HPLC详细教程
高效液相色谱仪的操作步骤
高效液相色谱仪的操作步骤高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。
它利用液体流动相和固定相之间的相互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。
本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。
1. 准备工作在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。
检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配制是否准确。
2. 样品制备根据需要分析的物质，准备好待测样品。
样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。
3. 仪器开机将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。
等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。
4. 设置参数在仪器上设置分析所需的参数。
包括选择适当的检测器类型和检测波长、设置流量、温度等。
5. 启动系统启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。
通常需要一段时间使得流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。
6. 校正进行色谱柱的校正。
校正过程包括流量校正、波长校正等。
通过校正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。
7. 注射样品将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升至毫升的量级。
确保样品的注射量稳定和准确。
8. 分离分析开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。
在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互作用进行分离。
9. 监测结果通过检测器对分离后的化合物进行监测。
根据检测器的信号，可以得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。
10. 数据处理将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。
通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的定量分析。
11. 关机分析结束后，关闭高效液相色谱仪的电源开关，并进行必要的清洗和维护工作。
确保仪器的正常运行，并延长其使用寿命。
总结：高效液相色谱仪的操作步骤涵盖了仪器准备、样品制备、仪器设置、校正、样品注射、分离分析、结果监测和数据处理等多个方面。
液相色谱教程相色谱实验操作
液相色谱教程相色谱实验操作液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、制药、环境科学和食品科学等领域的分析技术。
本文将介绍液相色谱实验的基本操作步骤，以帮助读者更好地了解和掌握该技术。
实验前准备：1.准备好实验所需的HPLC仪器和耗材，包括色谱柱、固定相、溶剂、样品和标准品等。
2.进行前的实验室准备，确保实验台面整洁，试剂摆放井然有序。
步骤一：样品准备1.样品制备：准备好需要分析的样品，确保样品质量和净度，并按照实验要求进行前处理。
2.样品溶解：将样品溶解于适当的溶剂中，以获得所需浓度的溶液，并用过滤器除去杂质。
步骤二：色谱柱选择和准备1. 色谱柱选择：根据实验要求和分析目的选择合适的色谱柱材质和类型。
常见的色谱柱材质包括C18、C8、Silica gel等。
2.色谱柱准备：根据色谱柱的要求进行装柱，包括柱后法、柱前法和封口法等。
步骤三：溶剂体系选择和准备1.溶剂体系选择：根据样品的特性和所需的分离效果选择合适的溶剂体系，包括单溶剂和混合溶剂等。
2.溶剂准备：准备好所需的溶剂，并使用高纯度的有机溶剂，并用过滤器或其他方法除去杂质。
步骤四：HPLC仪器设置和优化1.仪器设置：按照实验要求设置好HPLC仪器的参数，如波长、流速、柱温等。
2.优化条件：对于分离效果不佳的样品，可逐渐调整实验条件，并记录下各条件下的结果，以找到最佳分离条件。
步骤五：实验操作1.样品进样：将样品溶液注射到色谱柱中。
通常采用自动进样器或手动进样器进行操作。
2.色谱柱运行：打开HPLC仪器，开始柱运行。
随着溶液通过色谱柱的过程，样品中的组分将逐渐分离并通过检测器。
3.数据收集与分析：利用检测器检测样品组分，并采集色谱图谱和峰面积等数据。
根据实验目的可以选择不同的检测器，如紫外检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
步骤六：结果解释和报告1.观察色谱图谱：根据检测器得到的色谱图谱，观察各峰的形状、峰高、峰面积等，并根据相关标准进行数据分析。
HPLC培训教程
HPLC培训教程HPLC（High Performance Liquid Chromatography）是一种高效液相色谱技术，被广泛应用于化学、生物化学、药学等领域中的分析和纯化过程。
HPLC培训教程旨在向初学者介绍HPLC的原理、仪器组成、样品制备、方法开发以及常见问题解决等方面的知识。
一、HPLC原理HPLC是一种基于色谱原理的分析方法，通过在固定填充物（固定相）上进行流动相（液相）与样品之间的相互作用，实现对样品的分离和定量分析。
其主要原理包括分配作用、吸附作用和离子交换作用。
二、HPLC仪器组成HPLC仪器主要由流动相系统、分离柱、检测器和数据处理系统组成。
流动相系统包括溶剂供应部分和混合部分，用于供给流动相。
分离柱是药物分离的关键，通常由填料柱和色谱柱两部分组成。
检测器用于检测分离柱出口的组分，并生成相应的信号。
数据处理系统将检测器信号转化为可读取的结果。
三、样品制备样品制备是HPLC分析的关键步骤，正确的样品制备可以确保分离柱正常工作并获得准确的结果。
常见的样品制备包括溶解、过滤、稀释和净化等。
溶解样品时要选择适当的溶剂，并根据样品性质进行必要的处理。
过滤可以去除杂质颗粒和减少背景噪声。
稀释可以使样品浓度适合分析要求。
净化可以去除干扰物，保证仪器的稳定性和分析结果的准确性。
四、方法开发HPLC方法开发是为了针对特定的分析目标选择适当的仪器参数和操作条件。
方法开发的关键是选择分离柱和优化流动相组成与流速，以获得较好的分离效果和分析结果。
在方法开发过程中，应该考虑分析目标、样品矩阵、仪器性能以及分析时间等因素，进行试错实验，根据实验结果进行参数调整，直到得到满意的分析方法。
五、常见问题解决在HPLC分析过程中，常常会遇到一些问题，需要及时解决。
常见问题包括峰形异常、峰分离不佳、信号漂移、背景噪声等。
为了解决这些问题，需要对仪器进行校准和维护，检查和修复分离柱，优化操作条件等。
此外，还可以通过尝试不同的分析方法或更换试剂等方法进行排除。
HPLC 操作规程
HPLC操作规程1.溶剂：所用溶剂甲醇，乙腈，超声10 min，去除气泡。
水需要用0.45um水系滤膜过滤，再超声10 min，去除气泡。
溶剂中加入0.5%0的TFA。
2.样品准备：样品最好用梯度程序中初始的溶剂配比溶解，用0.45um滤器过滤后使用。
用纯甲醇也可以。
3.开机：打开A泵，B泵，和检测器，选择REMOTE状态，然后再打开电脑上的工作站界面。
（如果先打开工作站界面，再打开检测器，会造成谱图上横坐标显示的时间是真实时间的两倍。
如果这样，就关闭工作站界面再打开，即可）4.打开工作站界面HPLC LC 600 PLUS WorkStation先平衡: 运行开机平衡梯度程序，约30min。
第一次使用前柱子是100%甲醇，需要平衡到你要运行的梯度程序初始的溶剂比例，如MeOH/H2O=30/70。
5.设置梯度程序，统一保存在D盘HPLC data文件夹里，新建个人文件夹。
泵参数设置，不需要设置；梯度程序，需要设置并保存自己的梯度程序；检测器设置，更改波长数值，点击Set。
6.进样：进样阀右边在上，注射进样品，然后扳下进样阀，右边朝下，完成进样。
仪器自动按照设定的梯度程序运行。
7.数据采集：打开工作站界面左上角文件下谱图处理。
数据统一保存在D盘HPLC data文件夹里，新建个人文件夹。
8.冲柱子：测试完成后准备关机时，用纯甲醇8 ml/min，冲洗10min，平衡柱子，冲洗流路，最后柱子和流路里要充满有机溶剂。
9.关机：没有特殊要求注意事项：1.在使用含盐的流动相后，需用HPLC级的水冲洗管路和样池，然后再用甲醇（或5-10%甲醇水溶液）冲洗管路和样池。
这样可以避免堵塞液路，样池损坏，以及样池中零部件上微生物的生长。
避免无机盐对泵头的磨损，延长柱塞杆及密封圈的使用寿命。
2.保存的数据结果中不能保存method，所以对自己的化合物成熟的色谱条件要另外保存。
柱子使用说明1.新柱子活化新柱子用甲醇/乙腈/水封存，在运输过程中，柱子填料会变干。
HPLC操作规范
高效液相色谱操作流程一.开机前准备1.流动相准备水相采用经纯水机处理后的超纯水，有机相（乙腈、甲醇、异丙醇等）采用HPLC级试剂。
所有流动相在使用之前须经0.22μm滤膜（水相滤膜材料一般为醋酸纤维素,有机相滤膜材料一般为尼龙）过滤。
过滤后的流动相再经过超声机除气泡5-10分钟后方可使用。
注：如需要配制水相有机相的混合溶液，应使用有机相滤膜。
用错滤膜的后果：水相用有机相滤膜会造成过滤时液体过来吧不下去。
有机相用水相滤膜会造成滤膜溶解。
2. 样品准备所有需要测试的样品须经0.22μm滤膜过滤处理后方可进样，根据样品中的溶剂选择对应的滤膜。
（水溶液采用水相滤膜，有机溶剂采用有机相滤膜）二.开机操作1. 仪器、软件开机依次打开检测器（SPD-20A）、柱温箱（CTO-10AS）、输液泵（LC-20AT）的power键，再打开电脑上的软件LCSolution工作站。
2. 排气操作在建立检测方法、仪器参数之前，打开输液泵上的排液阀（逆时针旋转90度即可）后，按下输液泵仪器参数板上的purge按钮进行管路排气操作。
Purge 操作结束后将排液阀顺时针旋转到初始位置。
注：不能反复开关检测器，否则减少紫外灯使用寿命。
三.检测方法的建立在进行purge操作的同时，可以在软件上设置仪器参数。
具体步骤如下：1)打开软件菜单栏file下拉列表，点击new method file。
在instrument parametersview中找到advanced按钮并点击。
依次设置Data Acquisition、LC time Prog （梯度程序用）、Pump、PDA、Column Oven、Controller中的参数。
设置完成后，点击工具栏中的保存按钮保存设置的方法，再点击instrument parameters view中的download按钮下载仪器参数。
完毕后打开工具栏中的instrument on按钮。
2)待仪器稳定后（大约30mins），点击工具栏中的single start按钮，并设置进样数据的保存路径和文件名，按ok键后再使用平头进样针进行手动进样。
高效液相色谱的使用流程
高效液相色谱的使用流程简介高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种用于分离、鉴定和定量化分析化学物质的常用技术。
本文将介绍高效液相色谱的使用流程。
使用流程1.准备工作–检查仪器：确保HPLC仪器处于正常工作状态，检查进样器、流动相泵、柱温箱和检测器等部件。
–准备试剂：根据需要，准备好所需的溶剂、标样溶液和样品溶液，并确保它们纯净、稳定且符合实验要求。
–校准仪器：进行必要的仪器校准，包括流速校准、进样器校准和检测器校准等。
2.设置分离条件–选择合适的柱：根据需要选择合适的固定相柱，例如反相柱、离子交换柱或手性柱等。
–设置流速：根据柱的要求和分离物的性质，设置合适的流速，一般为0.5-2.0 mL/min。
–选择合适的流动相：根据待分离物的性质，选择合适的流动相体系，包括溶剂和缓冲液等。
–设置柱温：根据实验要求和分离物的性质，设置适当的柱温，一般常温即可。
–设置检测器：选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器或质谱检测器，根据需要设置检测器的波长、激发波长等参数。
3.进样与分析–进样方式：根据需求和样品性质，选择适合的进样方式，包括自动进样器、手动进样器或固相萃取柱等。
–进样量：根据样品的浓度和分析要求，设置合适的进样量，一般范围为1-20 μL。
–开始分析：点击软件界面上的“开始”按钮，启动HPLC运行，此时仪器开始运行，进行样品分离和检测。
–数据记录：在分离过程中，系统会实时记录和显示数据，包括峰面积、保留时间和峰高等结果。
4.数据分析与解读–峰面积计算：根据检测器记录的峰面积数据，通过内置的计算公式，计算出目标化合物的峰面积。
–保留时间测定：根据检测器记录的保留时间数据，可以获得目标化合物的保留时间，用于鉴定和定量分析。
–峰高测定：根据峰高数据，可以了解化合物的峰高大小，用于比较不同样品或条件下的分离结果。
–结果解读：根据数据分析结果，判断样品中所含化合物种类和含量，并与已知标准进行对比验证。
高效液相色谱（HPLC）操作规程
高效液相色谱（HPLC）操作规程一操作1.准备工作⑴流动相的准备应根据实验选择合适的流动相，所有流动相原则上应选择HPLC级别，水应选择超纯水，并应保持新鲜。
所有流动相在进行实验前应经过相应的脱气处理，脱气时间应根据流动相的量相应增加，但一般超声脱气不应少于20min。
在实验过程中应保证足够的流动相，流动相的量与流速、洗脱时间等有关，应根据具体情况进行准备。
⑵样品的准备对于待测的样品，在进样之前应经过滤膜过滤，根据样品的不同选择不同种类、不同直径的滤膜。
2. 排气打开purge阀，键入stop→prime，直到无气泡停止stop。
B泵同样操作。
关闭purge阀。
3. 开机打开电脑主机和显示器，点击Galaxie，进入工作站。
选择系统，点击Agilent HPLC.点击overview，可观察仪器各部分状态。
打开泵及检测器的电源。
二 分析方法建立1.进入工作站系统界面。
点击数据，文件→新建→方法，出现视窗，点击前进即可。
键入方法名和相应描述→点击ok后出现方法文档。
2.210的设定点击控制→210图标→Elution。
选择流动相A和B的种类。
Compressibility、Pressure Constant以及Refill Time属于内置参数无需设定。
设置A、B流动相的比例，通过改变B的比例设定。
如需梯度洗脱，则根据方法对Equilibrium Time 和Hold Time进行设定。
点击Misscellaneous。
Start Mode选择Inject Trigger on Pump A。
End of Sequence 选择Leave Pump on。
210设定结束。
3.325的设定点击325图标，选择Signal。
其中Detector Bunch Rate建议设置成2（10Hz），Noise Monitor Length建议设定成64，Response Time建议设定0.5。
根据方法设定相应波长。
高效液相色谱仪操作流程
高效液相色谱仪操作流程高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛应用于分离、检测和定量分析化合物的分析仪器。
本文将介绍HPLC的操作流程。
1. 仪器准备在进行HPLC分析前，首先需要对仪器进行准备。
确保仪器处于正常工作状态，检查各个部件的连接是否紧固，必要时更换液相色谱柱。
接下来，检查并设置流动相（溶剂）系统、进样系统和检测器等参数，并验证仪器的漏水性能。
2. 样品准备样品的准备对HPLC分析结果的准确性和可靠性至关重要。
首先，将待分析的样品溶解在适宜的溶剂中，并在必要时进行稀释。
确保样品中无杂质和悬浮物，并使用过滤器过滤掉可能的固体颗粒。
3. 进样进样是将样品引入HPLC系统的过程。
通常使用自动进样器或手动进样器。
使用自动进样器时，将样品放置到样品盒中，设置合适的进样量和进样速度。
使用手动进样器时，使用微量注射器将样品吸取并快速注射到进样口。
4. 色谱柱选择根据待分析的化合物性质和分析要求，选择合适的液相色谱柱。
色谱柱的选择包括柱材、柱内直径和柱长度等参数。
确保色谱柱的品质良好并处于适当的工作状态。
5. 流动相系统流动相系统用于将样品带入色谱柱并实现化合物的分离。
设置合适的流动相组成和流量，确保流动相的质量和稳定性。
调整流率以达到较好的分离效果，并避免柱干燥和色谱峰形变。
6. 检测器选择与设置根据分析需要选择合适的检测器。
常见的检测器包括紫外可见检测器、荧光检测器和电化学检测器等。
根据需要进行检测器的波长设置和信号增益调整，并确保检测器的灵敏度和稳定性。
7. 数据处理与结果解读HPLC分析生成的数据需要进行处理和解读。
通常使用色谱数据处理软件进行峰面积计算、色谱峰图绘制和质量分析等操作。
根据实验目的和分析要求，对分析结果进行解读和统计分析，并生成相关报告和图表。
总结：使用HPLC进行分析需要按照一定的操作流程进行操作，包括仪器准备、样品准备、进样、色谱柱选择、流动相系统设置、检测器选择与设置以及数据处理与结果解读等步骤。
HPLC操作流程
HPLC操作流程HPLC是高效液相色谱技术的简称，通过高效液相色谱技术可以进行非常精准的化学分析，能高效地分离混合物中的化合物，并且可以分析和确定分离出的各种成分和相应的数量关系，十分实用。
下面我们介绍一下HPLC的具体操作流程。
一、样品制备先将样品制备好，将不同比例的成分混合均匀，样品中所含的溶剂和其他杂质严格控制在一定的范围内，以免对分析结果产生影响。
样品溶解后要进行気相或液相萃取，使样品中纯度较低、固体或油脂等大分子组分得以去除，净化及浓缩样品，使其含量符合实验要求。
二、溶剂准备准备好HPLC专用的试剂，分析纯度要求高，需要用高纯度的水、有机溶剂等化学试剂。
三、操作步骤1. 在HPLC设备中配置好离子交换树脂型柱与专有离子交换树脂型柱，并选择适当的溶剂混合液和反应温度，以确保最佳效果。
2. 打开HPLC仪器，开启点检程序，检定系统参数是否正常，排除故障和标定参数。
3. 开始样品注射，先将样品直接注入HPLC仪器，然后选择样品注入参数，通过控制流量速度和采样时间，将样品逐渐注入设备中。
4. 开始设定仪器参数，这些参数会影响化合物分离的效率和准确性，包括进样量、流量、梯度等参数。
5. 保持仪器运行稳定，在统计稳定数据的过程中，检查温度、压力、流量、荧光数据等，如果数值不平稳或平稳值太低，则需要重新调整参数，调整稳定数据的值。
6. 用标准品评价分析结果的准确性和精度，并根据结果进行调整和优化。
7. 通过结果搜查，通过分析结果来判定样品的成分和含量，并与其他分析结果相比较，进行最终分析总结。
四、清洗结束HPLC检测后，需要对设备进行清洗，清洗步骤如下：1. 改变流量方向，用纯水洗涤几分钟，直至设备中所有的损坏或杂质均被去除。
2. 清除柱空的固体或粘稠物，可以使用尽可能多的溶媒混合以尽可能清除。
3. 最后在高度温度下恢复仪器，使它返回原始位置。
HPLC操作流程是十分复杂和精密的，不仅仪器要求高，而且对操作人员的要求也很高，需要有尤其专业技能和经验，否则可能会影响分析结果和仪器性能。
HPLC原理和操作详解
HPLC原理和操作详解HPLC (High Performance Liquid Chromatography) 是一种高效液相色谱分析仪器，也是一种广泛应用于分析和制备化学领域的色谱技术。
它通过溶液的流动将混合物中的分子分离和纯化，然后通过检测器检测和定量各个组分。
下面将详细介绍HPLC的原理和操作。
HPLC的原理是基于色谱技术的理论基础，即溶液与固体（固定相）表面之间会发生物理和化学吸附等相互作用，从而使溶液中的化合物被分离。
HPLC的主要组成部分包括溶液输送系统、色谱柱、检测器和数据处理系统。
HPLC的操作步骤如下：1.样品制备：将待分析的样品溶解在适当的溶剂中，并通过滤器过滤，去除杂质和颗粒物。
2.系统预冲洗：在运行之前，先用纯溶剂进行系统预冲洗，以去除柱子内的杂质。
3.色谱柱选择：根据需要分离的化合物性质选择适当的色谱柱。
常见的色谱柱包括反相柱、离子交换柱和凝胶渗透柱等。
4.流动相选择：根据样品性质选择合适的流动相，可以是单一溶剂或者混合溶剂。
流动相的选择对分离效果有很大影响。
5.色谱条件设定：设置合适的色谱条件，包括流速、柱温、检测器的参数等。
这些参数的选择要根据样品的特性和分析目的进行优化。
6.进样：将经过预处理的样品注入HPLC系统中。
可以选择自动进样或者手动进样的方式。
7.分离：通过调节色谱柱中的移动相流动速度和梯度等参数，使样品中的组分逐渐被分离。
分离的程度取决于色谱柱、流动相和样品的性质。
8.检测：通过检测器对分离出的化合物进行检测和定量。
常见的检测器包括紫外-可见吸收检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
9.数据处理：将检测到的信号转换为荧光检测器和质谱检测器等。
HPLC的操作常见问题和注意事项：1.质控：在实验过程中需要进行质控，包括对流速、柱温和检测器的参数进行定期检查和校准。
2.柱寿命：色谱柱使用一段时间后会失效，需要定期更换。
柱的选择要根据样品的特性和分离目的进行优化。
HPLC的使用步骤
HPLC的使用步骤HPLC（High Performance Liquid Chromatography）是一种高效液相色谱技术，用于分离和分析溶液中的化合物。
下面是HPLC的使用步骤：1.样品准备：首先，需要准备样品。
根据所研究的化合物性质，选择适当的提取和纯化方法。
确保样品的浓度适当，并将其溶解于适当的溶剂中。
2.设定仪器参数：接下来，需要设置和检查仪器的相关参数。
这包括选择适当的色谱柱、流动相、检测器和流速等。
根据样品特性和分离要求，选择合适的操作条件。
3.预洗色谱柱：在开始实验之前，需要进行柱子的预洗。
这可以通过将流动相在柱子上通过一段时间来完成。
这有助于去除残留杂质并稳定柱子。
4.校准仪器：为了确保准确的分析结果，需要校准仪器。
这可以通过使用标准样品来完成。
选择适当的标准物质，根据其峰面积和浓度绘制标准曲线。
5.注射样品：将样品溶液注射到色谱仪中，通常使用自动注射器。
确保样品注射量适当，以避免柱子过载。
6.运行分离：开始运行仪器，以分离样品中的化合物。
流动相以设定的速率通过色谱柱，用于分离化合物。
这个过程可能需要一段时间，取决于样品的复杂性。
7.监测检测器信号：使用合适的检测器监测流经柱子的化合物。
常见的检测器包括紫外-可见光谱检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
通过检测器产生的信号，可以确定样品中的目标化合物的存在和浓度。
8.数据分析：分析检测器产生的信号，并将其转换为峰面积。
使用标准曲线和峰面积，可以计算出样品中目标化合物的浓度。
进行数据分析和处理，以获取所需的结果。
9.定性和定量分析：根据所需的目标，确定化合物的质量和纯度。
可以使用定性和定量方法来确定目标化合物的结构和浓度。
10.清洗和保养：在使用HPLC之后，需要对仪器进行清洗和保养。
这包括冲洗色谱柱、清洗注射器和流动相贮存器。
确保所有的部件都干净，没有残留物。
这些步骤提供了使用HPLC进行分离和分析化合物的基本指南。
根据具体的实验目的和所研究的化合物，可能需要进行调整和优化。
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，用于分离
和定量分析化合物的混合物。
以下是HPLC的基本使用方法：
1. 样品准备：将待分析的混合物或溶液准备好，通常需要进行前处理，例如过滤、稀释或提取。
2. 系统准备：打开色谱仪的电源，启动仪器，确保所有组件处于正常工作状态。
检查液相、气相和其他溶剂的供应，并确保其质量良好。
3. 进样：将样品注射器连接到色谱柱，并根据实验要求设置注射器体积。
将样品注射器插入进样口，并将样品注入到色谱柱。
4. 创建梯度：根据分析要求，创建一个梯度程序。
这涉及到设置流动相的组成和梯度变化的速率。
5. 运行分析：点击开始按钮，启动分析过程。
色谱系统将自动进行溶剂梯度变化，使样品中的化合物逐步从色谱柱中分离出来。
6. 数据采集和分析：在分离过程中，色谱仪将采集到一系列数据点，包括峰高、峰面积、保留时间等。
使用相关的数据处理软件，可以对这些数据进行处理和分析。
7. 清洗和维护：在分析完成后，需要进行系统的清洗和维护。
这包括冲洗色谱柱、清理进样器和其他组件，并储存色谱仪在
正确的环境条件下。
以上是高效液相色谱仪的基本使用方法。
具体的使用流程和操作步骤可能会有细微的差异，取决于具体的仪器品牌和型号。
建议在使用前仔细阅读和理解相关的操作手册和使用说明。
HPLC操作规程和注意事项
HPLC操作规程和注意事项一、操作规程1.准备工作(1)检查设备：检查HPLC仪器的仪表、进样系统、柱室、检测器等是否正常工作。
(2)准备试剂：准备好所需的试剂和溶剂，并按照操作要求进行配制。
(3)准备样品：根据需要分析的样品性质，选择适当的提取和前处理方法，准备好待测样品。
2.仪器操作(1)打开电源：首先接通HPLC仪器的电源，并预热一段时间，确保仪器达到稳定状态。
(2)装填柱子：按照操作说明将柱子正确装填到柱室中，并连接好进样系统和检测器。
(3)刷洗柱子：用纯溶剂将柱子刷洗，至少连续通过10倍柱子体积的溶液，以去除表面的杂质。
(4)进样：按照分析方法中的要求，设置好进样量和进样方式，确保样品能够均匀地进入柱子。
3.参数设置(1) 流速：根据分析方法的要求，设置适当的流速，一般应在0.5-2.0 mL/min之间。
(2)梯度程序：如果需要进行梯度洗脱，按照分析方法中的梯度程序设置好梯度条件和比例。
(3)柱温：根据样品性质和柱子的要求，设置适当的温度，一般应在室温到60℃之间。
4.检测和记录结果(1)检测器选择：根据分析物的性质，选择合适的检测器进行检测，如紫外检测器、荧光检测器等。
(2)检测条件：根据需要测量的物质，设置合适的检测波长、增益和灵敏度等参数。
(3)记录数据：及时记录分析结果和数据，包括进样量、保留时间、峰面积等，以备后续分析和比对。
二、注意事项1.安全操作(1)使用个人防护装备，如实验手套、安全眼镜和实验服。
(2)注意化学品的毒性和腐蚀性，避免接触皮肤和吸入有害气体。
(3)注意防火和爆炸，禁止在实验室中吸烟，并保持实验区域通风良好。
2.样品制备(1)样品的准备应尽量避免污染和氧化，以保证结果的准确性。
(2)样品的提取和前处理方法需根据样品特性和分析要求进行优化，确保提取效率和分析结果的可靠性。
(3)样品的溶解度要适宜，过高或过低的浓度都会影响分析结果。
3.仪器维护(1)定期检查和校准仪器，保证仪器的正常工作和准确性。
HPLC使用指南
2. 仪器 开机顺序：泵 → 紫外检测器 → 电脑 → 工作站 → 软件
2.1 泵 2.1.1 控制模式 内控：由控制面板控制。外控指示灯灭。只能设置恒定梯度。 外控：由电脑通过工作站控制。外控指示灯亮或闪烁（闪烁为暂停状态）。可以设置线性梯度。 *通过 menu 2 转换控制模式
2. 进样 2.1 六通阀的使用 Step 1 六通阀处在 Inject 状态 Step 2 将进样针插入进样器。进样针要插入到底（最后略有阻力），否则会造成漏液损失。 Step 3 点击‘启动数据采集’ Step 4 将扳手扳至 load 状态 Step 5 将样品注入 Loop Step 6 紫外检测器回零 Step 7 扳手迅速扳回 inject 状态 *进样针需要使用平头进样针
3.2 分类 分析柱 ( ID 4.6mm ) 和半制备柱 ( ID10mm ) 分析柱用来检测物质的纯度。半制备在使用之前也需要进小量进行分析。分析柱的结果不能直接 套用到半制备柱上。
3.3 每次使用之前 3.3.1 冲净
用高浓度的有机相（90%～100% Solvent B）冲洗 10～15min，确保上一次的残留样品已全部冲洗 干净。
1.1.2 确定梯度 1.1.2.1 可以根据分子结构猜测洗脱梯度 在正相硅胶板上，石油醚-乙酸乙酯体系（例如 3：1～1：1 的极性）展开的分子，在反相甲醇-水 体系中，需在甲醇浓度较高（60%以上的浓度）时洗脱。
在正相硅胶板上，二氯甲烷-甲醇体系（例如 100：1～50：1 的极性）展开的分子，在反相甲醇水 体系中，不需要甲醇浓度较高（50%以下的浓度）即可洗脱。 在正相硅胶板上，需要加酸展开才可以得到不拖尾的圆点时，反相体系需要用酸性乙腈水。
HPLC操作
HPLC操作方法：一．高相液相组成：泵、紫外检测器、蒸发光检测器、进样器、电脑组成。
一般用紫外检测器二．操作流程：1.打开总电源-----打开蓄电池电源-----打开泵的电源-----打开进样器的电源-----打开紫外检测器电源----打开电脑电源2.泵排空：先打开排空阀，旋一圈半左右，按回车键选定排空的通道，100%，排空有两种方法，一种是设流速，一种是按purge，一般用按purge排空，停止的话再按一下。
3.手动进样方法：从电脑上打开[菜单]，单击变色龙，单击启动，启动后单击桌面的chromeleom，单击二极管，点击HPLC.pan，连接泵、检测器，用90%水（加10%甲醇）冲洗，选择流速，一般为1.0ml/min，要等压力稳定之后慢慢调流速，冲洗10分钟。
换上流动相冲洗流路，设置好检测波长等参数，待基线和压力稳定后，进样、采集。
4.样品多的情况可以采用批处理：在二级管下依次选中控制面板上的“文件”、“新建”，先创建方法文件，点击峰表，改峰名。
点击检测，可以设定参数，如最小峰面积是0.5意思是面积0.5以下的峰不要了。
A.建立程序文件，设置梯度类型，下一步设定采集时间，做有关物质的时候采集时间要保留出峰时间的三倍，做含量时可自己控制，可以先手动进一针看出峰时间，若做研究时，打开3D，再保存。
B.再建样品序列文件，供试品要求双样双针，然后选中要处理的样品序列文件，依次单击“批处理”、“启动”进行分析，样品分析完后处理数据。
C.若是要遇到自动洗脱的情况，再建立一个程序文件，在就绪检查里输入LAMPOFF，梯度设为多步梯度，新建一行，保留时间零分钟流速为1.0ml/min，走流动相，再新建一行保留时间30分钟，流速为1.0ml/min，用90%的水洗柱，再新建一行，保留时间60分钟，流速为1.0 ml/min，用100%甲醇洗柱，再新建一行，保留时间65分钟，流速为0 ml/min，用100%甲醇保存，要确定是否程序文件里灯已关。
HPLC的使用操作和需要注意的事项
HPLC（高效液相色谱法）使用操作和注意事项HPLC的流程简图：流程流程：如右图所示，溶剂贮器（1）中的流动相被泵（2）吸入，经〔3〕梯度控制器按一写的梯度进行混后然后输出，经（4）测其压力和流量，导入（5进样阀（器）经（6）保护柱、（7）分离柱后到（8）检测器检测，由（10）数据处理设备处理数据或（11）记录仪记录色谱图，（12）馏分收集器收集馏分，（13）为废液。
.一．操作步骤1．排空状态：将吸液头让在已经超声的甲醇中，旋松排空阀让机器以高流速排走机器或输液管的气泡，3—5分钟后关闭排空阀，排空结束。
2．冲洗状态：以适当流速冲洗机器核色谱柱大约20分钟;同时开启检测器，让检测器处于预热和自检状态。
3．联机状态：打开联机电脑让色谱工作站和HPLC机器相连设定吸收波长，适当流速，查看系统压力是否正常。
4．用已经配好的流动相换下甲醇开始走基线，此过程大约20分钟5．当基线平稳，开始进样准备。
6．进样前用进样液清洗六通阀2-3次。
7．样品打入机器开始谱图。
8．谱图完成清洗机器和关闭电脑：用甲醇做流动相以适当流速开始冲洗机器大约15分钟，确定甲醇已经充满机器管道。
同时用甲醇清洗六通阀若干次。
退出色谱工作站和关闭电脑。
9．整理数据填写结果。
二．注意事项1、进样前样品处理及注意事项（1）须用专用平头液相专用注射器进样（禁用气相尖头进样针）；（2）进样试液应无颗粒、浑浊和乳化，使用前先用超声波溶解后，须用0.45um 的过滤膜过滤；（3）部分装取样时，取样体积一般小于定管的50%，完全装液相取样体积取必须是定量环的5 倍以上2、操作中注意事项：1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2) 柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
3）所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4) 压力不能太大，最好不要超过150kgf/cm2 .5) 因为缓冲试剂遇有机溶剂，会结晶，有损色谱柱，所以，每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。
实验心得记录HPLC操作流程及注意事项(二)
引言：
HPLC（高效液相色谱法）是一种广泛应用于分离和定量分析的仪器。
本文将详细记录我在进行HPLC操作时的一些心得体会，并总结了一些操作流程和注意事项，旨在帮助其他操作者提高实验效果和减少操作错误。
概述：
正文内容：
1.样品处理
1.1.样品的准备
1.2.样品的溶解
1.3.样品的过滤
1.4.样品的稀释
1.5.样品的保存
2.仪器设定
2.1.流速设定
2.2.柱温设定
2.3.检测器设置
2.4.分离柱的选择
2.5.分析方法的选择
3.色谱条件的调整
3.1.流动相的组成
3.2.流动相的pH调整
3.3.柱温的优化
3.4.柱压的控制
3.5.检测波长的选择
4.峰形和峰分离的优化
4.1.注射量的控制
4.2.色谱柱的选择
4.3.峰的分离度优化
4.4.峰的形状调整
4.5.退峰效果的改善
5.数据处理和结果分析
5.1.校正曲线的绘制
5.2.峰面积的计算
5.3.峰的重复性和稳定性评估5.4.数据的统计分析
5.5.结果的解释和报告撰写总结：
本文以HPLC操作流程和注意事项为主题，从样品处理、仪器设定、色谱条件调整、峰形和峰分离优化以及数据处理和结果分析五个大点进行了详细阐述。
通过正确的操作流程和注意事项的遵守，可以提高HPLC实验结果的准确性和可信度。
希望本文对于其他操作者在HPLC实验中的操作指导有所帮助。
HPLC操作流程
操作流程第一步：准备1 、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
2 、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。
3、配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
第二步：开机接通电源，依次开启不间断电源、真空脱气机、四元泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，最后打开联机色谱工作站。
（一）参数设定方法——新建方法——编辑完整方法（波长设定、流速设定、流动相比例设定、梯度设定）（二）更换流动相并排气泡1：将吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2 ：顺时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；3 ：运行泵，泵以3ml/min的流速冲洗5min；4 ：将排液阀逆时针旋转适度拧紧，关闭排液阀。
5 ：如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
（三）平衡系统用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。
检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。
如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。
观察基线变化。
如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。
（四）进样1 、进样前按检测器[balance]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。
2 、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了。
3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次。
（五）谱图的判断及结果计算记录分离度、理论塔板数、拖尾因子、重复性、保留时间第三步：清洗管路及关机1、分析完毕后，先关检测器，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，先用水（5%甲醇），然后用甲醇-水冲洗，各种冲洗剂一般冲洗15～30分钟，最后用甲醇保留色谱柱，特殊情况应延长冲洗时间。
hplc检测方法
hplc检测方法HPLC检测方法高效液相色谱(HPLC)是一种广泛应用于化学、制药、食品、环境等领域的分析技术。
HPLC检测方法能够对样品中的化合物进行定量和定性分析，具有灵敏度高、分离效果好、选择性强等优点。
下面将介绍HPLC检测方法的原理、步骤、注意事项等方面的内容。
一、原理HPLC检测方法的原理是利用不同化合物的物理化学性质，如分子量、极性、亲水性、亲油性等，在高压力下通过固定在柱子中的固定相进行分离。
样品成分通过柱子后，会在检测器中产生信号，根据不同成分的信号大小进行定量分析。
二、步骤HPLC检测方法的步骤主要包括：样品制备、柱子选择、流动相配置、样品进样、分离、检测等。
1. 样品制备：样品制备是HPLC检测方法的第一步。
样品制备的目的是将复杂的样品进行简化，使其易于分离和检测。
常用的样品制备方法包括提取、纯化、水解、酸解等。
2. 柱子选择：柱子是HPLC检测方法中最重要的部分之一。
柱子的选择应根据不同样品的性质和分离要求进行选择。
常见的柱子类型有反相柱、离子交换柱、凝胶柱等。
3. 流动相配置：流动相是HPLC检测方法中的另一个重要组成部分。
流动相的选择应根据不同样品的性质和柱子类型进行选择。
常用的流动相包括水、有机溶剂、缓冲液等。
4. 样品进样：样品进样是HPLC检测方法中的关键步骤之一。
样品进入柱子前必须经过进样器。
进样器的选择应根据不同样品的性质和进样量进行选择。
5. 分离：分离是HPLC检测方法中最核心的部分之一。
分离的目的是将样品中的成分分离出来。
分离过程中，样品成分会根据不同的化学性质在柱子中进行分离。
6. 检测：检测是HPLC检测方法中的最后一步。
检测器会对柱子中流过的各个成分进行检测，根据不同成分的信号大小进行定量分析。
三、注意事项在进行HPLC检测方法时，需要注意以下几点：1. 样品应尽可能纯净，避免杂质的干扰。
2. 流动相的选择应准确，避免对柱子产生损害。
3. 进样量应适当，过多或过少都会影响检测结果。
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HPLC培训教程我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。
I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。
又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。
也称现代液相色谱。
二、HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压—压力可达150~300Kg/cm2。
色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。
高速—流速为0.1~10.0 ml/min。
高效—可达5000塔板每米。
在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng。
同时消耗样品少。
HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快—通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高—可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。
灵敏度高—紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。
柱子可反复使用—用一根色谱柱可分离不同的化合物。
样品量少，容易回收—样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。
三、色谱法分类按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。
气相色谱法适用于分离挥发性化合物。
GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。
液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。
LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。
此外还有超临界流体色谱法(SFC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常用CO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短，特别适用于手性化合物的拆分。
按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC，又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法。
(此外还有电泳。
)按操作形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法。
四、色谱分离原理高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
1．液固色谱法使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。
分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。
常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5~10μm。
适用于分离分子量200~1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。
常用于分离同分异构体。
2．液液色谱法使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。
分离过程是一个分配平衡过程。
涂布式固定相应具有良好的惰性；流动相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从担体表面流失；温度的变化和不同批号流动相的区别常引起柱子的变化；另外在流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集复杂化。
由于涂布式固定相很难避免固定液流失，现在已很少采用。
现在多采用的是化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。
液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。
正相色谱法采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相)；流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。
常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。
反相色谱法一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。
适用于分离非极性和极性较弱的化合物。
RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。
随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。
为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。
但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。
有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。
正相色谱法与反相色谱法比较表正相色谱法反相色谱法固定相极性高～中中～低流动相极性低～中中～高组分洗脱次序极性小先洗出极性大先洗出从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）。
3．离子交换色谱法固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。
被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。
缓冲液常用作离子交换色谱的流动相。
被分离组分在离子交换柱中的保留时间除跟组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外，它还受流动相的pH值和离子强度影响。
pH值可改变化合物的解离程度，进而影响其与固定相的作用。
流动相的盐浓度大，则离子强度高，不利于样品的解离，导致样品较快流出。
离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。
4．离子对色谱法又称偶离子色谱法，是液液色谱法的分支。
它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。
主要用于分析离子强度大的酸碱物质。
分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。
另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。
分析酸性物质常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。
离子对色谱法常用ODS柱（即C18），流动相为甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10 mmol/L的离子对试剂，在一定的pH值范围内进行分离。
被测组分保时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值、离子强度有关。
5．排阻色谱法固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样品的溶剂。
小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。
它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。
常用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。
被分离组分在柱中的洗脱原理II．基本概念和理论一、基本概念和术语1．色谱图和峰参数色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。
基线(base line)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴。
噪音(noise)——基线信号的波动。
通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。
主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。
流出曲线上的突起部分。
正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
不对称色谱峰有两种：前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。
前者少见。
拖尾因子(tailing factor，T)——T＝，用以衡量色谱峰的对称性。
也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。
《中国药典》规定T应为0.95~1.05。
T＜0.95为前延峰，T＞1.05为拖尾峰。
峰底—基线上峰的起点至终点的距离。
峰高(peak height，h)—峰的最高点至峰底的距离。
峰宽（peak width，W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。
W＝4σ半峰宽（peak width at half-height，Wh/2)—峰高一半处的峰宽。
Wh/2＝2.355σ标准偏差（standard deviation，σ)—正态分布曲线x＝±1时（拐点）的峰宽之半。
正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。
标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。
σ小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。
峰面积(peak area，A)—峰与峰底所包围的面积。
A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h2．定性参数（保留值）死时间(dead time，t)——不保留组分的保留时间。
即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。
在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。
死体积(dead volume，V)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。
它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。
其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。
为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。
V0＝F×t（F为流速）保留时间(retention time，tR)——从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
保留体积(retention volume，VR)——从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。
又称洗脱体积。