浅谈植物多倍体鉴定方法
植物多倍体诱发及细胞学鉴定概要
植物多倍体诱发及细胞学鉴定一、实验目的1、通过实验掌握人工诱导多倍体植物的方法和技术，观察多倍体的特点。
2、利用染色体分析的方法对多倍体细胞做出准确判断。
二、实验原理（一）多倍体1、多倍体是指细胞中具有3个或3个以上染色体组的细胞或个体。
多倍体可以分为:同源多倍体(具有3个以上相同染色体组的细胞或个体，且染色体组来源于同一物种（AAA，AAAA）；异源多倍体(具有3个以上染色体组且染色体组来源于不同物种，通常由不相同的种杂交的杂种再经过染色体加倍而来（AABB，AABBDD）。
2、多倍体是适应恶劣环境条件的结果。
3、自然界多倍体产生的原因：温度骤变，使细胞分裂时染色体不分离造成；有丝分裂时染色体分离而细胞没有分裂，导致体细胞染色体加倍；减数分裂时染色体没有减数，使生殖细胞染色体加倍。
4、多倍体植物的特性：A巨大性B可孕性低C适应性强D有机合成速率增加E克服远缘杂交的不结实性（二）人工诱导多倍体的方法、原理及鉴定方法1、人工诱导多倍体的方法A、物理方法温度剧变、机械损伤、各种射线处理等B、化学方法各种植物碱、麻醉剂、植物生长激素等。
秋水仙素是诱导多倍体的最有效的方法之一。
2、秋水仙素的作用A、细胞分裂时抑制纺锤体的形成B、抑制细胞板的形成C、无残效3、诱导方法A种子浸渍处理B点滴法(滴定法) C 毛细管法D 羊毛脂法E球根处理F复合处理G离体组织水平上诱导单个细胞内染色体加倍3、鉴定方法A、间接鉴定：观察气孔的大小和花粉粒的体积最为可靠。
B、直接鉴定：直接检查花粉母细胞或根尖细胞内的染色体数目。
三、实验步骤1、取材：取大蒜（洋葱、蚕豆、小麦等）发根至0.5-1cm，然后转入盛有0.15%秋水仙素水溶液的培养皿中继续培养24小时，待观察到根部有膨大时取出固定。
与在水中培养的材料做对照。
2、固定：在卡诺固定液中固定24小时，移至70%乙醇中保存或备用。
3、解离：植物的分生组织如根尖、茎尖等需要经过处理以便除去细胞之间的果胶层并使细胞壁软化，经解离的组织才能使压片步骤顺利进行。
实验五 植物多倍体的诱导和鉴定
五.作业
1.分别绘出2n=16和2n=32洋葱中期分裂相细胞。
2.阐述秋水仙素诱导植物细胞染色体数目加倍的机 制。
四．步骤方法
4.保存液中取根尖，纯水漂洗2次，1mol/L盐酸60℃水解根
尖10分钟，再纯水漂洗2次
5.将两种根尖分别置于干净载玻片上，
均切下分生区，加一滴染液，用镊 子捣碎根尖染色3-5分钟
四．步骤方法
6.加盖玻片，进行压片
7.显微观察
四．步骤方法
1.剥去洋葱干茎片，整理干净根盘，泡水3-4天 2.不定根长出约2cm，部分洋葱转入0.05%秋水仙素溶液 处理2天 3.分别取经过秋水仙素溶液处理后膨大的根尖和不处理 的根尖进行固定4-6h，95%酒精冲洗及70%酒精保存 4.保存液中取根尖，纯水漂洗2次，1mol/L盐酸60℃水解 根尖10分钟，再纯水漂洗2次 5.将两种根尖分别置于干净载玻片上，均切下分生区， 加一滴染液，用镊子捣碎根尖染色3-5分钟 6.加盖玻片，进行压片 7.显微观察
人工诱导多倍体也是培育植物新品种的主要 途径之一。
4nx2n 3仙
郁金香
小麦
三．供试材料 洋葱鳞茎
四．步骤方法
1.剥去洋葱干茎片，整理干净根盘，泡水3-4天 2.不定根长出约2cm，部分洋葱转入0.05%秋水仙素溶液处
理2 天
3.分别取经过秋水仙素溶液处理后膨大的根尖和不处理的 根尖进行固定4-6h，95%酒精冲洗及70%酒精保存
实验五
一．目的要求
植物多倍体的诱导和鉴定
了解人工诱导多倍体植物的原理；学习使用秋 水仙素诱发多倍体植物的方法；掌握鉴别植物多倍 体的实验操作。
二．预备知识 具有3个或以上基本染色体组的植物称为多
倍体植物。多倍体有同源多倍体和异源多倍体。 人工诱导多倍体可以采用物理和化学药剂处 理的方法进行操作。
植物多倍体鉴定
实验18 植物多倍体鉴定技术多倍体广泛分布于植物界，如普通小麦是异源六倍体，棉花是四倍体，栽培草莓是八倍体等，多倍体产生途径除自然发生外，化学药剂诱导是很有效的途径。
不管以何种方式产生，检测、鉴定多倍体就显得很重要和迫切。
鉴定多倍体，可采用间接和直接的方法。
间接方法包括形态学和细胞学的观察，直接法是直接对试材检测染色体的数目。
一般来讲，多倍体植物在形态学和细胞学上的特征表现为: 气孔、花器、花粉粒、种子、果实甚至叶片等明显变大，单位面积叶片上的气孔数目减少而密度降低等。
考虑到染色体观察、记数较为烦琐，首先对试材从形态学和细胞学上来初步判断是否为多倍体，然后把初步断定为多倍体的试材再观察、记录染色体数目是否真正地发生了倍性的变异，从而最终确定为多倍体。
芽变选种是无性繁殖植物育种的一种有效途径，多以嵌合体的形式存在，特别是多倍体芽变。
通过检测梢端分生组织LⅠ、LⅡ、LⅢ三层细胞的细胞、细胞核及核仁的大小，可以鉴定芽变材料倍性嵌合体的类型。
本实验学习多倍体鉴定的基本方法。
一、试材及用具1．试材:玉米、小麦、棉花、草莓、番茄、苹果等。
2．用具:显微镜、剪刀、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸、镊子、纱布、酒精灯、物镜测微尺、目镜测微尺等。
3．试剂及配制（1）卡诺氏固定液: 冰醋酸1份，加纯（或95%）酒精3份，混匀，现用现配。
（2）醋酸纤维素液: 称取10g醋酸纤维素，加入到100 mL的丙酮溶液中，用玻棒搅拌数分钟至醋酸纤维素全部溶解。
（3）醋酸洋红染色剂: 取45 mL冰醋酸，加入55 mL蒸馏水，加热至沸腾，慢慢加入2 g洋红，煮沸约5 min，冷却后加入2% 硫酸亚铁。
过滤，贮于棕色瓶中。
（4）解离液: 铬酸2g，浓硫酸8 mL，浓硝酸3 mL，蒸馏水89 mL，充分混匀。
二、方法步骤（一）间接方法1．形态学观察观察试材的形态学特征，例如叶片、果实、种子、花器等是否有较明显的增大现象，如果肉眼就能观察到明显的增大现象，说明试材很有可能是多倍体。
植物多倍体的诱发和鉴定
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2 讨论： ① 选择合适的材料是实验成功的首要因素， 请问该实验选材时注意什么问题？ ② 酶解时酶液的组成及浓度如何确定？ ③ 研究原生质体的意义是什么？
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药品：蒸馏水、卡诺氏固定液、45%醋酸、秋 水仙素、改良苯酚品红染液等。
实验步骤：
1 培养根尖：将大蒜瓣放在盛有清水的培养皿
中，让根部接触水，在20~25℃光照下培养，待根 尖长到0.5~1cm时备用。
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2 多倍体诱导：将水换成0.1%的秋水仙素溶液， 在阴暗处培养2天左右。
3 固定：11：30左右将剪取根尖1~2cm冲洗后 转移至卡诺氏固定液中，室温下处理3~8小时。
用高温、低温、射线照射、等物理化学方法人工诱
发多倍体植物。其中，以应用化学试剂更为有效和
方便，如秋水仙素、异生长素、富民农等，使用最
广泛、效果最好的是秋可水编辑仙ppt素。
2
实验材料：
洋葱、大蒜等。本实验选用大蒜。
实验用品：
用具：显微镜、剪刀、镊子、解剖针、载玻片、 盖玻片、酒精灯、铅笔、吸水纸等。
和果胶酶分离原生质体可。编辑ppt
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实验材料：
菠菜、油菜等。
实验用品：
用具：显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、尼 龙过滤网、离心管、剪刀、镊子、吸水纸等。
药品：70%乙醇、甘露醇、CPW缓冲液、纤维素 酶、果胶酶、20%蔗糖溶液等。
实验步骤：
1 选取叶片：选取充分伸展的幼嫩叶片，自来 水清洗后，用吸水纸吸干水分。
请注意比较该实验结果与 有丝分裂实验结果有何不 同？
实验报告：
1 说明秋水仙素诱发多倍体的原理是什么？ 2 画出在显微镜下看到的多倍体细胞的图像；
园艺植物多倍体的诱导和鉴定 李腾飞
园艺植物多倍体的诱导和鉴定中荷1001 李腾飞一、多倍体的诱导：物理方法温度骤变、机械创伤、辐射处理等都有可能诱发多倍体的产生。
化学方法主要是利用秋水仙素诱导多倍体。
生物方法：有性杂交获得多倍体组织培养获得多倍体1、秋水仙素诱导多倍体：秋水仙素是从百合科植物秋水仙的器官和种子中提取出来的一种剧毒的植物碱。
纯品为无色或淡黄色针状结晶，熔点155℃，有苦味，易溶于冷水、酒精、氯仿和甲醛。
通常用水或酒精作溶媒。
秋水仙素诱导多倍体的原理：秋水仙素与正在分裂的细胞接触后，可抑制微管的聚合过程，不能形成纺锤丝，使染色体无法分向两极，从而产生染色体加倍的核。
适宜浓度的秋水仙素溶液，能阻碍纺锤丝的形成，但对染色体结构无明显影响。
处理的细胞在一定时间内可恢复正常，重新进行分裂。
诱导方法：①浸渍法：可用溶液浸渍幼苗、新梢、插条、接穗、种子及球根类蔬菜、花卉等材料。
为避免蒸发，宜加盖，避光。
一般发芽种子处理数小时至3d或多至10d左右。
秋水仙碱能阻碍根系的发育，处理后要用清水洗净后再播种。
发芽种子的胚根，处理后往往受到抑制，发根较慢，为利于根的生长，可在药液中添加适当生长素。
处理插条、接穗一般1-2d。
处理幼苗时，为避免根系受害，可将盆钵架起来倒置，使茎端生长点浸入秋水仙碱溶液中。
②涂抹法把秋水仙碱按一定浓度配成乳剂，涂抹在幼苗或枝条的顶端，处理部位要适当遮盖，以减少蒸发和避免雨水冲洗。
③滴液法对较大植株的顶芽、腋芽处理时可采用此法。
常用的水溶液浓度为0.1%~0.4%，每日滴一至数次，反复处理数日，使溶液透过表皮渗入组织内部。
如溶液在上面停不住时，可将小片脱脂棉包裹幼芽，再滴加溶液，浸湿棉花。
④套罩法保留新梢的顶芽，除去顶芽下面的几片叶，套上一个防水的胶囊，内盛有含1%秋水仙碱的0.65%的琼脂，经24h即可去掉胶囊。
这种方法的优点是不需加甘油，可避免甘油引起药害。
⑤毛细管法将植株的顶芽、腋芽用脱脂棉或纱布包裹后，将脱脂棉与纱布的另一端浸在盛有秋水仙碱溶液的小瓶中，小瓶置于植株旁，利用毛细管吸水作用逐渐把芽浸透，此法一般多用于大植株上芽的处理。
植物多倍体的诱发及鉴定
植物多倍体的诱发与鉴定一、实验目的1、掌握人工诱导多倍体的原理，及其在遗传育种中的意义。
2、掌握用秋水仙素诱发多倍体的方法。
二、实验原理自然界各种生物的染色体数目是相对恒定的，这是物种的重要特征。
遗传学上把一个配子的染色体数，称为染色体组(或称基因组)，用n表示。
一个染色体组内每个染色体的形态和功能各不相同，但又互相协调，共同控制生物的生长和发育、遗传和变异。
由于各种生物的来源不同，细胞核内可能具有一个或一个以上的染色体组，凡是细胞核中含有一套完整染色体组的就叫做单倍体，也用n表示。
具有两套染色体组的生物体称为二倍体，以2n表示。
细胞内多于两套染色体组的生物体称为多倍体，这类生物细胞内染色体数目的变化是以染色体组为单位进行增减的，所以称作整倍体。
多倍体普遍存在于植物界，目前已知道被子植物中约有l／3或更多的物种是多倍体，除了自然发生的多倍体物种之外，还可采用高温、低温、X射线照射、嫁接和切断等物理方法人工诱发多倍体植物。
在诱发多倍体方法中以应用化学药剂更为有效。
如秋水仙素、异生长素，富民农等，都可以诱发多倍体，其中以秋水仙素溶液效果最好，使用最为广泛。
秋水仙素溶液的主要作用是抑制细胞分裂时纺锤体的形成，使染色体向两极的移动被阻止，而停留在分裂中期的分布，这样细胞不能继续分裂，从而产生染色体数目加倍的核。
若染色体加倍的细胞继续分裂，就形成多倍性的组织．由多倍性组织分化产生的性细胞，可通过有性繁殖方法把多倍体繁殖下去。
如果将种子用秋水仙素浸渍，也可诱导多倍体植株产生。
多倍体已成功地应用于植物育种。
用人工方法诱导的多倍体，可以得到一般二倍体所没有的优良经济性状，如粒大、穗长、抗病性强等。
三倍体西瓜、三倍体甜菜、八倍体小黑麦已在生产上得到广泛的应用。
染色体加倍后必须进行鉴别，同源多倍体主要是根据形态特性来判断，如叶色、叶形及气孔和花粉粒的大小。
最为可靠的方法，是待收获大粒种子后，再将这些大粒种子萌发，制备根尖压片，然后检查细胞内的染色体数目，只有染色体数目加倍了，才能证明植株已诱变成为多倍体。
不同植物同源多倍体的诱发与鉴定实验设计
不同植物同源多倍体的诱发与鉴定实验设计实验设计：诱发和鉴定不同植物同源多倍体的实验设计主要包括以下几个步骤：准备材料、诱发多倍体、鉴定多倍体。
一、准备材料1. 植物种子或试管苗：选择需要研究的植物种子或试管苗作为实验材料。
2. 培养基：根据植物的需求配制适宜的培养基，通常包括基本培养基、诱导培养基等。
3. 生长室：提供适宜的光照、温度和湿度条件以促进植物生长。
二、诱发多倍体多倍体的诱导通常通过植物组织培养技术实现。
1. 无菌处理：将植物种子或试管苗表面进行消毒处理，以去除外源菌。
2. 初代培养：将消毒后的种子或试管苗分别接种到适宜的基本培养基上，培养至生长健壮的愈伤组织形成。
3. 诱导多倍体：将愈伤组织转移到适宜的诱导培养基上，添加适当的植物生长调节剂（如激素和抗生素），促使植物细胞发生有丝分裂异常或无丝分裂，从而诱导多倍体形成。
4. 多倍体分化：将诱导成功的多倍体组织进行分化培养，使其分化为正常形态的植株。
三、鉴定多倍体鉴定多倍体可以通过形态学观察、流式细胞术和染色体分析等方法进行。
1. 形态学观察：对诱导得到的植株进行形态学特征的观察，如株高、叶片大小和形状等与对照（二倍体）进行比较，多倍体往往具有较大的特征。
2. 流式细胞术：通过流式细胞仪对植物细胞进行染色体数量的测定，多倍体的染色体数量通常是对照的两倍或多倍。
3. 染色体分析：通过染色体制备和染色，使用显微镜观察染色体数量和形状，根据染色体的形态、大小和数量来判定多倍体。
四、数据统计与分析根据实验结果进行数据统计和分析，可以计算出多倍体的诱导率和鉴定率，并与对照进行比较分析，以评估实验的效果和可靠性。
总结：诱发和鉴定不同植物同源多倍体的实验设计主要包括准备材料、诱发多倍体和鉴定多倍体三个步骤。
在进行实验前，需要准备好实验所需材料和环境条件，包括植物种子、培养基和生长室等。
实验过程中，通过植物组织培养技术诱导多倍体的形成，并使用形态学观察、流式细胞术和染色体分析等方法对多倍体进行鉴定。
植物多倍体的诱发与鉴定
植物多倍体的诱发与鉴定张延杰山东大学生命科学学院09级四班200900140178摘要通过对大蒜根尖的秋水仙素处理，将根尖进行多倍体诱导，了解人工诱发多倍体植物的原理、方法及其在植物育种上的意义。
初步掌握用秋水仙素诱发多倍体的实验技术和多倍体的鉴定方法。
引言多倍体广泛地存在于植物界，目前已知被子植物中有三分之一以上的物种是多倍体，如普通小麦是异源六倍体，棉花是四倍体，此外还有烟草等，这些部是自然界存在的多倍体。
多倍体产生的途径除自然发生外。
也可以采用高温、低温、嫁接、切断和射线处理等物理方法和化学药剂处理方法，在这些方法中以化学药剂处理最为有效，如秋水仙素，萘嵌戊烷、异生长素、植物激素、富民隆等，都可诱发多倍体，其中应用最广泛、效果最好的是秋水仙素。
秋水仙素是由百合科秋水仙属的秋种番红花一一秋水仙素(Colchicum autumnale)的种子和器官中提炼出来的一种生物碱。
化学分子式为。
它具有麻醉作用，对植物的种子、幼芽、花蕾、花粉、嫩枝等可产生诱变作用，它的作用机理是抑制细胞分裂时纺缍体的形成，使复制后的染色体不能拉向两极，细胞不能继续分裂形成两个子细胞，从而导致染色体加倍，形成多倍体细胞，在此基础上进一步发育成多倍体植物，多倍体植物可以通过有性繁殖进行繁殖下去。
用人工方法诱导的多倍体，可以得到一般二倍体没有的优良性状，如大粒、大穗、内含物量增加、抗病性强等。
人工培育的三倍体西瓜、三倍体甜菜、八倍体小黑麦已在生严上厂泛应用。
对多倍体的鉴定，除了检查染色体数目变化外，形态特征的变异也是一个重要方面。
多倍体植物的气孔、花器、花粉粒、种子、果实等部分明显变大，气孔数目减少而密度变稀，同源多倍体育性有一定的降低，所以同源多倍体中有部分畸形的不育花粉粒。
实验材料：1、活体材料大蒜。
2、实验器具显微镜、剪刀、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸、培养箱、镊子、解剖镜、镊子、解剖针、培养皿等。
3、药品改良苯酚品红染液、固定液、1mol／L HCl、冰醋酸、无水乙醇、医用乙醇（75%）等。
植物多倍体诱导及细胞鉴定
植物多倍体诱导及细胞鉴定摘要本实验通过利用秋水仙素对大蒜根尖进行人工诱导，得到多倍体细胞，又经染色制片在显微镜下观察其特点，从而掌握了人工诱导多倍体植物的方法并学会了利用染色体分析方法对多倍体细胞做出准确判断。
1.引言一个染色体组是指真核细胞中的一组非同源染色体，它们在形态和功能上各不相同，但是携带着控制一种生物生长发育、遗传和变异的全部信息，用n表示；而每一个染色体组的染色体数，称为染色体基数，用x表示。
具有3个或3个以上染色体组的细胞被称为多倍体细胞，有同源染色体和异源染色体之分。
自然界中，多倍体的产生多是适应恶劣环境条件的结果。
其产生的原因是由于温度骤变，细胞分裂时染色体不分离或染色体分离而细胞没有分裂，导致体细胞染色体加倍。
减数分裂时若染色体没有减数，也会使生殖细胞染色体加倍。
多倍体植物具有植株巨大、适应强、有机合成速率高等优良作物特点，引发了人们对人工诱导多倍体的研究兴趣。
现在已知的人工诱导多倍体的方法有物理方面的温度剧变、射线处理以及化学方面的各种植物碱、麻醉剂、植物生长激素等。
其中较常用且有效的一种方法即是利用秋水仙素诱导。
秋水仙素的作用是抑制纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂中期纺锤丝断裂或纺锤体形成受抑制，有丝分裂后期染色体无法移向两级，细胞中染色体加倍。
秋水仙素诱导得到的材料可以通过观察气孔的大小和花粉粒的体积或直接检查花粉母细胞或根尖细胞内的染色体数目判断出是否形成多倍体。
2.实验材料2.1试验材料大蒜根尖（2n=16），0.15%的秋水仙素溶液、卡诺固定液、1mol／L HCl溶液、改良苯酚品红染液，显微镜，载玻片，盖玻片，培养皿，镊子，刀片，滴管，吸水纸等。
2.2试验方法2.2.1 培养根尖：将大蒜瓣放在盛有清水的培养皿中，让根部接触水，在25℃恒温培养箱中培养，待根尖长到0.5~1cm时备用。
2.2.2 多倍体诱导：将水换成0.15%的秋水仙素溶液，在25℃恒温培养箱中继续培养24h左右，至根尖呈鼓槌状。
浅谈植物多倍体鉴定方法.doc
浅谈植物多倍体鉴定方法【摘要】多倍体育种作为一种重要的育种手段，目前已被广泛应用，其中倍性鉴定是多倍体育种的一个重要环节，快速、准确地进行倍性鉴定对加速育种进程有重要的意义。
本文概括了目前最常用的几种多倍体鉴定方法，并对各自优缺点进行简要比较。
【关键词】植物；多倍体；鉴定多倍体植物通常具有生物产量高、适应性强、抗逆性强、有效成分含量高等特征，然而仅靠染色体自然加倍很难满足现代植物育种的需要。
为此，人为通过物理方法、化学方法、生物学方法等途径使植物细胞染色体组加倍，获得多倍体材料，用以选育符合人们需要的优良品种，是近年来植物育种研究的一个热点。
目前，育种学家已在150属的若干种上进行了研究，并已诱导出许多多倍体。
一批二倍体材料经处理后，其中一些材料的染色体加倍成为多倍体，一些未能加倍依然为二倍体，还有一些为混倍体，因此，准确地辨认多倍体并将其挑选出来，是多倍体育种的一个重要环节。
目前常用的鉴定方法主要有以下几种：1 植株形态学鉴定随着细胞染色体倍性的增加，植物细胞和各器官体积一般趋于增大，表现出茎杆粗壮，叶色变深，叶片变厚，生长缓慢，多倍体的花、果实一般均比二倍体的大，而且花瓣肥厚，花色较鲜艳。
因此，巨型性是多倍体植物最为显著的外部形态特征。
苹果多倍体植株外观具有茎矮、粗壮、节间短、叶宽圆、叶片厚、叶色浓绿、叶脉突起等形态特征[1]。
颖长可以作为水稻染色体倍数的又一指标，水稻单倍体与二倍体的颖长一般以5.6?L为界，二倍体与三倍体的颖长以7.8?L为界[2]。
黄瓜单倍体与双单倍体雌、雄花花冠具有明显区别：单倍体花冠深裂，而双单倍体花冠浅裂，可以作为区别单倍体和双单倍体植株的标志，单倍体能结果，但果形多异常，无正常种子，多空瘪籽，双单倍体种子饱满[3]。
根据植株外部形态特征进行鉴定是初步鉴定多倍体的主要方法，也是最直观，最粗放的方法，优点是简便、快速，不需要任何仪器，可以在苗期做出早期鉴定，为育种工作者减轻工作量。
不同植物同源多倍体的诱发与鉴定实验设计
不同植物同源多倍体的诱发与鉴定实验设计同源多倍体是指某一物种通过自交或杂交产生的有多个完全一致的染色体组成的个体。
不同植物同源多倍体的诱发与鉴定是植物育种研究中非常重要的一项工作，它可以为植物改良提供可靠的基础。
实验设计1. 诱导同源多倍体的方法诱导同源多倍体的方法主要有化学处理、温度处理、激素处理、辐射处理等。
根据不同的诱导方法，设计出相应的实验方案。
以花生为例，可以使用化学物质染色体剂科铵处理，放置8-10小时后，用水冲洗去除药剂。
待植株生长至4-5个叶子时，对其进行基因组扫描，筛选出同源四倍体。
2. 鉴定同源多倍体的方法鉴定同源多倍体的方法主要有染色体计数、ISSR-PCR、流式细胞仪、比琼酸染色等。
根据不同的鉴定方法，设计出相应的实验方案。
以玉米为例，可以采用比琼酸染色方法。
将玉米新生芽切片并染色，放置显微镜下观察其染色体的数量与形态，区分出同源多倍体。
实验步骤1. 对植株进行处理按照设计的实验方案，对植株进行处理。
根据不同的诱导方法，处理时间也会有所不同。
2. 植株育种待植株生长至一定大小时，将其进行育种。
根据要求可选用不同的交配方式，如自交或杂交。
3. 植株基因组扫描按照设计的实验方案，对育出的幼苗进行基因组扫描，筛选出同源多倍体。
4. 植株染色体计数或其他鉴定方法对于同源多倍体的鉴定,可采用染色体计数或其他方法。
根据所选方法对植株进行染色、观察、计数等操作。
总结不同植物同源多倍体的诱发与鉴定是植物育种研究中非常重要的一项工作。
它可以为植物改良提供可靠的基础。
实验方案中的方法和步骤可以根据不同的研究需求进行调整和修改。
重要的是要严格执行实验方案，避免不必要的误差出现。
不同植物同源多倍体的诱发与鉴定实验设计
不同植物同源多倍体的诱发与鉴定实验设计要诱发和鉴定不同植物的同源多倍体，可以采用以下实验设计：1. 选择合适的植物材料：选择目标植物的种子、嫩芽或离体培养的组织为实验材料。
确保材料的品种和来源可靠。
2. 细胞处理：将植物材料经过适当的处理来诱导多倍体形成。
常用的处理方法包括化学处理、物理处理和生物处理等。
- 化学处理：使用合适的化学物质，如染色剂（如染色体特异性染料）或化学诱导剂（如某些植物生长调节剂），浸泡、喷洒或处理材料，以促进细胞的多倍化。
- 物理处理：利用离子辐射（如X射线或γ射线）或化学物理处理（如温度、压力）等方法，对植物材料进行处理，诱发细胞的多倍化。
- 生物处理：利用植物病原微生物（如农杆菌）或共生微生物（如植物内生菌）等与植物进行交互作用，诱导细胞多倍化。
3. 培养条件的优化：根据目标植物的生长习性和需要，对培养基的成分、光照条件、温度和湿度等进行优化调整，以促进多倍体形成和生长。
4. 细胞倍化检测：使用适当的细胞学方法来检测和鉴定多倍体细胞。
常用的方法包括：- 核型分析：通过染色体制备和染色，观察细胞的染色体数目和结构，来确定是否形成了多倍体。
- 流式细胞术：利用流式细胞仪分析细胞的DNA含量，多倍体细胞的DNA含量会相应增加。
- 核型鉴定：利用核型学方法，如比较基因组杂交或分子标记技术，检测植物材料的基因组组成和倍性。
5. 多倍体植株的筛选与培养：鉴定出多倍体细胞后，将其分离培养，筛选并培养出稳定的多倍体植株。
在进行实验设计时，应注意对照组的设置，以确保结果的可靠性和准确性。
同时，要充分记录实验过程和结果，以便进行数据分析和后续研究。
此外，还应考虑实验的重复性和统计学分析，以提高实验结果的可信度。
植物多倍体的细胞学鉴定
植物多倍体的细胞学鉴定姓名：刘乐乐学号：201100140084 班级：生计11.3 实验时间：2013.11.4一、实验目的1、认识植物多倍体的特点，了解研究多倍体的意义。
2、了解人工诱导多倍体的方法，掌握多倍体鉴定的实验技能。
二、实验原理1、多倍体的概念及分类多倍体是指细胞中具有3个或3个以上染色体组的细胞或个体。
多倍体分为同源多倍体和异源多倍体。
同源多倍体：具有3个以上相同染色体组的细胞或个体，且染色体组来源于同一物种（AAA，AAAA）。
异源多倍体：具有3个以上染色体组且染色体组来源于不同物种，通常由不相同的种杂交的杂种再经过染色体加倍而来（AABB，AABBDD）。
2、染色体组和染色体基数各种生物的染色体数目是恒定的，这是物种的基本特征之一；遗传学上将二倍体生物一个配子的染色体总和称为染色体组，也叫基因组，用n表示。
每一个染色体组的染色体数，称为染色体基数，用X表示。
如普通小麦2n=6x=42（AABBDD），小麦是异源六倍体, 共有3个基本染色体组（ABD）, 染色体基数x=7。
n用于个体发育的范畴，是指配子体世代即单倍体细胞中的染色体数，孢子体世代细胞中染色体数用2n表示，n、2n与真实染色体倍数无关。
x表示一个染色体组的染色体数目，表示物种演化过程中的染色体倍数性的关系。
3、多倍体在进化中的意义随着植物自然演化地位的提高，多倍体所占比例增大。
自然界中，多倍体在裸子植物中占物种的13%；据估计，50％～70％的被子植物在其进化过程中至少经历过1次多倍化过程。
许多重要的作物为异源多倍体(allopolyploid)，如小麦、燕麦、棉花等，或同源多倍体(autopolyploid)，如紫花苜蓿、马铃薯等。
其他一些作物，如玉米、大豆、甘蓝等虽为二倍体(diploid)，但其祖先在进化中也经历了多倍化过程。
4、自然界中多倍体的产生有丝分裂时染色体分离而细胞没有分裂，导致体细胞染色体加倍。
减数分裂时染色体没有减数，使生殖细胞染色体加倍。
植物多倍体的人工诱导和鉴定概要
植物多倍体的人工诱导和鉴定
实验原理 实验用品 实验目的 实验步骤
作业
实验目的
掌握诱发多倍体的一般方法 了解人工诱导多倍体的原理、方法 及其在植物育种上的意义 观察植物染色体数目的变化引起植 物其它器官的变异
实验步骤
1. 2.
3.
4. 5.
6.
种子萌发 先将种子清水洗净，浸种。待露白后置于培 养皿中发芽。 预处理 当根长1cm时，取出洗净吸干，用0.05—0.1% 秋水仙素溶液浸根处理24～36小时，根尖明显膨大时 用固定液固定。 酸解 将材料放入青霉素瓶中西净， 1moL/LHCl60oC 进行酸解，不同的材料的酸解时间不同.(大麦8-10分 钟) 染色 酸解后洗净材料，将根尖部分切下（约1mm）， 加改良石炭酸品红染色. 压片 染色后盖上盖片，用大拇指按压有材料的部位， 粗滤纸吸干多余染液，再用铅笔头轻敲，使重叠细胞 分散，得到理想的分裂相. 观察 低倍镜找到分散良好的分裂相后换高倍镜或油 镜.
作业
Hale Waihona Puke 分别绘制染色体分散良好的加倍细胞核 和未加倍细胞图。 秋水仙素处理后，根尖为什么会发生膨 大？
实验原理
自然界各种生物的染色体数目一般是相当稳定的， 这是物种的重要特征。由于各种生物的来源不同，细 胞核内可能具有一个或一个以上的染色体组，凡是细 胞核中含有一套完整染色体组的就叫做单倍体，亦用 n表示。具有两套染色体组的生物体称为二倍体，以 2n表示。细胞内多于两套染色体组的生物体则称为多 倍体。在整倍体中，又可按染色体组的来源，区分为 同源多倍体和异源多倍体。凡增加的染色体组来自同 一物种或者是原来的染色体组加倍的结果，称为同源 多倍体。如果增加的染色体组来自不同的物种，则称 为异源多倍体。
植物多倍体的诱导及细胞学鉴定
植物多倍体的诱导及细胞学鉴定实验时间：4月6日摘要一个物种细胞中染色体形态结构和数目的恒定性是这个种的重要特征。
我们把二倍体个体中能维持配子或配体正常功能的、最低数目的一套染色体称为染色体组或基因组。
当生物体内细胞染色体组数达到3组或3组以上者，称为多倍体。
多倍体在植物进化中有很重要的意义。
本实验利用大蒜作为试验材料，利用秋水仙素诱导，使生长出多倍体根尖。
然后通过制作大蒜根尖压片，观察染色体的数目，以鉴定大蒜根尖细胞是否为多陪细胞。
（本实验报告主要从多倍体的鉴定方面展开，而多倍体培育方面，将在下次报告中给出。
）1.引言生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这是物种的基本特征之一。
遗传学中，将二倍体生物一个配子的染色体总和称为染色体组，也叫基因组，用n表示。
以下是几种常见模式生物的染色体组数目：玉米，2n=20；拟南芥，2n=10；果蝇，2n=8；小鼠，2n=40；水稻，2n=24。
又如，小麦染色体组可表示为2n=6x=42。
其中x表示每一个染色体组的染色体数，称为染色体基数，它是物种演化过程中的染色体倍数性的关系。
多倍体是指细胞中具有3个或3个以上染色体组的细胞或个体,而多倍体可以分为:同源多倍体(具有3个以上相同染色体组的细胞或个体，且染色体组来源于同一物种（AAA，AAAA）)、异源多倍体(具有3个以上染色体组且染色体组来源于不同物种，通常由不相同的种杂交的杂种再经过染色体加倍而来（AABB，AABBDD）)。
在自然界中许多植物都是多倍体，大约有30％～35％的被子植物，其中70％的禾本科植物属于多倍体，它们在植物进化中起了重要的作用，也是植物发生变异的重要途径之一。
多倍体植物，一般被认为是适应恶劣自然环境的结果，如我国西南部地区，温度变化激烈，紫外线辐射强，许多植物产生了多倍体类型。
在自然界中，大多是因为温度骤变，导致细胞分裂时染色体不分离，从而形成了多倍体。
植物多倍体有许多特性，其中一些特性也为农业经济发展提供了帮助。
多倍体的诱发与鉴定
3）固定：剪取根尖1~2cm，冲洗后转移至卡诺 氏固定液中，室温下处理3~8小时。然后转入70% 乙醇中4℃保存。
2、多倍体细胞的鉴定：
1）解离：将冲洗后的根尖放入1mol/L的盐酸 中，室温下处理10~15min。
实验11 植物多倍体细胞的诱发和鉴定
实验目的：
1 了解人工诱导植物多倍体的原理、方法及其 在植物育种上的意义；
种生物染色体的数目、形态和结构都是恒定 的。在植物界多倍体普遍存在，已知被子植物中有 1/3或更多的物种是多倍体。除了自然界存在的多 倍体物种以外，可以采用高温、低温、射线照射、 等物理化学方法人工诱发多倍体植物。其中，以应 用化学试剂更为有效和方便，如秋水仙素、异生长 素、富民农等，使用最广泛、效果最好的是秋水仙 素。
实验材料：
洋葱、大蒜等。本实验选用大蒜。
实验用品：
用具：显微镜、剪刀、镊子、解剖针、载玻片、 盖玻片、酒精灯、铅笔、吸水纸等。
药品：蒸馏水、卡诺氏固定液、45%醋酸、秋 水仙素、改良苯酚品红染液等。
实验步骤：
1、多倍体细胞的诱发：
1）培养根尖：将大蒜瓣放在盛有清水的培养 皿中，让根部接触水，在20~25℃光照下培养，让 根尖长到0.5~1cm。
2）染色：切取1mm左右的分生区，用改良苯酚 品红染液染色10~20min。
3）压片：盖上盖玻片，在酒精灯上烤片。然 后固定盖玻片，用铅笔垂直、用力敲击盖片几下， 将材料压成一层细胞。
8 镜检：先在低倍镜下找到细胞，再换成高倍 镜仔细观察。
请注意比较该实验结果与 有丝分裂实验结果有何不 同？
实验报告：
1、说明秋水仙素诱发多倍体的原理是什么？ 2、画出在显微镜下看到的多倍体细胞的图像； 3、了解诱发多倍体在育种方面的意义。
植物多倍体的诱导及其细胞学鉴定
植物多倍体的诱导及其细胞学鉴定植物多倍体的诱导及其细胞学鉴定摘要多倍体诱发在植物乃至在动物中都已经有了很广泛的应用，此次实验通过对大蒜根尖细胞进行多倍体诱发，初步了解并掌握了仍诱导多倍体的方法和技术，并对诱导组织进行了染色和压迫观察，进行了细胞学鉴定，掌握了判断多倍体细胞的方法和技术。
1.引言多倍体这个名词在人们的日常生活中也许并不多见，但在自然界中多倍体的分布却十分广泛，人们平时的饮食生活中，也有多倍体的身影。
现已知自然界大约有30％~35％的被子植物，70％的禾本科植物属于多倍体，它们在植物进化中起了重要的作用，也是变异发生的主要途径。
而我们平时吃的山药是四倍体，小麦是异源六倍体，大豆是异源四倍体，香葱也是四倍体。
自然形成的多倍体大多是植物对恶劣的自然环境的适应，而自从1937年美国学者布莱克斯利（A.F.Blakeslee）等，用秋水仙素加倍曼陀罗等植物的染色体数获得成功以后，秋水仙素就被广泛应用于细胞学、遗传学的研究和植物育种。
花卉方面：矮牵牛、金鱼草、鸡冠花等多倍体植物多表现为叶片肥厚、花色艳丽、花期长、花瓣多等特点，观赏价值得到了提高；药材方面，板蓝根四倍体有效成分含量比普通二倍体对照高出约40%；林木方面，四倍体桑树及刺槐在生长量及抗逆性方面都较之二倍体对照有了较大提高；经济作物方面，多倍体水稻的稻粒比普通水稻更加饱满、肥大。
另外，在倍性育种的过程中，育种家们还发现，植物多倍体除了适应性强、有机合成速率增加、果实大等优点外，还可克服远源杂交的不结实性和诱变率高的优点，由此可见，在人工诱导植物多倍体的基础上，如能结合其它育种手段，以培育出高质量的植物新品种，大有潜力可挖。
现在，动物多倍体诱变也逐渐发展起来，最显著的应用便是鲍的诱变。
人们发现，鲍的多倍体个体具有生长速度快、抗病力强、个体大等优点，具有明显的增产效果，极具推广价值。
而利用水压法、温度法等方法，也已经实现了工业化的批量生产。
植物的多倍体诱导及其观察实验报告
植物多倍体的诱导及其鉴定一、实验目的1、通过实验，掌握化学诱导植物多倍体的原理以及方法，学习利用秋水仙素诱导植物多倍体的一般方法及多倍体诱导在植物育种上的意义。
2.学习利用细胞学方法观察鉴定多倍体的特点以及诱导染色体加倍后的细胞学表现，利用染色体分析的方法对多倍体的细胞做出准确判断。
二、实验原理生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这是物种的基本特征之一。
多倍体是细胞中具有3个或3个以上的染色体组的生物体。
在植物育种上，利用多倍体可以改良作物的经济性状，同时还可以利用多倍体克服远缘杂交过程中的障碍。
利用一些化学因素诱导植物产生多倍体，秋水仙素是诱导多倍体形成最有效和常用的药品之一，利用秋水仙素处理正在进行有丝分裂的细胞，可以抑制纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂中期纺锤丝断裂或纺锤体形成受抑制，有丝分裂后期，复制的染色体无法移向两级，细胞内的染色体加倍，形成多倍体。
因此在适宜浓度的秋水仙素作用下，它既可以有效的阻止纺锤体的形成，又不至于对细胞发生较大的毒害，因此，细胞经一定时期后仍可恢复正常，继续分裂，只是染色体数目加倍成为多倍性细胞，并在此基础上进一步发育成为多倍体植物。
将秋水仙素处理的植物根尖，制成临时装片，利用显微镜观察根尖分生区细胞中的染色体数目而确定是否形成染色体。
三、实验材料、器具及试剂1、实验材料：发芽的蚕豆，蚕豆幼苗2、实验器具：显微镜、解剖针、小试管、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、试管、培养皿、烧杯。
3、实验试剂：秋水仙素： 0.1%浓度。
卡诺固定液：3份95％酒精与1份冰醋酸配制而成。
1mol/l盐酸，45%醋酸，改良苯酚品红，70%酒精。
四、实验步骤1、取材：将种子消毒，并于无菌水中浸泡24小时后，将蚕豆种子（2n=16）培养在培养皿内的湿滤纸上，室温或28℃发芽，待胚根长达1~2cm时，取出萌发的种子，用自来水洗2~3次，备用。
2、预处理：将胚根长到1~2cm的蚕豆种子移到盛有0.1%秋水仙素的润湿的的吸水纸的培养皿内，室温下处理48h,待观察到根部有膨大时取出固定，与在水中进行培养的蚕豆种子（一般植物生长周期为17~18h）做对照。
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浅谈植物多倍体鉴定方法
作者：鲁文英
来源：《科技视界》2016年第16期
【摘要】多倍体育种作为一种重要的育种手段，目前已被广泛应用，其中倍性鉴定是多倍体育种的一个重要环节，快速、准确地进行倍性鉴定对加速育种进程有重要的意义。
本文概括了目前最常用的几种多倍体鉴定方法，并对各自优缺点进行简要比较。
【关键词】植物；多倍体；鉴定
多倍体植物通常具有生物产量高、适应性强、抗逆性强、有效成分含量高等特征，然而仅靠染色体自然加倍很难满足现代植物育种的需要。
为此，人为通过物理方法、化学方法、生物学方法等途径使植物细胞染色体组加倍，获得多倍体材料，用以选育符合人们需要的优良品种，是近年来植物育种研究的一个热点。
目前，育种学家已在150属的若干种上进行了研究，并已诱导出许多多倍体。
一批二倍体材料经处理后，其中一些材料的染色体加倍成为多倍体，一些未能加倍依然为二倍体，还有一些为混倍体，因此，准确地辨认多倍体并将其挑选出来，是多倍体育种的一个重要环节。
目前常用的鉴定方法主要有以下几种：
1 植株形态学鉴定
随着细胞染色体倍性的增加，植物细胞和各器官体积一般趋于增大，表现出茎杆粗壮，叶色变深，叶片变厚，生长缓慢，多倍体的花、果实一般均比二倍体的大，而且花瓣肥厚，花色较鲜艳。
因此，巨型性是多倍体植物最为显著的外部形态特征。
苹果多倍体植株外观具有茎矮、粗壮、节间短、叶宽圆、叶片厚、叶色浓绿、叶脉突起等形态特征[1]。
颖长可以作为水稻染色体倍数的又一指标，水稻单倍体与二倍体的颖长一般以5.6㎜为界，二倍体与三倍体的颖长以7.8㎜为界[2]。
黄瓜单倍体与双单倍体雌、雄花花冠具有明显区别：单倍体花冠深裂，而双单倍体花冠浅裂，可以作为区别单倍体和双单倍体植株的标志，单倍体能结果，但果形多异常，无正常种子，多空瘪籽，双单倍体种子饱满[3]。
根据植株外部形态特征进行鉴定是初步鉴定多倍体的主要方法，也是最直观，最粗放的方法，优点是简便、快速，不需要任何仪器，可以在苗期做出早期鉴定，为育种工作者减轻工作量。
不足之处是存在很大的经验因素，可能会因人而异，鉴定的准确度不高。
2 染色体计数法鉴定
染色体计数法通常有常规压片法和去壁低渗法两种。
压片法一般以根尖、茎尖、卷须、愈伤组织等为材料，用醋酸洋红或苏木精等染色压片，观察细胞分裂中期的染色体并计数，制片中需要很好的操作技能。
陈瑞阳等在国内首创利用去壁低渗法进行染色体标本制备，并对37科105种植物进行切片制备，总结了不同植物的低渗、酶解和染色时间[4]。
去壁低渗法与常规压片法相比有许多优点，既可用于染色体计数，也可用于染色体组型分析Gimsa分带等研究，并可借助扫描电镜对植物染色体进行观察，但是酶解去壁成功与否的关键在于对酶液浓度、酶解时间、酶解温度等几个因素的把握，需要一定经验，而且操作过程繁琐，工作量大，所以该方法需要良好的实验条件和丰富的经验[5]。
3 植株叶片气孔性状鉴定
染色体倍性与气孔性状的关系已有很多研究报道，气孔保卫细胞叶绿体数目受染色体控制，能反映植株倍性，气孔保卫细胞长度是受染色体倍性控制的一对相对稳定的性状，年份间差异变化不显著[6]，并且同一植物处于相同环境条件和发育阶段，同一部位的保卫细胞大小性状是相对稳定的[7]。
玉米花药培养的再生植株进行倍性鉴定，可结合采用根尖染色体压片法和气孔保卫细胞长度法两种方法鉴定，得出玉米单倍体植株的鉴定标准是气孔保卫细胞长度不超过29um，其鉴定精度可达到95%以上[8]。
青花菜小孢子培养获得的植株叶片保卫细胞叶绿体数占保卫细胞数的比率（叶绿体/保卫细胞）为8.3，13.6，22.1，和30.7，分别代表单倍体、二倍体、四倍体和八倍体[9]。
李赟等以苹果和梨的二倍体和多倍体为材料，比较了气孔保卫细胞叶绿体数目、气孔密度、气孔长和气孔宽四个性状与倍性的关系，分析各个性状用于倍性鉴定的可靠性，并采用两类性状同时进行判别分析，建立判别方程，结果表明，叶绿体数目和气孔长鉴定倍性的可靠性较高，如以这两个性状进行判别分析，苹果判别方程鉴定倍性的可靠性与以气孔长鉴定倍性的可靠性相似，梨的判别方程可大大提高鉴定的可靠性[10]。
利用植株叶片气孔性状鉴定倍性简单易行，只需几分钟就可鉴定一份材料，且不需要先进的仪器，不失为倍性鉴定的一种简单有效方法。
4 花粉形态学鉴定
花粉的形态特征受植物基因型控制，不同倍性花粉的大小、萌发孔数量形态、纹孔、纹饰等都存在差异，花粉形态特征比起解剖结构更少受外界条件影响，是探讨植物起源、演化及亲缘关系的重要特征之一。
花粉粒的大小与染色体数目的正相关性已经完全得到证实，四倍体花粉一般比二倍体大20%-30%[11]。
以不同倍性苎麻为材料，对其花粉粒形状、大小进行比较观察，结果表明：花粉大小与染色体倍性呈正相关，相关系数为0.9708，单倍体、二倍体、三倍体和四倍体平均直径分别为16.30、17.81、22.00、24.76微米，品种对这一性状没有影响，单倍体花粉大小变化
较大，并且存在一定数量的畸形、空壳花粉；三倍体存在少量的小粒花粉[12]。
采用扫描电子显微镜对二倍体、三倍体和四倍体甜菜的花粉进行形态观察，结果表明：三种甜菜花粉在花粉粒的形状、萌发器官类型及表面纹饰等主要性状上均为相同；不同染色体倍性品种的花粉之间，在花粉粒的体积、萌发孔的数量、孔口直径和孔膜表面纹饰等方面亦有一定差别[13]。
5 流式细胞仪法鉴定
流式细胞仪法是目前最快速且有效的倍性鉴别方法，它可以直接测定细胞的DNA含量，从而快速鉴别植株的染色体倍性水平。
通过流式细胞分析仪对大量处于分裂间期染色体的DNA含量进行检测，然后经计算机自动统计分析，绘制出DNA含量（倍性）的分布曲线图。
流式细胞仪可以对几万个细胞进行倍性检测，并且除了检测单倍体和多倍体等整倍体外，还能很好地鉴别出再生植株中少量混倍体、非整倍体类型的细胞，避免传统检测方法由于观察数量的局限导致的检测误差[14]。
此外该法不受植物体取材部位和细胞所处的时期限制，取材部位可以是叶片、茎、根、花、果皮、种子等，而且只需要少量材料，不影响植物生长。
但该方法的不足是测定费用较高，对于一般育种单位来说是难以承受的，此外，利用流式细胞仪进行测定时，样品准备时间不宜过长，在室温条件下，样品准备时间不宜超过20分钟，时间过长会导致测定时DNA峰值的位置发生偏移，从而影响测定结果[15]。
综上所述，几种常用的倍性鉴定方法各有优缺点，应根据不同植物材料特点，结合试验单位自身情况，探索最有效、最直接的方法进行倍性鉴定，快速筛选出多倍体植株，加速多倍体育种进程。
【参考文献】
[1]石荫坪，王强生，周广芳，等.苹果试管苗染色体工程育种[J].落叶果树，1993（4）：1-5.
[2]Nakamura K. Identification of ploidy level of the regeneratied plants by anther culture in
rice[J]. Breeding Science， 1994， 44（1）： 19-22.
[3]韩毅科，杜胜利，王鸣.黄瓜染色体制片及倍性研究[J].华北农学报，2003，18（1）：72-74[100].
[4]陈瑞阳，宋文芹，李秀兰.植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义[J].遗传学报，1982，9（2）：151-159.
[5]张海洋，裴新涌，张天真，等.棉花单倍体植株染色体加倍研究[J].河南农业科学，1996（7）：10-12.
[6]胡含，王恒立.植物细胞工程与育种[M].北京：北京工业大学出版社，1990：394-400.
[7]王培，陈玉蓉，范光年，等.小麦花粉植株中保卫细胞长度的分布[J].华北农学报，1989，4（3）：6-10.
[8]李春红，孟祥启.玉米花药培养及再生植株倍性鉴定[J].华北农学报，1993，8（2）：64-68.
[9]Choi Miyong，Improvement of chloroplast observation technique in guard cells for ploide detection of microspore derived plants in broccoli[J]. Journal of the Korean Society for Horticultural Science， 1997， 38（6）： 666-669.
[10]李赟，石荫坪，束怀瑞，等.应用气孔性状对苹果和梨的倍性判别分析[J].果树科学，1999，16（1）：9-13.
[11]杨晓红.苹果属植物花粉观察研究[J].西南农业大学学报，1986（2）：121-129.
[12]晏春耕，曹瑞芳，李宗道，等.苎麻花粉形态学与倍性的相关性[J].湖北农业科学，2005（3）：47-49.
[13]宛涛，许红春.不同染色体倍性甜菜花粉形态观察[J].内蒙古农业大学学报（自然科学版），1996，17（2）：21-24.
[14]陈斌.辣椒花药培养再生植株染色体倍数检测研究[J].辣椒杂志，2005，4：28-30.
[15]周元昌.S.KENNEDY，抱子甘蓝花培苗倍性的快速鉴定[J].福建农林大学学报（自然科学版），2002，31（1）：55-58.
[责任编辑：杨玉洁]。