一批假冒_人血白蛋白_主要成分的分析

作者简介：张国柱，副主任药师；Tel：（0916）2828830；E-mail：Alliance1974@一批假冒 “人血白蛋白”主要成分的分析张国柱，黄东萍，朱琳煊，何洁，黄文，刘斌（汉中市食品药品检测中心，汉中 723000）人血白蛋白是由健康人血浆，经低温乙醇蛋白分离法或经批准的其他分离法分离纯化，并经60℃ 10 h 加温灭活病毒后制成，为略黏稠、黄色或绿色至棕色澄明液体[1]。

用于因失血、创伤及烧伤等引起的休克，脑水肿及大脑损伤所致的颅内压升高，防治低蛋白血症以及肝硬化或肾病引起的水肿或腹水[2]。

因其价格昂贵，加上医院人血白蛋白药物紧缺，一些患者需要院外自行购买[3]，给药品监管带来一定难度，也多有非法造假的报道。

汉中食品药品监督管理局曾查获一批假冒人血白蛋白，外观为略黏稠、淡橙黄色液体，轻摇后有泡沫出现，与《中国药典》2010年版三部人血白蛋白项下的外观描述相似。

现对这批假冒人血白蛋白的主要成分进行测定，为评估其对人体的伤害提供依据。

笔者采用一些常规仪器分析，如紫外分光光度法、高效液相色谱法等，结合一些常规的理化方法，对其主要成分进行分析确定。

1 仪器与试药1.1 仪器LC-20A 高效液相色谱仪（日本岛津，配二极管阵列检测器）；lambda35紫外-可见分光光度计（美国PE）；RE52AA 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。

1.2 试药保险粉、碘、溴水、磺基水杨酸、氢氧化钠、酒石酸钾钠、硫酸铜、硫酸，均为分析纯。

1.3 对照品与阳性对照吐温80（西安化学试剂厂，批号：CHINESE PHARMACEUTICAL AFFAIRSzhgysh110812）；维生素B 2（中国食品药品检定研究院，批号：100369-200502）；日落黄（天津多福源实业有限公司，批号：110111691）；柠檬黄（天津多福源实业有限公司，批号：110323105）。

1.4 样品样品：标示为“人血白蛋白”，生产厂家为“成都蓉生药业有限责任公司”，批号为201202A009。

2 分析方法与结果2.1 蛋白质类成分检查取样品适量，加入双缩脲试剂，样品无变化；取样品适量，加30%磺基水杨酸试液，最后再取样品适量，加硫酸酸化后，加钨酸钠溶液，样品无变化。

上述实验均可证明样品中不含蛋白质成分。

2.2 氨基酸类成分检查取样品和氨基酸注射液适量，分别加入茚三酮试液：样品未变色，氨基酸注射液变为蓝紫色，证明样品中无氨基酸类成分。

2.3 淀粉类成分检查取样品适量，加入碘试液，未出现蓝色；再加入少许淀粉，溶液即变成蓝色，证明样品中无淀粉类成分。

2.4 氯化物检查取样品适量，滴加0.1 mol·L -1硝酸银，样品无沉淀；随后滴加1滴生理盐水，有白色沉淀产生，可排除样品中有Cl -离子。

2.5 糖类成分检查取样品滴入温热的碱性酒石酸铜溶液中，未观察到氧化亚铜的红色沉淀；取样品，加入4%氢氧化钠溶液煮沸，放冷，滴入温热的碱性酒石酸铜溶液中，未观察到氧化亚铜的红色沉淀。

上述实验均可证明样品中不含糖类或淀粉类成分。

2.6 聚山梨酯80（吐温80）检查取样品5 mL，加入氢氧化钠试液5 mL，煮沸几分钟，放冷，用稀盐酸酸化后，显乳白色浑浊；取样品5 mL，滴加溴试液，溴试液褪色；取样品10 mL，加硫氰酸钴溶液5 mL，混匀，再加三氯甲烷5 mL，振摇混合，静置，三氯甲烷层呈蓝色；精密量取样品3 mL 置25 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。

另取吐温80加水制成0.012%的溶液，作为对照溶液，以水为空白，照紫外分光光度法试验测定吸光度，结果见图1。

0.90.70.50.30.1200 250 300 350 400 450 50012吸光度Aλ/nm1.样品溶液紫外光谱；2.吐温80对照溶液紫外光谱。

图1 样品溶液、吐温80对照溶液紫外光谱CHINESE PHARMACEUTICAL AFFAIRSzhgysh样品溶液、吐温80对照溶液在233 nm 的波长处有最大吸收，且吸收曲线接近。

以上试验中，样品均符合《中国药典》2010年版二部吐温80[4]项下的鉴别反应，紫外分光光谱结果进一步证实样品中含有吐温80，并利用紫外分光光度法粗略定量，样品中吐温80的含量约为0.1%。

2.7 维生素B 2检查取样品约5 mL，加入连二亚硫酸钠（保险粉）约10 mg，样品明显褪色。

取样品、维生素B 2溶液，以水作为空白，照紫外-可见分光光度法，在250~800 nm 的波长范围内记录吸光图谱，结果见图2：样品溶液在445 nm 波长处有最大吸收；维生素B 2水溶液在267、375与444 nm 的波长处有最大吸收。

1.样品吸收光谱；2. 维生素B 2对照溶液吸收光谱。

图2 样品、维生素B 2对照溶液的吸收光谱2.20 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2-0.04250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800266.76374.99A444.61445.6721λ/nm采用《中国药典》2010年版二部维生素B 2片[4]项下的含量测定方法，将样品溶液用0.45 µm 的滤膜过滤后注入液相色谱仪，结果色谱图中在维生素B 2对照溶液主峰相应位置上，未出现色谱峰。

对样品进行旋转蒸发浓缩，并加大进样量，结果色谱图中在维生素B 2对照溶液主峰相应位置上，未出现色谱峰。

以上试验中，加入连二亚硫酸钠样品褪色符合维生素B 2的理化反应[4]，但紫外光谱和液相色谱鉴别证明样品中不含维生素B 2，故加入连二亚硫酸钠使样品褪色应为其他成分。

2.8 色素检查样品呈淡橙黄色，遇连二亚硫酸钠后褪色，筛选食品工业中常见的一些黄色色素。

将日落黄水溶液加入连二亚硫酸钠（保险粉）约10 mg，溶液褪色，与样品现象相似；样品褪色后仍呈亮黄色，与柠檬黄水溶液的颜色近似；将日落黄溶液和柠檬黄溶液混在一起，得到一种和样品颜色极为接近的溶液，加入保险粉，溶液橙色褪去，颜色变淡，与样品反应一致。

取样品，用0.45 µm 的微孔滤膜过滤；称取日落黄、柠檬黄适量加水溶解，作为混合对照溶液。

参照赵霞等《高效液相色谱法测定蛋糕中柠檬黄和日落黄含量》[5]中的测定方法，流动相：以乙酸铵溶液为流动相A，甲醇为流动相B，40 min 线性浓度梯度从A-B（95∶5）至A-B（50∶50）；二极管阵列检测器；柱温：；流量：1 mL·min -1；进样量：20 μL。

结果见图3。

CHINESE PHARMACEUTICAL AFFAIRSzhgysh1.柠檬黄对照溶液峰1的紫外光谱；2.样品溶液峰的紫外光谱。

图4 柠檬黄及样品的二极管阵列检测器光谱1751501251007550250200 250 300 350 400 450 500 550 λ/nm121.日落黄对照溶液峰1的紫外光谱；2.样品溶液峰的紫外光谱。

图5 日落黄及样品的二极管阵列检测器光谱1251007550250200 250 300 350 400 450 500 550 λ/nm121.样品液相色谱图；2. 柠檬黄与日落黄混合对照溶液液相色谱图。

图3 样品、柠檬黄与日落黄混合对照溶液液相色谱图在与柠檬黄、日落黄主成分色谱峰相应位置处，样品溶液有色谱峰。

用二极管阵列检测器测得的样品和日落黄、柠檬黄的紫外光谱一致，见图4、5。

3 结论综上所述，本批假冒“人血白蛋白”基本为吐温80、柠檬黄、日落黄加水勾兑而成。

4 讨论1）近年来，药品制假售假手段越来越高超、隐蔽，对人体健康的损害越来越不可预知。

对于食品药品检验工作而言，弄清楚假冒伪劣药品的成分，并掌握其对人体可能造成的危害，对于保护公众健康和用药安全有着重大意义。

但是对于未知物质的实验室筛查鉴别，目前还是一个难题，而且大多数的筛查分析需要液相-质谱联用或气相-质谱联用等仪器，普及率不高，筛查费用高昂，操作过程繁琐，工作量大。

本文利用蛋白质、氨基酸、糖类、吐温、日落黄、柠檬黄的理化性质，用极为简单的理化鉴别试验结合一些常规的实验室设备，如紫外分光光度计、高效液相色谱仪等，成功分析了该批样品的主要成分，避免了价格昂贵、使用维护成本高昂、操作繁琐的质谱仪器。

操作过程简单、费用低廉、耗时较短，有一定的可取之处，或许会为未知物筛查或成分分析提供思路。

zhgysh2）本文考察了样品中几种主要成分的理化性质、光谱特性、色谱行为特征，得出的结论基本是可信的。

本文仅针对主要成分进行了分析，没有涉及微量以及痕量成分，也未涉及微生物的分析。

3）聚山梨酯80（吐温80）的分析：吉林省药检所和应用化学研究所对查获的假人血白蛋白样品进行具体成分分析后发现，样品中含有名叫“聚山梨酯80”的成分。

吐温80作为一种表面活性剂，常被加入到一些注射剂中，根据美国FDA 公布的IIG 中收载的吐温80静脉注射最大用量应为10%，日本医药品添加事典记载吐温80的各种给药途径中静脉注射最大用量为500 mg，样品中加入吐温80可能是为了模拟人血白蛋白摇动时起泡的现象。

4）维生素B 2水溶液显黄色，与人血白蛋白色泽类似，容易造假。

因此笔者对样品中的维生素B 2进行了检查，样品加入连二亚硫酸钠褪色，维生素B 2造假的可能性被排除。

考虑到样品显橙黄色，而吐温80 在溶液中含量为0.1%时，溶液基本无黄色，因此样品中除含吐温80外，应该还有其他有色物质。

我们将考虑范围转向食品工业中常见的一些黄色色素，阅读相关资料后将目标聚焦到柠檬黄和日落黄这两种常用食用色素并进行了考察，资料显示：日落黄又名晚霞黄、夕阳黄、橘黄、食用黄色3号，化学名为6-羟基-5-[（4-磺酸基苯基）偶氮]-2-萘磺酸的二钠盐，分子式为C 16H 10N 2Na 2O 7S 2，相对分子质量为452.38，为橙红色偶氮类色素。

日落黄不溶于油脂，溶于水呈黄光橙色澄清溶液，水溶液遇浓盐酸不变色，遇浓氢氧化钠呈棕红色，遇浓硫酸呈红光橙色[1]，稀释后呈黄色；耐热性及耐光性强，还原时褪色[2]。

样品溶液中分别加入浓氢氧化钠、浓硫酸，现象均不明显，将样品进行旋转蒸发浓缩，再分别用上述试剂进行试验，样品加入浓硫酸后颜色有些变化。

取日落黄配制成适宜浓度的水溶液，加入连二亚硫酸钠（保险粉）约10 mg，溶液褪色，与样品现象一致；于是将样品是否含有日落黄作为排查重点。

日落黄、柠檬黄等食品添加剂本身并不具有任何营养价值，可以限量添加到如蛋糕、橙汁、糖果、饼干、奶茶、肉类等食品中，从而对食品进行着色[6]。

但冒充注射剂，进行静脉注射还是首次被发现。

样品中加入以上两种物质，可能是为了调节样品的颜色，使其与正品人血白蛋白一致。