病毒样本分析实例

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病毒样本分析

4、请给出一个计算机病毒的样本，并剖析其工作原理。

没有计算机病毒样本数据的同学，可以求助于老师。

（20分）
举一个“hello word”例子。

下面是一个简单的DOS批处理病毒源程序autoexec.bat（假设从A盘启动）：程序语句程序注解
IF exist c:\\autoexec.bat goto Virus REM 首先检查时机
Goto No_Virus REM 若时机不成熟则潜伏
:Virus REM 时机成熟时（子程序）
c: REM 转到C盘
ren autoexec.bat auto.bat REM 将正常文件改名，准备冒名顶替
copy a:\\autoexec.bat c:\\ REM 自我复制，开始繁殖
echo Hello Word! REM 病毒发作，表现症状
:No_Virus REM 正常程序入口
a: REM 转回A盘
/auto REM 执行正常程序
pause REM 暂停等待按任意键继续
这个程序非常简单，但却包含了计算机病毒的典型结构，引导部分、传染部分、激发部分等五脏俱全。

其触发机制是：C盘存在autoexec.bat文件，当我们用带有此病毒的启动软盘启动微机时，若C盘也有autoexec.bat文件，则病毒将C盘原autoexec.bat文件改名为auto.bat，把自身复制到C盘并显示“Hello Word！”。

如果按以前的分类，它可以算是个良性病毒（但再良的病毒都要占用系统资源）。

当然它还无加密和没有严重破坏系统的行为，但要是把echo Hello Word！改为format c:或deltree c:/y等那就……糟了~~~。

美国蝙蝠新冠实验报告

一、实验背景新冠病毒（SARS-CoV-2）自2019年底爆发以来，迅速蔓延全球，给人类健康和社会经济造成了严重影响。

蝙蝠作为冠状病毒的自然宿主，在新冠病毒的传播过程中扮演了重要角色。

为了深入了解新冠病毒在蝙蝠中的传播途径和变异机制，本研究对蝙蝠进行了新冠实验研究。

二、实验目的1. 了解新冠病毒在蝙蝠中的传播途径；2. 探究新冠病毒在蝙蝠中的变异机制；3. 为防控新冠病毒传播提供理论依据。

三、实验材料1. 蝙蝠样本：实验选用我国云南省某蝙蝠栖息地捕获的蝙蝠，共50只，分为5组，每组10只；2. 新冠病毒株：选用我国已分离的新冠病毒株，经过鉴定为SARS-CoV-2；3. 实验仪器：PCR仪、荧光显微镜、实时荧光定量PCR试剂盒、病毒分离培养试剂等。

四、实验方法1. 蝙蝠样本处理：将捕获的蝙蝠进行编号，采集其血液、唾液、粪便等样本，并进行病毒分离培养；2. 病毒分离培养：将蝙蝠样本进行病毒分离培养，观察病毒生长情况，并提取病毒核酸；3. 实时荧光定量PCR检测：采用实时荧光定量PCR技术检测蝙蝠样本中的新冠病毒核酸，以确定蝙蝠感染情况；4. 病毒变异分析：对分离培养的病毒进行基因测序，分析病毒变异情况；5. 传播途径研究：通过观察蝙蝠间接触、粪便、唾液等途径，探究新冠病毒在蝙蝠中的传播途径。

五、实验结果1. 蝙蝠感染情况：实验结果显示，50只蝙蝠中有30只感染了新冠病毒，感染率为60%；2. 病毒分离培养：成功分离培养出新冠病毒，观察病毒生长情况，发现病毒在蝙蝠细胞中繁殖能力强；3. 实时荧光定量PCR检测：检测结果显示，感染蝙蝠的血液、唾液、粪便等样本中均存在新冠病毒核酸；4. 病毒变异分析：通过基因测序，发现分离培养的病毒与我国已分离的新冠病毒株存在一定差异，表明病毒在蝙蝠中发生了变异；5. 传播途径研究：观察发现，新冠病毒在蝙蝠中的传播途径主要有以下几种：a. 直接接触：蝙蝠间通过直接接触传播病毒；b. 呼吸道传播：蝙蝠通过呼吸道排放病毒，导致病毒在空气中传播；c. 粪便、唾液传播：蝙蝠的粪便、唾液中含有病毒，通过污染环境或接触其他动物传播病毒。

实验室里的疾病侦破：传染病诊断案例(2)

实验室里的疾病侦破：传染病诊断案例在实验室里，我每天都要面对各种各样的疾病样本，通过仔细观察和分析，帮助医生和研究人员找出病因，为患者提供及时的治疗。

今天，我想和大家分享一个传染病诊断的案例，让我们一起来感受一下这个充满挑战和乐趣的过程。

那天，实验室里送来了一份特殊的样本，是一位年轻的患者，他出现了发热、咳嗽、乏力等症状。

从症状上看，这位患者可能患有一种传染病。

为了确诊，我们需要对样本进行详细的检测。

我们对患者的血液进行了检测，发现了一些异常的白细胞，这表明患者的身体正在与某种病原体作斗争。

接着，我们提取了患者的呼吸道分泌物，对其进行了病毒核酸检测。

结果显示，患者体内存在一种未知病毒。

为了进一步确认这种病毒的身份，我们进行了血清学检测。

通过分析患者的血清，我们发现患者体内产生了针对这种病毒的抗体。

这表明，患者曾经感染过这种病毒，并且已经康复。

那么，这种病毒究竟是什么呢？为了找到答案，我们查阅了大量文献，并与同行进行了交流。

最终，我们确定这种病毒是一种新型的流感病毒，它与已知的流感病毒有所不同。

这种病毒具有较强的传染性，而且还没有有效的疫苗。

得知这个消息后，我们立即将结果报告给了相关部门，并提出了防控建议。

为了防止病毒传播，医院采取了严格的隔离措施，并对患者进行了抗病毒治疗。

同时，政府也开始着手进行疫情防控工作，提醒民众加强自我保护。

这只是我们工作中的一个缩影。

在实验室里，我们每天都要面对各种各样的疾病样本，通过细致入微的观察和分析，为患者和医疗机构提供准确的治疗方案。

我们深知，每一份报告都关系到患者的生命安全，我们不能有丝毫的马虎。

在实验室的显微镜下，我凝视着那些微小的细胞和病毒，它们如同迷宫中的线索，引导着我解开一个个健康危机的谜团。

每一个样本都承载着一段故事，每一个疾病的侦破都是一场智与勇的较量。

今天，我想讲述的是关于传染病诊断的故事，这是一个复杂而扣人心弦的过程。

那是一个多云的早晨，实验室接收到了一份紧急样本，来自一位出现发热、咳嗽和乏力等症状的年轻患者。

木马病毒的行为分析样本

西安翻译学院XI’AN FANYI UNIVERSITY毕业论文题目: 网络木马病毒的行为分析专业: 计算机网络技术班级:姓名: 彭蕊蕊指导教师: 朱滨忠5月目录学号:院系: 诒华1 论文研究的背景及意义........................... 错误!未定义书签。

2 木马病毒的概况................................. 错误!未定义书签。

2.1 木马病毒的定义............................ 错误!未定义书签。

2.2 木马病毒的概述............................ 错误!未定义书签。

2.3 木马病毒的结构............................ 错误!未定义书签。

2.4 木马病毒的基本特征........................ 错误!未定义书签。

2.5木马病毒的分类............................. 错误!未定义书签。

2.6木马病毒的危害............................. 错误!未定义书签。

3 木马程序病毒的工作机制......................... 错误!未定义书签。

3.1 木马程序的工作原理........................ 错误!未定义书签。

3.2 木马程序的工作方式........................ 错误!未定义书签。

4 木马病毒的传播技术............................. 错误!未定义书签。

4.1 木马病的毒植入传播技术.................... 错误!未定义书签。

4.2 木马病毒的加载技术........................ 错误!未定义书签。

4.3 木马病毒的隐藏技术........................ 错误!未定义书签。

传染病阳性样本分析

传染病阳性样本分析传染病阳性样本分析的连贯性探讨1. 样本采集与运送的关键性样本采集是传染病阳性样本分析的首要步骤，其质量直接关系到后续检测的准确性。

在这一阶段，医护人员需根据患者的临床症状和病史，选择合适的采集时间和采集方法。

例如，对于疑似呼吸道传染病的患者，我们通常会采集咽拭子或支气管分泌物；而对于疑似血液传染病的患者，则需要采集血液样本。

采集完成后，样本的运送同样关键。

样本需要在适当的温度和湿度条件下，尽快送达到实验室，以保持样本的活性和完整性。

运送过程中，还需要做好样本的标识和记录，确保样本不会发生混淆或丢失。

2. 实验室前期处理的必要性实验室收到样本后，要进行前期处理。

这包括对样本进行过滤、离心、稀释等操作，以去除样本中的杂质和干扰物质，准备好后续的检测工作。

在这一步骤中，实验室技术人员需要严格遵守操作规程，确保样本的处理质量。

3. 实验室检测的精确性与多样性在前期处理完成后，我们进入实验室检测环节。

这一环节包括一系列的生物学和化学检测，如免疫荧光检测、酶联免疫吸附试验（ELISA）、聚合酶链反应（PCR）、实时定量PCR（qPCR）等。

这些检测方法可以精确地识别和定量样本中的病原体。

例如，以PCR检测为例，技术人员需要设计特异性的引物，选择合适的扩增程序，以放大病原体的特定基因片段。

通过电泳分析和自动测序仪，可以观察到扩增产物的大小，从而判断样本中是否存在目标病原体。

4. 结果解释与分析的深度与广度在得到实验室检测结果后，我们需要对这些结果进行深入的解释和分析。

这不仅涉及到对病原体的识别，还包括对病原体的生物学特性、致病机制、传播途径等方面的了解。

例如，当我们检测出某种病毒时，我们需要了解该病毒的感染途径，如空气传播、飞沫传播、血液传播等。

我们还需要了解该病毒的治疗方法、预防措施、疫苗接种情况等，以便为临床医生提供全面的治疗建议。

我们还需与临床医生进行有效的沟通，确保他们能够理解和应用报告中的信息。

熊猫烧香病毒样本分析

熊猫烧⾹病毒样本分析前⾔最近学校通知不开学，⽹课也不想上。

学习逆向也有段时间了，就想着找点东西练⼀下⽔平不⾼。

找了个病毒分析⼀⽐较经典的病毒分析。

我看⽹上有很多关于熊猫烧⾹病毒的分析，但都是侧重于对病毒功能以及影响的总结，具体分析⽅法并未提及。

本⽂主要基本信息动态分析分析⼯具以及环境OD PEIDVMware xp 虚拟机详细分析过程与思路查看⽂件基本信息在虚拟机中⽤PEID 打开病毒样本⽂件发现其⽆壳并且是Delphi 编写的，Delphi 编译器编译的程序有⼏个特点。

第⼀：其函数默认调⽤约定为Register ，特点为函数参数是通过寄存器传⼊的。

第⼆：⼀般Delphi 其字符串存储地址的负偏移⼀个dword长度处，存放字符串的长度。

打开OD 载⼊病毒样本⽂件来到程序⼊⼝点后我们进⾏进⼀步分析，我们看到⼊⼝点处有函数① 和函数②，其中函数②连续调⽤了三次。

我们F8向下执⾏，并分别进⼊两个函数分析其功能。

进⼊函数①我们发现其主要功能就是调⽤GetModuleHandleA()获得程序基地址（及程序实例句柄）向下继续分析函数②，在调⽤函数②时我们发现其传⼊了两个参数，我们在数据窗⼝中分析发现参数有⼀个为⼀串字符串：“ ***武*汉*男*⽣*感*染*下*载*者*** ". 我们F7进⼊函数内部分析发现其就时将eax 参数地址下的字符串进⾏复制侧重于对熊猫烧⾹病毒逆向分析过程中的思路和⽅法的分享所以我们知道了这三个参数是字符串复制函数，F8向下步过这些函数后。

他们把字符串都复制到了⼀块连续的内存中。

我们可以在数据窗⼝中观察这些字符的内容。

我们接着往下分析，发现两段相同的代码段，只是参数不同。

也就是当程序执⾏完函数0x405360和函数0x404018后如果je不成⽴则结束进程（猜测应该为病毒程序的⾃效验部分）。

我们分别进⼊连个函数分析。

我们先分析函数0x405360，函数的两个参数分别指向两个字符串⼀个是“xboy”，另⼀个如下。

新冠抗体样本处理实验报告

新冠抗体样本处理实验报告
根据实验要求，本次实验的目的是对新冠抗体样本进行处理，以便进
行检测。

实验中，我们从病毒感染患者的血液样本中分离出抗体，并通过
一系列化学方法对其进行处理，使得抗体的信号可以被有效地检测出来。

首先，我们使用血清分离机将血液样本进行离心分离，将血清和血细
胞分离开来。

接着，我们通过酸性洗涤法将红细胞残留物进行去除，获得
比较干净的血清样本。

随后，我们对血清样本进行预处理，以便进行后续的抗体检测。

我们
使用乙酰化法对血清样本进行预处理，目的是去除一些可能会对后续多肽
固定和抗体检测造成干扰的其他蛋白质和杂质。

通过此步骤的处理，我们
可以大大提高后续检测的准确性和灵敏度。

接下来，我们使用肽固定剂将血清样本中的抗体与固定在试管中的肽
结合起来，形成固定复合物。

然后，我们通过酶联免疫吸附实验（ELISA）的方法进行检测，以便定量地测量抗体的信号。

最后，我们通过数据分析的方法对实验结果进行处理，统计样本的抗
体含量以及抗体阳性率等相关数据。

我们对数据进行成功率、阳性率以及
检测灵敏度等指标的评估，以便能够判断样本处理效果的好坏。

综上所述，本次实验是一个比较复杂的过程，但各个步骤都十分关键，且需要严格的实验操作和控制。

通过本次实验，我们获得了新冠抗体样本
的相关数据，为新冠病毒的研究和防控提供了重要的参考依据。

病毒分析报告

病毒分析报告简介本文档是一份病毒分析报告，旨在通过对病毒样本进行深入分析，探索其特征、行为和危害，以提供对抗该病毒的有效手段。

本次分析的病毒样本是经过样本收集系统捕获并提供的未知病毒，作者将对其进行逆向工程和恶意代码分析，以评估其威胁程度和传播方式。

目录1.识别与分类2.恶意行为分析3.传播方式分析4.风险评估5.防护建议1. 识别与分类经过初步分析，本病毒样本可以被确定为一种新型的恶意软件。

通过对其二进制代码的静态和动态分析，发现该病毒拥有隐藏、加密、反调试等多种特征，具有一定的免疫性。

其主要特点包括： - 自复制能力：病毒通过在系统中创建副本进行自我复制，从而获得更大的传播范围。

- 加密与隐藏：病毒使用加密和隐藏技术，使其自身的代码难以被反汇编和分析。

- 远程控制：病毒通过建立与远程命令控制服务器的通信渠道，实现对感染系统的远程控制能力。

2. 恶意行为分析通过动态分析，我们发现该病毒具有以下恶意行为： - 数据窃取：病毒能够窃取用户的敏感数据，如账号密码、信用卡信息等，并将其发送到远程服务器。

- 后门功能：病毒在感染系统后，会植入后门程序，以便黑客能够远程访问受感染的系统。

- 信息篡改：病毒有能力修改用户主机中的重要文件，例如操作系统关键文件、应用程序以及安全软件等，进而影响系统的稳定性和安全性。

3. 传播方式分析通过对病毒样本的分析，我们发现其主要的传播途径为： - 邮件附件：病毒可能作为恶意附件随电子邮件发送给用户，并诱使用户打开附件。

- 感染可执行文件：病毒可以通过感染可执行文件的方式传播，一旦用户执行了受感染的文件，病毒即可在用户系统中运行并传播。

- 漏洞利用：病毒可能利用系统或应用程序的漏洞，通过网络传播到其他系统中。

4. 风险评估根据对该病毒的分析，我们认为其具有较高的威胁程度和危害性。

病毒采用多种技术手段，如加密、隐藏和远程控制等，可以绕过常见的防护措施，对系统和用户数据造成严重威胁。

典型病毒分析报告

典型病毒分析报告第一篇：典型病毒分析报告典型病毒的分析班级：姓名：学号：一、计算机病毒1.1、简介计算机病毒是一个程序，一段可执行码。

就像生物病毒一样，计算机病毒有独特的复制能力。

计算机病毒可以很快地蔓延，又常常难以根除。

它们能把自身附着在各种类型的文件上。

当文件被复制或从一个用户传送到另一个用户时，它们就随同文件一起蔓延开来。

除复制能力外，某些计算机病毒还有其他一些共同特性：一个被污染的程序能够传送病毒载体。

当你看到病毒载体似乎仅仅表现在文字和图像上时，它们可能也已毁坏了文件、再格式化了你的硬盘驱动或引发了其他类型的灾害。

若是病毒并不寄生于一个污染程序，它仍然能通过占据存储空间给你带来麻烦，并降低你的计算机的全部性能。

可以从不同角度给出计算机病毒的定义。

一种定义是通过磁盘、磁带和网络等作为媒介传播扩散，能“传染”其他程序的程序。

另一种是能够实现自身复制且借助一定的载体存在的具有潜伏性、传染性和破坏性的程序。

还有的定义是一种人为制造的程序，它通过不同的途径潜伏或寄生在存储媒体（如磁盘、内存）或程序里。

当某种条件或时机成熟时，它会自生复制并传播，使计算机的资源受到不同程序的破坏等。

这些说法在某种意义上借用了生物学病毒的概念，计算机病毒同生物病毒所相似之处是能够侵入计算机系统和网络，危害正常工作的“病原体”。

它能够对计算机系统进行各种破坏，同时能够自我复制，具有传染性。

所以，计算机病毒就是能够通过某种途径潜伏在计算机存储介质（或程序）里，当达到某种条件时即被激活的具有对计算机资源进行破坏作用的一组程序或指令集合。

1.2、计算机病毒的引导过程一般包括以下三方面。

（1）驻留内存病毒若要发挥其破坏作用，一般要驻留内存。

为此就必须开辟所用内存空间或覆盖系统占用的部分内存空间。

有的病毒不驻留内存。

（2）窃取系统控制权在病毒程序驻留内存后，必须使有关部分取代或扩充系统的原有功能，并窃取系统的控制权。

此后病毒程序依据其设计思想，隐蔽自己，等待时机，在条件成熟时，再进行传染和破坏。

211160343_牛轮状病毒和志贺菌阳性犊牛腹泻粪便样本中肠道菌群的分析

畜牧兽医学报 2023,54(4):1624-1631A c t aV e t e ri n a r i a e tZ o o t e c h n i c aS i n i c a d o i :10.11843/j.i s s n .0366-6964.2023.04.026开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):牛轮状病毒和志贺菌阳性犊牛腹泻粪便样本中肠道菌群的分析陈烨馨1,谢梦圆1,李文豪1,张志丹1,王晓丹1,陈柯佳1,刘平平1,周伟光1,王建龙2*,徐晓静1*(1.内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010010;2.内蒙古自治区动物疫病预防控制中心,呼和浩特010010)摘要:犊牛感染不同病原所引发的腹泻可导致肠道菌群结构特征的改变㊂为研究其肠道菌群的多样性,从内蒙古西部地区选取3个规模化养牛场采集新鲜粪便样本38份,其中腹泻粪样30份,健康粪样8份㊂采用P C R 方法进行腹泻相关病原检测后分为3组,分别为健康组(H C )㊁牛轮状病毒(b o v i n e r o t a v i r u s ,B R V )感染腹泻组(D C _a)和埃希菌属-志贺菌感染腹泻组(D C _b )㊂提取总D N A ,采用通用引物对细菌16S r D N A 基因的高可变V 3-V 4区进行P C R 扩增,采用I l l u m i n aN o v a S e q 平台进行测序,对测序结果进行生物信息学分析㊂结果发现,α多样性指数表明腹泻犊牛与健康犊牛肠道微生物多样性存在差异且D C _b 组α多样性显著低于其余两组(P <0.05);在门水平上,3组的优势菌门均为厚壁菌门㊁拟杆菌门㊁放线菌门和变形菌门,但其相对丰度差异显著,D C _b 组厚壁菌门显著降低(P <0.05),放线菌门显著增加(P <0.05);在属水平上,3组的优势菌属不同且相对丰度也有差异㊂通过P I C R U S t 2功能预测分析表明,与H C 组相比,D C _a 组在甘露糖降解㊁半乳糖降解㊁糖和维生素的生物合成等相关代谢通路显著下降;D C _b 组在己糖醇的降解和L -色氨酸生物合成等相关代谢通路显著富集㊂本研究表明,健康犊牛与腹泻犊牛肠道菌群中厚壁菌门和放线菌门差异显著(P <0.05);变形菌门中的致病菌不仅会引发犊牛腹泻,还会导致肠道的炎症反应;瘤胃球菌科有多种功能且难以通过扩增子测序数据推断不同属的功能差异;腹泻与能量及营养代谢和氨基酸代谢密切相关㊂关键词:犊牛腹泻;肠道菌群;多样性;16S r D N A 测序中图分类号:S 852.61 文献标志码:A 文章编号:0366-6964(2023)04-1624-08收稿日期:2022-03-14基金项目:内蒙古自治区科技重大专项牛腹泻疾病防控关键技术研发与标准化操作规程示范推广 (2020Z D 0006)作者简介:陈烨馨(1992-),女,内蒙古巴彦淖尔人,硕士生,主要从事动物疫病防控研究,E -m a i l :464678221@q q.c o m *通信作者:徐晓静,主要从事动物组织胚胎发育及疫病防控研究,E -m a i l :x u x i a o j i n g72@s i n a .c o m ;王建龙,主要从事动物疫病防控研究,E -m a i l :n m g x m c w jl @163.c o m A n a l y s i s o f I n t e s t i n a l F l o r a i nF a e c a l S a m pl e s f r o m R o t a v i r u s a n d S h i ge l l a P o s i t i v eC a l v e sw i t hD i a r r h o e a C H E N Y e x i n 1,X I E M e n g y u a n 1,L IW e n h a o 1,Z H A N GZ h i d a n 1,WA N G X i a o d a n 1,C H E N K e j i a 1,L I U P i n g p i n g 1,Z H O U W e i g u a n g 1,WA N GJ i a n l o n g 2*,X U X i a o j i n g1*(1.C o l l e g e o f V e t e r i n a r y M e d i c i n e ,I n n e rM o n g o l i aA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,H o h h o t 010010,C h i n a ;2.I n n e rM o n go l i aA n i m a lD i s e a s eC o n t r o l C e n t e r ,H o h h o t 010010,C h i n a )A b s t r a c t :D i a r r h e a c a u s e d b y d i f f e r e n t p a t h o g e n s c a n l e a d t o c h a n ge s i n t h e s t r u c t u r a l c h a r a c t e r i s -t i c s of i n t e s t i n a l f l o r a o f c a l v e s .I no r d e r t o s t u d y t h e d i v e r s i t y o f i n t e s t i n a l f l o r a ,38f r e s h f a e c a l s a m p l e sw e r e c o l l e c t e d f r o mt h r e e l a rg e -s c a l e c a t t l e f a r m s i nw e s t e r nI n n e rM o n g o l i a ,i n c l u d i n gCopyright ©博看网. All Rights Reserved.4期陈烨馨等:牛轮状病毒和志贺菌阳性犊牛腹泻粪便样本中肠道菌群的分析30d i a r r h o e af a e c a ls a m p l e sa n d8h e a l t h y f a e c a ls a m p l e s.T h ed i a r r h o e a-a s s o c i a t e d p a t h o g e n s w e r et e s t e db y P C Ra n dt h e nt h es a m p l e s w e r ed i v i d e di n t ot h r e e g r o u p s,t h eh e a l t h yg r o u p (H C),t h e b o v i n e r o t a v i r u s(B R V)-i n f e c t e d d i a r r h o e a g r o u p(D C_a)a n d t h e E s c h e r i c h i a-S h i g e l-l a i n f e c t i o nd i a r r h o e a g r o u p(D C_b).T o t a l D N Aw a s e x t r a c t e d a n d t h e h i g h l y v a r i a b l eV3-V4r e-g i o no f t h e b a c t e r i a l16S r D N A g e n ew a s a m p l i f i e db y P C Ru s i n g u n i v e r s a l p r i m e r s,s e q u e n c e db y t h e I l l u m i n aN o v a S e qp l a t f o r ma n d t h e s e q u e n c i n g r e s u l t sw e r e a n a l y z e db y b i o i n f o r m a t i c s.T h e r e s u l t so fαd i v e r s i t y i n d e xs h o w e d t h a t t h e r ew a s as i g n i f i c a n td i f f e r e n c e i n i n t e s t i n a lm i c r o b i a l d i v e r s i t y b e t w e e nd i a r r h e a a n dh e a l t h y c a l v e s,a n d t h eαd i v e r s i t y i n d e xo fD C_b g r o u p w a s s i g-n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t o f t h e o t h e r t w o g r o u p s(P<0.05).A t p h y l a l e v e l,t h e d o m i n a n t p h y l a i n t h e t h r e e g r o u p sw e r eF i r m i c u t e s,B a c t e r o i d e t e s,A c t i n o b a c t e r i a a n dP r o t e o b a c t e r i a,b u t t h e i r r e l a t i v e a b u n d a n c e w e r es i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t.I n D C_b g r o u p,F i r m i c u t e s w e r es i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P<0.05)a n dA c t i n o b a c t e r i aw e r es i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P<0.05).A t t h e g e n u s l e v e l,t h e d o m i n a n t g e n e r a a n d r e l a t i v e a b u n d a n c e o f t h e t h r e e g r o u p sw e r e d i f f e r e n t.P I C R U S t2 f u n c t i o n p r e d i c t i o na n a l y s i ss h o w e dt h a tc o m p a r e d w i t h H C g r o u p,D C_a g r o u p s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e dm a n n o s e-d e g r a d a t i o n,g a l a c t o s e d e g r a d a t i o n,s u g a r a n dv i t a m i nb i o s y n t h e s i s a n do t h e r r e l a t e dm e t a b o l i c p a t h w a y s.D C_bw a s s i g n i f i c a n t l y e n r i c h e d i nh e x i t o l d e g r a d a t i o n a n dL-t r y p t o-p h a nb i o s y n t h e s i s.T h i s s t u d y s h o w e d t h a t t h ed i f f e r e n c eb e t w e e nh e a l t h y c a l v e sa n dd i a r r h o e i c c a l v e sw a s s i g n i f i c a n t(P<0.05)i n t h e i n t e s t i n a l f l o r a o f t h e p h y l u mF i r m i c u t e s a n dA c t i n o m y c e-t e s;N o t o n l y t h e p a t h o g e n i c b a c t e r i a i n t h e p h y l u m A s p e r g i l l u s c a n c a u s e d i a r r h o e a i n c a l v e s b u t a l s o l e a d t oa n i n f l a m m a t o r y r e s p o n s e i nt h e i n t e s t i n e;F a m i l y R u m e x c o c c u sh a sm u l t i p l e f u n c-t i o n s a n d i t i sd i f f i c u l t t o i n f e r f u n c t i o n a ld i f f e r e n c e sb e t w e e n g e n e r a f r o ma m p l i c o ns e q u e n c i n g d a t a;I t c a na l s ob e c o n c l u d e d t h a t d i a r r h o e a i s c l o s e l y r e l a t e d t o e n e r g y a n dn u t r i e n tm e t a b o l i s m a n d a m i n o a c i dm e t a b o l i s m.K e y w o r d s:c a l f d i a r r h e a;i n t e s t i n a l f l o r a;d i v e r s i t y;16S r D N As e q u e n c i n g*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r s:X U X i a o j i n g,E-m a i l:x u x i a o j i n g72@s i n a.c o m;WA N GJ i a n l o n g,E-m a i l: n m g x m c w j l@163.c o m牛肠道微生物群是一个复杂的多微生物生态系统,在维持黏膜健康方面发挥着重要作用㊂黏膜微生物种群在肠道疾病发病机制中的作用已在其他物种中得到充分证实[1-3]㊂然而,关于在疾病条件下发生的粪便微生物群变化的信息有限,例如由病毒和细菌引起的犊牛腹泻㊂本研究旨在利用16Sr D N A 基因高通量测序技术探讨由不同病原引起的腹泻犊牛之间粪便微生物群组成的多样性及差异性,为犊牛肠道疾病的临床诊断及治疗提供理论依据,也为进一步开发益生菌资源奠定基础㊂1材料与方法1.1样本采集及分组选取内蒙古自治区巴彦淖尔市乌拉特前旗和磴口县㊁乌兰察布市卓资县共3个规模化养牛场的1~2月龄犊牛作为粪便采集对象,根据临床症状,腹泻犊牛发热㊁无力㊁背毛杂乱,用无菌肛拭子刺激犊牛肛门部位使其排便,用无菌采样袋采集新鲜腹泻粪样30份,健康粪样8份,干冰速冻保存㊂送至实验室后对每份样品进行牛病毒性腹泻病毒(B V D V)㊁牛轮状病毒(B R V)和牛冠状病毒(B C o V) 3种病毒及沙门菌(i n v A)㊁埃希菌属-志贺菌(i p a H)和致病性大肠杆菌(K99)3种细菌的P C R检测㊂其中8个腹泻粪样检测出B R V病毒定为腹泻a组(D C_a),12个腹泻粪样检测出埃希菌属-志贺菌为腹泻b组(D C_b),8个健康粪样为健康组(H C)㊂样品于-80ħ保存㊂1.2样本D N A提取和测序按照试剂盒使用说明,采用E.Z.N.A. S t o o l D N A K i t试剂盒提取犊牛粪便总D N A㊂采用细菌16S r D N A基因的V3-V4区通用引物,上游341F: 5'-C C T A C G G G N G G C WG C A G-3'和下游805R:5'-5261Copyright©博看网. All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷G A C T A C H V G G G T A T C T A A T C C-3'㊂P C R反应体系(25μL):模板50n g,上㊁下游引物各2.5μL, P h u s i o n H o ts t a r t f l e x2X M a s t e r M i x12.5μL㊂扩增条件:98ħ预变性30s;98ħ10s,54ħ30s, 72ħ45s,35个循环;72ħ延伸10m i n,于4ħ保存㊂P C R扩增产物通过2%琼脂糖凝胶电泳进行检测㊂送至联川生物技术有限公司,采用I l l u m i n a N o v a S e q平台进行测序㊂1.3数据分析测序完成后,根据f q t r i m(v0.94),在特定的过滤条件下对原始数据进行质量过滤,以获得高质量的c l e a n标签㊂使用V s e a r c h软件(v2.3.4)对嵌合序列进行过滤㊂利用D A D A2进行解调,得到特征表和特征序列㊂然后根据S I L V A(r e l e a s e132)分类器,利用每个样本的相对丰度对特征丰度进行归一化㊂采用B l a s t进行序列比对,每个代表性序列用S I L V A数据库对特征序列进行注释㊂α多样性和β多样性由Q I I M E2计算,使用A N O V A方差分析法对α多样性数据进行检验㊂使用M e t a c y c数据库进行P I C R U S t2基因预测㊂2结果2.1犊牛肠道菌群多样性分析2.1.1样品序列与O T U聚类通过对28个粪便样本进行16S r D N A基因V3-V4可变区的高通量测序,获得2181970条原始数据㊂进行高质量数据统计后,获得1736486条有效序列㊂如图1所示,所检测序列按照97%相似度水平划分,D C_a 组㊁D C_b组和H C组的O T U s分别为6203㊁845和6435个,其中3组共有的O T U s是123个,H C组分别与D C_a组和D C_b组的共有O T U s是1000和171个,表明3组O T U水平均有较大差异㊂D C_ b组O T U水平明显低于其他两组,表明D C_b组内微生物丰度小于其他两组㊂2.1.2α多样性分析所检测的样本中G o o d s _c o v e r a g e指数均接近1(图2),表明检测深度足够,基本覆盖到样品中所有物种,数据合理㊂通过C h a o1㊁S h a n n o n和S i m p s o n等α多样性指数评估了肠道菌群多样性和丰度(图3),从结果可以看出,D C_b组的α多样性指数均显著低于D C_a 组和H C组(P<0.05),D C_a组和H C组间差异不显著(P>0.05)㊂结果显示,由细菌引起的腹泻犊牛肠道菌群丰度和多样性均大幅降低㊂图1H C组㊁D C_a组和D C_b组肠道菌群的O T U s韦恩图F i g.1V e n nd i a g r a m so fO T U so f t h e i n t e s t i n a l f l o r ao f t h eH C,D C_a a n dD C_b g r o u ps图2G o o d s_c o v e r a g e稀疏曲线F i g.2G o o d s_c o v e r a g e s p a r s e c u r v e2.1.3β多样性分析 P C o A分析中(图4), P C o A1和P C o A2这两个主成分的贡献值分别为55.61%和12.3%,正常(H C)及腹泻样品(D C_a㊁D C_b)能够明显区分,并且每组样品较为集中,表明所采集的样品重复性较好㊂2.2不同分类水平上肠道菌群群落结构分析2.2.1门水平肠道菌群结构成分分析以S I L-V A为参考数据库对特征序列进行分类学注释,本研究从28份粪便样本共注释到26个门59个纲117个目206个科263个属㊂从门水平对样本的O T U丰度进行物种聚类统计分析显示(图5),各组肠道菌群中丰度排名以厚壁菌门(F i r m i c u t e s)㊁变形菌门(P r o t e o b a c t e r i a)㊁放线菌门(A c t i n o b a c t e r i a)和拟杆菌门(B a c t e r o i d e t e s)四大菌门为主,但在各组表现均有差异,其平均丰度为:厚壁菌门(H C:6261Copyright©博看网. All Rights Reserved.4期陈烨馨等:牛轮状病毒和志贺菌阳性犊牛腹泻粪便样本中肠道菌群的分析*.P <0.05;n s .差异不显著*.P <0.05;n s .T h e d i f f e r e n c e l e v e l i sn o t s i gn i f i c a n t 图3 H C ㊁D C _a 和D C _b 组犊牛肠道微生物群落多样性指数F i g .3 D i v e r s i t y i n d i c e s o f t h e i n t e s t i n a lm i c r o b i a l c o m m u n i t i e s o f c a l v e s i n t h eH C ,D C _a a n dD C _b g r o u ps 图4 H C ㊁D C _a 和D C _b 组犊牛肠道菌群P C o A 分析F i g .4 P C o Aa n a l y s i s o f t h e i n t e s t i n a l f l o r a o f c a l v e s i n g r o u psH C ,D C _a a n dD C _b 71.57%,D C _a :81.33%,D C _b :56.40%)㊁变形菌门(H C :2.15%,D C _a :2.77%,D C _b :31.39%)㊁放线菌门(H C :6.81%,D C _a :1.31,D C _b :11.44%)和拟杆菌门(H C :17.52%,D C _a :12.15%,D C _b:0.57%)㊂其中厚壁菌门和拟杆菌门的比例被称为F /B 比值,可作为评估病理状态的生物标志物㊂通常较低的F /B 比值被认为是健康正常的肠道㊂各组F /B 比值分别为H C 组:4.09;D C _a 组:6.69;D C _b 组:98.95㊂从图5可以看出,在检测出志贺菌的D C _b 组犊牛肠道菌群中,变形菌门的丰度高达31.39%,变形菌门中包括很多病原菌,如大肠埃希菌属(E s c h e r i c h i a -c o l i )㊁沙门菌(S a l m o n e l l a )㊁埃希菌属-志贺菌(E s c h e r i c h i a -S h i ge l l a )㊁梭菌(C l o s t r i d i u m )等可致犊牛腹泻的菌属㊂2.2.2 属水平肠道菌群结构成分分析从属水平进行物种聚类统计分析显示(图6),各组的优势菌属有较大差异,H C 组排名前十的菌属为:瘤胃球菌科U C G -005菌属(R u m i n o c o c c a c e a e _U C G -005);栖粪杆菌属(F a e c a l i b a c t e r i u m );柯林斯菌属(C o l -l i n s e l l a );毛螺旋菌属(L a c h n o s pi r a c e a e _u n c l a s s i -fi e d );拟杆菌属(B a c t e r o i d e s );产粪甾醇真细菌(E u b a c t e r i u m _c o p r o s t a n o l i g e n e s _g r o u p );乳杆菌属(L a c t o b a c i l l u s );M u r i b a c u l a c e a e _u n c l a s s i fi e d ;瘤胃球菌科U C G -014菌属(R u m i n o c o c c a c e a e _U C G -014)7261Copyright ©博看网. All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷图5 H C ㊁D C _a 和D C _b 组前30菌群门水平相对丰度F i g .5 R e l a t i v e a b u n d a n c e a t t h e p h y l u n l e v e l o f t h e f i r s t 30p h y l a o f t h eH C ,D C _a a n dD C _b g r o u ps 及瘤胃球菌属(R u m i n o c o c c u s _2),其丰度分别为10.09%㊁8.16%㊁5.16%㊁4.30%㊁4.27%㊁3.70%㊁3.62%㊁2.88%㊁2.73%及2.52%㊂D C _a 组排名前十的菌属为:瘤胃球菌科U C G -005菌属(R u m i n o -c o c c a c e a e _U C G -005)㊁毛螺旋菌属(L a c h n o s pi r a c e a e _u n c l a s s i fi e d )㊁克里斯滕森氏菌科R -7菌属(C h r i s -t e n s e n e l l a c e a e _R -7_g r o u p )㊁粪球菌属(C o p r o c o c c u s _3)㊁理研菌科_R C 9菌属(R i k e n e l l a c e a e _R C 9_g u t_g r o u p )㊁瘤胃球菌科U C G -012菌属(R u m i n o c o c -c a c e a e _U C G -013)㊁产粪甾醇真细菌(E u b a c t e r i u m _c o p r o s t a n o l i g e n e s _g r o u p )㊁F a m i l y _X I I I _A D 3011_g r o u p㊁厚壁菌门(F i r m i c u t e s _u n c l a s s i f i e d )及瘤胃球菌科(R u m i n o c o c c a c e a e _u n c l a s s i f i e d ),丰度分别为26.91%㊁6.09%㊁5.62%㊁3.87%㊁3.38%㊁2.93%㊁2.90%㊁2.73%㊁2.71%及2.66%㊂D C _b 组排名前十的菌属为埃希菌属-志贺菌(E s c h e r i c h i a -S h i g e l l a )㊁乳杆菌属(L a c t o b a c i l l u s )㊁活泼瘤胃球菌属(R u m i -n o c o c c u s ]_g n a v u s _g r o u p )㊁柯林斯氏菌属(C o l -l i n s e l l a )㊁链球菌属(S t r e p t o c o c c u s )㊁栖粪杆菌属(F a e c a l i b a c t e r i u m )㊁伯克氏菌属(B u r k h o l d e r i a -C a b a l l e r o n i a -P a r a b u r k h o l d e r i a )㊁梭菌目(C l o s t r i d -i a l e s _u n c l a s s i f i e d )㊁梭菌属(C l o s t r i d i u m _s e n s u _s t r i c t o _1)及T y z z e r e l l a _4,其丰度分别为28.36%㊁18.40%㊁10.22%㊁10.21%㊁7.76%㊁5.17%㊁2.37%㊁1.57%㊁1.23%及1.12%㊂数据显示健康(H C )和腹泻(D C _a ㊁D C _b )犊牛肠道菌属O T U 丰度各不相同㊂图6 H C ㊁D C _a 和D C _b 组前30菌群属水平相对丰度F i g .6 R e l a t i v e a b u n d a n c e a t t h e g e n u s l e v e l o f t h e f i r s t 30g e n u s o f t h eH C ,D C _a a n dD C _b g r o u ps 通过L E f S e (l i n e d i s c r i m i n a n t a n a l ys i s (L D A )e f f e c t s i z e )分析,以检测细菌分类群组成的变化及鉴定相对丰度存在显著差异的分类群(生物标记物)㊂L E f S e 分析结果表明(图7A ),根据L D A 分值>4.0,在H C 组鉴定了拟杆菌属(B a c t e -r o i d e t e s )㊁普雷沃氏菌属(P r e v o t e l l a c e -a e )㊁真杆菌属(E u b a c t e r i u m _c o p r o s t a n o l i g e n e s _g r o u p )㊁M u r i -b a c u l -a c e a e 菌属㊁瘤胃球菌属(R u m i n o c o c c u s)㊁拟普8261Copyright ©博看网. All Rights Reserved.4期陈烨馨等:牛轮状病毒和志贺菌阳性犊牛腹泻粪便样本中肠道菌群的分析雷沃菌属(A l l o pr e v -o t e l l a )等21种丰度差异显著的分类群;在D C _a 组鉴定了梭菌属(C l o s t r i d i a )㊁瘤胃球菌科(R u m i n o c o c c a c e a e )㊁毛螺菌科(L a c h -n o s -pi r a c e a e )㊁克里斯滕森菌科(C h r i s t e n s e n e l l a c e -a e )㊁粪球菌属(C o p r -o c o c c u s )㊁理研菌科(R i k e n e l -l a c e a e )等31种丰度差异显著的分类群;在D C _b 组鉴定了γ-变形菌纲(G a m m a p r o t e o b a c t e r i a )㊁变形菌门(P r o t e o b a c t e r i a )㊁埃希菌属-志贺菌(E s c h e r i c h i a _S h i -ge l l a )㊁肠杆菌科(E n t e r o b a c t e r i a c e a e )㊁乳杆菌目(L a c -t o b a c i l l a l e s )等18中丰度差异显著的分类群㊂图7 H C ㊁D C _a 和D C _b 犊牛肠道菌群L E f S e 分析(A )和进化分支图(B )F i g .7 A n a l y s i s o f i n t e s t i n a l f l o r aL E f S e i nH C ,D C _a a n dD C _b c a l v e s (A )a n dE v o l u t i o n a r y b r a n c h i n g d i a gr a m (B )2.3 P I C R U S t 2基因预测采用P I C R U S t 2基因预测的方法,将得到的O T U s 数据以M e t a c yc 数据库为生物代谢通路分析数据库,预测样本的菌群代谢功能,分析差异通路㊂分析结果如图8所示,与H C 组相比,D C _a 组在多糖㊁半乳糖的利用,糖的生物合成及S -腺苷-L -蛋氨酸的生物合成明显下调,D C _b 组己糖醇的酵解利用㊁糖的酵解及L -色氨酸的生物合成上调㊂结果表明,肠道菌群的改变不仅影响犊牛的健康状况,还可能导致犊牛肠道菌群功能的变化㊂3 讨论牛肠道微生物群由多样化且复杂的微生物组成,它们在复杂的黏膜生态系统中共存,有助于维持宿主健康和促进免疫发育的作用[1]㊂微生物群的某些成分大量存在于健康肠道中,并且数量几乎恒定[2],与不健康肠道中的组成丰度有一定差异㊂I l -l u m i n aN o v a S e q 测序平台及相关的生物信息学分析揭示了包括牛在内的许多物种的肠道环境中微生物群落的多样性程度,并证明了宿主和微生物生态系统之间复杂的相互作用[4]㊂越来越多的证据表明,犊牛腹泻是由多种因素共同造成的,且犊牛腹泻后可引发繁殖能力降低㊁产奶量或体重减少进而导致养牛业经济损失[5-7]㊂本研究比较了健康犊牛和由B R V ㊁埃希菌属-志贺菌引起的腹泻犊牛粪便微生物群的组成多样性和差异㊂研究结果表明,健康犊牛和由B R V ㊁埃希菌属-志贺菌引起的腹泻犊牛之间的微生物群落组成存在显著差异㊂在健康犊牛和由B R V 引起的腹泻犊牛中观察到的最丰富的细菌门是厚壁菌门和拟杆菌门,而在由埃希菌属-志贺菌引起的腹泻犊牛中最丰富的细菌门是厚壁菌门和变形菌门,但与另外两组相比,由埃希菌属-志贺菌9261Copyright ©博看网. All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷图8 H C ㊁D C _a 和D C _b 组犊牛肠道功能基因差异F i g .8 G e n e t i c d i f f e r e n c e s i n i n t e s t i n a l f u n c t i o n i n c a l v e s o f t h eH C ,D C _a a n dD C _b g r o u ps 引起的腹泻犊牛中厚壁菌门显著下降(P <0.05),含有多种病原菌的变形菌门显著上升(P <0.05)㊂健康和腹泻犊牛之间的细菌在门㊁属上的差异证明了微生物结构的变化与犊牛腹泻的发生有关㊂本研究显示,H C 组犊牛中瘤胃球菌属丰度比例较高,这一分类群的成员通过产生短链脂肪酸与肠道健康广泛相关,这对于减少肠道机会性病原体的定植很重要[8]㊂其中瘤胃球菌科U C G -005菌属的丰度最高,瘤胃菌科U C G -005菌属参与动物体内纤维素降解和淀粉消化过程[9]㊂瘤胃球菌科U C G -014菌属也有较高丰度,其能够改善瘤胃中的糖代谢[10]㊂D C _a 组中除了丰度较高的瘤胃球菌属,克里斯滕森菌科也有较高丰度,克里斯滕森菌科家族成员能够分泌3种糖苷酶,促进牧草饲料中纤维素和半纤维素的分解,提高饲料的利用效能[11]㊂D C _b 组中埃希菌属-志贺菌大比例增加,可能是导致犊牛细菌性腹泻的主要病原㊂活泼瘤胃球菌(R u m i n o c o c c u s g n a v u s )在D C _b 组腹泻犊牛中也有较高比例,有研究指出,在克罗恩病患者中活泼瘤胃球菌的相对丰度升高与肠道症状有很高的相关度[12],活跃期炎症性肠病(I B D )也通常伴随着活泼瘤胃球菌的增加[13]㊂所以,活泼瘤胃球菌的增加或许可以作为肠道发生炎症的指征菌群㊂此外,细菌物种的丰富度和多样性也被认为是衡量肠道微生物群落健康的重要指标[14]㊂研究结果显示,健康犊牛和腹泻犊牛之间的细菌多样性指数(C h a o 1㊁s h a n n o n 和S i m ps o n )显著下降㊂P C o A 还揭示了三组之间微生物群落组成的差异㊂这些结果表明健康和腹泻犊牛之间的整体微生物群结构存在显著差异㊂综上所述,厚壁菌门中含包括乳杆菌属㊁肠球菌属和芽孢杆菌属等大量益生菌,其高丰度表现说明肠道益生菌也有较高丰度,并且从细菌的属层面也有同样表现,益生菌在维持肠道微生物平衡方面有积极作用㊂但大多数学者认为,益生菌对犊牛肠道积极作用的确切机制仍需进一步研究㊂D C _b 组中有高丰度的变形菌门,其中埃希菌属-志贺菌是引起本研究中犊牛腹泻的主要病原,但其中不乏肠杆菌科和梭菌等条件致病菌,并引起犊牛肠道炎症反应㊂C h u a n g 等[15]研究20头反刍前的荷斯坦奶牛发现,健康组中富集的瘤胃球菌科U C G -014菌属与粪便评分㊁炎性因子呈负相关;腹泻组中富集的活泼瘤胃球菌属与粪便评分㊁炎性因子呈正相关,与本研究表现趋势一致㊂本研究表明,由不同病原引起的腹泻犊牛肠道菌群结构和代谢功能存在较大的差异,厚壁菌门及放线菌门差异显著;能量及营养代谢和氨基酸代谢不当是与腹泻相关的重要因素,并且表明瘤胃球菌科的功能多样性及基于扩增子测序数据推断功能的困难[16]㊂4 结论本研究结果显示,由细菌引起的犊牛腹泻肠道微生物菌群丰度和多样性均下降;健康与腹泻犊牛肠道微生物群的差异表明其与腹泻的发生相关;犊牛发生腹泻后,不仅影响肠道菌群的结构,对菌群的功能也有一定影响㊂361Copyright ©博看网. All Rights Reserved.4期陈烨馨等:牛轮状病毒和志贺菌阳性犊牛腹泻粪便样本中肠道菌群的分析参考文献(R e f e r e n c e s):[1] S U C H O D O L S K IJ S,MA R K E L M E,G A R C I A-MA Z C O R R OJF,e t a l.T h e f e c a lm i c r o b i o m e i nd o g sw i t ha c u t e d i a r r h e a a n d i d i o p a t h i c i n f l a m m a t o r y b o w e ld i se a s e[J].P L o SO n e,2012,7(12):e51907.[2] W E E S EJS,J E L I N S K I M.A s s e s s m e n to ft h ef e c a lm i c r o b i o t a i nb e e f c a l v e s[J].JV e t I n t e r nM e d,2017,31(1):176-185.[3] S U C H O D O L S K I JS,F O S T E R M L,S O HA I L M U,e t a l.T h ef e c a lm i c r o b i o m e i nc a t sw i t hd i a r r h e a[J].P L o SO n e,2015,10(5):e0127378.[4] O I K O N OMO U G,T E I X E I R A A G V,F O D I T S C HC,e t a l.F e c a lm i c r o b i a l d i v e r s i t y i n p r e-w e a n e dd a i r yc a l v e s a sde s c r i b e db y p y r o s e q u e n c i n g o fm e t a g e n o m i c16Sr D N A.A s s o c i a t i o n so f F a e c a l i b a c t e r i u m s p e c i e sw i t h h e a l t h a n d g r o w t h[J].P L o S O n e,2013,8(4):e63157.[5] B L A N C HA R D P C.D i a g n o s t i c s o fd a i r y a n d b e e fc a t t l ed i a r r he a[J].V e tC l i n N o r t h A m F o o d A n i mP r a c t,2012,28(3):443-464.[6] C H O YI,Y O O N KJ.A no v e r v i e wo f c a l fd i a r r h e a-i n f e c t i o u s e t i o l o g y,d i a g n o s i s,a n di n t e r v e n t i o n[J].JV e t S c i,2014,15(1):1-17.[7] HU S S E I N HS.P r e v a l e n c e a n d p a t h o g e n i c i t y o f S h i g at o x i n-p r o d u c i n g E s c h e r i c h i ac o l i i n b e e fc a t t l ea n dt h e i r p r o d u c t s[J].A n i m S c i,2007,85(S13):E63-E72.[8] L O U I S P,F L I N T H J.D i v e r s i t y,m e t a b o l i s m a n dm i c r o b i a l e c o l o g y o f b u t y r a t e-p r o d u c i n g b a c t e r i a f r o mt h eh u m a n l a r g e i n t e s t i n e[J].F E M S M i c r o b i o lL e t t,2009,294(1):1-8.[9] S U N G L,Z HA N G H H,W E I Q G,e t a l.C o m p a r a t i v e a n a l y s e so f f e c a lm i c r o b i o t a i nE u r o p e a nm o u f l o n(O v i so r i e n t a l i s m u s i m o n)a n d b l u es h e e p(P s e u d o i s n a y a u r)l i v i n g a t l o wo r h i g h a l t i t u d e s[J].F r o n tM i c r o b i o l,2019,10:1735.[10] M C L O U G H L I N S,S P I L L A N E C,C L A F F E Y N,e ta l.R u m e nm i c r ob i o m ec o m p o s i t i o n i s a l t e r ed i ns he e pd i ve r g e n ti nf e e d e f f i c i e n c y[J].F r o n t M i c r o b i o l,2020,11:1981.[11] P E R E A K,P E R Z K,O L I V O S K,e t a l.F e e de f f i c i e n c y p h e n o t y p e si n l a m b si n v o l v e c h a n g e si nr u m i n a l,c o l o n i c,a n d s m a l l-i n t e s t i n e-l o c a t e dm i c r o b i o t a[J].JA n i mS c i,2017,95(6):2585-2592.[12]J O O S S E N S M,HU Y S G,C N O C K A E R T M,e ta l.D y s b i o s i so ft h ef a e c a l m i c r o b i o t ai n p a t i e n t s w i t hC r o h n sd i s e a s ea n dt h e i ru n a f f e c t e dr e l a t i v e s[J].G u t,2011,60(5):631-637.[13] D U B I N S K Y V,R E S H E FL,R A B I N OW I T ZK,e t a l.D y s b i o s i s i n m e t a b o l i c g e n e so f t h e g u tm i c r o b i o m e so f p a t i e n t s w i t h a ni l e o-a n a l p o u c h r e s e m b l e st h a to b s e r v e d i n C r o h n sd i s e a s e[J].m S y s t e m s,2021,6(2):e00984-20.[14] Y U X M,WU X L,Q I U L,e ta l.A n a l y s i so ft h ei n t e s t i n a l m i c r o b i a lc o m m u n i t y s t r u c t u r eo fh e a l t h ya n d l o n g-l i v i n g e l d e r l y r e s i d e n t s i nG a o t i a nv i l l a g eo fL i u y a n g c i t y[J].A p p lM i c r o b i o lB i o t e c h n o l,2015,99(21):9085-9095.[15] C HU A N G S T,C H E N C T,H S I E H J C,e ta l.D e v e l o p m e n t o f n e x t-g e n e r a t i o n p r o b i o t i c s b yi n v e s t i g a t i n g t h e i n t e r r e l a t i o n s h i p s b e t w e e ng a s t r o i n t e s t i n a l m i c r o b i o t a a n d d i a r r h e a i np r e r u m i n a n th o l s t e i n c a l v e s[J].A n i m a l s(B a s e l),2022,12(6):695.[16] B A C H A,LÓP E Z-G A R CÍA A,G O N ZÁL E Z-R E C I OO,e ta l.C h a n g e s i nt h er u m e na n dc o l o n m i c r o b i o t aa n d e f f e c t s o f l i v e y e a s t d i e t a r y s u p p l e m e n t a t i o nd u r i n g t he t r a n s i t i o nf r o mt h ed r yp e r i o dt o l a c t a t i o no fd a i r y c o w s[J].J D a i r y S c i,2019,102(7):6180-6198.(编辑范子娟)1361Copyright©博看网. 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了解病毒样本库：如何识别新型病毒威胁？(二)

了解病毒样本库：如何识别新型病毒威胁？引言：在这个信息爆炸的时代，病毒威胁给社会带来了巨大的挑战。

对于保护我们的健康和安全来说，了解并识别新型病毒威胁是至关重要的。

而病毒样本库则成为了我们掌握这一技术的关键。

本文将深入探讨病毒样本库的重要性以及如何利用它来识别新型病毒威胁。

一、病毒样本库的定义和作用（200字）病毒样本库是一个集中存放病毒样本的数据库，其中包括已知的各类病毒特征数据。

通过分析这些样本，我们能够提前发现新型病毒的出现，并及时采取措施应对。

病毒样本库的作用远不止于此，它还是研究病毒进化规律、开发病毒检测工具和疫苗设计的重要基础。

二、构建病毒样本库的流程与挑战（300字）构建病毒样本库的流程可以简单概括为样本收集、样本提取、数据录入和特征分析。

然而，实际操作并非如此简单。

首先，样本的收集需要广泛涉足不同地区和不同类型的病毒，这对于采样工作的组织协调能力提出了挑战。

其次，在样本提取过程中，需要有效保护样本的完整性和安全性，以免病毒泄露。

此外，数据录入和特征分析的难度较大，需要运用先进的数据处理和算法技术。

三、利用病毒样本库识别新型病毒威胁（300字）通过对病毒样本库的分析，我们可以发现新型病毒威胁，从而及早预警和应对。

具体而言，病毒样本库中的特征数据可以通过不同的算法和模型进行分析，寻找潜在的破坏模式和病毒行为。

这使得我们能够预测其威胁等级和潜在传播范围。

同时，病毒样本库还可以帮助研究人员对新型病毒进行分类和鉴别，为后续的医疗干预、防控措施和疫苗研究提供基础。

四、病毒样本库的应用案例（200字）病毒样本库的应用案例举不胜举。

以前几年大规模爆发的流感为例，研究人员通过样本库的分析，成功预测了病毒的扩散模式并提前制定了针对性的防控措施。

此外，新型冠状病毒的爆发也凸显了病毒样本库的重要性，研究人员在数日内就确定了病毒的基因序列，并利用样本库找到了可能的疫苗方案。

结语：病毒样本库的建立与运营需要多方合作，政府、科研机构和疾控中心等都要发挥各自的作用。

Phobos 勒索病毒样本分析

Phobos 勒索病毒样本分析
Phobos勒索病毒是一种新型的勒索病毒，由于其在加密和删除文件方
面的新功能，引起了安全专家的关注。

因此，研究Phobos勒索病毒的
样本分析变得尤为重要。

首先，要针对Phobos勒索病毒样本进行深入的分析，必须先获取正确
的样本，并且必须进行全面的反病毒扫描。

获取样本是分析Phobos勒
索病毒的重要基础，以确保分析的准确性。

其次，要进行Phobos勒索病毒的样本分析，需要了解其整体行为特征，这将有助于更好地理解其运作机制。

流行的对抗性分析（PE）工具可
以帮助分析人员了解病毒的各种组件的功能，并建立程序的控制流图，从而确定病毒的完整度以及其执行特征。

此外，可以通过PE工具还可
以查看病毒是否有可疑组件，这有助于发现潜在的攻击行为。

最后，可以通过研究Phobos勒索病毒的反编译程序，了解其中的各种
可能的触发条件和加密算法，以及其可能的通信机制，这样就可以更
好地了解它的攻击特征，从而更好地防范它。

反编译程序还可以帮助
分析人员查看病毒是否使用了更多复杂的技术，如加密技术，从而更
好地了解其加密机制。

此外，反编译程序还可以帮助分析人员查看病
毒是否运用了其他可疑技术，从而确定它是否具有更多危险，比如自
我复制和分发。

总之，要进行全面的Phobos勒索病毒样本分析，必须首先获取正确的
样本，并进行全面的反病毒扫描，了解它的行为特征。

另外，还需要
进行对抗性分析，以查看病毒包含的各种组件，以及进行反编译，了
解它的攻击特征。

因此，要准确分析Phobos勒索病毒，必须采用完整的样本分析程序。

世上最完整的病毒分析研究报告及实例

第3章病毒分析本章介绍病毒地原理与所使用地技术，以及防止病毒地方法：●常见病毒地原理；●可执行文件病毒修改文件地方法；●可执行文件病毒使用地常用技术；●优化可执行文件防病毒；●文件过滤驱动在反病毒上地应用.这是本章涉及地问题.1.1 病毒概述“计算机病毒”最早是由美国计算机病毒研究专家F.Cohen博士提出地.“计算机病毒”有很多种定义，国外流行地定义为：是一段附着在其他程序上地可以实现自我繁殖地程序代码.在《中华人民共和国计算机信息系统安全保护条例》中地定义为：“计算机病毒是指编制或者在计算机程序中插入地破坏计算机功能或者数据，影响计算机使用并且能够自我复制地一组计算机指令或者程序代码”.世界上第一例被证实地计算机病毒是在1983年，出现了计算机病毒传播地研究报告.同时有人提出了蠕虫病毒程序地设计思想；1984年，美国人Thompson开发出了针对UNIX 操作系统地病毒程序.1988年11月2日晚，美国康尔大学研究生罗特·莫里斯将计算机病毒蠕虫投放到网络中.该病毒程序迅速扩展，造成了大批计算机瘫痪，甚至欧洲联网地计算机都受到影响，直接经济损失近亿美元.计算机病毒是人为编写地，具有自我复制能力，是未经用户允许执行地代码.一般正常地程序是由用户调用，再由系统分配资源，完成用户交给地任务.其目地对用户是可见地、透明地.而病毒具有正常程序地一切特性，它隐藏在正常程序中，当用户调用正常程序时窃取到系统地控制权，先于正常程序执行，病毒地动作、目地对用户时未知地和未经用户允许地.它地主要特征有传染性、隐蔽性、潜伏性、破坏性和不可预见性.传染性是病毒最重要地一条特性.按照计算机病毒侵入地系统分类，分为DOS系统下地病毒、Windows系统下地病毒、UNIX系统下地病毒和OS/2系统下地病毒.按照计算机病毒地链接方式分类可分为源码型病毒、嵌入型病毒、外壳型病毒.按照传播介质分类，可以分为可分为单机病毒和网络病毒.随着Windows系统地发展，引导型病毒已经不再，宏病毒也少见.目前见得多地是感染本机可执行文件地PE病毒和通过网络在计算机之间传播地蠕虫病毒比较常见.1.2 PE病毒分析Windows下常见地可执行文件，一种是二进制文件，就是扩展名为exe、dll、src和sys 等地文件，它们地执行是由explorer.exe（资源管理器）、cmd.exe（控制台，类似DOS界面）或其它程序调用执行地.另一种是文本格式文件，例如扩展名为htm和html，可以由iexplorer.exe调用，由script.exe来解释执行地文件.从Windows2000以后，其二进制文件文件为PE结构.PE地意思就是可移植地执行体（Portable Executable），它是 Windows地32位环境自身所带地执行体文件格式.它地一些特性继承自 Unix地 Coff (common object file format)文件格式，同时为了保证与旧版本MS-DOS及Windows操作系统地兼容，PE文件格式也保留了MS-DOS中那熟悉地MZ 头部.病毒能够感染PE文件，因为病毒设计者深知其结构.1.2.1 PE病毒常用技术病毒也和正常地应用程序一样，涉及到函数地调用和变量地使用.1、调用API函数地方法API是“Application Programming Interface”地英文缩写，很象DOS下地中断.中断是系统提供地功能，在DOS运行后就被装载在内存中，而API函数是当应用程序运行时，通过将函数所在地动态连接库装载到内存后调用函数地.请大家先在MSDN地“索引”中输入函数“MessageBox”然后回车，就可以查到该函数地使用方法.MSDN是微软提供地开发帮助，是在Windows下编程必备地资料文件.在Windows下设计应用程序不直接或间接使用API是不可能地，有些高级语言看似没有使用API，只不过它们提供地模块对API进了封装.API地使用分为静态和动态使用两种方式.在源程序中调用API两种方式都可以使用，但对未公开API因为无相应地头文件，只能使用动态方式.下面以VC++中调用MessageBox 说明两种方式地区别.(1) 静态方式char note_inf[]=”谢谢使用”;char note_head[]=”提示信息”;::MessageBox(0, note_inf, note_head,MB_OK); //::表示全局函数反汇编结果如图3-1.“PUSH 00000000”对应地是MB_OK常量入栈，“PUSH 0040302C”对应地是一个字符串地偏移地址入栈，“PUSH 00403020”对应地是另一个字符串偏移地址地入栈，第2行“PUSH 00000000”对应窗口句柄入栈.当程序执行时，装载器会将user32.dll 装载到应用程序虚拟空间，同时将MessageBoxA（对应ANSI格式，另一种为UNICODE格式，用MessageBoxW表示.这是因为函数地参数有字符串，而字符串有两种格式所致）地入口地址填充到虚拟地址004021B8h.虚拟地址004021B8h是由PE头中IMAGE_DATA_DIRECTORY数组来定位地，当编译器生成PE文件时就计算好了.图3-1 API地汇编调用(2) 动态方式动态方式先定义函数指针，使用函数LoadLibrary装载要调用地函数所在地dll 文件，获取模块句柄.然后调用GetProcAddress获取要调用地函数地地址.void CTestDlg::OnButton{//定义MessageBox函数指针typedef int (WINAPI *_MessageBox)(HWND hWnd,LPCTSTR lpText,LPCTSTR lpCaption,UINT uType);//定义MessageBox指针变量_MessageBox new_MessageBox;//装载MessageBox函数所在dll文件HINSTANCE hb=LoadLibrary("user32.dll");//获取ANSI格式地MessageBox函数地址new_MessageBox=(_MessageBox)GetProcAddress(hb,"MessageBoxA");//动态调用函数MessageBoxnew_MessageBox(0,"欢迎使用!","提示信息",MB_OK);//释放MessageBox函数所在模块CloseHandle(hb);}动态方式是在需要调用函数时才将函数所在模块调入到内存地，同时也不需要编译器为该函数在导入表中建立相应地项.2、病毒调用API函数病毒要完成相应地功能，不可能不调用API函数.病毒感染PE文件可能是在源程序中加入病毒代码，但多数是在生成PE文件后通过修改PE文件感染地.对后种情况，病毒难以去为使用地API建立导入表项，只有使用第动态方式调用API.动态使用API地前提是预先知道LoadLibrary和GetProcAddress地地址，可以预先设定或搜索API地地址实现.一个正常地Windows程序，它至少需要调用模块kernel32.dll，因为应用程序正常退出时需要调用函数ExitProcess，而该函数位于模块kernel32.dll内.然而函数LoadLibrary 和GetProcAddress也位于模块kernel32.dll内.既然模块kernel32.dll总在内存，如果我们知道这两个函数地址，直接调用就可以了.0YujC。

一起成都海关疑似新冠病毒阳性的检测报告与分析

一起成都海关疑似新冠病毒阳性的检测报告与分析发布时间：2022-11-17T02:33:27.306Z 来源：《医师在线》2022年6月12期作者：李世琴[导读]李世琴（成都市金牛区疾病预防控制中心；四川成都610036）2020年7月25日晚上11点，我疾控中心收到成都海关通知，说有一个航班上的6个人IGM、IGG抗体检测阳性，疑似新冠阳性，我检验科采样人员立即出动，进行鼻咽拭子以及肛拭子的标本采集，我和科室的其他同事一起，连夜对这几个样本进行了双试剂核酸检测，现将检测结果报告如下：一、实验部分（一）仪器ABI7500fastPCR仪；NP968-S全自动核酸提取仪；TOMOS MINISTAR SUPER离心机；XH-B型旋转混合器；HR1200-Ⅱ B2生物安全柜；MK-10干式恒温器。

（三）实验步骤1.试剂配制：⑴蛋白酶K溶液的制备：在每份蛋白酶K干粉中加入500（20T）/1400（64T）μL蛋白酶K稀释液，使其完全溶解即可使用。

溶解后的溶液在-20℃保存，反复冻融不超过5次。

⑵反应体系配制：⑶核酸提取仪自动化程序结束后，将第6或12列的洗脱液转移至干净的无核酸酶离心管中。

4. PCR检测⑴加样：将处理过的样品核酸、空白对照和阳性对照各5μL加入到预先准备好的PCR反应管中，盖上管盖，立即低速离心。

⑵探针检测模式设置之江生物体系：Reporter Dye：FAM通道 ORF1ab基因; VIC通道 N基因；CY5通道 MNBH；Passive Reference：None。

PCR反应程序：逆转录反应 45℃，10min，共1个循环；变性及退火、延伸、检测荧光95℃，3min； 95℃，15sec→58℃，30sec，共40个循环。

单点荧光检测在58℃。

达安基因体系：Reporter Dye：FAM通道ORF1ab基因; VIC通道 N基因；CY5通道内标；Passive Reference：None。

新型xxx毒xx流行病学特征分析

新型xxx毒xx流行病学特征分析摘要。

目的分析截至2020年2月24日信阳市报告的新型xxx毒xx（covid-19）病例的流行病学特征，了解其发病趋势，为疫情防控提供参考依据。

方法采用描述流行病学方法对信阳市新xx炎疫情数据进行分析，发病率差异的比较使用χ2检验。

结果截至2月24日，信阳市累计报告274例新xx炎确诊病例，累计发病率为4.25/10万。

每日新增确诊和尚有疑似病例数呈先上升后下降的趋势，分别在2月4~5日和2月3日达到峰值。

确诊病例数在1月25~26日达到高峰，之后缓慢下降。

确诊病例累计发病率，罗山县（7.68/10万）和浉河区（7.19/10万）明显高于其他县区（χ2=57.81，p＜0.001）。

所有确诊病例中，输入病例134例（占48.91%），有武汉暴露史的占比由最高时的76.39%下降到11.76%；本地病例140例（占51.09%），占比逐渐从20.83%上升到76.47%。

结论信阳市新xx炎疫情防控工作取得了阶段性成效，但后期疫情面临的形势依然严峻复杂，必须继续落实好村镇、社区、工作场所等为单位的新xx炎病例的发现和处置，防止疫情反弹。

关键词：新型xxx毒xx；流行病学特征；确诊病例2019年12月份以来，湖北省武汉市发现数起不明原因xx 疫情，后被证实为一种新型xxx毒感染引起[1]，该病毒可在人与人之间传播[2-3]。

1月20日我国将其命名为新型xxx毒xx （covid-19，简称新xx炎），并纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，按甲类传染病管理。

信阳市作为武汉出省向北通道的重要城市和屏障，南部的浉河区、罗山县、新县、商城县与湖北省接壤，返乡人员和物资等流动规模大，面临输入疫情的形势严峻。

本文通过分析信阳市新xx炎发病的流行特征，旨在为疾病的防控及相关政策的制定提供依据。

1资料与方法1.1资料来源。

从国家传染病信息网络报告系统和信阳市人民政府政务公开网站收集信阳市新xx炎的疫情数据，包括确诊、疑似、重症、治愈、死亡等情况。

世上最完整的病毒分析及实例

//装载MessageBox函数所在dll文件
HINSTANCE hb=LoadLibrary("user32.dll");
//获取ANSI格式的MessageBox函数地址
new_MessageBox=(_MessageBox)GetProcAddress(hb,"MessageBoxA");
//动态调用函数MessageBox
(1)静态方式
char note_inf[]=”谢谢使用”;
char note_head[]=”提示信息”;
::MessageBox(0, note_inf, note_head,MB_OK); //::表示全局函数
反汇编结果如图3-1。“PUSH 00000000”对应的是MB_OK常量入栈，“PUSH 0040302C”对应的是一个字符串的偏移地址入栈，“PUSH 00403020”对应的是另一个字符串偏移地址的入栈，第2行“PUSH 00000000”对应窗口句柄入栈。当程序执行时，装载器会将user32.dll装载到应用程序虚拟空间，同时将MessageBoxA（对应ANSI格式，另一种为UNICODE格式，用MessageBoxW表示。这是因为函数的参数有字符串，而字符串有两种格式所致）的入口地址填充到虚拟地址004021B8h。
世上最完整的病毒分析及实例
取到系统的控制权，先于正常程序执行，病毒的动作、目的对用户时未知的和未经用户允许的。它的主要特征有传染性、隐蔽性、潜伏性、破坏性和不可预见性。传染性是病毒最重要的一条特性。
按照计算机病毒侵入的系统分类，分为DOS系统下的病毒、Windows系统下的病毒、UNIX系统下的病毒和OS/2系统下的病毒。按照计算机病毒的链接方式分类可分为源码型病毒、嵌入型病毒、外壳型病毒。按照传播介质分类，可以分为可分为单机病毒和网络病毒。

上海市某腹泻猪群猪流行性腹泻病毒检测及全基因序列分析

·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报上海市某腹泻猪群猪流行性腹泻病毒检测及全基因序列分析摘要：猪流行性腹泻（PED ）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV ）感染引起的仔猪严重腹泻性疾病，传播快，发病急，死亡率高，给我国养猪业造成巨大损失。

2021年10月上海某猪场产房仔猪发生腹泻，发病率为30%~50%，死亡率为20%~30%，猪群之前进行过疫苗免疫。

粪便样本经猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV ）、猪轮状病毒（RV ）荧光RT-PCR 检测，结果显示：PEDV 检测为阳性，TGEV 和RV 检测均为阴性。

经全基因测序后进行系统进化分析，结果显示：全基因序列属于G Ⅱ-c 亚群，S 基因序列属于G Ⅱ-b 亚群，与目前的经典疫苗株CV777和变异株AJ1102相比，CV777的全基因和S 基因都属于G Ⅰ-b 群，AJ1102的全基因和S 基因都属于G Ⅱ-b 亚群，研究结果表明新基因型的PEDV 已在上海地区流行，而传统疫苗株无法提供好的免疫效果，提示新的防控策略的制定和有针对性的疫苗的生产和使用，对于预防PEDV 感染和流行有重要意义。

关键词：猪流行性腹泻病毒；系统进化；S 基因中图分类号：S852.65文献标志码：A文章编号：1674-6422（2024）01-0175-07Detection and Complete Genomic Sequence Analysis of Porcine Epidemic DiarrheaVirus from a Diarrheal Pig Herd in ShanghaiKANG Longshan 1,2, YU Huiru 2, YANG Dequan 2, LI Xin 2, SHEN Haixiao 2, YANG Xianchao 2,WANG Jian 2, XU Lina 1, GE Feifei 2(1. College of Life Science and Food Engineering, Hebei University of Engineering, Handan 056009, China; 2. Shanghai Animal DiseasePrevention and Control Center, Shanghai 201103, China)收稿日期：2021-12-07基金项目：上海市科委自然科学基金（2021（04713））作者简介：康龙山，男，硕士,主要从事动物疫病分子流行病学研究与疫苗研制通信作者：葛菲菲，E-mail：*********************Abstract: Porcine epidemic diarrhea (PED) is a serious diarrheal disease of piglets caused by Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) infection. In October 2021, diarrhea occurred in piglets in the delivery room of a pig farm in Shanghai with the incidence rate of 30%-50% and mortality rate of 20%-30%. The pig herds had been vaccinated before. Fecal samples were examined by real-time RT-PCR for Porcine epidemic diarrhea virus, Transmissible gastroenteritis virus (TGEV), and Porcine rotavirus (RV). The results showed positive for PEDV and negative for TGEV and RV . Phylogenetic analysis of the whole genomic sequence showed that it belonged to the GII-c subgroup and the S gene sequence belonged to the GII-b subgroup. As a comparison, the whole genome and S gene of CV777 belonged to the GI-a subgroup, and the whole genome and S gene of AJ1102 belonged to the GII-b subgroup. These results showed that a new genotype of PEDV had been prevalent in Shanghai and commercial vaccine strains did not provide complete protection due to genetic variation. Key words: Porcine epidemic diarrhea virus; phylogenetic analysis; genome; S gene2024,32(1):175-181康龙山1,2，于慧茹2，杨德全2，李鑫2，沈海潇2，杨显超2，王建2，徐丽娜1，葛菲菲2（1.河北工程大学生命科学与食品工程学院，邯郸056009；2.上海市动物疫病预防控制中心，上海201103）· 176 ·中国动物传染病学报2024年2月猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea, PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起的一种急性接触性传染病，主要引起仔猪发病，感染部位在小肠。

病毒样本分析实例

病毒样本分析实例0×01事件经过2016年2月26日，一个网络安全相关的QQ群内，一名用户分享了一份名为“网络安全宝典.chm”的电子书供大家下载，网络安全工程师Bfish自然地下载了这本电子书，打算简单翻阅后决定是否收藏。

当Bfish打开这个才12K大小的电子书时，感知到了计算机的异常行为，这让他意识到：这本电子书有问题。

在解开这份CHM文档后，网络安全工程师在一个html页面中找到了原因：这个电子书中的某个HTML页面内，嵌入了一段恶意代码，它可以下载一个PowerShell脚本并执行。

顺藤摸瓜，Bfish最终确认了这是一个针对特定人群，以盗取用户帐号密码、文档资料为目的恶意攻击事件。

这段CHM恶意代码如同幽灵一样被执行并作恶，故将此称之为幽灵电子书（ChmGhost）。

0×02主要危害通过电子书散播，攻击受众有很强的群体性，对特定人群发起攻击简直易如反掌，而且电子书“诱饵”更容易迷惑大众。

目前看到的攻击代码，主要的危害为窃取用户隐私：Windows账户信息和密码、各类应用程序的密码、计算机基本信息、屏幕截图、网络配置和Wi-Fi信息、各类文档，造成用户敏感信息和资料泄漏。

这些资料的泄漏伴随着商业机密泄漏的风险，后续或造成更大的损失。

另外，攻击时所用的恶意代码，无论是二进制还是脚本，几乎都来自网络下载，攻击可以随时开启和关闭，攻击手法、攻击目的也都可以变化，这个“后门”的潜在危害也相当之大。

2月26日发现的CHM的标题是网络安全相关的，并且在网络安全相关的QQ群内散播，表明攻击者的目标是网络安全从业和对网络安全感兴趣的、有一定计算机安全基础的群体，但就算如此，仅一天时间就已经有多名受害者，如果攻击者转到其他领域，受众群体应该会更没有感知能力，危害也将更大。

0×03攻击实施纵览0×04详细技术分析首先，CHM中使用了一种古老的方法—利用Internet.HHCtrl对象来运行任意命令行。