癌胚抗原特异性寡核苷酸适配子的体外筛选及其意义
寡核苷酸适配体的筛选及在农兽药残留检测中的应用
寡核苷酸适配体的筛选及在农兽药残留检测中的应用作者:邹雪梅周佳伟宋尚红陈冠华来源:《分析化学》2019年第04期摘要适配体是一类从随机寡核苷酸文库中筛选出来的可对特定靶分子具有高亲和性和特异识别性的单链短脱氧核糖核酸或核糖核酸序列。
自从指数富集配体系统进化(SELEX)的筛选方法问世以来,相继出现了各种基于SELEX的改进筛选方法,以及基于毛细管电泳分离手段的SELEX或非SELEX筛选方法。
作为类似于抗体作用的分子识别元件,适配体在与食品和环境安全相关的农兽药残留检测领域中已得到一定的应用。
在这些应用中,适配体通常与其它可以产生信号的材料如纳米金、量子点等构成复合探针,或与电化学电极等构成传感器。
本文对适配体的筛选方法以及适配体在农兽药残留检测中的应用进行了概括和总结,以期为该研究提供有益的参考。
关键词适配体; 筛选; 农兽药残留; 检测; 评述1 引言食品安全和環境问题被发达国家和许多发展中国家高度重视,各国制定了严格的强制性法规来强化对包括农兽药残留在内的各种有害物质的监管。
例如,美国规定在牛奶中不可检测出抗生素残留,欧盟限定了鸡蛋中四环素类抗生素的最大残留限量(MRL)为200 μg/kg。
因此,对食品和环境样品中农兽药残留进行有效快速检测始终是相应领域的重要研究课题。
适配体是一类从人工构建的随机寡核苷酸文库中筛选出来的单链短脱氧核糖核酸(ssDNA)或核糖核酸(RNA)序列,通常由20~80个碱基组成,库中寡核苷酸序列数可达1013~1015个。
适配体可以与靶分子高特异性、高亲和性结合,适配体与各类靶分子的解离常数可低至nmol/L~pmol/L水平,而高特异性则体现为适配体可以区分仅有一个甲基区别的两种靶分子,可被适配体识别的靶分子范围十分广泛,大的分子或者颗粒等包括疟疾诊断蛋白恶性疟原虫乳酸脱氢酶(PFLDH)[1]、穿孔素蛋白[2]等蛋白质,甚至是产肠毒性大肠杆菌k88[3]、金黄色葡萄球菌[4]等微生物,以及HepG2肝癌细胞[5]、AGS胃癌细胞[6]等细胞,小分子可包括一般意义上的各种小分子化合物,如双酚A[7]、L-色氨酸[8]、黄曲霉毒素[9]等。
寡核苷酸适配子在分析化学中的应用
寡核苷酸适配子在分析化学中的应用唐吉军邵宁生#谢剑炜*(军事医学科学院月份毒物药物研究所#基础医学研究所北京 100850)摘要指数富集配基的系统进化(SELEX)技术是一种新的组合化学技术,应用人工合成的随机寡核苷酸文库,通过筛选、分离、富集获得能与氨基酸、蛋白、药物、有机小分子、无机离子等靶物质特异性结合的寡核苷酸适配子,且具有高亲和力。
随着SELEX技术的发展,寡核苷酸适配子作为一种分析工具,在生物传感器、流式细胞检测、毛细管电泳、亲和色谱等分析化学领域的应用越来越广泛。
本文介绍了寡核苷酸适配子作为生物识别元件在生物传感器中的应用以及作为色谱固定相的应用。
关键词指数富集配基的系统进化适配子生物传感器毛细管电泳亲和色谱Applications of Oligonucleotide Aptamers in Analytical ChemistryTang Jijun, Shao Ningsheng#, Xie Jianwei*(Institute of Pharmacology Toxicology, #Institute of Basic Medicine, Academy of Military Medical Science, Beijing 100850)Abstract Systematic Evolution of Ligand by Exponential enrichment (SELEX) is a new combinational chemistry methodology for in vitro selection of specific aptamers. Aptamers are artificial nucleic acid ligands that are capable of high-affinity binding to target molecules, such as amino acids, drugs, proteins and other small molecules or ions etc. They are isolated from combinational libraries of synthetic nucleic acid by an iterative process of adsorption, recovery and reamplification. The use of aptamers as tools in analytical chemistry is on the rise due to the development of the SELEX technology. These aptamers have been used in biosensors, flow cytometry, capillary electrophoresis, and affinity chromatography. In this review, were discussed the applications of aptamers as biocomponents in biosensors, and the applications of aptamers as chromatographic stationary phases.Key words SELEX, Aptamer, Biosensor, Capillary electrophoresis, Affinity chromatography上世纪90年代初,美国的Joyce[1]、Szostak[2]和Gold[3]三个研究小组分别报道了一种寡核苷酸体外筛选(in vitro selection)、扩增(amplification)技术,通过这项技术可以得到能与非核酸靶分子具有高亲和力、高特异性结合的寡核苷酸序列。
癌胚抗原是什么 (2)
癌胚抗原是什么引言癌胚抗原(Carcinoembryonic Antigen,简称CEA)是一种常见的肿瘤标志物,主要存在于胎儿组织和某些癌细胞中。
它是一种糖蛋白,属于细胞表面粘附分子的家族成员。
本文将对癌胚抗原的定义、结构、功能以及其在临床诊断和治疗中的应用进行详细介绍。
定义癌胚抗原最早是在1932年由Gold和Freedman在肠癌组织中首次发现。
它是一种由细胞外基质依赖性生长的肿瘤细胞分泌的蛋白质,以其在胎儿期上皮组织和恶性肿瘤组织中的表达而得名。
癌胚抗原的基因分布在人类基因组中的19号染色体上,它是一个复杂的基因家族,包含多个亚种。
结构癌胚抗原是一种糖蛋白,在结构上具有复杂性和多样性。
它由511个氨基酸残基组成,具有一个N端信号肽序列、一个胞外结构域、一个跨膜域和一个C端胞浆域。
胞外结构域是癌胚抗原的特征性部分,含有多个重复的基序。
这些重复基序的数量和序列差异导致了癌胚抗原的多样性。
功能癌胚抗原在正常生理条件下并没有明确的功能。
然而,在某些疾病条件下,癌胚抗原的表达显著增加。
在胚胎发育过程中,癌胚抗原在维持细胞间黏附、细胞迁移和细胞信号传导等方面发挥重要作用。
在癌症发展过程中,癌胚抗原的过度表达与细胞的侵袭、转移和血管生成等恶性行为密切相关。
临床应用癌胚抗原在临床上被广泛应用于肿瘤的早期筛查、诊断和评估疗效的监测。
通过检测患者的血清癌胚抗原水平可以辅助癌症的诊断和分期。
此外,癌胚抗原还常用于观察治疗效果、预测复发和预后,并作为一些特定癌症的治疗靶点。
然而,癌胚抗原作为肿瘤标志物并不具备100%的特异性和敏感性,因此单独的癌胚抗原水平并不能作为诊断肿瘤的唯一依据。
结论癌胚抗原是一种常见的肿瘤标志物,广泛应用于肿瘤的早期筛查、诊断和治疗的监测中。
它的结构复杂多样,具有重要的细胞黏附和信号传导功能。
然而,在临床应用中需要综合考虑其他临床检测指标,并结合病理学和影像学等信息进行综合判断。
未来,随着科学技术的发展,对癌胚抗原的深入研究将有助于提高癌症的早期诊断和治疗效果。
肝癌早期检测的生物标志物筛选与实验研究
肝癌早期检测的生物标志物筛选与实验研究肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其高度侵袭性和易转移性使之成为难治性疾病。
据统计,全球每年约有75万人死于肝癌,我国更是肝癌的高发地区之一。
与许多其他癌症一样,肝癌早期发现和治疗是预防和控制该疾病的关键。
因此,研究肝癌早期检测的生物标志物是当前的热点和难点问题之一。
生物标志物是指能够说明生物体内某种生理或病理状态的物质或指标。
在肝癌的早期检测中,生物标志物可以作为一个重要的参考。
目前,临床上用于肝癌早期筛查的生物标志物有AFP、PIVKA-II、ALT、AST、GGT、TB、ALB等。
然而,这些检测指标的特异性和敏感性都存在较大的局限,存在误诊和漏诊的风险。
在分子生物学技术不断更新的今天,通过对患者血液样本、组织样本和体液样本中生物标志物的高通量筛选,以发现能够早期和准确诊断肝癌的生物标志物,已成为研究的重点和热点。
以下将介绍目前常用的一些生物标志物筛选技术和肝癌生物标志物的研究情况。
一、基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量筛选生物标志物的方法,其通过分析组织或细胞中的RNA或DNA来获取分子水平的信息。
通过将数以万计的基因序列固定在一个晶片上,检测样本中的RNA或DNA与芯片上的基因序列的杂交程度,可以快速地得到许多生物标志物的表达情况,为寻找肝癌早期生物标志物提供了重要的依据。
目前,该技术已被广泛应用于肝癌的研究,如对比肝癌与正常肝组织的基因表达谱、对比不同肝癌患者的基因表达谱、对比肝癌早期与晚期患者的基因表达谱等。
例如,研究表明,在肝癌组织中,FAM19A4、TMEM106B、AP1S2、IGHG1等基因的表达显著下调,而DSC2、SLC25A13、KRT6C等基因的表达显著上调,这些基因可以作为评估肝癌预后和治疗效果的生物标志物。
二、蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术是一种用于分析大量蛋白质表达水平的高通量生物芯片技术。
该技术通过将数千个蛋白质固定在晶片上,将样本中的蛋白质与晶片上的蛋白质发生特异性的相互作用,以确定不同生物样本中的蛋白质表达量和表达模式,可以为肝癌早期诊断和治疗提供重要的生物标志物。
胃肠道癌患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸的检测及其临床意义
胃肠道癌患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸的检测及其临床意
义
胃肠道癌是世界上最常见的癌症之一,其通过肠道粘膜的组织形态和生物学行为的不同而被分类为多种类型。
虽然早期胃肠道癌可能没有症状,但当癌症扩散到淋巴结和其他器官时,就会产生类似消化系统疾病的症状,如胸痛、腹痛、食欲减退、消瘦等。
癌胚抗原(CEA)是一种具有胚胎发育表达特异性的蛋白质,是大肠癌患者的重要肿瘤标志物。
随着分子生物学和遗传学技术的不断发展,现在人们已经能够检测癌胚抗原信使RNA (CEA mRNA),从而提高胃肠道癌的早期发现率和诊断准确性。
在胃肠道癌中,CEA mRNA通常是在转录和翻译的过程中产生的。
在这个过程中,基因会转录成信使RNA,而信使RNA 则会进一步被翻译成蛋白质(癌胚抗原)。
因此,检测CEA mRNA水平可以提供更加精确的胃肠道癌诊断和治疗监测信息。
最近的一些研究证明,CEA mRNA的检测在胃肠道癌的诊断和治疗方面具有很高的诊断价值。
首先,CEA mRNA检测可以提高肿瘤早期诊断的精度,同时也可以检测到那些CEA水平较低的患者。
其次,CEA mRNA检测有助于胃肠道癌的分期和预后预测。
例如,当CEA mRNA的水平明显升高时,通常表明肿瘤可能
已经扩散到淋巴结和其他器官,并且其预后往往会更加不良。
此外,CEA mRNA可以在手术切除肿瘤之前检测到癌细胞的
存在,这可以帮助外科医生决定肿瘤的范围,提高手术切除率,从而提高治愈率。
总之,CEA mRNA的检测为胃肠道癌的早期诊断、分期、预
后预测和治疗监测提供了有力的手段,其检测还可以帮助患者和医生更好地决定治疗方案,避免不必要的治疗和手术切除。
肺癌患者血清特异性核酸适配体的筛选及鉴定
library of aptam ers w ent through high—throughput sequencing.Results A fter four rounds of screening,four aptam ers w ith high specificity of serum were obtained.The sequencing results show ed t h at they were different sequences.Conclusion The specificity of screened aptam er in com bination w ith serum of lung cancer w as tested.The results show ed that the binding dissociation constants of serum aptamer and lung cancer serum were all within nanomolar leve1.Seq一2,Seq一3,Seq一6 and Seq一19 can bind to the serum of lung cancer w ith high specificity,but not w ith norm al hum an serum .Using the serum of 200 cases of lung cancer and norm al hum an serum of 200 cases,it was show ed that the positive detection rate of lung cancers by these four serum aptam ers of lung cancers could reach 91% or even higher,t h us providing a new m ethod for the early diagnosis of lung
MUC1核酸适配体的筛选及其在肿瘤靶向治疗方面的初步应用研究共3篇
MUC1核酸适配体的筛选及其在肿瘤靶向治疗方面的初步应用研究共3篇MUC1核酸适配体的筛选及其在肿瘤靶向治疗方面的初步应用研究1MUC1核酸适配体的筛选及其在肿瘤靶向治疗方面的初步应用研究肿瘤是人类面临的一大健康难题,目前治疗肿瘤的方法有很多,但由于肿瘤的复杂性和异质性,治疗效果并不理想。
因此,需要更有效的治疗方法来应对肿瘤。
靶向治疗是一种有前途的肿瘤治疗策略,它基于肿瘤细胞表面的特异性分子来实现特异性作用,从而避免影响正常组织和器官。
MUC1是一种重要的高分子糖蛋白,它在肿瘤细胞上过度表达,在正常组织中则很少表达。
因此,MUC1成为了肿瘤靶向治疗中的重要靶点。
MUC1核酸适配体是一种能够识别MUC1的锁定分子,是一种有潜力的靶向肿瘤治疗药物。
本文旨在介绍MUC1核酸适配体的筛选及其在肿瘤靶向治疗方面的初步应用研究。
MUC1核酸适配体的筛选MUC1核酸适配体研究的关键在于筛选出能够与MUC1高亲和力结合并实现特异性作用的核酸序列。
分子进化联合体(SELEX)是一种经典的核酸适配体筛选技术。
它基于核酸亲和力,通过循环筛选、放大等步骤,筛选出适合特定靶点的核酸适配体序列。
在MUC1核酸适配体的筛选中,首先要选择MUC1作为锁定分子,然后设计适合SELEX技术的实验方案,如选择适当的核酸库,筛选条件等。
在实验中,我们进行了多个循环筛选,逐步筛选出与MUC1高亲和力结合的核酸适配体。
通过质谱、荧光共振能量转移(FRET)等技术验证了所筛选出的核酸适配体序列的能力。
MUC1核酸适配体的初步应用研究在筛选出MUC1核酸适配体后,我们对其在靶向治疗肿瘤方面进行了初步应用研究。
实验中,我们将MUC1核酸适配体序列修饰到载荷纳米粒子上,然后将其加入肿瘤细胞培养基中,观察其对肿瘤细胞生长的影响。
实验结果显示,与未加入载荷纳米粒子的对照组相比,MUC1核酸适配体修饰的载荷纳米粒子更能够特异性地作用于过度表达MUC1的肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞的增殖和转移。
癌胚抗原的实验报告
癌胚抗原的实验报告1. 引言癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)是一种产生于癌胚组织及恶性细胞中的糖蛋白,广泛存在于许多癌症类型的细胞表面。
CEA在临床上常用作肿瘤标志物,用于辅助肿瘤的诊断、预测预后以及监测治疗效果。
本实验旨在确定CEA在肿瘤细胞株中的表达情况,并通过免疫组织化学染色和ELISA方法对其进行定性和定量分析。
2. 材料与方法2.1 实验材料- 人肺癌细胞株A549- 兔抗人CEA抗体- 辅助抗体:羊抗兔IgG-HRP- DAB染色盒- 免疫组织化学染色常用试剂- 细胞培养基- 96孔ELISA板- CEA标准品- 人CEA酶联免疫吸附试剂盒2.2 方法2.2.1 免疫组织化学染色1. 培养肺癌细胞株A549至密集细胞层,并用PBS洗涤细胞。
2. 使用PFA固定细胞片,冷冻切片。
3. 样品脱脂:用xylene处理、以乙醇递降浓度处理、最后用PBS洗涤。
4. 阻断非特异性结合:在切片上滴加5%的牛血清白蛋白,静置30分钟。
5. 兔抗人CEA抗体处理:将兔抗人CEA抗体稀释至适当浓度,在切片上滴加抗体,室温孵育2小时。
6. 三次PBS洗涤:每次5分钟。
7. 辅助抗体处理:将羊抗兔IgG-HRP稀释至适当浓度,并在切片上滴加。
室温孵育1小时。
8. 三次PBS洗涤:每次5分钟。
9. 使用DAB染色盒按说明书进行染色。
10. 用水清洗切片,封片后显微镜观察。
2.2.2 酶联免疫吸附实验(ELISA)1. 培养肺癌细胞株A549至密集细胞层,并在96孔ELISA板上接种细胞悬液。
2. 收集细胞上清液,离心去除细胞碎片。
3. 在ELISA板上设置标准品组和待测组。
4. 将标准品和待测样品加入板孔中,孵育一段时间后洗涤孔。
5. 加入辅助抗体孵育,再次洗涤。
6. 加入底物,反应一定时间后停止反应。
7. 用ELISA酶标仪测量吸光度。
3. 结果与讨论3.1 免疫组织化学染色结果通过免疫组织化学染色,观察到肺癌细胞株A549中CEA的表达情况。
Cell-SELEX技术研究进展
Cell-SELEX技术研究进展赵仲麟;李燕;袁超【摘要】适配子是通过SELEX技术,即指数富集配体系统进化技术,经反复放大筛选得到的、与目标分子有高度亲和性的分子.SELEX技术常使用纯化的靶分子,目前活细胞也可用于筛选目标,这种技术称为细胞指数富集配体系统进化技术(Cell-SELEX),其优点是产生的适配子可以与活细胞中的靶分子的天然构象发生作用.细胞表面的跨膜蛋白也可作为适配子的目标.此外,在不知道任何细胞表面分子的情况下也可以得到细胞特异性适配子.对Cell-SELEX技术的应用及研究进展进行综述.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】5页(P52-56)【关键词】Cell-SELEX;生物标记物;癌症研究;核酸;适配子【作者】赵仲麟;李燕;袁超【作者单位】河南农业大学理学院,郑州450002;郑州轻工业学院食品与生物工程学院,郑州450002;河南农业大学理学院,郑州450002【正文语种】中文适配子是从组合核酸库中筛选到的、与靶分子具有高度亲和性的分子[1] 。
与抗体类似,适配子对目标分子具有高度亲和性和特异性。
然而适配子还有很多额外的优点,如可以抵抗还原条件和热变性等。
典型的适配子一般少于40个核苷酸,同时还要易于化学合成。
另外,适配子可以在一些生理条件下,可通过反义寡核苷酸杂交使其失活。
因此,可以用于设计解毒剂。
适配子在分子生物学和医学已经被广泛应用[2] 。
适配子通过SELEX技术,即指数富集配体系统进化技术,经反复的放大筛选得到的[3,4] 。
这个过程中,单链核酸库与靶分子孵育,单链核酸包括DNA、RNA和修饰的核酸,库由30-100个核苷酸的随机序列组成,约含1014-1015变异体。
与目标有结合活性的变异体将被回收,然后通过RT-PCR进行文库富集扩增,然后利用富集的PCR产物,通过模板链除去或体外转录重建单链库。
该过程将重复几轮至20轮不等,最终找到目标适配子。
化合物体外筛选试验中的重要指标
化合物体外筛选试验中的重要指标1.引言化合物体外筛选试验是药物研发过程中的重要环节,用于评估化合物对生物靶点的活性以及其潜在药效。
为了正确、全面评估化合物的活性和选择潜力,研究人员需要考虑多个指标。
本文将介绍化合物体外筛选试验中的一些重要指标,并对其应用和意义进行解析。
2. IC50值I C50是指化合物对特定生物靶点的半数抑制浓度。
在体外筛选试验中,研究人员通常通过测定化合物对靶点的抑制效果,来评估其活性。
IC50值越小,表示化合物对靶点的抑制能力越强。
因此,低IC50值的化合物更有可能展现出良好的药效。
3. EC50值E C50是指化合物对特定生物靶点的半数激活浓度。
在一些试验中,研究人员关注的是化合物对靶点的激活效果。
E C50值越小,表示化合物对靶点的激活能力越强。
因此,低E C50值的化合物可能具有更好的治疗效果。
4.药物代谢半衰期药物代谢半衰期是指药物从体内消失一半所需的时间。
在体外筛选试验中,评估药物代谢半衰期可以帮助研究人员了解化合物在体内的稳定性和持续时间。
长半衰期的化合物可能更适合作为口服药物,而短半衰期的化合物可能需要频繁给药。
5.细胞毒性化合物的细胞毒性是指其对细胞的伤害程度。
在体外筛选试验中,评估化合物的细胞毒性可以用于判断其对正常细胞的安全性。
理想的化合物应该对靶点产生抑制或激活效果,同时对正常细胞造成较小的伤害。
6.可溶性化合物的可溶性是指其在溶液中的溶解度。
在体外筛选试验中,评估化合物的可溶性可以帮助研究人员确定最佳的化合物浓度范围。
溶解度低的化合物可能需要更高的浓度才能达到预期的效果,而溶解度高的化合物则更容易进行后续研究。
7.反应特异性反应特异性是指化合物对靶点的选择性。
在体外筛选试验中,评估化合物的特异性可以帮助研究人员确定其对不同靶点的亲和力。
具有高特异性的化合物可能更有潜力作为治疗药物,因为它们更有可能只对目标靶点产生效果,而不会对其他蛋白质产生明显影响。
生物标记物的筛选和应用
生物标记物的筛选和应用近年来,随着医学技术的不断发展,生物标记物已经成为了诊断和治疗许多疾病的重要工具。
生物标记物是相对于生物样本的个体化分子指纹,它们可以在生物样本中表示对不同疾病的反应,其主要类型包括蛋白质,细胞核酸和代谢产物等。
在生物标记物的筛选中,目前最常用的方法是生物芯片技术。
这种技术能够高效地捕捉和分析大量的蛋白质或核酸,得出一系列变异和特征,从而研究发现新的生物标记物。
在医学领域,筛选出的生物标记物广泛应用于癌症、炎症、神经系统疾病以及感染等领域的检测和诊断。
在癌症领域,生物标记物可以用来诊断癌症、监测治疗效果、预测复发等。
例如,前列腺特异性抗原(PSA)和癌胚抗原(CEA)是最常用的肿瘤标志物之一,它们的升高可以提示患者患有前列腺癌和结直肠癌等。
在炎症领域,C反应蛋白(CRP)是一种众所周知的生物标记物,可以用于诊断和监测许多不同类型的炎症。
在神经系统疾病领域,tau蛋白和阿尔茨海默病抗原42(Aβ42)是常用的两种生物标记物,可用于监测老年痴呆症和阿尔茨海默症的发展。
除了诊断和监测之外,生物标记物也可以在药物开发和治疗中发挥重要作用。
药物的发现和研制是一个漫长而复杂的过程,其中生物标记物可以帮助研究人员快速筛选出潜在的药物候选物,从而缩短研究时间和降低成本。
此外,生物标记物还可以用于个体化治疗,即根据患者的生物标记物选择最适合的治疗方法。
这种方法可以确保治疗的针对性和效果,减少不必要的药物副作用。
总之,生物标记物是医学研究和治疗领域的关键部分。
随着技术的发展和研究的不断深入,我们相信将会有更多的生物标记物得到发现并应用于实际生活中。
寡核苷酸适配体的筛选及在农兽药残留检测中的应用
寡核苷酸适配体的筛选及在农兽药残留检测中的应用适配体是一类从随机寡核苷酸文库中筛选出来的可对特定靶分子具有高亲和性和特异识别性的单链短脱氧核糖核酸或核糖核酸序列。
以下是适配体筛选的简要过程:
1. 构建随机寡核苷酸文库。
2. 将文库与靶分子孵育,使文库中的寡核苷酸序列与靶分子结合。
3. 通过特定的分离手段,将结合的寡核苷酸序列与未结合的寡核苷酸序列分开。
4. 经过多轮重复上述过程,富集具有高亲和性和特异识别性的寡核苷酸序列,得到适配体。
在农兽药残留检测中,适配体通常与其他可以产生信号的材料如纳米金、量子点等构成复合探针,或与电化学电极等构成传感器,用于检测食品和环境中的农兽药残留。
此外,还有基于毛细管电泳分离手段的SELEX或非SELEX筛选方法。
其中,基于毛细管电泳(CE)的SELEX具有高效分离选择性特点,使筛选的效率大大提高,一般仅需2\~4轮即可达到SELEX 8\~15轮的富集效率。
以上内容仅供参考,如需更多信息,建议查阅相关文献或咨询专业人士。
一种体外筛选PD-L1的DNA核酸适配体的方法及其应用[发明专利]
专利名称:一种体外筛选PD-L1的DNA核酸适配体的方法及其应用
专利类型:发明专利
发明人:娄新徽,李济远,任惜娇
申请号:CN202010875370.5
申请日:20200827
公开号:CN114107307A
公开日:
20220301
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明涉及一种体外筛选PD‑L1的DNA核酸适配体的方法及其应用,属于生物技术领域。
本方法为模块化‑SELEX,起始随机DNA文库包含两个随机序列区域和位于中间的固定区域。
本方法由三个筛选模块组成,分别为快速富集模块、特异性提高模块和兼容性提高模块。
模块化‑SELEX利用各种SELEX方法的独特优势,依次快速提高文库对靶标的亲和力、提高对主要干扰因素的特异性、提高对真实样本中靶标检测的兼容性。
Modular‑SELEX得到的PD‑L1的DNA核酸适配体成功用于多种癌细胞、正常人体扁桃体组织切片和非小细胞型肺癌组织切片上PD‑L1的表达水平的检测。
申请人:首都师范大学
地址:100048 北京市海淀区西三环北路105号
国籍:CN
代理机构:北京展翅星辰知识产权代理有限公司
代理人:王文生
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肺癌肿瘤标志物神经元特异性烯醇化酶抗原适配子的筛选及其应用
肺癌肿瘤标志物神经元特异性烯醇化酶抗原适配子的筛选及其应用赵运旺;朱家宁【期刊名称】《分子影像学杂志》【年(卷),期】2017(040)001【摘要】目的提出一种基于适配子快速检测肺癌肿瘤标志物的方法.方法利用指数级富集配体的系统进化技术筛选其高特异性适配子,通过流式细胞术检测亲和力,最终选出一条高亲和力、强特异性的适配子.枸橼酸钠还原法制备纳米金颗粒.建立基于免标记纳米金和适配子的分析方法,并对其方法进行考察.结果通过6轮筛选得到三条NSE的高特异性、强亲和力的适配子,其中,a适配子特异性最高.同时利用筛选得到的肺癌肿瘤标志物a适配子和纳米金颗粒建立一种快速检测NSE抗原的方法.结论该方法具有较好的准确度,为肺癌的早期检测提供了一种新的手段.【总页数】4页(P112-115)【作者】赵运旺;朱家宁【作者单位】西北师范大学化学化工学院,甘肃兰州730070;西北师范大学化学化工学院,甘肃兰州730070【正文语种】中文【相关文献】1.应用SELEX技术筛选沙门氏菌抗原的适配子 [J], 郎春燕;江树勋;邵碧英;陈文炳;傅碧忠;缪婷玉;陈融斌;黄晓蓉2.血清癌胚抗原鳞状上皮细胞癌抗原神经元特异性烯醇化酶角质蛋白21-1联合检验在肺癌诊断中的临床研究 [J], 郝艳艳3.血清神经元特异性烯醇化酶/癌胚抗原及胃泌素释放肽前体/癌胚抗原比值在诊断小细胞肺癌中的价值 [J], 刘琳;朱立强;赵利;4.血清鳞状细胞癌相关抗原神经元特异性烯醇化酶癌胚抗原与细胞角蛋白19片段联合检测在肺癌诊断中的应用 [J], 侯瑞军5.肿瘤标志物癌胚抗原、糖类抗原、神经元特异性烯醇化酶和细胞角质蛋白联合检验对老年胃癌的诊断价值 [J], 闫慧霞;陈国庆;赵丹;王凌云因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
癌胚抗原是什么
癌胚抗原是什么什么是癌胚抗原?癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen, CEA)是一种蛋白质,最早在胎儿的消化系统和胰腺上皮组织中发现。
它是一种糖蛋白,在胚胎期间起到促进细胞黏附的作用。
正常情况下,成年人的CEA水平很低,因为它的产生主要是在胚胎发育阶段进行的。
然而,癌细胞可以产生和释放大量的CEA,导致血液中CEA水平的升高。
因此,CEA通常用作癌症的生物标志物,特别是结直肠癌。
癌胚抗原的作用在正常情况下,CEA的功能是在胚胎发育过程中参与细胞和组织的黏附。
它对胚胎实质间质细胞的间质-细胞和细胞-细胞黏附起着重要的作用。
在成年人的正常细胞中,CEA的表达受到抑制,因此没有或只有非常低水平的CEA。
然而,在某些类型的癌症中,特别是结直肠癌、胰腺癌和乳腺癌等,癌细胞具有异常激活的CEA产生和释放机制。
这导致了血液中CEA水平的升高,因此将其作为癌症的生物标志物。
癌胚抗原的检测为了检测CEA的水平,可以进行血样测试。
CEA的检测主要用于结直肠癌的诊断和监测治疗的效果。
此外,它也可以用于监测其他癌症的复发和转移。
CEA的检测通常通过放射免疫分析(radioimmunoassay)或酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)来进行。
这些测试可以测量血液中CEA的浓度,并与正常参考范围进行比较。
需要注意的是,CEA并不是一个特异性的标志物。
除了癌症之外,一些非恶性疾病,如炎症性肠病和肝硬化等,也可引起CEA的升高。
因此,将CEA作为癌症的筛查工具时需要结合其他检查结果进行综合评估。
癌胚抗原与结直肠癌在结直肠癌中,CEA是最常用的生物标志物之一。
它用于对患者进行诊断、评估疾病的严重程度,以及监测治疗的效果。
对于结直肠癌患者,CEA水平的升高通常与肿瘤的生长和转移有关。
因此,通过定期监测CEA水平,可以判断肿瘤的活动性以及治疗的效果。
癌胚抗原知识点总结
癌胚抗原知识点总结一、CEA的结构CEA是一种糖蛋白,属于抗原成分家族成员中的一种。
它主要由蛋白质和多糖组成。
CEA 的分子量约为180~200 kDa,是由5个亚单位(A、B、C、D、E)组成的,每个亚单位之间的序列相似度约为50%。
CEA的亚单位之间通过二硫键交联成二聚体或三聚体形式存在。
二、CEA的生理功能1. 胚胎时期:CEA主要表达在胚胎肝、胃、胰腺和胎盘等组织中,对促进细胞间黏附具有重要作用,有助于胚胎发育和器官形成。
2. 成体期:在成人体内,CEA的表达主要在肝、结肠和胰腺等组织中,但表达水平较低。
其生理功能主要包括参与细胞间黏附、细胞信号转导、免疫调节等。
此外,一些研究发现CEA在肠道黏膜上皮细胞的保护中也具有一定的作用。
三、CEA与癌症的关联1. 肿瘤组织中CEA的表达在各种恶性肿瘤中如胃癌、肝癌、结直肠癌、胰腺癌、乳腺癌等,CEA的表达水平明显升高。
此外,一些研究还发现CEA能够提高肿瘤细胞的侵袭性和迁移性,从而参与肿瘤转移过程。
2. CEA与肿瘤发展和预后关系大量研究表明,CEA水平与肿瘤的发展阶段以及预后密切相关。
肿瘤患者血清CEA水平增高通常与肿瘤的大小、淋巴结转移和肿瘤分期等临床指标相关。
此外,一些研究还发现CEA水平与肿瘤的复发和转移风险存在一定的相关性。
四、CEA的临床应用1. 作为肿瘤标志物CEA可以作为一种良好的肿瘤标志物,应用于肿瘤早期诊断、肿瘤预后评估和治疗反应监测等方面。
目前CEA主要在结直肠癌、肺癌、胃癌和乳腺癌等肿瘤中的临床应用较为广泛。
2. 作为治疗靶点在一些研究中,研究人员发现将CEA作为肿瘤治疗的靶点,可以有效抑制肿瘤的生长和转移。
目前已有一些抗CEA抗体药物在临床试验中展现出较好的抗肿瘤效果。
3. 作为预后评估指标CEA也常常作为肿瘤预后评估的重要指标之一,通过监测患者术后血清CEA水平的变化,可以预测患者的预后及肿瘤的复发风险。
五、CEA的检测方法目前常用的CEA检测方法包括放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫分析法(ELISA)、荧光免疫分析法(FIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)等。
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癌胚 抗原特异性寡核苷酸适 配子 的体 外筛选及 其意义
王 立峰 , 魏 嘉 , 殷 海涛 , 钱 晓萍 , 禹立 霞, 刘宝瑞
( 南京 大学 医学 院 附属鼓 楼 医 院肿 瘤 中心南 京 大学 临床 肿瘤 研究 所 , 江苏 南 京 200 ) 10 8
摘要 : 目的 : 通过体外筛选获得癌 胚抗 原 ( E 特异性适 配子 , C A) 为高表达 C A肿瘤 的靶 向奠 定基础 。 方法 : C A特异性适配子 , E 通过配体介导 的靶蛋 白纯化 实验检测 经筛 选 的适配子与纯化蛋 白结合 ; 提取 L 14 S 7 T细胞 总蛋白, 免疫共沉淀检测经 筛选 的适配子 与细胞 总蛋 白的结 合 。 结果 : 经体外 7轮筛选富集及筛选条件 的优化 , 配体介导 的靶标 分离实验证 实 了筛 选 出的适配子 与纯 化 C A蛋 白 E 的结合 ; 免疫沉淀及 Wet l 证实 了其识别并特异性结 合天然状态的 C A 结论 : s m bo e t E 。 经过 体外 7轮筛选 , 证实 了 所获得 的 C A适 配子可特异性地与纯化 C A和天然状态 的 C A蛋 白结 合 , E E E 为后续高 表达 的 C A肿 瘤的靶 向诊断 E
i b n i g o h p a rt h u f d a d n t e p o en s p aey Re u t W e o t ie h E c i d n ft e a tme t e p r e n ai r t i e a t l . o i i v r sl s: b an d t e C A—
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93・ 0
第2 0卷
第 9期
医 学 研 究 生 学 报
J u n lo d c lP sg a u t s o r a fMe ia o tr d ae
V10 o o2 . N. 9
Sp 20 e.07
著 ・
20 0 7年 9月
moe u e frc n e a g tt e a y a d i g n .T i a e c s s o h ce n n f h EA-p cf l c l o a c rtr e h r p n ma i g h s p p rf u e n t e s r e i g o e C o t s e ic i
和 治 疗 奠 定 了初 步 的 实验 基 础 。
关键词 : 适配子 ; 癌胚抗原 ; 靶 向治疗 中图分类号 : R 3 .3 7 0 5 文献标 识码 : A 文章 编号 : 10 —19 20 )90 0 -5 0 88 9 (0 7 0 -9 3 0
/ /os et no eicb d gD A a t rt h ma ri e b ync ni n nvr e c o f p c i i N ห้องสมุดไป่ตู้a u nc c om roi at e t l i s f nn i me o a n g
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Can e nt t o N n n n e i , a i 10 8 J n s , h a c rI i e st aj g U i r t N n n 2 0 0 ,i gu C i ) u f i v sy jg a n
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