不同流式细胞分析仪检测淋巴细胞亚群的比较研究解析
流式细胞术检测淋巴细胞亚群的常见问题及注意事项
流式细胞术检测淋巴细胞亚群的常见问题及注意事项摘要目的规范流式细胞术检测淋巴细胞亚群的操作，保证检测结果准确性，对检测过程中出现的常见问题及注意事项进行汇总，提出解决方案。
方法对本科室使用贝克曼FC500流式细胞仪检测淋巴细胞亚群的检测过程中出现的各种问题进行汇总、整理和分析，提出解决方法。
结果流式细胞术检测淋巴细胞亚群中的常见问题包括前处理中遇到的的问题、实验操作过程中遇到的问题和分析过程遇到的问题等。
采用控制实验环境条件、多步骤多次核对标本信息、严格规范操作等方法可解决检测中存在的上述问题。
讨论淋巴细胞亚群是常见检测项目之一，实验过程中容易出现各种问题，只有发现、解决和预防这些问题，才能保证检测结果的准确性和可靠性。
关键词：淋巴细胞亚群流式细胞仪一、淋巴细胞亚群淋巴细胞是构成人体免疫系统的主要细胞，主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞及NK细胞，三种亚群的分布比例及数量具有重要的临床意义。
检测淋巴细胞亚群的方法有很多种，目前比较常用的是流式细胞术。
二、流式细胞术流式细胞术是用荧光素（如CD3，CD4，CD19等）标记细胞，经过与细胞上的抗原反应，经过流式细胞仪检测，通过对细胞荧光素表达情况，分析标本中的淋巴细胞及淋巴细胞亚群的比例和数量。
三、检测过程中遇到的问题1.分析前1.1 标本前处理1.1.1 实验前应核对标本的信息一致性，确认实验项目。
对标本进行排序和编号，T和NKB需分开编管，并做好标记。
1.2 实验操作1.2.1 加抗体时应核对抗体是否无误，避免加错抗体；每加一次抗体需更换枪头，避免污染试剂瓶中的抗体；检查抗体量，以防多加或漏加。
1.2.2 加标本前，应观察标本状态，是否存在凝集、黄疸、溶血等，加样时，再次核查试验号和项目，充分混匀标本，加样时避免枪头碰试管壁，如管壁沾有血迹，用干净棉签拭去；做绝对计数时，为保证结果准确性，采用反向加样。
1.2.3 溶血时应严格按量按时溶血，若溶血效果不好，可以适当延长溶血时间。
PDF版 淋巴细胞亚群和流式细胞术
淋巴细胞计数减少，同时/或者： 淋巴细胞中某个亚群（绝对）计数减少，同时/或
者：
某活化淋巴细胞亚群%减少 有些患者临死前的B细胞计数会非常低！
比如对于感染性疾病患者可帮助了解 有没有感染的免疫反应？
哪群细胞反应强烈？细胞免疫反应为主还是体液免 疫为主？
是否存在免疫反应降低？
自身免疫病中某些亚群细胞活化增高增高，特别是 T细胞中的CD4细胞
CD8细胞又包括以下两群： 抑制性T细胞（Ts）具有抑制细胞免疫及体液免疫癿功能 细胞毒性T细胞（Tc）具有杀伤靶细胞癿功能
B细胞，最早在禽类中发现，称（法氏）囊依赖性淋 巴细胞，祖细胞存在于胎肝癿造血细胞岛中，此后B 淋巴细胞癿产生和分化场所逐渐被骨髓所代替
其分化成熟经历前B细胞、丌成熟B细胞、 成熟B细内加入植物凝集素（诱导T细胞），48小时观察 结果
传统测定T细胞癿方法 我们癿改进是用克脑迷（Antiradon ）处理绵羊红
细胞，4℃可保存1周 不小鼠红细胞形成花环癿为B淋巴细胞
系一种免疫组化技 术，通过复合物中 的碱性磷酸酶催化 底物显色来判断抗 原分子的存在
用于淋巴细胞分化 抗原、活化抗原、 MHC-I、II类抗原表 达的检测等
• 肾脏和心脏移植后接受预防排斥的免疫调节药物OKT-3的患 者
• 恶性肿瘤、自身免疫性疾病（SLE和RA等）、先天性免疫 缺陷病、艾滋病、接受放疗、化疗或者使用肾上腺皮质激 素等免疫抑制剂资料的患者
T细胞增多，常见于：见于慢性活动性肝炎、重症肌无力
等自身免疫病活动期
即辅助性T细胞无论对于细胞免疫还是体液免疫都非常重要，
报告绝对值能让临床医师能够一目了然地获知何种 淋巴细胞亚群发生了异常，所以很受欢迎
某一亚群活化百分比升高见于该亚群的淋巴细胞功 能亢进或活性被调动起来了
简述免疫细胞亚群及其流式细胞检测分子标志
一、概述免疫细胞是机体抵抗外界侵入的重要组成部分，通过识别和消灭病原体和异常细胞来维护机体内稳衡。
免疫细胞亚裙指的是免疫细胞的不同类型和功能亚裙，包括T细胞亚裙、B细胞亚裙、自然杀伤细胞、抗原呈递细胞等。
流式细胞检测是一种用于分析细胞表面和内部分子的技术手段，通过标记特定的细胞分子，可以帮助科研人员了解免疫细胞亚裙的表达情况，从而深入研究其在免疫调节和疾病发生发展中的作用。
二、T细胞亚裙及其分子标志1. 辅助T细胞（Th细胞）辅助T细胞是免疫应答的重要调节者，根据其分泌的细胞因子不同可分为Th1、Th2、Th17和Treg等亚裙。
流式细胞检测常用的分子标志包括CD4、IFN-γ、IL-4、IL-17和Foxp3等，通过检测这些标志物可以对不同类型的辅助T细胞进行定量和质量分析。
2. 细胞毒T细胞（Tc细胞）细胞毒T细胞主要起到直接杀伤感染细胞和肿瘤细胞的作用，其分子标志包括CD8、Perforin、Granzyme B等。
通过流式细胞检测可以准确检测细胞毒T细胞的活性和数量。
三、B细胞亚裙及其分子标志B细胞是体液免疫应答的主要执行细胞，根据其分泌的抗体类型和功能可分为不同的亚裙。
流式细胞检测常用的分子标志包括CD19、CD20、CD27、IgG、IgM等，通过检测这些标志物可以分析B细胞的活化、分化和功能状态。
四、自然杀伤细胞及其分子标志自然杀伤细胞是一类重要的淋巴细胞，主要起到对病毒感染和肿瘤细胞的直接杀伤作用。
流式细胞检测常用的分子标志包括CD56、NKG2D、Perforin、Granzyme等，通过检测这些标志物可以分析自然杀伤细胞的活性和数量。
五、抗原呈递细胞及其分子标志抗原呈递细胞主要包括树突状细胞、巨噬细胞和B细胞等，其在免疫应答中起到识别和捕获抗原、激活T细胞和B细胞的作用。
流式细胞检测常用的分子标志包括CD11c、CD11b、MHC-II、CD86等，通过检测这些标志物可以分析抗原呈递细胞的数量和功能状态。
流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的准确性评价
流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的准确性评价夏欣欣;王慧睿【摘要】目的:探讨流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的准确性.方法:选取2016年3月至2017年3月收治的恶性肿瘤患者36例为观察组,另选取同期就诊的非肿瘤患者36例为对照组,比较两组对象的外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD8+T细胞数量;利用流式细胞术对两组患者外周血T淋巴细胞亚群进行检测,判断该检测结果与临床诊断结果的符合率.结果:观察组患者的CD3+T细胞数量为(823.42±212.03)个/mm3,低于对照组的(1270.21±685.14)个/mm3(t=2.786,P=0.008);观察组患者的CD4+T细胞数量为(424.06±235.02)个/mm3,低于对照组的(750.98±367.56)个/mm3(t=2.786,P=0.008);观察组患者的CD8+T细胞数量为(860.94±633.86)个/mm3,高于对照组的(456.37±334.20)个/mm3(t=2.525,P=0.016);观察组患者的CD4+/CD8+T细胞数比值为(0.51±0.29),低于对照组的(2.11±1.32)(t=5.295,P=0.000);流式细胞术对患者外周血T淋巴细胞亚群检测结果的符合率为100.0％.结论:采用流式细胞术检测恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群准确性较高,能够为恶性肿瘤的临床诊断和治疗提供依据.【期刊名称】《包头医学院学报》【年(卷),期】2018(034)003【总页数】2页(P5-6)【关键词】流式细胞术;恶性肿瘤;外周血T淋巴细胞亚群;检测准确性【作者】夏欣欣;王慧睿【作者单位】郑州大学附属洛阳中心医院肿瘤科,河南洛阳471000;郑州大学附属洛阳中心医院血液科【正文语种】中文恶性肿瘤的发生、发展与患者机体免疫功能的关系密切，在机体抗肿瘤免疫监视功能中，免疫系统具有非常重要的作用，而在维持人体机体免疫平衡的过程中，T细胞及其亚群所起到的作用至关重要，如T细胞亚群发生功能或数量改变时，机体的免疫功能紊乱，从而导致疾病[1-2]。
流式检测淋巴细胞亚群在临床中的应用
平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
化疗(n=48) 67.60 27.40 28.20 0.82 13.20 7.40 5.80
放疗(n=81) 65.30 22.30 34.10 0.73 5.90 8.10 6.90
手术(n=82) 65.20 34.00 29.00 1.20 9.10 6.30 7.70
p值
0.311 0.007 0.035 0.032 0.045 0.031 0.165
* t检验：P<0.05 显著性差异
手术、化疗和放疗对肺癌患者淋巴细胞亚群的影响
平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
手术 (n=152) 67.57 34.39 31.09 1.25 16.08 6.42 8.64
化疗(n=244) 67.67 33.78 32.07 1.30 16.27 7.48 7.93
放疗(n=164) 65.64 28.59 32.99 1.13 17.98 5.85 6.58
p值
0.093 0.001 0.021 0.011 0.045 0.029 0.430
* t检验：P<0.05 显著性差异
2、流式专业讲座：流式相关免疫学、流式相关血 液学、流式相关其他实验。
3、临床流式疑难病例解答：临床在职流式专家为 您解决临床检测中遇到的疑难病例问题，帮您更好 的做出诊断。
4、交流平台：丰富的交流平台可以让更多的流式 从业者在此交流心得，互相帮助，获得更多有用的 信息。
流式细胞术检测肺结核患者血清T淋巴细胞亚群分析
流式细胞术检测肺结核患者血清T淋巴细胞亚群分析【摘要】目的：分析流式细胞术检测中肺结核患者血清T淋巴细胞亚群的改变。
方法：将2015年6月-2016年6月医院收治的100例肺结核患者进行流式细胞术检测，进行血标本采集，随后观察肺结核患者经过治疗后血清T淋巴细胞亚群的改变情况，并且与未患病者进行比较。
结果：初至活动性肺结核患者血清中CD4+、CD4+/CD8+降低，而CD3+、CD8+升高，与正常对照组相比，CD8+、CD4+/ CD8+差异有显著性（P <0. 05）；病变范围广泛者的CD3+、CD4、CD4+/CD8+ 较病变范围小者低，CD3+ 差异有显著性；痰菌阳性者与阴性者比较，CD4+/CD8+ 下降，CD8+升高，但差异无显著性（P >0. 05）。
结论：初治活动性肺结核患者的T 细胞亚群变化存在其自身特点。
对肺结核患者 T 淋巴细胞亚群的检测有助于判断病情、了解抗结核治疗效果。
【关建词】流式细胞术检测；肺结核；T淋巴细胞亚群肺结核是由结核杆菌感染引发的一种慢性传染性疾病，据相关资料表明，我国是高居第二位的结核病高负担国家。
肺结核早期临床表现及体征同其他相关肺疾病相似，易导致误诊或漏诊，进而使病情延误。
T淋巴细胞作为机体执行细胞免疫主要效应细胞之一，其亚群改变对肺部疾病的发生及发展具有直接影响，因此，对T淋巴细胞亚群水平予以相关检测，直接关乎到患者机体免疫功能改善、肺部疾病病情的临床诊断及治疗。
对此，现选取100例初治性肺结核患者，对其血清中T淋巴细胞亚群情况进行分析，相关结果总结并报告如下。
1 资料与方法1.1 一般资料（1）肺结核患者组：选取2015年6月-2016年6月医院收治的肺结核患者100例，其中男58例，女42例，年龄15-76岁，平均（43±2.85）岁，其中结核菌阴性56例，结核菌阳性44例。
诊断依据为：有结核中毒症状；X 线检查及CT 检查发现结核病灶，并提示结核活动；结核菌阳性者痰涂片、痰培养或气管镜刷检找到结核分枝杆菌；结核菌阴性者经诊断性抗结核治疗病灶吸收。
两种流式细胞仪检测T细胞亚群的比对分析
两种流式细胞仪检测T细胞亚群的比对分析流式细胞仪是一种用于研究和分析细胞的仪器。
它可以通过分析细胞的表面标记物或细胞内的分子，来获得关于细胞亚群的信息。
其中，T细胞是一类重要的免疫细胞，可以分为多个不同的亚群，如细胞毒性T细胞（CD8+）、辅助性T细胞（CD4+）等。
在免疫学研究和临床检测中，了解T细胞亚群的数量和比例对于评估免疫功能的状态至关重要。
下面将介绍两种常用的流式细胞仪检测T细胞亚群的比对分析方法。
1.全血淋巴细胞表面标记法全血淋巴细胞表面标记法是通过将新鲜全血样本进行细胞表面标记，然后使用流式细胞仪进行分析。
该方法的优点是样本处理简单快速，可以直接得到体内T细胞亚群的比例。
具体步骤如下：（1）制备淋巴细胞上清液：将新鲜全血样本与等体积的生理盐水混合，用离心管密封离心，将上清液分离出来。
（2）染色：将淋巴细胞上清液转移到离心管中，加入适量的表面标记的单克隆抗体。
常用的表面标记抗体有CD3、CD4和CD8等。
（3）洗涤：离心管密封离心，将上清液倒掉，再次加入适量的生理盐水洗涤淋巴细胞。
（4）流式细胞仪检测：将洗涤后的细胞上样到流式细胞仪中，设置相应的检测参数，如激发波长和荧光信号的检测通道。
通过流式细胞仪收集数据，并使用分析软件对数据进行解析和计算。
这种方法的优点是可以同时检测多种T细胞亚群，准确计算亚群的比例。
但是由于这种方法无法获得细胞内的功能和分子表达信息，只能通过表面标记物进行鉴定。
2.胞浆染色法胞浆染色法是通过流式细胞仪检测细胞胞浆内的标记物，从而分析T 细胞亚群的比例。
该方法通常与细胞表面标记法联合使用，可以同时获得细胞表面和胞浆内的信息。
具体步骤如下：（1）制备全血淋巴细胞上清液：与全血淋巴细胞表面标记法相同。
（2）染色：将淋巴细胞上清液进行细胞膜标记和胞浆胞浆标记。
胞浆标记常用的有抗体和荧光染料，如免疫球蛋白（IgG）等。
（3）洗涤：与全血淋巴细胞表面标记法相同。
（4）流式细胞仪检测：与全血淋巴细胞表面标记法相同，但需要在分析软件中选择相应的通道来检测胞浆标记物。
流式细胞术检测淋巴细胞亚群的原理及注意事项
流式细胞术（flow cytometry）是一种广泛应用于生物医学领域的技术，它通过检测细胞表面和内部分子的存在和数量，从而可以对细胞进行高度特异性的分析和分类。
在临床诊断、生物医学研究以及药物开发等方面都有着重要的应用。
其中，流式细胞术检测淋巴细胞亚群，可以帮助我们更好地了解免疫系统的功能状态，对于免疫相关疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本文将从原理和注意事项两个方面，深入探讨流式细胞术检测淋巴细胞亚群的相关知识。
**一、流式细胞术检测淋巴细胞亚群的原理**1. 标本处理流式细胞术检测淋巴细胞亚群的首要步骤是标本处理。
通常情况下，我们会收集外周血进行检测。
在实际操作中，需要抗凝剂进行处理，避免血液凝固，从而保证细胞的完整性。
2. 抗体染色标本处理完成后，接下来是抗体染色。
我们会选择特定的单克隆或多克隆抗体，将其与待检测的淋巴细胞结合。
这些抗体会携带着荧光标记，通过激光的激发，可以将淋巴细胞亚群进行精准识别。
3. 流式细胞分析染色完成后，样本会被注入到流式细胞仪中，通过激光的激发和散射光的检测，可以将不同淋巴细胞亚群进行高效、高速的分析。
在这一步骤中，流式细胞仪会根据荧光信号的强度和特异性来对淋巴细胞进行分类和计数。
4. 数据分析通过计算机对流式细胞仪获取的数据进行分析和解读，我们可以得到淋巴细胞亚群的比例、数量和表达特征等信息，从而更好地了解免疫系统的状态和功能。
**二、流式细胞术检测淋巴细胞亚群的注意事项**1. 样本保存在进行流式细胞术之前，我们需要认真保存样本，避免细胞的损伤和变性。
通常情况下，标本需要在4摄氏度下保存，并尽快进行检测，避免细胞的失活和降解。
2. 抗体选择在进行抗体染色时，需要根据实际情况选择合适的抗体，保证其对于待检测的淋巴细胞具有高度的特异性和亲和性。
还需要注意避免抗体的交叉反应，以免对结果的准确性造成影响。
3. 仪器校准流式细胞仪作为检测设备，需要定期进行校准和质控。
新版流式淋巴细胞亚群检测技术原理
B 细胞
GM-CSF, TGF-
CD8+ 抗原肽+ 感染病毒的 FasL 穿孔素, 粒酶，IFN-, -细胞免疫
CTL I 类分子 靶细胞
TNF-, TNF-
T4细胞增高
提醒体内存在细菌等病原微生物感染，主要见于临床多种 细菌性感染性疾病。
器官移植发生排斥反应 支气管哮喘 SLE活动期 某些免疫增强药物旳有效成果 注意:昼夜变化（傍晚旳峰值可为上午旳两倍）
常用荧光素
荧光素分子 FITC PE PerCP APC PE-Cy5 PE-Cy7
激发光波长 （nm）
488 488 490 633 488 488
发射光波长 （nm）
525 575 675 660 670 755
中文名 异硫氰酸荧光素 藻红蛋白 多甲藻叶绿素蛋白 别藻青蛋白 藻红蛋白-花青素5 藻红蛋白-花青素7
药物/放化疗等） 急慢性肝炎患者 呼吸道感染患者 胰岛素依赖型糖尿病患者
谢谢大家！
免疫荧光染色
FCM可检测下列细胞成份： 表面标识物 胞浆标识物 核内标识物 可溶性成份
联合CD45旳四色方案
第一种是用CD45/CD3/CD4/CD8做四色标识，主要能够检测 T3细胞、T4细胞、T8细胞这三种不同旳亚群
CD45-FITC CD4-RD1 CD8-ECD CD3-PC5
T4/T8细胞比值与肿瘤
恶性肿瘤患者术前T4/T8细胞比值低，手术后比值恢复正 常
当发生癌转移时,T3、T4细胞数明显降低旳同步T8细胞数 明显增多
T4/T8比值明显降低,提醒恶性肿瘤患者晚期细胞免疫功能 更低,预后更差
B细胞旳功能
①产生抗体
②提呈抗原 ③免疫调整
B细胞增高
流式细胞术(FCM)简单介绍及淋巴细胞亚群结果判读-精品医学课件
EDTA抗凝样本最好不要超过24小时。使用除EDTA以外其它抗凝剂的样本，在 送检时应同时送未染色的血液涂片作形态学检测。
其它体液
CLSI H43-A2-2007
肝素钠、EDTA和ACD都可使用。用ACD过夜保存的标本的细胞可能较脆弱，活 力也较低。如果使用ACD，应使体液和抗凝剂保持合适比例，以免改变pH，从 而导致细胞活力的降低。
计数基本正常，则可明确此群细胞存在异常。
一种淋巴细胞亚群变化(相对数)
• 二一判别法：判别T、B、NK淋巴细胞亚群中哪一种是引起相对数改变的原因。
• 三种淋巴细胞中，二种百分比变化趋势一致的，另一种则是异常的根源
• 一二判别法：判别T细胞两个亚群中哪一种是引起相对数变化的原因
• 以CD3+T细胞百分比为基准，CD4+和CD8+哪种百分比变化趋势与CD3+T一致，这种T细胞亚 群则是异常的根源
• 过敏性疾病：并非所有这类患者都需要进行淋巴细胞亚群的检测。 对于一些严重的过敏患者应考虑淋巴细胞亚群的检测。
• ① 婴幼儿时期全身严重湿疹样表现 • ② 嗜酸性粒细胞显著增多 • ③ 血清IgE水平明显增高（IgE>1000IU/L） • ④ 伴有反复、严重感染的患者
Williams KW, Milner JD, Freeman AF. . Immunol Allergy Clin North Am. 2015;35(3):523-44.
本的活力，这对于新鲜组织标本尤为重要。对送检作流式细胞术分析的所有组织样本，和采集后24小 时才送达的外周血或骨髓样本都必须做活力评估。 对低活力样本的处理 CLSI H43-A2-2007 ➢ 对活力＜75%的非不可替代样本应予以拒收。 ➢ 如果是活力＜75%的不可替代样本（骨髓或组织） ，应出具一份声明以注明样本活力不佳，但必须报 告所有区分出来的异常细胞群体。 ➢ 如果未能区分异常细胞群，且活力＜75%，应考虑拒收样本并要求重新采集。
流式细胞术淋巴细胞亚群检测室间质评结果分析
流式细胞术淋巴细胞亚群检测室间质评结果分析朱宇清;朱俊;徐翀【摘要】目的通过分析卫生部临床检验中心、上海市临床检验中心的淋巴细胞亚群室间质量评价(EQA)报告数据以及上海市2家实验室室内质控上报数据,探讨目前国内淋巴细胞亚群检测EQA评判规则的合理性,为进一步提高国内该检测项目的质量水平提供依据.方法对BD流式细胞仪用户组2014年卫生部临床检验中心及2015年上海市临床检验中心第1次淋巴细胞亚群EQA报告数据进行统计,计算各浓度质评样本上报数据的标准差(s)和变异系数(CV),选取上海市2家BD流式细胞仪用户2014年9月至2015年4月期间的淋巴细胞亚群室内质控数据,计算月s和月CV值.并对卫生部临床检验中心第201403和201405号质评样本CD3+CD4+百分比(CD3+ CD4+％)项目(靶值分别为42.7％、42.1％)、上海市临床检验中心第1521和1525号质评样本CD3+CD4+％项目(靶值分别为43.2％,44.13％)的回报数据以及2家上海市临床实验室CD3+ CD4+％项目中值水平(月组均值为44.39％～ 46.80％)室内质控数据进行比较分析.结果 2014卫生部临床检验中心5份EQA样本的s为1.10％～ 1.55％,CV为3.1％～5.5％,平均CV为3.36％;2015年上海市临床检验中心第1次EQA 5份样本的s为0.67％～1.63％,CV为3.51％～8.64％,平均CV为4.83％.在样本CD3+ CD4+％值相近的情况下,卫生部临床检验中心2个EQA样本组s(1.55％、1.35％)和组CV(3.6％、3.2％)、上海市临床检验中心2个EQA样本的组s(1.63％、1.55％)和组CV(3.78％、3.51％)均在上海市2家临床实验室室内质控月s(1.06％～2.44％、0.98％～ 2.03％)和月CV(2.18％～5.28％、2.14％～4.35％)的变化范围之内.结论由于仪器品牌和型号、溶血方法、荧光抗体的品牌和用量、设门方法、实验人员、环境条件等不同因素的影响,EQA数据统计中的s和CV低于室内质控的s和CV不合理.其原因可能是部分参与EQA的实验室在数据上报前对检测结果进行了交流、核对和更改.当前除了加强对实验室的质量教育外,EQA组织者还需要探讨建立更合适的质控规则.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2015(030)011【总页数】5页(P1086-1090)【关键词】淋巴细胞亚群;流式细胞术;室间质量评价;标准差;变异系数【作者】朱宇清;朱俊;徐翀【作者单位】上海市临床检验中心,上海200126;上海市临床检验中心,上海200126;上海市临床检验中心,上海200126【正文语种】中文【中图分类】R446.63淋巴细胞亚群检测对影响机体免疫系统的多种因素的诊断和监测提供了重要信息。
如何运用流式细胞仪进行T淋巴细胞亚群分析
如何运用流式细胞仪进行T淋巴细胞亚群分析流式细胞技术(FCM)是70年代发展起来得一种快速对单细胞定量分析的新技术,它借鉴了荧光显微镜技术,同时利用与荧光染料,激光技术,单抗技术以及计算机技术的发展,将荧光显微镜的激发光源改为激光,使之具有更好的单色性与激发效率,因而大大提高了检测灵敏度,同时将固定的标本台改为流动的单细胞悬液,用计算机进行数据处理,因而大大提高了检测速度与统计精确性,而且从同一个细胞中可以同时测得多种参数,为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的视角和强有力的手段.目前,该技术已经广泛用于基础研究与临床应用,在免疫学,遗传学,血液学,肿瘤学等领域内发挥前重要的作用.本文着重介绍流式细胞仪基本原理及其在临床上的应用.基本原理：流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪（fluorescence activated cell sorter,FACS）,是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。
其原理是在一组混合的细胞群中，加入特异的针对特定靶细胞表面分子的荧光标记单克隆抗体，这种特异单克隆抗体与其对应的抗原靶分子结合，结合后的荧光标记抗体停留在特定细胞的表面，称为荧光抗体标记的靶细胞；将含有被标记细胞的混合细胞群混悬在一定容积的上样缓冲液中，再通过FACS的进样吸管孔，仪器就会将细胞悬液制成以单细胞排列的微细流束。
当每一个细胞通过仪器的激光束照射时，带在细胞上的荧光就会被相应的激光束激活并发出对应的荧光，通过敏感的光电倍增管即可检测到从细胞表面发出的荧光。
根据测得的散射光（scattered light ）可得到细胞大小及颗粒状态的信息；而从荧光的发射强度(fluorescence emissions)则提供了结合在细胞上的抗体信息，进而也被反映了该细胞表面相应分子的表达情况。
流式细胞仪检测淋巴细胞亚群抗体用量的探讨
手术导致单核细胞活化继续下降 提示单核细胞活化表达可用来监测手术后暂时性的免疫抑制 单核细胞-血小 板黏附升高 提示 CD42a+/CD14+与术后应急反应 炎性反应有关 HLA-DR+/CD14+术后呈下降将趋势 术后第 3 天最底 之后又呈上升恢复趋势 CD42a+/CD14+ % PLT 1012/ml WBC 109/ml 术后呈上升趋势 术后第 3 天最高 之后又呈下降恢复趋势 HLA-DR+/CD14+低点与 CD42a+/CD14+ % PLT 1012/ml WBC 109/ml 顶点之间相关 且 HLA-DR+/CD14+ % 与 CD42a+/CD14+ % 负相关 r=-0.897 HLA-DR+/CD14+ % 与 PLT 负相关 r=-0.998 HLA-DR+/CD14+ % 与 WBC 负相关 r=-0.742 CD42a+/CD14+ % 与 PLT 正相关
流式细胞仪检测淋巴细胞亚群抗体用量的探讨
俞 颖 许志良 陈益民 谈潘莉 钱丽丽 浙江中医药大学附属第一医院实验诊断中心 310006
淋巴细胞是正常人体免疫功能最重要的一大细胞群 根据其生物学功能及表面表达抗原 人类淋巴细胞可主要 分为三群 T 淋巴细胞 B 淋巴细胞和 NK 细胞 目前淋巴细胞免疫分型检测的方法首选流式细胞术 flow cytometry, FCM 流式细胞仪是集光学 电子学 流体动力学和计算机技术于一身的大型精密的现代生物医学仪器 它能够 精确 快速地对单个细胞进行定量分析和有效分选 目前 FCM 用于免疫学基础研究和临床医学的各个方面 应用 流式细胞仪检测淋巴细胞膜表面的抗原表达时 各实验室荧光抗体用量均不同 且试剂盒也仅有推荐用量 并无标 准化 为寻求适合本实验室自身的条件的抗原-抗体反应的最佳用量 节约成本 减少不必要浪费 对此进行了探讨 结果如下 1 材料与方法 1.1 病例
浅析淋巴细胞亚群功能检测技术
外科 杂志，2 0 0 9，12（13）：211-212 . [2] 胡祥，曹亮，于艺，等. 保留幽门和迷走神经的胃部分 切除手术对早期
胃癌的疗效观察[J]. 中华胃肠外科杂志，2010，13（12）：908-909. [3] 胡祥，曹亮，于艺，等. 保留幽门及迷走神经的胃部分 切除术治疗早期
目前国内外多采用检测N K 细胞活性 来研究不同疾病状态下 N K 细胞的杀伤功能。体外N K 细胞活性测定的方 法较多，常用的 有流 式细胞 术、形 态学 方 法、放 射 性同位 素释放 法、酶 释放 法、 特异性荧光 染料释放法等。本节仅介绍流式细胞仪测定 N K 细胞 功能。
N K细胞活性是一种细胞介导的细胞毒作用，它无须特异性抗 体 参与，也无 M HC限制性，不经抗原活化即能直接杀伤靶细胞。 实验选用K 562细胞为测定人 N K 细胞活性的靶细胞，利用碘化丙 啶 染 料 排斥法，这种染 料 具 有只渗透 到死亡细胞内的特点，用流 式 细胞仪检 测靶细胞 受 N K 细胞作用后的死亡率来反映 N K 细胞的 活性。
根 据 斑 点 形成的多 少 和 大 小 判定 淋巴细 胞 分 泌 细 胞因子（如 I F N-Y）或I g的功能。每一个着色斑点代表一个 独立细胞分泌细
胞因子（如I F N-Y）的情况，斑点的数目代表抗原特异性淋巴细胞 的 数 量，斑 点的大 小和 染 色 程 度 则反 映 淋巴细 胞分泌细 胞因子 或I g的水平。 2 T淋巴细胞功能测定技术 2.1 T淋巴细胞转化试验
MEDICALLABORA TORY SCIENCES 医学检验
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基于流式细胞术的淋巴细胞亚群分类试验条件比较
基于流式细胞术的淋巴细胞亚群分类试验条件比较姜华;文海若;刘丽;颜玉静;霍艳【摘要】目的比较不同抗体稀释度和多聚甲醛浓度对流式细胞术测定淋巴细胞亚群分类结果的影响.方法取猴抗凝全血经浓度为1％或4％的多聚甲醛固定后连续4 d上机测定淋巴细胞荧光强度及CD3+、CD4+、CD8+、CD20+百分率及CD4+/CD8+比值.取猴抗凝全血50μl分别与1、3、5和10μl CD8+-FITC、CD4+-PE、CD3+-PerCP抗体混合后连续7 d上机测定CD4+和CD8+荧光强度及CD4+与CD8+百分率和CD4+/CD8+比值.结果经1％多聚甲醛固定至第4天检测雄性动物CD4+、CD8+、CD3-CD20+百分率和雌性动物CD8+百分率与样本制备当天相比存在显著性差异(P<0.05,P<0.01),且存在时间依赖性.样本保存至第4天时以1％多聚甲醛保存的样本CD4+、CD8+、CD3-CD20+百分率与4％多聚甲醛保存的样本相比亦存在显著性降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001).50μl抗凝全血中添加1μl抗体时,自制备后第4天起CD4+平均荧光强度即显著降低(P<0.01).所有样本至第4天起,CD4+及CD8+平均荧光强度显著性衰减(P<0.01).结论不同多聚甲醛使用浓度、抗体用量及保存时间均对样本的状态和试验结果产生一定影响.如流式样本当天无法测定,样本可于4％浓度的多聚甲醛中稳定保存至制备后第4天检测;在50μl全血中应添加至少3μl抗体用于检测,以保证流式细胞仪对淋巴细胞表型识别的灵敏度,检测应于样本制备后3天内完成.【期刊名称】《中国医药生物技术》【年(卷),期】2019(014)005【总页数】6页(P400-405)【关键词】流式细胞术;抗体;淋巴细胞亚群分类;食蟹猴;多聚甲醛【作者】姜华;文海若;刘丽;颜玉静;霍艳【作者单位】100176 北京,中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室;100176 北京,中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室;100176 北京,中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室;100176 北京,中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室;100176 北京,中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室【正文语种】中文目的比较不同抗体稀释度和多聚甲醛浓度对流式细胞术测定淋巴细胞亚群分类结果的影响。
临床实验室淋巴细胞亚群检测现状的调查与分析
临床实验室淋巴细胞亚群检测现状的调查与分析李臣宾;陆红;周文宾;彭明婷【摘要】目的调查临床实验室淋巴细胞亚群的检测现状,结合全国室间质量评价数据进行分析,为质量改进提供依据.方法以参加全国淋巴细胞亚群检测室间质量评价的200家为调查对象,通过问卷调查,收集相关检测信息,并将2011～2013年的全国室间质评数据与同期美国Wadsworth Center质评数据进行比较,分析检测现状.结果调查问卷回报率为87.5％;三级医院的实验室占88.6％;使用光路流路校准品、PMT电压校准品和荧光补偿样品的实验室各占97.7％、88.6％和88.6％;实验室均采用包括CD3抗体在内的至少2种抗体进行T细胞亚群和NK细胞检测;26.3％的实验室曾使用全血质控物开展室内质控;38.5％的实验室使用CD45/SSC设门;30.3％的实验室报告绝对计数值,其中采用单平台方法的占62.3％.2011～2013年全国淋巴细胞亚群检测质评CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-(CD16+56)+和CD3-CD19+五类细胞的相对计数的变异系数分布范围为(3.0～9.8)％,绝对计数的变异系数分布范围为(15.8～30.4)％,而美国质评相对计数和绝对计数的变异系数分布范围分别为(2.0～10.0)％和(7.0～13.0)％.结论参加淋巴细胞亚群检测质评的实验室主要来自各地的三级医院,其检测能力代表了我国淋巴细胞亚群检测的较高水平;流式细胞仪检测状态的质量监控已在开展,但样本检测过程的质量控制(如全血质控品应用、设门方案等)未有效开展;我国质评计划结果中相对计数的变异系数略高于美国,而绝对计数的变异系数差距更明显.应进一步制订相关标准并实施标准化.【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2015(017)003【总页数】6页(P203-208)【关键词】淋巴细胞亚群;流式细胞术;问卷调查【作者】李臣宾;陆红;周文宾;彭明婷【作者单位】100730 卫生部北京医院,卫生部临床检验中心;100730 卫生部北京医院,卫生部临床检验中心;100730 卫生部北京医院,卫生部临床检验中心;100730 卫生部北京医院,卫生部临床检验中心【正文语种】中文【中图分类】R331.+44;R392.11为了解临床实验室开展淋巴细胞亚群检测的现状，卫生部临床检验中心设计调查问卷，对开展淋巴细胞亚群检测的临床实验室进行调查，同时对2011～2013 年全国室间质量评价的数据进行分析，拟为临床实验室淋巴细胞亚群检测质量的改进提供参考依据。
淋巴细胞亚群检测报告怎样看懂？
淋巴细胞亚群检测报告怎样看懂？淋巴细胞是一种包括T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等多个亚群的白细胞，它们各自具备不同的免疫作用，协同工作来维护机体免疫平衡和抵御外部侵害。
淋巴细胞亚群检测可以帮助医生了解不同亚群的数量和比例，从而判断免疫系统是否受到影响，同时也能够为一些免疫相关疾病的诊断提供重要参考依据。
在本文中，我们将详细介绍淋巴细胞亚群检测报告中的各项指标含义及其正常值范围，希望能够帮助您更好地理解和解读检测结果。
1.淋巴细胞亚群是如何检测淋巴细胞亚群的检测通常采用流式细胞术、荧光素标记技术等方法。
流式细胞术是一种通过测量单个细胞的光学和物理特性来分析淋巴细胞亚群的数量和比例的技术。
通过将淋巴细胞标记上荧光素等物质，然后把标记的淋巴细胞注入流式细胞术仪中，利用激光束照射、散射、荧光及电导等特性检测并分析细胞的类型、数量、活性等参数，从而识别出各类淋巴细胞亚群。
而荧光素标记技术则是一种在淋巴细胞前处理过程中进行标记的技术，该技术可将淋巴细胞分类并标记在表面（例如用荧光标记）后，再使用流式细胞仪来测量并分析淋巴细胞亚群的数量、活性以及分布情况等。
这些检测方法都是无创的、准确度较高、操作简便、结果可靠，已经成为临床上常用的检测手段之一。
1.淋巴细胞亚群检测的临床意义2.1 评估机体免疫功能淋巴细胞是机体免疫系统中最重要的细胞类型之一，在免疫应答中发挥着重要作用。
淋巴细胞亚群检测可以对机体免疫功能进行全面评估，了解机体是否有免疫功能障碍或免疫力下降等问题。
2.2 辅助诊断病情淋巴细胞亚群检测可以帮助医生判断感染性疾病的类型及病情轻重，如通过测定CD4+ T细胞数目，可以确定HIV感染者的病情进展及治疗效果；通过测定CD8+ T细胞数目，可以推测病毒性肝炎等疾病的病情程度。
2.3 指导免疫治疗方案针对某些自身免疫性疾病例如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等，淋巴细胞亚群检测可以帮助医生选择合适的免疫调节治疗方案。
淋巴细胞亚群检测浅谈
淋巴细胞亚群检测浅谈免疫系统是人机体执行免疫应答及免疫功能的一个重要系统。
人体之所以能够在充满病毒、细菌及其他病原体的环境中正常生活，离不开一个正常的免疫系统。
免疫系统由免疫器官和组织、免疫细胞及免疫分子组成。
免疫细胞是指参与机体免疫应答的细胞，大致分为两类，一类能识别特异性抗原，一旦被激活则显示出特异性免疫应答的功能，主要指淋巴细胞亚群，包括T细胞，B细胞、NK细胞等，另一类主要是免疫辅助细胞，能够捕获异物，处理抗原，如中性粒细胞、树突状细胞、吞噬细胞等。
我们这里所介绍的淋巴细胞亚群检测就属于对免疫细胞中的前一类进行检查和分析。
淋巴细胞亚群是人体发挥免疫功能的主角，主要包括B细胞、T细胞以及NK 细胞。
其中，B淋巴细胞是在我们的中枢免疫器官，也就是在骨髓中发育成熟，成熟的B淋巴细胞由骨髓释放，定居于外周淋巴器官的淋巴小结中，约占外周淋巴细胞总数的20%，主要参与体液免疫，也就是先天性免疫应答。
T淋巴细胞，来源于骨髓中的淋巴样干细胞，在胸腺中发育成熟，约占外周淋巴细胞总数的50%-80%，T细胞具有高度的异质性，根据其表面标志和功能特征，T细胞可分为不同的亚群，如辅助性T细胞、杀伤性T细胞等，各亚群之间相互调节，共同发挥其免疫学功能。
NK细胞即自然杀伤性细胞，来源于骨髓淋巴样干细胞，其分化、发育依赖于骨髓或胸腺微环境，主要分布于外周血和脾脏，在淋巴结和其他组织中也有少量存在。
淋巴细胞亚群检测就是利用流式细胞仪，根据各类淋巴细胞表面特异性抗原的不同，利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，配合不同的多种荧光染料，通过流式细胞仪检测分析即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的相对比例，通过已知数母的荧光标记微球即可以计算出各种亚群的绝对数目。
这里主要阐述T淋巴细胞、B淋巴细胞及NK细胞的功能、细胞表面标志和临床意义。
1、T淋巴细胞表面标志（CD3+）：于所有的T细胞表面表达，T细胞所共有的白细胞分化抗原。
BriCyte E6和Cytomics FC500流式细胞仪在T淋巴细胞亚群分析中的对比研究
BriCyte E6和Cytomics FC500流式细胞仪在T淋巴细胞亚群分析中的对比研究陈杰;张剑波;汪智英;鲍锦库【期刊名称】《实用医院临床杂志》【年(卷),期】2018(015)002【摘要】目的对BriCyte E6流式细胞仪(简称E6)和Cytomics FC500流式细胞仪(简称FC500)的相关性、一致性和精密度进行比较及评价.方法选取202份新鲜抗凝静脉血,分别用两台流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群百分比及绝对计数值,观察相关性和一致性;另检测Immuno-Trol cells质控血,观察两台仪器的精密度.结果两台流式细胞仪测得的CD3+细胞、CD3+CD4+细胞和CD3+CD8+细胞百分比和绝对计数值相关性均较好(R2均>0.98),但也都存在显著性差异(P值均<0.05).Bland-Altman分析显示,两台仪器测得的 CD3+细胞、CD3+CD4+细胞和CD3+CD8+细胞百分比的偏倚较小,分别为0.52%、-0.50%、2.28%;绝对计数值的偏倚较大,分别为13.24%、12.21%、16.09%.E6的绝对计数值高于FC500.精密度实验显示,E6的精密度优于FC500,特别是两仪器绝对计数值的日间变异系数(CV)差异最大.结论在检测T淋巴细胞亚群百分比中,E6和FC500一致性较好.E6检测T淋巴细胞亚群绝对计数值精密度更高,操作简单且成本更低,可优先选择.【总页数】4页(P22-25)【作者】陈杰;张剑波;汪智英;鲍锦库【作者单位】四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,四川成都610065;四川省医学科学院·四川省人民医院中心实验室,四川成都610072;四川省医学科学院·四川省人民医院中心实验室,四川成都610072;四川省医学科学院·四川省人民医院中心实验室,四川成都610072;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,四川成都610065【正文语种】中文【中图分类】R446.1【相关文献】1.类风湿性关节炎患者2H4+T淋巴细胞亚群的流式细胞仪分析 [J], 吴福国;邱翠娥;韩晓琳;朱立平;蒋明2.BriCyte E6和FACSCanto Ⅱ流式细胞仪在淋巴细胞亚群分析中的对比研究 [J], 孙庆国;赵文静;匡玉吉;李炜;周翠红;董丽芳;张宝华3.Cytomics FC500与ImageStreamX MarkⅡ检测大鼠脾脏T、B细胞亚群TDO2表达的比较 [J], 张冰洁;李丝雨;赵英杰;常艳;魏伟4.流式细胞仪检测慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞亚群的意义分析 [J], 柳国强5.流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群在原发性血小板减少性紫癜中的意义探讨 [J], 薛桂芹;易红;罗春华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－９１５８．２０１６．０５．００８
作者单位：２０００９２上海交通大学医学院附属新华医院检验科 通信作者：沈立松，电子信箱：ｌｉｓｏｎｇｓｈｅｎ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
淋巴细胞大致可分为Ｔ细胞、ＮＫ细胞和Ｂ细 胞３个亚群。此外，根据是否表达ＣＤ４和ＣＤ８，Ｔ细
行业标准，以ＣＤ４５设门分析。
Ｅｘｐｒｅｓｓ
１．标本来源：２０１５年７月连续５ ｄ随机收集在 上海交通大学医学院附属新华医院检验科随机采集 的新鲜外周全血标本７３份，其中来自男性４０例，女 性３３例，年龄１～８１岁，平均年龄２０岁。所有标本
收集于含肝素抗凝的真空采血管中，收集后置于室 温（１８～２５℃），并在４ ｈ内完成标本前处理，处理 后的标本２ ｈ内完成检测。
ｏｆ ＭｅｄｉｃｉＭ，Ｓｈａｎｇｈａｉ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏ凡ｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｓｈｅｎ Ｌｉｓｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｆｉｓｏｎｇｓｈｅｎ＠ｈｏｔｍａｉＬ ｃｏｍ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｃｙ ａｍｏｎｇ ３ ｂｒａｎｄｓ ｏｆ ｆｌｏｗ ｅｙｔｏｍｅｔｅｒｓ （ＢｒｉＣｙｔｅ Ｅ６，ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏⅡａｎｄ Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＦＣ ５００）ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ． Ｍｅｔｈｏｔｉｓ Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ ＢｒｉＣｙｔｅ Ｅ６ ｗａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ２ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒｓ ｃｏｍｍｏｎｌｙ
主坐焦墅医堂苤查！！！！生！旦筮！！鲞筮！塑鱼！ｉ！』！些塑旦：丛型！Ｑ！！：！！！：！！：堕！：！
３６１
．论著
不同流式细胞分析仪检测淋巴细胞亚群的
比较研究
王维维奚迪袁向亮 沈立松
【摘要】
目的通过对淋巴细胞亚群百分比及绝对计数的检测，对比３种流式细胞仪（ＢｒｉＣｙｔｅ
１１、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＦＣ ５００）在淋巴细胞亚群检测中的一致性和精密度。方法按
ｓｕｂｓｅｔｓ
Ｗａｎｇ Ｗｅｉｗｅｉ，Ｘｉ Ｄｉ，Ｙｕａｎ Ｘｉａｎｇｌｉａｎｇ，Ｓｈｅｎ Ｌｉｓｏｎｇ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆ
Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｒｔｏｒｙ，Ｘｉｎ Ｈｕａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ２０００９２，Ｃｈｉｎａ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
ｔｏ
Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｉａｏ Ｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ
Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ购自美国Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ公司。仪
ＩＩ流式细胞仪及配套抗体、试
Ｋｉｔ、Ｔｍｃｏｕｎｔ Ｔｕｂｅ、７．ｃｏｌｏｒ
万方数据
主堡焦堕医堂苤壶！Ｑ！鱼生！旦筮！！鲞筮！塑堡！堕』！生丛型：丛型！Ｑ！！：ｙ！！：！！：盟！：！
胞还可进一步划分为ＣＤ４＋Ｔ和ＣＤ８＋Ｔ两个亚群。 淋巴细胞亚群的的百分比（％）和绝对计数（＃）或浓
度（ｃｅｌｌ／ｉｘｌ）在免疫缺陷病的诊断和治疗…、化疗或 移植后的免疫重建旧１、器官移植后并发症的监 测‘３ ｏ、生物制剂的疗效观察Ｈ６１等过程中发挥着重
—０．９９２ ５
４）；在进行淋巴细胞亚群绝对计数（｝｝）检测时，３种仪器之间亦均具有较好的一致性（Ｒ２＞
１～０．９９３
０．９５，Ｒ２值０．９６９
３）；评估精密度时发现，在ＣＤ８％、脚、ＣＤ４＋Ｔ｝｝和ＣＤ８＋Ｔ｝｝检测时，ＢｒｉＣ”ｅ
ＩＩ和Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＦＣ ５００进行比较，差异有统计学意义
ｗｅｒｅ
ａｎｄ
ｔｈｅ ｆｌｏｗ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ（％）ａｎｄ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｎｕｍｂｅｒ（＃）ｏｆ ｔｈｅ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ
ｃｙｔｏｍｅｔｅｒｓ ｗｉｔｈｉｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ４ ｈ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ３ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｇｏｏｄ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ３ ｆｌｏｗ ｃ”ｏｍｅｔｅｒｓ
上机检测，分析各淋巴细胞亚群的百分比及绝对
Ｅ６），对３种仪器淋巴细胞亚群百分比和绝对计数 的一致性和精密度进行评价。
材料与方法 一、材料
计数。 ３．标本测试和分析：处理后的标本分别在３种 流式细胞仪上进行测试，每个标本测试２次，然后计 算２次结果的均值和变异系数。均值用于线性回归 和Ｂｌａｎｄ—Ａｌｔｍａｎ分析，变异系数用于重复性的评价。 原始文件的数据分析采用ＦＣＳ
二、方法
要作用，因此淋巴细胞亚群检测的准确性和重复性 对于临床来说至关重要。 根据测量方式的不同，淋巴细胞绝对计数的单 平台法又分为微球法和体积法。前者需要在标本中
添加一定浓度的参比微球，然后通过微球和细胞的
１．流式细胞仪的质控和校准：迈瑞ＢｒｉＣｙｔｅ
Ｒａｉｎｂｏｗ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ
Ｅ６
Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ完成仪器质 使用Ｓｕｐｒａ 控和参数设置，使用Ｔｒｕｃｏｕｎｔ进行绝对计数校准； ＢＤ的ＦＡＣＳＣａｎｔｏ １１使用７－ｃｏｌｏｒ
ｗａｓ
ｎｏ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｅｅ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ３ ｆｌｏｗ ｃ”ｏｍｅｔｅｒｓ（Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ
ａｒｅ
４．２４２。３．９１６．０．８５２．
２．５９５，１．８３５ ａｎｄ ０．５７８，Ｐ＝０．１１９ ９，０．１４１ ２，０．６５３ ２，０．２７３ ３，０．３９９ ６，０．７４９ ０．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｅ６ ｍａｙ ｂｅ
２、０．０２７、０．０００ ４、
Ｅ６的ＣＶ％更小，与ＢＤ
ＦＡＣＳＣａｎｔｏ
（Ｆｒｉｅｄｍａｎ统计值分别为１６．７２０、１１．８４０、１５．７６０、１５．４３０，相应的Ｐ值分别为０．０００
０．０００
４），而在检测Ｔ％、ＣＤ４％、ＮＫ％、Ｂ％、ＮＫ＃、Ｂ＿Ｉ｝时，在３种仪器间ＣＶ％差异无统计学意义
９、０．１４１ ２、
ａｎ
Ｔｈｅ ３ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒｓ ｈａｖｅ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ
ｏｒ
ａ
ｇｏｏｄ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ．ＢｒｉＣｙｔｅ
ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｘｉｓｔｉｎｇ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒｓ．（Ｃｈｉｎ Ｊ Ｌａｂ
（Ｆｒｉｅｄｍａｎ统计值分别为４．２４２、３．９１６、０．８５２、２．５９５、１．８３５、０．５７８，Ｐ值分别为０．１１９
０．６５３ ２、０．２７３ ３、０．３９９ ６、０．７４９
０），精密度具有一致性。结论３种仪器在淋巴细胞亚群检测时具
有较好的一致性，ＢｒｉＣｙｔｅＥ６流式细胞仪或许可以作为现有流式细胞仪的替代或补充。ｒ手华检验医
ＣＩＭ５一ＰｅｒＣＰ／ＣＤ４一ＡＰＣ、ＣＤ３一ＦＩＴＣ／ＣＤｌ６＋ＣＤ５６一ＰＥ／ ＣＩＭ５一ＰｅｒＣＰ／ＣＤｌ ９一ＡＰＣ）和溶血剂，Ｓｕｐｒａ Ｒａｉｎｂｏｗ
Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ
ＣＤｌ９＋Ｂ细胞百分比及绝对计数的一致性评价采用 线性回归和Ｂｌａｎｄ－Ａｈｍａｎ法，３种仪器测定值精密
度（变异系数）的比较采用多配对标本的非参数检
学杂志．２０１６，３９：３６１－３６５）
【关键词】
流式细胞术；对比研究；淋巴细胞亚群；诊断设备
基金项目：国家自然科学基金（８１３０１７８８）
Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｌｏｗ
ｃｙｔｏｍｅｔｅｒｓ
ｉｎ ｔｈｅ
ｃｌｉｎｉｃａｌ
ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ
Ｃｏｕｌｔｅｒ ＦＣ
５００流式细胞仪及配套抗体、试剂（ＣＤ４５．
ＣＤ３－ＦＩＴＣ／
７
ＦＩＴＣ／ＣＤ４一ＰＥ／ＣＤ８一ＥＣＤ／ＣＤ３－ＰＣ５、 ＣＤｌ６‘ＣＤ５６一ＰＥ？ＣＤｌ９．ＥＣＤ？ＣＤ４５．ＰＣ７
Ｆｌｏｗｃｏｕｎｔ
计数微球、Ｆｌｏｗｃｈｅｃｋ微球、Ｆｌｏｗｓｅｔ微球）。溶血剂 为实验室自配氯化铵。
中，混匀后避光孵育１５ ｍｉｎ，再加入４５０ Ｉｘｌ稀释后 的流式溶血剂，混匀后避光孵育１５ ｒａｉｎ。仪器３的
目前微球法和体积法的对比研究主要集中于 ＣＤ４＋Ｔ细胞的评价，对于其他亚群的比较却很少涉 及＂剖。而不同仪器间重复性和一致性评价对于医
学实验室淋巴细胞亚群检测方法学的建立以及质量 控制都具有重要意义，为此本研究选择２种基于微
Ｅ６、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ
照方法学对比的要求，将ＢｒｉＣｙｔｅ Ｅ６与２种临床常用的流式细胞仪进行比对。２０１５年７月连续５ ｄ随 机收集上海交通大学医学院附属新华医院检验科抽取的新鲜肝素抗凝外周全血标本７３份，其中来自 男性４０例，女性３３例，４ ｈ内荧光抗体染色分析各淋巴细胞亚群的百分比及绝对计数值。结果在 进行淋巴细胞亚群百分比（％）检测时，３种仪器之间均具有较好的一致性（Ｒ２＞０．９５，Ｒ２值０．９６９
Ｍｅ４ ２０１６，３９：３６１－３６５）
Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ；Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ；Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（８１３０１７８８）
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
（Ｒ２＞０．９５，Ｒ２ ｆｒｏｍ ０．９６９ ５
ｔｏ
０．９９２ ４）ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ．ｓｏ ｄｉｄ ｉｎ ｔｈｅ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｎｕｍｂｅｒ（Ｒ２＞０．９５，Ｒ‘ｆｒｏｍ ０．９６９ ｌ ｔｏ ０．９９３ ３）．Ａｓ ｔｏ ｔｈｅ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ ＣＤ８％．Ｔ｝｝．ＣＤ４＋Ｔ＃ａｎｄ ＣＤ８＋Ｔ＃．ＢｒｉＣｙｔｅ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ １１ ａｎｄ ＦＣ ５００（Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ