1.液相色谱特点及主要类型
高效液相色谱原理及应用
高效液相色谱原理及特点高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
一、高效液相色谱仪有哪些特点？1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。
一般可达150～350 ×105Pa。
2．高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。
高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h 。
3．高效：近年来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。
4．高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。
如荧光检测器灵敏度可达10-11g。
另外，用样量小，一般几个微升。
5．适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。
而高效液相色谱法只要求试样能制成溶液，而技术平台〉〉〉高效液相色谱仪原理不需要汽化，因此不受试样挥发性的限制。
对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75% ～80%）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。
据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70%～80%。
二、高效液相色谱法可分为哪几种主要类型？各自的分离原理是什么？高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。
检验科 液相色谱
液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种常用的分离技术和分析方法，用于分离和测定混合物中的化合物。
它是基于溶液中分离物质的相互作用力，通过样品溶液在固定相上的流动来实现分离的。
液相色谱是在液相中进行的，相对于气相色谱（Gas Chromatography，简称GC）来说，液相色谱的固定相是固定在柱子中的，而样品溶液则通过固定相之间的间隙进行流动。
液相色谱的分离机制主要有吸附色谱、反相色谱、离子交换色谱、凝胶色谱等。
不同的分离机制适用于不同类型的化合物，并可以选择不同类型的固定相和溶剂来达到理想的分离效果。
在液相色谱中，样品溶液经过固定相进行分离后，可以通过检测器进行检测和定量分析。
常见的检测器有紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等，可以根据化合物的性质和需求选择相应的检测器。
液相色谱广泛应用于各个领域，例如药物分析、环境监测、食品检测等。
它可以分离和测定复杂样品中的多个成分，提供准确和可靠的分析结果。
液相色谱技术在检验科中常用于药物分析、毒物分析以及一些重金属、有机污染物的分析等。
通过液相色谱的分离和测定，可以快速、准确地得到样品中目标物质的含量和结构信息，提供科学依据和参考价值。
液相色谱
(二)、HPLC与GC异同点
气相色谱 只能分析挥发性物质，只能分 析20%的化合物 不能用于热不稳定物质的分析 用毛细管色谱可得到很高的柱 效 有很灵敏的检测器如ECD和较 灵敏的通用检测器（FID和TCD） 流动相为气体，无毒，易于处 理 运行和操作容易 仪器制造难度较小 高效液相色谱 几乎可以分析各种物质
高效液相色谱的分类
1 按固定相的聚集状态可分为：
• 液液色谱法(LLC)
• 液固色谱法(LSC)
2 按分离机制可分为：
• 分配色谱法
• 吸附色谱法
• 化学键合相色谱法 • 离子交换色谱法
• 分子排阻色谱法
• 亲和色谱法
四、流程及主要部件
process and main assembly of HPLC
。亲和力大，保留时间长。
阳离子交换： 阴离子交换： 离子交换反应达到平衡时，保留值决定于平衡常数。容量因子 k’ 与平衡常数 K 成正比，且与流动相中的反离子浓度（ M+ 、 X- ） 成反比。 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离 子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸、蛋白质等。
四、 离子对色谱
ion pair chromatography 原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（ 对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏 水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配；
1.液相色谱特点及主要类型、原理
二、 高效液相色谱方法的局限性
1．成本高，且易引起环境污染 2. 缺少通用型检测器 3. 不能替代毛细管气相色谱法分析组成复 杂的具有多种沸程的石油产品 4. 不能代替中、低压柱色谱法，分析受压 易分解、变性的具有生物活性的生化样 品。
三、 HPLC与经典LC区别
主要区别：固定相差别，输液设备和检测 手段 1．经典LC：仅做为一种分离手段
(1).固定相传质阻力项
• 式中，df 为固定液涂层厚度；Ds 为组分 在固定液中的扩散系数；Cs为常数
(2) 流动相的传质阻力项：
• 式中，dp为填充物平均颗粒直径；Dm为 组分在流动相中的扩散系数；Cm为常数。
(3)滞留流动相的传质阻力项：
式中，Csm是与颗粒微孔和容量因子有关的 常数。
GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低 的样品，仅能分析有机物的20%.
• HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受 样品挥发性和热稳定性的限制。 • 分子量大、难气化、热稳定性差及高分 子和离子型样品均可检测，占有机物的 80%。
2．流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用
2、液-固吸附色谱
基本原理： 各组分在吸附剂上的吸附性 能的差别 固定相： 固体吸附剂 应用：对中等分子量的油溶性试样，对 具有官能团的化合物和异构体有较高选择 性；
3、离子交换色谱
基本原理：各离子组分在固定相上发生的反 复离子交换反应能力的差别； 固定相：阴（阳）离子交换剂 流动相：pH缓冲溶液（酸性、碱性） 应用：离子及可离解的化合物、氨基酸、核 酸、蛋白质等。
7、亲和色谱(AC) Affinity chromatograph
原理：利用生物大分子和固定相表
水化学分析——11 色谱分析法
第十一章 色谱分析法
➢排阻色谱法：排阻色谱法又称凝胶色谱法，是按分子 大小顺序进行分离的一种色谱方法。体积大的分子不 能渗透到凝聚孔穴中去而被排阻，较早地淋洗出来； 中等体积的分子部分渗透，小分子可完全渗透入内， 最后洗出色谱柱。
df —固定液液膜厚度 Dl — 组分在固定液中扩散系数
第十一章 色谱分析法
将A、B、C带入H=A+B/u+Cu中，即可得到下述色 谱板高方程式（范迪姆特方程式）。
把含有A、B两组分的样品加到色谱柱的顶端，样品组分被吸附 到固定相上。用适当的流动相冲洗，当流动相通过时，被吸附 在固定相上的组分溶解于流动相中，称为解吸。已解吸的组分 随着流动相向前移行，遇到新的吸附剂颗粒，又再次被吸附。 如此在色谱柱上不断发生吸附、解吸、再吸附、再解吸的过程。 若两种组分的极性不同，则吸附剂表面对组分的吸附能力也存 在差异，其结果就使吸附能力弱的组分先从色谱柱中流出，吸 附能力强的组分后流出色谱柱，从而使A、B两组分得到分离。
第十一章 色谱分析法
3、分配比 分配比k又称容量因子，是指在一定温度和压力下，组 分在两相间达到分配平衡时，分配在固定相和流动相 中的总量之比。
分配系数K与分配分比配k系之数间K的和关分系配为比：k在β表为征VM组与分VS的之分比离行为 时，两者完全是等效的。k值可以方便地由 色谱图直接求得，其大小直接影响组分在柱 内的传质阻力、柱效能及柱的物理性质。
➢ 分子扩散导致色谱峰变宽，H↑(n↓)，分离变差。 ➢ 分子扩散项与流速有关，流速u↓，滞留时间↑，扩散↑。 ➢ 组分分子在气相中的扩散系数大约是液相中的105倍，
液相色谱柱固定相类型
液相色谱柱固定相类型
液相色谱柱的固定相类型主要有以下几种：
1.硅胶：是最常用的固定相，它具有高吸附性、高渗透性和高化学
稳定性等特点，能够满足大多数液相色谱分析的需求。
2.氧化铝：具有与硅胶相似的物理和化学性质，也是一种常用的固
定相。
3.聚酰胺：具有较高的稳定性，可以在各种溶剂和酸碱条件下使用，
常用于分离芳香胺和酚类化合物。
4.氨基甲酸酯：是一种低成本、高效率的固定相，特别适合分离氨
基酸和肽类化合物。
5.反相固定相：这种固定相通常由硅胶表面涂覆聚合物而成，适用
于分离非极性或中等极性的化合物。
常见的反相固定相包括C18、C8和苯基等类型。
6.离子交换固定相：这种固定相基于离子交换原理，适用于分离带
电的离子或离子化合物。
常见的离子交换固定相包括SAX、SCX和阴离子交换柱等类型。
7.体积排阻固定相：这种固定相基于分子尺寸排阻原理，适用于分
离大分子化合物如蛋白质、多糖和核酸等。
常见的体积排阻固定相包括SEPHADEX和BIOGEL等类型。
这些固定相各有特点，适用于不同的分离需求。
选择合适的固定相是实现高效液相色谱分离的关键之一。
高效液相色谱检测器的种类及特点
一、概述高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析化学技术，广泛应用于化学、生物、医药和食品等领域。
在HPLC技术中，检测器是至关重要的一部分，它负责检测样品中化合物的浓度，并将其转化为可读的信号输出。
本文将对HPLC检测器的种类及特点进行详细介绍。
二、紫外-可见光（UV-Vis）检测器1. 原理：UV-Vis检测器利用化合物中的紫外或可见光吸收特性来检测化合物。
2. 特点：1）广泛适用：UV-Vis检测器适用于大多数有机化合物和许多无机化合物的分析。
2）灵敏度高：对于绝大多数有机化合物，UV-Vis检测器的灵敏度较高。
3）简单易用：UV-Vis检测器的操作相对简单，适合实验室常规分析。
三、荧光检测器1. 原理：荧光检测器利用化合物在受激光照射下产生荧光的特性来检测化合物。
2. 特点：1）高灵敏度：荧光检测器对于有荧光活性的化合物具有极高的灵敏度。
2）特异性强：由于荧光本身具有较高的特异性，荧光检测器可以用于分析中对混杂物的忽略。
3）应用广泛：在生物学、医学和环境领域，荧光检测器得到了广泛的应用。
四、蒸发光散射检测器1. 原理：蒸发光散射检测器通过样品与蒸发后的溶剂之间的差异来检测化合物。
2. 特点：1）通用性强：蒸发光散射检测器对于大多数非吸收性化合物都具有较好的检测能力。
2）无需色谱柱：相比于其他检测器，蒸发光散射检测器可以不需要色谱柱，适用于高分子化合物的检测。
3）灵敏度较低：蒸发光散射检测器的灵敏度通常较低，需要较高浓度的样品才能进行检测。
五、质谱检测器1. 原理：质谱检测器通过将化合物转化为离子，并对离子进行质量分析来检测化合物。
2. 特点：1）高分辨率：质谱检测器具有极高的分辨率，可以准确确定化合物的质荷比。
2）特异性强：质谱检测器对于复杂混合物的成分分析具有很强的特异性。
3）操作复杂：相比于其他检测器，质谱检测器的操作和维护较为复杂，需要专业的操作人员。
六、综述HPLC检测器种类繁多，每种检测器都有其特定的适用场景和优势。
常见液相色谱种类
常见液相色谱种类液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种基于液体作为流动相的色谱分析技术。
根据不同的分离原理、柱填充材料和应用领域的不同，液相色谱可以分为多种不同的类型。
以下是常见的几种液相色谱种类：1. Normal Phase液相色谱（NPC）：常用极性柱填料，非极性试样分配在固定相上，较极性的成分在流动相中移动快，实现分离。
主要适用于天然产物、大多数有机化合物和水溶性物质的分离。
2. Reverse Phase液相色谱（RPC）：常用非极性柱填料，非极性试样在固定相上分配，极性的成分在流动相中移动快，实现分离。
广泛应用于生物分子、药物、环境污染物等的分离和分析。
3.离子交换液相色谱（IEC）：柱填充材料含有带电离子交换功能的固定相，利用样品中的带电离子与固定相上相反电荷的离子交换吸附作用进行分离。
主要应用于电解质分析、酸碱度测定和水质分析等。
4.凝胶渗透液相色谱（GPC）：柱填充材料为聚合物凝胶，根据溶质在凝胶孔隙中的渗透性差异进行分离。
主要用于高分子物质的分子量分析。
5.亲和液相色谱（AEC）：柱填充材料为具有亲和作用的固定相，其分离流动相中的目标化合物与固定相上的配体发生特异性结合，实现目标分离。
常用于生物分子、金属离子以及抗体和抗原等的纯化和分离。
6.氢氟酸-离子含量液相色谱（HFIC）：利用离子交换柱在氢氟酸流动相中与离子交换固定相发生相互作用进行分离，主要用于离子含量测定。
7.毛细管电泳液相色谱（CE-LC）：将毛细管电泳和液相色谱相结合的技术，利用电动力和液体流动相进行分离，具有快速分离、高效和高灵敏度等优点。
此外，还有射流色谱、微生物液相色谱、薄层液相色谱、离子对色谱、CPC连续萃取液相色谱等种类。
这些液相色谱类型在一定程度上适用于特定的分析需求和应用领域，可以根据具体的研究目的和样品特性选择合适的液相色谱方法。
高效液相色谱(HPLC)简介
2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性；
按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。
常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、
乙腈、水。
采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动
相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
3. 流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积，损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱 子。如使固定液溶解流失，酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并 在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测 器时，流动相不应有紫外吸收。
高效液相色谱（HPLC）简介
目
1, 液相色谱分析法的发展 2, 高效液相色谱的特点 3, 高效液相色谱仪简介 4, 液相色谱法介绍 5, 分析方法的选择 6, 实际分析操作过程
录
1、液相色谱分析法的发展
20世纪初： 俄国植物学家茨维特提出经典液 相色谱法。经典液相色谱法包括柱色 谱、薄层色谱、纸色谱。 20世纪60年代末： 随着色谱理论的发展、高效细微 固定相的开发、高压恒流泵及高灵敏 度检测器的应用，高效液相色谱法得 到了突破性的发展。
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机 化合物有响应。 特点： 灵敏度高；
线性范围宽；
流通池可做得很小(1mm × 10mm ，容积 8μL)； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
b. 光电二极管阵列检测器
紫外检测器的重要进展；
液相色谱法名词解释-概述说明以及解释
液相色谱法名词解释-概述说明以及解释1.引言1.1 概述液相色谱法是一种分离和分析化学物质的重要技术手段，广泛应用于各种领域，包括药物研发、食品安全、环境监测等。
它通过在固定相（填料）上溶解待测物质，利用流动的液相作为分离介质，在柱内或板内进行化学分离，最终通过检测器检测不同物质的保留时间或光谱特性，实现对化合物的分离和定量分析。
液相色谱法具有高分辨率、高灵敏度、高选择性和高效率的优点，能够分析复杂的混合物，并且通常能够达到微量甚至痕量水平的检测。
因此，液相色谱法已经成为现代化学分析中不可或缺的一部分。
本文将对液相色谱法的概述、原理及应用进行详细介绍，旨在帮助读者了解液相色谱法的基本概念和特点，进一步探讨其在科学研究和实际应用中的重要性和价值。
1.2 文章结构本文将分为三个主要部分：引言、正文和结论。
在引言部分，将对液相色谱法进行概述，介绍文章的结构和目的。
正文部分将包括液相色谱法的概述、原理和应用。
我们将详细解释液相色谱法是什么，它是如何工作的，以及在实际应用中的具体情况。
结论部分将对液相色谱法进行总结，强调其优势和未来发展方向。
我们将讨论液相色谱法在当今科学领域的重要性，并展望其在未来的应用前景。
1.3 目的本文旨在深入探讨液相色谱法，并对其进行全面解释和解析。
通过对液相色谱法的概述、原理和应用进行详细介绍，旨在帮助读者更好地了解和掌握这一重要的分析技术。
我们将介绍液相色谱法在不同领域的广泛应用，包括生物医药、环境监测、食品安全等方面的案例分析，以展示其在科学研究和工程实践中的重要性和实用性。
同时，我们还将总结液相色谱法的优势，探讨其未来发展的趋势和前景，为读者提供关于这一分析技术的全面了解和展望。
通过本文的阐述，希望读者可以加深对液相色谱法的理解，并在相关领域的研究和实践中更好地运用和应用液相色谱法。
2.正文2.1 液相色谱法概述液相色谱法是一种利用液相作为固定相，通过溶质在流动液相和固定相之间的分配作用实现样品分离的方法。
液相色谱仪结构及原理
液相色谱仪结构及原理(分享资源)高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上,引用了气相色谱的理论,在技术上,流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9′107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器,可对流出物进行连续检测。
一、特点:1.高压:液相色谱法以液体为流动相(称为载液),液体流经色谱柱,受到阻力较大,为了迅速地通过色谱柱,必须对载液施加高压。
一般可达150~350×105Pa。
2. 高速:流动相在柱内的流速较经典色谱快得多,一般可达1~10ml/min。
高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多,一般少于1h 。
3. 高效:近来研究出许多新型固定相,使分离效率大大提高。
4.高灵敏度:高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器,进一步提高了分析的灵敏度。
如荧光检测器灵敏度可达10-11g。
另外,用样量小,一般几个微升。
5.适应范围宽:气相色谱法与高效液相色谱法的比较:气相色谱法虽具有分离能力好,灵敏度高,分析速度快,操作方便等优点,但是受技术条件的限制,沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。
而高效液相色谱法,只要求试样能制成溶液,而不需要气化,因此不受试样挥发性的限制。
对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于400 以上)的有机物(这些物质几乎占有机物总数的75% ~80% )原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。
据统计,在已知化合物中,能用气相色谱分析的约占20%,而能用液相色谱分析的约占70~80%。
二、性质及原理:高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。
用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。
高效液相色谱法(HPLC)简介
高效液相色谱法分离过程
主要在于固定相的性质、形状及粒度，其次 差别： 是检测手段和输液设备。
经典液相色谱 固定相： 粒度：60~600μｍ（多孔） 柱长：10~200cm（d=10~50mm） n 约为 2~50/m
流动相：靠重力输送
经典液相色谱无在线检测器
缺点：
①粒度范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻 力大。 ②无检测设备，分析速度慢、效率低。 只能作为分离手段
（3）不能完全替代气相色谱
（4）不适于分析受压分解、变性的具有生物活性的
Hale Waihona Puke 生化样品。高效液相色谱法与其他分析方法一样，
不是尽善尽美的。
第二节 高效液相色谱法的基本理论
一、高效液相色谱参数 1.定性参数 tR 、 t 0 、 t’ R t’R= tR- t0 2.柱效参数 σ、 W1/2 、W W=4 σ 或 w=1.699W1/2 n=（ tR / σ）2 H=L/n
四、高效液相色谱法的应用范围和局限性
1.应用范围 高效液相色谱法适于分析高沸点、受热不稳定易 分解、分子量大、不同极性的有机化合物；生物活性 物质和多种天然产物；合成和天然高分子化合物。 涉及石油化工产品、食品、药品、生物化工产品 及环境污染物。约占全部有机物的80%。 2.方法的局限性
（1）使用多种溶剂为流动相，成本高，污染环境 （2）缺少通用检测器
美国药典委员会（USPC）成立于1820年，至今近200 年。出版发行了25版药典。 75年（19版）将HPLC载入药典 20版-62项；21版-363项；22版-871项；23版-1188项； 24版-含量测定法：1386项 鉴别：519项 杂质检查：206项
如今：在评价世界各国药典水平时，HPLC法成为 反映各国药典先进性的重要指标之一。
液相色谱的常见类型及其常用填料的特点与用途
液相色谱的常见类型及其常用填料的特点与用途
液相色谱（Liquid Chromatography）的常见类型包括：
1. 通用液相色谱（Normal Phase Liquid Chromatography，NPLC）：使用极性填料，非极性流动相，适用于分离极性化
合物。
2. 反相液相色谱（Reversed Phase Liquid Chromatography，RPLC）：使用非极性填料，极性流动相，适用于分离非极性
或弱极性化合物。
3. 离子交换色谱（Ion Exchange Chromatography，IEC）：使
用带有离子交换官能团的填料，适用于分离带电离子或分离具有不同离子状态的化合物。
4. 碳氢化合物色谱（Hydrocarbon Chromatography）：使用低
极性填料，适用于分离石油产品、燃料、有机溶剂等样品中的碳氢化合物。
在液相色谱中，常用的填料包括以下几种：
1. 硅胶填料（Silica Gel）：具有良好的化学稳定性和热稳定性，适用于大多数样品的分离。
2. C18填料：具有疏水性，适用于分离非极性化合物。
3. C8填料：相对于C18填料来说，更疏水，适用于分离更疏
水的化合物。
4. CN填料：具有较强的极性，适用于分离极性化合物。
5. NH2填料：具有亲水性，适用于分离极性化合物。
6. 离子交换填料：根据需要可以选择阴离子交换填料或阳离子交换填料，适用于分离带电化合物。
不同类型的填料具有不同的特点和用途。
根据需要选择合适的填料可以实现对不同类型化合物的有效分离和检测。
液相色谱仪的原理和特点分析 液相色谱工作原理
液相色谱仪的原理和特点分析液相色谱工作原理液相色谱是目前应用较多的色谱分析方法，液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器构成，其整体构成仿佛于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。
液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是接受了高压输液泵、高灵敏度检测器和微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。
其工作原理如下：储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的调配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的调配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分别成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
LC—80 ChroMini液相色谱仪包含微型串联泵、微型可变波长紫外检测器、色谱柱箱、手动进样阀。
具有体积小、重量轻、使用和移动便利等优点。
用户只需用笔记本电脑通过USB或RS232接口启动LC—80工作站软件就能掌控与采集数据，进行色谱分析。
伍丰开发了各种应用软件包，如：食品中的脂溶性维生素、水溶性维生素、氨基酸分析、瘦肉精、三聚氰胺、黄曲霉素、苯并芘、苏丹红等检测。
液相色谱仪选购技巧一、技术指标优异：首先是如何看指标。
液相色谱仪的指标很多，有泵的、检测器的、色谱柱等等。
我们认为要看紧要技术指标，依据国家标准，仪器的紧要指标有噪音，漂移，最小检测浓度，定性定量重复性等。
这些指标都要放在系统，回路里去看，去比较。
就是需要把各单元装置都要联接好，如接好色谱柱，进样阀，并且要通上流动相。
由于您在分析中也都是联接好以后才可以进行分析的，而不是单单用个检测器或是泵的。
然后在这个基础上，我们再去比较这些紧要指标。
1、噪音是指由仪器的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规定波动。
简述常见色谱分离法的类型及基本原理
简述常见色谱分离法的类型及基本原理色谱分离法是一种常用的分离分析方法，其基本原理是利用不同物质在固定相和流动相之间的分配平衡，实现物质的分离。
根据分离原理的不同，色谱分离法可以分为以下几种类型：
1. 液相色谱法（LC）：该方法是最常用的色谱分离法之一，其基本原理是利用不同物质在固定相和流动相之间的分配平衡，实现物质的分离。
液相色谱法具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点，被广泛应用于生物、医药、环保、化工等领域。
2. 气相色谱法（GC）：该方法利用不同物质在气相状态下的吸附和解吸特性，实现物质的分离。
气相色谱法具有高分离效能、高灵敏度、分析速度快等优点，被广泛应用于环保、化工、食品、医药等领域。
3. 高效液相色谱法（HPLC）：该方法是一种改进的液相色谱法，通过提高固定相的粒径和流动相的速度，提高分离效率和速度。
高效液相色谱法具有高分离效能、高灵敏度、分析速度快等优点，被广泛应用于生物、医药、环保、化工等领域。
4. 薄层色谱法（TLC）：该方法是一种简便的色谱分离法，通过在薄层板上分离样品，实现物质的分离。
薄层色谱法具有操作简单、分析速度快、灵敏度高等优点，被广泛应用于食品、环保、化工等领域。
5. 离子交换色谱法（IEC）：该方法利用不同物质在离子交换剂
上的吸附和解吸特性，实现物质的分离。
离子交换色谱法具有高分离效能、高灵敏度、分析速度快等优点，被广泛应用于生物、环境等领域。
不同的色谱分离法具有不同的原理和特点，应根据具体的分析需求选择合适的色谱方法。
液相色谱的原理分类及应用
液相色谱的原理分类及应用1. 液相色谱的概述液相色谱（Liquid chromatography，简称LC）是一种基于溶液体系中的分离技术。
它通过溶液与固定相之间的相互作用力来对样品进行分离和分析。
液相色谱具有高效、高灵敏度、高分辨率以及对复杂样品的广泛适用性等特点，被广泛应用于生物分析、环境监测、药物研发和食品安全等领域。
2. 液相色谱的原理分类2.1. 按固定相类型分类液相色谱根据固定相的类型可以分为以下几种: - 正相色谱：使用亲水性的固定相和疏水性的流动相，对极性化合物具有较好的分离能力。
- 反相色谱：使用疏水性的固定相和亲水性的流动相，在极性化合物的分离上具有较好的选择性。
- 离子交换色谱：使用带电离子交换基团的固定相，可以对带电离子进行分离。
- 大孔吸附色谱：使用大孔吸附剂作为固定相，适用于分离较大分子。
2.2. 按分离机理分类液相色谱还可以根据分离机理进行分类: - 萃取色谱：基于溶解度差异进行分离，可根据流动相中的有机溶剂种类和浓度来调节分离效果。
- 离子对色谱：利用离子对形成的相互作用进行分离，可以用于有机酸、无机阴离子等的分离。
- 手性色谱：利用手性固定相和手性分子之间的对映体选择性相互作用来分离对映异构体。
- 亲和色谱：利用配体和分析物之间的特异性亲和作用进行分离，适用于对生物大分子的分离。
2.3. 液相色谱联用技术为了提高分析的灵敏度和选择性，液相色谱常常与其他技术联用，主要包括以下几种: - 液相色谱-质谱联用（LC-MS）：将色谱分离与质谱检测结合，可以实现物质的分离和结构的鉴定。
- 液相色谱-红外光谱联用（LC-IR）：将色谱分离与红外光谱检测结合，可以实现对有机化合物结构的鉴定。
- 液相色谱-紫外光谱联用（LC-UV）：将色谱分离与紫外光谱检测结合，常用于有机分析和药物研究。
- 液相色谱-核磁共振联用（LC-NMR）：将色谱分离与核磁共振检测结合，可以实现对化合物结构和相互作用的研究。
液相色谱柱类型
液相色谱柱类型液相色谱柱有哪些分类、以及如何选择和维护呢？一．液相色谱柱的分类(按色谱固定相基质分)1.硅胶基质1.1反相色谱柱：反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。
反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
1.2正相色谱：正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)，以及其他具有极性官能团，如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN，CPS)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
1.3离子交换色谱柱：以磺化交联强阴/阳离子键合硅胶色谱柱，常用规格：强阴离子色谱柱(SAX)，强阳离子交换色谱柱(SCX)2.聚合物基质聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～14均可使用。
相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。
现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。
所有聚合物基质在流动相发生变化时都会出现膨胀或收缩。
用于HPLC的高交联度聚合物填料，其膨胀和收缩要有限制。
溶剂或小分子容易渗入聚合物基质中，因为小分子在聚合物基质中的传质比在陶瓷性基质中慢，所以造成小分子在这种基质中柱效低。
对于大分子像蛋白质或合成的高聚物，聚合物基质的效能比得上陶瓷性基质。
因此，聚合物基质广泛用于分离大分子物质。
3.其他无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
5,离子色谱 ion chromatograph
在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱亦称为抑制型离子色谱 在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱亦称为抑制型离子色谱 或称双柱离子色谱.由于抑制柱要定期再生, 或称双柱离子色谱.由于抑制柱要定期再生,而且谱带在通 过抑制柱后会加宽,降低了分离度. 过抑制柱后会加宽,降低了分离度. 后来,Frits等人提出不采用抑制柱的离子色谱体系,而采用 等人提出不采用抑制柱的离子色谱体系 后来,Frits等人提出不采用抑制柱的离子色谱体系, 了电导率极低的溶液, 了电导率极低的溶液,例如苯甲酸盐或邻苯二甲酸盐的稀溶 液作流动相,称为非抑制型离子色谱或单柱离子色谱. 液作流动相,称为非抑制型离子色谱或单柱离子色谱. 以无机,特别是无机阴离子混合物为主要分析对象,可采用电 以无机,特别是无机阴离子混合物为主要分析对象, 导检测器,解决了传统离子交换色谱需要高浓度淋洗液洗脱, 导检测器,解决了传统离子交换色谱需要高浓度淋洗液洗脱, 洗脱时间很长以及洗脱后的组分缺乏灵敏, 洗脱时间很长以及洗脱后的组分缺乏灵敏,快速的在线检测 方法等缺点
2.流动相差别 GC:流动相为惰性气体 GC:
组分与流动相无亲合作用力, 组分与流动相无亲合作用力,只与固定相作用
HPLC: HPLC:流动相为液体
流动相与组分间有亲合作用力,为提高柱的选择性, 流动相与组分间有亲合作用力,为提高柱的选择性, 改善分离度增加了因素, 改善分离度增加了因素,对分离起很大作用 流动相种类较多,选择余地广 流动相种类较多, 流动相极性和pH 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性
应用:离子及可离解的化合物,氨基酸,核酸等. 应用:离子及可离解的化合物,氨基酸,核酸等.
4,离子对色谱 ion-pair chromatograph ion基本原理:离子对色谱法是分离分析强极性有机酸和有机碱 基本原理:
的极好方法.将一种(或多种)与溶质离子电荷相反的离子 的极好方法.将一种(或多种) 对离子或反离子) (对离子或反离子)加到流动相中使其与溶质离子结合形成 疏水性离子对化合物, 疏水性离子对化合物,控制溶质离子的保留行为使其两相之 间进行分配; 间进行分配;
3,离子交换色谱 ion-exchange chromatograph ion基本原理:组分在固定相上发生的反复离子交换反应;组 基本原理:组分在固定相上发生的反复离子交换反应;
分与离子交换树脂(固定相) 分与离子交换树脂(固定相)之间亲和力的大小与离子半 电荷,存在形式等有关.亲和力大,保留时间长; 径,电荷,存在形式等有关.亲和力大,保留时间长; 阳离子交换:R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阳离子交换: R— 阴离子交换: R— 阴离子交换:R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH-
2,液-固吸附色谱 liquidliquid- solid adsorption chromatograph
基本原理:各组分在固定相吸附剂上竞争性吸附与解吸 吸附与 基本原理:各组分在固定相吸附剂上竞争性吸附 固定相:固体吸附剂为,如硅胶,氧化铝等, 固定相:固体吸附剂为,如硅胶,氧化铝等,较常使用 的是5 10m的硅胶吸附剂 的硅胶吸附剂; 的是5～10m的硅胶吸附剂; 流动相:各种不同极性的一元或多元溶剂. 流动相:各种不同极性的一元或多元溶剂. 特点:适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样,对 油溶性试样, 特点:适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样 具有官能团的化合物和异构体有较高选择性; 具有官能团的化合物和异构体有较高选择性; 缺点:非线形等温吸附常引起峰的拖尾 缺点:
5,离子色谱 ion chromatograph
阳离子交换: 阳离子交换:R—H + Na+OH- = R—Na + H2O R—H + Na+Br- = R—Na + H+Br使具有高背景电导的流动相转变成低背景电导的流动相, 使具有高背景电导的流动相转变成低背景电导的流动相, 从而用电导检测器可直接检测各种离子的含量. 从而用电导检测器可直接检测各种离子的含量.这种色谱 技术称为离子色谱. 技术称为离子色谱. 若样品为阳离子,用无机酸作流动相,抑制柱为高容量 若样品为阳离子,用无机酸作流动相, 的强碱性阴离子交换剂. 的强碱性阴离子交换剂.
子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相,试样离子X- 进入流动 的甲醇-水或乙腈-水作为流动相,试样离子X 相后,生成疏水性离子对Y 在两相间分配. 相后,生成疏水性离子对Y+ X -后;在两相间分配.
5,离子色谱 ion chromatograph
离子色谱法是由离子交换色谱法派生出来的一种分离方法. 离子色谱法是由离子交换色谱法派生出来的一种分离方法. 由于离子交换色谱法在无机离子的分析和应用受到限制. 由于离子交换色谱法在无机离子的分析和应用受到限制. 例如,对于那些不能采用紫外检测器的被测离子,如采用 不能采用紫外检测器的被测离子, 例如,对于那些不能采用紫外检测器的被测离子 电导检测器,由于被测离子的电导信号被强电解质流动相 电导检测器, 的高背景电导信号掩没而无法检测. 的高背景电导信号掩没而无法检测. 阴离子交换: 阴离子交换:R—OH + Na+Br- = R—Br + Na+OH为了解决这一问题,1975年Small等人提出一种能同时测定 为了解决这一问题,1975年Small等人提出一种能同时测定 多种无机和有机离子的新技术.他们在离子交换分离柱后 多种无机和有机离子的新技术. 加一根抑制柱,抑制柱中装填与分离柱电荷相反的离子交 中装填与分离柱电荷相反 加一根抑制柱,抑制柱中装填与分离柱电荷相反的离子交 换树脂. 换树脂.
1,液-液分配色谱 liquidliquid- liquid partition chromatography
固定相与流动相均为液体(互不相溶); 固定相与流动相均为液体(互不相溶); 基本原理:组分在固定相和流动相上的分配; 基本原理:组分在固定相和流动相上的分配; 流动相:对于亲水性固定液,采用疏水性流动相, 流动相:对于亲水性固定液,采用疏水性流动相,即流动 相的极性小于固定液的极性( phase), ),反之 相的极性小于固定液的极性(正相 normal phase),反之 流动相的极性大于固定液的极性( phase) ,流动相的极性大于固定液的极性(反相 reverse phase) 正相与反相的出峰顺序相反; .正相与反相的出峰顺序相反; 固定相:早期涂渍固定液,固定液流失,较少采用; 固定相:早期涂渍固定液,固定液流失,较少采用; 化学键合固定相:将各种不同基团通过化学反应键合到硅 化学键合固定相: 担体)表面的游离羟基上. 18柱 反相柱). 胶(担体)表面的游离羟基上.C-18柱(反相柱).
固定相:阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂; 固定相:阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂; 流动相:阴离子离子交换树脂作固定相,采用碱性水溶液 碱性水溶液 流动相:阴离子离子交换树脂作固定相,采用碱性
;阳离子离子交换树脂作固定相,采用酸性水溶液; 酸性水溶液 阳离子离子交换树脂作固定相,采用酸性水溶液;
高沸点,挥发性差,热稳定性差,离子型及高 高沸点,挥发性差,热稳定性差, 聚物的样品不可检测,仅能分析有机物的20% 聚物的样品不可检测,仅能分析有机物的20%
HPLC:溶解后能制成溶液的样品,不受样品挥发性和 :溶解后能制成溶液的样品,
热稳定性的限制 分子量大,难气化, 分子量大,难气化,热稳定性差及高分子和离 子型样品均可检测,用途广泛,占有机物的80% 子型样品均可检测,用途广泛,占有机物的80%
§3-1 高效液相色谱法的特点
一, HPLC与经典LC区别 HPLC与经典 区别 与经典LC
主要区别:固定相差别,输液设备和检测手段 主要区别:固定相差别, 1.经典LC:仅做为一种分离手段 经典LC LC:
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
柱内径1 3cm,固定相粒径>100μm 柱内径1~3cm,固定相粒径>100μm 且不均匀 常压输送流动相 ;柱效低(H↑,n↓) 柱效低(H↑,n↓) 分析周期长, 分析周期长,无法在线检测
阴离子分离:常采用烷基铵类, 阴离子分离:常采用烷基铵类,如氢氧化四丁基铵或氢氧化
十六烷基三甲铵作为对离子; 十六烷基三甲铵作为对离子;
阳离子分离:常采用烷基磺酸类, 阳离子分离:常采用烷基磺酸类,如己烷磺酸钠作为对离子 反相离子对色谱:非极性的疏水固定相(C-18柱 反相离子对色谱:非极性的疏水固定相(C-18柱),含有对离
3.操作条件差别 GC:加温操作; HPLC:室温;高压(液体粘度大) GC:加温操作; HPLC:室温;高压(液体粘度大)
§3-2 高效液相色谱法的主要类型及原理
1,液-液分配色谱 liquid- liquid partition chromatograph liquid2,液-固吸附色谱 liquid- solid adsorption chromatograph liquid3,离子交换色谱 ion-exchange chromatograph ion4,离子对色谱 ion-pair chromatograph ion5,离子色谱 ion chromatograph 6,排阻色谱 size- exclusion chromatograph size7,亲和色谱(AC) Affinity chromatograph 亲和色谱(AC)
2.HPLC:分离和分析 HPLC:
柱内径2 6mm,固定相粒径<10μm 球形,匀浆装柱) 柱内径2~6mm,固定相粒径<10μm(球形,匀浆装柱) <10μm( 高压泵输送流动相;柱效高(H↓,n↑) 高压泵输送流动相;柱效高(H↓,n↑) 输送流动相 分析时间大大缩短, 分析时间大大缩短,可以在线检测