实验四--培养基的制备、器具包扎和.
微生物实验指导书-教材
微⽣物实验指导书-教材微⽣物学实验指导书⽬录实验⼀玻璃器⽫清洗、包扎与常⽤灭菌技术 (3)实验⼆培养基的配制 (8)实验三从⼟壤中分离微⽣物及纯化 (11)实验四微⽣物的接种技术 (14)试验五细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态观察 (17)实验六细菌的简单染⾊和⾰兰⽒染⾊ (20)实验七⼤肠杆菌⽣长曲线的测定 (23)实验⼋实验室环境和⼈体表⾯微⽣物的检查 (25)实验九乳酸菌的检测 (28)实验⼀玻璃器⽫清洗、包扎与常⽤灭菌技术【⽬的要求】1. 学习并掌握棉塞制作的⽬的、原理及⽅法；2. 学习并掌握玻璃器⽫清洗及包扎⽅法；3.掌握⾼压蒸汽灭菌的基本原理及操作⽅法。
4.了解其它常⽤消毒灭菌技术原理及技术【基本原理】棉塞的作⽤有⼆：⼀是防⽌杂菌污染，⼆是保证通⽓良好。
因此，棉塞质量的优劣对实验的结果有较⼤的影响。
微⽣物学实验所⽤的器⽫，⼤多数要进⾏清洗、消毒、灭菌，才能⽤来培养微⽣物。
玻璃器⽫的包扎⽅法正确合理，在使⽤过程中才能有效防⽌杂菌的污染。
玻璃器⽫包扎好后，⼀般⽤⾼压蒸⽓灭菌法进⾏灭菌。
⾼压蒸⽓灭菌是将待灭菌的物品放在⼀个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的⽔沸腾⽽产⽣蒸⽓。
待⽔蒸⽓急剧地将锅内的冷空⽓从排⽓阀中驱尽，然后关闭排⽓阀，继续加热，此时由于蒸⽓不能溢出，⽽增加了灭菌锅内的压⼒，从⽽使沸点增⾼，得到100℃以上的⾼温，导致菌体蛋⽩质凝固变性⽽达到灭菌的⽬的。
此外，常见灭菌⽅法还有⼲热灭菌、灼烧灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等。
对空间灭菌常使⽤甲醛加⾼锰酸钾熏蒸、喷洒消毒灭菌药剂等消毒灭菌⽅法。
【实验⽤品】棉花，试管，培养⽫，纱布，三⾓瓶，棉线，量筒，⽜⽪纸（或旧报纸），LDZX-50KBS ⽴式⾼压蒸⽓灭菌锅，常⽤灭菌⽤具、药剂等等。
【⽅法步骤】⼀、棉塞的制作正确的棉塞要求形状，⼤⼩，松紧与试管⼝（或三⾓瓶⼝）完全适合，过紧妨碍空⽓流通，操作不便；过松则达不到滤菌的⽬的。
制作过程见图1，包括取棉花、整理、折⾓、卷紧、成形、塞试管等步骤。
微生物实验
微生物学实验实验一一、目的要求二、基本原理➢➢➢三、实验材料每组同学需要准备以下材料（2人/组）：●●●●●●●●●●●●●●四、实验内容（一）、培养基的配制：注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。
操作图示：四、实验内容培养基配方：1．配制肉汤斜面培养基50 mL 2．配制麦芽汁斜面培养基3．注意事项：◆◆◆◆（二）培养基灭菌四、实验内容（三）包扎1．培养皿：2．吸管：3．三角玻扒：五、实验报告思考题：◆◆◆◆◆◆◆◆实验二一、目的要求➢➢二、基本原理三、实验材料1．各组所需的物品●●●●2．注意事项：①②①②③④四、实验内容1．微生物的斜面接种技术：斜面接种的操作方法：转下页接种菌名及接种划线方式、接种工具：细菌：霉菌：酵母菌：图2-1 各种无菌操作接种技术示意图图2-2 穿刺接种操作过程示意图2．生物的培养技术——培养箱恒温培养法3. 为下次实验准备平板培养基：注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。
培养基配方：(1)配制肉汤平板培养基100 mL(2)配制麦芽汁平板培养基配制好的培养基进行灭菌！五、实验报告1．观察记录实验结果:微生物琼脂斜面上的生长状况。
2．思考题:◆◆实验三一、目的要求●●二、基本原理三、实验材料1、各组所需物品：•••••2、平板的制备：四、实验内容1. 平板混合分离法：大肠杆菌，枯草杆菌，单球菌（3皿）图3-1 混合倒平板操作法示意图四、实验内容2. 平板划线分离法：（3皿）图3-2 平板划线分离操作法示意图图3-3 平板划线菌落分离效果图四、实验内容3. 平板涂布分离法(3皿)：图3-4 涂布平板操作法示意图四、实验内容4. 平板点殖：黑曲霉，黄曲霉，根霉（3皿）四、实验内容5. 生物的培养技术：培养箱恒温培养法➢➢五、实验报告1、观察记录实验结果：微生物的菌落特征注:菌落特征描写方法参考如下：五、实验报告2、思考题:实验四一、目的要求二、基本原理转下页二、基本原理三、实验材料1. 菌种：2. 每组制片用具：3. 染色剂1套：四、实验内容四、实验内容3.细菌、酵母菌、霉菌的制片技术及个体形态观察：●●●图4-10 涂片制备过程四、实验内容4 注意事项：●●●●。
培养基的制备、器具包扎和灭菌
实验五培养基的制备、器具包扎和灭菌一、实验目的1、了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2、了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3、熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。
二、实验原理①培养基分类：据组成成分可分为:1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。
2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。
3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
据用途可分为1.选择培养基：用来从环境中筛选微生物的培养基加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使其快速生长，便于分离抑制性培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标微生物得到富集，便于分离2.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性，以便鉴别。
据培养基的物理状态可分为：1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。
2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。
3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。
②配置好的培养基必须立即进行灭菌③实验室常用加压蒸汽灭菌法三、实验材料药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O等。
高压蒸汽灭菌锅、恒温干热灭菌箱。
其它：天平、牛角匙、电磁炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带塞子的无菌试管、培养皿、枪头、枪头盒、标签等。
四、实验步骤1、培养基的配制2、分离培养微生物常用器皿的准备3、培养基和玻璃器材的灭菌培养基的配制方法和步骤：1.称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。
2.溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。
3.调pH值：用NaOH或HCl调pH，用pH试纸对照。
4.加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。
食品微生物学实验报告
实验一玻璃器皿的准备、常用仪器的使用及培养基的制备[实验目的]1、系统掌握玻璃器皿的准备方法及常用仪器的使用。
2、掌握一般培养基制备的原则和要求，熟悉一般培养基制备的过程。
[实验原理]一、玻璃器皿的无害处理：1、新购置的玻璃器皿因含有游离碱，一般在2%的盐酸溶液中浸泡数小时后再用清水洗净，也可在洗衣粉水中煮30-60min，取出用清水洗净。
2、常用玻璃器皿洗涤时可用鬃刷蘸取洗衣粉刷洗，然后用自来水冲洗干净。
3、带油污玻璃器皿先将倒空的玻璃器皿用10%的氢氧化钠浸泡半小时或放在5%的苏打液内煮两次，去掉油污，再用洗衣粉和热水刷洗。
4、带菌玻璃器皿经121℃高压蒸汽灭菌20min后，趁热倒去内容物，再用洗衣粉水刷洗干净，以水在内壁均匀分布成一薄层而不出现水珠为油垢除尽的标准。
经以上处理的玻璃器皿，可满足一般实验用。
少数实验对玻璃器皿清洁度要求较高，除用上述方法外，还应先用2%的HCl溶液浸泡数10min，再用自来水冲洗，蒸馏水淋洗2-3次。
有的尚需超纯水淋洗然后烘干备用。
二、玻璃器皿的包扎：吸管、平皿、瓶口等的包扎。
三、玻璃器皿的灭菌：分为两种，高压蒸汽灭菌法和干热灭菌法。
高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌中应用最为广泛的一种方法。
其原理是依据在一个密闭的高压蒸汽灭菌器中，水的沸点随水蒸汽压的增加而上升，加压是为了提高水蒸汽的温度。
把待灭菌物品放在灭菌器内，当灭菌器内压力为0.1MPa时，温度可达到121℃，一般维持20min，即可杀死一切微生物的营养体及其孢子。
一般的培养基、玻璃器皿、金属用具、实验服、传染性标本等均可用这种方法有效灭菌。
灭菌的温度及时间视灭菌物品中的微生物种类及数量而定。
干热灭菌法也叫热空气灭菌法。
实验室通常使用恒温控制的电热鼓风干燥箱作为干热灭菌器。
此法常用于空的玻璃器皿、金属器具和其他耐高温的物品（如陶瓷培养皿盖、石蜡油、碳酸钙）的灭菌。
其优点是灭菌器皿保持干燥。
但带有胶皮、塑料的物品、液体及固体培养基不能用此法。
无菌操作技术—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制
无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制实验目的：1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的灭菌方法—干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌3、掌握培养基的配制及不同类型灭菌器的使用。
一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制1、洗涤液的种类及配制（1）去垢剂溶液（常用洗涤液）。
生化去垢剂（detergent）A．中性去垢剂又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。
一般市售有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司班和吐温类：司班-80和吐温-20B．阴离子去垢剂：常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。
常用于核酸的提取。
C．阳离子去垢剂：如洁尔灭、新洁尔灭、消毒净等，消毒灭菌类居多。
D．天然表面活性剂：又称为生物表面活性剂，如各种树胶（阿拉伯胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、多糖类（如环糊精）等。
E．两性表面活性剂：在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质，起泡性好，去污力也强；在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征，其杀菌性很强。
（2）铬酸洗液：[又称重铬酸钾（或钠）——浓硫酸洗涤液，简称洗液]广泛用于玻璃仪器的洗涤。
其配制方法如下：①称取5g重铬酸钾(或钠)粉末放入250ml烧杯中，加5ml水，尽量使其溶解。
然后边搅拌，边缓缓注入浓H2SO4l00ml，待洗液温度冷却至40℃以下，将其转移到具玻塞的细颈干燥的试剂瓶内贮存备用。
②称取10g重铬酸钾粉末置于500ml烧杯中，加水20ml，尽量使其溶解。
然后慢慢注入浓H2SO4180ml，随加随搅拌。
冷却后贮于具玻塞的细颈试剂瓶中备用。
（3）浓HCl（工业用）常用于洗去水垢或某些无机盐沉淀。
（4）浓HNO3（常用于洗涤除去金属离子）。
（5）1mol/LKOH溶液。
（6）8mol/L尿素洗涤液（PH1.0）适用于洗涤盛蛋白质溶液及血样的器皿。
（7）10-3mol/LEDTA溶液用于除去塑料容器内壁污染的金属离子。
无菌操作技术—用品的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制
无菌操作技术—用品的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制无菌操作技术是实验室中非常重要的技术，可以保证实验结果的准确性和可靠性。
以下是用品的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制的一些建议和步骤：用品的清洗在进行无菌实验前，确保所有用品是干净的，没有任何污染物。
1. 使用洗碗液和温水彻底清洗所有用品，包括培养皿、试管、移液器等。
2. 用专用的刷子和洗涤剂清洗玻璃器皿，保证器皿内外表面完全清洁。
3. 用去离子水或者超纯水冲洗所有用品，以除去洗涤剂和其他杂质。
4. 沥干并摆放用品在干净的工作台上。
用品的包扎包扎是为了防止用品在操作过程中受到外界污染。
1. 在无菌环境下，将用品放在无菌纸上。
2. 使用无菌纸或箔纸将用品包裹好，封口处用无菌胶带固定。
3. 将包扎好的用品放入无菌中，并密封。
用品的灭菌灭菌是为了杀死用品上的细菌和其他微生物。
1. 使用常见的灭菌方法包括高温干热灭菌和湿热灭菌。
2. 对于耐高温的器皿，如玻璃器皿，可以选择高温干热灭菌。
将器皿放入预热至160°C的高温灭菌器中，保持30分钟。
3. 对于耐湿热的器皿，如塑料器皿，可以选择湿热灭菌。
将器皿放入预热至121°C的压力灭菌器中，保持15-20分钟。
培养基的配制培养基是进行微生物培养的基础，配制过程需要严谨操作。
1. 根据需要的培养基种类和配方，准备所需的培养基成分。
2. 使用称量器具准确称量所需成分，并将其加入无菌中。
3. 向无菌中添加适量的热蒸馏水，并搅拌混合，直到成分溶解彻底。
4. 根据需要调整pH值，并使用pH计进行测量和校准。
5. 分装培养基到无菌培养皿或试管中。
6. 对于固体培养基，添加适量琼脂糖，并将其加热至混合溶解。
然后将培养皿冷却，直到琼脂糖凝固。
以上是无菌操作技术中用品的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制的基本步骤和建议。
通过严格遵循这些步骤，可以提高实验的可靠性，并避免实验结果的污染和误差。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
无菌操作技术—器具的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制
无菌操作技术—器具的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制无菌操作技术是在实验室中进行微生物学实验时必不可少的操作技术之一。
它的目的是确保实验过程不受外界微生物的污染，保证实验结果的准确性和可靠性。
本文将介绍无菌操作技术中器具的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制等关键步骤。
器具的清洗在进行实验前，必须对所有使用的器具进行彻底的清洗。
清洗的目的是去除器具表面的污物和微生物，减少污染的可能性。
清洗器具的基本步骤包括：1. 使用肥皂水或清洁剂将器具浸泡并搓洗，彻底清洗器具表面。
2. 用去离子水或蒸馏水冲洗器具，确保彻底去除清洁剂残留物。
3. 使用含有消毒剂的溶液浸泡器具，有效杀灭残留的微生物。
包扎器具清洗后的器具应立即包扎以保持无菌状态。
包扎的目的是防止任何微生物重新污染器具表面。
包扎器具的基本步骤包括：1. 使用无菌纱布或绷带将器具进行包裹，确保器具表面完全覆盖。
2. 使用无菌胶带或无菌绷带将包扎好的器具固定住，防止松动或破损。
灭菌器具灭菌是无菌操作技术中非常重要的一步，它可以有效杀灭器具表面残留的微生物。
常用的灭菌方法包括：1. 蒸汽灭菌：使用高温蒸汽对器具进行灭菌，常用于玻璃器具和金属器具。
2. 高压灭菌：将器具置于高压下，常用于塑料器具和液体培养基。
3. 过滤灭菌：使用微孔滤膜对液体培养基进行过滤，去除其中的微生物。
培养基的配制在无菌操作技术中，培养基的配制也是非常重要的一步。
正确的培养基配制可以提供适合微生物生长和繁殖的营养物质。
培养基的基本配制步骤包括：1. 根据实验需要选择合适的培养基类型，如富含营养物质的琼脂培养基或液体培养基。
2. 按照培养基配方中的比例准确称量所需的成分，将它们加入适量的水中。
3. 调节pH值，常用的方法是使用 pH计和酸碱试剂来调节。
4. 将配制好的培养基装入无菌培养皿或试管中，并进行灭菌处理。
以上就是无菌操作技术中器具的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制的基本步骤。
通过严格遵循这些步骤，可以有效地保证实验过程的无菌性，提高实验结果的可靠性。
实验4 培养基的制备
4）鉴别培养基(differential medium) 用于鉴别不同类型微生物的培养基
特定的化学反应，产生明显的特征性变化(大肠杆菌在伊红美蓝固体 培养基上呈现金属光泽)
根据这种特征性变化,可将该种微生物与其他微生物区分开来。 5）选择培养基(selective medium)
用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基 根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不 同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要 的微生物的生长，有利于所需微生物的生长(如用于沙门氏菌培养的 四硫磺酸钠培养基,其可抑制非沙门氏菌的细菌生长)。
2、接种操作
无菌操作： 火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行
任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素： 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理
培养基配制原理
依据不同的微生物对生方法
（1）、选择适宜的营养物质
（2）、营养物的浓度及配比合适
（3）、物理、化学条件适宜(如酸碱度）
在一定条件下含有某种微生物生长繁殖所需的所有营养物质的培养基
一、无菌技术
微生物无处不在，在微生物的操作和研究中无菌 操作的概念必须贯串始终，因此：
1。用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； 2。在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染；
二 培养基
培养基（medium）是人工配制的，适合微生物生长繁殖或 产生代谢产物的营养基质。
周四
营养琼脂：3000ml 6组，（每组500ml） 真菌培养基（沙保劳氏）1200ml 2组 （500ml，700ml） 麦康凯培养基：1100ml 2组（500ml，600ml
培养基的配制和灭菌实验报告（共8篇）
培养基的配制和灭菌实验报告(共8篇) 培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）N源：包括无机氮和有机氮。
（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。
微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min 可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
培养基的制备实验报告材料
培养基的制备实验报告材料（文章一）：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)（一）、实验题目：培养基的制备与灭菌（二）、实验目的：（1）、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
（2）、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
（三）、实验器材：（1）、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
（2）、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
（四）、实验原理：（1）、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）N源：包括无机氮和有机氮。
（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。
微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
（2）、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
（3）、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
培养基的制备与灭菌
3. 马铃薯葡萄糖培养基（分离霉菌用） 制法：将马铃薯去皮，并切成薄片，立即放入水 中。否则马铃薯易氧化变黑。每200克马铃薯加 自来水1000 mL。80℃温水浸泡1小时，用纱布过 滤，然后稀释到1000 mL。15磅/寸2灭菌20分钟， 即为20%的马铃薯浸汁，贮存备用。 配制培养基时，按100 mL马铃薯浸汁加入葡萄糖 2克，琼脂1.5-2.0克。 4. 无菌水的制备 在每个250 mL锥形瓶内装99 mL自来水（或生理 盐水），在每个小试管内装4.5 mL自来水（或生 理盐水），塞上棉塞，15磅/寸2灭菌20分钟待用。
四、实验内容
（一）常用培养基的配制 1. 肉膏蛋白胨培养基（用于分离及培养细菌） 成分： 牛肉膏 0.5g； 蛋白胨 1.0g； 氯化钠 0.5g； 琼脂 1.5－2.0g； 水 100mL； PH 7.0－7.2 配制培养基的基本过程如下：
（1）称量：按照培养基配方，正确称取各种原料 放于烧杯中； （2）溶解：在上述烧杯中加入所需水量（根据实 验需要可加入蒸馏水或自来水）搅匀，加热溶解。 应在药品全部溶解后加水补足加热过程所蒸发的 水分。配制固体培养基时，应将已配好的液体培 养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼 脂完全融化，并不断搅拌，以免糊底烧焦，最后 加水补足失去的水分； （3）调PH值：用1N NaOH或1N HCl调PH至7.2，尽 量避免回调； （4）过滤：用过滤纸或多层纱布过滤，一般无特 殊要求，此步可以省去。
图2-3 摆斜面
（三）玻璃器皿的洗涤和包装 1. 玻璃器皿的洗刷：玻璃器皿的使用前必须洗刷干净。锥形 瓶、试管、培养皿等浸入水中洗涤，用毛刷和洗衣粉洗刷，然 后再用水冲净。移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗。洗刷干净 的玻璃仪器在电热干燥箱中烘干后备用。 2. 玻璃器皿灭菌前的准备工作： （1）培养皿又称双碟或平皿，由一底一盖组成一套。可以每 套单独使用纸包装，也可将几套一起用纸包装； （2）移液管应在距管口约1-2毫米处用铁丝塞入少许棉花（约 1-1.5厘米长）；以防止细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹 入管内。棉花要塞的松紧适宜。炊时以能通气但不使棉花滑下 为准。江塞好棉花的移液管尖端，放在4-5厘米宽的长条纸的 一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身， 右手将移液管压紧，在桌上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上 端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。
病原生物学实验1培养基的配制、器皿包扎、消毒灭菌
本次试验内容
1、配制牛肉膏蛋白胨培养基 2、配制固体、半固体、液体培养基 3、消毒灭菌 4、平皿、移液管、锥形瓶等的包扎
三、实验器材
量筒、小试管、中试管、试管帽、移液管、 500mL锥形瓶、玻璃棒、试管架、电炉、搪 瓷杯、滴管、NaOH溶液、HCl溶液、琼脂、 电子称
牛肉膏蛋白胨培养基的制备
❖ 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌基础培养基；
溶化
称好后，加蒸馏水稍微加热，使其溶化。 在分装半固体及斜面时，琼脂溶化过程中，应控
制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时， 需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦，配制培养基时， 不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基 中，影响细菌生长。 若定量时需补水
调pH、过滤、定容
先pH试纸测试一下培养液的原始酸碱度 根据情况用稀酸或者稀碱调节至所需的pH值 不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的
（3）紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室、 接种箱、手术室内的空气及物体表面的灭菌。
化学药品灭菌：
（1）是应用能抑制或杀死微生物的化学制剂进行消 毒灭菌的方法。作用效果与化学药品浓度的高低、 处理微生物的时间长短，微生物的种类以及微生 物所处的环境等有关。
（2）杀菌剂：能破坏细菌代谢机能并有致死作用的 化学药剂，如重金属离子等；
分装
A组： 配半固体培养基：取20mL稀释后培养液加0.5%琼
脂，加热溶解，分装至小试管中，每支4mL。补水 配液体培养基：取36mL稀释后培养液分装9支小试
管，每支4mL。（不加琼脂）
B组： 配斜面培养基：取30mL稀释后培养液加1.8%琼脂，
加热溶解，分装中试管中，每支6mL。补水 配液体培养基：取36mL稀释后培养液分装小试管9
培养基的配制与灭菌
课题四: 微生物的实验室培养基础知识（一）培养基培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型, 对营养物质的要求也各不相同, 加之实验和研究的目的不同, 所以培养基的种类很多, 使用的原料也各有差异, 但从营养角度分析, 培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外, 培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原及合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质, 是应用最广的凝固剂。
加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化, 于45℃以下凝固。
但多次反复融化, 其凝固性降低。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌, 以备纯培养用。
一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
（二）无菌技术1、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。
要获得微生物培养基, 必须避免杂菌污染, 因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。
主要包括以下几个方面2、对实验操作者的空间、操作者的衣著和手进行清洁和消毒。
3、将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
4、为避免周围环境中微生物的污染, 实验操作者应在酒精灯火焰附近进行。
5、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。
对培养基而言, 更是要进行严格的灭菌。
对培养基一般采取高压蒸汽灭菌, 一般培养基用1.05kg/cm2, 121.3℃条件下维持15～30min可达到灭菌目的。
消毒: 用物理或化学方法杀灭或消除传播媒介上的病原微生物, 使其达到无害化。
最初消毒是指环境消毒, 既无生命的物体表面。
目前一般认为也包括有生命集体的体表和浅表体腔。
通常认为, 在医用器材和医疗环境中消毒, 若能使人工污染的微生物减少原有微生物的99.90%, 就达到消毒要求, 对自然污染的微生物, 能杀灭或除去90.0%亦认为合格。
灭菌：用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物, 使其达到无菌。
这里所指的所有微生物, 包括致病的和非致病的微生物。
实验四 培养基的制备、器具包扎和
制备无菌水
无菌水为下一次微生物分离实验中所需要 的材料。 250mL三角烧瓶（装有玻璃珠），装自来 水45mL，试管中装9.0mL自来水，塞上棉 塞，包扎、灭菌备用。
物品的准备
三角烧瓶、试管、培养皿、吸管 等的包扎准备。
现场演示
思考题
固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问 题？ 培养基中加琼脂的作用是什么？ 干热灭菌、高压蒸彻底？
3 ．调 pH 在未调 pH 前，先用精密 pH 试纸测量培养基的原始 pH 值，如果 pH 偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入 1mol/L NaOH ，边加边搅 拌，并随时用 pH 试纸测其 pH 值，直至达到所需 pH 值。反之， 则用 1mol/L HCL 进行调节。注意 pH 值不要调过头，以避免回调， 否则，将会影响培养基内各离子的浓度。 4 ．过滤 趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。一般无特殊要求 的情况下，这一步可以省去。 5 ．分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装 过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起 污染。 （ 1 ）液体分装 分装高度以试管高度的 1/4 左右为宜。 （ 2 ）固体分装 分装试管，其装量不超过管高的 1/5 ，灭菌后制成 斜面，分装三角瓶的量不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
9 ．搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至 50 ℃ 左右，将试管棉塞端搁在玻棒上， 搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
10 ．无菌检查 将灭菌的培养基放入 37 ℃ 的温室中培养 24 — 48 小时，以检查灭菌是否彻底。
培养基的配制方法和步骤
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
（用于分离和培养细菌，是一种天 然培养基）配方如下：
实验四培养基的配制与灭菌
实验四培养基的配制与灭菌一、实验教学目标基本与要求1、明确培养基的配制原理。
2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。
3、熟悉准备微生物培养准备器械的方法二、实验内容1.无菌移液管、无菌平皿，准备无菌水、棉塞（试管和在三角瓶）；2.配制五类菌培养基(细菌、放线菌、霉菌、酵母培养基，双歧杆菌厌氧培养基)、分装。
(每人参与配制一种，但要求四种都会配)3.高压蒸汽灭菌，灭菌后摆放斜面；4.实验室常用消毒灭菌方法(示范)。
三、实验操作（一）吸管的包扎与灭菌：•在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。
•棉花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会下滑）；•然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与报纸约呈60º角，并将右端多余的报纸打一小结。
（二）培养皿的灭菌：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。
（三）无菌水的制备无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。
1.无菌分离试管水的准备●试管中装入4.5ml自来水，每组共准备12支，盖上塑料盖，包扎；2.三角瓶无菌水的准备●三角瓶装入99ml水，共装3瓶，封口膜包扎，外包牛皮纸或报纸。
3.无菌玻璃珠的准备●三角瓶中装入玻璃珠，封口膜包扎，外包牛皮纸或报纸。
（四）培养基的配制：1、标识同学们先将试管和三角瓶贴好标签。
注明培养基名称，组别，日期。
标签粘贴位置在离管口1/3管身处。
注意：标签用记号笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。
2、培养基的配制程序●称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。
●溶化：在搪瓷杯中加入所需水量自来水，玻棒搅匀，加热溶解。
●调pH值：用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。
●定容：将溶化的培养基倒入量筒中，补充水量至所需体积；●加琼脂溶化：加所需量的琼脂，加热融化并不断搅拌。
3、培养基配方●牛肉膏蛋白胨培养基(常用的细菌培养基)（1组）（p275）●牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl 0.5克，水100mL，琼脂2g ，pH7.2～7.4●高氏一号培养基(常用的放线菌培养基)（2组）（p275）●可溶性淀粉2.0g，KNO300.1g ，K2HPO40.05g，MgSO40.05g，NaCl 0.05g，FeSO40.001g，水100mL，琼脂2g ，pH7.2～7.4●马铃薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）琼脂培养基（3组）（p276）（用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基），其配方如下：去皮马铃薯20g （或鲜豆芽10g），葡萄糖5g，自来水100mL ，琼脂2g ，pH 自然。
无菌操作技术—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制
无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制实验目的：1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的灭菌方法—干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌3、掌握培养基的配制及不同类型灭菌器的使用。
一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制1、洗涤液的种类及配制（1）去垢剂溶液（常用洗涤液）。
生化去垢剂（detergent）A．中性去垢剂又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。
一般市售有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司班和吐温类：司班-80和吐温-20B．阴离子去垢剂：常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。
常用于核酸的提取。
C．阳离子去垢剂：如洁尔灭、新洁尔灭、消毒净等，消毒灭菌类居多。
D．天然表面活性剂：又称为生物表面活性剂，如各种树胶（阿拉伯胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、多糖类（如环糊精）等。
E．两性表面活性剂：在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质，起泡性好，去污力也强；在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征，其杀菌性很强。
（2）铬酸洗液：[又称重铬酸钾（或钠）——浓硫酸洗涤液，简称洗液]广泛用于玻璃仪器的洗涤。
其配制方法如下：①称取5g重铬酸钾(或钠)粉末放入250ml烧杯中，加5ml水，尽量使其溶解。
然后边搅拌，边缓缓注入浓H2SO4l00ml，待洗液温度冷却至40℃以下，将其转移到具玻塞的细颈干燥的试剂瓶内贮存备用。
②称取10g重铬酸钾粉末置于500ml烧杯中，加水20ml，尽量使其溶解。
然后慢慢注入浓H2SO4180ml，随加随搅拌。
冷却后贮于具玻塞的细颈试剂瓶中备用。
（3）浓HCl（工业用）常用于洗去水垢或某些无机盐沉淀。
（4）浓HNO3（常用于洗涤除去金属离子）。
（5）1mol/LKOH溶液。
（6）8mol/L尿素洗涤液（PH1.0）适用于洗涤盛蛋白质溶液及血样的器皿。
（7）10-3mol/LEDTA溶液用于除去塑料容器内壁污染的金属离子。
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6 ．加塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以防止外 界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 7 ．包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以 防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注 明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻 绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名 称、组别、日期。 8 ．灭菌 一般培养基是在 1.0 5 ㎏ / ㎝ 2 （ 15 磅 / 英寸 2 ）， 121.3 ℃ ， 15-30 分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入 冰箱内暂存。
3 ．调 pH 在未调 pH 前，先用精密 pH 试纸测量培养基的原始 pH 值，如果 pH 偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入 1mol/L NaOH ，边加边搅 拌，并随时用 pH 试纸测其 pH 值，直至达到所需 pH 值。反之， 则用 1mol/L HCL 进行调节。注意 pH 值不要调过头，以避免回调， 否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖； 可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、
FeSO4•7H2O等。
高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、紫外线杀菌灯。 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试
纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠 的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、 吸管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
实验四
培养基的制备、器具包 扎和灭菌
目的要求
了解培养基的配制原理和方法，掌握其 配制过程。
了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和 加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
熟悉分离、培养微生物前的有关准备工 作及操作方法。
实验原理
培养基
据组成成分可分为:
1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物 质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
4 ．过滤 趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。一般无特殊要求
的情况下，这一步可以省去。
5 ．分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装
过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起
污染。
（ 1 ）液体分装 分装高度以试管高度的 1/4 左右为宜。 （ 2 ）固体分装 分装试管，其装量不超过管高的 1/5 ，灭菌后制成 斜面，分装三角瓶的量不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开 紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射 紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强 灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透 力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫 外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。
化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲 醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、 漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是 杀菌剂，有的是抑菌剂。
3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固 剂而成的半固体状培养基。
常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
消毒：使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的 方法。
灭菌：采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方 法。
干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器
加压蒸汽灭菌法其步骤如下： 1.灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 2.接通电源，进行加热 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大 气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到 0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气 阀。 4.当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为1210C， 维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸 等物时，应适当降低压力，延长时间。 5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开 排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。
剧用途可分为 1.基础培养基：能满足各种微生物的营养需求 ２.加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质， 使其快速生长，便于分离 3.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目 标微生物得到富集，便于分离 4.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。
从培养基的物理状态可分为
1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂 的固体状态的培养基或农副产品培养基。
实验步骤
培养基的配制 分离培养微生物常用器皿的准备 方法和步骤
1 ．称量 按培养基配方（见附录）比例依次准确地称取试剂、药品等 放入烧 杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水 溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时 如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白 胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。称药品时严防药品混杂，一把 牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另 一药品，瓶盖也不要盖错。 2 ．溶化 在装有试剂和药品的烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀 ，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到 所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药 品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊 底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。
间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天 蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。 在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基） 放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以 使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营 养体，以便下次蒸煮时杀灭。
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、 血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。