液相色谱流动相基础知识-扫盲篇
液相色谱的固定相与流动相
不同固定相的选择与优势
C18
适用于中极性非极性化合物，适用于医药化 学等领域。
手性
可以实现大量手性化合物的分离，广泛应用 于制药、医药等领域。
芳香族
由于分子间的π-π堆积作坊，固定相表面可 以容纳一定分子体积。主要用于分离芳香族 或含芳香族结构物质。
离子交换
适用于分离具有离子性的化合物和混合物。
常见的流动相
液相色谱的固定相与流动 相
液相色谱（Liquid Chromatography）是一种高效、分辨率较高、适用于大多 数分子的分离技术。本文将介绍液相色谱的固定相和流动相。
固定相的介绍
作用
固定相是固定在色谱柱中的一种材料。它的 主要作用是提供一个分离的平台。
种类
常见的固定相有C18、C8、芳香族、离子交 换、手性等，不同的固定相分离作用不一样。
选择因素
在选择固定相时需要考虑分离物的化学性质 和分子结构，以及分离柱的长度和直径等。
优势
固定相具有高分离效率、高分离分辨率、操 作简单、时间短、试剂消耗小等优点。
流动相的 按一定比例调配而成。
种类
常见的流动相种类有水、有机 溶剂、盐酸等，不同种类的流 动相适用于不同的分离柱。
3 环境领域
4 化工领域
适用于环境污染物分析、有机化合物测定、 微量元素测定等。
分离和纯化有机化学品、研究石油化工原 料和煤化学反应机理等。
总结与展望
液相色谱是一种高效、分辨率较高的分离技术，应用领域较广。未来液相色谱技术将更好地结合质谱， 等离子体及纳米技术，应用的领域将更加广泛和深入。
作用
流动相可以作为分离物在色谱 柱中移动的载体，通过改变流 动相的性质，对分离物产生分 离作用。
(干货)液相色谱基础知识大全
一、基本原理高效液相色谱（HPLC）法是以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。
高效液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不足。
在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱来分析。
高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。
二、高效液相色谱分析原理（1）、高效液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。
被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。
废液流入废液瓶。
遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。
这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。
（2）、高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。
它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。
分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。
分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。
组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。
若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。
不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。
其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。
液相色谱流动相参数
液相色谱流动相参数液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析方法，广泛应用于化学、药学、生物学、食品科学等领域。
液相色谱主要通过样品溶液在固定填料上与流动相之间的相互作用，实现分离和分析的目的。
而流动相在液相色谱中起到非常重要的作用，它可以有效地影响液相色谱的分离效果。
本文将详细介绍液相色谱流动相的参数及其影响。
1.选择溶剂：流动相中的溶剂选择是液相色谱中非常重要的一个参数。
溶剂应具有较好的溶解性、低粘度、不易挥发、不产生尘埃，并且对样品具有适当的溶解度。
此外，还需考虑对填料和色谱柱的稳定性、运行效果以及对探测器的影响。
根据溶剂极性，可以将溶剂分为极性溶剂（如水、甲醇）和非极性溶剂（如乙酸乙酯、正己烷）。
在实际应用中，常常需要将不同极性的溶剂按一定比例混合，以得到适合的流动相。
2.流动相配比：在液相色谱实验中，不同样品可能需要不同的流动相配比。
流动相配比指的是极性溶剂与非极性溶剂的比例。
通过改变流动相配比，可以调整流动相的极性，从而影响样品的保留时间和分离效果。
通常情况下，流动相配比越偏向非极性溶剂，样品的保留时间越短，分离效果越差；而流动相配比越偏向极性溶剂，样品的保留时间越长，分离效果越好。
3.pH值调控：流动相中的pH值也是一个重要的参数，它可以影响样品的保留时间和分离效果。
pH值的改变会影响样品的电离状态和溶解度，从而影响样品与填料之间的相互作用。
在液相色谱实验中，通过调节流动相的pH值，可以使得一些酸性或碱性的化合物保持在不同的电离状态，实现它们的分离和分析。
4.缓冲剂的使用：为了稳定流动相的pH值，在液相色谱实验中通常需要添加缓冲剂。
缓冲剂能够在一定范围内稳定流动相的pH值，保持分离效果的稳定性。
常用的缓冲剂包括醋酸盐缓冲液、磷酸缓冲液等。
在选择缓冲剂时，需要考虑其对流动相稳定性、填料和色谱柱的影响。
5.流速控制：液相色谱实验中，流速是一个重要的参数，它会影响样品的保留时间和分离效果。
液相色谱基础知识
第一部分原理和分类一、色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。
又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLC)。
也称现代液相色谱。
二、色谱法分类按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。
气相色谱法适用于分离挥发性化合物。
GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。
液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。
LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。
此外还有超临界流体色谱法(SFC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常用CO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短，特别适用于手性化合物的拆分。
液相色谱 流动相
液相色谱流动相
液相色谱流动相的选择与配制是液相色谱分析的关键步骤。
液相色谱流动相的主要作用是帮助色谱柱中的组分分离，以实现有效的分离和分析。
流动相的选择和配制需要遵循一些基本原则。
首先，流动相应该具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
常用的流动相包括水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液。
在流动相的配制过程中，需要注意以下几点：
1.流动相溶解度应达到要求，以保证进样对流动相的影响不会导致基线不稳；
2.流动相与样品不产生化学反应，以减少对色谱峰的影响；
3.流动相的黏度要尽量小，以获得好的分离效果并降低柱压降，延长泵的使
用寿命；
4.流动相的物化性质要与使用的检测器相适应，如使用UV检测器，最好使用
对紫外吸收较低的溶剂配制；
5.流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行；
6.在流动相配制好后，一定要进行脱气处理。
同时，针对不同的分离要求和样品特点，液相色谱流动相的选择和配制方法会有所不同。
例如，对于一些难以分离的复杂样品，可能需要采用特殊的流动相或添加助剂来提高分离效果。
总之，液相色谱流动相的选择和配制需要根据具体的实验条件和要求进行优化和调整。
液相色谱的基础知识共69页
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃
液相色谱的基础知识
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6、黄金时代是在我们的前面，而不在 我们的 后面。
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7、心急吃不了热汤圆。
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8、你可以很有个性，但某些时候请收 敛。
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9、只为成功找方法，不为失败找借口 (蹩脚 的工人 总是说 工具不 好)。 Nhomakorabea•
10、只要下定决心克服恐惧，便几乎 能克服 任何恐 惧。因 为，请 记住， 除了在 脑海中 ，恐惧 无处藏 身。-- 戴尔． 卡耐基 。
END
液相色谱基本知识
液相色谱基本知识一、液相色谱原理液相色谱是一种基于不同物质在固定相和流动相之间的分配平衡原理的分离技术。
当流动相流经固定相时，不同物质在固定相中的保留时间不同，从而实现分离。
通过选择合适的固定相和流动相，以及调整流动相的速度，可以实现对不同物质的分离和纯化。
二、液相色谱种类根据固定相的不同，液相色谱可以分为硅胶柱色谱、氧化铝柱色谱、活性炭柱色谱等多种类型。
根据流动相的不同，液相色谱可以分为正相色谱和反相色谱。
正相色谱中，固定相的极性大于流动相的极性；反相色谱中，固定相的极性小于流动相的极性。
三、液相色谱操作步骤1. 样品准备：将待分离的样品进行适当处理，以便于后续的分离和纯化。
2. 装柱：将固定相装入色谱柱中，确保固定相填充均匀。
3. 平衡：在流动相中平衡色谱柱，使固定相和流动相充分接触。
4. 进样：将待分离的样品加入色谱柱，开始分离过程。
5. 洗脱：使用流动相洗脱样品中的各组分，并收集洗脱液。
6. 检测：对收集到的洗脱液进行检测，确定各组分的含量和纯度。
四、液相色谱应用领域液相色谱在多个领域有着广泛的应用，如医药、生物、环保、食品等。
在医药领域，液相色谱可用于药物的分离和纯化；在生物领域，液相色谱可用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离和纯化；在环保领域，液相色谱可用于污染物的分离和检测；在食品领域，液相色谱可用于食品添加剂、农药残留等的检测。
五、液相色谱优缺点1. 优点：液相色谱具有分离效果好、分离速度快、适用范围广等优点。
同时，液相色谱还可以与质谱等检测手段联用，提高检测灵敏度和准确性。
2. 缺点：液相色谱需要使用有机溶剂作为流动相，可能对环境和人体健康造成一定影响。
此外，液相色谱的设备成本较高，操作复杂度也相对较高。
六、液相色谱仪器设备液相色谱常用的仪器设备包括高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计、质谱仪等。
其中，高效液相色谱仪是实现液相色谱分离的核心设备，它包括泵、进样器、色谱柱、检测器等部分。
hplc的流动相
hplc的流动相HPLC的流动相HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析方法，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
在HPLC分析过程中，流动相是至关重要的组成部分，它直接影响着分析结果的准确性和可靠性。
流动相是指在HPLC柱中流动的溶剂或溶液，它能够将样品带入柱中进行分离。
流动相的选择要根据待分析物的性质和目的来确定，常见的流动相包括有机溶剂和水的混合物，以及酸性或碱性缓冲液等。
有机溶剂是HPLC中常用的流动相之一。
有机溶剂具有良好的溶解性和流动性，能够有效地溶解待分析物，并在柱上产生合适的保留时间。
常见的有机溶剂有甲醇、乙醇、乙腈等。
选择有机溶剂时，要考虑其溶解度和挥发性，以及对柱和检测器的影响。
水是另一种常用的流动相。
水是广泛存在于自然界中的溶剂，具有良好的溶解性和流动性。
在HPLC中，水常用作极性物质的流动相，能够有效地分离极性化合物。
此外，水还可以与有机溶剂混合使用，以调节溶剂的极性，实现对不同化合物的分离。
除了有机溶剂和水，酸性或碱性缓冲液也常用作流动相。
酸性或碱性缓冲液可以调节流动相的pH值，对某些具有酸碱性的化合物具有良好的溶解性和分离能力。
常见的缓冲液有磷酸盐缓冲液、醋酸缓冲液等。
选择缓冲液时，要考虑其缓冲能力、稳定性以及对柱和检测器的影响。
在HPLC分析中，流动相的选择要根据待分析物的性质和目的来确定。
一般来说，对于非极性物质，可以选择有机溶剂作为流动相；对于极性物质，可以选择水或酸碱缓冲液作为流动相。
此外，还需要考虑流动相与柱和检测器的相容性，以及流动相的流速和温度等因素。
HPLC的流动相是HPLC分析中不可或缺的组成部分，它直接影响着分析结果的准确性和可靠性。
在选择流动相时，需要根据待分析物的性质和目的来确定，并考虑流动相与柱和检测器的相容性。
合理选择和优化流动相的使用，可以提高HPLC分析的效果，为科学研究和生产实践提供可靠的数据支持。
液相色谱流动相基础知识-扫盲篇
液相色谱流动相基础知识-扫盲篇一、液相色谱流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在SPME填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。
因此，k值是流动相组成的函数。
塔板数N一般与流动相的粘度成反比。
所以选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料会计考试有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
②纯度。
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
③必须与检测器匹配。
使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相溶剂瓶，以提高灵敏度。
④粘度要低（应<2cp）。
高粘度溶剂溶剂瓶会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。
最好选择沸点在100℃以下的流动相。
二、液相色谱流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。
对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸会计考试的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。
分析弱酸经济师样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。
注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的相互网上培训作用，减轻或消除峰拖尾现象。
HPLC(液相色谱)常识及疑难详解(附实际操作图解)
1 液相色谱基础知识1.1 液相色谱名词术语Mobile phase：流动相，在色谱柱中存在着相对运动的两相，一相为固定相，一相为流动相。
流动相是指在色谱过程中载带样品（组分）向前移动的那一相。
Stationary phase：固定相，柱色谱或平板色谱中既起分离作用又不移动的那一相。
Gradient elution: 梯度洗脱,一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比, 使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
Detection wavelength：检测波长，retention time：保留时间，被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间Peak:峰Peak Base：峰基线，经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴Peak Height：峰高，色谱峰顶点至峰底的距离。
Peak Width：峰宽，色谱峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点间的距离Peak Width at Half Height：半峰高宽Peak Area：峰面积Tailing Peak: 后沿较前沿平缓的不对称峰Leading Peak:前沿较后沿平缓的不对称峰Ghost Peak: 假峰，并非由试样所产生的峰Baseline Drift:基线漂移Baseline Noise:基线噪音Band Broadening:组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象. 1.2 流动相1.2.1 流动相类型正相液相色谱流动相：一般正相色谱固定相极性大于流动相极性，采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。
常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等），极性小的组分先出柱。
反相液相色谱流动相：一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。
液相色谱中固定相和流动相的概念
在液相色谱中，流动相通过样品混合物，使其与固定相发生相互作用，从而导 致样品中的成分以不同速度通过柱，实现分离。分离的过程基于样品成分在固 定相和流动相之间的相互作用和亲和性。
总体而言，液相色谱通过调整固定相和流动相的性质，使不同的化合物以不同 的速度在柱中传播，从而实现对混合物中化合物的分离和检测。
2. 流动相（Mobile Phase）： • 定义： 流动相是在液相色谱柱中流动的溶剂，它将样品与固定相 接触并推动它们通过柱，实现分离。流动相的组成和性质会对分 离过程产生重要影响。 • 性质： 流动相通常是液体，可以是有机溶剂、水或它们的混合 物，具体取决于分离的目标和所使用的固定相。例如，在反相液 相色谱中，水和有机溶剂（如甲醇或乙腈）的比例将影响化合物 的亲水性与亲油性。
液相色谱中固定相和流动相的概念
在液相色谱（Liquid Chromatography，简称 LC）中，固定相和流动相是两 个关键的概念，它们共同作用以实现化合物的分离。
1. 固定相（Stationary Phase）： • 定义： 固定相是液相色谱柱中的不动的部分，通常涂覆或填充在 柱内。这个相对于流动相而言是固定不动的。 • 性质： 固定相通常是一种固体或涂层，它的性质直接影响到分离 的选择性。不同类型的固定相对于不同类型的化合物具有不同的 选择性。例如，正相液相色谱使用亲油性的固定相，而反相液相 色谱则使用亲水性的固定相。
液相色谱流动相说明
液相色谱流动相说明什么是液相色谱？液相色谱（Liquid chromatography，LC）是一种分离技术，主要用于生化、制药、环境、食品等各个领域中的物质分离、纯化和分析等工作。
液相色谱分为两种类型：常规液相色谱和高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）。
常规液相色谱分离速度较慢，分离效率较低，而HPLC以其高分离速度和高分离效率迅速地成为了现代液相色谱分离技术的主流。
液相色谱的原理液相色谱的分离原理基于样品组分在流动相和固定相的相互作用上。
样品经过色谱柱时出现组分分离，分离的程度取决于样品组分在固定相和流动相上的亲疏性。
流动相的性质可以通过改变其成分、溶剂极性、离子强度和缓冲能力等来控制。
液相色谱的流动相液相色谱中的流动相通常是液体，而常用的液体流动相包括乙腈、甲醇、水、乙酸等。
流动相的选择要考虑到样品的性质、固定相的性质、分离效率、检测方法等多种因素。
通常情况下，液相色谱使用的流动相是复合流动相（Mobile phases consist of two or more solvents，常称为BOTH-EL），即由两种或多种有机溶剂组成的混合液体。
BOTH-EL有利于提高分离效率，提高检测灵敏度，并保证了流动相的气味、毒性和等级相容性。
液相色谱流动相的性质溶液循环性能在液相色谱中，流动相要在色谱柱中发生循环。
因此，流动相循环性能的好坏对于液相色谱分离效果具有重要影响。
如果流动相流量不稳定或有间歇流动现象，可能影响某些成分的分离峰形，使峰宽加大，峰与峰之间的分辨率下降。
极性和离子强度液相色谱的流动相中，极性和离子强度较低的流动相通常可加速样品在固定相上的迁移，使分定速度提高，但峰形会变得稍宽，可能影响分离效率。
同时，离子强度也会影响某些化合物的分离效果，这是由于流动相离子强度的影响。
等级相容性液相色谱流动相的等级相容性通常指流动相成分中两种或多种有机溶剂的等级。
液相色谱法基本知识
第一节 概 述
等，作为分析时选择余地大；而气相色谱并不可能的。 ③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般有利
于色谱分离条件的选择。 （3）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质在液
相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而在 气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。 （4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易，而 且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺 乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际 应用中，这两种色谱技术是互相补充的。
组分的差速迁移，从而实现分离。分配系数（K）或分配比
（k）小的组分，保留值小，先流出柱。然而与气相色谱法 不同的是，流动相的种类对分配系数有较大的影响。
21
第四节 液—固色谱法
（4）应与所用检测器相匹配。例如利用紫外检测器时，溶 剂要不吸收紫外光。
（5）容易精制、纯化、毒性小，不易着火、价格尽量便宜 等。
在液-固色谱中，选择流动相的基本原则是 极性大的试 样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相。
为了获得合适的溶剂极性，常采用两种、三种或更多种 不同极性的溶剂混合起来使用，如果样品组分的分配比k值 范围很广则使用梯度洗脱。
3
第一节 概 述
的70 ~ 80%。 （2）液相色谱能完成难度较高的分离工作
因为： ①气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与分配平衡
过程，与样品分子无亲和作用，样品分子只与固定相相 互作用。而在液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样 品分子，为提高选择性增加了一个因素。也可选用不同 比例的两种或两种以上的液体作流动相，增大分离的选 择性。 ②液相色谱固定相类型多，如离子交换色谱和排阻色谱。
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第二节 高效液相色谱仪
液相色谱法基本知识共49页文档
我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
液相色谱法基本知识
1、合法而稳定的权力在使用得当时很 少遇到 抵抗。 ——塞 ·约翰 逊 2、权力会使人渐渐失去温厚善良的美 德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感 ；权力 不易确 定之处 始终存 在着危 险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金 子可以 拉着它 的鼻子 走。— —莎士 比
液相色谱基础知识
紫外可见检测器
紫外可见检测器
原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收 定量基础：Lambert-Beer定律，A＝KCL 优点：1）对温度和流速变化不敏感
2）可用于梯度分析 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质
紫外可见检测器
光栅
l
样品池
Ein
Eout
光电管
D2 / W 灯
Ein
Ein
参比池
返回
流动相注意点
离子对试剂的使用 具有缓冲盐流动相的使用 分析结束及开
始 流动相平衡 加快平衡时间 异丙醇的使用
LC检测器
紫外可见检测器（UV/VIS） 二极管阵列检测器（PDA） 示差检测器（RID） 电导检测器（CDD） 荧光检测器（RF） 电化学检测器（L-ECD） 质谱检测器（MS） 蒸发光散射检测器（ELSD）
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流路中形成气泡引起的问题
改变保留时间和峰面积
流动相中形成气泡对液流的不良影响 泵中形成气泡使液流波动
峰变形
柱中气泡形成和累积使流动相绕流
尖峰或锯齿状噪声
检测池中气泡形成和累积产生基线噪声
输液泵
输液泵类型： 注射泵 柱塞往复泵 隔膜泵
输液泵控制方式：
恒流控制 恒压控制
柱塞往复泵
马达和凸轮
液相色谱基础知识
一、色谱起源
石油醚
色素
碳酸钙颗粒
色谱
组分
HPLC的分离类型
正相色谱 (NP-HPLC) 反相色谱 (RP-HPLC) 反相离子对色谱 (RPIC) 离子交换色谱 (IEC) 空间排阻色谱 (SEC) 手性化合物分离模式(Chiral separation
mode)
液相色谱流动相
液相色谱流动相
液相色谱，简称LC，是美国麻省理工学院科学家威尔逊在1954年提出的一种新技术，它结合了毛细力学和颜色分析。
液相色谱定义是在一定的流动相中，利用高效的色谱分离介质来精确分离和分析离子性有机物（包括分子量较低的有机物）或其他物质的理论和技术。
流动相是液相色谱中最重要的一环，它决定着分离效果。
它通常由低分子量溶剂组成，可以是有机溶剂或无机溶剂，流动相的参数会对分离效果产生重大影响；参数设计和分离条件设置是一项很重要的工作。
有机溶剂、混合溶剂和新型离子液体都可以作为流动相。
作为分离剂，其选择要求考虑分子的结构、大小、电荷和溶剂的性质。
通常情况下，倾向于使用抑制作用较小的溶剂，使保留时间更长，分离效果更好。
在实际操作过程中，应注意溶剂比液体、溶剂比液体中的变化等。
若出现溶剂分离，则需做出相应的调整，即增大比液体、减少流速、加入其他溶剂调整水的极性、改变柱的温度等。
正确运用液相色谱技术，可大大提高分离效率，得到可靠的结果。
总之，正确的流动相是保证液相色谱的准确性的关键。
合理的参数设置和恰当的溶剂选择，可大大提高分离效率，得到更准确的结果。
食品冷链品控专业《液相色谱基础知识-流动相》
• 流动相及样品的预处理
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液相色谱对流动相的要求
• 除色谱柱对流动相对的要求外，还有∶ • 与检测器匹配 • 脱气 • 避免卤素离子（不锈钢系统） • 溶剂的粘度 • 防止细菌的生长
第二页，共五页。
流动相的脱气
• 流动相脱气的目的
• 使色谱泵的输液准确 • 输液均匀准确，并且脉动减小 • 保留时间及色谱峰面积的重现性提高 • 提高检测的性能
• 通惰性气体（一般用氦气）
• 可保持连续脱气，多用于低压梯度 • 在线脱气机 • 可保持连续脱气，多用于低压梯度
第四页，共五页。
内容总结
流动相及样品的预处理。简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。可保持连续脱气，多 用于低压梯度
第五页，共五页。
• 防止气泡引起的尖峰
• 基线稳定，信噪比增加 • 溶剂的紫外吸收本底降低
• 保护色谱柱 • 减少死体
• 加热 • 简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流
动相组成的变化
• 抽真空 • 同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果
• 超声波 • 简单，但效果不理想。
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液相色谱流动相基础知识-扫盲篇
一、液相色谱流动相的性质要求
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在SPME填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。
因此，k值是流动相组成的函数。
塔板数N一般与流动相的粘度成反比。
所以选择流动相时应考虑以下几个方面：
①流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料会计考试有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧
化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
②纯度。
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
③必须与检测器匹配。
使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差
折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相溶剂瓶，以提高灵敏度。
④粘度要低（应<2cp）。
高粘度溶剂溶剂瓶会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使
分离时间延长。
最好选择沸点在100℃以下的流动相。
二、液相色谱流动相的pH值
采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。
对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸会计考试的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。
分析弱酸经济师样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L
三乙胺溶液。
注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的相互网上培训作用，减轻或消除峰拖尾现象。
所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。
三、液相色谱流动相的选择
在化学键合相色谱法中，溶剂的洗脱能力直接与它的极性相关。
在正相色谱中，溶剂的强度随极性的增强而增加；BR>正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。
反相色谱的流动相通常以水作网上辅导基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。
极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。
一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。
但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统，但价格较贵。
在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，也需采用梯度洗脱技
术。
四、液相色谱流动相的滤过
所有溶剂使用前都必须经0.45μm（或0.22μm）滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外（除非在标
签上标明"已滤过"）。
用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相（脂溶性）滤膜和水相（水溶性）滤膜。
有机相滤膜一般用于网上听课过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。
水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解！溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。
对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后
滤过，首选有机相滤膜。
现在已有混合型滤膜出售。
五、液相色谱流动相的脱气
所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。
气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。
此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。
溶解培训辅导气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。
溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、溶剂瓶、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移。
在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。
在某些情况下，荧光响应可降低达95%。
在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。
除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测东奥会计应用中的灵敏度。
超声培训辅导脱气比较好，10-20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了，此法不影响溶剂组成。
超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不
要高出水面太多。
六、液相色谱流动相的贮存
流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。
因许多有机溶剂如甲醇、
乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受经济师。
这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。
贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相溶剂瓶。
磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用。
如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在短期内使用
完毕。