食品生物检验技术--食品微生物检验样品的采集与处理)_.ppt
合集下载
第二章 样品的采集、制备处理及保存
第二章 食品样品的采集与处理
图2-2 萃取操作示意 1-三角瓶；2-导管；3-冷 凝器；4-欲萃取相
图2-3 常压蒸馏装置
3、盐析法：溶液中加入某种盐类，降低了 某溶质在溶液中的溶解度，使 之从溶液中分离出来的方法。
4、超临界萃取法（SFE） Supercritical Fluid Extraction
超临界流体及其性质 a.流体是非液非气的,具有气体较强的穿透 能力和液体较大的密度及溶解度,有较大 的吸附能力,流动性好. b.萃取速度快
什么物质适合于二氧化碳超临界萃取 二氧化碳超临界萃取的优点
a. 接近常温, 对物质没有变解作用. b. 易达到Pc和Tc c. 化学稳定性好, 无毒, 无色, 无味, 无污染 d. 萃取时间短 e. 费用低 f. 适用热敏感样品 g. 有防氧化和抑菌作用
然后层从的样四品角堆和放中
的不心同点部用位双，套按回
采样转件取数样确器定各具取
体采少样量袋样(品桶，、得
箱)检，样再，用再双按套上回
转取法样处管理采得样平。均
将取样样品管。插入包
装中，回转180。
取出样品，每一
包装须由上、中、
下三层取出三份
检样；把许多检
样综合起来成为
原始样品：用
“四分法”
这类物料不易充 分混匀，可先 按 总件数/ 2 确 定采样件(桶、 罐)数。启开 包装，用采样 器从各桶(罐) 中分层(一般 分上、中、
特点：简便快速，破坏彻底，减少 金属挥发。酸气刺激性大， 腐蚀性大。
第二章 食品样品的采集与处理
（1）硫酸-硝酸法 如图2-1所示。
（2）高氯酸-硝酸-硫酸法
（3）高氯酸（过氧化氢）-硫 酸法
（4）硝酸-高氯酸法
食品微生物检验的采样方案取样方案有
×××××采样单
样品编号：━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 产品名称（商品名）______规格型号__________注册商标_____________ 生产厂家_______________通讯地址__________邮政编码□ □ □ □ □ □ 受检地点_______________通讯地址__________邮政编码 □ □ □ □ □ □ 采样地点_______________采样日期__________采样基数______________ 生产日期_______________批 号__________产品依据标准__________ 有效成分及含量 ____________________________________________________________ 检验目地________________检测项目_____________________________
采样前调查→现场观察→确定采样方案 →采样 →样品封存 →开具采样证明
（3）采样的要求
1、严格遵守样品采集的操作规程。 2、所采样品必须具有代表性。 3、采样操作要防止污染，防止变质、损坏、 丢失。 4、不得加入防腐剂、固定剂等。 5、样品采集和现场测定必须有二人以上参 加。
（4）食品微生物检验的采样方案
一、微生物检验的工作流程
检验前准备 样品的采集及样品的送检 样品的预处理方法 样品的检验 检验结果的报告
（一）.检验前的准备
1. 2. 准备好所需的各种仪器。 按技术要求将各种玻璃仪器进行清洗、烘干、包扎、灭菌，冷 却后送无菌室备用。 准备好所用的各种试剂，做好普通营养琼脂或其他选择必培养 基。 做好无菌室或超净工作台的灭菌工作，提前1h灭菌30~60min. 工作衣、鞋、帽、等灭菌后备用。 工作人员进入无菌室后，实验没有完成之前不得随便出入无菌 室。
第二章样品预处理方法【共57张PPT】
❖ 注意测量pH值的准确性，误差不应超过0.1 固相萃取技术（SPE）的重要性
由于试剂未经纯化致使色谱分析中往往呈现额外的杂质峰。 ☞更严重的是干扰物在每批溶剂或试剂中有所不同，而影响不同实验室间、各分析人员间的实验结果。 0.
（3）温度 常用的溶剂有水、稀酸、稀碱、稀盐等，也可以采用不同比例的有机溶剂，如：乙醇、丙酮、氯仿、四氯化碳
使用方法
❖可先用6到10倍柱体积的去离子水或弱缓冲液平 微透析技术：实质上是一种膜分离技术，它利用膜透析原理，微量地对细胞液进行流动性连续采样的新型采样和色谱样品制备技术。
衡， 影响盐析的条件 盐的饱和浓度
动物体内—药物及代谢产物、糖类及有关化合物、脂类、维生素、核甘、核甘酸及其衍生物、磷酸酯类化合物、固醇类化合物、氨基酸、多肽、蛋
使用方法 ❖可先用6到10倍柱体积的甲醇或乙腈活化，再用 6到10倍柱体积的水或缓冲液平衡，不要让小柱 干了
❖样品溶解在强一些极性的溶剂中 ❖加入样品
❖用强极性溶剂洗脱不想要的组份
❖用极性弱些的溶剂洗脱第一组感兴趣的组份
❖用极性更弱的溶剂洗脱剩下的感兴趣的组份
确认回收率
各种SPE小柱（三）
❖ 离子交换
❖变离子型化合物为非离子型，用反相方法分离 ❖ 典型的例子
氨基酸分析
加速溶剂萃取（ASE）
ASE 是用溶剂对固体、半固体的样品进行萃取的技术.
ASE 的原理是选择合适的溶剂、通过增加温度和压力来提高 萃取过程的效率.
ASE 可用来替代索氏提取、超声萃取、手工振摇、煮沸法和 其他萃取方法
三种不同型号的ASE
组感兴趣的组份 以1～5ml/min流速洗脱样品
❖用更强的缓冲液洗脱剩下的感兴趣的组份
确认回收率
由于试剂未经纯化致使色谱分析中往往呈现额外的杂质峰。 ☞更严重的是干扰物在每批溶剂或试剂中有所不同，而影响不同实验室间、各分析人员间的实验结果。 0.
（3）温度 常用的溶剂有水、稀酸、稀碱、稀盐等，也可以采用不同比例的有机溶剂，如：乙醇、丙酮、氯仿、四氯化碳
使用方法
❖可先用6到10倍柱体积的去离子水或弱缓冲液平 微透析技术：实质上是一种膜分离技术，它利用膜透析原理，微量地对细胞液进行流动性连续采样的新型采样和色谱样品制备技术。
衡， 影响盐析的条件 盐的饱和浓度
动物体内—药物及代谢产物、糖类及有关化合物、脂类、维生素、核甘、核甘酸及其衍生物、磷酸酯类化合物、固醇类化合物、氨基酸、多肽、蛋
使用方法 ❖可先用6到10倍柱体积的甲醇或乙腈活化，再用 6到10倍柱体积的水或缓冲液平衡，不要让小柱 干了
❖样品溶解在强一些极性的溶剂中 ❖加入样品
❖用强极性溶剂洗脱不想要的组份
❖用极性弱些的溶剂洗脱第一组感兴趣的组份
❖用极性更弱的溶剂洗脱剩下的感兴趣的组份
确认回收率
各种SPE小柱（三）
❖ 离子交换
❖变离子型化合物为非离子型，用反相方法分离 ❖ 典型的例子
氨基酸分析
加速溶剂萃取（ASE）
ASE 是用溶剂对固体、半固体的样品进行萃取的技术.
ASE 的原理是选择合适的溶剂、通过增加温度和压力来提高 萃取过程的效率.
ASE 可用来替代索氏提取、超声萃取、手工振摇、煮沸法和 其他萃取方法
三种不同型号的ASE
组感兴趣的组份 以1～5ml/min流速洗脱样品
❖用更强的缓冲液洗脱剩下的感兴趣的组份
确认回收率
食品微生物检验无菌取样技术
LOGO
取样工具：
取样工具包括：茶匙、角匙、尖嘴钳、fovceps tongs 量筒和烧杯，工
具的类型一般由取样产品来决定。
所有取样设施和容器的灭菌日期应当被检查、灭菌时间应当在仪器设施
的标签和包装上标明，一些仪器设施可以在当地实验室灭菌处理或购买灭菌
仪器，在当地实验室灭菌的仪器设施一般可以保持至少两个月，过期后设施
空气采样
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
LOGO
空气消毒方法 密闭场所：稀释消毒液消毒 紫外灯照射无菌室45MIN，后保持15MIN黑暗，彻底
杀灭微生物 熏蒸法：1份高锰酸钾加2份福尔马林关紧房间，24h
后开门通气
Page 11
采样方法
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
直接沉降法：平板暴露一段时间，370C培养48小时 过滤法： 气流撞击法
查观看干冰袋子是否有接触，如果泄漏可能污染样品，你也可以用湿冰，湿
冰可以由工厂提供，然而取样前必须清楚这一点，如果想保持样品冷冻，干
冰应在检验前获得。
盒子或制冷皿：
检验员需要贮藏、运输他们的样品，如果样品不需冷冻，那么用一个
盒子即可，但如果样品需要冷却，一个标准的制冷皿或保温箱是必须使用的
，一般来讲制冷皿随带着一个塑料袋，样品可以放还袋子里，制冷剂象干冰
游泳池水
≤100/100ml ≤1000/1ml
Page 9
图示_03
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
LOGO
水样采集
自来水：清洁布将水龙头擦拭干净，酒精灯灼烧灭菌， 放水5-10MIN后取样
江、湖：取水下15cm处，井水50cm处。 氯处理水：先脱氯。 水样应2小时内送检
食品样品的采集与制备
— 1—
• 食品样品的运送及处理
样 品
2.样品的保存和运送
的
抽样过程中应对所抽样品进行及时、准确的标记。抽样结
采
束后，应有抽样人写出完整的抽样报告，使样品尽可能保持在
集 与
原有条件下迅速发送到实验室。
制 备
1）抽样结束后应立即送往实验室检验。如不能及时运送，冷 冻样品应存放在-20℃冰箱内；冷却和易腐食品存放在0-4℃
详尽的资料。
— 1—
• 采样前的准备工作
样 品
3.取样方案
的
有些实验室在每批产品中，仅采一个检样进行检验，该批
采
产品是否合格，全凭这个检样来决定。ICMSF方法与此不同，它
集 与 制
是从统计学原理来考虑，对一批产品，检查多少检样，才能够 有代表性，才能客观地反映出该产品的质量而设定的。ICMSF方
集
～5s,或灼烧消毒），再用无菌剪子取检样深层肌肉，放入无菌
与 制 备
乳钵内用灭菌剪子剪碎后，称取25g。 （2）鲜、冻家禽检样的处理：先将检样进行表面消毒，用灭菌 剪子或刀去皮后，剪取肌肉25g（一般可从胸部或腿部剪取）。
其他处理同生肉。带毛野禽去毛后，同家禽检样处理。
（ 3 ） 各类熟肉制品检样的处理：直接切取或称取25g，其他处
— 1—
• 食品样品的运送及处理
样 品
3.样品的处理
的
由于食品样品种类多，来源复杂，各类预检样食品种类的不同性状，经过预处理后
集 与 制
制备稀释液才能进行有关的各项检验。样品处理好后，应尽快 检验。
备
（1）样品的接收：做好记录查对，予以登记，接受人员应签 字。 （2）样品的融化：冷冻的样品检验前应解冻，要防止病原菌 的死亡和因在生长温度下而使细菌数量增加。 （3）检样的制备：采用均质法，均质比搅拌效果好。
食品安全的检测技术讲义(PPT 29张)
生产厂家的商品名称、厂名、厂址、注册商标 和包装装璜，以充当正宗产品的方法。 最常见的以低档次酒充当高档酒。
食品掺伪的方式
5.粉饰:是指食品在加工或销售过程中用颜色或染料 混于食品中或粉饰于食品表面，来掩饰食品本身的某 些劣点的方法。 在熟肉制品上涂上红色素和油来掩盖变质肉、 病死肉的本身颜色，以充当正常肉制品出售。 茶叶中加入色素，以掩盖劣质茶叶的茶的颜色。 虾酱中掺入红色素以掩盖其掺入玉米粉、豆渣 后的颜色，粉皮、粉丝中掺入色素以改善外观颜 色等。
食品掺伪的方式
3.抽取：从食品中提取出部分营养成分后仍冒
充成分完整，在市场上进行销售的做法叫做抽取。 例如：从小麦粉中抽取面筋后，其余物质还充 当小麦粉销售或掺入正常小麦粉中出售，从牛乳 中提取出脂肪后，剩余部分制成乳粉，仍以“全 脂乳粉”在市场出售。
食品掺伪的方式
4. 假冒:是指以劣质食品为内容物，盗用其他
一、食品样品的采集、预处理
• （四） 样品的预处理 含义：利用化学或物理方法对样品进行分解， 提取浓缩等操作，以保证检验得到可靠的结果的 过程。
• 目的：消除干扰因素，保留被测组份. 主要方法：有机物破坏法、溶剂提取法、蒸馏法、 盐析法、化学分离法、色层分离法、浓缩。
• *[一] 有机物破坏法 1.干法灰化 ①原理：高温灼烧将有机物破坏 。 ②优点：破坏彻底、操作简单、空白值低。 ③缺点：破坏时间长，温度高，挥发性金属损失高。 2.湿法消化 ①原理：加强氧化剂消煮，使有机物完全分解氧化，待 测成分转化为无机状态存在于消化液中。 ②优点：分解速度快，时间短，金属挥发逸散损失小。 ③缺点：易产生大量有害气体，空白值高。 ④注意问题：适当温度，防暴沸，防毒气，加氧化剂时 应冷却沿壁加入。 3.微波消解法
食品样品的采集和前处理
食品样品的采集与前处理李巨秀食品学院食品化学教研室食品分析的对象包括各种原材料、农副产品、半成品、各种添加剂、辅料及产品。
种类繁多，成分复杂，来源不一，分析的目的，项目和要求也不尽相同，但无论哪种对象，都要按一个共同程序进行一般为：样品的采集制备和保存样品的预处理成分分析数据记录，整理分析报告的撰写。
第一节样品的采集、制备及保存一、样品的采集1.采样：由于食品数量较大，而且目前的检测方法大多数具有破坏作用，故不能对全部食品进行检验，必须从整批食品中采取一定比例的样品进行检验。
从大量的分析对象中抽取具有代表性的一部分样品作为分析化验样品，这项工作即称为样品的采集或采样。
食品采样是食品检测结果准确与否的关键，也是营养食品卫生专业人员必须掌握的一项基本技能。
2.采样目的和要求食品采样的主要目的是鉴定食品的营养价值和卫生质量，包括食品中营养成分的种类、含量和营养价值；食品及其原料、添加剂、设备、容器、包装材料中是否存在有毒有害物质及其种类、性质、来源、含量、危害等。
食品采样是进行营养指导、开发营养保健食品和新资源食品、强化食品的卫生监督管理、制定国家食品卫生质量标准以及进行营养与食品卫生学研究的基本手段和重要依据。
进行食品检验，是在整批被检食品中抽取一部分作为检验样品，而对样品进行检验的结果用来说明整批食品的性状。
因此，采样时必须注意样品的代表性和均匀性。
3.正确采样的意义尽管一系列检验工作非常精密、准确，但如果采取的样品不足以代表全部物料的组成成分，则其检验结果也将毫无价值，甚至得出错误结论，造成重大经济损失以至误伤人命，酿成大祸。
4.正确采样的原则（1）代表性在大多数情况下,待鉴定食品不可能全部进行检测,而只能抽取其中的一部分作为样品,因此,所采的样品应能够较好地代表待鉴定食品各方面的特性。
（2）真实性采样人员应亲临现场采样,以防止在采样过程中的作假或伪造食品。
所有采样用具都应清洁、干燥、无异味、无污染食品的可能。
微生物样品的采集(精)
ICMSF的采样方法
有些实验室在每批产品中，仅采一个检样进 行检验，该批产品是否合格，全凭这个检样来决 定。ICMSF方法与此不同，它是从统计学原理来 考虑，对一批产品，检查多少检样，才能够有代 表性，才能客观地反映出该产品的质量而设定的。 ICMSF方法中包括二级法及三级法两种。二 级法只设有n、с及m值，三级法则有n、c、m及M 值。M即附加条件后判定合格的菌数限量。
4）ICMSF采样方案简介 国际食品微生物标准委员会（ICMSF） 所建议的采样计划是目前世界各国在食品微 生物工作中常用的采样方案。 ICMSF提出的采样基本原则根据： a)各种微生物本身对人的危害程度各有不 同。 b）食品经不同条件处理后，其危害度变 化情况：①降低危害度；②危害度未变；③ 增加危害度，来设定采样方案并规定其不同 采样数。
2
微生物样品的采样
• 样品的采样和取、制样是食品微生物检验的重要组成 部分。 • 要得到准确的检测结果，必需正确掌握采样技术、样 品传递、样品保存方法和样品的制备技术，保证样品 在从采样到制样整个过程中的一致性。如果样品的采 取、运送、保存或制备过程中操作不当，或者样品不 具有代表性，就会使实验室的微生物检验结果毫无意 义。 • 对采样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要 保证样品的代表性和一致性，又要保证整个微生物检 验过程在无菌操作的条件下完成。
根据表1中15种情况的举例，1-3可用三级法，45可用二级法来判定是否合格。 考虑到以上15种情况，分别设定不同的取样数 及检样污染数，在1-9例中检样需采5个（n=5），而 污染检样数设定为c=3，2，1。在10-15例用二级法 则不得检出该致病菌c=0。例如冷冻食品，细菌数按 例2，大肠菌按例5，金黄色葡萄球菌按例8，沙门氏 菌按例11的二级法判定。 对食品处理应酌情考虑，例如生肉火腿中的金 黄色葡萄球菌，被腐败菌所抑制，不易发生食物中 毒，适用例7和例8。烹调加工后的熟肉，对腐败菌 没有抵抗力，则易发生食物中毒，适用例9。加热盐 腌的火腿，水分活性为0.86以下，金黄色葡萄球菌 有增殖的可能性，因此适用例9。沙门氏菌水活性在 0、94以下不能繁殖，适用例11，如上所述，应根据 各种食品的危害度进行设定。
食品中微生物的检验—微生物检验实验室基本要求(食品微生物控制技术课件)
带有废弃培养物的平皿，需先经高压蒸汽灭 菌或沸水煮沸30min后，倒掉污物，方可清 洗。洗干净的平皿全部向下，一个压着一个， 扣于洗涤架或桌子上。
7、载玻片和盖玻片的清洗
用过的载玻片和盖玻片如有香柏 油，要先擦去香柏油或在二甲苯内 摇晃几次，使油垢溶解； 再在肥皂水中煮沸5-10min，用软 布或脱脂棉擦拭，立即用自来水冲 洗； 然后在稀洗液中浸泡0.5-2h，自来 水冲洗； 最后用蒸馏水换洗几次，晾干后 浸于95%乙醇中保存备用。
低倍物镜:指1×~6×， NA值为0.04~0.15。
高倍物镜:指25×~63×， NA值为0.35~0.95。
中倍物镜:指6×~25×， NA值为0.15~0.40。
油浸物镜:指90×~100×， NA值为1.25~1.40。
1、光学显微镜的结构
（2）显微镜的光学系统
目镜பைடு நூலகம்作用是把物镜放大了的实像再放大一次，并把物像
8、滴瓶
（1）普通滴瓶 滴瓶的规格大小不等，分 为棕色和无色两种。用来 盛放各种染色剂、试剂和 生理盐水等。棕色瓶主要 盛放需要避光保存的试剂 ，如碘液等。
8、滴瓶 （2）双层滴瓶
由内外两个玻璃瓶组成，内层 为小的上粗下细的圆柱瓶，用 于盛放香柏油，供油镜头观察 微生物时使用，外层为锥形瓶 ，用于盛放二甲苯，供擦净油 镜头时使用。
1、光学显微镜的结构
（2）显微镜的光学系统
反光镜：在镜座上装有反光镜，可以将投射在它上面
a
的自然光反射到聚光器透镜的中央，照明标本。新式 显微镜镜座上装有光源，并有电流调节螺旋，可通过
调节电流大小调节光照强度。
聚光器：聚光器在载物台下面，由聚光透镜、虹彩光圈
b
和升降螺旋组成的。其作用是将光源经反光镜反射来的
7、载玻片和盖玻片的清洗
用过的载玻片和盖玻片如有香柏 油，要先擦去香柏油或在二甲苯内 摇晃几次，使油垢溶解； 再在肥皂水中煮沸5-10min，用软 布或脱脂棉擦拭，立即用自来水冲 洗； 然后在稀洗液中浸泡0.5-2h，自来 水冲洗； 最后用蒸馏水换洗几次，晾干后 浸于95%乙醇中保存备用。
低倍物镜:指1×~6×， NA值为0.04~0.15。
高倍物镜:指25×~63×， NA值为0.35~0.95。
中倍物镜:指6×~25×， NA值为0.15~0.40。
油浸物镜:指90×~100×， NA值为1.25~1.40。
1、光学显微镜的结构
（2）显微镜的光学系统
目镜பைடு நூலகம்作用是把物镜放大了的实像再放大一次，并把物像
8、滴瓶
（1）普通滴瓶 滴瓶的规格大小不等，分 为棕色和无色两种。用来 盛放各种染色剂、试剂和 生理盐水等。棕色瓶主要 盛放需要避光保存的试剂 ，如碘液等。
8、滴瓶 （2）双层滴瓶
由内外两个玻璃瓶组成，内层 为小的上粗下细的圆柱瓶，用 于盛放香柏油，供油镜头观察 微生物时使用，外层为锥形瓶 ，用于盛放二甲苯，供擦净油 镜头时使用。
1、光学显微镜的结构
（2）显微镜的光学系统
反光镜：在镜座上装有反光镜，可以将投射在它上面
a
的自然光反射到聚光器透镜的中央，照明标本。新式 显微镜镜座上装有光源，并有电流调节螺旋，可通过
调节电流大小调节光照强度。
聚光器：聚光器在载物台下面，由聚光透镜、虹彩光圈
b
和升降螺旋组成的。其作用是将光源经反光镜反射来的
食品微生物检验技术 样品的制备
• ③车间空气采样：将5个直径90mm的普通营养琼脂平板分别置于车 间的四角和中部，打开平皿盖5min，然后盖上平皿盖送检
• (6)食物中毒微生物检验的取样当怀疑发生食物中毒时，应及时收集 可疑中毒源食物或餐具等，同时收集病人的呕吐物、粪便或血液 等。
• (7)人畜共患病原微生物检验的取样当怀疑某一动物产品可能带有人 畜共患病病原体时，应结合畜禽传染病学的基础知识，用取病原体
用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有 9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀， 制成1：100的稀释液。另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制 10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸 管。
注意事项：
1、无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿 必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊 子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇 在包装开口处擦拭后取样。操作应当在超净工作台或经过消毒处 理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得 超过15个菌落。
2、采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多 采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振 摇，以获得均匀稀释液。
3、样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每 一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸 管。在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管 尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。
一、Hale Waihona Puke 品的采集• 1、样品的种类：
• 样品可分大样、中样、小样三种。大样是指一整批样 品；中样是指从样品各部位取得的混合样品，定型包装 及散装食品均采样250g；小样是指分析用的样品，又称 为检样，检样般为25g。
• (6)食物中毒微生物检验的取样当怀疑发生食物中毒时，应及时收集 可疑中毒源食物或餐具等，同时收集病人的呕吐物、粪便或血液 等。
• (7)人畜共患病原微生物检验的取样当怀疑某一动物产品可能带有人 畜共患病病原体时，应结合畜禽传染病学的基础知识，用取病原体
用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有 9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀， 制成1：100的稀释液。另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制 10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸 管。
注意事项：
1、无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿 必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊 子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇 在包装开口处擦拭后取样。操作应当在超净工作台或经过消毒处 理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得 超过15个菌落。
2、采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多 采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振 摇，以获得均匀稀释液。
3、样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每 一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸 管。在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管 尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。
一、Hale Waihona Puke 品的采集• 1、样品的种类：
• 样品可分大样、中样、小样三种。大样是指一整批样 品；中样是指从样品各部位取得的混合样品，定型包装 及散装食品均采样250g；小样是指分析用的样品，又称 为检样，检样般为25g。
食品检验工培训(5)——食品添加剂食品微生物检测基础
整理ppt
第四步：染色
1.初染（结晶紫）2-3滴一分钟然后水洗。 2.媒染（碘液）2-3滴一分钟然后水洗。 3.脱色（95%酒精）2-3滴一分钟然后水洗。 4.复染（沙黄复染液）2-3滴一分钟然后水洗。
第五步：干燥 第六步：镜检
革兰氏阳性菌被染成紫色， 革兰氏阴性菌被染成红色。
整理ppt
练习题
整理ppt
整理ppt
革兰氏染色
第一步：制片
在干净的载玻片上滴上一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作， 挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成悬液并 涂成直径为1厘米的薄层。若材料为液体培养物或固体培养 物中洗下制备的菌液，则直接涂布于载玻片上即可。
第二步：自然干燥
第三步：固定
手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰外层尽快的来 回通过3-4次，共约2-3秒钟，并不时以载玻片背面加热触及 皮肤，不觉得过烫为宜（不超过60 ℃ ），放置待冷后，进 行染色。
整理ppt
菌落计数
菌落计数及报告：
1、选择菌落数在10~150之间的平板进行菌落计 数。
2、其他同菌落总数一样。
注意事项：
1、培养温度是在25℃~28℃，培养时间是5 天。
2、在往平皿中加培养基时应多加一些。（当 培养基自然漫过平皿底部时再多加一点）
整理ppt
大肠菌群的测定
一、大肠菌群MPN的概念及意义 大肠菌群系指一群在37℃24小时能发
整理ppt
微生物实验室玻璃器皿的准备
一、洗涤
载玻片和盖玻片在清洗前可先在2%盐酸溶液 中浸泡1h。
二、灭菌前的准备
制作棉塞 包扎器皿 灭菌
整理ppt
微生物培养基的制备
❖ 培养基的定义：是根据细菌的生长需要 人工配置的营养环境。
第四步：染色
1.初染（结晶紫）2-3滴一分钟然后水洗。 2.媒染（碘液）2-3滴一分钟然后水洗。 3.脱色（95%酒精）2-3滴一分钟然后水洗。 4.复染（沙黄复染液）2-3滴一分钟然后水洗。
第五步：干燥 第六步：镜检
革兰氏阳性菌被染成紫色， 革兰氏阴性菌被染成红色。
整理ppt
练习题
整理ppt
整理ppt
革兰氏染色
第一步：制片
在干净的载玻片上滴上一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作， 挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成悬液并 涂成直径为1厘米的薄层。若材料为液体培养物或固体培养 物中洗下制备的菌液，则直接涂布于载玻片上即可。
第二步：自然干燥
第三步：固定
手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰外层尽快的来 回通过3-4次，共约2-3秒钟，并不时以载玻片背面加热触及 皮肤，不觉得过烫为宜（不超过60 ℃ ），放置待冷后，进 行染色。
整理ppt
菌落计数
菌落计数及报告：
1、选择菌落数在10~150之间的平板进行菌落计 数。
2、其他同菌落总数一样。
注意事项：
1、培养温度是在25℃~28℃，培养时间是5 天。
2、在往平皿中加培养基时应多加一些。（当 培养基自然漫过平皿底部时再多加一点）
整理ppt
大肠菌群的测定
一、大肠菌群MPN的概念及意义 大肠菌群系指一群在37℃24小时能发
整理ppt
微生物实验室玻璃器皿的准备
一、洗涤
载玻片和盖玻片在清洗前可先在2%盐酸溶液 中浸泡1h。
二、灭菌前的准备
制作棉塞 包扎器皿 灭菌
整理ppt
微生物培养基的制备
❖ 培养基的定义：是根据细菌的生长需要 人工配置的营养环境。