血片制作
疟原虫镜检技术操作规范
疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范。
一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液、棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm 深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。
3、涂制血膜用推片的左下角刮取玻片上的血液4～5μl，涂于载玻片的第三格（靠近磨砂侧），由里向外一个方向旋转2～4圈，涂成直径为0.8～1.2cm的圆形厚血膜；再用该角沾取血液1～1.5μl血置于载玻片的中心点即（第四格前缘中点）；接着用干棉球或卫生纸擦净推片角上的血渍；最后用推片的下缘置载玻片的中心点（1～1.5μl血液处），当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速推成舌状薄血膜，即（薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部）。
如（图1）、（图2）疟原虫镜检涂制血膜方法示意图2薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）；厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。
二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。
血涂片的制作流程
血涂片的制作流程
血涂片是一种常见的临床检查方法，用于观察血液中的细胞形态和数量，以帮助医生诊断疾病。
下面将介绍血涂片的制作流程。
1.采集血液样本
首先需要采集患者的血液样本。
通常采用的方法是在患者的手臂上绑上一条绷带，使血管充血，然后用一根针头穿刺血管，将血液采集到一根试管中。
2.制作血涂片
将采集到的血液样本滴在玻片上，然后用另一根玻片将其涂开，使血液均匀地分布在玻片上。
这个过程需要非常小心，以避免血液样本的污染或损坏。
3.固定血涂片
将制作好的血涂片放在一个固定剂中，通常使用的是甲醛或乙醇。
这个过程可以固定细胞的形态和结构，以便更好地观察。
4.染色
将固定好的血涂片放在染色剂中，通常使用的是伊红染或吉姆萨染。
这个过程可以使细胞更加清晰地显示出来，以便更好地观察和分析。
5.观察和分析
将染好色的血涂片放在显微镜下观察和分析。
医生可以通过观察细胞的形态、大小、数量和排列方式来判断患者的健康状况，例如是否存在贫血、感染或癌症等疾病。
血涂片制作流程需要非常小心和精确，以确保获得准确的结果。
这个过程需要专业的技能和经验，只有经过专业的培训和实践，才能够熟练掌握。
疟原虫镜检技术操作规范
疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范。
一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液、棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。
3、涂制血膜用推片的左下角刮取玻片上的血液4～5μl，涂于载玻片的第三格（靠近磨砂侧），由里向外一个方向旋转2～4圈，涂成直径为0.8～1.2cm的圆形厚血膜；再用该角沾取血液1～1.5μl血置于载玻片的中心点即（第四格前缘中点）；接着用干棉球或卫生纸擦净推片角上的血渍；最后用推片的下缘置载玻片的中心点（1～1.5μl 血液处），当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速推成舌状薄血膜，即（薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部）。
如（图1）、（图2）疟原虫镜检涂制血膜方法示意图2薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）；厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。
二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。
血片制作与染色
如何确定疟原虫血片为阴性
● 检查全部厚血膜未查见疟原虫 ● 最少检查100个厚血膜油镜视野未查见
疟原虫（临床病人）
疟原虫与其它物体的鉴别
染色过程中所落在血膜上的灰尘、真菌、孢 子、水中原虫等误诊为疟原虫，应注意鉴别。 ● 灰尘和染色液的色素沉着：易被误认为是 疟色素，可依据其颗粒形状、大小、色泽及有 无核与胞浆的结构来鉴别。是否在一平面上， 若不在同一平面者一般不是疟原虫。
疟原虫镜检技术
显微镜检查疟原虫技术
1.血样采集 2.血片的染色与制作 3.染色时注意事项 显微镜的使用与保护
1.使用时 2.使用后
采集血样
采集血样涂片时，首先要核对患者的 姓名和年龄
采集血样
采血部位和取血方法：
耳垂或无名指，通常 在耳垂取血，先用75%酒 精棉球消毒取血部位， 待酒精干后，用左手拇 指和食指紧捏耳垂上方 或无名指指尖，右手持 消毒针迅速刺入皮肤， 不宜过深或过浅。
转换器 物镜
通光孔 载物台
光源 镜座
调节器
认识显微镜
目镜 镜筒
镜臂 弹簧夹尺
推进尺 粗细螺旋
开关
显微镜的使用
（1）使用时 : 打开电源，调节亮度，聚光 器上升至最高位置，油镜与聚光器对接，放 入待检血片，镜台上升直至油镜与血膜接触， 然后镜台徐徐下降，出现视野用微调调节。
(2) 使用后: 调节亮度至最小，关闭电源， 镜台下调，擦拭干净油镜，物镜转离聚光器， 聚光器下调，遮盖防尘罩。
薄血膜： 取洁净的载 玻片2张，1张平置在桌 上，以左手拇指，食指
夹持载玻片两端，用另
一张边缘平滑的载玻片
做推片，用推片一端边
缘的中点从取血部分取
血片制作 PPT课件
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3
血片制作染色与疟原虫计数
血膜的制作 用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂
呈薄膜状，称薄血膜；一种是血辅在玻片上面。
发热病人血片 2019/9/7
标本片 4
52006-12-13
取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普 查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期 疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
2019/9/7
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血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染液种类：目前所用的血片染色液，虽然名称 很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的染液 变化过来的。总的可分为水溶液和酒精溶液 两大类，前者包括罗氏、西氏（Simon)、 J.S.B氏染液等，后者包括利氏 (Leishman)、瑞氏和吉氏染液等。这些染 液中的主要染剂都包含美兰、伊红和由美兰 氧化所成的天青，所以称多色性染剂。
涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜 涂在一张载片上。方法是将载片分为6等分， 第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3 格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。 作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个； 门诊和发热病人血片每片1人，涂
涂2个厚血膜1个薄血膜，以
标标签签
防血膜脱落而影响检查；
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血片制作与染色镜检
2 采血制片 自耳垂或手指采血，厚血膜的血量约为火柴 头大小（4-5mm3），滴在载玻片的1/3处；薄血膜的 血量为其1/4，滴于玻片中央，立即用边缘整齐光滑的推 片与玻片之间成30-40度角平直向前推成薄血膜。再用推 片的一角将厚血滴涂制成直径约0.8-1cm的圆形厚血膜， 厚度以能清晰映出报刊上的铅字为宜。薄片的厚度为镜下 只见一层均匀紧密排列的红细胞为宜。血片涂制好后用 HB铅笔在干燥的薄血膜底部写上受检者的姓名或编号。 对疑为恶性疟者，可用皮肤划痕法刮取渗出的体液作涂片 染色，此法检出率较高，且可查见末梢血液中不常看到的 恶性疟原虫的滋养体和裂殖体。
血涂片的制备
血涂片的制备
血涂片是一种常见的医学检查方法，它可以通过显微镜观察血液细
胞的形态和数量，从而帮助医生诊断疾病。
下面将从材料准备、制备
步骤和注意事项三个方面介绍血涂片的制备方法。
一、材料准备
制备血涂片需要的材料有：血液样本、玻璃片、无菌棉签、生理盐水、甲醇、乙醇、甲苯、染色剂（如吉姆萨染色液）等。
二、制备步骤
1.取一块干净的玻璃片，用无菌棉签在玻璃片上涂上一层薄薄的血液样本。
2.将玻璃片放在通风处晾干，使血液样本充分干燥。
3.将玻璃片浸泡在生理盐水中，轻轻摇晃，使血液样本充分溶解。
4.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
5.将玻璃片浸泡在甲醇中，固定细胞形态。
6.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
7.将玻璃片浸泡在乙醇中，使细胞脱水。
8.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
9.将玻璃片浸泡在甲苯中，使细胞透明。
10.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
11.将玻璃片浸泡在染色剂中，染色。
12.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
13.将玻璃片放在通风处晾干，制备完成。
三、注意事项
1.制备血涂片时要注意无菌操作，避免污染。
2.血液样本要新鲜，避免血液凝固。
3.制备过程中要注意时间控制，避免细胞形态变化。
4.染色剂的选择要根据需要进行，不同染色剂对细胞的染色效果不同。
5.制备完成后要注意保存，避免受潮和污染。
总之，血涂片的制备是一项细致的工作，需要严格按照步骤进行操作，才能得到准确的检查结果。
希望本文能对大家有所帮助。
血片制作
M+Cl-+Na+E→ME↓+NaCl
美蓝 伊红伊红化美蓝（瑞士染料）
将适量的ME溶解在甲醇中，即成为瑞氏染液。甲醇的作用可使ME溶解，解离为M+和E－，这两种有色离子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。甲醇的另一个作用是有很强的脱水作用，可将细胞固定为一定形态，当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状结构，增加细胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。
②.磷酸盐缓冲液（pH6．4～6．8）
磷酸二氢钾（KH2PO4）0．3g
磷酸氢二钠（Na2HPO4）0．2g
蒸馏水加至1000．0ml
配好后用磷酸盐溶液校正pH，如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
（3）操作
①用蜡笔在血膜两头划线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上。
1．瑞氏染色法（Wrightstaining）
本法的特点是将固定和染色合并在一起进行，手续简便，染色时间短，对白细胞中的特异性颗粒着色较好，但对核的着色较差。
（1）原理瑞氏染粉是由伊红和美蓝混合后组成的一种中性盐染料。伊红是一种酸性染料，为伊红钠盐，其有色部分为阴离子；美蓝是一种碱性染料，为氯化美蓝，有色基团为阳离子。如以M+代表美蓝，以E-代表伊红，其反应式为：
②用瑞氏染液3～5滴覆盖整个血膜，固定细胞0．5～1分钟。
③滴加等量或稍多的缓冲液，用吸球将其与染液吹匀，或者摇动玻片染色5～10分钟。
④慢慢摇动玻片，然后用流动水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥后（或用滤纸吸干），即可镜检。
2．姬姆萨染色法（Giemsastaining）
一张良好的血片，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，膜的边缘要整齐，并留有一定的空隙。
血涂片制作与染色
血涂片制作与染色1.血涂片的制备血涂片的制备需要用到标本采集工具如无菌化的注射器、针头、试管、硅化玻璃片以及一些实验室试剂如无菌生理盐水、巴氏溶液和电解溶液等。
具体步骤如下：（1）将患者指尖的表面清洁卫生。
（2）选择一个适合的静脉穿刺点，通常是患者的中指或无名指。
（3）用酒精棉球清洁穿刺点，使其干燥。
（4）将无菌化的注射器连接到无菌生理盐水的瓶口上，并抽取一定量的生理盐水。
（5）将针头插入穿刺点后，将生理盐水匀速注射入患者的静脉内。
（6）在生理盐水滴入试管的同时，用眼微观检查，如果有血液进入注射器和管道内，即可采集。
宜用自来水洗净试管外表面，先不带盖座放倾空液。
（7）用试管夹夹住注射针，将针头推入试管内，然后轻轻射入试管底部液面下，同时向上抽手，保持抽液缓慢，可避免气泡产生。
（8）将采集到的血液缓缓带走，同时注入试管内，让其与100ml巴氏溶液进行搅拌。
（9）将混合液倾入瓷漏斗中，从中取出干燥了的血细胞。
2.血涂片的染色血涂片染色可使用湿涂片法或干涂片法，其中湿涂片法应用更广泛。
下文将以湿涂片法为例进行介绍。
（1）取一根硅化玻璃片，用纸巾或棉球擦拭干净。
（2）用血涂片染色钳将准备好的血涂片床放在玻璃片上。
（3）将一滴适量的Wright液倒在血涂片的中段。
Wright液包含了染色剂和辅助剂，其中主要成分是吡啶基甲重氮盐和三氧二氮菲盐。
（4）用另一根玻璃片的尾部将液滴均匀地扩开，并迅速在血涂片上来回涂抹，在染液与血涂片上充分接触并混合。
（5）保持血涂片在室温下静置5-10分钟，以促进染色反应的进行。
（6）用蒸馏水冲洗玻璃片上的染料，并将其晾干。
3.血涂片的观察与分析观察血涂片需用光学显微镜，常规放大倍数为1000倍。
观察血涂片时，应注意血细胞的形态、大小、核形态、细胞质染色情况及相关细胞间的比例等。
根据各种细胞的数量和比例，可以初步评估出是否存在异常细胞，及其可能的病理性质，如感染、贫血等。
总结：血涂片制作与染色是血液检查中重要的步骤之一，它能够帮助医生判断病情，制定治疗方案。
01血片制作与染色
二、血片制作
薄血膜血量
取洁净的载玻片 2张，1张 以左手拇指，食指夹持载
玻片两端，用另一张边缘
平滑的载玻片做推片，用 推片一端边缘的中点取血 约1~1.5ul的血量（小米粒 大小），使血滴与平置的 载玻片接触，并形成 25~30 度夹角，待血液向
两侧扩展宽约2cm时，均
匀而迅速地轻轻向左推出 （约2.5cm长）。
间越久，染色力越强。通常在染液配制1~2周后才使用，盛装染液的瓶子应加
塞盖密，以防吸潮而影响染液质量。 3.染液稀释后使用时间 吉氏染液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在酒精溶 液中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。因此，必须在稀释 染液当时使用，一般在半小时内染色力最强。
900 ml
900 ml 900 ml
三、血片染色
单张血片染色
在量筒内加2ml缓冲液或 ph7.0~7.2净水， 滴加吉 氏原液4滴(每ml2滴）， 混匀，然后滴在已充分干
躁的厚薄血膜上，染色
30min。清水缓缓冲洗， 晾干（厚血膜朝下），等 待镜检。
三、血片染色
成批血片染色
根据血片多少来配应用液 选用ph7.0~7.2净水为好 吉氏原液的加量要根据厂 商提供的技术参数，最好 试染后再批量染。 可以用染色架
五、疟原虫镜检与其它鉴别
镜检结果登记
看完血片后，若为阳性应立即按血片编号登记原虫的
种、期、以防差错。为记录方便，对疟原虫的种、期
可使用英文字母缩写作为代号： 间日疟=P.v 三日疟=P.m 环状体=R 恶性疟=P.f 卵形疟=P.o 大滋养体=T
裂殖体=Ｓ
配子体=Ｇ
五、疟原虫镜检与其它鉴别
三、血片染色
缓冲液的配制
血片制作染色课件
血片的染色
第二步：染色用水和冲洗用水配制
常用中性的蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水； 用pH7.0～pH7.2的缓冲液。
血片的染色
第三步：染色
薄血膜经甲醇固定干燥后， 将血片平放
用PH7.0-7.2的磷酸缓冲液 (PBS)或蒸馏水将吉氏原液 稀释；
染色20-30分钟，晾干镜检。
血片的染色
久，颜色偏酸；
染色时间 ：染色时间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温而适当增减。 冲洗方法：染色后不要直接将染液倒掉，沿玻片及染缸边缘加水使染液表面 益出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒粘污血膜。
染色质量影响因素
染色稀释用水: PH7.0-7.2清洁水。
用水过酸，可致感 染的RBC上的点彩 染不出来； 用水过碱，则使薄 血膜上的RBC染成 灰蓝色，致使R的 胞浆难以辨论。
厚血膜溶血染色 放臵多时未染色的血 片（2天以上，薄片已 用甲醇固定），在染 色之前，须在厚血膜 上用清水进行溶血， 待血膜全部溶解后倒 掉，用吉氏染液染色, 清水漂洗干净,晾干。
血片的染色
如果血片偏红,说明
标 准
偏 碱
血片制作影响因素
载玻片必须清洁无油污，理想的薄血膜是一层血细胞均匀 分布不重叠、无裂缝、无皱折和空泡，血膜末端呈舌状； 厚血膜厚度以一个油镜视野内可见5-10个白细胞为宜； 血片制作场所要保持清洁，以免尘埃沾污血膜，防止苍蝇 等舔食血膜； 制成的血片在未干前不能倾斜放臵，待其自然干燥，不要 加热，加热会使原虫变形，影响镜检结果．
血片制作
第二步：患者信息的核实
首先要核对患者的姓名、年龄和住址。
非常重要
血片制作
第三步：血样的采集 部位：指尖、耳垂
制作血涂片的实验报告
制作血涂片的实验报告
《制作血涂片的实验报告》
实验目的：
本实验旨在通过制作血涂片的过程，观察和学习血液的结构和特点，以及掌握制作血涂片的方法和技巧。
实验材料：
1. 血液样本
2. 血涂片
3. 血涂片制作工具（包括玻璃片、涂片钳、涂片刷等）
4. 显微镜
5. 染色剂（如甲苯胺蓝）
实验步骤：
1. 取一滴血液样本滴在玻璃片上，用另一块玻璃片将其涂抹开。
2. 将涂有血液的玻璃片放在涂片钳上，用涂片刷轻轻拭去多余的血液。
3. 将涂有血液的玻璃片在空气中晾干，或用吹风机吹干。
4. 将干燥的血涂片放入染色剂中浸泡片刻，然后取出晾干。
5. 将制作好的血涂片放在显微镜下观察，记录所见的血液结构和特点。
实验结果：
通过显微镜观察，我们可以清晰地看到血细胞的形态和数量。
红细胞呈现出圆形或椭圆形，中间凹陷，颜色鲜艳；白细胞呈现出不同的形态和大小，有的呈现出颗粒状，有的呈现出光滑的形态。
血小板呈现出颗粒状，大小不一。
实验结论：
通过本次实验，我们成功地制作了血涂片，并通过显微镜观察到了血液的结构
和特点。
通过观察，我们了解到了血细胞的形态和数量，对血涂片的制作方法
和技巧也有了更深入的理解。
这对我们日后的实验和研究工作具有重要的意义。
总结：
制作血涂片的实验过程虽然简单，但需要细心和耐心。
通过这次实验，我们不
仅学习到了血涂片的制作方法，还对血液的结构和特点有了更深入的了解。
希
望通过今后的实验和学习，我们可以进一步掌握更多的实验技巧和知识，为科
学研究和医学工作做出更大的贡献。
血片制作染色和血检质量控制(5)
（2）染液的新旧 新配制的染液因色素尚 未充分溶解，染色力较弱且常呈现偏碱性。 染液存放时间越久，染色力越强。通常在 染液配制1~2周后才使用，盛装染液的瓶 子应加塞盖密。以防吸潮而影响染液质量。
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影响染色效果的因素
（3）染液稀释后使用时间 吉氏和瑞氏染 液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化 产生的天青，三者能在酒精溶液中溶解， 但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生 沉淀。因此，必须在稀释染液当时使用， 一般在半小时内染色力最强。
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二、血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染液种类：目前所用的血片染色液，虽然名称 很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的染液 变化过来的。总的可分为水溶液和酒精溶液 两大类，前者包括罗氏、西氏（Simon)、 J.S.B氏染液等，后者包括利氏 (Leishman)、瑞氏和吉氏染液等。这些染 液中的主要染剂都包含美兰、伊红和由美兰 氧化所成的天青，所以称多色性染剂。
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三、发热病人血检的质量控制 2 、血检对象
表 各类发热病人血检原虫阳性率
血检人数 阳性人数 阳性率%
10931 24733 10602 96084 670 293 76 4 64.49 2.35 0.02 0.004
临床初诊
疟疾 疑似疟疾 发热原因不明 其它
占总阳性人数 %
64.24 28.09 7.29 0.38
因此血检的目的在于通过对发热病
人血检达到确诊疟疾病例。它的意 义在于及时发现传染源和明确感染 的疟原虫种类，以能针对虫种选择 正确的治疗方案。
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三、发热病人血检的质量控制 2 、血检对象
在疟疾严重流行时期，卫生部
有关文件中提出，疟区的各级 医疗卫生单位，都要把发热病 人血检疟原虫列为常规。
疟疾血膜制作及染色技术
疟疾血膜制作及染色技术一、血片的制作1.材料准备载玻片：新玻片浸入有液态洗涤剂的清水中10-20分钟，干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干备用。
1. 2. 采血针：一次性 . 玻片盒：防止污染和昆虫吸食血膜 1. 4. 75%酒精棉球：采血前后消毒 . 记号笔：玻片上书写号码2.血片的制作（厚、薄血膜）用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂成薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。
最好一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜。
薄血膜涂片薄血膜取洁净的载玻片1张，左手持载玻片平置,右手持推片，推片一端边缘的中点刮取血液~微升（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片中线接触，待血液向两侧扩展约2cm宽时，以25°～35°夹角均匀而迅速地向左推成舌状薄血膜（约长）。
厚度以薄血膜上的红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳。
厚血膜涂片用推片的一角刮取4~5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴涂于载玻片的中央偏右处，由里向外一个方向旋转2圈，涂成直径~的圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求（厚度以1个油镜视野内可见5~10个白细胞为宜）。
血膜位置通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。
方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编用；厚血膜涂在第3格中央；薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。
血片的制作编号血膜制成后，立即在玻片面上写上受检者的号码（姓名）、单位(地址)、制片日期、以防差错；待血膜干后依次按顺序插入标本盒内。
血膜制作注意事项1. 清洗玻片，且勿碰撞、磨损2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内3. 血膜应自然干燥，要充分干燥。
二、血片染色：（吉氏染液的染色方法）1. 血膜染色前的处理固定薄血膜血片干燥后，用吸有甲醇的吸管在薄血膜表面轻轻涂抹，自然干燥。
注意固定时甲醇不要接触厚血膜，否则会影响厚血膜的溶血。
溶解厚血膜血片干燥后，用滴管滴水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倒去，晾干。
血片的制作和染色精讲课件
染色步 骤
预处理
清洗血片，固定，脱色等。
染色
将血片浸泡在染料溶液 中，根据需要调整染色
时间和温度。
洗涤
干燥
用清水或缓冲液冲洗掉 多余的染料。
晾干或用吹风机吹干血片。
染色注意事 项
避免交叉污染
确保每种染料都用于相应的细 胞成分染色。
控制染色时间和温度
过长的染色时间或过高的温度 可能导致非特异性染色。
避免污染
确保环境清洁，避免灰尘、毛发等杂质污染血膜。干燥时间 通常为10-15分钟。
2023
PART 02
染色基 础
REPORTING
染料选择
01
02
03
04
伊红
用于细胞质染色，如嗜酸性粒 细胞。
苏木素
用于细胞核染色，如淋巴细胞 和粒细胞。
甲基绿
用于染色DNA，如巨噬细胞 和血小板。
碱性品红
用于染色RNA，如红细胞和 血小板。
2023
血片的制作和染色精 讲课 件
REPORTING
• 血片制作 • 染色基础 • 常用染色方法 • 染色问题处理 • 染色质量控制 • 染色结果评估
2023
PART 01
血片制作
REPORTING
采血方法
01
02
03
采血部位
通常选择耳垂、手指或静 脉，确保血液来源清洁且 不受污染。
采血工具
2023
PART 05
染色质量控制
REPORTING
染色质量控制
• 请输入您的内容
2023
PART 06
染色结果评估
REPORTING
细胞核染色评估
细胞核染色均匀
血片、骨髓片制备
血片、骨髓片制备血片、骨髓片标本制备中，有直接检查法与许多细胞化学检查法，通过辨认细胞形态特征并结合临床资料，一般可做出正确诊断。
为了达到这一目的，首先应做好血涂片、骨髓涂片和端氏染色，这是成功的关键。
一、准备工作：（一）清洁玻片：玻片须边缘光滑，十分清洁干燥，不带有油质，新玻片要先浸在清洁液（重铬酸钾2份，硫酸3份，水25份）内，除去游离碱质（否则染色偏碱，不适于观察），用自来水冲洗，再浸在70％酒精内，用时取出，并在火焰高处烘干。
旧的玻片要先用肥皂水煮10余分钟后，再用温水冲洗干净。
边缘玻碎、玻面有划痕的不能再用。
因手上带有油渍，在取用玻片时只可用两手指挟住玻片的两边，不可触及玻面。
（二）推片：推片推端要光滑（常用凹玻片做推片）并将其中锐角用镊子掰掉lmm左右（既宽度较载片窄2~3mm），在油石上平磨光滑。
因异常细胞如瘤细胞等，体积大比重轻，只在涂片边缘尾端才易找到，如涂膜宽至边缘，容易漏诊。
二、制片方法：用推片蘸取骨髓液或血液少许（若看上去很浓，蘸量要少；如果稀薄，可多蘸些），置于载物玻片右端1／3处（右端空白处留贴标签），放直径1~2mm大小的血液或骨髓液一滴，使推片和此滴血液或骨髓液接触，当血液或骨髓液扩散成一均匀的粗线（亦可来回或左右移动推片，使之成为一粗线）。
然后使推片与载玻片成30~45°角（骨髓液较浓时，角度要小，推的速度要慢；骨髓液较稀时，角度应大，推速要快），自右向左，均匀地向前推，直至玻片的尾部，尾部应结束在载玻片左侧1／6处。
上述制作过程应尽快完成，否则骨髓液凝固，将影响标本质量。
三、注意事项：（一）玻片：玻片洁净，手指不能触及玻片面，将玻片一张一张地摆开，准备5张以上。
（二）推片：如置于载片上的血滴液或骨髓液滴较小，应推得较慢，且成＜30°角时涂片较薄；如血滴或骨髓滴较大，应推得较快，且成＞30°角时涂片较厚。
推时要注意用力均匀，动作不快不慢，不可复推。
血液涂片的制作与染色
血液涂片的制作与染色一、血液涂片的制作1.材料准备制作血涂片所需的材料包括干燥、清洁的玻璃片、净化的草酸铵溶液、无副作用的橡胶手套和标本采集器具等。
确保上述材料都经过消毒处理，以避免交叉感染。
2.血液采集选择适当的采血部位，一般为患者的指尖或外周静脉。
在采血前，应向患者解释操作流程，让其放松，并确保患者的肢体血管处于稳定状态以提高采血的成功率。
3.制片过程（1）在取血前，先常规清洁手指或采血部位，并佩戴无菌橡胶手套。
（2）使用标本采集器具（例如针头或注射器），按规定的采血量采集患者的血液样本。
（3）快速地将采集到的血液滴在干净、干燥的玻璃片中。
（4）将一个玻璃片顶在另一个玻璃片上，迅速向两个玻璃片之间倾斜，使血液被充分涂抹在玻璃片上。
（5）用均匀的速度将两个玻璃片拉开，使得血涂片上形成一条逐渐变细、近乎透明的血液薄片。
（6）待血液薄片干燥后，即可进行染色。
二、血液涂片的染色1. Wright染色法Wright染色法是最常用的血液染色方法之一，能够清晰地显示细胞的结构。
染色步骤如下：（1）用染色液将血液涂片浸泡3-5分钟，以充分染色。
（2）用蒸馏水冲洗血涂片，使余胞器染料被去除。
（3）将血涂片放在水平位置晾干。
（4）待片子干燥后，用显微镜观察。
2.尼氏染色法尼氏染色法适用于染色器材简单的实验室，在显微镜下能够清晰地显示红细胞、白细胞和血小板等细胞的形态和特征。
染色步骤如下：（1）将血涂片浸入尼氏液中，时间约为30分钟。
（2）用蒸馏水将血涂片冲洗干净，直至水洗液不再出现颜色为止。
（3）用吸水纸轻轻吸干血涂片，然后放在阴凉处晾干。
（4）用显微镜观察已经干燥的血涂片。
总结起来，血液涂片的制作与染色是一项简单而重要的临床检验技术。
通过制作血涂片，可以快速、直观地观察和分析血液成分，帮助医生进行诊断和治疗决策。
通过染色，可以更好地展示细胞的结构和特征，提高结果的准确性和可靠性。
需要注意的是，在制作血涂片的过程中要注意卫生和消毒，以减少交叉感染的风险。
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影响染色效果的因素
（4）染液的稀释浓度 染液的浓度高其 着色就快而深，从而疟原虫寄生红细胞的 薛氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓 度过低则染色时间久，颜色偏酸，薛氏点 不明显或消失。
影响染色效果的因素
（5）染色时间 染色时间长染色效果好， 反之较差。室温高则着色快，染色时间可 略缩短，气温低可适当延长。因此染色时 间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和 气温而适当增减。
影响染色效果的因素
血片染色好坏除了与玻片是否清洁，血片 制作质量好坏等有关外，还受到以下几个 因素的影响： （1）染料溶剂的质量 染料、甲醇和甘油 如果不纯，常使配制的染液偏酸或偏碱而 影响染色效果。因此必须用分析纯的甲醇 和中性甘油，而且在配制时所用的器具必 须干净而无水份。
影响染色效果的因素
血膜的制作（取血操作）
取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头，通常 在耳垂取血（现场取血建议用大头针采血，一 人一针，避免血传疾病）。先用75%酒精棉球 消毒取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后 再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和食指 紧捏耳垂上方，右手持消毒针迅速刺入耳垂下 端1~2毫米，不宜过深或过浅。然后用右手中 指轻轻向挤压出血。
取血量及涂片法（涂片操作）
薄血膜 取洁净的载玻片2张， 1张平置在桌上，以左手拇 指，食指夹持载玻片两端 （手指切勿接触玻片表面）， 用另一张边缘平滑（最好为 磨口边缘）的载玻片做推片， 用推片一端边缘的中点从取 血部分取约1微升的血量 （相当于1/4火柴头大小）， 使血滴与平置的载玻片接触， 并形成25~30度夹角，待 血液向两侧扩展约2厘米长 度时，均匀而迅速地轻轻向 左推出（约2.5厘米长）。
疟原虫计数法
厚血膜疟原虫镜检“记号”法：
★全血膜发现同种、同期疟原虫数在10个以内均 记实际数，10个以上但还不到平均每个视野一个虫 登记“少”。如P.V.T少S3.G1， 少 2 P.f.R G 。 ★ 平均每个视野同种、同期疟原虫数在1~5个时 + 记 “ ＋ ” 如 pfR ，6~10 个 以 上 时 记 “ ＋ ＋ ” 如 ++ p.f.R ，10~100个时记“+++”，100个以上 时记“＋＋＋＋”，如p.V.R+++G+,p.f.R++++。
伊红在水溶液内遇到美兰或天青，即可互相化合而产生沈 淀从而失去染色力，因此，吉氏母液绝对不能进水。
血片的染色 （二）吉氏染液母液配置方法
取吉氏粉0.5克置于研钵中， 加少量甘油充分研磨，再加再磨， 至25毫升加完为止，倒入60或 材料： 100毫升带有玻塞的有色玻瓶中。 在研钵中加少量甲醇，洗去甘油 1、吉氏粉0.5克 浓液混入瓶内，至25毫升甲醇 2、甘油25毫升 洗净钵中甘油染液为止，塞紧瓶 3、甲醇25毫升 塞，充分摇匀，置于55~60℃ 水浴中或温箱内24小时或室温 内3~5天，多加摇动，即成原 液。吉氏染液是目前较优良的血 膜染剂，即使在炎热天气中，亦 可经久不变。
血片的镜检
1.在学习镜检疟原虫之前，必须先对正常厚薄血膜中各 种血细胞的形态、内部结构和染色性质加以识别。 2.学习镜检疟原虫，首先要学看薄血膜，在基本上掌握 薄血膜中疟原虫形态后，才学习镜检厚血膜。 3.镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫分类 时参考和血片编号之用。 4.镜检疟原虫必须用油镜头配合5X低倍目镜镜检，当 发现疑难问题时可调换10X目镜进行观察。 5.检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，自 左至右，由右至左，一行接一行，一个视野稍叠一个 视野顺序地查完整个血膜。
血片制作染色与疟原虫计数
血膜的制作 用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂 呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘，称
厚血膜。薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。
发热病人血片
标本片
血膜的制作（取血时间）
取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普 查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期 疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。 间日疟在寒热发作时，外周血液中主要可见环 状体期；发作后数小时，环状体发育到滋养体 期，疟色素形成，形态较易辩认，为诊断的有 利时机；36~48小时，可检出裂殖体；发作 一、二次后，配子体出现较多。 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20小 时内取血，初发患者退热后常查不到原虫。
血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
注意：蛋白质是二性电解质，当其处于较等电点为酸的溶液中时， 便呈硷的作用，即与酸或阴离子结合，这就说明为何在染液偏 酸时，伊红的着色力强，使红细胞着色鲜艳而淋巴细胞和原虫 的胞浆着色不著；反之，蛋白质在偏硷的溶液中呈酸的作用而 中和硷基，也就说明为何染液偏硷时，红细胞和嗜伊红白细胞 的颗粒等被染成紫兰色。
影响染色效果的因素来自（6）染色用水 染液的稀释用水和染色后冲洗用 水应选择Ph7.0~7.2清洁水，通常使用的新鲜 的蒸馏水或过滤的冷开水，以及自来水、井水、 河水、泉水和雨水等。如果偏酸或偏碱，可用缓 冲蒸馏水调整。染色后发现血膜颜色偏蓝（偏碱） 或偏红（偏酸）时，可用与之相反的酸、碱度水 冲洗血片予以纠正。
血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染液种类：目前所用的血片染色液，虽然名称 很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的染液 变化过来的。总的可分为水溶液和酒精溶液 两大类，前者包括罗氏、西氏（Simon)、 J.S.B氏染液等，后者包括利氏 (Leishman)、瑞氏和吉氏染液等。这些染 液中的主要染剂都包含美兰、伊红和由美兰 氧化所成的天青，所以称多色性染剂。
影响染色效果的因素
（7）染色后不要直接将染液倒掉，应沿玻 片或染色缸边缘加水使染液表面一层溢出， 并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。
显微镜的一般构造
1.镜座 2.镜柱 3.镜臂 4.倾斜度关节 5.镜筒 6.接目镜 7.旋转盘 8.接物镜 9. 粗调节器 10.细调节器 11.齿板 12.镜台 13.推动器 14.弹簧夹 15.聚光器 16.虹彩 17.滤光镜圈 18.反光镜
血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染色原理：伊红是酸性水溶性钠盐，美兰是碱性 水溶性盐酸盐，当它们各自溶化水中时，就离 解为带阳电和阴电的离子。伊红主要离解为酸 性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质如血红蛋白、 嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水的 沈淀物染成红色。美兰主要离解为碱性的美兰 离子，美兰就与疟原虫、淋巴和大单核细胞的 胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸性蛋白质结合 染成兰色。
标签 标本片 发热病人血片
血膜的制作
血膜编号
血膜制成后，立即用特种 蜡笔或水笔于玻片面上写上受检者的 号码，以防差错，待薄血膜干后再用 铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号 和受检者的个人编号，依次顺序插入 标本盒内。
制作血膜的注意事项
1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、
磨损。制作血膜的载玻片必须完 全清洁而毫无油渍或污垢。制片 时，手指只能持载片的边缘，不 能接触玻片表面，以免油污使薄 血膜产生空白区以及厚血膜脱落。 作为推片的玻片边缘一定要平滑， 才能使推出的血膜均匀一致。
制作血膜的注意事项
2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜 未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧， 造成血膜厚薄不均，厚处不一溶血和着色而影 响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍 蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标 本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段 时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜红 蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。
制作血膜的注意事项
3. 血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或 火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。 夏天标本尽可能24~48小时内固定染色； 冬天也不能超过72小时。放置时间越久， 厚血膜越不易脱血，染色效果也差。若 不能及时染色，膜血膜宜先用甲醇固定 （1~3分钟）然后用过滤清水对厚血膜 溶血，晾干固定后装入盒内盖严，待以 后染色。
血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染色原理：美兰与伊红都不能使原虫和白细胞 的核着色，必须由天青作为媒介（染媒）才 能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，但又 具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来 只能染上极淡兰色的结构染上显著的酸性染 剂伊红，这样，就使白细胞粗大的核染成显 著的既兰又红的紫兰色，而较小或菲薄的原 虫核和淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。
血片的染色 （三）吉氏染液血片染色方法
先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干 后进行染色。亦可在固定薄血膜后用清水对厚 血膜溶脱血红蛋白，然后才进行染色。 单张血片染色：薄血膜经固定干燥后， 用2%吉氏染液稀释液1~2毫升，滴入血片 标本上染色30分钟左右，或用中性蒸馏水1毫 升，加吉氏母液1~2滴，混合均匀后滴入血 片标本上，染色10~20分钟，然后用清水轻 轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。
（涂片操作）
厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4微升血 量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片 接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成 直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀， 过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。
血膜的制作（涂片操作）
涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜 涂在一张载片上。方法是将载片分为6等分， 第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3 格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。 作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个； 门诊和发热病人血片每片1人，涂 标签 涂2个厚血膜1个薄血膜，以 防血膜脱落而影响检查； 疟疾调查时，每张玻片 可涂制2~3人血膜。
血片的染色 （三）吉氏染液血片染色方法
先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行 染色。亦可在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红 蛋白，然后才进行染色。 成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染 色缸，倒入2%吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性 蒸馏水98毫升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染 色30分钟（如染液不合标准时，得酌情增减染色时 间），然后用清水轻轻将染液冲去，再用清水轻轻冲 洗一次，干净后将血片标本（血膜面朝下）插于晾干 板上，待干镜检。