小鼠过氧化氢酶的制备与测定(10口腔)
过氧化氢酶实验报告
过氧化氢酶实验报告过氧化氢酶实验报告引言过氧化氢酶是一种重要的酶类，在生物体内发挥着重要的催化作用。
本次实验旨在通过观察过氧化氢酶催化过氧化氢分解的实验现象，探究其催化机理和影响因素。
实验方法1. 实验材料准备实验所需材料包括：过氧化氢酶溶液、过氧化氢溶液、磷酸盐缓冲液、甲酚酸溶液、酶标仪、试管、移液器等。
2. 实验步骤a. 首先，将磷酸盐缓冲液倒入试管中，制备一定浓度的缓冲液。
b. 然后，使用移液器向试管中加入一定量的过氧化氢溶液。
c. 接着，加入适量的过氧化氢酶溶液，注意控制酶溶液的浓度。
d. 在试管中加入甲酚酸溶液，用于观察反应的颜色变化。
e. 将试管放入酶标仪中，记录下反应开始后一段时间内的吸光度变化。
实验结果与讨论1. 实验结果在实验过程中，我们观察到了明显的颜色变化。
初始时，溶液呈现无色透明状态，随着反应进行，溶液逐渐变为深红色。
2. 实验讨论过氧化氢酶是一种催化剂，能够加速过氧化氢分解的反应。
该酶能够将过氧化氢分解为水和氧气，从而起到了去除有害物质的作用。
实验中的甲酚酸溶液则起到了指示剂的作用，通过颜色的变化可以直观地观察到反应的进行。
3. 影响因素a. 酶的浓度：酶的浓度对反应速率有明显影响。
当酶的浓度增加时，反应速率也会增加。
这是因为酶的浓度增加会导致更多的酶分子参与反应，从而加速反应的进行。
b. 底物浓度：底物浓度越高，反应速率越快。
因为底物浓度的增加会提供更多的底物分子，与酶分子发生反应，加快反应速率。
c. 温度：适宜的温度可以提高酶的催化活性，但过高的温度会使酶变性，从而影响酶的活性。
d. pH值：过氧化氢酶对pH值也有一定的适应性，不同的酶在不同的pH值下催化活性也会有所差异。
结论通过本次实验，我们了解了过氧化氢酶的催化机理和影响因素。
过氧化氢酶能够催化过氧化氢分解的反应，去除有害物质。
酶的浓度、底物浓度、温度和pH 值都会对反应速率产生影响。
进一步的研究可以探索更多的影响因素，并应用于实际生物医学领域，发挥过氧化氢酶的作用。
小鼠过氧化氢酶的制备与测定
前言过氧化氢酶是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物体内。
过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶, 约占过氧化物酶体酶总量的40%。
过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。
过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。
过氧化氢酶也被用于食品包装，防止食物被氧化。
过氧化氢酶(CAT)是一种酶类清除剂，又称为触酶，是以铁卟啉为辅基的结合酶。
它可促使H2O2分解为分子氧和水，清除体内的过氧化氢，从而使细胞免于遭受H2O2的毒害，是生物防御体系的关键酶之一。
CAT作用于过氧化氢的机理实质上是H2O2的歧化，必须有两个H2O2先后与CAT相遇且碰撞在活性中心上，才能发生反应。
H2O2浓度越高，分解速度越快。
几乎所有的生物机体都存在过氧化氢酶。
其普遍存在于能呼吸的生物体内，主要存在于植物的叶绿体、线粒体、内质网、动物的肝和红细胞中，其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机理。
CAT是红血素酶，不同的来源有不同的结构。
在不同的组织中其活性水平高低不同。
过氧化氢在肝脏中分解速度比在脑或心脏等器官快，就是因为肝中的CAT含量水平高。
过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。
过氧化氢酶也被用于食品包装，防止食物被氧化。
在纺织工业中，过氧化氢酶被用于除去纺织物上的过氧化氢，以保证成品是不含过氧化物的。
它还被用在隐形眼镜的清洁上：眼镜在含有过氧化氢的清洁剂中浸泡后，使用前再用过氧化氢酶除去残留的过氧化氢。
近年来，过氧化氢酶开始使用在美容业中。
一些面部护理中加入了该酶和过氧化氢，目的是增加表皮上层的细胞氧量。
本实验所提取的过氧化氢酶来源于小鼠，其分子量约为238KD，结构上由4个具有相同多肽链的亚基组成，是以铁卟啉为辅基的结合酶，在407nm波长下有特征性的吸收。
溶于水,几乎不溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机试剂，酸性环境下溶解度低易析出，最适温度为37℃，最适pH值约为7.8。
小鼠过氧化氢酶(CAT)ELISA检测试剂盒使用说明书
小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被过氧化氢酶（CAT）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶（CAT）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80U/ml 试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制
过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制过氧化物酶(POD)活性测定【实验原理】过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H0存在条件下，过氧化物酶能使愈创木22酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。
【实验试剂】愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L 磷酸缓冲液(pH6.0)、反应混合液[100mmol/L磷酸缓冲液(Ph6.0)50mL，加入愈创木酚28uL,加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢19uL，混合均匀保存在冰箱中]方法步骤】【(1)、粗酶液的提取称取小麦叶片0.25g，加20mmol/LKH2PO4 2.5mL，于研钵中研成匀浆，以4000r/min离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO4 2.5mL提取一次，全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液(酶活性过高，稀释10倍)。
(2)、酶活性的测定取试管3只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，另外三只中加入反应混合液3mL，稀释后的酶液1mL(如表1)，立即开启秒表，于分光光度计470nm波长下测量OD值，每隔1min读数一次(4min)。
以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD值增加0.01定义为一个活力单位。
表1 紫外吸收法测定POD酶活性配置表管号 S0(对照) S1(实验) S2(实验)反应混合液(ml) 3.0 3.0 3.0KH2PO4 (ml) 1.0 0.0 0.0酶液 (ml) 0.0 1.0 1.04.结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA 470 /[min ? g (鲜重) ]表示之。
也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位( u )表示。
, ， A V 470 T，，， 0 .0 1 V t FW 1POD总活性[u/g(FW)]=式中:POD总活性以酶单位每克鲜重表示。
小鼠肝脏过氧化氢酶的制备与测定
小鼠肝脏过氧化氢酶的制备与测定摘要：过氧化氢酶(Catalase) 是一种广泛存在于生物体内的氧化还原酶，是过氧化物酶体的标志酶尤其在动物的肝脏、肾脏、红细胞中含量较多，其生物学功能是催化细胞内H2O2分解，防止过多H2O2 对细胞的危害。
人工制备的过氧化氢酶可广泛应用于食品与乳制品业，造纸与印染业，农业与环保业，以及医疗卫生业等多领域。
过氧化氢酶分子量约为238KD，结构上由4个具有相同多肽链的亚基组成，是以铁卟啉为辅基的结合酶，在407nm波长下有特征性的吸收。
溶于水,几乎不溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机试剂，酸性环境下溶解度低易析出，最适温度为37℃，最适pH值约为7.8。
本实验以小鼠肝脏为原料，根据过氧化氢酶溶解性和大分子等特性，通过组织匀浆、盐析、透析、分子筛层析等步骤，提取纯化过氧化氢酶。
建立了一套适合一般实验室分离纯化过氧化氢酶的方法，并对制备的过氧化氢酶进行蛋白浓度、分子量、米氏常数等测定。
现报告如下：一、实验器材1、实验动物：成年雄性小鼠（河北医科大学实验动物中心提供）2、主要器材：托盘天平，组织捣碎机，离心管，H2050R高速冷冻离心机，CU600型电热恒温水箱，DYY-8L型电泳仪（北京市六一仪器厂），H2S-H水浴振荡器（哈尔滨市东联电子技术开发有限公司），垂直板型电泳装置，制冰机，4℃冰箱二、实验方法来6g；按1：pH4.0）,是在过氧化氢酶中加入适当浓度的中性盐溶液，破坏其水化膜，使其成盐析状态而沉淀下来，离心后可除去部分杂蛋白。
盐析法粗提过氧化氢酶：缓慢加入上清液体积0.06倍的0.5mol/L的硫酸钠溶液，冰浴搅拌1h，离心（4℃, 6500rpm, 10min），保留离心沉淀；加入4倍肝重（0.1mol /L pH7.8）的磷酸缓冲液手动玻璃匀浆器使沉淀溶解,离心（4℃, 4000rpm, 10min）,保留上清备用。
●透析是利用透析袋的半透过性，在一定透析条件下，使过氧化氢酶以不变性的沉淀形式析出，复溶后，可除去部分杂蛋白。
小鼠肝脏过氧化物酶制备与测定
小鼠肝脏过氧化物酶制备与测定摘要目的分离纯化过氧化氢酶，测定其相关性质。
方法采用匀浆、盐析、透析、层析等方法分离纯化过氧化氢酶，采用Lorry 法测定蛋白含量，SDS-PAGE法测定蛋白质相对分子质量，双倒数法测定酶的米氏常数。
结论相对分子质量为60.25kD，以过氧化氢为底物时酶的Km值为0.133mol/L，酶层析后的比活为0.686IU/mg。
关键词小鼠过氧化氢酶纯化米氏常数SDS-PAGE前言过氧化氢酶(Hydrogen Peroxidase)又名触酶(Catalase，CAT),是一种广泛存在于生物组织的氧化还原酶[1]。
过氧化氢酶是一种四聚体血晶素酶, 由四个相同四面体排列的亚基组成,每一个亚基相对分子质量约60000，每一个分子都包含有四个高铁血红素基团,分子量在240000左右[2]。
在人体内以肝和肾脏所含过氧化氢酶活性最高, 结缔组织活性最弱,其它组织如红细胞、脾、小肠、肌肉等均含有过氧化氢酶。
过氧化氢酶在细胞内主要与线粒体及过氧化物酶体结合, 在红细胞内呈溶解状态。
过氧化氢酶是一种与D－氨基酸氧化酶等一系列需氧脱氢酶相偶联的酶, 具有重要的生理功能。
过氧化氢酶能将细胞代谢所产生的毒性物质迅速加以清除, 从而起到和谷胱肽过氧化酶共同保护琉基酶、膜蛋白和解毒的作用。
近年来, 过氧化氢酶的活性测定被作为与肿瘤和抗衰老有关的酶学指标而受到关注。
[3]近年来，过氧化氢酶活性的测定被作为与肿瘤和抗衰老有关，蛋白质的分离纯化方法是生命科学领域关注的热点之一。
[4]1实验器材1.1实验动物昆明小鼠6只，雌雄不限，由河北医科大学动物实验中心提供。
1.2主要仪器5200型紫外分光光度计（上海元析仪器有限公司），UV-5200 冷冻离心机(湖南相依实验仪器开发有限公司)，BCD-185冰箱（青岛海尔公司），微量移液器，40W匀浆器（江苏国华仪器厂），电泳仪（北京六一）2实验方法2.1过氧化氢酶的分离提取颈椎脱臼法处死小鼠(6只），取肝脏；加入51mL预冷匀浆缓冲液(0.05mol/L,pH4.0醋酸缓冲液,23.5％乙醇），用组织捣碎机匀浆3min。
过氧化氢酶活力的测定实验报告
一、实验目的1. 了解过氧化氢酶的作用和特性。
2. 掌握过氧化氢酶活力的测定原理和方法。
3. 通过实验，验证过氧化氢酶在催化过氧化氢分解过程中的活力。
二、实验原理过氧化氢酶（Catalase，简称CAT）是一种广泛存在于生物体内的酶，其主要功能是催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2），从而降低过氧化氢对生物体的毒害作用。
过氧化氢酶活力的测定通常通过测量在一定时间内过氧化氢的分解量或氧气的生成量来进行。
本实验采用碘量法测定过氧化氢酶活力。
碘量法的基本原理是：在一定条件下，过氧化氢酶将过氧化氢分解，生成氧气，使溶液中的碘离子（I-）氧化成碘单质（I2）。
然后，用硫代硫酸钠滴定溶液中的碘单质，根据消耗的硫代硫酸钠的量计算出过氧化氢的分解量，从而推算出过氧化氢酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如青菜、萝卜叶等）、蒸馏水、碘液、硫代硫酸钠溶液、盐酸、氢氧化钠溶液、0.1 mol/L过氧化氢溶液等。
2. 实验仪器：分析天平、研钵、漏斗、容量瓶、移液管、滴定管、锥形瓶、水浴锅、计时器等。
四、实验步骤1. 酶液提取：- 称取0.5 g新鲜植物叶片，置于研钵中，加入2 mL pH 7.0磷酸缓冲液和少量石英砂，研磨成匀浆。
- 将匀浆转入25 mL容量瓶中，用磷酸缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容至刻度。
- 将容量瓶置于4℃冰箱中静置10 min，取上清液即为过氧化氢酶粗提液。
2. 测定过氧化氢酶活力：- 取4个锥形瓶，分别编号为1、2、3、4。
- 向1、2、3号锥形瓶中分别加入0.5 mL过氧化氢酶粗提液，向4号锥形瓶中加入0.5 mL蒸馏水。
- 向各锥形瓶中分别加入1 mL 0.1 mol/L过氧化氢溶液，立即开始计时。
- 当加入0.1 mL 1 mol/L盐酸时，停止计时，此时溶液中剩余的过氧化氢量即为酶促反应所分解的过氧化氢量。
- 向各锥形瓶中加入1 mL碘液，充分振荡，静置3 min。
过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书（钼酸铵法）
过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书（钼酸铵法）微量法货号：BC4785规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体75mL×1瓶4℃保存试剂一液体15mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2瓶4℃保存标准品液体0.5mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前取1瓶试剂二加入12.5mL蒸馏水，充分溶解，用不完的试剂4℃保存一周。
2、30μmol/mL标准液的配制：标准品置于试剂瓶内EP管中，使用前需先离心。
本试剂盒所提供标准品为1mmol/mL H2O2标准溶液，临用前取0.15mL标准品加入4.85mL试剂一稀释或者根据样本量按照比例配制，充分混匀，即为30μmol/mL标准液，现配现用。
产品说明：CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。
H2O2可与钼酸铵反应形成稳定的黄色复合物，在405nm处有强烈吸收峰，且其吸光值大小与过氧化氢浓度成正比。
通过测定反应体系中剩余的H2O2量，得出被CAT催化分解的H2O2量，进而反映CAT的活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、恒温水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备：a、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔9s，重复30次）；8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
过氧化氢酶活力的测定实验报告
过氧化氢酶活力的测定实验报告竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。
h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。
因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。
本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。
一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。
在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。
【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。
【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。
待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。
2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。
(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。
沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。
过氧化氢酶活性测定实验报告
过氧化氢酶活性测定实验报告实验目的，通过测定过氧化氢酶活性，探究不同条件下过氧化氢酶的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供实验数据支持。
实验原理，过氧化氢酶是一种重要的酶类，在生物体内起着重要的氧化还原作用。
本实验采用比色法测定过氧化氢酶活性，其原理是过氧化氢酶催化过氧化氢分解成水和氧气，过氧化氢酶活性与生成的氧气量成正比。
实验材料与方法，实验中所需材料包括过氧化氢酶、过氧化氢、磷酸盐缓冲液、吡啶甲酸钠盐等。
首先，按照一定比例将过氧化氢酶和过氧化氢混合，然后加入磷酸盐缓冲液和吡啶甲酸钠盐，使混合液在一定温度下进行反应。
接着，通过比色法测定生成的氧气量，进而计算出过氧化氢酶的活性。
实验结果与分析，在不同温度、pH值、底物浓度等条件下，测得过氧化氢酶的活性数据。
通过对比分析不同条件下的活性数据，发现过氧化氢酶在不同条件下呈现出不同的活性变化规律。
在温度较低时，过氧化氢酶活性较低；在酸性环境下，过氧化氢酶活性受到抑制；随着底物浓度的增加，过氧化氢酶活性呈现出逐渐增加的趋势。
结论与讨论，通过本实验，我们得出了过氧化氢酶活性与温度、pH值、底物浓度等因素之间的关系。
这些结果对于深入研究过氧化氢酶的功能机制，以及在生物医学、生物工程等领域的应用具有一定的指导意义。
同时，我们也发现过氧化氢酶在不同条件下表现出不同的活性变化规律，这为进一步探究过氧化氢酶的调控机制提供了重要的实验数据支持。
综上所述，本实验通过测定过氧化氢酶活性，揭示了过氧化氢酶在不同条件下的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供了实验数据支持。
希望本实验结果能够为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
小鼠肾脏中抗氧化酶的表达
小鼠肾脏中抗氧化酶的表达肾脏是人体内一种非常重要的器官，其主要功能为排泄体内废物和调节体内电解质的平衡。
与此同时，肾脏也是人体内一个重要的抗氧化系统。
抗氧化剂是一种与自由基相互作用的物质，可以减少由于自由基过量引起的细胞损伤和氧化应激。
小鼠肾脏中的抗氧化酶也是这种抗氧化系统的一部分。
本文将简要介绍小鼠肾脏中的抗氧化酶的表达情况。
小鼠肾脏中的抗氧化酶种类小鼠肾脏中主要存在三种抗氧化酶，分别是超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）。
其中，SOD的主要作用是将细胞内的超氧自由基转化为较为稳定的分子氧和过氧化氢；CAT能够将细胞内的过氧化氢转化为氧和水；GPx主要作用是将细胞中的有机过氧化物转化为各种醇和水。
小鼠肾脏中的SOD表达情况小鼠肾脏中存在三种不同的SOD，分别是Cu/ZnSOD、MnSOD和EcSOD。
其中Cu/ZnSOD主要存在于细胞质和细胞外基质中；MnSOD存在于线粒体中；EcSOD则存在于细胞外基质中。
研究显示，小鼠肾脏中SOD的表达与细胞坏死和肾脏疾病有关。
具体来说，SOD的表达水平也与年龄、性别等因素有关。
小鼠肾脏中的CAT表达情况小鼠肾脏中CAT的表达量较低，但也具有一定的重要性。
一些研究显示小鼠肾脏CAT的表达与肾脏疾病、肾损伤等相关。
小鼠肾脏中的GPx表达情况小鼠肾脏中GPx的主要类型是GPx1、GPx3和GPx4。
研究显示小鼠肾脏之间的GPx的表达量差异较大，不同类型的GPx对于小鼠的生长发育、肾功能、细胞周期等都具有一定的影响。
小鼠肾脏中抗氧化酶对于肾脏疾病的影响抗氧化酶对于小鼠肾脏疾病的产生具有一定的影响。
研究表明，在肾脏疾病的过程中，氧化应激的程度会不断增高，导致小鼠肾脏中抗氧化酶的表达水平不断增加。
同时，抗氧化酶的表达也会对小鼠肾脏疾病的治疗产生影响。
结论综上所述，小鼠肾脏中抗氧化酶的种类较多，包括了SOD、CAT和GPx等多种类型。
过氧化氢酶测定方法
过氧化氢酶测定(容量法)过氧化氢酶也叫接触酶，能促进过氧化氢对各种化合物的氧化。
几乎在所有的生物体内部有过氧化氢酶，在某些细菌里，其数量约为细胞干重的1％。
土壤的过氧化氢酶活性，与土壤呼吸强度和土壤微生物活动相关，在一定程度上反映了土壤微生物学过程的强度。
原理过氧化氢酶的测定有测压法和滴定法。
测压法是测定过氧化氢分解时析出的氧量(反应过氧化氢酶式为：H2O2+H2O O2+H2O，方法简单，但准确性较差。
后者则是定量滴定酶促反应后剩余的过氧化氢量，反应式为2KMnO4+5H2O2+3H2SO42MnSO4+K2SO4+8H2O+5O2，此法测定结果较好。
试剂(1) 0.3% H2O2：按1：100将30％的H2O2用水稀释。
(2) 3N H2SO4（也就是1.5mol/l H2SO4）：以配1000ml为例，需要的浓硫酸的体积为1.5*98.08/1.83=80.39ml，可以取80ml。
KMnO4的分子量=158.026,当量=31.605.高锰酸钾水溶液受到水中还原物和杂质以及受日光直射等影响能分解析出棕色的含水的二氧化锰沉淀，而有浓度的改变。
因此在配制其标准溶液时必须使用棕色瓶盛装，以防日光直射作用.配制后并应放置一段时间，待与水中还原物完全作用后，滤去沉淀，然后进行标定，才能得到基本稳定不易变化的标准溶液。
(3) 0.1N KMnO4溶液：称取化学纯高锰酸钾3.161克，溶于l升无CO2蒸馏水（沸水）中，溶解后,在暗处放置一周, 然后用虹吸管将上部澄清溶液移于棕色瓶中(或用玻璃棉滤过)保存，以备标定.注：C(1/5 KMnO4)=0.1mol/l表示的就是0.1N KMnO4溶液。
0.1N KMnO4溶液标定（GB/T601-2002）称取0.2g（准至0.0001g）于105~110℃烘至恒重的基准草酸钠。
溶于100mL（8+92）硫酸溶液中，用配制好的高锰酸钾溶液[c（1/5 KMnO4）=0.1mol/l]滴定，近终点时加热至65℃，继续滴定至溶液呈粉红色保持30s，同时作空白试验（不加草酸钠，其他一样）。
过氧化氢酶值的测定实验报告
过氧化氢酶值的测定实验报告一、实验目的过氧化氢酶（CAT）广泛存在于生物体内，能催化过氧化氢分解为水和氧气，从而避免过氧化氢对细胞的毒害作用。
本次实验旨在掌握测定过氧化氢酶值的方法和原理，了解不同样品中过氧化氢酶的活性差异。
二、实验原理过氧化氢酶催化过氧化氢分解的反应式为：2H₂O₂ → 2H₂O ＋ O₂在一定条件下，反应速度与酶浓度成正比。
通过测量单位时间内过氧化氢的减少量或氧气的生成量，可以计算出过氧化氢酶的活性。
本次实验采用碘量法测定过氧化氢酶值。
在酸性条件下，过氧化氢与碘化钾反应生成碘，然后用硫代硫酸钠标准溶液滴定碘，根据硫代硫酸钠的用量计算过氧化氢的剩余量，从而间接求出过氧化氢酶分解的过氧化氢量，进而计算出过氧化氢酶值。
三、实验材料与仪器1、材料新鲜的植物叶片（如菠菜叶）、动物肝脏（如猪肝）、过氧化氢溶液（3%）、碘化钾溶液（10%）、硫酸溶液（2mol/L）、淀粉溶液（05%）、硫代硫酸钠标准溶液（001mol/L）。
2、仪器研钵、离心机、移液管、容量瓶、滴定管、锥形瓶、恒温水浴锅。
四、实验步骤1、酶液提取（1）植物叶片：称取5g 新鲜的植物叶片，洗净剪碎后放入研钵中，加入少量石英砂和 10mL 磷酸缓冲液（pH70），研磨成匀浆。
将匀浆倒入离心管中，在 4000r/min 下离心 15min，上清液即为酶液。
（2）动物肝脏：称取5g 新鲜的动物肝脏，用生理盐水洗净后剪碎，放入研钵中，加入少量石英砂和 10mL 磷酸缓冲液（pH70），研磨成匀浆。
将匀浆倒入离心管中，在 4000r/min 下离心 15min，上清液即为酶液。
2、反应取 3 个锥形瓶，分别标记为空白对照（A）、样品 1（B）和样品 2（C）。
（1）空白对照（A）：加入 2mL 磷酸缓冲液（pH70）、2mL 过氧化氢溶液（3%）和 2mL 碘化钾溶液（10%），摇匀后立即放入 25℃恒温水浴锅中保温 5min。
（2）样品 1（B）：加入 2mL 酶液（植物叶片提取液）、2mL 过氧化氢溶液（3%）和 2mL 碘化钾溶液（10%），摇匀后立即放入 25℃恒温水浴锅中保温 5min。
过氧化氢酶的实训报告
一、实训背景过氧化氢酶（Catalase，CAT）是一种广泛存在于生物体内的酶，具有催化分解过氧化氢（H2O2）的功能，防止生物体内因过氧化氢积累而造成的氧化损伤。
随着生物科技和生物工程的快速发展，过氧化氢酶在食品、医药、环保等领域得到了广泛应用。
为了深入了解过氧化氢酶的性质及其应用，我们开展了此次实训。
二、实训目的1. 了解过氧化氢酶的基本性质、催化机理及其在生物体内的作用。
2. 掌握过氧化氢酶的提取、分离和纯化方法。
3. 学习过氧化氢酶在不同领域的应用技术。
4. 提高动手操作能力和科研思维。
三、实训内容1. 过氧化氢酶的基本性质与催化机理通过查阅文献资料，我们了解到过氧化氢酶是一种含铁的金属酶，由四个亚基组成，每个亚基含有一个铁离子。
在催化过程中，过氧化氢酶将H2O2分解为水和氧气，反应式如下：2H2O2 + 2Fe2+ → 2H2O + 2Fe3+ + O2↑2. 过氧化氢酶的提取、分离和纯化实训中，我们采用了以下方法提取、分离和纯化过氧化氢酶：（1）植物材料的选择：选取新鲜、成熟的植物叶片作为提取材料。
（2）提取方法：将植物叶片研磨成浆，加入一定量的缓冲液，搅拌均匀，进行酶的提取。
（3）分离方法：采用离心、过滤等手段，将提取液中的固体杂质去除。
（4）纯化方法：利用离子交换层析、凝胶过滤等方法，进一步纯化过氧化氢酶。
3. 过氧化氢酶的应用（1）食品工业：过氧化氢酶可应用于食品保鲜、防腐等方面。
例如，在肉制品加工过程中，过氧化氢酶可抑制细菌的生长，延长食品的保质期。
（2）医药领域：过氧化氢酶具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用，可应用于药物研发和治疗。
（3）环保领域：过氧化氢酶可催化分解有机污染物，具有降解废水、处理废气等环保功能。
四、实训总结通过本次实训，我们掌握了以下知识和技能：1. 过氧化氢酶的基本性质、催化机理及其在生物体内的作用。
2. 过氧化氢酶的提取、分离和纯化方法。
3. 过氧化氢酶在不同领域的应用技术。
遗传性无过氧化氢酶血症(小鼠)动物模型
遗传性无过氧化氢酶血症（小鼠）动物模型人的无过氧化氢酶血症（acatalasemia）属遗传性酶缺乏症，1948年由日本高原氏首次发现。
患者出现齿进行性坏疽性炎症，常波及到上颚腔、鼻腔。
病人血液中的过氧化氢酶活性显著低下，仅及正常值的1/500～1/1000。
通常想象，患本本病者除血液外全身所有组织的过氧化氢酶活性也应该是很低的，但事实上并非如此，因有些病例未做剖检，是否是无过氧化氢酶血症，还不能妄下结论。
本病对过氧化氢的血液学反应是特异性的，它不像正常血液那样有起泡现象，而是在瞬间变成暗红色，即血液中缺乏过氧化氢酶，过氧化氢过剩会使亚铁血红蛋白受到破坏，血红蛋白直接变成高铁血红蛋白故而呈现出暗红色。
本病属常染色体隐性遗传性疾病，80%患者的父母为近亲结婚。
据在此之前的调查，目前已报道过百余例的无过氧化氢酶血症，多发于日本，白种人中较为少见。
患有本病的人与正常人结婚所生的子女是无过氧化氢酶血症基因的杂合体，血液中过氧化氢酶活性只是正常人的1/2，但对过氧化氢的反应能力几乎和正常人一样，我们称此为低过氧化氢酶血症（hypocata-lasemia）。
日本人中有0.23%的发病率，即使同为无过氧化氢血症，瑞士人和日本人的发病性状也有明显差别。
作为疾病模型，小鼠的过氧化氢酶血症的表现更接近于日本患者的临床表现。
也曾发现伴有葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase，G-6-PD）缺乏的无过氧化氢酶血症，它为红细胞内己糖一磷酸旁路代谢中常见的酶缺乏症，是一种不完全显性遗传疾病。
一、发现经过Feinsteill用小鼠开发了无过氧化氢酶血症的动物模型。
他在研究过氧化氢酶在癌症中的作用时要利用动物模型，从日本Oak Ridge实验室的Russell得到12 300多只曾受6 Gy射线照射的小鼠幼仔，用自己设计的过硼酸法进行筛选，从中得到低过氧化氢酶血症的小鼠变异种，经反复近交交配，最后得到1只无过氧化氢酶血症纯合体小鼠C b s（血液中的过氧化氢酶活性仅为10 perborate units/mL，不及正常值的1%）和4只低过氧化氢酶症血症的小鼠（血液中的过氧化氢酶活性为正常值的20%），分别命名为C c S、C d S、C e S、C f S。
过氧化氢酶实验报告
一、实验目的1. 了解过氧化氢酶的生物学功能和催化特性。
2. 掌握过氧化氢酶活力测定的原理和方法。
3. 通过实验验证过氧化氢酶对过氧化氢的催化分解作用。
二、实验原理过氧化氢酶（Catalase）是一种广泛存在于生物体内的酶，能够催化过氧化氢（H2O2）分解成水（H2O）和氧气（O2）。
该反应在生物体内具有重要作用，可以清除细胞内的有害过氧化氢，保护细胞免受氧化损伤。
本实验采用分光光度法测定过氧化氢酶的活力，通过测定在一定时间内过氧化氢的分解速率来反映酶的活力。
反应方程式如下：2H2O2 → 2H2O + O2三、实验材料1. 过氧化氢酶溶液2. 过氧化氢溶液3. 0.1mol/L的盐酸溶液4. 0.1mol/L的氢氧化钠溶液5. 0.1mol/L的碘化钾溶液6. 0.1mol/L的淀粉溶液7. 酶活力测定仪8. 移液器9. 试管10. 烧杯11. 滴定管四、实验步骤1. 准备工作（1）将0.1mol/L的盐酸溶液、氢氧化钠溶液、碘化钾溶液和淀粉溶液分别配制好。
（2）准备实验所需仪器和试剂。
2. 实验操作（1）取一只试管，加入2ml的过氧化氢酶溶液。
（2）向试管中加入1ml的0.1mol/L的盐酸溶液，立即启动酶活力测定仪。
（3）在测定过程中，每隔1分钟取1ml反应液，用滴定管滴加碘化钾溶液至溶液颜色刚好变为蓝色，记录所用碘化钾溶液的体积。
（4）重复步骤（2）和（3），进行三次平行实验。
3. 数据处理（1）根据实验数据，绘制过氧化氢分解速率与时间的关系曲线。
（2）计算酶活力，公式如下：酶活力（U/mg）= （V2 - V1）/（t2 - t1）× 1000 / 0.1其中，V1为碘化钾溶液的消耗量，V2为三次平行实验的平均消耗量，t1为第一次实验的测定时间，t2为最后一次实验的测定时间。
五、实验结果与分析1. 实验结果根据实验数据，绘制过氧化氢分解速率与时间的关系曲线，如图所示。
2. 结果分析从实验结果可以看出，随着反应时间的延长，过氧化氢分解速率逐渐加快，说明过氧化氢酶具有催化分解过氧化氢的作用。
过氧化氢酶测定方法
过氧化氢酶测定方法概述过氧化氢酶（catalase）是一种存在于细胞中的重要酶类，它能够催化过氧化氢（H2O2）的分解为水和氧气。
过氧化氢是一种有毒物质，如果在细胞内积累过多，会对细胞结构和功能造成损害。
因此，测定过氧化氢酶活性对于研究细胞代谢和抗氧化能力具有重要意义。
本文将介绍一种常用的过氧化氢酶测定方法——碳酸盐法。
实验原理碳酸盐法是通过测定酶催化下H2O2分解所产生的O2释放量来间接评估过氧化氢酶活性的方法。
具体原理如下：1.过程1：H2O2 + 酶→ H2O + O2 过程1中，过氧化氢被过氧化氢酶催化分解为水和氧。
2.过程2：HCO3- + H+ → CO2↑ + H2O 过程2中，碳酸根离子（HCO3-）与酸反应生成二氧化碳（CO2）和水。
3.过程3：CO2 + H2O → H2CO3 过程3中，二氧化碳与水反应生成碳酸。
4.过程4：H2CO3 → H+ + HCO3- 过程4中，碳酸分解为氢离子（H+）和碳酸根离子（HCO3-）。
5.总反应：H2O2 → O2↑ + 2H+ 将过程1、过程2、过程3和过程4综合起来，可以得到总反应的方程式。
根据上述原理，我们可以通过测定产生的气体量（即释放的O2）来间接测定过氧化氢酶的活性。
实验步骤准备工作1.配制试剂：a.磷酸盐缓冲液（pH 7.0），用磷酸二氢钠和二氢磷酸钠按一定比例配制而成。
b.碳酸盐溶液，用纯净水溶解固体碳酸钠而成。
2.准备样品：a.收集需要测定的样品，如细胞提取物或组织液。
b.需要对样品进行稀释，以确保酶活性在可测范围内。
实验操作1.在一组试管中分别加入以下试剂：–试管A：磷酸盐缓冲液（pH 7.0）1 mL–试管B：磷酸盐缓冲液（pH 7.0）1 mL + 样品1 mL–试管C：磷酸盐缓冲液（pH 7.0）1 mL + 样品1 mL + 过氧化氢溶液1 mL2.将所有试管置于恒温水浴中，在37°C下预热5分钟。
过氧化氢酶活力的测定实验报告
过氧化氢酶活力的测定实验报告
实验目的，通过本次实验，我们旨在测定过氧化氢酶的活力，并探究影响酶活力的因素。
实验原理，过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，其活力可通过测定其催化分解过氧化氢的速率来反映。
实验中，我们利用底物过氧化氢与过氧化氢酶反应生成氧气和水的特性，通过测定氧气释放速率来确定过氧化氢酶的活力。
实验步骤：
1. 制备过氧化氢酶活性测定液，将过氧化氢酶溶液与过氧化氢底物混合，并在一定温度下反应一段时间，然后停止反应并测定氧气释放速率。
2. 测定氧气释放速率，利用气体收集装置，将释放的氧气收集起来，并通过测定氧气体积的变化来计算出氧气释放速率。
3. 计算过氧化氢酶活力，根据氧气释放速率，利用相关公式计算出过氧化氢酶的活力。
实验结果与分析：
我们进行了多次实验，并测定了不同浓度的过氧化氢酶的活力。
通过实验数据的分析，我们发现过氧化氢酶活力与其浓度呈正相关关系，即随着过氧化氢酶浓度的增加，其活力也随之增加。
这与酶学理论相符合，因为酶的活性与其浓度有密切关系。
结论：
通过本次实验，我们成功测定了过氧化氢酶的活力，并得出了过氧化氢酶活力与浓度的正相关关系。
这为进一步研究酶活力的影响因素提供了重要参考。
同时，本实验也验证了过氧化氢酶活力测定方法的可行性和准确性。
总结：
过氧化氢酶活力的测定是酶学研究中的重要内容之一，通过本次实验，我们不仅熟悉了过氧化氢酶活力的测定方法，还加深了对酶活力与浓度关系的理解。
希望本实验能为相关领域的研究提供一些借鉴和参考。
小鼠肝脏过氧化氢酶的制备及测定
实验：小鼠肝脏过氧化氢酶的制备与测定1：《小鼠肝脏过氧化氢酶的制备与测定》实验背景资料过氧化氢酶(Catalase) 是一种广泛存在于生物体内的氧化还原酶，尤其在动物的肝脏、肾脏、红细胞中含量较多，其生物学功能是催化细胞内H2O2分解，防止过多H2O2对细胞的危害。
人工制备的过氧化氢酶可广泛应用于食品与乳制品业，造纸与印染业，农业与环保业，以及医疗卫生业等多领域。
小鼠肝脏过氧化氢酶分子量约为238KD，结构上由4个具有相同多肽链的亚基组成，是以铁卟啉为辅基的结合酶，在407nm波长下有特征性的吸收。
溶于水,几乎不溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机试剂，酸性环境下溶解度低易析出，最适温度为37℃，最适pH值约为7.8。
本实验以小鼠肝脏为原料，根据过氧化氢酶溶解性和大分子等特性，通过组织匀浆、盐析、透析、分子筛层析等步骤，提取纯化过氧化氢酶，并对制备的过氧化氢酶进行蛋白浓度、分子量、米氏常数等测定。
2、3. 实验目的熟悉并掌握生化四大技术—离心、层析、比色、电泳。
熟悉并掌握分离纯化小鼠过氧化氢酶和测定其含量的技术和方法。
4. 实验原理匀浆原理：分离纯化某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性，所以要根据所提取蛋白质的性质采用适当的方法将组织和细胞破碎。
过氧化氢酶在乙醇、氯仿等有机溶剂中溶解度很小，而脂质在有机溶剂中溶解度较大,通过加入有机溶剂可实现过氧化氢酶与脂质的分离。
过氧化氢酶在乙醇、氯仿等有机溶剂中稳定性好，不易变性，而某些杂蛋白在有机溶剂中稳定性差，容易变性。
根据上述原理选择0.05mol/L，pH4.0醋酸-乙醇缓冲液以及氯仿作为匀浆缓冲液，通过匀浆法破碎肝组织细胞，匀浆液离心后脂质分配到有机相中，部分杂蛋白则沉淀下来，而过氧化氢酶主要存在于上清液中，分离出上清液即获得过氧化氢酶的粗提液。
盐析原理：蛋白质在高浓度盐溶液中由于水化膜被破坏而溶解度降低。
通过向过氧化氢酶粗提液中加入适当浓度的中性盐,使过氧化氢酶呈盐析状态,而部分杂蛋白呈盐溶状态, 离心后过氧化氢酶主要存在于沉淀中，弃去上清收集沉淀，即可实现过氧化氢酶与部分杂蛋白的分离。
小鼠组织中过氧化氢酶的活性与年龄的关系
作者 简介 ： 孔德 胜（ ９９一） 女 ， １８ ， 汉族 ， 河北医科 大学大学生创新 性实验计划项 目小组 负责人 ； 通讯 作者 ： 高 嫒， ， 女 汉族 ， 讲师 ， 主要从事生物化学与分子生物学教学与研究 ， — ｉ：ａ２０ ＠１３ ｃｎ。 Ｅｍａ ｉａ０ ２ ６ ． ｏｌ ｌ
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变 化 的研 究 文 献 较 少 。 本 实 验 以小 鼠 为 研 究 对 象 ， 采 用 高 锰 酸 钾 滴 定 法 测 定 １月 龄 、 ４月 龄 、８月 龄 小 鼠 ｌ 肝 、 、 、 、 、 、 组 织 中过氧 化氢 酶 的活性 ， 肾 肺 心 脾 胃 脑 以 了 解 小 鼠各 组 织 中 过 氧 化 氢 酶 的 活 性 与 年 龄 的 关 系 ，
摘 要： 为观 察 小 鼠组 织 中过 氧 化 氢 酶 的 活 性 与 年 龄 的 关 系 ， 用 高 锰 酸 钾 滴 定 法 测 定 不 同年 龄 （ 、 、８月龄 ） 采 １４ １ 小
鼠肝 、 肺 、 、 、 脑组织 中过氧化氢酶 的活性 。结果显 示 ： 肾、 心 脾 胃、 小鼠过氧化 氢酶在不 同组 织中活性 不同， 活性 高低 顺序基 本表现为 ： ＞肾 ＞肺 ＞心 、 、 ＞脑 ； 肝 脾 胃 小鼠肺 、 、 、 脑各 组织 中过氧 化氢酶 的活性在 １— 心 脾 胃、 ４月龄 问随
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小鼠肝脏过氧化氢酶的制备与测定学院：口腔医学院班级：10级口腔本科指导老师：***实验人员：师艳伟 10011040015李东 10011040021代鑫鹏 10011040024邢栋 10011040022一、实验背景资料1. 实验背景资料过氧化氢酶(Catalase) 是一种广泛存在于生物体内的氧化还原酶，尤其在动物的肝脏、肾脏、红细胞中含量较多，其生物学功能是催化细胞内H2O2分解，防止过多H2O2对细胞的危害。
人工制备的过氧化氢酶可广泛应用于食品与乳制品业，造纸与印染业，农业与环保业，以及医疗卫生业等多领域。
小鼠肝脏过氧化氢酶分子量约为238KD，结构上由4个具有相同多肽链的亚基组成，是以铁卟啉为辅基的结合酶，在407nm波长下有特征性的吸收。
溶于水，几乎不溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机试剂，酸性环境下溶解度低易析出，最适温度为37℃，最适pH值约为7.8。
本实验以小鼠肝脏为原料，根据过氧化氢酶溶解性和大分子等特性，通过组织匀浆、盐析、透析、分子筛层析等步骤，提取纯化过氧化氢酶，并对制备的过氧化氢酶进行蛋白浓度、分子量、米氏常数等测定。
2. 实验方案3. 实验目的熟悉并掌握生化四大技术—离心、层析、比色、电泳。
熟悉并掌握分离纯化小鼠过氧化氢酶和测定其含量的技术和方法。
4. 实验原理匀浆原理：分离纯化某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性，所以要根据所提取蛋白质的性质采用适当的方法将组织和细胞破碎。
过氧化氢酶在乙醇、氯仿等有机溶剂中溶解度很小，而脂质在有机溶剂中溶解度较大,通过加入有机溶剂可实现过氧化氢酶与脂质的分离。
过氧化氢酶在乙醇、氯仿等有机溶剂中稳定性好，不易变性，而某些杂蛋白在有机溶剂中稳定性差，容易变性。
根据上述原理选择0.05mol/L，pH4.0醋酸-乙醇缓冲液以及氯仿作为匀浆缓冲液，通过匀浆法破碎肝组织细胞，匀浆液离心后脂质分配到有机相中，部分杂蛋白则沉淀下来，而过氧化氢酶主要存在于上清液中，分离出上清液即获得过氧化氢酶的粗提液。
盐析原理：蛋白质在高浓度盐溶液中由于水化膜被破坏而溶解度降低。
通过向过氧化氢酶粗提液中加入适当浓度的中性盐,使过氧化氢酶呈盐析状态,而部分杂蛋白呈盐溶状态，离心后过氧化氢酶主要存在于沉淀中，弃去上清收集沉淀，即可实现过氧化氢酶与部分杂蛋白的分离。
透析原理：采用20%乙醇、0.1mol/L pH4.7醋酸缓冲液、0.1mol/L NaCl 溶液为透析液，对产物进行透析处理。
在该透析条件下，过氧化氢酶溶解度变小，以沉淀形式析出，但不变性。
透析过夜后离心，过氧化氢酶主要存在于沉淀中，但沉淀中也可能含有少量变性的杂蛋白。
选择0.1mol/L pH7.8磷酸缓冲液复溶沉淀，则过氧化氢酶溶解，而变性的杂蛋白不能溶解，从而实现过氧化氢酶与部分杂蛋白的分离。
层析原理：凝胶层析法主要根据混合物中分子大小不同的各种物质，随流动相流经作为固定相的凝胶层析柱时，各种物质分子扩散移动速度不同使混合物中各种物质得到分离的技术。
采用sephadexG-200葡聚糖凝胶层析柱可以实现过氧化氢酶与其他分子量杂蛋白的分离，通过监测洗脱液在407nm （过氧化氢酶特征性吸收波长）和280nm 波长下的光吸收值变化，合并收集OD407nm 和OD280nm 重叠峰值管，即可获得纯化后的过氧化氢酶。
Lowry 法原理：蛋白质中的酪氨酸等与酚试剂之磷钼酸、磷钨酸作用产生蓝色化合物，其颜色深浅与蛋白质含量成正比。
福林—酚法测定蛋白质可分为两个步骤：1.在碱性溶液中，蛋白质与铜离子发生反应：蛋白质蛋白质-→++Cu Cu 22.Cu-蛋白质使试剂中的磷钨酸-磷钼酸还原成为蓝色化合物，测定光吸收值就可以推算出蛋白质的含量。
试剂中的碳酸钠有缓冲作用，使溶液的pH 保持在10左右，显色最深。
福林-酚法灵敏度高、蛋白质浓度测定范围是25～250μg/ml 。
但此法实际上是蛋白质中酪氨酸和色氨酸等与试剂的反应，因此它受蛋白质氨基酸组成的影响，即不同蛋白质中氨基酸组成的不同会使显色强度有所差别；此外，样品中酚类及柠檬酸的干扰会使结果偏高。
低浓度的尿素（约0.5%左右）、胍（0.5%左右）、硫酸钠（1%）、硝酸钠（1%）、三氯醋酸（0.5%）、乙醇（5%）、丙酮（0.5%）对显色无影响，上述物质浓度高时必须做校正曲线。
SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法原理：SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法是在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠，则蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于它的相对分子质量（Mr ），而与所带电荷和形状无关。
在一定条件下，蛋白质的相对分子量（Mr ）与电泳迁移率间的关系，可用下式表示：)10(6m K Mr -= bm k bm k Mr -=-=1lg lg式中：Mr 为蛋白质的相对分子量；k ，k 1为常数，b 为斜率；m 为迁移率。
因此，要测定某个蛋白质的Mr ，只需比较它和一系列已知Mr 的蛋白质在SDS-凝胶电泳时的迁移率就可以了。
过氧化氢酶米氏常数测定原理：（方法学原理）：（反应学原理）O H O SO K MnSO SO H O H O KM KMnO O O H O H 22424422244222285235n 2滴定剩余的用22+++→++↓+→↑ 在酸性环境中（硫酸）紫红色→滴定终点为微红色，记录滴定用的ml 数，取平均值，计算H 2O 2准确的摩尔浓度。
求出反应前后H 2O 2的浓度差及反应的速度（v ）。
以][1s 为横坐标，v 1为纵坐标作图可求出H 2O 2酶的Km 值。
二、实验操作（一）组织匀浆法制备过氧化氢酶粗提液【器材】1、动物：成年小鼠2、器材：手套、镊子，剪刀，肾盘，冰袋，电子天平，托盘天平，组织捣碎机，10mL 匀浆管，冰浴盒，吸量管，滴管，10ml 、50mL 量筒，100mL 烧杯，50mL 锥形瓶，玻璃棒，离心管，离心机，制冰机，4℃冰箱，纱布，滤纸3、试剂：0.05mol/L醋酸-乙醇（23.5％）缓冲液，pH4.0；氯仿【方法】1、颈椎脱臼法处死小鼠（6只），取肝脏（按6g计算，不称重）；2、加入肝重8.5倍体积（51ml）的预冷匀浆缓冲液（0.05mol/L, pH4.0醋酸缓冲液,23.5％乙醇，），用组织捣碎机匀浆1-3min（三组合并一块匀浆，快慢交替使用）。
【留样】不离心，取200ul匀浆液留样，放-20o C 保存。
3、冰浴下缓慢滴加肝重0.5倍体积（3ml）的氯仿（边加边搅拌），再次匀浆30s-1min；匀浆液离心，4℃，7500rpm，30min后，弃沉淀，收获上清液约44ml于100ml锥形瓶中。
4、取匀浆后上清液120uL，加入40 uL 4×电泳上样Buffer，沸水浴3-5分钟，备用于SDS-PAGE检测，-20℃冰箱保存。
【留样】另取200 uL匀浆后上清液-20℃冰箱保存，用于酶活的测定和蛋白定量。
（二）盐析与透析法初步纯化过氧化氢酶【器材】1、100mL锥形瓶，冰浴盒，制冰机，JT-1型定时电磁搅拌器，离心管，托盘天平，离心机，透析袋（截留量10KD-20KD，直径2公分），滴管，50mL量筒，5mL吸量管2、试剂：0.5mol/LNa2SO4；0.1mol/L pH7.8磷酸缓冲液；透析液（20%乙醇，0.1mol/LpH4.7醋酸缓冲液，0.1mol/L NaCl），50%甘油。
【方法】1、冰浴搅拌状态下，向肝匀浆上清液中缓慢滴加0.06倍体积的0.5M Na2SO4溶液，继续冰浴搅拌1h（用玻璃棒手动搅拌）；2、将盐析溶液离心（40C，7500rpm，10min）后弃去上清，保留沉淀；3、用肝重4倍体积（24ml）的磷酸缓冲液（0.1mol/L，pH7.8）溶解沉淀（用手动玻璃匀浆器助溶）15min ，离心（40C 5000rpm , 10min）后，弃去沉淀，保留上清液；4、【留样】取盐析后上清样品120ul，用40 uL 4×电泳上样Buffer制样，煮3-5min，备用于SDS-PAGE检测，-20℃冰箱保存。
5、将透析袋（截留量10-20KD，直径2公分）置于沸水中煮5min，清洗晾凉后备用（不要捞出来）；6、将上清液放入透析袋（截留量10-20KD，直径2公分）内（注意封口要结实），置于透析液（20%乙醇，0.1mol/L pH4.7醋酸缓冲液，0.1mol/L NaCl溶液，上清液的10倍体积）中透析两周，中途更换一次透析液（让学生自带水溶VC瓶）；7、两周后，取出透析袋内混浊溶液，离心（40C，7500rpm，10min）后，弃去上清，收集沉淀；8、用2mL~3mL的磷酸缓冲液（0.1mol/L，pH7.8）溶解沉淀15min（用手动玻璃匀浆器助溶），离心（40C，4000rpm，10min）后，弃去沉淀，收获上清液。
9、【留样】取上清样品120ul，用40 uL 4×电泳上样Buffer制样，沸水浴3-5分钟，备用于SDS-PAGE检测。
放置-20℃冰箱保存。
10、将透析袋（截留量10-20KD，直径2公分）置于沸水中煮5min，清洗晾凉后备用；11、将收获的样品液（三组样品合并为一组）放入处理后的透析袋中，置于75%的甘油中包埋浓缩2小时，待样品浓缩至1~1.2ml收样，放置-20℃冰箱保存。
（三）凝胶层析法进一步纯化纯化过氧化氢酶【器材】1、玻璃层析柱（直径1.8cm长45cm）、细乳胶管、夹子、玻璃棉或棉花、细玻璃棒、收集管（试管）、试管架、紫外\可见分光光度计（型号-9100）、锥形瓶、吸量管、滴管。
2、试剂：sephadexG-200，0.1mol/L pH7.8磷酸盐缓冲液【方法】1、凝胶的处理：每组取2.5g sephadexG-200葡聚糖凝胶干粉（膨胀体积30~40mL/每克干胶），浸泡于蒸馏水中充分溶胀，倾斜法除去表面悬浮的小颗粒，替换等体积磷酸缓冲液(0.1mol/L，pH7.8) 继续浸泡一天（准备室操作）。
2、装柱：取层析柱一支，将层析柱出口接上乳胶管，在柱底部填入一薄层玻璃棉或海绵垫，越薄越好。
将层析柱垂直夹于铁架上，层析柱下端的止水夹夹紧，向柱中加入约5-7cm 高的缓冲液，用细玻璃棒将凝胶颗粒搅成悬液，顺玻璃棒缓缓倒入层析柱中。
当凝胶颗粒沉积约2cm高时，开启止水夹子，使缓冲液缓缓流出，同时继续倒入凝胶悬液，掌握倒入速度，使其与缓冲液流出速度大体相同，直至凝胶床高度达35cm（柱床体积约60ml）时为止。
关闭止水夹子，要求凝胶床要均匀，中间要连续，不得有气泡或断纹，表面要平整。
如凝胶床表面不平整，可用细玻璃棒轻轻将凝胶床上部颗粒搅起，待其自然下沉，即可使表面平整。