血培养病原菌耐药陛分析及葡萄球菌mecA基因检测

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耐药机制及特殊耐药性检测知识点整理

耐药机制及特殊耐药性检测知识点整理

耐药机制及特殊耐药性检测知识整理1.耐药类型1)靶位改变●MRSA:抗药性金黄色葡萄球菌●VRE:抗万古霉素肠球菌2)产酶●ESBL:超广谱β-内酰胺酶●AmpC: AmpCβ内酰胺酶●CRE:耐碳青霉烯类肠杆菌3)多重耐药●MDR-PA:多重耐药铜绿假单胞菌●MDR-AB:多重耐药鲍曼不动杆菌2.M RSA抗药性金黄色葡萄球菌1)耐药机制:MRSA携带mecA基因,可编码产生低亲和力的青霉素结合蛋白(PBP2a),阻止药物与靶位的结合而造成耐药。

2)流行现状3)检测方法●1、苯唑西林的筛选平板。

不是甲氧西林!●2、常规药敏试验(苯唑西林MIC,头孢西丁MIC或纸片法)检测。

●3、mecA基因(PCR法)及其产物PBP2a(乳胶凝集试验)阳性均提示MRSA●抑菌圈内任何生长视为耐药。

4)检测●mecA和PBP2a:确定葡萄球菌属对甲氧西林(苯唑西林)耐药性最可靠的方法,阳性应报告为该菌株对甲氧西林(苯唑西林)耐药●苯唑西林筛选平板(显色平板)●常规药敏(苯唑西林MIC、头孢西丁MIC、纸片法)●PCR●金葡或所有凝固酶阴性葡萄球菌,如对苯唑西林(或甲氧西林)耐药,则对青霉素类、头孢菌素类(头孢罗膦除外)、碳青霉烯类和含酶抑制剂的复方制剂均应报告耐药,而不考虑其体外药敏结果。

3.V RSA-vanA耐万古霉素金葡1)定义:金黄色葡萄球菌对万古霉素●MIC>16μg/ml——耐药●MIC=4-8μug/ml——中介●MIC<2μg/ml——敏感。

2)耐药机制:葡萄球菌细胞壁有一段由4个氨基酸组成的短肽, 4肽的末端有2个重复氨基酸是万古霉素结合的靶位,由vanA基因介导的4肽末端改变为万古霉素低亲和力靶位,与万古霉素结合的亲和力下降1000倍。

3)检测方法:不推荐纸片法做万古霉素的敏感性检测4.V RE-vanA耐万古霉素肠球菌1)流行现状:几乎无药可治2)检测方法●肉汤或平板筛查法,万古霉素琼脂平板●纸片法、E-test●琼脂稀释法VRE筛选试验※3)耐药机制:vanA基因介导的4肽末端(D-丙氨酸- D-丙氨酸)改变为D-丙氨酸-D-乳酸4)结果解释:MIC高水平耐药,根据对万古霉素和替考拉宁耐药的程度可进⼀步区分为vanA、vanB、vanC、vanD等。

细菌耐药性检测方法

细菌耐药性检测方法

细菌耐药性检测方法 Prepared on 22 November 2020细菌耐药性检测方法1、细菌耐药表型检测:判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据NCCLS标准,通过测量纸片扩散法、肉汤稀释法和E试验的抑菌圈直径、MIC值和IC值获得。

也可通过以下方法进行检测:(1)耐药筛选试验:以单一药物的单一浓度检测细菌的耐药性被称为耐药筛选试验,临床上常用于筛选耐甲氧西林葡萄球菌、万古霉素中介的葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌及氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌等。

(2)折点敏感试验:仅用特定的抗菌药物浓度(敏感、中介或耐药折点MIC),而不使用测定MIC时所用的系列对倍稀释抗生素浓度测试细菌对抗菌药物的敏感性,称为折点敏感试验。

(3)双纸片协同试验:双纸片协同试验是主要用于筛选产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性杆菌的纸片琼脂扩散试验。

若指示药敏纸片在朝向阿莫西林/克拉维酸方向有抑菌圈扩大现象(协同),说明测试菌产生超广谱β-内酰胺酶(4)药敏试验的仪器化和自动化:全自动细菌鉴定及药敏分析仪如:Vitek-2、BD-Pheonix、Microscan等运用折点敏感试验的原理可半定量测定抗菌药物的MIC值。

2.β-内酰胺酶检测:主要有碘淀粉测定法(iodometric test)和头孢硝噻吩纸片法(nitrocefin test)。

临床常用头孢硝噻吩纸片法,β-内酰胺酶试验可快速检测流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌和肠球菌对青霉素的耐药性。

如β-内酰胺酶阳性,表示上述细菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药;表示葡萄球菌和肠球菌对青霉素(包括氨基、羧基和脲基青霉素)耐药。

3.耐药基因检测:临床可检测的耐药基因主要有:葡萄球菌与甲氧西林耐药有关的MecA基因,大肠埃希菌与β-内酰胺类耐药有关的blaTEM、blaSHV、blaOXA基因,肠球菌与万古霉素耐药有关的vanA、vanB、vanC、vanD基因。

检测抗菌药物耐药基因的方法主要有:PCR扩增、PCR-RFLP分析、PCR-SSCP 分析、PCR-线性探针分析、生物芯片技术、自动DNA 测序4.特殊耐药菌检测(1)耐甲氧西林葡萄球菌检测:对 1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10㎜,或其MIC≥4цg/ml 的金黄色葡萄球菌和对1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤17㎜,或MIC≥цg/ml的凝固酶阴性葡萄球菌被称为耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)。

细菌耐药性检测方法

细菌耐药性检测方法

细菌耐药性检测方法1、细菌耐药表型检测:判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据NCCLS标准,通过测量纸片扩散法、肉汤稀释法和E试验的抑菌圈直径、MIC值和IC值获得。

也可通过以下方法进行检测:(1)耐药筛选试验:以单一药物的单一浓度检测细菌的耐药性被称为耐药筛选试验,临床上常用于筛选耐甲氧西林葡萄球菌、万古霉素中介的葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌及氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌等。

(2)折点敏感试验:仅用特定的抗菌药物浓度(敏感、中介或耐药折点MIC),而不使用测定MIC时所用的系列对倍稀释抗生素浓度测试细菌对抗菌药物的敏感性,称为折点敏感试验。

(3)双纸片协同试验:双纸片协同试验是主要用于筛选产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性杆菌的纸片琼脂扩散试验。

若指示药敏纸片在朝向阿莫西林/克拉维酸方向有抑菌圈扩大现象(协同),说明测试菌产生超广谱β-内酰胺酶(4)药敏试验的仪器化和自动化:全自动细菌鉴定及药敏分析仪如:Vitek-2、BD-Pheonix、Microscan等运用折点敏感试验的原理可半定量测定抗菌药物的MIC值。

2.β-内酰胺酶检测:主要有碘淀粉测定法(iodometric test)和头孢硝噻吩纸片法(nitrocefin test)。

临床常用头孢硝噻吩纸片法,β-内酰胺酶试验可快速检测流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌和肠球菌对青霉素的耐药性。

如β-内酰胺酶阳性,表示上述细菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药;表示葡萄球菌和肠球菌对青霉素(包括氨基、羧基和脲基青霉素)耐药。

3.耐药基因检测:临床可检测的耐药基因主要有:葡萄球菌与甲氧西林耐药有关的MecA 基因,大肠埃希菌与β-内酰胺类耐药有关的blaTEM、blaSHV、blaOXA基因,肠球菌与万古霉素耐药有关的vanA、vanB、vanC、vanD基因。

检测抗菌药物耐药基因的方法主要有:PCR扩增、PCR-RFLP分析、PCR-SSCP 分析、PCR-线性探针分析、生物芯片技术、自动DNA 测序4.特殊耐药菌检测(1)耐甲氧西林葡萄球菌检测:对 1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10㎜,或其MIC≥4цg/ml的金黄色葡萄球菌和对1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤17㎜,或MIC≥0.5цg/ml 的凝固酶阴性葡萄球菌被称为耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)。

检验科微生物室多重耐药菌的检测及分析

检验科微生物室多重耐药菌的检测及分析

检验科微生物室多重耐药菌的检测及分析1. 引言1.1 背景介绍微生物室是医院中重要的检验科室之一,负责对各类致病菌进行检测及分析。

随着抗生素的广泛使用,耐药菌的检测问题也日益凸显。

多重耐药菌是指对多种不同类别的抗生素呈现耐药性的细菌,其对人类健康产生的威胁不容忽视。

对微生物室中的多重耐药菌进行检测及分析,对于及时发现并控制这些耐药菌的传播至关重要。

在医院感染控制中,多重耐药菌已成为一项严重的公共卫生问题。

很多医院出现了多重耐药菌暴发,给患者的治疗带来了很大的困难。

对微生物室中的多重耐药菌进行检测及分析,可以及时采取相应的预防和治疗措施,减少医院感染的发生率,有效维护患者的健康。

通过检测及分析多重耐药菌的方法,可以为医院感染管理提供重要的参考依据。

对多重耐药菌的研究也有助于深入了解细菌的耐药机制,推动抗生素的合理使用。

【请继续阅读正文部分】。

1.2 研究目的本研究的目的是为了探究检验科微生物室中多重耐药菌的检测及分析方法,从而提高对多重耐药菌的监测和控制能力。

具体研究目的包括:1. 建立一套可靠的样本采集和处理流程,以确保样本的质量和准确性;2. 探索多种耐药菌的检测方法,包括传统培养法、分子生物学方法和质谱技术等,从而提高检测的准确性和快速性;3. 研究多重耐药菌的分析方法,包括对耐药菌的药敏试验、耐药基因检测和流行病学分析等,为临床治疗提供参考依据;4. 分析实验结果,探讨多重耐药菌的流行病学特征和影响因素,为预防和控制多重耐药菌提供科学依据。

通过本研究,将为多重耐药菌的检测和防治提供新的思路和方法,为保障公共卫生安全做出贡献。

1.3 研究意义微生物室多重耐药菌的检测及分析在临床医学中具有重要的意义。

多重耐药菌的检测可以帮助医生及时选择有效的抗菌药物,避免对患者造成不必要的伤害和延误治疗的风险。

多重耐药菌的分析可以揭示耐药菌的分布规律和流行趋势,为制定更科学合理的感染控制措施提供重要依据。

对多重耐药菌的深入研究也有助于加强对抗菌耐药性的监测和管理,推动抗菌药物的合理使用,防止抗药菌株的进一步传播和扩散。

耐药基因检测与耐药性分子机制解析

耐药基因检测与耐药性分子机制解析

耐药基因检测与耐药性分子机制解析耐药基因检测与耐药性分子机制解析是目前医学领域的热点研究方向,旨在揭示微生物对抗生素的耐药机制以及寻找新的抗菌药物靶点。

本文将分别就耐药基因检测和耐药性分子机制解析进行详细介绍。

耐药基因检测是一项用于检测细菌或病毒耐药性的分子生物学技术。

在临床治疗中,耐药性已成为一个全球性的问题,对治疗效果产生了严重影响。

通过耐药基因检测技术,可以快速准确地确定微生物菌株是否具有耐药性,并且可以为选择合适的抗生素治疗提供参考。

一种常用的耐药基因检测方法是聚合酶链式反应(PCR)。

该技术利用特异性引物扩增目标基因,在不经过培养的情况下,可以直接从临床样本中检测到特定的耐药基因。

此外,新兴的下一代测序技术也在耐药基因检测中发挥了重要的作用。

通过对细菌或病毒的基因组进行高通量测序,可以全面了解其耐药基因的存在与表达情况。

耐药基因检测的应用在许多方面都具有重要意义。

首先,它可以帮助临床医生进行精准的药物选择,避免使用对患者不起作用的抗生素。

其次,耐药基因检测可以迅速发现耐药菌株的传播,防止其进一步传播并采取相应的控制措施。

此外,耐药基因检测还可以为监测耐药性的演变提供重要信息,帮助科研人员更好地了解耐药机制的变化趋势。

耐药性分子机制解析是研究耐药性的分子基础和机制的过程。

通过深入研究微生物抵御抗生素的能力,可以揭示出微生物耐药的分子机制。

这些分子机制通常包括耐药基因的表达调控、新的抗菌靶点的出现以及细菌细胞壁和外膜等结构对抗生素的保护。

耐药性的分子机制是极其复杂的,并且会因不同病原微生物的种类而有所差异。

一些耐药基因表达调控的机制包括突变、水平基因转移和表观遗传修饰等。

对于细菌来说,可能会出现抗生素靶点的变异,导致抗生素无法有效结合靶标。

此外,一些细菌还可以改变其细胞壁或外膜的结构,使抗生素无法进入细胞或被快速排出。

分析耐药性分子机制的研究方法有许多种。

其中,基因组学技术的发展为研究提供了强大的工具。

细菌耐药表型的检测_检验科工作经验

细菌耐药表型的检测_检验科工作经验

细菌耐药表型的检测(一)1. 葡萄球菌1.1 对β-内酰胺类药物1.1.1 耐药机制葡萄球菌对β-内酰胺类药物的耐药至少有三种不同的机制。

①产生添加的青霉素结合蛋白PBP2a;②大量产生灭活药物的β-内酰胺酶;③内源性的PBP被修饰(modified intrinsic PBPs,MOD-SA)降低了与药物的亲和力。

PBP2a由mecA基因编码,这个基因可能源自枯草杆菌,它所编码的PBP2a不但不与β-内酰胺类药物结合,而且能替代几种PBPs的功能,在细胞壁的合成中发挥转肽酶作用。

带有mecA基因的菌株可以是同质性的,在体外药敏试验中均表现耐药;也可以是异质性的,在体外试验中仅1/104-108个菌表现耐药。

大量产生β-内酰胺酶引起的耐药,是由于酶打开药物中的β-内酰胺环,使药物失去了与靶位(PBP)结合的能力,也称做药物被灭活。

MOD-SA型耐药是由于葡萄球菌原有的PBP1、2、4被修饰后降低了β-内酰胺类药物的亲和力。

表13-1 耐β-内酰胺类药物的葡萄球菌的苯唑西林表型分类苯唑西林mecA基因机制borderlinea耐药抑制剂作用β-内酰胺类交叉耐药其它药物交叉耐药R(同质性) + PBP2a - - + +R(异质性) + PBP2a ±- + +S - 产生β-内酰胺酶增加+ + - -R/S - PBP1、2、4被修饰+ - - -a:borderline耐药表型:稀释法中,苯唑西林MIC在2-8ug/ml之间,无明确终点;扩散法抑菌圈直径10-13mm,边缘不整齐。

b:表示可以有例外情况1.1.2 实验室检测β-内酰胺酶检测采用酸法、碘法和头孢噻吩(nitrocefin)法3种方法任一种均可。

苯唑西林耐药性检测NCCLS推荐用琼脂筛选法。

我们的具体方法是配制含40g/L NaCl 的MH琼脂(加水量为应加量的9/10),高压灭菌后分装试管每管9ml,加盖无菌橡皮胶塞后4℃保存。

病原菌耐药性监测报告

病原菌耐药性监测报告

病原菌耐药性监测报告根据我们对病原菌耐药性的监测结果和分析,以下是报告的内容。

一、概述病原菌耐药性监测是针对临床疾病常见的病原菌进行的一项重要工作。

通过监测和分析病原菌对常用抗生素的耐药性情况,可以为临床医学提供指导,确保合理使用抗生素,降低耐药性的发生。

二、监测方法我们采用了标准微量稀释法来进行耐药性监测。

通过将各类抗生素稀释至不同浓度,并加入病原菌培养物中进行生长观察,最终确定其最低抑菌浓度(MIC)。

三、监测结果我们对多个病原菌的耐药性进行了监测,包括但不限于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等。

根据我们的监测,以下是我们得到的一些主要结果:1. 多药耐药情况我们发现某些病原菌对多个药物表现出耐药性。

这些耐药菌株在对多类抗生素均表现出一定程度的耐受性,显示出多药耐药的特征。

2. 特定抗生素耐药性对于单一抗生素,我们也发现了一些病原菌耐药情况。

例如,对氨苄西林、头孢菌素类、红霉素等抗生素的耐药性均有不同程度的出现。

四、分析和建议根据我们的监测结果,结合临床使用和相关研究数据,我们可以得出以下分析和建议:1. 合理使用抗生素耐药性的发生与抗生素的滥用和不合理使用密切相关。

因此,我们强烈建议医务人员在使用抗生素时,严格遵循指南,在合适的患者和病原菌确诊情况下进行使用。

2. 加强感染控制措施耐药性的传播是造成临床感染困境的一个重要原因。

我们建议医院和卫生管理部门加强感染控制措施,包括手卫生、环境清洁、隔离措施等,防止病原菌的传播和耐药性的扩散。

3. 推动研究和开发新型抗生素随着耐药性的不断发展,急需研发新型抗生素来解决当前抗生素效果下降的问题。

政府、学术机构和药企应加强合作,推动新型抗生素的研发和应用。

五、结论病原菌耐药性的监测工作对于保护公众健康、指导临床治疗具有重要意义。

通过监测结果的分析和建议的给出,我们可以更好地应对耐药性问题,为临床治疗提供科学依据。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析和mecA基因检测

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析和mecA基因检测

耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)是医院和社区感染的重要病原菌。

自20世纪90年代初起MRSA检出率有逐年上升趋势,已引起全世界重视。

MRSA不仅对β内酰胺类抗生素耐药,还常对喹诺酮类、氨基糖苷类和大环内酯类等抗菌药物耐药。

由于其多重耐药性,易造成医院感染的暴发流行,全身感染的病死率高达50%以上。

已成为临床抗感染治疗的一大难题[1]。

为正确掌握临床分离MRSA耐药性,给临床用药提供参考,我们分析了太原地区3所综合性医院临床分离的101株MRSA来源、分布、耐药监测情况并对其进行了mecA基因检测。

1材料和方法1.1菌株来源:收集2007—2008年太原地区3所综合性医院(山西省人民医院、山西医科大学第一医院、山西医科大学第二医院)临床分离的MRSA101株,剔除同一患者相同部位的重复菌株。

来源于住院和门诊患者的各类临床标本,包括痰、导管末段、血液、脓液、脑脊液、伤口分泌物、引流液、穿刺物等。

1.2主要试剂与仪器:金黄色葡萄球菌凝集试剂Slidex Staphplus,APIStaph葡萄球菌鉴定试条,VITEK-60全自动微生物分析系统均为法国生物梅里埃公司产品;药物敏感实验培养基为MH培养基购自天津金章生物技术公司现成品;抗生素药敏纸片为Oxoid公司产品。

聚合酶链反应(PCR)扩增所需试剂均为上海生工工程公司产品。

1.3药敏实验:采用纸片扩散法(Kirby-Bauer法)进行。

质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923。

药敏实验结果按美国临床实验室标准化委员会(CLSI)标准判断结果,采用Whonet5.4软件统计分析数据。

1.4MRSA检测:根据CLSI推荐的头孢西汀纸片扩散法检测。

应用标准的纸片扩散法实验条件,金黄色葡萄球菌孵育18h,使用反射光阅读头孢西汀抑菌圈直径。

判断标准是若抑菌圈直径≤21mm判断为MRSA。

抑菌圈直径≥22mm,判断为MSSA。

1.5mecA基因检测,用PCR法。

细菌耐药性基因检测与筛查分子技术

细菌耐药性基因检测与筛查分子技术

细菌耐药性基因检测与筛查分子技术细菌耐药性是指细菌对抗生素的抗性能力,这是一个严重的全球性问题。

随着细菌耐药性的增加,传统的抗生素已经变得无效,使得治疗感染性疾病变得更加困难。

因此,及早检测和筛查细菌耐药性基因对维护公共健康至关重要。

本文将探讨细菌耐药性基因检测与筛查分子技术的原理和应用。

细菌耐药性基因检测与筛查技术是一种基于分子生物学的方法,通过检测并分析细菌中的耐药性基因,以确定细菌是否对特定抗生素产生抗性。

这种技术通常使用PCR(聚合酶链式反应)和DNA测序等分子生物学技术,它们可以快速、准确地检测和鉴定耐药性基因。

首先,PCR技术起到了核心作用。

PCR可以在体外扩增细菌基因组中的特定片段,使其扩增成大量的复制物。

通过设计特异性的引物,可以选择性地扩增目标基因,例如与某种抗生素抗性相关的基因。

一旦目标基因扩增得到足够的数量,就可以进行后续的分析。

其次,PCR产物的测序是细菌耐药性基因检测与筛查中的关键步骤。

通过对PCR产物进行测序,可以获得目标基因的完整序列信息。

这有助于确定某种基因是否与耐药性相关,以及其与已知耐药性基因的相似性。

测序数据还可以用于比较不同临床样本或细菌株中的基因变异,揭示耐药性的起源和传播途径。

此外,细菌耐药性基因检测与筛查分子技术还可以运用微芯片技术,实现高通量的检测和分析。

微芯片上涂覆了大量的特异性探针,用于捕获目标基因。

细菌样本中的DNA经过PCR扩增后,可以与微芯片上的探针发生特异性的杂交反应,从而定量检测目标基因的存在与否。

细菌耐药性基因检测与筛查分子技术具有广泛的应用前景。

首先,它可以用于疾病诊断和监测。

通过检测细菌中耐药性基因的存在与数量,可以判断某种细菌株是否对一种或多种抗生素产生抗性,为医生选择合适的治疗方案提供参考。

此外,该技术还可以用于监测细菌耐药性的传播和演变,及早发现和应对耐药性的出现。

其次,细菌耐药性基因检测与筛查分子技术对抗生素的合理使用和监管也起到了重要作用。

耐药细菌及检测(2)

耐药细菌及检测(2)

耐药细菌及检测(2)写在课前的话随着多重耐药或经耐药细菌在教学医院以及综合性医院的流行,院内感染的机会也在不断的增多。

一些对青霉素和大环内酯类耐药的肺炎链球菌,对三代头孢菌素耐药的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌,以及对碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌等耐药菌株的流行,加之一些新的病原微生物的不断出现,给临床对感染性疾病的诊断和治疗增加了难度。

一、耐药细菌的检测细菌的耐药机制各异,针对具有特定耐药机制的细菌的检测方法也是不同的。

耐药细菌的检测,主要是采用抗菌药物的敏感试验。

具体方法主要有扩散法、稀释法、E-test 法、自动微生物分析仪检测以及分子生物学方法。

(一)方法1、扩散法这种方法是将抗菌药物纸片贴到已经涂布有待检细菌的MH碟子上,通过孵育以后,观察抑菌圈直径,以mm表示,这是一种定性的方法。

2、稀释法稀释法主要是将抗菌药物的浓度做不同稀释,然后来测定这些不同浓度的抗菌药物对细菌的抑菌作用。

通过孵育培养以后,观察最低抑菌浓度,即MIC值,以μg/ml 表示,这是定量的方法。

3 、E-test法E-test法主要是综合了扩散法和稀释法的优点,它是把抗菌药物以不同的浓度放在了一个E-test条上,把E-test条直接放在涂有细菌的碟子上,那么可以观察E-test条上抗菌药物与细菌之间相互作用以后,所获得的椭圆形的抑菌圈,来测定一个MIC值,因此这也是一种定量的方法。

4 、自动微生物分析仪自动微生物分析仪,例如现在很多实验室使用的ViteK, Microscan等,这些微生物分析仪可以给出抗菌药物对于某种细菌的特定的抑菌值,也是MIC值的一种检测方法。

5 、分子生物学方法分子生物学方法主要是测定耐药细菌的一些耐药基因,比如说mecA基因,当然对于某些耐药基因的检测,应该注意这些耐药基因是否有表达,它们是否是“沉默”的基因。

(二)解释性分类通过药敏试验我们可以获得定性的结果即抑菌圈的直径,或者是定量的结果,即最低抑菌浓度MIC值。

菌血症病原菌种类分布及耐药分析

菌血症病原菌种类分布及耐药分析

菌血症病原菌种类分布及耐药分析方案进行血培养分离、鉴定和药敏试验。

运用Bact Alert3D全自动血培养仪进行培养、VITEK-2-Compact全自动微生物分析仪进行鉴定及药敏试验,根据美国临床实验室标准化研究所(CLSI M100-S24)2014版作为选择抗菌药物及判断抗菌药物敏感性的依据,采用Whonet5.6版数据分析软件统计分析病原菌种类和药物敏感情况。

结果所收集的2 200例血培养标本中,共分离病原菌409株,革兰阴性杆菌(G-杆菌)60.4%,革兰阳性球菌(G+球菌)33.8%,真菌5.8%;G-杆菌以大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌为主,对亚胺培南和阿米卡星高度敏感,对氨苄西林高度耐药;G+球菌以溶血葡萄球菌与金黄色葡萄球菌为主,对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、喹奴普汀- 达福普汀全敏感,对青霉素耐药率较高。

结论菌血症病原菌种的种类多样、分布广泛,不同菌种对抗菌药物的耐药性相差较大,医疗机构应加强细菌耐药监测,指导合理有效的选用抗菌药物进行治疗,缩短治疗时间,降低细菌耐药性发生机会,以提高菌血症的救治率。

[关键词] 菌血症;病原菌种;种类分布;耐药分析[中图分类号] R446.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654(2017)04(a)-0054-02 [Abstract] Objective To study and research the distribution and drug resistance of bacillemia pathogenic bacteria species and discuss the bacillemia related factors and provide basis for searching for the more effective treatment method. Methods 2 200 pieces of blood culture specimens submitted in the microbiology lab in the department of clinical laboratory in our hospital from 2015 and 2016,and all the selected specimens were given the blood culture isolation and identification anddrug sensitivity test according to the unified program,Bact Alert3D Automated Blood Culture System was used for culture and VITEK-2-Compactautomatic microbe identification system was used for identification and drug resistance test,and the (CLSI M100-S24)2014 was used as the basis of antimicrobial drug choice and determining the drug sensitivity and the pathogenic bacteria species and drug sensitivity were statistically analyzed by the Whonet5.6 data analysis software. Results Of the collected 2 200 pieces of blood culture specimens,409 strains of pathogenic bacteria were isolated in total,gram-negative bacilli (G- bacillus)accounted for 60.4%,gram positive coccus (G+coccus)accounted for 33.8%,fungus accounted for 5.8%,G- bacillus was mainly escherichia coli and klebsiella pneumoniae,and it was highly sensitive to imipenem and amikacin and is highly drug-resistant to ampicillin;G+coccus was mainly staphylococcus haemolyticus and staphylococcus aureus,and it was fully sensitive to vancomycin,teicoplanin,linezolid,quinupristin-dalfopristin and the drug resistance to penicillin was higher. Conclusion The bacillemia pathogenic bacteria specie is multiple and the distribution is wide,the difference in the drug resistance to antibacterial drug between different pathogenic bacteria species is big,and the medical institutions should enhance the monitoring of bacterial drug resistance,guide the rational and effective choice of antibacterial drug for treatment,shorten the treatment time and reduce the occurrence chance of bacterial drug resistance in order to improve the treatment rate of bacillemia.[Key words] Bacillemia;Pathogenic bacteria specie;Specie distribution;Analysis of drug resistance菌血症是由细菌感染导致的一种严重感染性疾病,了解病原菌对抗菌药物的敏感性,对指导合理用药,避免反复、交叉和滥用抗生素以致更严重的耐药菌产生具有重要意义。

动物源金黄色葡萄球菌分离株mecA基因的表达及耐药性分析

动物源金黄色葡萄球菌分离株mecA基因的表达及耐药性分析
1 材料和方法
1.1 材料 1.1.1 菌株 由项目组实验室提供动物源金葡菌,共计 45 株。药敏试验质控株 ATCC25922、ATCC43300。 1.1.2 仪器与设备 MIC 药敏板、培养箱及 PCR 仪等。 1.2 方法 1.2.1 药敏试验 利用微量肉汤稀释法对 10 种药物的敏感 性进行检测。在具体操作时使用灭菌棉签蘸取 3 ~ 5 个待测 单菌落,使其悬浮在 NaCI 溶液中(3mL 0.45%),用比浊仪 把细菌浓度调整至适宜区间内,混合摇匀,由 MHB 试管内 吸取 50μL 并将其安放在药敏板各孔,在 36℃恒温箱中培养 24h 后,判断结果。 1.2.2 检测 MRSA 菌株 采用头孢西丁制片法进行。严格 依照 CLSI 有关规定,把待测菌株涂擦在琼脂平板上后,将头 孢西丁纸片贴上,恒温培养后利用反射光阅读纸片试验结果。 1.2.3 检测 mecA 基因 依照 ZHANG 等方法合成 mecA 引 物,目标片断为 146bp,工作浓度为 20pmol/L,-20℃低温环 境下保存。利用 DNA 模板取多个菌落并将其放置于 EP 管内, 水浴、离心处理后,取上层清液作为模板,保存待用。提取 8μL PCR 产物,用 2% 琼脂糖凝胶电泳,在成像仪上观察结果。
3 结论
本次试验研究表明,除了万古霉素、莫匹罗星外,金葡 菌对其他药物均产生了耐药性。对利福平的耐药率为 3.8%, 对青霉素、链霉素、甲氧氨苄嘧啶的耐药率均在 70 ~ 81% 之间,而对红霉素的耐药率高于 90.0%。头孢西丁纸片法检 测出 MRSA 共计 23 株,占 51.1%;并且发病样本中只从猪 内脏样品中检测出 MRSA,这可能是因为生猪在疾病预防、 治疗过程中未能科学使用抗生素所引发的。
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MecA、Nuc基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测中的应用

MecA、Nuc基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测中的应用

MecA 、Nuc 基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测中的应用郭建巍,齐文峰,郝秀红,李文军,陈昌国,张云,马志家,陈秋圆,赵强元[摘要]目的通过对180株金黄色葡萄球菌临床分离株MecA 、Nuc 基因的检测,以期选择出一种适合临床的并能简便、快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus ,MRSA )的方法。

方法细菌鉴定及药敏采用全自动细菌鉴定和药敏分析仪。

MecA 、Nuc 基因检测采用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction ,FQ-PCR )法。

结果FQ-PCR 对180株金黄色葡萄球菌MecA 、Nuc 基因检出率为75.0%,全自动细菌鉴定和药敏分析仪对180株金黄色葡萄球菌的MRSA 检出率为72.8%,2种检测方法比较差异无统计学意义(P >0.05)。

全自动细菌鉴定和药敏分析仪对MRSA 的检测正确率为94.8%。

结论FQ-PCR 检测MRSA 正确率高,只需要1 2h 即可完成。

该方法快速、简便、准确,值得推广应用。

[关键词]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;MecA 基因;Nuc 基因;荧光定量聚合酶链反应;全自动细菌鉴定和药敏分析仪[中图分类号]R446.5[文献标志码]B[文章编号]2095-3097(2017)03-0157-03doi :10.3969/j.issn.2095-3097.2017.03.007Application of MecA and Nuc genes detection in clinical isolated methicillin resistant Staphylococcus aureus GUO Jianwei ,QI Wenfeng ,HAO Xiuhong ,LI Wenjun ,CHEN Changguo ,ZHANG Yun ,MA Zhijia ,CHEN Qiuyuan ,ZHAO Qiangyuan(Department of Clinical Laboratory ,Navy General Hospital ,Beijing 100048,China )[Abstract ]Objective In order to choose an easier performed rapid and accurate methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA )detection method.MecA and Nuc genes were detected from 180strains clinical isolated Staphylococcus aureus .Methods Staphylococcus aureus were identified by automatic bacteria identification and drug sensitivity analyzer.MecA and Nuc genes were detected by fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR )analyzer.Results The expressionrate of MecA and Nuc genes in 180Staphylococcus aureus was 75.0%.MRSA positive rate of 180Staphylococcus aureus identified by automatic bacteria identification and drug sensitivity analyzer was 72.8%.No difference between automatic bacteria identification and FQ -PCR.The accuracy rate of automatic bacteria identification and drug sensitivity analyzer was 94.8%.Conclusion Detection MRSA according to quantitation of MecA and Nuc genes expression by FQ-PCR has a high accuraterate.The whole experiments would be finished in 1—2hours.This method is rapidly ,easily per-formed and has a wide application.[Key words ]Methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA );MecA gene ;Nuc gene ;Fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR );Automatic bacteria identificationand drug sensitivity analyzer[基金项目]国家自然科学基金面上项目(30872394);北京市自然科学基金资助项目(面上项目)(7162188)[作者单位]100048北京,海军总医院检验科(郭建巍,齐文峰,郝秀红,李文军,陈昌国,张云,马志家,陈秋圆,赵强元)[注明]郭建巍,齐文峰:并列第一作者金黄色葡萄球菌是医院感染和社区感染的重要病原菌,在金黄色葡萄球菌引起的临床感染中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant staphy-lococcus aureus ,MRSA )占到了60% 80%[1-4],并逐年增加。

感染性心内膜炎患者的主要病原菌耐药基因检测

感染性心内膜炎患者的主要病原菌耐药基因检测

感染性心内膜炎患者的主要病原菌耐药基因检测王佳;高辉;徐益;黄云昆;朱雯梅;姚瑶;俸玉【摘要】目的分析感染性心内膜炎患者耐药表型与耐药基因的关系.方法收集感染性心内膜炎患者血培养分离的草绿色链球菌和葡萄球菌,提取DNA,用聚合酶链反应(PCR)法扩增检测耐药基因.结果草绿色链球菌扩增的基因为PBP1a、PBP2b 和PBP2x,这3个基因主导β-内酰胺类抗菌药物耐药,葡萄球菌扩增基因为mecA 和ermB,mecA基因可引起耐甲氧西林阳性,ermB基因主导大环内酯类耐药,该实验选取的5株草绿色链球菌未检测出PBP1a、PBP2b和PBP2x基因,葡萄球检测检测结果显示6、7、8、10号菌株mecA基因阳性,6、7、8、9号菌株ermB基因阳性.结论耐药基因检测可以对临床感染性心内膜炎患者早期用药起到指导作用.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2018(015)018【总页数】4页(P2694-2696,2700)【关键词】感染性心内膜炎;草绿色链球菌;葡萄球菌【作者】王佳;高辉;徐益;黄云昆;朱雯梅;姚瑶;俸玉【作者单位】昆明医科大学附属延安医院/云南心血管病医院检验科,昆明650051;昆明医科大学附属延安医院/云南心血管病医院检验科,昆明650051;昆明医科大学附属延安医院/云南心血管病医院检验科,昆明650051;昆明医科大学附属延安医院/云南心血管病医院检验科,昆明650051;昆明医科大学附属延安医院/云南心血管病医院检验科,昆明650051;昆明医科大学附属延安医院/云南心血管病医院检验科,昆明650051;昆明医科大学附属延安医院/云南心血管病医院检验科,昆明650051【正文语种】中文【中图分类】R446.5感染性心内膜炎是由病原菌直接感染而引起的心瓣膜、心室壁或邻近大动脉内膜的炎症性疾病,引起感染的病原体以细菌最常见,也可由真菌、病毒、立克次体、衣原体属、螺旋体等其他微生物引起。

PCR法快速检测阳性血培养瓶中葡萄球菌属

PCR法快速检测阳性血培养瓶中葡萄球菌属

PCR法快速检测阳性血培养瓶中葡萄球菌属周义正;李向阳;邱小燕;付千均;杨锦红【期刊名称】《中华医院感染学杂志》【年(卷),期】2008(18)12【摘要】目的建立采用聚合酶链反应(PCR)技术从阳性血培养瓶中检测葡萄球菌属的方法。

方法以493例阳性血培养瓶中的细菌为检测对象,采用盐酸胍-苯甲醇法提取细菌DNA,然后以PCR扩增16S rRNA、ssa和mecA基因鉴定葡萄球菌属及其对甲氧西林的耐药性,并将检测结果与传统方法相比较。

结果PCR法检测阳性血培养瓶中葡萄球菌属的时间约为4h。

其较传统方法的24~48h明显缩短;以传统方法为金标准,其检测葡萄球菌属的灵敏度和特异度达98.6%和100.0%,此外PCR法检测耐甲氧西林葡萄球菌较传统方法也具有明显优势。

结论该方法灵敏度高,特异性强,检测方便快速;适合从阳性血培养瓶中检测葡萄球菌属。

【总页数】3页(P1798-1800)【关键词】葡萄球菌属;聚合酶链反应;甲氧西林;耐药性【作者】周义正;李向阳;邱小燕;付千均;杨锦红【作者单位】荆州市中心医院检验科,湖北荆州434020;温州医学院附属第二医院检验科,浙江温州325027【正文语种】中文【中图分类】R378.11【相关文献】1.基于通用探针库的实时荧光PCR技术快速检测阳性血培养瓶中的细菌病原体 [J], 郭安;刘志文;修贺明;刘薇;方闪闪;2.阳性报警时间法快速鉴定血培养中的葡萄球菌 [J], 王沛;何永贵;陈学兵3.免疫捕获PCR快速检测阳性血培养瓶中的金黄色葡萄球菌 [J], 周义正;李向阳;杨锦红4.环介导等温扩增法直接检测阳性血培养瓶中大肠埃希菌 [J], 任春阳;田杰5.肺炎链球菌抗原试验快速检测阳性血培养瓶肺炎链球菌 [J], 王沛;吕志华因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

兽医超级细菌实验报告

兽医超级细菌实验报告

一、实验背景近年来,随着抗生素的广泛使用,细菌耐药性逐渐增强,出现了许多对多种抗生素具有耐药性的“超级细菌”。

这些超级细菌不仅对人类健康构成严重威胁,也对兽医领域造成了极大影响。

为了研究兽医超级细菌的耐药机制、传播途径及防治方法,我们开展了本次实验。

二、实验目的1. 筛选兽医临床分离的细菌,鉴定其耐药性。

2. 分析兽医超级细菌的耐药基因,探讨其耐药机制。

3. 探究兽医超级细菌的传播途径及防治方法。

三、实验材料1. 实验菌株:从兽医临床分离的细菌,包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。

2. 试剂:抗生素药敏纸片、细菌鉴定试剂盒、PCR试剂盒、引物等。

3. 仪器:恒温培养箱、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等。

四、实验方法1. 菌株培养与分离:将分离得到的细菌接种于血琼脂平板,37℃培养24小时,挑取单菌落进行纯化。

2. 药敏试验:将纯化后的细菌接种于血琼脂平板,用抗生素药敏纸片进行药敏试验,观察细菌的抑菌圈直径。

3. 耐药基因检测:采用PCR技术,检测细菌耐药基因,包括金黄色葡萄球菌的mecA基因、大肠杆菌的ampC基因、肺炎克雷伯菌的TEM-1基因等。

4. 传播途径研究:通过细菌的接种试验,观察细菌在不同环境中的存活时间、存活率等,分析其传播途径。

5. 防治方法研究:针对耐药细菌,探讨新型抗生素的使用、联合用药、细菌耐药基因的敲除等防治方法。

五、实验结果与分析1. 药敏试验结果:金黄色葡萄球菌对青霉素、红霉素等抗生素耐药,大肠杆菌对阿莫西林、头孢噻肟等抗生素耐药,肺炎克雷伯菌对头孢噻肟、头孢他啶等抗生素耐药。

2. 耐药基因检测结果:金黄色葡萄球菌携带mecA基因,大肠杆菌携带ampC基因,肺炎克雷伯菌携带TEM-1基因。

3. 传播途径研究:细菌在不同环境中的存活时间、存活率存在差异,主要通过空气、水源、动物排泄物等途径传播。

4. 防治方法研究:针对耐药细菌,可尝试以下方法:(1)合理使用抗生素,避免滥用;(2)联合用药,提高治疗效果;(3)研究新型抗生素,降低耐药风险;(4)加强细菌耐药基因的监测,及时掌握细菌耐药动态。

mecA、femA基因与MRS多重耐药性的相关性研究的开题报告

mecA、femA基因与MRS多重耐药性的相关性研究的开题报告

mecA、femA基因与MRS多重耐药性的相关性研究的开
题报告
题目:mecA、femA基因与MRS多重耐药性的相关性研究
背景:葡萄球菌(Staphylococcus)是一种常见的致病菌,其中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)可以引起各种感染,从皮肤感染到血流感染。

由于广泛使
用抗生素和医院设施的不良管理,金黄色葡萄球菌对多种药物表现出了多重耐药性(MRS),从而使治疗变得困难。

研究表明,mecA和femA基因是金黄色葡萄球菌耐药性的主要决定因素。

目的:本研究旨在探讨mecA和femA基因在MRS菌株中的表达水平与多重耐药性之
间的相关性,为MRS的治疗提供新的思路和策略。

方法:从临床分离的金黄色葡萄球菌中筛选出对多种抗生素表现出不同程度耐药性的
菌株,包括MRSA(甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌)和MSSA(甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌)等。

利用RT-qPCR技术检测这些菌株中mecA和femA基因的表达水平,并
分析其与多重耐药性之间的相关性。

预期结果:本研究预计可以揭示mecA和femA基因与MRS多重耐药性之间的相关性,并对MRS的治疗提供新的思路和策略,从而有效控制MRS的传播和流行。

意义:MRS已成为公共卫生的威胁,而针对MRS的治疗策略也面临着严峻的挑战。

本研究旨在了解MRS耐药性的基因机制,并为临床治疗提供新的思路和策略,从而具有重要的社会和临床意义。

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J a o h a J a r ,s ̄ H si l 0 7 e ,D 2 ,o 中 口友好医院学报 2 0 o lfC i -a nFi t h o t , 0 b f 1 . ¨ n p ed p p a 2 F V . N 0 7年第 2 卷第 1 1 期
A s a tObet e T rvd ud o raoa l a t i i hrp fp toe i mi orai sf m bt c jc v :o poie gie fr esnbe ni c a teay o a gnc c ogn m r r i m mb l h r s o
一定 比例 。 关 Nhomakorabea键
词: 病原菌 : 血培 养; 耐药性
文献 标 识 码 : A 文 章 编 号 :0 10 2 f0 70 一 o 5 0 10 — 0 5 2 0 ) 1o 1— 4
中 图分 类 号 : 3 8 R 7
An lss f a t c o ll eitn e f p to e i mir o g ns fo ay i o ni r ba rssa c o a h g nc mi c o r a m r m bo d c l r n d tci n o i lo ut e a d ee t u o f
为合理使用抗菌药物提供参考。 方法: 应用 WHO E . N T 53进行耐药率统计 ; 采用微量 肉汤稀 释法测定最低抑菌
浓 度 ;C P R检 测 葡 萄 球 菌 m c 基 因 。结果 : 兰 阳性 球 菌 比革 兰 阴性 杆 菌 分 离 率 高 。m c eA 革 eA基 因 阳性 率在 金 黄
me A i Sa h l ̄ c l W ANG igl S u n YAN Ch o.t c n t p yo o c/ / Jn LI h a g. a e
|o r a o ia- a a F in s i un l f Chn J p n re d h p
Hopt12 7 F b 2 ( )1 - 8 si .伽I e ,1 1 :5 1 a
血培养病原菌耐药 陛分析及 葡萄球菌 meA基因检测 ★ c .
王 靖, 李 爽 , 超 , 阎 李春 英 , 李 杰 , 刘迎 春 , 张远春
( 日友好 医院 检 验科 , 京 10 2 ) 中 北 0 09
摘 要 目的 : 析 中 日友 好 医 院血 培 养 【病 原 菌 的 构 成 与 耐 药 情 况 , 分 I ] 明确 血 液 感 染 的病 原 菌 分 布 和 耐 药 模 式 ,
bo d c l r n h i a t co i eitn eM eh d : nma n ii r o c nrt n wa eemie w t lo ut e a d ter ni rba rs a c . t o s Mii l ihbt y c n e t i s d tr n d i u mi l s o ao h mir rt i t n a d W HON T 53 w s p l d O s mma z eitn .ne e it n u c pil. c co b h dl i n o uo E . a a pi t u e i r e rss t itr dae a d s se t eme A a m b W S d tce t P n sa h lc c i s l : h e aaig rt fga p st e O C S a ih r ta a ee td wi h CR i tp yo oc. ut T e sp rt ae o rm- o iv C CU w s hg e h n Re s n i ta rm - e aie a iu . c d tce i Sa ru a d o g l e e aie tp yo o c s a 3 -% h to ga n g t b cl s f v l me A ee td n .ue s n c a ua n g t sa h lc c u w s 23 s v a d 9 .% rs e t eyT e sp rt g rt a ih i .oiK.n u na d A.a a ni S L n E.oi n 58 ep ci l.h e aai ae w s hg n Ec l。 p e mo ie a b u mn iE B s i c l v n n . ad n K.n u na w r 1 .% a d 1 % . n u in: t iii eitn tp yo o c s s f hg ec n- p e mo ie ee 04 n l . Co c so mehcln rss tsa h lc c u i ih p re t 2 l l a o a e i tp yo o c s a d ES L s o eti ec na e i .oia d K.n u na rm h lo utr. g n s h lc c u n B s i fc ran p re tg n Ee l n p e mo ie fo te bo d c l e a u Ke r p to e i y wo d s ah g nc c og ns ;lo utr a t c ba rss n e mir ra im bo d c l e;ni r il eit c o u mio a
色 葡 萄球 菌 和 凝 固酶 阴性 葡 萄 球 菌 中 分别 为 3 . 23 %和 9 . ; 兰 阴性 杆 菌 中分 离 率 较 高 的 是 大 肠 埃 希 菌 、 58 革 % 肺
炎克雷伯菌和鲍 曼不动杆菌 。超广谱 B 内酰胺酶( S L ) 一 E B s菌株分别占大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌 的 1.%和 04 l. 结论 : 1 %。 2 血培养苯唑西林耐药葡萄球菌 菌株分离 比例较高 ,S L 菌株在大肠埃希菌和肺 炎克雷伯菌中占 EBs
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