4 ℃离心10 min,弃上清,重新加入培养液500 L,用移液器吹打均匀,取一滴做标片,在激光共聚焦显微镜下观察AM 线粒体融合/ 的状态.1.2.4 生理指标的测定蛋白含量测定: 以牛血清白蛋白为标准溶液(1 mgmL-1) ,作蛋白含量0、10、20、30、40、50、60 g 的标准曲线,采用考马斯亮蓝法,于595 nm 波长下测其吸光值,通过标准曲线测得样品中的蛋白含量.SOD、GSH 及MDA 含量用试剂盒测定(购自南京建成公司) ,具体方法参见试剂盒说明书.1.2.5 统计分析实验数据以平均值标准误差(MeanSD) 表示,用Excel 软件对组间差异进行统计分析,P0.05 表示差异显著,用Origin 8.0 完成制图与分析.2、结果与讨论2.1 菲的细胞毒性AM 是重要的吞噬细胞,可以清除肺中的坏疽碎片及尘埃等,当病原体被AM 吞噬后,会与溶酶体融合并被消化掉,而AM 也将死于消化过程中产生的混合物.如图 1 所示,随染毒浓度的增加,AM 成活率呈下降趋势,低浓度(20 gmL-1) 组相对于较高浓度组(80 gmL-1、100 gmL-1) 而言,产生的混合物较少,AM 成活率下降较缓,当浓度大于40 gmL-1时,染毒组与对照组相比差异达显著或极显著水平(P0.05 或P0.01) .图1 空白为只加甲醇时的细胞成活率(以最大染毒浓度组的甲醇体积计算) ,与对照组相比,无显著性差异.2.2 不同浓度菲对AM SOD 活力的影响SOD 是保护细胞免受自由基侵袭的第一道屏障,能够催化O-2与H2O2反应生成O2.SOD 作为重要的抗氧化酶,广泛存在于生物体内,SOD 能及时修复受损细胞,复原自由基对细胞造成的伤害,但当有毒有害物质的浓度过高,产生的O2-过多,超出SOD 的清理能力时,SOD 活力就会减弱.如图 2 所示,随着染毒剂量的增加,SOD 活力呈下降趋势,说明细胞的抗氧化能力减弱.在浓度大于80 gmL-1时,与对照组相比,差异极显著(P0.01) .2.3 不同浓度菲对AM GSH 含量的影响GSH 也是一种重要的抗氧化酶,可以清除体内的O2-、H2O2、LOOH. 此外,GSH 还可与一些毒性分子及其代谢物结合,降低其毒性.当有毒有害物质增加时,O2-增加,GSH 的清理能力减弱,含量下降.如图 3 所示,当染毒浓度大于40 gmL-1时,随着染毒浓度的升高,GSH 含量逐渐降低,且与对照相比,差异显著(P0.05 或P0.01) ,但在染毒浓度为20 gmL-1时,GSH 含量略有上升,但与对照相比无显著差异.其可能原因为低浓度处理时,细胞内的自由基增加,细胞中GSH 含量上升以及时清理过量的自由基,是细胞的一种应激反应,随着染毒浓度的升高,自由基的产生远远超出了GSH 的清除能力,导致GSH 含量的降低.2.4 不同浓度菲对AM MDA 含量的影响MDA 是脂质过氧化的产物,通常MDA 的含量反映了脂质过氧化水平.当生物体内自由基过量时,MDA 含量就会增加,细胞受损害程度增强.如图 4 所示,不同浓度染毒使得AM 中MDA 含量增加,且与其他指标相比在较低浓度20 gmL-1时与对照相比差异就达显著水平(P0.05) ,高浓度处理时,与对照相比差异极显著(P0.01) .2.5 菲对大鼠AM 线粒体融合/ 的影响正常的细胞中,线粒体的融合与是协同进行的,两者保持动态平衡,这种平衡对维持线粒体的正常形态、分布和功能十分重要.线粒体融合/ 平衡的紊乱将导致线粒体功能障碍,表现为ATP 生成减少、氧自由基(ROS) 产生增多等,同时还将造成细胞功能损害和疾病的发生. 除此之外,线粒体融合和的异常还能导致巨型线粒体(megamitochondria) 的出现.由图5 可以看出,不同浓度的菲处理,对AM 线粒体的融合/ 造成了一定的影响.多、体积增大.菲进入细胞后,溶酶体需要不断地将其消化掉,这就需要大量的能量,不断的融合能使线粒体体积变大,基质增加,释放大量的能量,同时菲的进入可能引起线粒体相关基因(如Drp) 损伤,导致线粒体减少,在胞体内积聚,这就导致了巨型线粒体的出现,且随着菲浓度的增加,巨型线粒体的数目越来越多,体积越来越大.3、结论本研究采用体外细胞培养及染毒方法,选择典型的低环多环芳烃菲为代表,以肺泡巨噬细胞为研究对象,研究了菲对肺泡巨噬细胞的生物学毒性,旨在阐明多环芳烃对呼吸系统的毒理机制,研究发现:(1) 不同浓度的菲造成细胞成活率的下降,特别是在高浓度处理下,细胞成活率急剧降低,说明了菲对AM 具有细胞毒性.(2) 菲处理后,AM 中SOD、GSH 含量都有所下降,而MDA 含量在低浓度下就有所上升,且均呈现一定的剂量-效应关系,揭示过量自由基的生成并对细胞造成氧化损伤是菲对AM 毒性的一条可能途径.(3) 正常细胞的线粒体处于不断的/融合当中,始终保持平衡,而菲处理后,细胞线粒体融合/ 异常,出现了大量的巨型线粒体,导致细胞正常功能的损害,这也是菲细胞毒性的可能机制.参考文献:[1] 段晓丽,陶澍,徐东群,等. 多环芳烃污染的人体暴露和健康风险评价方法[M]. : 中国环境科学出版社,2011: 2．[2] 卢晓丹,高彦征,凌婉婷,等.多环芳烃对黑麦草体内过氧化物酶和多酚氧化酶的影响[J].农业环境科学学报,2008,27(5) :1969-1973.。
多环芳烃的微生物降解机制研究进展
多环芳烃的微生物降解机制研究进展王涛;蓝慧;田云;卢向阳【摘要】多环芳烃是环境中最常见且最难降解的有机污染物之一。
通过微生物降解使环境中的多环芳烃低毒化或无毒化是当今环境修复的研究热点之一。
以萘和菲为研究对象，论述了多环芳烃的微生物降解机制，并阐述了生命组学新技术在多环芳烃降解机制研究中的应用，为深入探讨多环芳烃的微生物降解及转化机制奠定了理论基础。
%Polycyclic aromatic hydrocarbons(PAHs)are one of the common and the most refractory organic pollutants in the environment.Nowadays,low-toxicity or non-toxicity of PAHs by microbial degradation is one of the research highlights in the field of environmental remediation.In this paper,using naphthalene and phe-nanthrene as example,the microbial degradation mechanisms of PAHs are reviewed,and the application of“omics”technology in life science for research of microbial degradation of PAHs is summarized.The review lays a certain theoretical foundation for further exploring the microbial degradation and conversion mechanism for PAHs.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2016(033)002【总页数】7页(P8-14)【关键词】多环芳烃;微生物降解;降解机制【作者】王涛;蓝慧;田云;卢向阳【作者单位】湖南农业大学生物科学技术学院，湖南长沙 410128; 湖南省农业生物工程研究所，湖南长沙 410128;湖南农业大学生物科学技术学院，湖南长沙410128; 湖南省农业生物工程研究所，湖南长沙 410128;湖南农业大学生物科学技术学院，湖南长沙 410128; 湖南省农业生物工程研究所，湖南长沙 410128;湖南农业大学生物科学技术学院，湖南长沙 410128; 湖南省农业生物工程研究所，湖南长沙 410128【正文语种】中文【中图分类】X172多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs)是一类于环境中分布广泛且稳定存在的有毒有机化合物，是由2个或2个以上的苯环以线形排列、弯曲连接或者聚簇状的方式构成的有机污染物，分子量较大，其水溶性和挥发性会随着分子量的增大而减小。
小鼠腔前卵泡体外培养成熟-染色体分析技术的建立
小鼠腔前卵泡体外培养成熟-染色体分析技术的建立梅树江;林晓潭;王晓梅;林苏霞;许锦贝;程锦泉;马汉武;谢旭【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2009(021)006【摘要】背景与目的:初级卵母细胞生长过程中对理化因子反应敏感,拟建立小鼠腔前卵泡体外培养成熟(IVG)-染色体分析技术,为生殖毒理学提供有效的检测模型.材料与方法:采用机械分离法从12～14日龄昆明小鼠的卵巢中分离出直径为140～160 μm的腔前卵泡,单个卵泡放入微液滴培养体系中,隔天半量换液,连续培养10 d,对成活卵泡体外诱导超排,于16～24 h后,检测卵母细胞成熟情况,分别计数停滞在生发泡期(GV)、生发泡期破裂(GVBD)和排出第一极体(PB)的卵母细胞数,对卵母细胞进行染色体数目与结构分析,并与体内发育体外成熟卵母细胞(IVM)及体内超排成熟卵母细胞(IVC)进行比较分析. 结果:从4只小鼠卵巢中分离得到332个腔前卵泡,培养早期卵泡直径增长显著,随后呈"摊鸡蛋"样生长,部分形成假腔.培养10 d后存活率为95.78%(318/332).激素诱导排卵后,卵丘.卵母细胞复合体排出率72.01%(229/318),其中11.80%(27/229)停滞在GV期,39.30%(90/229)发生GVBD,47.16%(108/229)发育成熟,排出第一极体(PB),1.74%(4/229)发生孤雌活化.IVG与IVM、IVC两种方法获得的卵母细胞染色体对比分析,未见明显的染色体数目与结构异常. 结论:小鼠腔前卵泡体外培养成熟,可获得与体内生长相同的成熟卵母细胞,染色体分析未见异常,可成为一种良好的生殖毒理学体外检测与卵泡发育机制研究模型.【总页数】4页(P463-466)【作者】梅树江;林晓潭;王晓梅;林苏霞;许锦贝;程锦泉;马汉武;谢旭【作者单位】深圳市疾病预防控制中心,广东深圳518020;深圳大学医学院生物医学重点实验室,生理学,教研室,广东深圳518060;深圳大学医学院生物医学重点实验室,生理学,教研室,广东深圳518060;深圳大学医学院生物医学重点实验室,生理学,教研室,广东深圳518060;深圳大学医学院生物医学重点实验室,生理学,教研室,广东深圳518060;深圳市疾病预防控制中心,广东深圳518020;深圳市疾病预防控制中心,广东深圳518020;深圳市疾病预防控制中心,广东深圳518020【正文语种】中文【中图分类】Q25【相关文献】1.小鼠腔前卵泡三维培养成熟后受精体系的建立及优化 [J], 曾荔苹;王晓梅;侯震晖;林桂淼;李慧;林苏霞;林晓潭;朱玥荃;蔡志明2.小鼠腔前卵泡无血清体外培养的研究 [J], 张耀君3.小鼠腔前卵泡体外培养中BMP-6和GDF-9的表达 [J], 王喜艳;姚健;徐邦生4.小鼠腔前卵泡卵母细胞的体外培养、体外成熟和体外受精研究 [J], 李朝军;王斌;范必勤;刘智慧;阮金度5.Rho/ROCK抑制剂Y27632对小鼠腔前卵泡体外培养的影响 [J], 俞晓丽;蒲静;罗晓强;刘心蕊;邱意开;张樱馨;裴秀英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多环芳烃和UV-B辐射对海湾扇贝幼虫的影响的开题报告
多环芳烃和UV-B辐射对海湾扇贝幼虫的影响的开题
报告
1. 研究背景
多环芳烃（PAHs）是一类常见的有机污染物，在石油勘探、交通运输、工业生产等过程中广泛存在。
PAHs的释放和累积会对海洋生物造成影响，包括生命活动的抑制、生殖和发育的异常以及免疫系统的受损。
UV-B辐射是一种紫外线辐射，其波长在280nm至320nm之间，易于穿
透水体。
UV-B辐射可以扰乱激素水平、减弱免疫功能以及导致DNA的损伤。
因此，本研究将探究PAHs和UV-B辐射的复合作用对海湾扇贝幼虫
的影响。
2. 研究目的
本研究旨在探究PAHs和UV-B辐射复合作用对海湾扇贝幼虫发育和生理指标的影响，确定PAHs和UV-B辐射的复合作用是否会加剧其影响，为保护海湾生态提供科学依据。
3. 研究方法
3.1 实验材料
海湾扇贝幼虫、PAHs溶液、UV-B辐射灯。
3.2 实验设计
将海湾扇贝幼虫随机分为四组，分别为对照组、PAHs组、UV-B组
和PAHs+UV-B组。
对照组仅接受清水处理，PAHs组接受为浓度为
20mg/L的PAHs溶液，UV-B组接受为紫外线辐射1h，PAHs+UV-B组接受PAHs溶液和紫外线辐射的复合作用，分别持续48小时。
3.3 测定指标
实验结束后，分别测定四组海湾扇贝幼虫的存活率、体长、速度、光合色素的含量和DNA的损伤程度等指标。
4. 研究意义
本研究将探究PAHs和UV-B辐射复合作用对海洋生态环境的影响，并为探究复合作用对其他海洋生物的生态效应提供科学依据，同时也为保护海湾生态环境提供指导。
DEHP及MEHP对小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响
DEHP及MEHP对小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响马明月;张玉敏;裴秀丛;段志文;王旭【摘要】目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)及其活性中间产物邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯(MEHP)对卵巢颗粒细胞及其激素合成、分泌功能的影响. 方法:体外培养健康初断乳ICR小鼠的卵巢颗粒细胞,分别加入DEHP(10、50、250 nmol/L).MEHP(10、50、250 nmol/L)和溶剂对照 (DMSO),作用细胞24 h.用RT-PCR法测定原代小鼠颗粒细胞中类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)和P450侧链裂解酶(P450sec)mRNA水平;用Real time-PCR法测定原代小鼠颗粒细胞中芳香化酶(CYP19)和过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARα、PPARβ、PPARγ)mRNA水平;用酶联免疫法(EIA)检测卵巢颗粒细胞上清液中雌二醇和孕酮的水平. 结果:与对照组比较,250 nmol/L MEHP抑制StAR基因及P450scc基因表达(P均<0.05);250 nmol/L DEHP对CYP19基因表达有促进作用(P<0.05);而10、50 nmol/L DEHP及50、250 nmol/L MEHP对CYP19基因表达均有抑制作用(P<0.05). 除10 nmol/L DEHP外,DEHP及MEHP其它浓度组均能抑制PPARα、PPARβ基因的表达(P<0.05);10 nmol/L DEHP及MEHP对PPARγ基因表达有促进作用(P<0.05),而250 nmol/L MEHP对PPARγ基因表达有抑制作用(P<0.05).各剂量DEHP及MEHP均能使颗粒细胞分泌雌二醇增加(P<0.05),10 nmol/L DEHP、50及250 nmol/L MEHP抑制颗粒细胞分泌孕酮(P<0.05). 结论:DEHP及MEHP影响颗粒细胞类固醇激素合成酶、PPARs的基因表达及分泌功能.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2010(022)002【总页数】5页(P104-107,111)【关键词】生殖毒性;邻苯二甲酸二(2-乙基)己醋;甲苯二甲酸单(2-乙基)己酯;卵巢颗粒细胞【作者】马明月;张玉敏;裴秀丛;段志文;王旭【作者单位】沈阳医学院毒理学教研室,辽宁沈阳110034;沈阳医学院毒理学教研室,辽宁沈阳110034;沈阳医学院毒理学教研室,辽宁沈阳110034;沈阳医学院毒理学教研室,辽宁沈阳110034;沈阳医学院毒理学教研室,辽宁沈阳110034【正文语种】中文【中图分类】R730.231~+.1邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)作为聚氯乙烯(PVC)等塑料制品的增塑剂，被广泛应用于食品包装材料、容器、儿童玩具、医疗用品、化妆品及人造革等制造行业。
小鼠受精卵体外培养的影响因素
２ ｏ １ ６年 １ ２月 － 下
Ｕ
小鼠受精卵体外培养的影响因素
王 晓 佳
（ 辽宁省抚顺市农业特产学校 ， 辽宁 抚顺市 １ １ ３ １ ２ ３ ）
摘 要 哺 乳动 物 受精 卵在从 合子 发 育到 囊胚 的过程 中对能 量 、 蛋 白质 和其 他物 质所 需要 的量 和 种类都 有 所不 同。 从 受精 卵的成 熟来 看 ， 影响 因素 是 多方
有 研究 显示，３ ９ １ Ｅ时牛受精 卵的成 熟 率明显 高于 ３ ５ ℃、３ ７ ℃和 ４ ｌ ℃。 当温度 达 到４ １ ℃时有明 显危害 。 之后 也有 研究 结果 与其相 似， 发现不同温度下的培养效果差异
很 大， 当牛受精 卵在 ３ ４ 、３ ６ ℃和 ３ ８ ． ５ ℃下 培 养时 ， 效 果随温度 而提 高。 而小鼠体 外培 养 的最适宜温度是 ３ ８ — ３ ９ ℃。
口（ Ｔ Ｇ Ｆ －口） 。 ８激 素
的进展 ， 胚胎 的体外培 养技术显得越 来越重 要。 而在 培 养液 中添 加生 长 因子 、 激素 、 葡
氨基 酸是早 期胚胎培 养的 一种重要物 质， 具 体来说 ， 谷 氨酞胺 是胚胎 代谢的主 要
氮源 ， 可 以促 进胚胎细 胞的早 期分裂 ， 增 强 胚胎 体外发 育能 力；在 乳酸钠 存在的情 况
下。 谷氨酞胺对于 卵母细胞体外成 熟和胚 胎 体外 发育有 明显的促 进作用 ；牛磺酸除 了 能够促进胚胎发育外 ， 还具有 抗氧化 作用和 解毒作用 ： 甘氨 酸可以维持细 胞内渗透压， 增强胚胎对 高离子 浓度环境 的抗逆 能力。
５蛋 白质
胚 胎发育 阻滞和胚 胎基 因组转录都 与 胚胎 内蛋 白质合成有 关， 胚 胎培养液中蛋白 质 含量不足 与过剩都 会对早 期胚胎发育 有
2023年毒理学之生殖毒理学解读
生殖毒作用的靶标与环节
四、对卵巢、子宫和阴道的毒性 1.生殖细胞 ：所有卵母细胞在雌(女)性出生前就已存在，
如果破坏了就没有额外的配子可补偿；最敏感的阶 段是卵原细胞的有丝分裂期。 2. 颗粒细胞 为卵母细胞正常发育提供所需的激素和营 养环境。 3. 卵泡膜细胞 具有17α羟化酶将孕酮转化为雄烯二酮
黄体细胞 LH 催乳激素
孕激素,松驰素 催产素
卵泡膜细胞
LH
垂体
LH
FSH 卵巢
卵 子
发
颗粒
生
细胞
雄激素 芳香化酶
卵原细胞(休止状态) 2n 有丝分裂(青春期)
初级卵母细胞 2n 减数分裂
次级卵母细胞 n 减数分裂
卵细胞 n
雌激素
成熟卵子
雌性生殖系统
生长发育
性成熟
配子释放
新生儿适应 分娩
配子发生
受精 合子转运
生殖毒作用的靶标与环节
毒物对卵巢的毒作用方式：
1. 促性腺激素分泌不足、卵泡发育障碍或胆固醇合成障碍均可 导致卵巢萎缩，并继发性引起子宫和阴道萎缩；
2.
如可卡因、环磷酰胺、多环芳烃、无机汞等。
2. 某些化学物是雌激素和孕酮的拮抗剂或激动剂引起卵巢萎缩； 如他莫昔芬、甲氧基醋酸孕酮等。
3. 血清促性腺激素水平升高或卵巢胆固醇激素的负反馈调节失 灵均可引起排卵周期异常。如外源性LH、FSH催乳素等。
殖距离、外生殖器结构
雌性性功能和生育力的特异终点
器官重量 组织病理学
动情周期的正常性 激素水平 性行为 哺乳
发育
衰老
卵巢、子宫、阴道、垂体
卵巢、子宫、阴道、垂体、输卵管、 乳腺 阴道涂片细胞学
LH、FSH、雌激素、孕酮、催乳激素
几种生殖激素对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡的影响
几种生殖激素对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡的影响几种生殖激素对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡的影响摘要：生殖激素在雌性动物卵巢的发育和卵泡成熟中起着重要作用。
本研究旨在探究不同生殖激素对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡的影响。
通过体外培养颗粒细胞并分别添加孕激素、雌激素和卵泡刺激素，采用细胞凋亡检测和相关生化分析方法，研究结果发现，孕激素和雌激素可以显著抑制颗粒细胞凋亡，而卵泡刺激素对凋亡没有显著影响。
这些结果有助于理解生殖激素在牦牛卵泡细胞生长和成熟中的作用机制，并为进一步优化体外培养的卵巢组织工程提供依据。
引言卵巢是雌性动物繁殖系统的核心器官，对雌性生育功能至关重要。
其中，卵泡是储备和发育成熟的卵子的结构单位。
卵泡细胞，尤其是颗粒细胞，起着关键的调控作用。
生殖激素在卵巢发育和卵泡成熟过程中具有重要影响。
孕激素、雌激素和卵泡刺激素是其中的主要代表。
方法本研究从健康牦牛卵巢中获取卵泡颗粒细胞，然后将细胞分离、培养。
首先，采用细胞凋亡检测试剂盒进行细胞凋亡检测。
然后，根据实验需求分别设置三个实验组：孕激素组、雌激素组和卵泡刺激素组。
在培养过程中，分别添加孕激素（孕酮）、雌激素（雌二醇）和卵泡刺激素（FSH），并设立对照组。
每组设3个重复。
培养48小时后，采用相关生化分析方法，如Western blot和Real-time PCR，检测凋亡相关蛋白的表达水平。
结果经过体外培养，颗粒细胞出现凋亡的比例较高。
然而，在添加孕激素和雌激素后，细胞凋亡明显降低，与对照组相比有显著差异（p<0.05）。
而卵泡刺激素组的凋亡水平与对照组无显著差异（p>0.05）。
此外，结果还显示添加孕激素和雌激素可显著降低凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3的表达水平，而卵泡刺激素组无显著差异。
讨论本研究结果表明，孕激素和雌激素可以显著抑制体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞的凋亡。
这可能是因为孕激素和雌激素通过调控相关信号通路，如Akt和ERK通路，来抑制细胞凋亡。
《小鼠卵母细胞干细胞体外分离、建系及其功能研究》范文
《小鼠卵母细胞干细胞体外分离、建系及其功能研究》篇一一、引言在过去的几十年中，随着细胞生物学和干细胞技术的不断发展，对于卵母细胞和干细胞的研究已成为科学领域的重要课题。
小鼠作为实验室常用的研究模型，其卵母细胞干细胞的研究对于理解生殖机制、疾病治疗以及再生医学等领域具有重要意义。
本文旨在探讨小鼠卵母细胞干细胞的体外分离、建系及其功能研究，为相关领域的研究提供理论依据。
二、小鼠卵母细胞干细胞的体外分离小鼠卵母细胞干细胞的体外分离是本研究的首要任务。
在实验室中，我们采用了多种方法对小鼠卵巢进行分离和获取卵母细胞干细胞。
具体而言，首先使用适当的消化酶处理卵巢组织，使卵母细胞干细胞得以释放。
随后，通过离心、过滤等方法将干细胞与其他细胞成分分离。
最后，通过特定培养基的培养和筛选，得到纯度较高的卵母细胞干细胞。
三、建系及培养在成功分离出卵母细胞干细胞后，我们进行了建系工作。
首先，我们确定了适宜的培养基和培养条件，以保证干细胞的生长和增殖。
随后，通过多次传代和筛选，建立了稳定的卵母细胞干细胞系。
在培养过程中，我们密切关注干细胞的形态、增殖速度以及基因表达等方面的变化，确保其稳定性和可靠性。
四、功能研究在建立稳定的卵母细胞干细胞系后，我们进行了功能研究。
首先，我们通过基因表达分析、蛋白质组学等方法，研究了干细胞的生物学特性和功能。
结果表明，这些干细胞具有多向分化的潜能，可以分化为不同类型的细胞。
此外，我们还研究了这些干细胞在体内外的生长和增殖情况，以及其在组织修复和再生方面的应用潜力。
五、结论与展望本研究成功实现了小鼠卵母细胞干细胞的体外分离、建系及其功能研究。
通过建立稳定的干细胞系，我们深入了解了其生物学特性和功能。
这些研究结果为进一步探索卵母细胞干细胞在生殖医学、疾病治疗以及再生医学等领域的应用提供了理论依据。
然而，本研究仍存在一些局限性。
例如，对于卵母细胞干细胞的分化机制和调控机制等方面的研究还不够深入。
未来，我们将继续深入研究这些领域，以期为卵母细胞干细胞的应用提供更多理论支持。
不同剂量激素处理对小鼠超数排卵及产仔性能的影响
不同剂量激素处理对小鼠超数排卵及产仔性能的影响周晓旭;李雁冰;宁博林;孙蕊;郭丽;李庆达;韩静;李井春【期刊名称】《黑龙江八一农垦大学学报》【年(卷),期】2015(000)003【摘要】研究不同激素组合处理对小鼠超数排卵及产仔性能的影响，以便获得适宜的超数排卵的激素使用剂量。
分别用不同剂量孕马血清促性腺激素（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）注入小鼠体内进行超数排卵处理，比较激素处理后小鼠卵母细胞成熟率、产仔数、胎儿出生重及性别比。
结果显示，5 IU PMSG+5 IU HCG剂量组和10 IU PMSG+10 IU HCG剂量组合相比较，卵母细胞成熟率差异不显著（P＞0.05），5 IU PMSG+5 IU HCG剂量组平均产仔数最高；10 IU PMSG+10 IU HCG剂量组的胎儿平均初生重最高，但产仔数少。
综合以上，在实验中，5 IU PMSG+5 IU HCG剂量组合进行超排处理效果最好。
【总页数】4页(P32-35)【作者】周晓旭;李雁冰;宁博林;孙蕊;郭丽;李庆达;韩静;李井春【作者单位】黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319;黑龙江八一农垦大学工程学院;黑龙江八一农垦大学信息技术学院;黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319【正文语种】中文【中图分类】S814.8【相关文献】1.激素的不同剂量对小鼠超数排卵的影响 [J], 郭庆勇;况玲;蒋国英;刘小兰;袁龙;张毅;侯宇;白亚峰2.不同剂量促卵泡素对成年和牛超数排卵效果的影响分析 [J], 孙凤俊;焦子康;薛建华;宣柏华;张佳谊3.不同剂量PMSG/HCG对小鼠超数排卵的效果 [J], 冯雨峰;闫雷4.子宫内不同激素处理对母猪产仔数的影响 [J], 李小军5.不同胎次和产仔季节对母猪产仔性能的影响及窝产仔数分布研究 [J], 郭亮;姜威;刘则学因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
MXC对小鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响
MXC对小鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响作者：王宝平，马向东，马佳佳，陈必良【摘要】目的：研究甲氧滴滴涕（MXC）对颗粒细胞凋亡的影响，探讨MXC对雌性小鼠性腺毒性的作用机制. 方法：以孕马血清（PMSG）处理的雌性昆明小鼠为模型,制备颗粒细胞悬液,以不同浓度的MXC （1.25, 2.50，5.00和10.00 μg/mL）对其作用24，48 h后,应用TUNEL法及流式细胞术,检测MXC对离体培养颗粒细胞凋亡的影响. 结果：体外培养的颗粒细胞存在自发性凋亡，对照组和MXC不同浓度实验组的颗粒细胞都有不同程度的体积变小、细胞浓缩、变圆、离壁等类似凋亡的特征. MXC 1.25 μg/mL浓度组凋亡的颗粒细胞最少,其余3个实验组随MXC浓度的升高,凋亡细胞也逐渐增多, MXC 10.00 μg/mL浓度组的颗粒细胞凋亡数量显着高于对照组和其他各组(P0.05). 采用3′末端原位标记法在细胞中检测到棕色深染的凋亡颗粒细胞；流式细胞术分析结果显示处于早期凋亡的细胞所占百分率明显升高(最高达53.5%). 结论：环境污染物高浓度MXC可抑制除血清后体外培养的颗粒细胞生长,导致颗粒细胞凋亡,它的作用是双向的并具有剂量依赖性.【关键词】甲氧滴滴涕; 卵泡颗粒细胞; 细胞凋亡; 小鼠【Abstract】AIM: To investigate the relationship between fe male gonad toxicity of methoxychlor (MXC) on mouse and the apoptosis of granulosa cells. METHODS: Pregnant mares seru m gonadotrophin (PMSG)treated female Kunming mice were used as models and granulosa cell suspensions were prepared. MXC (1.25, 2.50，5.00，10.00 μg/mL)was added to cultured cells after 24,48 h of incubation. The effect of MXC on apoptosis of granulosa ce lls was assessed by TUNEL method and flow cytometry. RESULTS : There was spontaneous apoptosis in the cultured granulosa cells and the apoptosis like changes such as cell shrin k age, condensed nuclei, rounded shape, droping off wall existe d in all control groups and experimental groups treated withMXC. In the MXC groups, the least apoptosis like granulo sa cells were found in 1.25 μg/mL group, and the number of apoptosis like granulosa cells increased gradually in other3 test groups with the increasing concentrations of MXC. The number of apoptosis like granulosa cells was significan tly higher in 10.00 μg/mL group than that in other group s (P0.05). Apoptotic signals were detected by DNA 3′end l abeling method in granulosa cells of mouse. Flow cytometry r evealed the increasing proportion of early stage apoptotic ce lls (the maximum was 53.5%). CONCLUSION: A higher concentra tion of MXC may serve as an important endocrine disruptingchemical (EDC), mediating mouse granulose cell apoptosis in vitro after FBS was removed from medium. The effect is bi directional and concentration dependent.【Keywords】methoxychlor; granulose cell; apoptosis; mo use0 引言甲氧滴滴涕(methoxychlor, MXC)是一种被人们主动投放于环境中的数量最大、毒性最广的化学物质，因其杀虫效果明显，被人们广泛应用于水果，蔬菜和园林中杀虫. 近年来，MXC的生殖毒性作用不断被发现［1］, 有研究表明长期接触MXC可导致生育能力下降［2-3］和异常胚胎细胞的形成［4］，但其生殖细胞的毒性作用机制仍不清楚，有关是否对卵泡颗粒细胞的生存具有影响的报道少见. 本研究以小鼠离体培养的颗粒细胞为模型，观察具有雌激素样作用的环境污染物MXC对颗粒细胞存活的影响，以探讨MXC的雌性生殖细胞毒性作用机制.1 材料和方法1．1 材料健康，尚未性成熟的雌性昆明小鼠40只，体质量18～22 g（第四军医大学实验动物中心）；甲氧滴滴涕（批号：49054，美国Sigma公司）；DMEM/F12干粉细胞培养基，无脂肪酸牛血清白蛋白（BSA）（美国Gibcol公司）；已二胺四乙酸（EDTA）、孕马血清(PMSG）（天津生物制品公司）；无Ca2+,Mg2+磷酸盐缓冲液（PBS）（北京中杉金桥公司）；3′OH 末端原位细胞凋亡检测试剂盒、多聚赖氨酸、DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)；流式细胞仪（美国EPICS公司）.1．2 方法1．2．1 小鼠颗粒细胞的制备及原代培养参照文献［5］的方法制备颗粒细胞，选取小鼠，皮下注射PMSG，10 U/只，饲养温度22℃，12 h光照，12 h黑暗，允许自由饮水和摄食. 48 h后颈椎脱臼处死，无菌条件下迅速取出双侧卵巢，用PBS（-）清洗3次，在体视显微镜下除去卵巢周围包膜及脂肪组织. 将卵巢置于DMEM/F12培养液中，37℃孵育15 min. 然后在解剖镜下用不锈钢针刺破排卵前卵泡使颗粒细胞和卵母细胞释放出来，加入1 g/L透明质酸酶消化使颗粒细胞与卵母细胞分离，过200目筛网，1000 r/min 离心5 min. 弃去上清后，用DMEM/F12培养液（含0.5 g/L BSA；5 g/L蔗糖；6.8 mmol/L EDTA），垂悬细胞沉淀. 37℃50 mL/L CO2孵箱中孵育15 min，然后用DMEM/F12培养液洗涤细胞3次，1000 r/min 离心5 min. 采用文献［6］的方法用台盼蓝排斥法检查活细胞比率（85%左右），细胞用一定量的无血清DMEM/F12培养基（含100 U/L青霉素；100 μg/mL链霉素；0.5 g/L BSA）稀释并用血细胞计数法计数，调整细胞密度，将细胞分别接种于两个250 mL无菌的培养瓶中. 置于37℃50 mL/L CO2培养箱中预培养.1．2．2 实验分组将细胞分为对照组：含0.5 g/L BSA的DMED/F12细胞培养液和四个MXC不同浓度实验组（M1～M4组）：MXC含量分别为1.25, 2.50, 5.00，10.00 μg/mL,每组均设4个重复.1．2．3 TUNEL法检测颗粒细胞凋亡将颗粒细胞接种于铺有盖玻片的100 mm培养皿，孵育24 h后培养液换为不同终浓度的MXC应用液，分别于第12,24和48 h后收集颗粒细胞爬片，用40 g/L多聚甲醛固定1 h，置于新鲜配置30 mL/L H2O2中，室温处理10 min，然后加入标记缓冲液（Labeling Buffer）20 μL/片，以保持切片湿润. 置样品于湿盒中，37℃标记2 h. 加封闭液50 μL/片，室温30 min，甩掉封闭液，不洗. 加入TUNEL反应混合物，37℃湿盒中反应1 h，再加入稀释后的SABC 50 μL/片,37℃反应30 min. DAB显色液显色，自来水冲洗，苏木素浅染，脱水，透明，封片（每次反应间隔均用TBS洗3次）. 阴性对照为在标记反应混合物中不加脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT酶），其余操作步骤相同. 病理图像分析仪观察(阳性反应细胞核呈棕黄色, 颗粒清晰，定位准确；阴性反应细胞呈兰紫色),拍照,镜下随机计数10个视野细胞,计算阳性细胞数占总细胞数目的比例,求其均值即为卵巢细胞凋亡指数(apoptosis index, AI).1．2．4 Annexin V/PI双染流式细胞仪检测早期凋亡率将250 mL培养瓶中的颗粒细胞以1×106个/瓶转接种于50 mL无菌的培养瓶中，孵育24 h后培养液换为不同终浓度的MXC应用液，24，48 h后收集卵巢颗粒细胞，将培养瓶中的原培养液弃去,加入少量的2.5 g/L胰酶,清洗后弃去;再加入适量的2.5 g/L胰酶,在倒置显微镜下观察,见细胞稍变圆时,立即竖起培养瓶,停止胰酶作用,弃去胰酶;每孔各加入1 mL的磷酸盐缓冲液(PBS),用吸管反复吹打,直至细胞成单细胞悬液为止,移入离心管中，1000 r/min离心5 min，弃上清液. 用4℃预冷过的750 mL/L乙醇固定,4℃保存,至少固定18 h,用时1000 r/min 离心5 min,弃去无水乙醇，用PBS洗细胞2次后，调整细胞浓度为1×106/mL,取1 mL细胞悬液,用PBS洗3次之后,参照文献［7］的方法采用Annexin V FITC及PI染色后上机操作,以未染色细胞将机器调零，以Annexin V FITC单染管和PI单染管作基准参照，选取散点图作直观显示，即可对细胞早期凋亡进行检测,并利用MCYCLF软件对细胞凋亡率进行分析.统计学处理：实验结果用x±s表示,所有数据采用SPSS 11.0统计软件进行单因素方差分析（One way ANOVA）及LDS t检验， P0.05为差异有统计学意义.2 结果2．1 TUNEL法检测颗粒细胞凋亡结果于转染后12, 24及48 h TUNEL 法染色结果显示：体外培养的颗粒细胞存在自发性凋亡，随着MXC浓度的增高和作用时间的延长，颗粒细胞的存活数下降，在作用12 h后细胞基本上存活，处理24 h后细胞开始出现凋亡，至48 h后凋亡达到高峰. 各实验组中，MXC 10.00 μg/mL浓度组凋亡最显着，MXC 5.00 μg/mL浓度组次之，其次是MXC 2.50 μg/mL浓度组；MXC 1.25 μg/mL浓度组与对照组未见明显阳性凋亡细胞. AI:对照组为（9.8±2.2）%，MXC 1.25 μg/mL浓度组为（10.8±2.4）%，MXC 2.50 μg/mL浓度组为（23.4±3.6）%，MXC 5.00 μg/mL浓度组为（28.3±4.6）%，MXC 10.00 μg/mL浓度组为（40.5±4.3）%. 经t检验, 对照组与1.25 μg/mL浓度组比较，差异无统计学意义(P0.05)；对照组与2.50, 5.00, 10.00 μg/mL各浓度组比较, 差异均具有统计学意义(P0.01). 提示MXC 可显着促进小鼠离体培养颗粒细胞的凋亡（P0.01，图1）.A：对照组；B：MXC2.50 μg/mL浓度组；C：MXC 5.00 μg/mL浓度组；D：MXC 10.00 μg/mL浓度组.图1 转染不同剂量MXC的小鼠卵巢颗粒细胞的凋亡检测结果 DAB×400（略）2.2 Annexin V/PI双染流式细胞仪分析在MXC 2.50 μg/mL浓度作用卵巢颗粒细胞24 h后即可明显诱导颗粒细胞的早期凋亡，这种效应随MXC剂量增加和作用时间的延长而明显增强（P0.01,表1）.表1 不同浓度MXC作用小鼠卵巢颗粒细胞后Annexin V/PI检测早期凋亡（略）bP0.01 vs对照.3 讨论大量研究表明，MXC具有拟内源性性激素的作用，即使是微量的MXC也可对正常的激素作用产生影响（主要对女性激素）. 目前关于MXC的毒性作用仅限于动物体内实验大体的研究，但具体是通过那条分子途径，破坏那些细胞的功能，影响那些激素水平的表达而发挥其毒性作用的，MXC是否对卵巢颗粒细胞的存活有较大的影响等的机理仍未阐明，因此，预防和治疗仍缺乏科学依据. 针对这些问题展开MXC对体外原代培养卵巢颗粒细胞毒性的研究，具有重要的现实意义.我们采用不同浓度MXC作用于原代培养卵巢颗粒细胞24，48 h，在细胞发生凋亡时，由于内源性钙镁离子依赖性核酸内切酶被激活，选择性降解核小体间DNA，核小体内DNA断裂出现缺口，即产生大量的黏性3′OH末端,用缺口末端标记法标记，加入DAB显色后在原位出现棕色沉淀，从而可以在显微镜下观察到被着色的凋亡细胞. 此法灵敏度高，被广泛用于检测细胞凋亡. 此外，细胞发生凋亡时细胞膜成分亦发生改变. 在凋亡早期，原来位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine,PS）迁移至脂双层外侧，PS外翻是凋亡细胞的早期事件. Annexin V是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合. 与PI双染细胞通过流式细胞仪可区分活细胞、凋亡细胞及坏死细胞. 两项指标检测的结果均表明MXC能够诱导小鼠卵巢颗粒细胞的凋亡，但对细胞坏死没有影响. 并且MXC的促颗粒细胞凋亡的效应随着其浓度和时间的增加而增强,这结果与相关体内实验类似［8］.原代培养卵巢颗粒细胞应用于药物生殖毒性性研究是目前一个比较新的方法,本实验采用了细胞体外实验来研究MXC可能的促凋亡作用,采用在培养液中直接加入MXC，发现在2.50～10.00 μg/mL给药浓度下,MXC对体外培养卵巢颗粒细胞有明显的促凋亡作用. 由于国内外相关报道很少,MXC的生殖系统毒性还有待于结合其他细胞实验或动物实验来进行深入的研究.【参考文献】［1］ Kim HS, Kang TS, Kang IH, et al. Validation study of OECD rodent uterotrophic assay for the assessment of estrogenic activity in Sprague Dawley immature female rats ［J］. Toxicol Environ Health A, 2005, 68(2324): 2249-2262.［2］ Fisk AT, Stern GA, Hobson KA, et al. Persistent organic pollutants (POPs) in a small, herbivorous, arctic marine zooplankton (Calanus hyperboreus): Trends from April to July and influence of lipids and trophic transfer［J］.Mar Pollut Bull, 2001，43(16):93-101.［3］王晓蓉，陈必良.内分泌干扰物MXC对生殖和胚胎发育的影响［J］.中国妇幼健康研究，2006，17（4）：299-301.［4］常飞，陈必良，马向东，等. 甲氧滴滴涕对雌性大鼠血清雌激素水平及抗氧化系统功能的影响［J］.第四军医大学学报，2007，28（6）：521-523.［5］王妍，赵晓娥，杨培先，等.小鼠卵巢颗粒细胞的体外培养［J］.西北农林科技大学学报，2007，35(8):12-14.［6］司徒镇强，吴军政. 细胞培养［M］.西安：世界图书出版公司，2004：246.［7］刘芳，陈燕，崔国慧，等.雷公藤内酯对红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响［J］.华中医科大学学报（医学版），2005，34（3）：308-309.［8］ Zachow R, Uzumcu M, Kuhn PE, et al. The methoxychlor metabolite,2,2bis(p hydroxyphenyl)1,1,1trichloroethane,inhibits steroidogenesis in rat ovarian granulose cells in vitro［J］.Reprod Toxicol, 2006,22(4):659-665.。
小鼠卵母细胞体外成熟、体外受精的效果观察
小鼠卵母细胞体外成熟、体外受精的效果观察乌日琴;邓新燕;陈颖青;都同功;陈系古【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】1999(7)2【摘要】目的研究不同培养条件对小鼠卵母细胞体外成熟及体外受精率的影响.方法小鼠卵母细胞分别在含有FSH、BSA和胰岛素的培养液中体外成熟,在Whitten 氏液中体外受精,比较体外成熟率、体外受精率. 结果 1.裸卵(DO)的体外成熟率、体外受精率(81.4%,31.0%)均高于卵丘卵母细胞复合体(COC)(48.6%,27.1%).2.在培养液中添加FSH、胰岛素和BSA,卵母细胞的体外成熟率为77.9%,82.3%、60.7%;体外受精率为77.2%、72.6%、26.7%;2-细胞率为49.2%、34.2%、10.0%.胰岛素组的卵母细胞IVM率最高,但IVF率、2-细胞率低于FSH组.3.添加BSA的两组的体外受精率只有26.7%、25.8%,显著低于其他组,其体外成熟率也较添加FSH和胰岛素的组成.4.排出第一极体(PbI)的卵母细胞的体外受精率和2-细胞率(85.9%,22.4%)均高于GV期卵母细胞(71.1%,12.9%). 结论 1.卵丘卵母细胞(COC)较裸卵(DO)的体外成熟率、体外受精率都低,差异显著(P成熟＜0.01;P受精＜0.05).2.FSH和胰岛素均能提高小鼠卵母细胞的体外成熟率、体外受精率.3.BSA 可以降低小鼠卵母细胞体外受精率,差异极显著.4.GV期卵母细胞的体外受精率显著低于体外培养的排出第一极体的卵母细胞(P2-cell＜0.05,P受精＜0.05).【总页数】5页(P81-85)【作者】乌日琴;邓新燕;陈颖青;都同功;陈系古【作者单位】佛山科学技术学院农牧分院动医系组织胚胎教研室;中山医科大学实验动物中心，广州510089【正文语种】中文【中图分类】Q95【相关文献】1.C-ERBB2促小鼠卵母细胞成熟及在表皮生长因子调控小鼠卵母细胞体外成熟中的作用 [J], 郑莉萍;汪小浪;吴磊;郑月慧;高凤兰;肖秋香;李芳2.卵巢运输温度及卵母细胞促成熟因子对山羊卵母细胞体外成熟和体外受精的影响[J], 孙新明;戴彩华;罗婷3.LIF对小鼠卵母细胞体外成熟和体外受精效果的影响 [J], 周敏敏;丁海雷;钱红娟;赵振华;王杏龙4.小鼠腔前卵泡卵母细胞的体外培养、体外成熟和体外受精研究 [J], 李朝军;王斌;范必勤;刘智慧;阮金度5.影响小鼠卵母细胞体外成熟和体外受精效果的因素分析 [J], 乌日琴;邓新燕;陈颖青;都同功;陈系古因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
束缚应激对小鼠卵巢氧化损伤的实验研究
束缚应激对小鼠卵巢氧化损伤的实验研究高源;郭翠娟;刘仁平;徐良全【期刊名称】《南昌大学学报:医学版》【年(卷),期】2022(62)2【摘要】目的探讨氧化应激标志物超氧化物歧酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)等在束缚应激小鼠卵巢中的活性。
方法以束缚为应激原建立心理应激动物模型,将40只6~8周龄小鼠按随机数字表法分成空白组、束缚1周组、束缚2周组、束缚3周组,测定各组卵巢脏器指数;用ELISA检测试剂盒检测卵巢中SOD活力、GSH-Px活力、MDA含量变化;用实时荧光定量聚合酶链式反应和免疫蛋白印迹法检测SOD蛋白在各组小鼠体内的表达。
结果各束缚组脏器指数低于空白组(P<0.05)。
各束缚组的MDA水平高于空白组(P<0.01),且不同束缚组间比较差异有统计学意义(P<0.01);束缚应激2、3周组与空白组相比T-SOD 活力降低(P<0.01),且相关分析表明T-SOD活力与MDA水平变化呈负相关(r=-0.883,P<0.01),随着束缚应激实验周数增加,T-SOD活力呈一定降低态势,MDA含量呈上升态势;各束缚组GSH-Px活力低于空白组(P<0.01),且不同束缚组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。
束缚应激2、3周组卵巢中SOD1与SOD2蛋白含量被显著抑制(P<0.05)。
结论慢性束缚小鼠卵巢中MDA的含量升高,T-SOD和GSH-Px的活力下降。
束缚应激可能是通过抑制SOD的表达导致卵巢出现氧化应激损伤。
【总页数】5页(P26-30)【作者】高源;郭翠娟;刘仁平;徐良全【作者单位】南昌大学药学院;南昌大学基础医学院生理学教研室;丰城市妇幼保健医院妇幼保健科【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.乌贼墨多糖对环磷酰胺介导小鼠卵巢氧化应激损伤的干预效应2.大豆异黄酮对心理应激所致小鼠卵巢氧化损伤的保护作用3.α-硫辛酸对小鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤和凋亡的影响4.黄芩苷对热应激小鼠卵巢氧化损伤的保护作用5.小鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤及对沉默信息调节因子2相关酶1信号通路的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多环芳烃对金属硫蛋白缺欠小鼠微核及红细胞的影响
多环芳烃对金属硫蛋白缺欠小鼠微核及红细胞的影响张宝旭;贾凤兰;阮明;魏雪涛;蒋建军;尚兰琴;邱飞婵【期刊名称】《卫生毒理学杂志》【年(卷),期】2002(16)3【摘要】目的观察两种致癌性多环芳烃化合物二甲基苯蒽 (DMBA)和苯并 (a)芘(BaP)对小鼠骨髓多染红细胞微核发生和血液循环中红细胞数量的时相影响以及金属硫蛋白的可能拮抗作用。
方法选用雄性金属硫蛋白 (MT)基因敲除的转基因小鼠 [MT(- -) ]和野生型小鼠 [MT(+ + ) ]。
在DMBA和BaP各 5 0mg kg 1次腹腔注射染毒后 2 4、48、72和 14 4h ,观察动物骨髓多染红细胞中的微核细胞发生率和外周血液循环中红细胞数量的变化。
结果DMBA和BaP均能引起两种小鼠骨髓多染红细胞微核发生增加和外周血液循环中红细胞数量减少。
DMBA诱导微核发生的高峰在 48h。
在同种小鼠内DMBA诱导的微核细胞发生率大于BaP。
在DMBA染毒 48和 72h后MT(- -)小鼠的微核细胞率明显大于MT(+ + )小鼠 ,而在BaP染毒后两种小鼠之间差异无显著性。
在DMBA染毒 2 4h后MT(- -)小鼠的红细胞数比染毒前明显减少。
结论在该研究条件下 ,缺乏MT的小鼠的骨髓多染红细胞微核更易被DMBA诱导和发生红细胞数量减少。
提示MT具有一定保护DMBA所致遗传损伤和红细胞系统损伤的的功能。
【总页数】3页(P133-135)【关键词】多环芳烃;金属硫蛋白;小鼠;微核;红细胞;二甲基苯蒽;苯并(a)芘【作者】张宝旭;贾凤兰;阮明;魏雪涛;蒋建军;尚兰琴;邱飞婵【作者单位】北京大学医学部公共卫生学院毒理系卫生毒理学教研室【正文语种】中文【中图分类】R994.6【相关文献】1.食品添加剂Na2 SO3对小鼠嗜多染红细胞微核率的影响 [J], 党卫红;任平国;赵美琳2.参菊浙贝汤对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验的影响 [J], 卢栋;莫小芳;张亮;饶伟源;覃良3.参菊浙贝汤对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验的影响 [J], 卢栋;莫小芳;张亮;饶伟源;覃良;4.化学物苯对小鼠骨髓红细胞微核率的影响——苯对小鼠细胞遗传毒性结果分析[J], 王黎明;郑佳瑞;阮元;陈飒;蒋淑娟;熊亚隆5.亚砷酸钠对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的影响 [J], 陈美意;王逸琦;狄春红;洪玉;王靖;金乐红;谭晓华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多环芳烃胁迫下农田土壤微生物特征及高效芘降解菌筛选的开题报告
多环芳烃胁迫下农田土壤微生物特征及高效芘降解菌筛选的开题报告摘要：多环芳烃（PAHs）是一类常见的环境污染物，其对土壤微生物群落的生态效应已经引起广泛关注。
为研究PAHs污染对土壤微生物群落的影响，本研究将采集来自不同PAHs污染程度的农田土壤样品，并通过荧光定量PCR（qPCR）技术分析细菌和真菌的数量。
此外，利用高效液相色谱（HPLC）分析土壤中PAHs的含量，以评估PAHs 污染的程度。
最后，从土壤样品中分离筛选PAHs高效降解菌，并通过16S rRNA和ITS序列分析进行菌株鉴定。
介绍：PAHs是一类含有二环和以上苯环的化合物，广泛存在于人类生产和生活中。
因其毒性和持久性较高，PAHs常常是环境污染物中的主要成分。
PAHs对土壤生态系统具有很强的影响力，它们可以抑制土壤中微生物的生长和代谢，进而影响土壤肥力和植物生长发育。
因此，对PAHs污染的研究对土壤生态学和环境保护都有着重要的意义。
在本研究中，我们将采集来自不同PAHs污染程度的农田土壤样品，并使用荧光定量PCR技术分析细菌和真菌的数量。
荧光定量PCR技术是一种准确、快速、灵敏的方法，可以定量分析微生物中特定基因的数量。
通过此方法，我们可以比较分析PAHs 污染土壤和对照土壤中微生物数量的差异，进而评估PAHs污染对土壤微生物群落的影响。
此外，我们还将利用高效液相色谱（HPLC）分析土壤中PAHs的含量，以评估土壤PAHs污染的程度。
HPLC是一种高效、准确的方法，可以分离、检测、定量分析PAHs。
通过此方法，我们可以非常客观地了解PAHs污染的情况，从而指导我们的进一步研究。
最后，我们还将从PAHs污染土壤样品中分离筛选高效降解PAHs的菌株，并通过16S rRNA和ITS序列分析进行鉴定。
通过此项工作，我们可以了解PAHs降解菌的多样性和适应性，为后续的土壤修复和生物治理提供有力的支持。
结论：本研究将从PAHs污染的角度入手，研究土壤微生物群落数量和多样性的变化，评估PAHs污染对土壤生态系统的影响，并从细菌中筛选出高效降解PAHs的菌株，为日后的土壤修复提供有力支持。
多环芳烃类化合物及芳香烃受体在肿瘤发生发展中的作用
多环芳烃类化合物及芳香烃受体在肿瘤发生发展中的作用胡玉霞;常福厚;白图雅;吕晓丽;余婉佳【摘要】多环芳烃（ polycyclic aromatic hydrocarbons， PAHs）是广泛存在于环境中的污染物，其具有致癌作用已是不争的事实。
PAHs能与芳香烃受体（ aryl hydrocarbon receptor， AhR）结合，产生某些毒性反应而发挥致癌作用。
AhR是一种配体依赖性激活转录因子，被PAHs等配体激活后，调控一系列与代谢有关的基因的表达，参与诸如信号转导、细胞增殖与分化、细胞凋亡等重要的生物学过程，且与肿瘤的发生发展密切相关。
因此探讨PAHs与AhR在肿瘤发生发展中的作用，可能为肿瘤的预防和治疗提供新途径。
%Polycyclic aromatic hydrocarbons ( PAHs) are ubiquitous environmental pollutants, whose carcinogenicity is determinated.The mechanism of their carcinogenicity: PAHs are able to combine with aryl hydrocarbon hydrocarbon receptor ( AhR ) , resulting in some toxicity and carcinogenicity.AhR is a ligand-dependent activation transcription factor, which is activated by a large variety of ligands, regulating the expression of a series of gene involved in metabolism, and participating in important biological processes, such as singal transduction, cell proliferation,differentiation and apoptosis,and so on.Besides, it's closely related with the tumor development.Thus, it will provide a new approach for cancer prevention and treatment to study the role of PAHs and AhR in the development of tumor.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】4页(P185-188)【关键词】多环芳烃类;芳香烃受体;肿瘤【作者】胡玉霞;常福厚;白图雅;吕晓丽;余婉佳【作者单位】内蒙古医科大学药学院药理教研室，内蒙古自治区呼和浩特010110;内蒙古医科大学药学院药理教研室，内蒙古自治区呼和浩特 010110;内蒙古医科大学药学院药理教研室，内蒙古自治区呼和浩特 010110;内蒙古医科大学药学院药理教研室，内蒙古自治区呼和浩特 010110;内蒙古医科大学药学院药理教研室，内蒙古自治区呼和浩特 010110【正文语种】中文【中图分类】R966肿瘤的发生是多种因素共同作用的结果，其中环境因素占主导地位。
米非司酮对体外大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响的开题报告
米非司酮对体外大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响的开题报告题目：米非司酮对体外大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响研究背景和意义：米非司酮是一种口服避孕药物，其作用机制是抑制排卵和改变子宫内膜，从而避孕。
然而，长期使用米非司酮可能导致卵巢功能异常和不孕症等副作用。
卵巢是女性生殖系统中的重要组成部分，其正常发育和功能对女性生殖健康至关重要。
卵巢颗粒细胞是卵泡内的重要细胞，其细胞凋亡是卵泡发育和成熟的重要环节，也是卵巢功能的关键因素。
因此，研究米非司酮对卵巢颗粒细胞凋亡的影响，有助于了解米非司酮对卵巢功能的影响机制及其潜在的危害，为开发更安全的口服避孕药物提供理论基础。
研究内容和方法：本研究将使用体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞模型，探究不同浓度的米非司酮对卵巢颗粒细胞凋亡的影响，具体内容和方法如下：1. 大鼠卵巢颗粒细胞培养：使用大鼠卵巢颗粒细胞进行体外实验，选取年龄4-6周的大鼠卵巢组织，并采用酶解消化的方法将卵巢颗粒细胞分离出来，接着将分离出的卵巢颗粒细胞进行细胞培养。
2. 细胞凋亡检测：将分离出来的卵巢颗粒细胞分为对照组和不同浓度的米非司酮处理组，使用细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡程度，并使用荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。
3. 细胞存活率检测：选取不同浓度的米非司酮处理卵巢颗粒细胞，使用MTT法检测细胞存活率。
预期结果：本研究预计能够探究不同浓度的米非司酮对卵巢颗粒细胞凋亡的影响，并对其作用机制进行初步探讨。
具体来说，预计米非司酮能够抑制大鼠卵巢颗粒细胞的细胞凋亡，从而影响卵泡发育和成熟进程，导致不良生殖健康。
同时，预计随着米非司酮浓度的增加，卵巢颗粒细胞的存活率也会呈现下降趋势。
意义和意义：米非司酮作为一种广泛使用的口服避孕药物，其副作用和潜在危害已引起广泛关注。
本研究将有助于深入了解米非司酮对卵巢颗粒细胞凋亡的影响机制，为避免其潜在的危害提供科学依据。
此外，本研究还有望为开发更为安全有效的口服避孕药物提供理论基础，有助于提高女性的生殖健康水平，具有重要的社会意义和实用价值。
拟菊酯及多环芳烃内暴露水平与男性生殖激素相关性研究的开题报告
拟菊酯及多环芳烃内暴露水平与男性生殖激素相关性研究的开题报告一、研究背景近年来，随着化学品的广泛应用，有关于其对人体健康的影响的报道不断增加。
其中，拟菊酯和多环芳烃等有机污染物被认为可能对生殖系统健康造成负面影响。
拟菊酯是一种常用的杀虫剂，被广泛应用于农业和家庭卫生领域。
多环芳烃是一类由苯环和苯并环构成的多环芳香烃化合物，广泛存在于空气、水体和土壤中。
研究表明，这些有机污染物可通过污染食品、水源和空气等不同途径进入人体，导致内分泌系统紊乱等健康问题。
近年来，有关拟菊酯及多环芳烃对男性生殖健康的影响方面的研究不断增加，但目前仍存在许多争议和未知领域。
二、研究意义男性生殖激素在人体内起到重要的调节作用，调节着男性生殖系统的发育和正常功能。
如果男性生殖激素发生紊乱，则会对男性生殖系统产生不良影响。
因此，探究拟菊酯及多环芳烃内暴露水平与男性生殖激素之间的相关性，有助于深入了解环境污染物对人类健康的影响，同时也可以为制定预防和控制策略提供参考。
三、研究内容与方法本研究将选择一定数量的河南省洛阳市男性居民作为研究对象，通过问卷调查和复检来收集受试者的个人基本信息、生活习惯、暴露史和生殖健康状况等相关信息。
同时，采用气相色谱-质谱联用技术来测定受试者体内拟菊酯和多环芳烃的内暴露水平，采用酶联免疫吸附法（ELISA）来检测受试者的男性生殖激素水平。
四、研究预期成果本研究可进一步探究拟菊酯及多环芳烃对男性生殖激素的影响，为加强环境污染物监测和生态环境保护提供有力的科学支持。
同时，也可为分析生殖健康状况和调查生殖健康问题提供理论基础和实证数据，为生殖健康保护提供参考和建议。