手性高效液相色谱法分析测定缬沙坦对映体

２． ２９
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，． ０ 且 ０
目． １
０ ２ ６ ８ ． ． ８ ７ ０
｝
结果表明降纤酶在 ２ １ 单位／ Ｌ内呈 良好的线性关 一０ ｍ
系。
１． ６８
６ 弓，
０ ２ ２ ８ ． ． ８ ５ １
２４ 重复性试验 ． 照“．．” 项下方法制备样品溶液 ， ２１ ４ 三批样品， 每批 １ ０
ｃｒ ａ ｇ ｐｉｃｎｉ ｎ ｗｒ ｌ ｅ ｂｌ ：ｉ ｒ Ａ Ｔ ｒ ｅ（５ｍ ｘ ｍ ，｝ ） ｌ ｎ ７０ ｓｈｔｂｆｒ ｅ ａｏ ｈ ｍ ｔ ｒ ｈ ｏｄｉ ｓ ｅ ｄ ｏ Ｌ ｈ Ｃ Ｒ ＣｉＤｘ２０ ｍ ｍ ５ ｍ ｃ ｕ ， ． ｐｏ ａ ｕｅ ｍ ｔ ｎｌ ｏ ｏ ａ ｃ ｔ ｏ ｅ ｉ ｅｗ Ｃ ｏ ｓ ｔ ｈａ ４ Ｌ ｏｍ ｐ Ｈ ｈ ｐ ｅ － ｈ ｈ ａｂ （０２ ） ｍ ｂｅ ｓ ａ０９ Ｕｍｎ ｄｔ ｔｎ ｅ ｎｔｗｓ ｎ ， ｍ ｔ ｐｒｕ ｗｓ Ｃ Ｒ Ｓ Ｌ Ｓ ｃｌ ｒ－ ８： ａ ｏｉ ｐａ ｔ ｍ ｉ， ｅ ｃｏ ｗｖ ｅｇ ａ２０ｍ ｃ ｕ ｎ ｅ ｔｅ ３０． Ｅ Ｕ Ｔ Ｔ ｅ ｉ ａ ０ ｓ ｌ ｈ ｅ ． ｅ ｉ ａ ｌ ｈ ５ ｏ ｌ ｅ ａｒ ａ ０ ｍ ． 岁 ｔｎ ｖ ｗｒｌｅｂｔｅ ０ １ ５ 岁ｍ ． ｌ ｅ ｌ ｉ ｆ ｃｏ ｗｓ ２，ｍ ａｄ ｌ ｉ ｆ ｎｔｉ ｗｓ ７ ｉ ｃｒ ｓ ｅ ｒ ｅ ． ｏ ｕ ｅ ｅ ｉ ｅ ｎ 一 ｎ ｗ Ｌ Ｔｅ ｓ ｉ ｔ ｅ ｔｎ ００ｐ／ Ｌ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｔｎ ａ００ Ｗ ｈ ｏ ｔ ｏｄｔ ｉ ａ ． ｇ ｗ ｍ ｅ ｎ ｈ ｍ ｏｑａ ｉ ｏ ｅ ａ
注射用降纤酶是由蛇毒类凝血酶加赋型剂组成的生物 制剂， 主要用于治疗血栓性疾病， 脑梗死， 股动脉栓塞， 肺栓
塞。其成分中 类凝血酶含量的准确确定对疗效起关键性作 用。注射用降纤酶常用的测定方法是凝固法， 赋形剂和离
收稿 日 ： ０－ － 期 ２ ４ ９１ ０ ０ ４
４５ 波长测定吸光度（ ０ｕ ｒ ｎ Ａ值） 以Ａ值为横坐标， ， 对照品含 量为纵坐标， 进行直线相关分析， 由供试品 Ａ值求出相应的 供试品含量。
表 １ 注射用降纤酶专属性试验结果（ 标示量％， ＝ ） ｎ５
Ｔａ ｂ
１ Ａ ｓ ｒ ｕｓ ｓｅｉｃ ｄｆ ｒ ｅ ｌ ｅ ｄ ｓ ｙ ｓｌ ｏ ｐｃ ｆ ｅｂａ （ ａ ｌ ａ ａ ｅ ｔ ｆ ｆ ｏ ｉ ｓ ｉ ｒ ｂｅ －
ｍ ｕｔ ｎ ５ ｏｎ ％， ＝ ）
样品 空白辅料 凝固法
发色底物法
２３ 标准曲线的可靠性 ．
每 浓度 三 精 取 照品 一 重复 管， 密吸 对 溶液。 ０ ０１ ， ， ， ，０ ４８ ２
１ ， ，分别置于试管中， ６ ２０ Ｌ ０ ｐ ０ 加缓冲液至 １Ｌ ｍ 作为标准曲
线。取供试品溶液 １ Ｌ ｍ 于待测试管中， 将上述各管分别加人 Ｓ １ ｌ ， － ６ ｍ， 混匀， ℃保温３ｍｎ加入０２ Ｌ ２ ０ ｌ ３ ７ ０ ｉ， ． 冰醋酸终止 ｍ 反应。以 标准系列中不含降纤酶对照品管调零点， 在分光光 度计上测各管Ａ 值。以吸光度及对照品量（ ， ， 单位） 绘制标
手性高效液相色谱法拆分和测定撷沙坦对映体
张明浩， 刘立军， 解斌（ 大 业 珠 有 公 ，东 珠 １７） 天 药 （ 海） 限 司广 海５ ０ ９０
摘要： 的 建立测定蝴沙坦对映体的高效液相色 目 语方法。方法 采用Ｌ ｈ Ｃ Ｒ ＣｉＤｘ ｍ ｘ ， ） ｉ ｒ Ａ Ｔ ｒ ｅ（５ ｍ ｍ ５ 手性柱， Ｃｏ ｈａ ２０ ４ｍ Ｎ ， ｒ ｎ
准确、 灵敏， 专属性强， 适用于撷沙坦对映异构体的测定。 关键词： 高效液相色 濒沙坦； 语； 对映体； 手性 中图分类号：９７７６１ Ｒ １．９． 文献标识码： Ｂ 文章编号： ０－ ９ （ ０ ）６ ４３ ３ １ ７ ６３２ ５０－ ８－ ０ ７ ０ ０ ０
Ｅ ａｔ ｍｅｉ ｓｐｒｔ ｎ ｄ ｔ ｍ ｎｔ ｎ ｖｌ ｒ ｎ ｃｉ ｌ Ｌ ｎ ｎｉ ｒ ｅａａ ｏ ａ ｄ ｅ ｉ ｉ ｏ ａ ａｔ ｂ ｈ ａ Ｈ Ｃ ｏ ｃ ｉ ｎ ｅ ｒ ａ ｏ ｆ ｓ ａ ｙ ｒ Ｐ Ｍ Ａ Ｇ ｎ－ａ，Ｉ Ｌ－ ｎＸＥ Ｔａ Ｐａ ａ ｕｃｓ ｈｉＬＤ ， ａ５９７， ａ Ｎ Ｍ ｇ ｏＬＵ ｊ ，Ｉ Ｂｎ（ｉｎ ｒ ｃ ｔａ（ ａ Ｔ． ｈｉ ０Ｃｉ ） ｉ ｈ ｉｕ ｉ ｔ ｈ ｍ ｅｉｌ Ｚｕ ） Ｚｕ １ ｈ ｈ ０ ｈ ｎ
稀释至 浓度， ／ ＝ 不同 按Ｓ ３ Ｎ 测得最 低检出限 ． ／Ｌ 为００ｐ ｍ ； ２， ｇ 按ＳＮ １ 测得其定量限为００ｐ／ Ｌ ／ 二０ ． ｍ ． ７ ． ｇ
２５ 对照品进样重复性试验 ． 取浓度为２ 的 ｐ／ Ｌ 对照品溶液２ｐ ， ，ｍ ｇ ０， 注人色谱仪， Ｌ 重 复进样５ ＲＤ为０５％ 二 ） 次，Ｓ ． （ ５ 。 ２ ｎ ２‘ 回收率试验 ． 称取已知Ｒ对映体含量的缴沙坦９ 每份１ｍ ， 一 份， Ｏ ｇ置于 ｌ ｍ 量瓶中， ０ Ｌ ０ 分成３ 分别加人上述 Ｒ对映体贮备液 组， 一 １， ， ｍ ， ５ ２ Ｌ流动相稀释至刻度， ２ ５ ０ 配制成高、 低三组不同 中、 浓度溶液， 各取２ｐ 注人色谱仪， ０， Ｌ 记录峰面积， 按外标法计 算加样回收率， 三组平均回收率分别为 ９．％，９６ ９８ ９．％， １ ． ；Ｓ 分别为０３％， ４％， ５％， ０ １ ０ ％ Ｄ Ｒ ． ０ ４ ０ ７ 总平均回 ８ ． ． 收率
ｐ ７０ Ｈ ． 磷酸盐缓冲液一 甲醉（０２ ） ８．０ 为流动相， 流速０９ Ｕｍｎ柱温３０ 检浏波长２０ｍ ． ｉ， ｍ ０ Ｃ， ５ｎ 。结果 纸沙坦对映体在 ０１ ．
５ Ｌ内 好的线性关系， Ｎ／ ，ｍ 呈良 ｇ 检测限为００Ｗ／ Ｌ定量限为００Ｍ／ Ｌ平均加样回收率为９．％。结论 本方法简 ． ｍ ， ２ ． ｍ ， ７ ． ｇ ８８ ． 便、
３ 讨论
发色肤 Ｓ １０释放出对硝基苯胺（Ｎ ）Ｐ Ａ在４５ｍ处 － ６， ２ Ｐ Ａ ，Ｎ ０ｎ 有强吸收峰， 其显色程度与类凝血酶含量成正比， 且该试验 不受降纤酶制剂中赋形剂右旋糖醉干扰， 也不受钙离子影 响， 因此比肉眼观察的凝固法准确、 特异、 简单、 快速， 适于降
纤酶原料、 半成品、 成品的含量测定与常规质量控制。 参考文献 ［１ 管利丰， １ 戚正武． 发色多肤底物及其临床应用【ｌ 中 ｉ． 华血液 学杂志，９５６ ）１ ． ８， ３ ； ４ １ （ ７ ［〕 严慧敏， ２ 黄济群， 廖兆全． 凝血酶底物发色肚的 化学合成【］ Ｊ． 广州医学院 学报，９５２ （）３． １ ， ５； ９ ３ ３
０ ３ ６ ９ ． ． １ ９ ４ ０ ３ ５ ９ ． ． １ ９ ０
１． ６６
五
Ｊ．
６ ，
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０ ３ ７ ９ ． ． １ ９ ８
准曲 计 回 方 线，算的 归 程为（二 ）Ｙ ００ ３ 十． ， 。 ５；二． Ｘ ０ ４ ｒ ７ ７ ０１ ８
＝ ９ ３ ０９ ９ ａ ．
ａ ｈｍｅ ｎｔｏ ｒ
１Ｒ对映体； 领沙坦 ．一 ２ ．
１Ｒｅａｔｍ ｒ ａ ａａ ；． ａａ ． ｎｏ ｅ ｏｖｌｒｎ２ｖｌｒｎ － ｉ ｎ ｆ ｔ ｓ ａ ｔ ｓ
２４ 检出限及定量限 ． 取线性试验中 浓度为０１ Ｌ ． ｍ Ｒ对映体溶液， 列 ｐ／ 一 ， ｇ 按比
圈 １ 顺沙坦的化学结构式 Ｆｇ ｈｍｃｌ ｃ ｕ ｏｖｌ ｒｎ ｉ １ ｅ ｉ ｓｕｔ ｅ ａ ａａ Ｃ ａ ｔ ｒ ｆ ｔ ｒ ｓ
时间（）含量（ ， ％）
２． ７８
１ ４ ７．
Ａ． ．
含量（ ％）
０ ０
９ ６ ７．
１６ ５
５ 单位降纤酶对照品 ５ 单位降纤酶对照品 ＋ ％右旋糖ｆ １ ｆ ｆ ５ 单位降纤酶对照品 ＋ ａｌ ＣＣ ２ ％ ２ 注射用降纤酶 注射用降纤酶 ＋ ％ １ ＣＣ２ ２ ａ
子含量对测定结果产生很大影响。本实验类凝血酶作用于
瓶， 另按“．．” ２１２ 项下方法制备对照品溶液； 依上法平行测 定， 计算样品的含量和精密度（Ｓ ） ＲＤ 。方法的精密度测定结 果为１ ％（ ＝ ） ． ｎ ３ 。结果表明， ４ 本法精密度良 好。 ２５ 专属性 ． 对空白 降纤酶对照品、 辅料、 注射用降纤酶样品， ％ 含２ ＣＣ 样品， ａ儿 在给定反应条件下与凝固法进行比较。
为９ ．％。 ９８ 表 １ 回收率试验结果（ ＝ ） ｎ９
１ 仪公与试药
Ｈ Ｉ 液相色谱仪， Ａ 检测器， Ｐ Ｐ１ ０ ０ ＤＤ Ｈ 化学工作站； 甲 醉为色谱纯； 撷沙坦及其Ｒ对映体样品均由 一 本公司合成室提
供。 ２ 实验方法
２１ 色谱条件 ．
色谱柱：ｉ ｒ Ａ Ｔ ｒ ｅ（５ ｍ ｍ ５ 手 ｈ Ｃ Ｒ ＣｉＤｘ ｍ ｘ ， ） Ｌ ｏ Ｃ ｈａ ２０ ４ｍ ｗ ｒ ｎ 性柱； 流动相： ７０ ｐ ． Ｈ 磷酸盐缓冲液一 醇（０２）流速： ９ 甲 ８： ； ０ ０ ． ｍ ｉ； ３ｃ 检测波长： ０ｍ 进样量： ｗ ｏ Ｕｍｎ柱温： Ｃ； ０ ２ ｎ； ５ ２ Ｌ ０
ｎ ｔ ｎ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｏ ｖｌ ｒ ｎ ａｉ ｏ ｎ ｎｉ ｒ ａｓ ｔ ． ｏ ｆ ｏ ｆ ａ ａ
Ｋ Ｙ Ｏ Ｄ ： Ｃ ｌ ｒｎ ａｔｍ ｒｃｉｌ Ｅ Ｗ Ｒ Ｓ Ｈ Ｌ ； ａａ ； ｉ ｅ； ａｔ Ｐ ｖｓ ａ ｔ ｅ ｎｏ ｎ ｈ ｉ ｒ ｙ
绷沙坦（ａａａ） ｌｒｎ是一种口 ｖｓ ｔ 服有效的特异性的血管紧张 素Ｉ ，受体拮抗剂， ＩＡ ） （Ｔ 临床用于治疗轻、 中度原发性高血 压， 其化学名为（ ） Ｓ －－ Ｎ戊酞基一－ ’ １ 一 Ｎ ｛ 一 Ｈ 四氮哇一基） ［ （ ２ ［，’ １１一 联二苯〕 一 甲 一 －基」 基｝ ４ 撷氨酸。分子结构见图１其中 ， 含有一个手性中心， 存在一对对映异构体。由于Ｒ对映体药 一 物活性远低于Ｓ 一 对映体， 故撷沙坦原料需控制Ｒ对映体的限 一 度。本实验建立的高效液相色谱方法， 采用 Ｌ ｈ Ｃ Ｒ ｉｒＡＴ Ｃｏ
八 “ 日 日 日 １ １ 、 ＼
２
ＣｉＤｘ２ ｍ ｘｍ ，Ｌ） ｈａｅ ５ ｍ ｍ５ｍ 手性色 ｒ （０ ４ ｝ 谱柱， Ｈ． 以ｐ７０ 磷酸盐
缓冲液一 甲醇（０２） ８： 为流动相， ０ 对撷沙坦中的对映异构体进 行了拆分和测定， 方法简便、 灵敏， 准确。
ｔ ） （ｉ ｍｎ
图２ 顺沙坦及其Ｒ对映体的手性分离图 一 谱 Ｆ ２ ｈａｓ ａ ｔｎ ｍｔｒ ｏｖｓ ａ ａｄ － － ｉ Ｃｉｌ ｒｉ ｃｒ ａｇ ｍ ａａ ｎ ｉ Ｒｅ ｇ ｒ ｅ ａｏ ｈ ｏ ａ ｆ ｒ ｎ ｔ ｎ ｐ ｏ ｌｔ ｓ
中国现代应用药学杂志 ２０ 年 １ ０５ ２月第 ２ ２卷第 ６期
Ｃ ｉ Ｊ Ａ ， ０ Ｄｃｍ ｅ， ２ Ｎ ． ｈ Ｍ Ｐ２ ５ ｅ ｂｒＶ ｌ ２ ６ ｎ ０ ｅ ｏ ． ｏ
・ ８ ・ ４３
ｍ ． ａ ｒｅ ｖ ｗｓ ８ Ｃ Ｎ Ｌ ＳＯ Ｔｉｍｔｄ ｏｖ ｉ ｔａ ｕ ｔ ｓ ｓ ｖ， ｓｅｉ ｆ ｄｔｍ－ Ｌ Ｔｅ ａ ｒｏ ｒ ９． Ｏ Ｃ Ｕ ＩＮ ｈ ｅ ｏ ｉｃ ｅ ｅ ， ｒｅ ｅ ｉ ｅ ａ ｅｃｖ ｏ ｅｒｉ ｈ ｖ ｇ ｅ ｅ ａ ８ ％． ｅ ｃ ｙ ｓ ｈ ｓ ｎ ｎ ｃ ａ ， ｔ ｎ ｌｔｅ ｅ ｎ ｃ ｎｉ ｄ ｒ
Ａ Ｓ Ｒ Ｃ ； Ｅ ＴＶ Ｔ ｄ ｅｐ ｈａＨ Ｌ ｍｔ ｄ ｔ ｄｔｍｎｔｎ ｎｎｏｅｏｖｓ ａ． Ｈ Ｄ Ｔｅ Ｂ Ｔ Ａ ＴＯ Ｊ Ｃ ＩＥ ｏ ｌ ａ ｌ Ｃ ｈ ｆ ｈ ｅｒｉ ｉ ｏｅ ｔｍｒ ａａ ｎＭＥ Ｏ Ｓ ｈ Ｂ ｅ ｏ ｃｉ Ｐ ｅ ｏ ｏ ｅ ｖ ｒ ｒ ｅ ａｏ ｆ ｉ ａ ｆ ｒ ｌｔ Ｔ