纤维素类高效液相色谱手性固定相
非衍生纤维素高效液相色谱手性固定相的研究
装 柱 ， 正相 色谱 条件 下 对 ２ 在 １种 手 性 化 合 物 进 行 拆分 ， 有 １ 并 ３种手 性化 合 物 得 到 了不 同程 度 的分
离 ， 究 结果 表 明该 手 性 固 定 相 具 有 良好 的 手 性 研 分 离 能力 。
效 液相 色谱 （ Ｌ 手 性 分 离 分 析 ｙ（ Ｐ Ｃ ，ｎ ｔ ｃｉ ｌ ｏ ｍ （５ ｍ ｘ２ ０ ｈｏ ａｏｒ ｈ Ｈ Ｌ ） ａ ｄｉ ｈｒ ｌ ｎ ２ ０ ｍ ． ｍｍ，． ． ｗ ｓｐｅａｅ ｎｅ ｈ ｒｓｕｅｏ ０ ＭＰ．ｎ ｔｅ ａ ｓ ａｃｕ ｉｄ ） ａ ｒｐｒｄｕ ｄｒｔｅｐｅｓｒ ｆ ａ Ｉ ４ ｈ
纤 维 素是 第 一 个 用 于手 性 分 离 的 多 糖 ， 为 因 氨基 酸 在纸 色谱 得 到 了较 好 的分 离 。 由 于纤 维 素不 溶 于通 常 的溶 剂 ， 因此 本 文 将 纤 维 素 溶 解 在
Ｄ ．ｉＩ ， ＭＡ ＬＣ 中 涂敷 在 硅 烷化 的 硅 胶 上 。采 用 湿 法
中 图 分 类 号 ：６ ７ ７ ０ ５ ． 文献标识码 ： Ａ
Ａ ｔ ｙ ｏ ｓ ｕｄ ｎ ＤＭ Ａ－ ＣＩｃ ｌｕｌ ｓ ｈｉ ａ ｔ ｔｏ ｒ ａ ｅ ｎ Ｈ ＰＬＣ － Ｌｉ ・ ｅｌ ｏ ｅ ｃ ｒ ｌｓ ａ ｉ ｎａ ｙ ｐｈ ｓ ｓ ｉ ・
Ｍ Ａ ａ ＡＩＰｉ ｇ， Ｃｈ ｏ， ｎ ＺＨＡＮＧ ｅ ， ＥＮＧ Ｍ ｉＰ Ｙａ， ＹＵＡＮ ｉｍｉ ｇ Ｌ－ ｎ
Ｋｅ ｗｏ ｄ ： ＤＭＡ． ｉ １ｃ ｌ ｌ ｓ ｙ ｒｓ Ｌ Ｃ 一 ｅｌ ｏｅ； ｈｇ — ｒｏ ａ ｃ ｌ ｕ ｄ ｃ ｒ ｍａｏ ａ ｈ ； ｅ ｉａ ｓａｉ ｎ ｒ ｐ ａ ｅ； ｃ ｉ ｌ ｃ ｍｐ ｕ ｄ ； ｕ ｉｈ ｐ ｆｒ ｎ ｅ ｉ ｉ ｈ ｏ ｔｇ ｐ ｙ ｅ ｍ ｑ ｒ ｈ ｒ ｌ ｔｔ ａ ｙ ｈ ｏ ｓ ｈ ｒ ｏ ｏ ｎ ｓ ａ
纤维素衍生物手性固定相高效液相色谱法分离盐酸川丁特罗对映体
（ 纯度 均 ≥９ ． ％， 阳）。
１ ２ 色谱 条件 ．
色谱 柱 ：ｕ ｅ ｕｏ ｅ１手性柱 （ ５ Ｌ ｘＣ ｌ ｌｓ 一 ｌ ２ ０ｍｍ ４ ６ ｘ ．
体无 分离 趋 势 。 当添 加 ０ １ 的 三 氟 乙酸 时 ， 酸 ．％ 盐
相 添加 剂 的毛细 管 电泳 法 （ Ｅ） 和 反 相 高效 液 相 Ｃ
色谱 （ Ｌ 柱 前衍 生 化 法 Ｈ 。其 中 Ｃ 系统 稳 定 ＨＰ Ｃ） Ｅ 性 较差 ， 平衡 时 间较 长 ； 前 衍 生 化 法操 作 繁 琐 ， 柱 耗 时较长 ， 不利 于快 速分 析 ， 分离 效果 受手 性试剂 纯 且
ｃ ｒ ｌｓ ａ ｉ ｎａ ｙ ｐ ｓ ｈｉａ ｔ ｔｏ ｒ ｈａ ｅ；ｔａ ｉ ｔ ｒ ｄ ｏ ｈｌ ｒｄｅ； ｅ ａｎ ｉ ｍ ｅ ｉ ｅ ｒ ｔｏ ｒ ｎｔｎ ｅ ｏｌｈｙ ｒ ｃ ｏ ｉ ｎ ｔｏ ｒｃ ｓ ｐａ ａ ｉ ｎ
盐酸Ｊｆ 特罗 （ｒｎｉｔｒ ｌ ｙ ｒ ｃ ｌｒ ｅ ， ｌ 丁 ｔ ｔ ｅｏ ｄ ｏ ｈｏ ｉ ） 化 ａ ｎ ｈ ｄ
添加适 当的流动 相添 加剂 以改 善峰形 、 高分离 度 。 提
对 酸性 物质 ， 常加 入 三 氟 乙 酸 ； 碱性 物 质 ， ４ 常 对 Ａ 加 ｒ 入 二 乙胺 ’ 从 川 丁 特 罗 的 分 子 结 构 式 可 以看 。 出， 它的手 性 中心连 接 了一 个 仲氨基 ， 苯环 上连 接 了
・
１３ ８・ １
色
谱
第２ ９卷
ａ ４ ｍ ｎ ｏ ｕ ｎ ｔ ｍｐ ｒ ｔ ｒ ｆ２ ℃ ．Ｔ ｅ ｍｅ ｈ ｄ ｉ ｉ ｐ ｅａ ｄ ｒ ｐ ｄ ｆ ｒｔ ｅ ｅ ａ ｔ — ｔ２ ６ ａ ａ ｄ ａ ｃ ｌｍ ｅ ｅ ａｕ ｅ ｏ ５ ｈ ｔ ｏ ｓｓｍ ｌ ｎ ａ ｉ ｏ ｈ ｎ ｎ ｉ ｏ
氟环唑外消旋体在纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相上的高效液相色谱法拆分
２０ ０ ８年 ９月
Ｓ ｔ ｍ ｂｅ ０ ｅｐ ｅ ｒ２０ ８
色
谱
Ｖ０ ． ６ Ｎ Ｏ． １２ ５
６ ３１ ～６ ３３
Ｃ ｉｅｅ ｏ ｒａ ｈ ｏ ｔ ｒｐ ｙ ｈｎｓ ｕ ｎ ｌ ｆ Ｃ ｒｍａｏ ａ ｈ Ｊ ｏ ｇ
ｏ ｇａ ｉ ｏ ｖ ｎｔｌｑ ｉ ｈｒ ｒ ｎ ｃ ｓ ｌ ｅ ｉ ｕ ｄ ｃ ｏｍ ａ ｏｇ ａ ｙ； ｅ ａ ｉ ｅ ｒ ｔｏ ：ｒ ｃ ｍ ｉ ｐｏｘｉ ｏ ｚ ｌ ｔ ｒ ｐｈ ｎ ｎｔｏｓ ｐａ ａ ｉ ｎ ａ ｅ ｃｅ ｃ ｎａ ｏ ｅ
在手 性分 离方 法 中 ， 效 液 相 色谱 手 性 固定 相 高
摘 要 ： 纤 维 素 一 （ ， － 甲基 苯 基 氨 基 甲酸 酯 ） Ｃ ＭＰ ） 性 固定 相 上 ， 别 采 用 正 相 、 相 及 极 性 有 机 相 色 谱 在 三 ３ ５二 （ Ｄ Ｃ 手 分 反
模式 对 氟 环 唑 外 消 旋 体 进 行 了拆 分 ， 考 察 了 流 动 相 组 成 在 手 性 识 别 中 对 手 性 分 离 的 影 响 。 氟 环 唑 在 Ｃ ｉ ｌｅ 并 ｈｒ ｃ ｌ ａ
Ａ ｂｓ ｒ ｔ：Ｔｈｅ ｔ ｏ ｐａｒ ｎ ｎｔｏｍ ｅ ｓ ｏ ｐｏ ｃ ａ ｏｌ ｅ ｅ ｒ ｏｌ ｄ ｕｓｎｇ ｎｏ ｍ ａ ａｓ ｔ ａｃ ｗ ｉｓ ｏｆ ｅ ａ ｉ ｒ ｆ ｅ ｘｉ ｏｎ ｚ ｅ ｗ ｒ ｅｓ ｖｅ ｉ ｒ ｌｐｈ ｅ
．
ｒ ｖ ｒ ｅ ｐｈ ｅ ａ ｅ ｅ ｓ ｄ— ａｓ ｎｄ ｐｏｌ ｇ ｎｉ ｏｌ ｅ ｇ ｒ ｏ ｍ ａ ｅ ｌｑ ｉ ｈｒ ａｒｏｒ ａ ｃ ｓ ｖ ｎｔｈｉ ｈ ｐｅ ｆ ｒ ｎｃ ｉ ｕ ｄ ｃ ｏｍ ａ ｏ ｒ ｐｈｙ ｏ ｃ ｌｕ ｏ ｅ ｔｇａ ｎ ｅｌ ｌ ｓ
手性药物色谱拆分法研究发展
5.1 间接拆分法
[1]Zukowski J,De Biasi V,Berthod A. Chiral
等特点，并具在手性分离方面与高效液相色谱、
间接拆分法[8]虽需进行衍生化反应，但生 separation of basic drugs by capillary elec－
气相色谱相互补充，在光学纯药物的制备方面 成的非对映体异构体，物化性质不同,可用常规 trophoresis with carboxymethylcyclodextrins [J].J
的技术，它以高压电场为驱动力，以毛细管为分 - NHCO- 基团。苯环的取代基的性质，数目及位 [11]LI Bing，SHI Jie -hua，YANG Gen -sheng，.
离通道，依据样品中各组分间电荷及质量的差 置对手性化合物的拆分影响很大[11]。蛋白质类 Cellulose-based chiral stationary phase in high
副作用。因此手性药物拆分近年来引起人们的 D- 10- 樟脑磺酸胺作为手性离子对试剂添加到 是很广泛；GC 法对于药物的沸点要求严格，故
广泛关注。目前，手性药物的拆分主要有化学拆 流动相中，在硅胶 GF254 薄层板上分离了两种芳 GC 应用范围有限；CE 法和 TLC 法检测灵敏度
分法、结晶法、生物拆分法和色谱法等等，其中 香醇胺类药物对映体拉贝乐尔和倍它乐克，并 较低，有待研究提高发展；HPLC 法因手性固定
也有其局限性，如检测灵敏度不足，重现性差等 磺酰基 - 1,2- 二苯基乙二胺，研究了流动相中 对甲基苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺在卵类粘
[6]。
有机调节剂的种类和含量等色谱条件对拆分结 蛋白柱上的手性拆分[J].色谱,2003, 21(4): 407.
手性药物高效液相色谱拆分
C S P 法优缺点
优点：分离时间短，而手性选择性和拆分能力
高，多数药物在分离前都不需要进行衍生化反应， 分 离方法直接。
局限性：色谱柱价格昂贵，部分固定相还存在稳
定性差，柱容量低，柱强度差等缺点，且根据不同手 性药物的性质不同，选用的分析方法也不同。
手性流动相( C M P ) 拆分法
又称手性添加剂法，这种拆分法是在流动相中加 入手性试剂，利用手性试剂与各对映体结合的稳定常 数不同，以及药物与结合物在固定相上分配系数的不 同来进行分离。
局限性：是手性试剂需要有高的光学纯度，各对映体的衍生
化速率及平衡常数应一致， 要求衍生化反应迅速、 彻底， 否 则影响定量结果。衍生化和色谱分析过程中应不发生消旋化， 外消旋药物需要有可被衍生化的基团， 此外衍生化法步骤较烦 琐， 衍生化试剂 绝大多数毒性相当大， 而且该方法难以实现 分析的自动化。
该法要求手性试剂及反应产物在化学性质上和 手性上很稳定，在反应及色谱条件下，试剂、手 性药物和反应产物不发生消旋化反应。手性试剂 应具有紫外或荧光吸收等敏感结构， 使生成物具 有良好的可检测性。
一些手性衍生化试剂和应用
CD F法优缺点
优点：可使用已有的非手性同定相， 花费少，通过选用具有
强烈紫外吸收或荧光吸收的手性试剂， 可提高检测敏感度， 而 且多数的衍生化试剂具有良好的对热及水的稳定性。
扑尔敏的拆分
色谱柱： 2 5 0× 4 .6 m m i .d ，(制备醋酸纤维素 酯类液相色谱固定相，涂渍在修饰硅胶表面)， 采用 湿法自行装柱。
色谱条件：以正己烷 一异丙醇的混合溶液( 体积比 为9： 1 ) 作流动相， 流速为 0 . 5 mL ／ m i n ，柱 温3 0 ℃ ,紫外检测波长为2 5 4 n m。
纤维素三苯甲酯手性固定相的制备及对映体的拆分
Ｐｒ ｐ ｒ ｔｏ ｆ Ｃｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｅ ｏ ｔ ｓ Ｃｈｉ ａ ｔ ｔｏ ｒ ｅ ａ ａ ｉ ｎ ｏ ｌｕ ｏ ｅ Ｔｒ ｂ ｎｚ ａ ｅ ａ ｒ ｌＳ ａ ｉ ｎａ ｙ Ｐｈａ ｅ ｓ ｉ ＰＬＣ ｎ ｅ ｒ ｔ ｏ ｆ Ｅｎａ ｉ ｍ ｅ ｓ ｏ ｔ ｎ Ｈ ａ ｄ Ｓ ｐａ ａ ｉ ｎ ｏ ｎｔｏ ｒ ｎ Ｉ
上＋ 用作 液 相 色谱 手 性 固 定 相 。 在 正相 条 件 下 ， 此 手 性 固 定 相 对 一 系列 外 消 旋 缩 水 甘 油 芳 香 基 醚 用
类化合 物进行 了折 分 ， 并时拆 分机理 进行 了探 讨 。 察 了流 动相 中添加 不 同的醇 时 缩水甘 油间 甲基 考
幕基 醚时映体拆 分 的影 响 。 关 键 词 手 性 固 定 相 ； 维 素 三 苯 甲 酯 ； 映 体 分 离 ； 水 甘 油 芳 香 基 醚 纤 时 缩 中 图 分 类 号 ： ５ ． Ｏ６ ８ ６ 文献标 识码 ： Ａ
ｅ ｈｅ ｔ ｒ
纤 维 素衍生物 作为 液相 色谱 手 性 固定 相 （ Ｓ ） Ｃ Ｐ
发 展 十 分 迅 速 。１７ ９ ３年 ． ｅ ｓ Ｈ ｓｅ和 Ｈａ ｅｎ首 先 ｇ ｌ
化率 。本 文将 超声 法合 成 的 Ｃ ＴＢ提纯后 ． 涂敷 于大 孔硅胶 ， 制备 成 液 相 色 谱 的 Ｃ Ｐ， 分 一 系列 外 消 Ｓ 拆 旋 缩水 甘 油 芳香 基 醚类 对 映 体 ， 于 大 部分 对 映体 对 均取得 拆分 效果 。这 一系列 化合 物是 合成 口 肾上腺 素阻 断剂 的重要 中间体 ， 因此 对它 们 的拆分 研 究具
文 章 编 号 ｝０ ６ ３ ８ （０ ２ ０ －０ ９０ １ ０ ０ ０ ２ ０ ） ｌ０ ７ —４
纤维 素 三苯 甲酯手 性 固定 相 的制 备 及 对 映体 的拆 分
高效液相色谱中乙基纤维素手性固定相研究
素 手性 固定 相 的报 道 。本 文制 备 了 乙基纤 维 素 手 性 固定相 ， 在正相 、 相 以及 极 性有 机 溶剂 的 流 并 反
动相 条件下 ， １ 对 ５种手 性化 合 物 的拆 分 情况 进行 了探究 ， 中 ９种得 到 了不 同程 度 的分 离 ， 其 研究 结 果表 明该手性 固定相 具有较 好 的手性拆 分能 力 。
色谱是最 普 遍使 用 的方 法 之 一 ， 而其 中又 以手 性 固定相法 最 为 常 用 … 。在 众 多 手 性 固 定 相 中 ， 各
种 多糖及其 衍 生 物 ， 别 是 纤 维 素 和 直 链 淀 粉 的 特 衍 生物 因具 有很好 的手 性识 别 能 力 而得 到 了广 泛 研 究 。但 到 目前 为 止 ， 们 还 未 见 乙基 纤 维 我
７ ： ０的 甲醇作流 动相 ， 速为 ０ ５ Ｌ ｍｎ， ０３ 流 ． ｍ ／ ｉ 柱 温 ３ ℃ ， 测波 长 ２４ ｍ。以 １３ ５一三叔 丁基 苯 Ｏ 检 ５ｎ ，， 作溶质， 测定 死 时间 。
２ 结 果 与 讨 论
采 用涂 敷 型 乙基 纤 维 素手 性 固定 相 ， 不 同 在 流 动相 条 件 下 ， １ 手 性化 合 物 进 行拆 分 ， 对 ５种 化
加入 １ｍＬ四氢 呋 喃 ， ５ 常温 搅 拌 ２ ｈ 让 其 充 分 溶 ４， 解 ， 后将 其 均匀 涂敷 于 ４ ５ 丙基 硅烷 化 硅胶 然 ．ｇ氨 表面 。
１２ ３ 柱子 的填 充 ．．
采 用 湿 法 装 柱 ， 用 美 国 ａｈｃ 使 ｌｅｈ装 柱 机 和 ２ ０ ｍ ×４ ６ ｍ 空 色谱 柱 ， 乙 基纤 维 素 手 性 固 ５ｍ ．ｍ 取 定 相 ４０ ， ２ ｍ ０ １ ．ｇ 以 ０ Ｌ９ ：０的正 己 液 体 石 蜡 为 匀浆 液 ， 约 ４ Ｍ ａ压力 下 ， ９ ： ０的正 已 在 ０ Ｐ 以 ０１
聚甲基丙烯酸葡萄糖酯及聚甲基丙烯酸纤维二糖酯高效液相色谱手性固定相的性能测评
叶志兵 ， ： 甲基丙烯 酸 葡萄 糖酯及 聚 甲基丙烯 酸纤 维二 糖酯 等 聚
高 效 液 相 色 谱 手 性 固 定 相 的 性 能 测 评
。２ ５ ‘ ３
固 定 相 相 继 被 研 制 并 用 于 分 离 各 种 手 性 药 品 。 。
（ 国 Ａｌ ｅ ｈ 公 司 ）， 谱 柱 管 （ ５ ｍｒ 美 ｌｃ ｔ 色 ２０ ［ １×２ ０ ． ｍｍ ） 美 国 Ａｌ ｅ ｈ公 司 ） （ ｌｃ ｔ 。 球 形硅 胶 Ｙ ＱＧ一０ （ ｍ ， 国 青 岛 美 高 化 工 ８ ５ 中
在 众 多 手 性 固 定 相 中 ， 合 物 手 性 固 定 相 （ 白 质 聚 蛋 型 除 外 ） 具 有 高 载 样 量 而 最 适 合 用 于 制 备 性 分 因 离 聚 合 物 手 性 固 定 相 可 分 为 两 类 ： 类 是 以 天 然 一 高 分 子 例 如 多 糖 的 衍 生 物 和 蛋 白质 作 手 性 选 择 体 ； 另 一 类 是 以 人 工 合 成 的 聚 合 物 例 如 聚 酰 胺 、 氨 酯 聚 和 聚 乙 炔 衍 生 物 作 手 性 选 择 体 。 Ｏ ａ ｔ ｋ ｍｏｏ等 研 制 的 纤 维 素 和 直 链 淀 粉 氨 基 甲 酸 酯 手 性 同定 相 已 被 广泛 地应 用 于外 消旋 体 的分 析 和 制 备 性 分 离 ， 但 这 类 涂 敷 型 手 性 固 定 相 耐 溶 剂 性 差 。 例 如 四 氢 呋 喃 、 仿 、 酮 等 溶 剂 ， 于 它 们 能 溶 解 多 糖 衍 生 物 氯 丙 由 而 不 适 于 用 作 流 动 相 ， 有 时 在 流 动 相 中 添 加 上 述 但
司 ） 甲 基 丙 烯 酰 氯 （ 度 为 ９ ％， 海 阿 拉 丁 公 ； 纯 ５ 上
高效液相色谱使用两种类型的纤维素-三(对甲基苯甲酸酯)固定相手性拆分非洛地平的比较
Ｃｈｒ ｌｅ — １ ０ ｍｍ ． ｉａｃ ｌＯＪ Ｒ（ ５ ｘ４ ６ ｍｍ ，５ ｍ ） ｕ 和
２ 结 果 与 讨 论
择性都 出现 了转 折 ， 示 手 性 拆 分机 理 在 特 定 温度 显 处发生 了变化 ， 导致 保 留过 程 对 应 的热 力 学 参 数 的
Ｆ Ｌ拆 分 方 法 恰 恰 是 用 Ｏ — 柱 在 正 相 的 正 己 烷 一 Ｅ ＪＲ 异 丙 醇 （ ９ １ ，ｖ ｖ） 动 相 条 件 下 完 成 手 性 拆 分 ８ ：１ ／ 流
图 １ ＦＥ 的结 构 式 Ｌ
Ｆｉ ｇ． １ Ｃｈｅ ｉ ａｌｓ ｒ ｔ ｅ ｏ ｍ ｃ ｔ ｕｃ ｕｒ ｆ ＦＥＬ
１ 实 验 部 分
１ １ 仪 器 与 试 剂 ．
文 中所用 色谱相 关参 数如 下 ： 时 间 ｔ 死 由 １ ３ ，， ５三 叔 丁基 苯 测 出 ， 留 因 子 ｋ由 （ 一ｔ） ￡ 一 保 ｔ 。 ／。计
所用 的 高效 液 相 色 谱 系统 由 Ｗａｅｓ５ ５输 液 ｔｒ ｌ 泵 、 ｔｒ ４ ７紫外 检 测 器 、 ｈ ｏ ｙ ｅ７ ２ ｉ 样 Ｗａｅｓ２ ８ Ｒ ｅ ｄ ｎ ７ ５ 进
分别 使用 Ｏ — ＪＲ和 Ｏ — 两种 手性 色谱 柱 ， ＪＨ 以正 己烷一 丙醇 （ ０ １ ， ／ ） 异 ９ ： ０ ｖ ｖ 为流动 相 。检测 波长 ２ ０ ３
ｎ ， 速 １ ０ｍＬ ｍｉ ， 样 量 ｌ Ｌ ｍ 流 ． ／ ｎ 进 ０ 。
１ ３ 对 映 体 分 离 结 果 的 评 价 ．
随着 流动 相 中异 丙 醇 含量 的减 少 ， 映 体 的保 对
【国家自然科学基金】_高效液相色谱固定相_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140802
推荐指数 13 7 3 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
推荐指数 6 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
2008年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35
2009年 科研热词 推荐指数 序号 高效液相色谱 4 1 手性固定相 4 2 手性拆分 3 3 高效液相色谱法 2 4 对映体拆分 2 5 香肠 1 6 钙拮抗剂 1 7 血清 1 8 联萘酚 1 9 纤雏素-三(苯基氨基酸酯) 1 10 相思子毒素-a 1 11 直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相 1 12 番茄红素 1 13 液相色谱 1 14 沉淀聚合 1 15 水 1 16 拆分 1 17 手性识别机理 1 18 手性识别 1 19 对映体分离 1 20 安息香 1 21 固定相 1 22 吸光光度法 1 23 反相高效液相色谱 1 24 分子印迹聚合物微球 1 25 分子力学 1 26 再生方法 1 27 α -氨基膦酸酯化合物 1 28 s-布洛芬 1 29 od-h和oj-h手性柱 1 30 n-(3,5-二甲基苯基)氨基甲酸酯单糖 1 31 n-(3,5-二甲基苯基)氨基甲酸酯二糖 1 32 hplc 1 5-乙氧基羰基特特拉姆酸甲酯 1 5-乙氧基羰基-4-羟基-2-吡咯烷酮1
高效液相色谱手性固定相法研究进展
本研究对于推动手性药物分离技术的发展、提高手性药物的纯度和质量、促进 手性药物的研究和开发具有重要意义。同时，新型手性固定相的开发还将为其 他领域的手性分离提供新的思路和方法。
02 高效液相色谱手性固定相 法概述
手性固定相法的定义与原理
定义
手性固定相法是一种利用手性固定相 来分离手性化合物的方法，属于液相 色谱技术的一种。
在食品科学中的应用
食品添加剂分析
高效液相色谱手性固定相法可用于食品 添加剂的分析，如防腐剂、抗氧化剂等 。这些添加剂往往具有手性特征，通过 手性固定相法可实现其对映体的分离和 检测，为食品添加剂的安全使用提供技 术保障。
VS
食品营养成分研究
食品中的营养成分如氨基酸、糖类等往往 具有手性特征。利用手性固定相法，可以 研究这些营养成分在食品中的存在形态和 含量，为食品营养价值的评估和开发利用 提供重要依据。同时，手性固定相法还可 以用于食品中天然活性成分的分离和纯化 ，为功能性食品的开发提供技术支持。
01
流动相组成的优化
02
色谱柱温度的控制
03
检测器技术的改进
通过调整流动相的组成、pH值和 添加剂等，改善待测物在固定相 上的保留和分离效果。
研究温度对手性分离的影响，优 化色谱柱温度以提高分离效果和 分离速度。
提高检测器的灵敏度和分辨率， 降低检测限和定量限，提高手性 分离的准确性和可靠性。
04 高效液相色谱手性固定相 法的应用实例
国外研究现状
国外在手性固定相的研究方面处于领先地位，已 开发出多种性能优异的手性固定相。
3
发展趋势
随着手性药物市场的不断扩大和技术的不断进步， 手性固定相的研究将朝着更高效、更稳定、更环 保的方向发展。
Chiralpak AD-H和Chiralcel OJ-H手性固定相拆分扁桃酸系列化合物
Chiralpak AD-H和Chiralcel OJ-H手性固定相拆分扁桃酸系列化合物王敏【摘要】对比了商品化的淀粉型手性固定相Chiralcel OJ-H和纤维素型手性固定相Chiralpak AD-H柱在正相条件下对扁桃酸系列8个化合物的拆分,结果表明Chiralcel OJ-H柱对扁桃酸系列化合物具有更强的手性识别能力,8个外消旋扁桃酸化合物在36 min内都得到了基线分离.研究发现,扁桃酸苯环上的取代基对其拆分的难易程度影响很大,其电子诱导效应影响扁桃酸类化合物在固定相上的保留时间,其空间位阻效应是扁桃酸在固定相上被拆分成败的决定因素.通过对比分析扁桃酸和手性柱的结构,探讨了可能的手性拆分机理是基于Chiralpak AD-H(Chiralcel OJ-H)手性固定相和扁桃酸系列化合物之间的氢键-氢键、偶极-偶极、π-π电子相互作用以及空间适应性等诸多因素的综合影响,其中空间适应性起到至关重要的作用.本研究可为一些实际光学活性扁桃酸及其类似物的对映体纯度测定与拆分研究提供参考.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2014(032)002【总页数】6页(P198-203)【关键词】液相色谱;手性拆分;扁桃酸;Chiralpak AD-H手性固定相;Chiralcel OJ-H手性固定相【作者】王敏【作者单位】中国科学院福建物质结构研究所,福建福州350002【正文语种】中文【中图分类】O658扁桃酸系列化合物既是一类具有广泛用途的医药、化工产品，又是制备化学中重要的合成砌块。
该类化合物含有一个手性中心，具有左旋和右旋两种光学异构体，其单一光学对映体在生物活性上通常存在较大差异，因此对扁桃酸系列化合物的拆分研究具有很重要的意义［1-4］。
目前，关于扁桃酸的拆分方法已发展为化学拆分、酶拆分、色谱拆分、分子印迹拆分、毛细管电泳拆分等［1，2］。
前两种拆分方法主要用于生产制备，后3种拆分方法主要用于分析检测。
高效液相色谱法在手性药物拆分中应用
高效液相色谱法在手性药物拆分中的应用纲要：外消旋化合物的手性分别是获取单调对映体的方法之一。
跟着人们对纯光学药物的需求日趋增添，各样手性分别技术得以快速发展。
近几十年来，在这些手性分别技术中，高效液相色谱法( HPLC ) 被公以为是一种强盛、快速、高效的分别技术，它已成功应用于对映体药物的分别剖析和制备中。
HPLC 用于敌手性药物分别的研究已获得很大进展，而且研发了大批可应用于手性小分子和聚合物分别的手性固定相，大大提升HPLC 的手性辨别能力。
本文以HPLC 的手性药物分别为焦点，介绍了近几年高效液相色谱法手性固定相的新发展和应用。
重点词：高效液相色谱法手性药物手性拆分Application of High Performance Liquid Chromatography in Chiral Separation of PharmaceuticalsAbstract：Resolution of racemic compounds is one of the potential ways of obtaining both enantiomers. The increasing demand for enantiopure drugs has led to the development of a variety of stereoselective separation technologies. Among several resolution techniques in the past few decades, high performance liquid chromatography ( HPLC ) is well recognized as a powerful, fast and efficient technique, which has been successfully employed for analysis and preparation of enantiomers of drugs. Enantioseparation by HPLC has significantly advanced, and a large number of chiral stationary phases ( CSPs ) for HPLC have been developed using both chiral small molecules and polymers with chiral recognition abilities. This review focuses on various HPLC methods for chiral separation of pharmaceuticals, many new developments and applications are introduced in chiral stationary phase of HPLC in recent years.Keywords：HPLC; Chiral drug; Chiral separation;引言手性药物是指药物分子构造中引下手性中心后，获取的一对互为实物与镜像的对映异构体，是当前药物研究领域的热门之一。
纤维素衍生化手性固定相的制备和对噻吗洛尔拆分
Ａｂｔａｔ ｉｅ ｉｄ ｏ ｅｌｌｓ ｄ ｒ ａｉｅ， ｅｌｌｓ ｔｓ３５ｄｎｔ ｂ ｎｏ ｔ ， ｅｌｌｓ ｔ （一ｒｍｏ ｅ ｚａｅ， ｅｌｌｓ ｓ ｃ： ｖ ｋ ｓ ｆ ｃ ｌ ｏｅ ｅｉ ｔ ｓ ｒ Ｆ ｎ ｕ ｖ ｖ ｃｌ ｏ ｅ ｒ （，一ｊ ｒ ｅｚ ａ ） ｕ ｉ ｉｏ ｅ ｃｌ ｏｅ ｒ４ｂｏ ｂ ｎ ｏｔ） ｕ ｉ ｃｌ ｏｅ ｕ ｔｓ ｅｚ ａｅ， ｅｌｌ ｅｔｓ 一 ｔｙｂｎ ｏ ｔ ｎ ｅ ｕｏｅｔｓ 一ｉｏ ｅｚ ａ ）ｗｅｅｕｔ ｓｎｃｌ ｒｐｒｄ ａｄ ｃ ａａｔ ｚ ｄｂ Ｒ ｒ （ ｎ ｏｔ） ｃｌ ｏ ｒ （ ｍｅｈ ｌｅｚ ａ ）ａ ｄｃ ｌ ｌｓ ｒ （ ｎｔ ｂｎ ｏ ｔ ｉｂ ｕ ｓ ｉ４ ｅ ｌ ｉ４ ｒ ｅ ｒ ｌａｏ ｉａｙ ｐｅａｅ ｎ ｈ ｒｃ ｒ ｅ ｙ Ｉ ｒ ｌ ｅ ｉ ｓｅｔ ｍｅ ｙａｄｅｅ ｎ ａ ａ ｓ ． ｈｙｗ ｒ ｒｔ ｓｄａ ｈ ａ ｓ ｔ ｎ ｒ ｈｓｓ ｏ Ｌ ｐ ｒｔ ｎｏ （ ） ｉ ｌ１Ｔ ｅｉｆ ｅ ｃ ｆ ｐ ｃ ｏ ｔ ｎ ｌｍｅｔ ｎ ｌ ｉ Ｔ ｅ ｅｅｆ ｓｙｕｅ ｓ ｉ ｌｔ ｉ ａ ｐ ａｅ ｒ Ｃ ｓ ａａｉ ｆ ＤＬ 一 ｍｏｏ． ｈ ｌ ｎ ｅｏ ｒ ｒ ｙｓ ｉ ｌ ｃ ｒ ａｏ ｙ ｆ Ｔ ｅ ｏ Ｔ ｎｕ
谱 的手性 固定相 ，结合展 开剂的优化 ，对噻吗洛尔对 映体进行拆分研 究 ，并对 衍生化取代基对拆分效果 的影响以及对 映 体在手性 固定相 上的拆分机理 进行 了详细的探讨 。
【 关键词】 维素衍 生物 ；手性 固定相 ；拆 分 ；薄层色谱 ；噻 吗洛尔 纤
Ｐ ｅ ａ ａｉｎｏ ｌ ｌｓ ｒｓｂ ｎ ｏ ｔ） ａ ｄＴ ｉ－ ｙ ｒＣ ｒ ｍａｏ ｒ ｐ ｉ ｒｐ ｒ ｔ ｆ ｌ ｏｅ ｉ ｅ ｚ ａｅｓ ｎ ｈｎｌ ｅ ｈ ｏ ｔｇ ａ ｈｃ ｏ Ｃｅ ｕ Ｔ （ ａ Ｓ ｐ ｒ ｔ ｎｏ （ ）Ｔ ｍｏｏ ｅ ａ ａｉ ｆ ＤＬ － ｉ ｌｌ ｏ
手性色谱柱的类别及应用 色谱柱操作规程
手性色谱柱的类别及应用色谱柱操作规程手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。
通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。
要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。
这种相互作用包括氢键、偶级—偶级作用、π—π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。
手性分别效果是多种相互作用共同作用的结果。
这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特别位点与分析物的键合等而更改手性分别结果。
由于这种作用力较微弱，因此需要认真调整、优化流动相和温度以达到更好的分别效果。
手性色谱柱的分类及应用迄今为止，尚没有一种仿佛十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。
不同化学性质的异构体不得不接受不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何依据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是特别紧要的。
依据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系：第1类：通过氢键、π—π作用、偶级—偶级作用形成复合物。
第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。
此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。
第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。
这类手性色谱柱中较为典型的是由Armstrong教授开发的环糊精型手性柱，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。
第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分别技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。
第5类：蛋白质型手性色谱柱。
纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)涂覆型手性固定相的制备研究与分离应用
纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)涂覆型手性固定相的制备研究与分离应用吴海波;薛兴亚;李奎永;周永正【摘要】以C8硅烷修饰的大孔硅胶作基质,涂覆制备了纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)手性固定相,研究了涂覆溶剂体系对固定相选择性的影响.实验选择氯仿或二氯甲烷作溶剂,分别添加N,N’-二甲基甲酰胺、苯酚、硝基苯、苯甲酸甲酯、苯乙酮涂覆制备了多个手性固定相,并以7种不同结构的手性化合物对固定相进行评价.结果表明,添加剂的种类与添加量对固定相的装柱柱效、保留以及选择性均会产生一定的影响.添加与纤维素酯等质量的苯甲酸甲酯制得的固定相性能较佳,其对于西孟坦中间体和酮咯酸消旋体具有良好的对映体拆分能力,具备工业制备分离的应用潜力.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2019(038)001【总页数】5页(P64-68)【关键词】涂覆;溶剂;纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯);手性固定相;对映体拆分【作者】吴海波;薛兴亚;李奎永;周永正【作者单位】浙江华谱新创科技有限公司,浙江温岭317503;中国科学院大连化学物理研究所分离分析化学重点实验室,辽宁大连116023;中国科学院大连化学物理研究所分离分析化学重点实验室,辽宁大连116023;浙江华谱新创科技有限公司,浙江温岭317503;浙江华谱新创科技有限公司,浙江温岭317503【正文语种】中文【中图分类】O657.72多糖衍生物手性固定相是目前应用最广泛的一类手性固定相。
据统计，其应用占据了手性分离案例中的90%。
此类固定相最早由日本的Okamoto研究组开发并实现商品化，主要由直链淀粉或纤维素的衍生物通过涂覆或键合到大孔硅胶上制得。
其主要分离原理是基于多糖衍生物高度有序的螺旋结构提供了复杂多样的手性环境，从而可与不同构型对映体发生选择性的作用[1-3]。
目前，由直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)，纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)，纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)和直链淀粉-三[(S)-α-甲基苄基氨基甲酸酯]分别涂覆制备的AD、OD、OJ和AS柱是选择性最强的4款手性柱[4-6]。
纤维素类手性分离材料
自由基共聚法
该键合方法中能发生聚合反应的双键过多，糖单元之间会 因相互交联产生副产物。另外，所用衍生化试剂须含乙烯 基，限制范围有限。
分子间缩聚法
该方法很大程度上避免了对衍生物本身有序结构的破坏， 但制备过程比较复杂
前面三种键合型方虽然可以成功制备 键合型 CSPs，但其制备过程十分复杂， 不利于大规模生产。 交联共聚法
主要内容
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手性药物 纤维素简介
纤维素手性固定相的分类
及制备
手性
手性(chirality)一词是指一个手性分子与其镜像 不重合的现象如我们的双手，左手与互成镜像 的右手无法重叠。又如(R)-1,2-丙二醇与(S)-1,2 丙二醇的分子量、分子结构相同，但左右排列 相反，如实物与其镜中的映体，也就像人的两 只手一样彼此不能重合，故为手性化合物(chiral compounds)
[1]李健, 苏霜, 刘宁. 微晶纤维素醋酸酯的合成与工艺研[J]. 化学与粘合, 2009, 31(6): 6972.
纤维素与酰氯反应
研究发现如果固定相与消旋体间除了氢键、偶极-偶极作用外， 还存在 π-π 相互作用，其手性识别能力一般较高。基于此规律， 纤维素三苯甲酸酯（CTB）及其衍生物被开发出来，该类 CSPs 通过苯环提供 π-π 共轭作用。该类 CSPs 的手性拆分能 力主要受苯环上取代基的种类和位置影响，其手性识别位点是 羰基和苯环。
[1]EFrancotte, R M Wolf. Chromatogr. A, 1992, 595(1/2): 63-75.
纤维素与异氰酸酯反应
与 CTB 类似，该类衍生物的手性识别能力也与苯环上取代 基的种类、位置和数量有关。
[1]Okamoto Y, Kawashima M, Hatada K. Chromatogr A, 1986, 363(2): 173-186.
纤维素-三(苯基氨基甲酸酯)涂敷手性固定相的制备及其在反相条件下的手性分离
第 卷第 期色 谱年 月纤维素 三 苯基氨基甲酸酯 涂敷手性固定相的制备及其在反相条件下的手性分离Ξ侯经国 周志强 陈立仁 欧庆瑜常俊标中国科学院兰州化学物理研究所 兰州 河南省化学研究所 郑州提 要 以微晶纤维素和异氰酸苯酯为原料 合成了纤维素 三 苯基氨基甲酸酯 并涂敷于自制的硅小球上 制备了可用于高效液相色谱手性拆分的固定相∀在反相条件下 分别对中性 酸性和碱性外消旋药物进行了拆分∀考察了流动相中 值 盐浓度 乙腈含量等因素对手性拆分的影响∀关键词 高效液相色谱法 纤维素 三 苯基氨基甲酸酯 手性固定相 手性拆分分类号前言在过去 年中 用于直接分离对映体的各种新型高效液相色谱手性固定相 不断被制备 使得 不仅成为测定对映异构体纯度的有用的分析工具 而且也成为获得光学纯异构体的十分有效的方法∀而用纤维素 淀粉等多糖衍生物制备的手性固定相 是 手性拆分中使用最广泛的手性固定相之一 但它们大多是在正相色谱条件下使用 ∀然而有些外消旋样品 如酸性药物 在正相溶剂中溶解困难 因此在正相条件下难以直接拆分 往往需要对样品进行衍生化 ∀ 等 首先报道了在纤维素 三 二甲基苯基氨基甲酸酯 手性柱上以缓冲溶液为流动相 对几个外消旋化合物进行拆分 获得了很好的结果∀其后等在 柱上系统地研究了不同缓冲溶液 盐及有机溶剂等对外消旋化合物拆分的影响∀我们则首次在自己合成的纤维素 三 苯基氨基甲酸酯 涂敷手性固定相 上 在反相色谱条件下 对中性 酸性及碱性外消旋药物进行了拆分 考察了流动相中 值 盐浓度和乙腈含量对样品保留和分离的影响∀结果表明 柱在反相条件下同样具有较好的手性拆分能力 酸性外消旋样品可不经衍生化而直接得到拆分∀实验部分试剂和样品堆积硅珠由本实验室自制 粒径 ∗ Λ 孔径比表面积 Ù 微晶纤维素 上海试剂四厂 异氰酸苯酯 其余所用试剂均为分析纯∀水为二次去离子水∀δλ Α 苯乙醇χ 二甲氧基 χ χ 二次甲二氧基 羰甲基甲酯 χ 羧基联苯 由常俊标博士合成并提供 甲砜霉素衍生物 由张所明博士提供 各样品结构如图 所示∀图 外消旋药物的结构Φιγ Στρυχτυρεοφραχε ιχδρυγσΞ本课题为中国科学院重点基金资助项目通讯联系人本文收稿日期 修回日期仪器与色谱条件红外光谱 在 光谱仪上测定∀元素分析在 元素分析仪上进行 色谱分离在由 泵 紫外 可见光可变波长检测器 日本 岛津 色谱数据处理器 日本 岛津 和 手动进样阀 Λ 组成的高效液相色谱仪上完成∀所有的色谱分离均在室温下进行∀在整个实验过程中 流动相的流速为 Ù 检测器灵敏度为 检测波长为 ∀所有流动相均经 Λ 过滤器过滤并超声脱气后使用∀手性固定相的制备的合成 的合成参照文献 ∀将 干燥的微晶纤维素置于 吡啶中回流 然后加入 倍微晶纤维素量的异氰酸苯酯 继续回流 ∀冷却后加入 甲醇使产物沉淀 经过滤 洗涤后再用适量吡啶溶解 然后加入 甲醇使产物沉淀 经过滤 洗涤后于真空中 ε下干燥 产率 ∀经 证实 微晶纤维素中的羟基在 处的吸收峰几乎完全消失 说明已基本完全酯化 同时在 处出现氨基苯甲酰基的 吸收峰 并在 和 处出现苯环吸收峰∀元素分析 括号内为计算值∀氨基修饰硅胶的制备 将 经酸活化并在 ε下干燥 的堆积硅珠置于 三颈瓶中 加入 干燥甲苯和 氨基丙基三乙氧基硅烷 于 ε氮气保护下回流 过滤 分别用甲苯和无水乙醇洗涤 ε下真空干燥 制得氨基丙烷化硅胶 ∀元素分析 ∀的涂敷 将 纤维素 三 苯基氨基甲酸酯 溶于 四氢呋喃中 将 该溶液加入 硅胶中 真空旋转蒸发除去溶剂∀将此过程重复 次 最终得到涂敷量为 Ù 的手性固定相∀该固定相以正己烷 异丙醇 Β ςÙς 为匀浆液 在 压力下装入不锈钢柱 ≅ 中∀结果与讨论中性化合物δλ-Α-苯乙醇的拆分人们认为对映体在 柱上的拆分 主要是在溶质分子与固定相表面 分子中的酰氨基部位通过氢键相互作用和溶质分子进入纤维素分子的手性螺旋空腔中形成包结络合物而发生的 ∀当以乙腈 水 Β ςÙς 为流动相时 在 柱上即可使δλ Α 苯乙醇得到很好的拆分∀图 表明 δλ Α 苯乙醇的分离和保留几乎不受流动相中 值和 离子浓度变化的影响∀因此可以认为 中性对映体的手性分离和保留对 值的变化和盐浓度的变化不敏感 简单的水 有机溶剂体系即可使其得到拆分∀酸性对映体 -∆∆ΒΙΠ的拆分当以乙腈 水 Β ςÙς 为流动相时 发现 未能被拆分而且保留时间很短 κν ∀这也许是由于 分子中的羧酸基的离解在上述流动相中未能得到充分抑制 非手性的静电作用较强 使得 与 中的手性识别部位 氨甲酸酯基 不能通过形成氢键或包结作用而发生保留和手性识别作用∀指出 在流动相中添加离液序列高 的阴离子有利于离子和可离子化对映体的拆分 并且对酸性样品的拆分在低 值条件下效果更好∀为此 我们考察了在流动相 乙腈Β水为 Β 调节 中添加不同浓度的 对 的保留和拆分的影响∀由图 可见 随着流动相中 离子浓度的增加 的分离因子 Α 和保留 κχ 随之增大 说明在流动相中存在一定浓度的 离子对带电荷溶质的拆分是十分必要的∀这也许是因为 离子的存在影响了酸性药物与手性固定相间的分子识别作用力 如范德华相互作用 氢键相互作用等 ∀同时 离子对抑制酸性药物的离解也起一定的作用∀由图 可见 在流动相 乙腈Β水为 Β Ù 中 离子浓度一定情况下 随着流动相中 值的降低 的κχ和Α有所增加 时得到满意的保留和拆分 时又略有下降∀这个结果表明流动相中较高的 离子浓度确实有效地抑制了酸性溶质分子中羧基的离解 消除了一些非手性的相互作用 使溶质在手性固定相上充分保留并发生手性识别作用∀碱性对映体 -ΤΠ∆的拆分对于碱性样品 的研究发现 在乙腈 水为 Β ςÙς 的流动相中 未能被拆分∀在含 离子的酸性流动相中 得到很好的拆分∀盐浓度的变化对 的保留和对映体拆分没有显著的影响 图 但对 值的变化则较为敏感 图 ∀色 谱 卷图 流动相中 ΧλΟ 对保留和拆分的影响Φιγ Εφφεχτοφ ΧλΟ ιν οβιλε ηασετορετεντιονανδρεσολυτιον图 流动相 Η值对保留和拆分的影响Φιγ Εφφεχτοφ Ηιν οβιλε ηασετορετεντιονανδρεσολυτιονκχ κχ κχ κχ κχ κχ流动相乙腈含量对手性分离的影响流动相中有机溶剂的含量和类型对手性识别也有明显的影响∀随着流动相中乙腈含量的降低 样品的κχ增加 Α也增大∀但当乙腈含量过低 时则难以将酸性和碱性药物洗脱∀而对于中性样品 当乙腈含量低于 ςÙς 时 保留κχ虽然增加 但Α下降 表 ∀样品在优化条件下的拆分情况见图 ∀表 乙腈含量对拆分和保留的影响 Η ΝαΧλ ολÙΛ Ταβλε ΙνφλυενχεοφΧΗ ΧΝϖολυ ειν οβιλε ηασε样品乙腈 乙腈乙腈乙腈κχ κχ ΑΡ κχ κχ ΑΡ κχ κχ ΑΡ κχ κχ ΑΡδλ Α图 样品在优化色谱条件下拆分的色谱图Φιγ Ρεσολυτιονσοφσα λεσυνδερο τι αλχονδιτιον δλ Α Β Β ςÙς Β Β ςÙς Ù Β Β ςÙς Ù上述结果表明 纤维素 三 苯基氨基甲酸酯 涂敷型手性柱在反相条件下亦具有较好的对映体识别能力∀对酸性外消旋化合物可不经衍生而直接拆分∀一般来说 低的 值和高的高氯酸盐浓度均有利于酸性外消旋化合物的拆分 这主要是由于它们充分抑制了酸性溶质的质子解离 使溶质与纤维素 三苯基氨基甲酸酯 中的羰基通过氢键而发生手性识别作用∀对中性溶质的拆分基本上与流动相中盐浓度的 值无关 仅与有机溶剂的类型和含量有关∀总之 对外消旋体的拆分不仅与手性固定相的手性识别能力有关 而且与流动相的组成有关∀对一个特定的外消旋化合物而言 通过选择流动相中有机溶剂的种类和含量 值及盐的种类和浓度对色谱操作参数进行优化 使外消旋化合物得到拆分是十分必要的∀手性柱的稳定性所制备的纤维素 三 苯基氨基甲酸酯 涂敷型手性柱在正相条件下曾连续使用两个月 在反相条期 侯经国等 纤维素 三 苯基氨基甲酸酯 涂敷 的制备及其在反相条件下的手性分离件下用各种盐浓度及 值在 ∗ 范围内连续使用一个月 均未见柱效及拆分能力下降现象∀参考文献Πρε αρατιονοφΧελλυλοσεΤρι ηενψλχαρβα ατεΧηιραλΣτατιοναρψΠηασεανδΣτυδιεσοφΡεσολυτιονυνδερΡεϖερσεδ-ΠηασεΧονδιτιονΛανζηουΙνστιτυτεοφΧηε ιχαλΠηψσιχσ τηεΧηινεσεΑχαδε ψοφΣχιενχεσ ΛανζηουΙνστιτυτεοφΧηε ιστρψοφΗενανΠροϖινχε ζηενγζηουΑβστραχτ ε ΛεΚεψωορδσ色 谱卷。
利用酯交换反应合成纤维素衍生物类HPLC用CSPs
利用酯交换反应合成纤维素衍生物类HPLC用CSPs 高效液相色谱手性固定相（HPLC-CSPs）因其快捷和直接拆分手性体等优点，被认为是光学纯对映体分析和制备分离最有效的方法之一。
在众多的HPLC-CSPs 中，纤维素苯基类氨基甲酸酯（PC）衍生物CSPs手性识别能力强、拆分范围广，始终是手性分离领域的研究重点。
利用氨基甲酸酯与异氰酸酯交换反应合成多基团取代的多聚糖衍生物CSPs 的研究鲜有报导。
本论文则是利用纤维素-三（3,5-二氯苯基氨基甲酸酯）（CDCPC）与苯基类异氰酸酯的交换反应合成多基团定位取代及含量可控的混合型纤维素类衍生物，这为探索取代基的性质对纤维素类衍生物CSPs光学拆分能力的影响开拓了新思路，且此方法操作简便、省时高效、节约资源，具有重要的理论意义和研究价值。
本文首先利用减压蒸馏的方法对实验所用的部分溶剂和反应试剂进行处理，并用傅里叶红外光谱（FT-IR）、核磁共振氢谱（1H NMR）检测纯化结果，采用传统方法合成了5种纤维素PC衍生物—CDCPC、CDMPC、CTPC、CTMPC和CTCPC，为后续实验做准备。
考察了3,5-二氯苯基异氰酸酯（DCPI）和3,5-二甲基苯基异氰酸酯（DMPI）在溶剂中（或无溶剂体系）的稳定性，并比较了苯环上取代基的电负性对异氰酸酯稳定性的影响规律。
考察了衍生物CDCPC在不同溶剂中的稳定性，并比较了溶剂的酸碱性对CDCPC热分解速率的影响。
研究了溶剂种类，催化剂用量，异氰酸酯种类等因素对多聚糖衍生物中的氨基甲酸酯基团与苯基类异氰酸酯间交换反应的影响，结果表明，CDCPC与DMPI的交换反应速率随溶剂碱性的减小而增大，此反应控制步骤是通过亲核加成机理完成的，且结构单元2-，3-及6-位反应活性相差较大：6-位反应活性最高，2-位次之，3-位最差；LiCl对CDCPC与DMPI在不同溶剂中的交换反应都有促进作用，且对Pyridine溶剂中CDCPC与DMPI酯交换反应的影响最为显著。
高效液相色谱手性固定相法直接拆分外消旋四面体金属簇合物
高效液相色谱手性固定相法直接拆分外消旋四面体金属簇合物韩小茜;李刚;赵丽;刘俊;李军;殷元骐;陈立仁【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2005(24)2【摘要】在自制的涂敷型纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相上直接拆分了含金属镍的外消旋四面体金属簇合物,得到了满意的色谱分离结果.同时考察了流动相中极性改性剂--醇的种类及结构对手性拆分的影响.结果发现,被研究的外消旋四面体金属簇合物在正丁醇作流动相极性改性剂时拆分效果好.【总页数】3页(P38-40)【作者】韩小茜;李刚;赵丽;刘俊;李军;殷元骐;陈立仁【作者单位】兰州交通大学,化学与生物工程学院,甘肃,兰州,730070;兰州交通大学,化学与生物工程学院,甘肃,兰州,730070;兰州交通大学,化学与生物工程学院,甘肃,兰州,730070;兰州交通大学,化学与生物工程学院,甘肃,兰州,730070;兰州交通大学,化学与生物工程学院,甘肃,兰州,730070;中国科学院,兰州化学物理研究所,甘肃,兰州,730000;中国科学院,兰州化学物理研究所,甘肃,兰州,730000【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.高效液相色谱手性固定相法拆分四面体金属簇合物 [J], 李军;韩小茜;刘峻2.液相色谱手性固定相法直接拆分外消旋金属簇合物 [J], 韩小茜;边治国;张玉华;李文智;陈立仁;李永民;柳春辉3.几种新的外消旋过渡金属簇合物在纤维素衍生的高效液相色谱手性固定相上的直接拆分 [J], 李文智;张伟强;李永民;窦建民;殷元骐;陈立仁4.高效液相色谱手性固定相法直接拆分外消旋雷诺嗪 [J], 张红丽;柳春辉;赵艳芳;明永飞;李永民;陈立仁5.高效液相色谱手性固定相法拆分金属簇合物 [J], 李军;韩小茜;刘峻因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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[接受日期] 2008 05 22*通讯作者: 狄斌,副教授;研究方向: 药用色谱材料研究、中药复方代谢研究;Te:l 025 ********; E m ai:l dd w 888@v i p .si na .com纤维素类高效液相色谱手性固定相赵敬丹1, 狄 斌1,2*, 冯 芳1,2(1.中国药科大学药物分析教研室,江苏南京210009;2.药物质量与安全预警教育部重点实验室,江苏南京210009)[摘 要] 在液相色谱分离中,将纤维素衍生物作为手性选择体及固定相以分离对映体,是最广泛采用的方法之一。
介绍涂敷型及键合型纤维素手性固定相的分类和最新研究进展,并展望了纤维素类高效液相色谱手性固定相的发展趋势。
[关键词] 手性固定相;纤维素;对映体分离;H PLC[中图分类号] O 657 7 [文献标识码] A [文章编号]1001-5094(2008)10-0447-07The Cell u l ose Chira l Stati onary Phases i n H PLCZ HAO Ji n g dan 1, DI B in 1,2, FE NG Fang1,2(1.D epart m ent of P har m aceutical Anal y sis ,China Phar maceutical University,N anjing 210009,China;2.K ey Labora tory of Drug Quality Control and Phar m acovi g ilance,M inistr y of Education,N anjing 210009,China )[Abstrac t ] C ell u l o se deri v atives are w i d ely used as chro m atograph ic chira l se lectors i n ch iral stati o nary phases(CSP)f o r separating enantio m ers by H PLC ,wh ich represen t no w adays one o f t h e m ost popu lar types o f CSP.The classificati o n and the recent research advances o f coated and bonded ce llulose chira l stationary phases w ere i n troduced i n this paper ,and the trend o f cell u l o se ch iral stationary phases i n HPLC w as a lso fo recas.t[Key w ords] Ch iral stationar y phases ;Cellulose ;Enanti o m er separations ;HPLC 在液相色谱分离中,多糖衍生物是已商品化的手性固定相(ch iral stati o nary phases ,CSP)中应用最广泛的类型之一。
多糖是具有天然光学活性的高分子化合物,而其葡萄糖单元上的羟基易于被修饰和衍生化,表现出特殊的手性识别能力。
纤维素是 D 葡萄糖单元通过1,4 糖苷键连接而成的线状聚合物,具有高度有序、呈螺旋型空穴的结构,为了降低其极性、提高对映体的选择性,常用相关的酰氯化合物和异氰酸酯将其衍生化。
自20世纪70年代,Ger hard H esse 和Robert B H agel(Chro mato graphia,1973年)发现微晶纤维素三乙酯具有高的手性识别能力以来,人们对纤维素类手性固定相日趋关注,研究也不断深入。
纤维素类手性固定相按其物理形态可分为整体微球型固定相、涂敷型固定相和键合型固定相3种类型。
整体微球型固定相不使用担体,直接将多糖衍生物制备成多孔微球作为色谱固定相,降低了成本,同时提高了溶质柱载量,特别适合于制备性拆分,但流动相选择范围窄,且不适于在高压下使用,目前对其的研究较少;涂敷型固定相是将多糖衍生物涂敷于担体表面,拆分能力强,但流动相的选择范围比较窄;键合型固定相则是将多糖衍生物键合于担体表面,扩大了流动相的选择范围,但拆分能力弱于涂敷型固定相。
本文主要介绍涂敷型和键合型纤维素类手性固定相的研究和进展情况。
1 涂敷型纤维素手性固定相1 1 涂敷型纤维素手性固定相的载体首次成功将纤维素衍生物涂敷在硅胶上用于手性化合物拆分的是日本科学家Yoshio Oka m oto 等人(Che m Lett ,1984年)。
一直以来,硅胶是最常用于制备涂敷型手性固定相的载体。
最初使用的硅胶均预先经过硅烷化试剂处理,而氨丙基硅胶被认为是最适用于制作涂敷型手性固定相的载体,因为氨基的极性低于硅羟基,可减少硅胶表面裸露的酸性硅羟基与手性化合物之间的非立体选择性作用。
而且由于氨基与纤维素衍生物之间易形成氢键,可使衍生物分子有序地排列在担体表面,这有利于其与手性分子的相互作用。
但硅烷化也存在一定的问题:硅烷化反应会减小硅胶的孔径和孔体积容量,而使固定相的手性识别性能降低。
p H 值对硅胶的色谱性能、分离效率影响较大:当p H >8时,硅胶骨架会被溶解;而当p H <3时,硅氧烷键又因慢慢水解而脱离硅胶表面使填料变性。
硅胶还存在不耐高温的问题。
因此近年来,具有良好化学稳定性和独特选择性的氧化锆色谱填料受到了广泛的关注[1 2]。
1 2 涂敷型纤维素手性固定相的类别1 2 1 均一取代的纤维素衍生物手性固定相 纤维素苯甲酸酯类衍生物的手性识别能力一方面来自外消旋化合物手性中心附近的功能基与衍生物上的羰基和苯环之间的氢键作用、偶极-偶极相互作用及 键相互作用,另一方面来自外消旋化合物在手性空腔中的空间适应性。
当分子结构中有一个推电子取代基的苯甲酸酯时,其手性识别能力优于分子结构中有一个吸电子取代基的苯甲酸酯。
在这类固定相中,纤维素-三(4 甲基苯甲酸酯)(CT M B)对许多手性化合物显示出较强的手性拆分能力,对此已有不少文献报道[3 10]。
纤维素苯基氨基甲酸酯及其衍生物主要的手性识别位点是氨基甲酸酯残基,具有极性基团的外消旋化合物通过氢键、偶极-偶极相互作用而达到手性分离。
相邻葡萄糖单元上的氨基甲酸酯残基之间通过分子内氢键形成的高级结构也是获得高手性拆分的重要原因之一。
在苯基的3位或4位无论引入吸电子基或推电子基都能提高纤维素苯基氨基甲酸酯的手性分离能力。
在众多衍生物中,纤维素-三(3,5 二甲基苯基氨基甲酸酯)和纤维素-三(3,5 二氯苯基氨基甲酸酯)表现出极高的手性拆分能力。
但后者易溶解在醇-烃混合溶剂中。
Francotte 等[11]借助嵌入式汞放电灯、激光灯照射或在光敏剂存在的条件下使衍生物之间发生交联,将衍生物固定在载体上。
该固定相对溶剂有高度的稳定性,且能充分保持高分离能力。
另外,当纤维素衍生物上的苯环同时有供电子取代基和吸电子取代基时,对许多外消旋体有高分离能力,比如纤维素-三(3 氯 4 甲基苯基氨基甲酸酯)、纤维素-三(4 氯 3 甲基苯基氨基甲酸酯)、纤维素-三(3 氟 4 甲基苯基氨基甲酸酯)等。
有研究发现,在相同条件下,纤维素-三(3 卤素 5 甲基苯基氨基甲酸酯)对某些外消旋化合物的拆分效果甚至优于纤维素-三(3,5 二甲基苯基氨基甲酸酯),并且由于其在20%以下的异丙醇-正己烷溶剂中几乎不溶解,故柱寿命比纤维素-三(3,5 二氯苯基氨基甲酸酯)的更长[10]。
在Da ice l 公司已上市的此类涂敷型手性柱中,CH I R LCEL OD[硅胶表面涂敷有纤维素-三(3,5 二甲基苯基氨基甲酸酯)]和C H I R LCELOJ[硅胶表面涂敷有纤维素-三(4 甲基苯甲酸酯)]的应用最为广泛。
1 2 2 区域选择性取代的纤维素衍生物手性固定相 根据葡萄糖结构单元上的伯羟基和仲羟基反应活性的不同,可以在葡萄糖单元上衍生不同的取代基,如在C2、C3和C6位衍生不同的苯甲酸酯或苯基氨基甲酸酯,并由此生成4种不同的衍生物(1~4)[12]。
20世纪90年代,Yuriko Ka i d a 和Yoshio Oka m oto(Bull Che m Soc Jpn ,1993年)制得的纤维素-三(3,5 二甲基苯基氨基甲酸酯)和纤维素-三(3,5 二氯苯基氨基甲酸酯)对许多异构体显示出极高的手性拆分能力。
为了研究这种拆分能力的特点,他们首次在C6和C2、C3位分别引入苯环上含不同取代基的氨基甲酸酯,得到了CSP 1(5)和CSP 2(6),结果发现,这些衍生物的分离能力与对映异构体结构相关。
而当C6和C2、C3位的取代基为不同的苯甲酸酯时,也得到了类似的结果。
此后不久,F li x (J Chro m atogr A ,1996年)发现,在C6位引入手性苯乙基氨基甲酸酯,如CSP 3(7)和CSP 4(8)可以提高纤维素类手性固定相的选择性,对某些对映体可获得高的分离因子。
但是,C6位并不是手性选择的活性位点。
在C6和C2、C3位分别衍生有苯甲酸酯和苯基氨基甲酸酯的纤维素衍生物CSP 5(9)、CSP 6(10)、CSP 7(11)对于对映体的保留在很大程度上受其苯环上取代基的空间位阻而不是电性效应的影响,并且分离和保留是独立的。
与C H I RLCELOD 相比,C6和C2、C3位分别衍生有氨基甲酸酯和苯甲酸酯的纤维素衍生物手性选择性相对较低。
可见,这种区域选择性取代衍生物的手性识别能力并不是取代基作用的简单加合,而是由纤维素规整有序的高级结构所决定的。
并且,区域选择性取代存在的问题是:当C6位脱去三苯基甲基保护基时,C2、C3处会发生部分去氨基甲酸酯化;而C6位三苯基甲基的存在使C2、C3处难以完全酯化,即区域选择性取代最终产物是C2、C3和C6位分别含有不同比例取代基的衍生物。
虽然对涂敷型手性固定相的研究较多,但是,涂敷型手性柱在以四氢呋喃、三氯甲烷、丙酮等一些有机溶剂为流动相时,会使纤维素衍生物溶胀和溶解,导致空间结构被破坏而失去手性识别能力,这大大限制了该类手性柱的使用。
2 键合型纤维素手性固定相键合型手性固定相是将纤维素衍生物固定于载体表面,从而扩大了流动相的使用范围,使很多在常规流动相中不能被分离的对映体能够通过流动相的改变而被拆分[13 16]。
但由于键合反应会破坏纤维素衍生物有序的二级结构和超分子结构,从而使其手性选择性降低,所以在选择固定相时要均衡利弊。