柱前衍生化-HPLC法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度

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丙戊酸钠HPLC检测方法

安捷伦1260丙戊酸钠母液配制：精密量取丙戊酸钠10 mg，加5 ml 甲醇溶解制得2mg/ml的丙戊酸钠储备溶液。

内标溶液：精密称取环己烷羧酸10mg至10ml溶量瓶中，用0.5mol/L氨水溶液稀释至刻度即得。

(10mg 环己烷羧酸+ 10ml 0.2mol/L氨水，去5ml用0.2mol/L氨水稀释至25ml，至0.2mg/ml。

)衍生化试剂：50mg 2溴苯乙酮+5ml乙腈溶解，得10mg/ml衍生化试剂。

血浆样品处理：取血浆1 ml，置具塞试管中，加1mg/ml入内标环己烷羧酸100μl，3mol/L硫酸0.5ml，混匀后，再加入正己烷6ml，涡旋混合5min，离心5min(4000r/min)。

精密吸取上层有机相5ml，加2-溴苯乙酮100μl，三乙胺100μl ，置55-60℃水浴中衍生化反应15min，氮气吹干有机相。

用1ml甲醇溶解残余物，取20μl进样。

岛津：丙戊酸钠标准溶液：准确称取丙戊酸钠对照品37.6mg，置于50 mL容量瓶中，用0.2 mol·L－1氨水稀释至刻度，摇匀，作为丙戊酸钠标准溶液（含丙戊酸钠0.752 mg·mL-1）。

内标溶液：准确称取环己烷羧酸50.0 mg，置于50 mL容量瓶中，用0.2 mol·L-1氨水溶解并稀释至刻度，再精密量取该溶液5 mL，置于25 mL容量瓶中，加0.2 mol·-1氨水稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液（含环己烷羧酸0.2 mg·mL-1）。

衍生化试液：准确称取2-溴苯乙酮125.0 mg，置于25mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为衍生化试液（含2-溴苯乙酮5.0 mg·mL-1），放置于冰箱中保存。

血样的制备：取血浆200 μL，置空白采血管中，加入内标溶液30 μL 和丙戊酸钠标准溶液20 μL，再加入1 mol·L-1硫酸溶液200 μL，振摇混匀，然后加入正己烷4 mL振摇萃取3 min，静置5 min使之充分分层，分离出上清液2 mL于另一试管中，加入衍生化试液40 μL 和三乙胺20 μL，涡旋混匀，于61～65 ℃水浴衍生化适当时间，然后在空气/氮气流下蒸发至干，立即取出，用甲醇0.3 mL涡旋溶解，作为血清样品溶液。

衍生化-HPLC法测定人血清中丙戊酸浓度

ｕｅ．ｎｈｍｐｒｔｒｆｈｏｕｎｗａ５ｔｅｍｂｌｐａｅｗｓｍｔａｏ— ｔｙａｏｏ — ａｅ７：：２，ｅｆｗｓｄａｄｔｅｔｅａｕｅｏｅｃｌｍｓ３ ℃，ｈｏｉｈｓａｅｈｎｌｅｈｌｌｈｌｗｔｒ（０８２）ｔｏｅｔｅｃｈｌｒｔｗｓ１／ｎＲｓｌｈｎａｎｅｏａｅｕｔＴｅｉｅｒａｇｆｌｏｃａｉｗｓ５－５．ｇ１ｓｌｒｖｐｄ０ｍＬｒ＝０９９６，ｉｃｖｒｆ８２．）ｗｔｒｏｅｙｏ．％一９ｈｅ９
ｈｘｎｐｏｉｎｃａｉｓａｎｅｎｌｓａｄｒ，ｅｕｌｓｍｐｅｗａｘｒｃｅｔｉｔｙｔｅ，２Ｄｉｒｍｏｃｔｐｅｏｅｅａｅｒｐｏｉｃｄａｎｉｔｒａｔｎａｄｓｒｎａｌｓｅｔａｔｄｗｉｄｅｈｌｅｈｒ，４一ｂｏａｅｏｈｎｎｈ
醇一（０８２）流速：．ｍＬｍｉ；温：５；水７：：；２１１／ｎ柱３ ℃ 紫外检测波长：４ｍ；结果血清中丙戊酸在５０１０５Ｉ／２８ｎ．～５．ｚｍＬ浓度ｇ
范围内呈良好线性关系（＝０９９６，收率为９．１１３，ｒ．９）回８２％～０－日内与日问ＲＤ≤５２％Ｓ．％。结论本法简便、确、准专
ＤｅｅｍｉａｉｎｏａｐｏｃａｉｎｓｒｍｙｄｒｖｔａｉｎＨＰｔｒｎｔｆｖｌｒｉｃｄｉｅｕｂｅｉａｉｔｏ－ｏｚＬＣ

柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度

柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度周春华;张志清;李飞高;亢泽坤;李敬瑄;张雪宁【摘要】目的建立柱前衍生-高效液相色谱法测定血清样品中丙戊酸钠的含量.方法以Diamonsil C18(4.6×250mm 5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-水(87:13,V/V),检测波长为245nm;流速为1.0mL/min;柱温25℃.样品酸化提取后经α-溴代苯乙酮衍生化后分析,环己烷羧酸为内标.结果标准曲线线性相关系数R为0.999 3,线性范围15.0～180.0μg/mL,平均回收率为103.2%,日内、日间相对标准差均小于10%,最低检出浓度为0.3μg/mL.结论该方法简便、准确,适合于临床血药浓度监测.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2013(034)011【总页数】4页(P1422-1425)【关键词】丙戊酸;色谱法;高压液相;血药浓度【作者】周春华;张志清;李飞高;亢泽坤;李敬瑄;张雪宁【作者单位】河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000【正文语种】中文【中图分类】R969.11丙戊酸钠（sodium valproate，VPA）是临床上常用的抗癫痫药物［1］，当其血药浓度＞100μg/mL时，其不良反应增加而疗效无明显增加，是血药浓度监测的常检药物，有效血药浓度为50～100μg/mL，血药浓度与疗效及毒性反应密切相关，是需进行常规监测的药物之一［2-4］。

由于VPA在紫外区无特征吸收，不易直接检测，临床上常用气相色谱测定，但存在萃取过程药物挥发的问题。

近年来，采用柱前衍生-高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法衍生化测定VPA血药浓度的报道［5-6］也较多，但多采用的衍生化试剂、条件及方法各不相同。

HPLC法测定丙戊酸的血药浓度

HPLC法测定丙戊酸的血药浓度目的：建立快速柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸（VPA）血药浓度的方法。

方法：选择ω-溴苯乙酮为衍生试剂，环己烷羧酸为内标，Hypersil ODS-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）为分析柱；流动相为甲醇-水（75∶25，V/V)，检测波长为248 nm，流速为1.0 ml/min。

血样经酸化后以二氯甲烷提取。

结果：内标环己烷羧酸和VPA的保留时间分别为8.0 min和12.8 min，线性范围为25～200 μg/ml，平均回收率为100.61%，日内、日间RSD均小于4.19%。

结论：本法快速、简便、准确，适合临床常规监测需要。

[Abstract] Objective: To establish a rapid pre-column derivatization-high-performance liquid chromatography determination of valproic acid (VPA) plasma method. Methods: ω-bromoacetophenone as a derivative reagent, cyclohexane carboxylic acid as the internal standard, Hypersil ODS-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5μm) for the analytical column; mobile phase was methanol-water(75:25, V/V), detection wave length was 248 nm, flow rate was 1.0 ml/min. Blood extracted by dichloromethane after acidification. Results: The internal standard cyclohexane carboxylic acid and VPA respectively, the retention time of 8.0 min and 12.8 min, the linear range of 25-200 μg/ml, the average recovery was 100.61%, days, day RSD were less than 4.19%. Conclusion: The method is rapid, simple, accurate and suitable for routine monitoring of clinical need.[Key words] Pre-column derivatization; High-performance liquid chromatography; Sodium valproate; Blood drug concentration丙戊酸作為癫痫小发作、大发作和肌阵挛的首选药物之一，一直是临床医生常用的抗癫痫药物。

HPLC法测定丙戊酸血清浓度衍生化条件的考察

（北京来亨科学仪器公司）。１．２试剂
液１．０ｍｌ至ｌＯｍｌ量瓶中，用水定容至刻度即得
０．１ｍｇ・ｍｌ的内标溶液。
２．３血样处理
精密取血清０．１ｍｌ，加入内标溶液５０ｌ，再加１ｍｏｌ・Ｌ硫酸１５０￣１，混匀；加入乙醚２ｍｌ涡旋提取１ｍｉｎ，离心１０ｍｉｎ（３５００ｒ・ｍｉｎ），吸取上清液至
１．Ｏｍｌ・ｍｉｎ～；柱温：３０ｃＣ；紫外检测波长：２４８ｎｍ；
灵敏度：１．００ＡＵＦＳ，进样量：２０１￣１。２．２对照品溶液的配制精密称取５７．８ｍｇ丙戊酸钠对照品至２５ｍｌ容量瓶中，用０．２ｍｏｌ・Ｌ氨水溶解并定容，得到
【中图分类号］Ｒ９６９．１；Ｒ９７１．６
【文献标识码】Ａ
丙戊酸钠是临床上常用的抗癫痫药，监测血药浓度实现个体化给药，可提高癫痫病的控制率和减少不良反应。衍生化一ＨＰＬＣ法。是目前国内常用的丙戊酸血药浓度测定方法，但很少文献ｂ对衍
柳州ｔｉ学２０１４年第２７卷第２期
பைடு நூலகம்
ＬｉｕｚｈｏｕＭｅｄｉｃｉｎｅ２０１４，Ｖｏ１．２７，Ｎｏ．２

柱前衍生化-HPLC法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度

柱前衍生化-HPLC法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度杨春兰;方会慧;夏泉;许杜娟;周农【摘要】Aim To determine sodium valproate in patients ' serum by high performance liquid chromatography( HPLC) . Methods Serum sample was extracted with n-Hexane. Cyclohexanecarboxylic acid and 2-Bromoacetophenone were selected as an internal standard and derivative reagent respectively. The analytical column was Symmetry C18 (4. 6 mm × 250 mm ,5 μm) with the temperature at 30℃ . The detection wavelength was 248 nm and the flow rate was 1. 0 ml · min -1. Column temperature 30 ℃ . The mobile phase consisted of methanol-water (82 ∶ 18). Results The linear range of sodium valproate was 12. 5 ～150 mg · L-1 ,The mean recovery was 98. 74％ . The relative standard deviation( RSD) of inter-day for sodium valproate was less than 5％ . Conclusion The method is rapid , accurate.sensitive and suitable for clinical routine monitoring for sodium valproate.%目的建立反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠血药浓度.方法血清用环己烷提取,以环已烷羧酸为内标,2-溴苯乙酮为衍生化试剂,用高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度.采用Symmetr y C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-水(82:18);检测波长为248 nm;流速为1.0 ml·min-1;柱温:30℃.结果血清中丙戊酸钠线性范围为12.5～150 mg·L-1,平均回收率98.74%,日内RSD<5%.结论该法快速、灵敏、准确,适用于临床常规监测需要.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2011(015)011【总页数】3页(P1352-1354)【关键词】丙戊酸钠;柱前衍生化;高效液相色谱法;血药浓度【作者】杨春兰;方会慧;夏泉;许杜娟;周农【作者单位】安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院神经内科,安徽,合肥,230022【正文语种】中文丙戊酸钠(sodium valproate，VPA)又名二丙基乙酸钠，是治疗癫痫病全身性强直、阵挛性发作的首选药物，对失神发作和肌阵挛性发作效果较好，也可用于治疗部分性发作［1］。

HPLC法测定患者丙戊酸钠血药浓度_段自皞

丙戊酸钠（ Sodium valproate，VPA）又名二丙基乙酸钠，是治疗癫痫病全身性强直、阵挛性发作的首选药物，对失神发作和肌阵挛性发作效果较好。VPA 主要通过神经系统发挥其药理作用，由于 VPA 治疗窗较窄，其体内过程和疗效存在较大的个体差异，给药剂量和血药浓度相关性不稳定，而毒性反应与血药浓度相关，为控制癫痫发作，减少不良反应发生，进行血药浓度监测，制定个体化给药方案非常必要。VPA 分子结构中不含苯环不含氮原子，缺乏特征的紫外吸收，本文参照有关文献的基础上〔1，2〕，根据本院自身条件，优选经正戊烷萃取后丙戊酸钠与 α-溴代苯乙酮衍生化生成具有紫外特征光谱的酯，使用反相 C18 色谱柱建立了柱前衍生 HPLC 法测定血清中的 VPA 浓度。本方法灵敏度高、精密度好，适合临床常规检测。 1 仪器和试剂 1. 1 仪器 Waters 高效液相色谱仪（美国 Waters 公司），C18 反相高效液相色谱柱，温箱，检测器，涡旋振荡器，水浴锅，离心机，电子天平。 1. 2 试剂丙戊酸钠（ Sigma 公司，纯度＞ 98% ）； α-溴苯乙酮（阿拉丁公司）；环己烷羧酸（阿拉丁公司）；甲醇（ TEDIA 色谱纯）；乙腈（ TEDIA 色谱纯）；正戊烷（ TEDIA 色谱纯）；三乙胺（分析纯）；浓硫酸；健康人空白血清；纯化水。 2 方法与结果 2. 1 色谱条件色谱柱： Symmetry C18 （ 250mm × 4. 6mm， 5μm）；流动相：乙腈-水（ 75 ∶ 25）；检测波长： 248nm；流速 1mL ·min － 1 ；柱温： 35℃ ；进样量： 20μL。杭州英谱 HS 色谱数据工作站 V4. 0 + 。 2. 2 试剂的配制 2. 2. 1 丙戊酸钠储备液：精密称取丙戊酸钠 20mg 至 10mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得 2mg·mL － 1 的丙戊酸钠储备液。 2. 2. 2 内标液：精密称取环己烷羧酸 3. 68mg 至 20mL 容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得 0. 184mg·mL － 1 的内标溶液。 2. 2. 3 衍生化试剂：称取 α-溴苯乙酮 24mg 至 20mL 容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得 1. 2mg·mL － 1 的衍生化试剂，密封，冷藏保存。 2. 2. 4 酸化液：量取 98% 浓硫酸 1mL，加蒸馏水稀释至 18. 4mL，即得 1mol·L － 1 H2 SO4 酸化液。 2. 3 标准曲线分别取空白血清 100μL 置于 15mL 玻璃离心管中，各加入适量的丙戊酸钠储备溶液，使其浓度分别相当于 6. 25、12. 5、25、50、100、200μg·mL －1 的 VPA 血清标准液。按操作规程进行操作，进样检测，记录色谱。以上述浓度 VPA 峰面积和内标峰面积之比（ Y）对 VPA 血清浓度（ X）作回归，得回归方程为： Y = 0. 0069X + 0. 0676，Ｒ = 0. 9982。丙戊酸钠在 6. 25 ～ 200μg·mL － 1 浓度范围内线性关系良好。在所定实验条件下，样品及空白的色谱图（见图 1） 2. 4 精密度试验分别配制丙戊酸钠的质控样品 3 份，使血清中丙戊酸钠终浓度分别为 100μg · mL － 1 、50μg · mL － 1 和 25μg·mL － 1 。作为未知样品随机分散于每批待测血样和血清标准样品进行测定，重复测定 5 次计算ＲSD 值（见表 1）。

HPLC测定人血浆中丙戊酸钠的浓度

乙酮为衍生化试剂。结果血浆中丙戊酸钠线性范围为５～２５０ｆｔｇ・ｍＩ（ｒ一０．９９９９， ” 一６），检测限为１．０ｇ・
ｍＩ。方法回收率为９８．１４～１０５．９３，萃取回收率为８３．５８～８７．５８。日内日问ＲＳＤ％１０。结论该方法快速、准确、重复性好，适用于临床丙戊酸钠的血药浓度监测。
关键词：高效液相色谱法；丙戊酸钠；药动学；血药浓度
中图分类号：Ｒ９６９
文献标志码：Ａ
文章编号：２０９５４７２７（２０１４）０７ —００２２ —０２
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｅｉｎＨｕｍａｎＰｌａｓｍａｂｙＨＰＬＣ
ＵＶｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ２６４ｎｍ．Ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓｓｅｔａｔ２５。Ｃ．Ｔｈｅｐｌａｓ —
ｌｅｃｔｅｄａｓｔｈｅｉｎｔｅｒｎａ１ｓｔａｎｄａｒｄａｎｄ２一Ｂｒｏｍｏ一４’ 一ｎｉｔｒｏａｃｅｔｏＤｈｅｎｏｎｅａｓｔｈｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｒｅａｇｅｎｔ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｏｆｓｏｄｉｕｍｖａｌｐｒｏａｔｅｉｎｐｌａｓｍａｗａｓ５－２５０ｇ・ｍＬ（ｒ一０．９９９９，ｎ一６）．

丙戊酸钠HPLC检测方法

安捷伦1260丙戊酸钠母液配制：精密量取丙戊酸钠10 mg，加5 ml 甲醇溶解制得2mg/ml的丙戊酸钠储备溶液。

内标溶液：精密称取环己烷羧酸10mg至10ml溶量瓶中，用0.5mol/L氨水溶液稀释至刻度即得。

(10mg 环己烷羧酸+ 10ml 0.2mol/L氨水，去5ml用0.2mol/L氨水稀释至25ml，至0.2mg/ml。

)衍生化试剂：50mg 2溴苯乙酮+5ml乙腈溶解，得10mg/ml衍生化试剂。

血浆样品处理：取血浆1 ml，置具塞试管中，加1mg/ml入内标环己烷羧酸100μl，3mol/L硫酸0.5ml，混匀后，再加入正己烷6ml，涡旋混合5min，离心5min(4000r/min)。

精密吸取上层有机相5ml，加2-溴苯乙酮100μl，三乙胺100μl ，置55-60℃水浴中衍生化反应15min，氮气吹干有机相。

用1ml甲醇溶解残余物，取20μl进样。

HPLC-MS-MS法测定丙戊酸钠的血药浓度

１实验仪器与试药
１．１实验仪器Ａｇｉｌｅｎｔ１２００型液相色谱系统：四元梯度泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱；ＡＰＩ４０００型三重
四极杆串联质谱仪，配备电喷雾电离源；ＡＢ－２６５Ｓ型精密天平；ＸＷ一８０Ａ微型涡旋混合仪；Ｔｈｅｒｍｏ
ＺＯＲＢＡＸ３００ＳＢ－Ｃ１８（５ｇｍ，２．１ｍｍＸ１５０ｍｍ）为色谱柱，乙腈：２０ｍＭ乙酸铵水溶液一５５：４５（Ｖ：Ｖ）
为流动相，流速：０．２５ｍｌ・ｍｉｎ～，柱温：２Ｏ ℃ ，进样量１Ｏｌ，内标为替米沙坦。结果：丙戊酸钠在０．５
ＨＰＬＣ — ＭＳ — ＭＳ法测定丙戊酸钠的血药浓度
向德尚（潜江市中心医院药剂科，湖北潜江４３３１ｏｏ）谢云（湖北中医药大学药学院，湖北武汉４３００６５）
［摘要］目的：用ＨＰＬＣ — ＭＳ－ＭＳ建立一个有效的方法来测定人体内丙戊酸钠的血药浓度。方法：Ａｇｉｌｅｎｔ
敏，重现性好。
［关键词］ＨＰＬＣ－ＭＳ－ＭＳ；丙戊酸钠；替米沙坦；血药浓度
［中图分类号］Ｒ９１４．１［３ｔ献标志码］Ａ［文章编号］１６７３— １４０９（２０１３）３３一Ｏｌ１９一Ｏ３

HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化

（１ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ８３２００２，Ｃｈｉｎａ；
２ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ８３２００２，Ｃｈｉｎａ）
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔ，ｃａｔａｌｙｓｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｔｉｍｅｗａｓｕｓｅｄａｓｓｔｕｄｙｆａｃｔｏｒｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ
中图分类号：Ｒ９２７．２文献标志码：Ａ
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔＩｌｅｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｈｅｎｔｈｅＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｗａｓａｄｏｐｔｅｄｔｏｍｏｎｉｔｏｉｎｒｇｔｈｅｓｅｒｎｍ

柱前衍生-HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的方法改进

动相为乙腈一７：５ｖ．）检测波长２４ｒ流速１０ｍＺｉ；温４水（５２，／；５ｍ；ｉ．ｌｍｎ柱ｏ℃。结果
ＶＡ的血清浓Ｐ
度在２．２００ｍ／５０— ５．ｇＬ范围内线性关系良好（ｒ＝０９９）平均回收率为（０．３± ．３％，．９１，１０４０７）日内、日间ＲＤ均＜５；２Ｓ％１３例服用ＶＡ的癫痫患者应用本法监测，５．Ｐ有３７％的患者血药浓度在有效浓
荣
选择对溴
建立快速柱前衍生－ＰＣ法测定人血清中丙戊酸钠（Ｐ。方法ＨＬＶＡ）
苯甲酰甲基溴为衍生化试剂，酸为内标，ｙｅｓＤ。４６ｍ × ２０ｍ５ｍ）分析柱；壬ＨｐｒｌＳＣ（．ｍｉＢ０ｍ，为流
・
４１・８
东南国防医药２１００年
１卷箜塑些２
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论
柱前衍生．ＰＣ法测定人血清中ＨＬ丙戊酸钠的方法改进
费燕，秀丽，林胡永狮，张
［摘要］目的
ａｄｂｔｅａｅｅａｌｅｓｔａ．ｈｔｏａｓｄｆｒｍｏｉｒｎｅｌｓｄｕｖｐｏｔｏｃｎｎｅｗｅｎｄｙｗｒｌｌｓｈｎ５％Ｔｅｍｅｈｄｗｓｕｅｎｔｉｇｓ／ｍｏｉｍａｒａｅｃｎｅ — ｏｏ％ｌ
ｈｎａｃｌｒｔｎｅｖｓｂｉｅｈｏｃｎａｏａｇｆ．２００ｍ／ｒ０９９）Ｔｅｌｅｒａｉａｏｒｅａｏｔｎｄｉｔｅｃｎｅｔｔｎｒｎｅｏ５０～５．ｇＬ（＝．９１．ｉｂｉｕｗａｎｒｉ２

柱前衍生化-HPLC检测丙戊酸钠血清浓度方法验证

柱前衍生化-HPLC检测丙戊酸钠血清浓度方法验证曲秀梅;雷力力;方芳;李冬;张志国【摘要】@@ 丙戊酸钠为一线广谱抗癫痫药物,因分子结构中没有能够产生紫外光谱吸收的结构,用一般的HPLC法难于直接测定,文献报道多用毛细管气相色谱法、酶联免疫法、荧光偏振免疫法等.目前应用较多的是"柱前衍生化高效液相色谱法检测丙戊酸钠的血清含量",为了开展丙戊酸钠临床血药浓度监测,对文献[1,2]报道的柱前衍生化-高效液相色谱检测方法进行了综合,经过改进的方法检测结果稳定、准确,可以投入临床使用.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2010(033)005【总页数】2页(P75-76)【关键词】丙戊酸钠;血药浓度;HPLC【作者】曲秀梅;雷力力;方芳;李冬;张志国【作者单位】佳木斯大学附属第一医院,黑龙江,佳木斯,154003【正文语种】中文【中图分类】R927丙戊酸钠为一线广谱抗癫痫药物,因分子结构中没有能够产生紫外光谱吸收的结构,用一般的 HPLC法难于直接测定,文献报道多用毛细管气相色谱法、酶联免疫法、荧光偏振免疫法等。

目前应用较多的是“柱前衍生化高效液相色谱法检测丙戊酸钠的血清含量”,为了开展丙戊酸钠临床血药浓度监测,对文献[1,2]报道的柱前衍生化-高效液相色谱检测方法进行了综合,经过改进的方法检测结果稳定、准确,可以投入临床使用。

1 仪器及试剂P230Ⅱ高效液相色谱仪(大连伊利特分析仪器仪器有限公司);XW-80涡旋混合器(上海精科实业有限公司);岛津AUW220D十万分之一天平。

色谱纯甲醇：天津凯通化学试剂有限公司生产;丙戊酸钠对照品 (湖南省湘中制药有限公司提供,含量：99.8%,批号 090405)环己烷羧酸 (美国 Sigma公司 ,批号：08265PD,);ω-溴苯乙酮(国药集团化学试剂有限公司,批号：20090212);其它试剂均为分析纯。

2 方法及结果2.1 色谱条件色谱柱：Hypersil ODS2C18(4.6mm× 250mm,5μm);柱温：30℃;检测波长：248nm;流动相：甲醇：水 (75：25);流速：1.0mL˙min-1;进样量：15 μL。

柱前衍生HPLC法测定丙戊酸钠的血药浓度及其临床应用

< 50 50 ～100 > 100 26. 65 59. 06 110. 02
例数
9 12 2
百分率 / %
39. 1 8. 7 52. 2
3 讨论 3. 1 色谱条件的选择本法采用 2 溴苯乙酮为衍生化试剂 , 在三乙胺的催化下 , 反应完全彻底 ; 经试验发现 VPA 在波长 262 nm 处吸收最强 ; 流动相选择甲醇 ∶ 水 ( 65 ∶ 35) , 基线稳定 ,流动相不需使用缓冲液等盐类物质 ,有利于保护色谱柱 ; 萃取选用二氯甲烷、二氯甲烷 /乙醚、正戊烷、正己烷 [ 4, 5 ] ,经反复试改 ,用正戊烷提取药物峰形理想 ,分离效果好 ,柱效高 ,正戊烷虽然沸点很低 ,但在常温下 ,其挥发性对吸取操作无影响 , 水浴温度高于其沸点 ,因此水浴过程中 ,正戊烷逐渐挥发至干或近干 ,部分样品有微量液体残留 ,所以最后仍需氮气吹干。 3. 2 临床监测进行临床应用的过程中 ,抗癫痫药大都有不良反应 ,在剂量不当或药物相互作用而至血药浓度过高时尤易发生。因此 ,在整个治疗期内宜高度警惕 ,结合血药浓度监测结果来随时调整剂量 [ 6, 7 ] 。柱前衍生 HPLC 法测定 VPA 血药浓度 ,方法简便快捷 ,精密度好 ,回收率高 , 试验成本低 , 适用于丙戊酸钠的临床血药浓度监测. 53 99. 41 UV 法 93. 89 96. 12 98. 06
甲氧苄啶含量 [ J ]. 中国药业 , 2008, 17 ( 21) : 29 - 30.
[6] 严宏凤 . UV 法测定复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑和甲氧苄
啶的含量 [ J ]. 中兽医医药杂志 , 2008, 27 ( 3) : 46.
有 2 例 ,占 8. 7% ,患者均为自行超量服用出现了头晕、乏力、震颤、共济失调等不良反应 ,停药一周后中毒症状消失 ; 在有效范围内的有 12 例 ,占 52. 2% 。结果见表 3。

HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化

HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文【摘要】为了研究HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度衍生时的最佳衍生条件,探讨不同衍生条件对血药浓度的影响,本实验采用L9(34)正交实验设计,以衍生试剂浓度、催化剂浓度、衍生温度和衍生时间为考察因素,确定最佳衍生条件.结果显示,A2B2C3D1为最佳衍生条件,即衍生试剂为2.0 mg/mL,催化剂浓度为20%,衍生温度为60℃,衍生时间5 min为最佳衍生条件.不同的衍生条件对测定结果有显著影响(P<0.05),且衍生反应的主次因素为衍生试剂浓度>衍生温度>催化剂浓度>衍生时间.由此可知,优化后的衍生条件方法回收率高,节约时间和成本,简便可行.%In order to optimize the derivatization conditions when the HPLC method was adopted to monitoring the serum concentration of sodium valproate, and investigate the influence of different derivatization conditions on serum concentration of sodium valproate, L9 (34) orthogonal experimental design was used to determine the optimal derivatization conditions, the concentration of derivatization reagent, catalyst concentration, temperature and time was used as study factors. Results showed that A2B2C3D1 combination was the optimal derivation conditions, so the best derivation condition was that the concentration of derivatization reagent was 2.0 mg/mL, the catalyst concentration was 20%, the reaction temperature was 60℃, and time was 5 min. Different derivatization conditions had a significant effect on the determination results (P< 0.05). The primary and secondary factors for the derivatization reaction were derived reagent concentration > derived temperature >catalyst concentration >derivatization time. These findings in our research showed that the optimized derivation condition method had high recovery rate, saves time and cost, and simple and feasible.【期刊名称】《石河子大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(035)002【总页数】6页(P176-181)【关键词】衍生条件;丙戊酸钠;血药浓度;正交实验;优化【作者】胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文【作者单位】石河子大学药学院,新疆石河子 832002;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子 832002;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子 832002;石河子大学药学院,新疆石河子 832002【正文语种】中文【中图分类】R927.2丙戊酸（valproic acid，VPA）钠是临床上常用的一线抗癫痫药，是癫痫综合征、大发作、失神性发作、肌阵挛性发作的首选。

反相高效液相色谱-柱前衍生法测定人血清中丙戊酸浓度

反相高效液相色谱-柱前衍生法测定人血清中丙戊酸浓度陈碧;黄晓亮;李辉【摘要】Objective To establish a determination method for valprate in serum .Methods Serum sample was acidified by sulfuric acid and extracted with ethyl ether ,cyclohexanecarboxylic acid was selected as an internal standard ,α-bromoaceto-phenone as derivative reagent .Determination was performed with HPLC with methanol :water (70:30) as the mobile phase . The nalytical column was Eclipse Plus C18 (150 mm × 4 .6 mm ,5 μm) ,detected at 248 nm ,the flow rate was 1 .0 ml/min .Re-sults The linear rang of valproate was 8 .65~173 μg/ml .The mean relative recovery was bigger than 99 .27% .Both the rela-tive standard deviation (RSD) of inter-day and intra-day was less than 5% .Conclusions The method israpid ,accurate ,sensi-tive and suitable for clinical therapeutic drug monitoring .%目的建立人血清中丙戊酸浓度测定方法.方法将血清酸化,用乙醚提取,以环己烷羧酸为内标,α-溴苯乙酮为衍生化试剂,采用高效液相色谱法测定.色谱柱:Eclipse Plus C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-水(70:30),检测波长:248 nm,流速:1.0 ml/min.结果血清中丙戊酸浓度线性范围为8.65~173μg/ml,平均回收率>99.27%,日内和日间RSD<5%.结论本法快速、简便、准确,适合于临床血药浓度监测.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2016(034)003【总页数】3页(P255-257)【关键词】丙戊酸;血药浓度;衍生化;高效液相色谱法【作者】陈碧;黄晓亮;李辉【作者单位】湖南省郴州市第一医院药学部 ,湖南郴州423000;湖南省郴州市第一医院药学部 ,湖南郴州423000;湖南省郴州市第一医院药学部 ,湖南郴州423000【正文语种】中文【中图分类】R92·研究报告·[DOI] 10.3969/j.issn.1006-0111.2016.03.016丙戊酸(valproate，VPA)是临床常用的一线广谱抗癫痫药，有效血药浓度范围为50～100 μg/ml。

改进HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度

改进HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度沈陈军;陈新贵;王勇;胡秀萍【摘要】Objective:To improve the high performance liquid chromatography( HPLC) for determination of the sodium valproate concentration in human serum in order to supply evidence with rational use of this drug.Methods:Cyclohexanecarboxylic acid was used as the internal standard.The serum samples were extracted with n-hexane after acidification and precipitation by sulphuric acid ,and subjected to treatment with 2-bromoacetophenone as derivative rea-gent and triethylamine as catalytic agent.Then the samples were determined by HPLC as protocol:chromatographic column,ZORBAX SB-C18(150 mm × 4.6 mm,5 μm);mobile phase,methanol-water(72∶28) at flow rate of 1.0mL/min;detection wavelength set at 248nm;the column temperature at 25℃, and sample size in 10 μL.Results:The linear range of sodium valproate was 13.3-160.7 μg/mL(r=0.9979,n=6).The recovery rate for the sodium valproate in low,middle and high concentration and extraction recovery rate was 88.6%-107.2% and 82.1%-89.5%,respectively.The RSD of intra-day and inter-day were less than 6.4% and 8.2%,respectively.Conclusion:The modified HPLC technique can satisfy the needs of clinically monitoring the valproate concentration in patients,for it has higher specificity and accuracy as well as better linear dependence and reduced laboratory cost.%目的：建立改进HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度，为临床合理使用丙戊酸钠提供依据。

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２方法与结果
２１色谱条件．
色谱柱：ｔｓｓｍｍｔｌ（．ＷａｅｙｅＣ８４６ｍｍ× ５ｒｙｒ２０
ｍｍ，ｍ）流动相为甲醇一（２：８；５；水８１）检测波长：４ｍ；２８ｎ流
速：．ｌ・ｉ～；温：０。进样量１ｌＷａｒＥ１０ｍｍｎ柱３℃ ０ｔ。ｘｔｓｍ— ｅ
丙戊酸钠分子结构中缺乏特征的紫外吸收，法用无
涡旋振荡器（上海医科大学仪器厂）医用高纯度氮气，ＹＬ；ＥＥ— Ａ．２０氮吹仪（京ＲＫＫＫＩ司）ＨＭＧ２０东ＩＡＩＡ公，Ｈ数显恒温水浴锅（江苏金坛市金城国胜实验仪器厂）ＴＬ１Ｈ高速离心，Ｇ一６
Ｄｅｅｍｉａｉｎｏｈｏｃｎｒｔｏｆｓｄｕａｐｒａｅｉａｉｎｓｔｒｎｔｏｆｔｅｃｎｅｔａｉｎｏｏｉｍｖｌｏｔｎｐｔｅｔ ’
ｓｒｍｙｐｅｏｕｎｄｒｖｔｚｔｏ．ＰＬＣｅｈｏｅｕｂｒｃｌｍｅｉａｉａｉｎＨｍｔｄ
ｒａｖｔｎａｄｄｖｔｎＲＤ）ｆｎｅ—ａｒｏｉｍｖｌｒａａｓｔｎ５ＣｏｃｕｓｏＴｅｍｅｈｏｓｒｐｄ，ｃｕｒｔ，ｅｓ．ｅｔｅｓｄｒｅｉｉ（Ｓｏｔｒｙｆ＇ｄａｏｔｗｓｌｓｈ％ｌｉａａｏｉｄｏｓｕｐｅｅａｎｌｉｎｈｔｄｉａｉａｃａｅｓｎｉ
．
ｔｅａｄｓｉｂｅｆｒｃｉｉａｏｔｅｍｏｉｒｎｏｏｉｍａｐｏｔ．ｉｎｕｔｌｏｌｃｌｕｉｎｔｉｇｆｒｓｄｕｖｌｒａｅｖａｎｒｎｏＫｅｒｓｓｄｕｖｐｏｔｐｅｏｕｅｉａｉｔｎ；Ｌｓｒｍｒｇｃｎｅｔａｉｎｙｗｏｄ：ｏｉｍａｒａｅ；ｒｃｌｍｎｄｒｔａｉＨＰＣ；ｅｕｄｕｏｃｎｒｔｌｖｚｏｏ
ａｓｍｐｅｗａｘｒｃｅｉ — ｘｎ．ｙｌｈｘｎｃｒｏｙｉｃｄａｄ２ＢｏａｅｏｈｎｎｒｅｅｔｄａｎｉｔｒａｔｎａｄａｄｍａｌｓｅｔｔｄｗｔｎＨｅａｅＣｃｏｅａｅａｂｘｌａｉｎ－ｒｍｏｃｔｐｅｏｅｗｅｅｓｌｃｅｓａｎｅｎｌａｄｒｎａｈｃｓ
机（海黑马公司）Ａ１５５电子天平（海梅特勒多一利珠；Ｂ３— 上托多）。
１２试剂．
丙戊酸钠（ｉｍ公司，Ｓｇａ纯度＞９％）２溴代苯乙８；一
ＨＬＰＣ的紫外检测器直接测定，文献报道多用气相色谱法（ＣＧ法）荧光偏振免疫法（ＰＡ法）、ＦＩ，存在仪器设备昂贵，但专属性不高，剂盒有效期短的限制。本文参照有关文试献Ｊ经试验比较后优选２溴代苯乙酮与丙戊酸钠衍生化，一生成具有紫外特征光谱的酯，反相Ｃ在建立丙戊酸钠的ＨＬＰＣ法。本方法具有方法简单、敏度高、灵精密度好、检测速度快等优点。现将我们对３８例服用丙戊酸钠的癫痫患者
ｐｗｒｏｅ２液相色谱工作站。
２２试剂的配制．
１１仪器．
Ｗａｒａｉｃ效液相色谱仪（国Ｗａｒ公ｔｓｌａｅ高ｅｌｎ美ｔｓｅ
２２１丙戊酸钠储备液．．２２２内标液．．
精密称取丙戊酸钠２ｇ至１１０ｍ，Ｏｍ
司），配备Ｗａｒ２９ｓｐｒｔｎｔｓ６５ｅａｉＭｏｕｅＷａｅｓｌｅｅａｏｄｌ，ｔｒＥ０
容量瓶中，甲醇至刻度。得２ｇ・的丙戊酸钠储备液。加Ｌ取环己烷羧酸１．至２容量瓶中，２５ｍｇ５ｍｌ
ｎｌｔｒ（２：１）ＲｅｕｔＴｅｌｅｒｒｎｅｏｏｉｍａｐｏｔａ２５～１０ｍｇ・Ｌ～．ｈａｅｏｅｓ９．４．Ｔｅｏ— ｅ８ｗａ８．ｓｌｓｈｉａａｇｆｓｄｕｖｌｒａｅｗｓ１．ｎ５Ｔｅｍｅｎｒｃｖｒｗａ８７％ｙｈ
杨春兰方会慧夏，，泉许杜娟周，，农
２０２）３０２（．１安徽医科大学第一附属医院药剂科，国家中医药管理局中药化学三级实验室；２安徽医科大学第一附属医院神经内科，．安徽合肥摘要：目的建立反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠血药浓度。方法
ｄｒａｖｅｇｎｓｅｔｅｙｈｎｌｉｌｏｕｎｗｓＳｍｔ１４６ｍ × ５ｍ，Ｉｅｉｔｅｒａｅｔｅｐｃｖｌ．ＴｅａａｔａｃｌｍａｙｍｅＣ８．ｍ２０ｍ５ｘｖｉｒｉｙｃｙｒ（ｍ）ｗｔｅｔｐｒｔｅａ３ ℃ ．Ｔｅｉｔｍｅａｒｔ０ｈｈｅｕｈ
・
１５３２・
安徽医药
ＡｈｉｄａａｄＰａｍａｅｔａｏｒａ２１ｏ；５１）ｎｕＭｅｉｌｎｈｒｃｕｉｌｕｎｌ０１Ｎｖ１（１ｃｃＪ
◇药物分析 ◇
柱前衍生化－ＰＣ法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度ＨＬ
血清中丙戊酸浓度检测方法与结果报道如下。１仪器和试剂
酮（阿拉丁化学公司）环己烷羧酸（；阿拉丁化学公司）甲醇、、乙腈（色谱纯）正己烷（，色谱纯）三乙胺（析纯）浓氨水；；分；浓硫酸；健康人空白血清，重蒸馏水。
－３３・１５
得１０ｍｇ・的环己烷羧酸内标液。５Ｌ２２３衍生化试剂精密称取５ｇ２溴代苯乙酮至５ｍ．．０ｍ－ｌ容量瓶中，乙腈溶解至刻度，１Ｌ的２溴代苯乙酮加得０下进行操作。记录各浓度对照品溶液中方丙戊酸钠和内标的峰面积。以丙戊酸钠与内标的峰面积之比
ＡｂｔａｔＡｍＴｅｅｎｏｉｍｖｌｏｔｉａｉｔ’ ｅｍｂｉｈｐｒｒａｃｑｉｃｒｍｔｒｐｙＨＬ．ｅｈｄＳｔｓｃ：ｉｒｏｄｔｍｉｅｄｕａｒａｐｔｎｓｓｒｙｈｇｅｆｒｓｐｅｎｅｕｏｎｅｉｕｄｈｏａｇａｈ（ＰＣ）Ｍｔｏｓｅ— ｍｌｏ
ＹＮｈｎｌｎ，ＡＧＨｕ—ｕＸＡＱａＸｕｊａＺＯｏｇＡＧＣｕ — ＦＮｉｉ，Ｉｕｎ，ＵＤ－ｎ，ＨＵＮｎａｈｕ
（．ｅａｔｅｔｆＰａｍｃ，ｈｉｔｆｌｔｏｉｌｆＡｈｉｄｃｌｎｖｒｔ，ｈｒ— ｒｄ１ＤｐｒｎｈｒａｙＴｅＦｒｆｉｅＨｓｔｎｕＭｅｉｉｓｙＴｉＧａｅｍｏｓＡａｄｐａｏｉａＵｅｉｄＰａｍｃｕｉｌｈｍｓｙＬｂｒｔｙｏａｅｄｉｉｒｔｎｏｒｄｔｎｌｈｎｓＭｅｉｎ；ｈｒａｅｔａＣｅｉｒａｏｏＳｔＡｍｎｔｉＴａｉｏａｉｅｄｃｅｃｔａｒｆｔｓａｏｆｉＣｅｉ２ＤｐｒｅｔＮｕｏｇ，ｅＦｒｌｔｏｉｌＡｈｉｄｃｌＵｉｒｔ，ｅｉ２０２）．ｅａｔｎｏｅｒｌｙＴｉｔｆｉｅＨｓｔｎｕＭｅｉｎｅｉＨｆ３０２ｍｆｏｈｓＡａｄｐａｏｉｆａｖｓｙｅ
丙戊酸钠（ｏｉｍｖｌｒａ，Ｐ又名二丙基乙酸钠，ｓｄａｐｏｔＶＡ）ｕｅ是
Ｓ６４柱温箱、ｔｓ２８Ｕ／ｉｂｅ检测器；Ｘ８ＡＭＨ１ＧＷａｒ４９ＶＶｓｌｅｉＷ一０
治疗癫痫病全身性强直、阵挛性发作的首选药物，对失神发作和肌阵挛性发作效果较好，也可用于治疗部分性发作 … 。其治疗剂量范围为：０～１０ｍｇ・～，戊酸的疗效及毒性反５０Ｌ丙应患者问个体差异很大，且疗效及毒性与血药浓度关系密切。因此对其体内血药浓度进行监测十分必要Ｊ。
通讯作者：杜娟，，许女主任药师，究方向：临床药学， — ｉ：ｕｕ加０２ｍｌＬ的氨水稀释至刻度，精密吸取该液７５ｍ研ＪＥｍａｘｄ．ｌ．ｏ・再．ｌ
ｊａ６６＠ｙｈｏｃｎ．ｎｕｎ３５ａｏ．ｏｃ
血清用环己烷提取，以环已烷羧酸为内标，一２血清中丙戊酸钠线性范围为１．２５～１０５
溴苯乙酮为衍生化试剂，高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度。采用Ｓｍｍｔ（．ｍｘ５ｍ，Ｉ色谱柱；用ｙｅｙＣ４６ｍ２０ｍ５ｘｒｍ）流动相为甲醇一８１）检测波长为２８ｎ流速为１０ｍ・ｉ～；温：０Ｃ。结果水（２：８；４ｍ；．ｌｒｎ柱ａ３￣ｍｇ・～，Ｌ平均回收率９．４，８７％日内ＲＤ＜％。结论Ｓ５关键词：丙戊酸钠；柱前衍生化；高效液相色谱法；血药浓度该法快速、灵敏、准确，适用于临床常规监测需要。