白血病抑制因子对K562细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响
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１５ 统计 学方 法 ． 采 用 ＳＳ Ｉ ． Ｐ ＳＯ ０软件 进行 统计 学 处 理 。计 量数 据 以 ±ｓ 表示 ， 行正 态检 验 和方差 检 验， 检验 水 准 ｏ＝ ．５ 【 ００ 。
２ 结果
于含 １％牛血 清及 ５ Ｕ ｍ 青霉 素 、０Ｉ／ ｌ 霉 ０ ０Ｉ／ ｌ ５ ｍ 链 Ｕ 素 的 Ｒ ＭＩ６０完全 培养基 中 ， ３ Ｐ １４ 于 ７℃ 、％ Ｃ ２ ５ Ｏ 培 养 箱 中培养 。取对 数生 长期 细胞接 种 于 ９ ６孔板 中 ，
上测定波长为 ５０ｎ ７ ｍ处 的吸光度 （ Ｄ值 ） Ｏ 。②细 胞凋 亡 ： 收集 １２各组 细胞并 离心 涂片 ， 培养 有细 ． 将 胞的盖玻片取出，Ｂ Ｐ Ｓ洗 ３遍 ， 固定液固定 １ ｉ， ０ｒｎ ａ ＰＳ １ ； Ｂ 洗 遍 滴加 Ｈ ｅ ｓ染色液 ， ｏｃ ｔ ｈ 室温 １ ｉ，Ｂ ０ｍｎ Ｐ Ｓ 洗片 ， 用吸水纸吸去多余水分 ， 封片后在荧光显微镜
白血病抑制 因子 （ Ｉ ） 由 Ｔ ｍｄ 等于 １８ ＬＦ 是 ｏｉ ａ ９４
年研 究 鼠骨髓 样 白血 病 Ｍ１细 胞 时发 现 的 ， Ｉ－ 属 Ｌ６ 家族 ， 是一 种新 型 的 多功 能 细胞 因子 。 国 内外 研究
人 十二 烷 基 硫 酸 钠 （Ｄ ）０ ｌ置 于 自动 酶 标 仪 Ｓ Ｓ １０ ，
山东 医药 ２ １ 年第 ５ 卷 第 ４ ０１ １ ３期
白血病 抑 制 因子对 Ｋ ６ ５２细胞 增 殖 、 亡 凋 及 ｐ３蛋 白表 达 的影 响 ５
陈 蕾 邸大 琳 王 鲁娟 孟 ， ， ， 洁 。孙 。 萍 王 占聚 ， （ １潍坊 医学院 附属 医院 ， 东潍坊 ２ １３ ； 山 ６ ０ １２潍坊 医学院免疫 学教研 室）
下 观察 细胞形态 学变 化 。 １４ Ｋ ６ ． ５２细胞 ｐ３蛋 白表 达检 测 ５
ｌ ／Ｌ Ｏ。
表明，Ｉ ＬＦ在胚胎发育 、 神经再 生、 细胞增殖等方面 均有一定作用。２０ ０９年 １ Ｏ月 ～ ００年 ８月 ， ２１ 我们 观察 了 ＩＦ对慢 性粒 细 胞 白血病 细 胞 系 Ｋ ６ Ｌ ５ ２细胞
随机分为对照组和观察 １ ３组 ， — 分别加入质量浓度
为 ０５ １ ４ ｇＬ的重组 人 Ｌ Ｆ， 于 ６ １ 、４、８ 、、０、０ ／ Ｈ 并 、２ ２ ４ ｈ后进 行下列 实 验 。
２１ Ｋ６ ． ５２细胞增殖活性及细胞凋亡率
观察 ｌ ～
３组 不 同时 间 细 胞增 殖 活性 均显 著 低 于对 照 组 ， 且
取对 数生 长期 Ｌ的重组人 ＬＦ Ｉ，
继续培养 ６ １ 、４ ４ ； 、２ ２ 、８ｈ 应用 ＭＴ 法 、 ｏｃ ｓ染色法观察各组 Ｋ ６ ｒ Ｈ ｅｈｔ ５ ２细胞增 殖活性 、 凋亡率 ， 采用免疫组化 法检测 观察 １～ ３组不同时间细胞增 殖活性均 显著低 于对照组 ， 且观察 １ 组 ＞观察 ２组 ＞ 观察 ３组 、 ２ｈ＞ ４ｈ＞ ８ｈ Ｐ均 ＜ ．５ ； ６ｈ＞１ ２ ４ （ ０ ０ ） 观察 １ ３组 不 同时 间细胞 凋亡率 均显著高 于对照 —
组 化染色 试剂 盒 。
将细胞悬液涂于多聚赖氨酸处理的玻片上 ， 自然晾 干 ， ４℃ 多聚 甲醛 固定 ３ ｉ， Ｂ ０ｍｎ Ｐ Ｓ洗 ３次 ，
，
１２ Ｋ ６ ． ５ ２细胞 培 养及 分 组 处 理
将 Ｋ６ ５ ２细胞 置
室温下干燥过夜； 显微镜下观察 ｐ３蛋白表达情况 ， ５ 以胞 质或 胞核染 成棕 黄色 者为 阳性细胞 。高倍 镜 下 随机计 数 ２０个 细胞 ， ０ 计算 阳性 细胞百 分率 。
增殖并诱导其凋亡 ， 机制可能为上调 ｐ３蛋 白表达 。 ５ 关键词 ： 白血病抑制因子 ；５ ２细胞 ； Ｋ６ 细胞凋 亡 ； ３蛋 白 ５ Ｏ 中图分 类号 ：７ ３ ７ Ｒ ３ ． 文献标 志码 ： Ｂ 文章编号 ：０ ２２ ６ ２ １ ） ３０ ７ －２ １０ —６ Ｘ（０ １ ４ － ４０ ０
１３ Ｋ ６ ． ５２细胞增殖活性及凋亡检测
①细胞增殖
观察 １ ＞ 组 观察 ２组 ＞ 观察 ３组 、 ｈ ２ｈ＞ ４ｈ ６ ＞１ ２ ＞ ８ｈ见表 １观察 １ ３ ４ ， ； — 组不同时间细胞凋亡率均 显著高于对照组 ， 且观察 ｌ ＜观察 ２组 ＜ 组 观察 ３
组 、 ２ｈ＜ ４ｈ＜ ８ｈ见表 ２ ６ｈ＜１ ２ ４ ， 。 ２ ２ Ｋ ６ 细胞 ｐ３ 白表达 观察 ３ ． ５２ ５蛋 组各时间点
摘要 ： 目的 探讨 白血病抑 制因子 （ Ｉ ） ＬＦ 体外 对 Ｋ ６ ５ ２细胞 增殖 、 亡 的影 响及 机制 。方 法 凋 Ｋ６ ５ ２细胞接种于 ９ ６孔板 中， 随机分为对照组和观察 １— ３组 ， 分别加入质量浓度为 ０ ５ １ 、０ 、、 ４ ０ 观察 ３组和对 照组 ｐ ３蛋 白表达情 况。结果 ５
组， 且观察 １ ＜观察 ２组 ＜ 组 观察 ３组 、 １ ＜２ ４ （ ６ｈ＜ ２ｈ ４ｈ＜ ８ｈ Ｐ均 ＜ ．５ ； ０ ０ ） 观察 ３组各时间点 ｐ３蛋 白阳性表达 ５ 率均明显高于对 照组 ， ６ｈ＜１ ２ ４ （ 且 ２ｈ＜ ４ｈ＜ ８ｈ Ｐ均 ＜００ ） ．５ 。结论 ＬＦ能以浓度一 时间依赖性抑制 Ｋ ６ Ｉ ５２细胞
体 外凋亡 及 ｐ３蛋 白表 达 的影 响 ， ５ 旨在 为 白血 病 的 临 床治疗 提供 理论依 据 。
１ 材 料与 方法
取 １２对 照组 ．
和 观察 ３组细胞 用 Ｐ Ｓ洗 ３次 ， 整 细胞 数 至 １× Ｂ 调
１ １ 材料 ．
慢性粒细胞 白血病细胞系 Ｋ ６ ５２细胞
（ 潍坊医学院免疫教研室常规保存 ）重组人 ＬＦ 牛 ； Ｉ， 血清 ，Ｐ Ｉ ４ 培养液 ； ｏｃｓ染色试 剂盒 ， Ｒ Ｍ１ ０ ６ Ｈ ｅｈｔ 免疫
２ 结果
于含 １％牛血 清及 ５ Ｕ ｍ 青霉 素 、０Ｉ／ ｌ 霉 ０ ０Ｉ／ ｌ ５ ｍ 链 Ｕ 素 的 Ｒ ＭＩ６０完全 培养基 中 ， ３ Ｐ １４ 于 ７℃ 、％ Ｃ ２ ５ Ｏ 培 养 箱 中培养 。取对 数生 长期 细胞接 种 于 ９ ６孔板 中 ，
上测定波长为 ５０ｎ ７ ｍ处 的吸光度 （ Ｄ值 ） Ｏ 。②细 胞凋 亡 ： 收集 １２各组 细胞并 离心 涂片 ， 培养 有细 ． 将 胞的盖玻片取出，Ｂ Ｐ Ｓ洗 ３遍 ， 固定液固定 １ ｉ， ０ｒｎ ａ ＰＳ １ ； Ｂ 洗 遍 滴加 Ｈ ｅ ｓ染色液 ， ｏｃ ｔ ｈ 室温 １ ｉ，Ｂ ０ｍｎ Ｐ Ｓ 洗片 ， 用吸水纸吸去多余水分 ， 封片后在荧光显微镜
白血病抑制 因子 （ Ｉ ） 由 Ｔ ｍｄ 等于 １８ ＬＦ 是 ｏｉ ａ ９４
年研 究 鼠骨髓 样 白血 病 Ｍ１细 胞 时发 现 的 ， Ｉ－ 属 Ｌ６ 家族 ， 是一 种新 型 的 多功 能 细胞 因子 。 国 内外 研究
人 十二 烷 基 硫 酸 钠 （Ｄ ）０ ｌ置 于 自动 酶 标 仪 Ｓ Ｓ １０ ，
山东 医药 ２ １ 年第 ５ 卷 第 ４ ０１ １ ３期
白血病 抑 制 因子对 Ｋ ６ ５２细胞 增 殖 、 亡 凋 及 ｐ３蛋 白表 达 的影 响 ５
陈 蕾 邸大 琳 王 鲁娟 孟 ， ， ， 洁 。孙 。 萍 王 占聚 ， （ １潍坊 医学院 附属 医院 ， 东潍坊 ２ １３ ； 山 ６ ０ １２潍坊 医学院免疫 学教研 室）
下 观察 细胞形态 学变 化 。 １４ Ｋ ６ ． ５２细胞 ｐ３蛋 白表 达检 测 ５
ｌ ／Ｌ Ｏ。
表明，Ｉ ＬＦ在胚胎发育 、 神经再 生、 细胞增殖等方面 均有一定作用。２０ ０９年 １ Ｏ月 ～ ００年 ８月 ， ２１ 我们 观察 了 ＩＦ对慢 性粒 细 胞 白血病 细 胞 系 Ｋ ６ Ｌ ５ ２细胞
随机分为对照组和观察 １ ３组 ， — 分别加入质量浓度
为 ０５ １ ４ ｇＬ的重组 人 Ｌ Ｆ， 于 ６ １ 、４、８ 、、０、０ ／ Ｈ 并 、２ ２ ４ ｈ后进 行下列 实 验 。
２１ Ｋ６ ． ５２细胞增殖活性及细胞凋亡率
观察 ｌ ～
３组 不 同时 间 细 胞增 殖 活性 均显 著 低 于对 照 组 ， 且
取对 数生 长期 Ｌ的重组人 ＬＦ Ｉ，
继续培养 ６ １ 、４ ４ ； 、２ ２ 、８ｈ 应用 ＭＴ 法 、 ｏｃ ｓ染色法观察各组 Ｋ ６ ｒ Ｈ ｅｈｔ ５ ２细胞增 殖活性 、 凋亡率 ， 采用免疫组化 法检测 观察 １～ ３组不同时间细胞增 殖活性均 显著低 于对照组 ， 且观察 １ 组 ＞观察 ２组 ＞ 观察 ３组 、 ２ｈ＞ ４ｈ＞ ８ｈ Ｐ均 ＜ ．５ ； ６ｈ＞１ ２ ４ （ ０ ０ ） 观察 １ ３组 不 同时 间细胞 凋亡率 均显著高 于对照 —
组 化染色 试剂 盒 。
将细胞悬液涂于多聚赖氨酸处理的玻片上 ， 自然晾 干 ， ４℃ 多聚 甲醛 固定 ３ ｉ， Ｂ ０ｍｎ Ｐ Ｓ洗 ３次 ，
，
１２ Ｋ ６ ． ５ ２细胞 培 养及 分 组 处 理
将 Ｋ６ ５ ２细胞 置
室温下干燥过夜； 显微镜下观察 ｐ３蛋白表达情况 ， ５ 以胞 质或 胞核染 成棕 黄色 者为 阳性细胞 。高倍 镜 下 随机计 数 ２０个 细胞 ， ０ 计算 阳性 细胞百 分率 。
增殖并诱导其凋亡 ， 机制可能为上调 ｐ３蛋 白表达 。 ５ 关键词 ： 白血病抑制因子 ；５ ２细胞 ； Ｋ６ 细胞凋 亡 ； ３蛋 白 ５ Ｏ 中图分 类号 ：７ ３ ７ Ｒ ３ ． 文献标 志码 ： Ｂ 文章编号 ：０ ２２ ６ ２ １ ） ３０ ７ －２ １０ —６ Ｘ（０ １ ４ － ４０ ０
１３ Ｋ ６ ． ５２细胞增殖活性及凋亡检测
①细胞增殖
观察 １ ＞ 组 观察 ２组 ＞ 观察 ３组 、 ｈ ２ｈ＞ ４ｈ ６ ＞１ ２ ＞ ８ｈ见表 １观察 １ ３ ４ ， ； — 组不同时间细胞凋亡率均 显著高于对照组 ， 且观察 ｌ ＜观察 ２组 ＜ 组 观察 ３
组 、 ２ｈ＜ ４ｈ＜ ８ｈ见表 ２ ６ｈ＜１ ２ ４ ， 。 ２ ２ Ｋ ６ 细胞 ｐ３ 白表达 观察 ３ ． ５２ ５蛋 组各时间点
摘要 ： 目的 探讨 白血病抑 制因子 （ Ｉ ） ＬＦ 体外 对 Ｋ ６ ５ ２细胞 增殖 、 亡 的影 响及 机制 。方 法 凋 Ｋ６ ５ ２细胞接种于 ９ ６孔板 中， 随机分为对照组和观察 １— ３组 ， 分别加入质量浓度为 ０ ５ １ 、０ 、、 ４ ０ 观察 ３组和对 照组 ｐ ３蛋 白表达情 况。结果 ５
组， 且观察 １ ＜观察 ２组 ＜ 组 观察 ３组 、 １ ＜２ ４ （ ６ｈ＜ ２ｈ ４ｈ＜ ８ｈ Ｐ均 ＜ ．５ ； ０ ０ ） 观察 ３组各时间点 ｐ３蛋 白阳性表达 ５ 率均明显高于对 照组 ， ６ｈ＜１ ２ ４ （ 且 ２ｈ＜ ４ｈ＜ ８ｈ Ｐ均 ＜００ ） ．５ 。结论 ＬＦ能以浓度一 时间依赖性抑制 Ｋ ６ Ｉ ５２细胞
体 外凋亡 及 ｐ３蛋 白表 达 的影 响 ， ５ 旨在 为 白血 病 的 临 床治疗 提供 理论依 据 。
１ 材 料与 方法
取 １２对 照组 ．
和 观察 ３组细胞 用 Ｐ Ｓ洗 ３次 ， 整 细胞 数 至 １× Ｂ 调
１ １ 材料 ．
慢性粒细胞 白血病细胞系 Ｋ ６ ５２细胞
（ 潍坊医学院免疫教研室常规保存 ）重组人 ＬＦ 牛 ； Ｉ， 血清 ，Ｐ Ｉ ４ 培养液 ； ｏｃｓ染色试 剂盒 ， Ｒ Ｍ１ ０ ６ Ｈ ｅｈｔ 免疫