HBV耐药基因突变检测

HBV耐药基因突变检测

项目简介：HBV是一种经血液传播的嗜肝DNA病毒，是导致慢性肝炎、肝硬化和肝癌的重要因素。抗病毒治疗是最常见的乙肝治疗方式。国内外公认的抗病毒药物主要有干扰素和核苷（酸）类药物两类。核苷（酸）类药物因口服方便、毒副作用少、病毒载量下降较快而受到广泛关注。

长期服用核苷（酸）类药物易产生耐药。在用药过程中，患者体内HBV DNA及谷丙转氨酶（ALT）逐渐下降，继而达到一个平稳期，患者病情减轻。此时，HBV很难被完全清除，而是处于一个低复制非活动时期。随着用药时间的延长，对药物敏感的野生株数量下降，具有耐药突变的变异株因对药物不敏感，而得以不断复制、增加，从而导致HBV DNA及ALT重新上升，使得肝炎复发。耐药发生的直接后果即为药物疗效的降低和丧失，具体表现为肝炎复发、肝病急性加重、肝硬化，甚至出现肝衰竭。

乙型肝炎病毒耐药是指在核苷酸类似物作用下，药物靶乙型肝炎病毒 P 基因中的某些位点发生改变，导致这种药物对乙型肝炎病毒的抑制作用下降或消失。自拉米夫定上市以来，目前经美国FDA 批准先后上市的核苷酸类似物有阿德福韦、恩替卡韦和替比夫定。这些药物作用下出现的病毒耐药均与乙型肝炎病毒 P 基因变异有关。如拉米夫定耐药相关突变位点为D 区M204V/ I、B 区L180M，阿德福韦相关突变位点为D 区N236T、B 区A181V，替比夫定为M204I，L180M，病毒只需要1 个上述位点突变就可发生对这些药物耐药。而对恩替卡韦耐药必须建立在拉米夫定耐药基础上(L180M +M204I/V)，同时出现Al84G 或S202I 或M250V 突变。随着用药时间推移，各类核苷酸类似物发生耐药的几率是不尽相同的。其中拉米夫定几率最高，而恩替卡韦由于具有较高耐药基因屏障，所以产生耐药的几率最低，在用药后的4 年内都维持在1.1%。

因此通过检测HBV耐药基因突变点有助于判断治疗的效果、制定个体化抗病毒治疗方案。使用核苷酸药物导致耐药基因突变原理如下图所示。

YMDD变异与拉米夫定抵抗：YMDD是4个氨基酸(酪氨酸一蛋氨酸一天门冬氨酸一天门冬氨酸)的缩写，位于乙肝病毒DNA聚合酶上，是拉米夫定的主要作用位点。如果该位点发生突变，称为YMDD突变。最常见的YMDD变异是M酪氨酸)被V(缬氨酸)或I(异亮氨酸)取代，分别称为YVDD或YIDD变异。一旦发生变异，拉米夫定对乙肝病毒的抑制作用就大大下降，称为拉米夫定抵抗。

检测方法：采用PCR结合测序技术，检测HBV感染患者血液中HBV耐药基因突变情况。该方法具有以下优点：1.流程简单：分析可靠，结果明确可信；2.高覆盖度：片段检测YMDD突变YVDD,YIDD;3.灵敏准确：野生型背景中检测所有突变；4.高效可靠：最少量反应中完成多个检测；5:。低起始量：血清或血浆，只需20ng 核酸；6.临床认证：3500DX测序仪，SFDA认证。各种抗HBV药物及相对应突变位点如下图所示。

HBV耐药基因突变检测标本采集及出报告时间：病人采集静脉血2ml（用EDTA-K2抗凝）送检验部分子诊断学实验室，7个工作日出报告。

临床意义：⑴在初始治疗前检测，有助于判断是否感染耐药突变株，可以帮助选择初治药物；⑵在治疗过程中检测，有助于及时发现基因型耐药，从而采取预防措施，避免发

生病毒反弹；⑶耐药发生后检测，可根据耐药情况及时换药加药或更改治疗方案，使患者获得更好的治疗效果。

HBV耐药检测建议：⑴在使用核苷（类）药物治疗前，先做一次耐药检测，以确定用药种类；⑵在治疗的最初两年，对于轻微肝病患者，推荐每6个月检测一次；⑶两年后建议每3个月检测一次，因为这个时候耐药出现的可能性更高；⑷对病情较重的患者来说，耐药的后果会迅速表现出来，并可能威胁生命，因此建议每3个月检测一次。