植物的DNA提取与鉴定
植物的DNA提取与鉴定
电泳结束后，取出凝胶板，在波长为254nm的凝胶成像系统下，观察电泳图谱，如果电泳条带清晰(如果EB染色看到桔黄色荧光条带，GV染色则看到绿色荧光条带)，将凝胶照相。根据标准DNA的电泳图谱，可以得知样品DNA的分子大小。
（3） 再加两倍体积的预冷异丙醇，混匀静止10分钟以上，在4℃下10000rpm/分钟离心10分钟后，弃上清。
（4） 用600μL70%乙醇洗涤沉淀，重复一次，在室温下倒置晾干。
（5）沉淀用TE溶液溶解DNA，再加入RNase至终浓度50μg/mL，在37℃下保温半小时，将DNA样品放入冰箱保存。
Ⅱ 植物DNA 纯度的鉴定——紫外分光光度计法
一、原理
由于核酸中的碱基都具有共轭双键，所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线，其吸收高峰在260nm处，吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处，所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一。但紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来鉴定核酸的纯度和含量。
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题：
（1）DNA的二级结构和双链易受多种因素（如强酸、强碱、加热、低盐浓度、有机溶剂、酰胺类、尿素等）的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时避免使用变性的条件。
（2）抑制内外源DNase的活力。DNase就象一把刀，它能把大分子的DNA切成碎片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a、低温操作；b、调节pH，使偏碱（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯合剂（EDTA）除去酶的铺助因子（Mg2+），使酶活性丧失。
纯度鉴定时，需测定在230、260和280nm处的消光值，经验数据表明，
植物DNA的提取与测定
植物DNA的提取与测定一、目的随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。
本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。
二、原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。
DNP与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl 溶液为例：RNP在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。
当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。
为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。
2．SDS 法：利用高浓度的阴离子去垢剂SDS（十二烷基磺酸钠，Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS）使DNA 与蛋白质分离，在高温（55～65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
植物基因组DNA的提取及分析
植物基因组DNA的提取及分析一、植物基因组DNA提取的步骤：1.样本的准备：从植物中选择健康和新鲜的组织样本，如叶片、茎、根等。
样本选择要避免含有大量的绒毛、叶色不正常等因素的部位。
2.细胞破碎：将样本放入液氮中迅速冷冻，然后用研钵和研钉对样本进行研磨，直至样本完全破碎。
3.细胞裂解：将研磨的样本加入裂解缓冲液，边振荡边研磨使样本均匀混合。
4.蛋白质去除：使用酚/氯仿提取法去除蛋白质。
加入等体积的酚/氯仿/异丙醇混合液，轻轻混合，然后离心离心管以分离上清和下层。
5.DNA沉淀：将上清转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇进行DNA沉淀。
静置一段时间后，离心离心管以沉淀DNA。
6.DNA洗涤：将DNA沉淀物用70%乙醇洗涤一至两次，去除残留的盐和其他杂质。
7.DNA溶解：用适量的稳定缓冲液溶解DNA，使其达到一定浓度并避免降解。
二、植物基因组DNA分析的方法：1.PCR扩增：PCR技术可以通过放大DNA片段来研究特定基因或DNA 序列。
首先选择适当的引物，然后将DNA样本与引物、核酸酶、dNTPs等反应液混合，进行多次循环的变温扩增反应。
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳：将PCR扩增的产物与DNA分子量标记物置于聚丙烯酰胺凝胶中，然后进行电泳。
电泳结束后，通过紫外线照射或染色剂染色，观察电泳图谱，可以得到DNA片段的大小和数量。
3.酶切电泳：使用限制性内切酶切割DNA片段，然后将切割后的DNA 片段进行电泳分析。
根据DNA片段的大小和相对迁移速度，可以进行DNA 的分析和比较。
4.南方杂交：将DNA样本与标记了放射性同位素或荧光染料的DNA探针进行杂交反应。
通过探针与目标DNA片段的互补配对，可以检测目标DNA的存在和数量。
5.DNA测序：通过测序技术获得DNA序列信息，可以揭示基因组的结构和功能。
通过以上方法，我们可以提取和分析植物基因组DNA，更好地了解植物基因组的组成和功能，为植物的遗传改良和研究提供重要的信息。
04 实验四 植物DNA的提取及纯度浓度鉴定.
实验步骤
10mL CTAB分离缓冲液加入50mL 离心管中， 在65℃水浴中预热。 取剪碎的植物叶片适量，置于预冷的研钵中， 倒入液氮，尽快将叶片研碎。 将约1g叶片粉末加入预热的CTAB分离缓冲 液中，轻轻转动混匀，65℃保温30分钟。 加10mL氯仿-异戊醇（24：1），轻轻混匀。 室温，4000 rpm离心10分钟。
异丙醇 氯仿-异戊醇（24：1） 液氮 70%乙醇
TE 缓冲液
10mmol/L Tris-HCL （pH7.4） 1mmol/L EDTA
思考题
本实验中CTAB、EDTA、巯基乙醇的 作用是什么？ 吸取样品、抽提应注意什么？为什么？ 提取DNA时除去蛋白质的方法有哪些？
用一开口较大的滴管将上层水相吸入另一干 净的50mL离心管中，加入等体积的异丙醇， 轻轻混匀，使核酸沉淀下来 用玻璃棒将丝状DNA搅起，转移至10mL 70％乙醇中，浸泡洗涤10分钟 用玻璃棒取出DNA沉淀，室温下干燥 将DNA沉淀溶于0.5 mL TE缓冲液中
DNA纯度和浓度鉴定
取100uL DNA溶液（剩余的DNA溶液放 在-20℃保存），用TE缓冲液稀释20，50 和100倍，测定A260和A280
实验四
植物DNA的提取与鉴定
实验原理
真核生物DNA与蛋白质结合，以核蛋白的 形式存在于细胞核内 在提取DNA时，通过研磨破坏细胞壁和细 胞膜，释放出核蛋白
实验原理
在浓氯化钠溶液（1～2 mol／L）中， DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋 白的溶解度很小。
在稀氯化钠溶液（0.14 mol／L）中， DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋 白的溶解度很大。 利用不同浓度氯化钠溶液将DNA核蛋白 或RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。
植物基因组DNA的提取与检测
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日题目：植物基因组DNA的提取与检测一．实验目的:1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
二．实验原理1.液氮研磨：液氮能迅速将植物组织温度降到零度以下，使组织细胞变得脆而易碎，此时对植物组织进行研磨，能大大提高研磨的效率，植物组织迅速变为粉末状，增大表面积，提高提取植物DNA的效率。
2.SDS等离子型表面活性剂处理：SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来，且使DNA保持溶解溶液状态，易于分离3.苯酚和氯仿处理：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4.异丙醇处理：上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，离心后DNA沉淀于离心管底部，便于移去提取液。
而后将沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶液；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。
DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。
DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。
因此，要有效地分离不同大小的DNA片生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。
三．实验材料及设备1.实验材料：新鲜的植物幼嫩叶片2.实验仪器：（1）研磨皿，10、100、1000μL取液器各一支，台式高速离心机，漩涡器；（2）电泳仪，电泳槽，样品槽模板（梳子），有机玻璃内槽，水平仪，取液器，微波炉，凝胶成像系统。
3.实验试剂：（1）植物DNA提取a.细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl, 1.25% SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）；b.氯仿:异戊醇（24:1）；c.其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液；作用：氯仿可使蛋白质变性，有助于液相与有机相的分离。
植物组织中dna的提取及鉴定实验报告
植物组织中dna的提取及鉴定实验报告实验目的：1、了解植物组织中DNA的提取和鉴定方法；2、学习DNA凝胶电泳和显色的实验操作；3、掌握实验数据处理和分析方法。
实验原理：DNA提取：DNA提取是从生物体组织中分离出DNA分子的过程。
植物组织的DNA提取主要采用CTAB法，其基本步骤如下：1. 将植物样本冷冻在液氮或在-80℃的冰箱中保存。
2. 取出植物组织并磨碎，用盐水淋洗去表面的杂质。
3. 加入抑制物质，如PVP（聚乙烯吡咯烷酮）和β-多聚糖。
4. 加入CTAB提取缓冲液，破解细胞壁并溶解细胞质。
5. 加入丙酮使DNA沉淀。
6. 安排离心管，离心沉淀。
7. 用乙醇洗涤、重悬DNA。
DNA鉴定：鉴定常用的方法包括电泳、吸光度法、荧光PCR 等。
本实验采用琼脂糖凝胶电泳法，基本步骤如下：1. 制备琼脂糖凝胶。
2. 调制电泳缓冲液。
3. 加载DNA样品。
4. 进行电泳。
5. 显色染色。
实验材料：1、植物样本（如玉米叶片、小麦胚芽等）2、CTAB提取缓冲液（含CTAB，EDTA，NaCl，Tris-HCl等）3、琼脂糖4、电泳缓冲液5、DNA标准品6、DNA分子量标记实验步骤：1. 取少量植物样本，将其用盐水淋洗，除去表面污垢和杂质。
2. 装入离心管并加入CTAB提取缓冲液，放在60℃水浴中孵育20分钟。
3. 加入冷丙酮沉淀DNA，离心5分钟。
4. 加入70%乙醇，洗涤DNA，离心5分钟。
5. 将DNA重悬于1 x TE缓冲液中，放在冰箱中储存。
6. 取一定体积的DNA样品，加入适量电泳缓冲液稀释。
7. 制备含DNA分子量标记的DNA样品，混合后加入琼脂糖凝胶槽中。
8. 加载DNA样品，与分子量标记一起进行琼脂糖凝胶电泳。
9. 进行电泳10-20分钟，直至DNA分子离子迁移完毕。
10. 取出琼脂糖凝胶，进行染色与分析。
实验结果：通过电泳可见DNA样品的带状图谱，观察带状图谱的大小、稠密程度、条带间距和条带的清晰度等特征，进而分析DNA样品的品质和纯度。
实验植物DNA提取及检测
结果解读
实验结果：成功提取出植物DNA 数据分析：DNA质量、浓度和纯度分析 结果解释：DNA提取效率、影响因素及实验结论 实验结论：成功实现植物DNA的提取与检测
实验结论
结论总结
实验过程中需要注意实验条 件和操作细节，避免DNA降 解或污染
实验植物DNA提取及检测成 功，得到较为完整的DNA片 段
将更加简便高效
THANK YOU
汇报人：XX
实验植物DNA提取通 常采用研磨法或酶解 法，其中研磨法是通 过机械研磨将植物细 胞破碎，释放出细胞 核中的DNA；酶解法 则是利用酶制剂将植 物细胞壁和细胞膜分 解，使DNA得以释放。
在提取过程中，需要 使用多种化学试剂， 如洗涤剂、盐离子、 有机溶剂等，以去除 杂质、分离出较纯的
DNA。
提取出来的DNA需 要进行质量检测，确 保其质量和纯度满足
后续实验的要求。
实验材料
实验植物：选取适当的植物样本 仪器：离心机、PCR仪等 试剂：植物基因组DNA提取试剂盒、缓冲液、乙醇等 实验器具：移液器、吸头、离心管等
实验步骤
准备实验材料：植物样本、离心管、移液 器、DNA提取试剂等
DNA沉淀：在上清液中加入适量的乙醇， 使其中的DNA沉淀下来
植物样本处理：将植物样本剪碎，加入 适量的缓冲液，用研磨棒研磨成匀浆
清洗DNA：将沉淀的DNA用70%的乙 醇清洗，去除杂质
离心分离：将研磨后的匀浆进行离心分离， 干燥：将清洗后的DNA晾干，溶解于适
收集上清液
量的水中
注意事项
实验前确保植物材 料无菌，避免污染
使用新鲜、健康的 植物材料，以提高 DNA提取质量
实验操作过程中保 持低温，防止 DNA降解
植物dna的小量法提取及鉴定实验现象
植物dna的小量法提取及鉴定实验现象
植物DNA的小量法提取及鉴定实验中，可能会出现以下现象：
1. 溶液混浊：在提取植物DNA时，可能会发现溶液混浊
的情况。
这是由于植物细胞中含有较多的杂质，如多糖、多酚等，这些杂质可能会干扰DNA的提取和纯化。
2. 色素沉淀：植物细胞中的色素可能会在提取DNA的过
程中沉淀出来。
这些色素可能会干扰DNA的定量和鉴定，因
此需要在实验中加以处理。
3. DNA粘稠度变化：在提取植物DNA时，可能会发现DNA的粘稠度发生变化。
这是由于植物细胞中的杂质可能会
干扰DNA的提取和纯化，导致DNA的粘稠度增加或减少。
4. 凝胶电泳结果异常：在用凝胶电泳检测提取的DNA时，可能会发现电泳结果异常。
例如，可能会出现条带不清晰、带型异常等情况。
这可能是由于DNA受到了污染或降解，或者
电泳条件不合适等原因导致的。
总之，在植物DNA的小量法提取及鉴定实验中，可能会
出现一些异常现象。
实验人员需要认真观察和记录这些现象，并采取适当的措施进行处理，以确保实验结果的准确性和可靠性。
植物品种鉴定dna指纹方法总则
植物品种鉴定dna指纹方法总则植物品种鉴定是通过研究植物的遗传信息来确定其品种的过程。
随着生物技术的不断发展，DNA指纹方法已经成为植物品种鉴定的主要手段之一、这种方法通过对植物的DNA进行分析，确定不同植物品种之间的遗传差异，并基于这些差异来进行鉴定。
DNA指纹方法的总则如下：1.DNA提取：首先需要从植物组织中提取出DNA。
这可以通过使用DNA提取试剂盒来完成，通常采用物理、化学或其他方法来破坏细胞壁，释放DNA。
然后使用各种技术将DNA纯化和浓缩，以获得高质量的DNA样本。
2.PCR扩增：DNA指纹分析通常采用PCR（聚合酶链反应）技术来扩增特定DNA片段。
首先，需要设计一对特异性引物，这两个引物将在特定DNA区域的两侧结合。
然后将DNA模板与引物和其他PCR试剂混合，进行PCR反应。
这个反应周期会反复进行，每一个周期会使DNA的数量翻倍，最终得到大量的目标DNA片段。
3.凝胶电泳：PCR扩增后的DNA片段需要通过凝胶电泳进行分离和分析。
通常使用琼脂糖凝胶作为分离介质，将扩增产物加入琼脂糖凝胶槽中，然后通过电场使DNA片段移动。
DNA片段的大小决定了其在凝胶中的迁移速度，从而分离出不同大小的DNA片段。
4.杂交检测：DNA片段在凝胶上分离后，需要进行杂交检测以确定其特征标记。
通常使用特定的DNA标记物，如荧光标记或放射性标记探针，将其与DNA片段结合。
然后通过显微镜或其他检测设备观察标记物的存在与否，以及其位置和数量。
5.数据分析：通过对凝胶电泳和杂交结果的分析，可以得到每个品种的DNA指纹图谱。
这些图谱可以用来比较不同品种之间的遗传差异，并确定植物的品种信息。
通常采用统计学方法和计算机软件来分析和解释这些数据。
总之，DNA指纹方法是一种可靠且高分辨率的植物品种鉴定方法。
它可以通过分析植物DNA的遗传信息，确定不同品种之间的差异，为植物分类、种质资源管理和遗传改良提供有力支持。
随着技术的进步，未来还有望开发更多更精确的DNA指纹方法，以提高植物品种鉴定的准确性和效率。
植物基因组dna的提取、扩增及电泳鉴定
从植物DNA中找到奥妙：提取、扩增与电泳鉴定植物基因组的研究是揭示植物遗传特性以及开展植物基础科学研究的重要手段。
在开展植物DNA研究前，需要实施植物基因组DNA的提取、扩增及电泳鉴定等步骤。
以下是生物科技领域的一些灵活和有趣的技巧，可以助您成功进行植物基因组研究。
一、提取植物基因组DNA1. 细胞破碎法植物组织通常蕴含大量的细胞壁，因此破碎细胞壁是提取植物基因组DNA的一个重要步骤。
通过粉碎植物组织，然后用试剂将细胞排出来即可提取发现植物DNA，从而用于后续步骤。
2. CTAB法这是一种常用的植物基因组DNA提取方法，包括使用CTAB（己基三甲基溴化铵）试剂破解细胞壁。
CTAB法需前期准备，但提取到的DNA质量均很高。
二、扩增植物基因组DNAPCR（聚合酶链反应）是一个非常有用的技术，可使选定DNA序列扩增成百万甚至更多的分子，使它们可用于植物基因组研究。
FBP（前向单一引物PCR）可以用于检测植物基因组单个位点的多态性，这可以用于检测种内个体之间的遗传差异。
三、植物基因组DNA电泳鉴定分子量相似的DNA分子可以通过电泳鉴定分离，因此，DNA电泳成为提纯DNA的主要方式，促进扩大研究样本大小范围的同时又允许研究DNA随时间变化的结果。
电泳是植物DNA研究中必不可少的步骤。
考虑到复杂的操作流程和数据分析过程，实施植物基因组研究的关键是建立一个可重复和可靠的实验流程。
尽管一些方法已经得到确定，但基础技术并没有发展完全需要依靠科研者们的努力和实践。
让我们一起研究植物DNA的提取、扩增及电泳鉴定，加深紧密的交流与学习，与令我们感到兴奋的植物DNA世界同在！。
实验十二 植物中DNA的提取及鉴定
实验十二植物中DNA的提取及鉴定一.实验目的1.学习掌握从植物中提取DNA的方法2.学习掌握从植物中分离核酸的原理和方法二.实验原理Ⅰ植物基因组DNA 的提取（CTAB法）植物组织中绝大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在一起，以核蛋白（即染色质或染色体）的形式存在于细胞核内。
CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide，简称CTAB)：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中(0.7mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度(0.3mol/L NaCl)时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题：（1）DNA的二级结构和双链易受多种因素（如强酸、强碱、加热、低盐浓度、有机溶剂、酰胺类、尿素等）的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时避免使用变性的条件。
（2）抑制内外源DNase的活力。
DNase就象一把刀，它能把大分子的DNA切成碎片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a、低温操作；b、调节pH，使偏碱（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯合剂（EDTA）除去酶的铺助因子（Mg2+），使酶活性丧失。
（3）防止化学降解。
如过酸或过碱以及其它化学因素，会使DNA降解，一般综合考虑，取pH8.0左右为宜。
（4）防止物理因素降解。
如温度太高或机械张力剪切等，DNA分子特别大，其分子量可达1012道尔顿，极易被机械张力拉断，甚至在细管中稍急一些的流动也会使DNA断裂，所以在抽提过程中要特别注意这一点，操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数，也不要剧烈摇动。
（5）植物的次生代谢物（主要是胞质内的多酚类或色素类化合物）对核酸提取有干扰作用。
实验四 植物DNA的提取
实验四植物DNA的提取一、实验目的掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。
采用CTAB法从植物叶片中提取基因组DNA，并进行纯度分析。
二、实验原理1、核酸提取的基本原理核酸是生物有机体中的重要成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。
核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类，在真核细胞中，前者主要存在于细胞核中，后者主要存在于细胞质及核仁里。
在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。
在浓氯化钠溶液(1～2 mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很小；而在稀氯化钠溶液(0.14 mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很大。
因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。
分离得到核蛋白后，需进一步将蛋白等杂质除去，常采用的去除蛋白的方法有3种：①用含异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间，而DNA溶于上层水相。
用两倍体积的无水乙醇溶液将DNA钠盐沉淀出来。
如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀，得到的是游离的DNA。
②用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，与核酸分离，从而从材料中直接提取出DNA。
③用苯酚处理，然后离心分层，DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内。
吸出上面水层，加两倍体积的无水乙醇溶液，得到白色纤维状DNA沉淀。
反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的DNA制品。
为了彻底除去DNA制品中混杂的RNA，可用RNA酶处理。
生物材料中含有的脂肪物质和大部分的多糖，在用盐溶液分离核蛋白和用乙醇或异丙醇分级沉淀时即被除去。
在DNA提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构：①化学因素，核酸的结构在pH值4.0～11.0间较稳定，pH值在此范围外就会使核酸变性降解，故制备过程应避免过酸过碱。
植物DNA的粗提取与鉴定报告
植物D N A的粗提取与鉴定实验摘要：对香蕉的果肉组织进行DNA的粗提取,并用二苯胺﹝沸水浴﹞进行DNA鉴定;实验原理：1.洗涤剂可溶解植物细胞膜在氯化钠溶液中的溶解度曲线呈U字形;3.细胞中的某些蛋白质溶于酒精,而DNA不溶;4. DNA分子在低温下更易凝结;5.在沸水条件下,DNA遇二苯胺会被染成染色;6.离心机可使悬浊液中的颗粒沉淀下来﹝详见附录﹞实验器材：玻璃棒、烧杯、滤纸、试管、试管夹、电磁炉、离心机、NaCl、二苯胺试剂、洗涤剂、香蕉等实验步骤：1.取50克左右的去皮香蕉,放入研磨钵中研磨,同时加入一定量的氯化钠与洗涤剂,尽可能的充分研磨,使更多的DNA从植物细胞中释放出来,但动作要轻缓,否则会产生大量泡沫,不利于后续操作;2.研磨好后,过滤并收集研磨液,在研磨液中加入氯化钠,使氯化钠溶液物质的量浓度为2mol/L,过滤除去不可溶杂质;再调节氯化钠溶液物质的量浓度为L,析出DNA,过滤除去溶液中的杂质,再用物质的量浓度为2mol/L的氯化钠溶液溶解DNA;3.加入与DNA溶液体积相等的、冷却的酒精溶液﹝体积分数为百分之九十五﹞,静置2到3分钟,溶液会出现白色丝状物,这就是粗提取的DNA,用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物﹝玻璃棒带负电,易吸附DNA﹞,并用滤纸吸去上面水分,注意搅拌动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀;4.取两支20ml试管,各加入物质量浓度为2mol/L的氯化钠溶液5ml,将丝状物放入其中一支试管,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解;然后,向两支试管各加入4ml的二苯胺试剂;混合均匀后,将两支试管放入沸水中加热5分钟,待两支试管冷却后,比较试管颜色的变化,看看溶有DNA的溶液是否变蓝;实验过程摘要：1.在研磨时发现,用研磨钵难以将香蕉研磨充分,估计是水分较多导致的;后用榨汁机进行该部分实验,效果好很多,没有较大的固体;并意外的发现剧烈的搅拌并没有产生大量泡沫;2.进行过滤时,所得到的研磨液非常少,担心DNA没有完全溶到研磨液中,所以往滤渣加一定量的2mol/L氯化钠溶液,用玻璃棒搅拌,再过滤一次;第二次过滤时,产生了大量的气泡;后来发现原来是第二次水分较多,使滤液直接通过滤纸底部尖端滴下,在经过漏斗下端细长部分时产生气泡;让滤液沿漏斗壁流下时则不再产生气泡;3.在将滤液的氯化钠量浓度稀释到L的过程中,并未发现任何絮状物,整个溶液非常澄清;一度以为实验失败,难以进行;后询问老师,老师认为有可能是因为植物DNA 的提取物片段较小,加之本身DNA含量不多,故看不见;可试下离心实验;4.于是将滤液上层的泡沫去掉,取清液分别加入12支离心管中,放入离心机进行试验;经过一段时间后,取出观察,仍未发现絮状物;我们认为可能是离心时间过短,转速不够;便再次放入,第二次在老师的指点下,振荡离心管,终于发现小段白色絮状物,每支离心管都有;5.我们用滤纸进行过滤,发现过滤速度非常慢,加之由于时间关系,便直接将一支白色絮状物含量较多的离心液倒入一支试管中,加入4ml的二苯胺试剂,取另一支加入同离心液等量的2mol/L的氯化钠溶液,同样加入4ml的二苯胺试剂作对照;再放入沸水中加热;6.遗憾的是,当时已打上课铃,实验还未做完,刘越老师说加热部分可统一交给实验老师进行;当第三节下课后来到实验室,发现还未加热;第二天早上再去时发现试管已被倒掉;故实验结果不得而知;实验结果：成功提取了白色絮状物,但二苯胺鉴定结果未知;实验总结：1.总的来说,实验还是比较有意义的,虽然未完成DNA鉴定实验,但已提取出白色絮状物,并尝试着使用离心机;整个实验过程有很多问题,我们学会了独立地解决一部分问题,当然有一些问题仍需请教老师;2.一些难以观察到,难以测量的量可通过一些易观测的现象表达;如；在确定氯化钠的量浓度已调节到L,是通过溶液无新的絮状物生成得出的;3.实验设计的一些步骤在未进行实施,不清楚效果,在效果不好时应及时改进;如在用研磨钵研磨时,效果很不好,当时以为是研磨的时间不够,到后面才改用榨汁机,而刚好此时别的组在用榨汁机,这样浪费了很多时间;4.做实验前,或者是说设计实验前应去查阅资料;仅以靠课本,且课本还未对此实验进行专门的介绍是远远不够的;如果现在再让我重新设计一次实验,我会改进许多步骤,如；1.选取材料时会用DNA含量更高的菜花进行实验;2.在实验前,可先将香蕉冷冻24小时;冷冻过后,在研磨时,植物细胞更易破裂,便提取DNA;3.植物DNA片段比动物的细碎的原因是植物细胞的细胞质含有DNA酶,这种酶可分解DNA;有以下几种方法可以抑制该酶的活性﹝1﹞可加入EDTA﹝乙二胺四乙酸二钠﹞﹝2﹞可在低温下进行操作﹝3﹞可调整pH,使其大小约为,呈偏碱性;方法1可能不太能够实现,但方法2,3还是可行的;这些措施都可以提高实验的成功率,与此同时查资料后,面对实验意外的状况时,不会太茫然、不知所措;这样可以节省很多时间,实验后面部分就不会太紧张,导致一些步骤都直接省略了﹝如离心后,本可利用冷却的酒精溶液进行进一步提纯,这是提取的白色絮状物较少的很重要的一个原因﹞附；离心机原理当含有细小颗粒的悬浮液静置不动时,由于重力场的作用使得悬浮的颗粒逐渐下沉;粒子越重,下沉越快,反之密度比液体小的粒子就会上浮;微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态和密度有关,并且又与重力场的强度及液体的粘度有关;象红血球大小的颗粒,直径为数微米,就可以在通常重力作用下观察到它们的沉降过程;参考资料视频资料文献资料。
实验七_植物DNA的提取与纯度鉴定
实验试剂及其配置
• 6 高盐 溶液（pH 8.0） （要求配 高盐TE溶液（ 溶液 ） 要求配50mL） ）
试剂 1 M pH 8.0 Tris·Cl 0.5 M pH 8.0 EDTA NaCl
需要量/L 需要量 10 mL 0.2 mL 58.5g
终浓度 10 mmol/L 0.1 mmol/L 1 mol/L
需要量/L 需要量 20 g 100 mL 40 mL 82 g
终浓度 2％（ ） ％（w/v） ％（ 100 mmol/L 20 mmol/L 1.4 mol/L
实验试剂及其配置
2 1 M pH 8.0 Tris·Cl（已有不用配置） （已有不用配置）
121 g Tris碱溶于 碱溶于800 mL dd H2O，浓HCl调pH至8.0，补dd H2O定容 碱溶于 ， 调 至 ， 定容 至1000 mL。 。 注意： 缓冲液的pH值随温度变化较大 注意：Tris缓冲液的 值随温度变化较大，每1℃可引起大约 缓冲液的 值随温度变化较大， ℃可引起大约0.028 pH单位的变化。 单位的变化。 单位的变化
实验七 植物DNA的提取与纯度鉴定 的提取与纯度鉴定 植物
谢 艳
• • • • • • •
实验目的 实验原理 实验材料 实验试剂 实验仪器 实验步骤 注意事项
实验目的
• 了解植物总 了解植物总DNA提取的原理 提取的原理 • 学习和掌握提取、纯化高等植物总DNA的 学习和掌握提取、纯化高等植物总 掌握提取 的 方法和步骤
背景知识 1
不同生物须选择不同DNA提取方法 提取方法 不同生物须选择不同
不同生物（ 植物、 动物、 微生物） 不同生物 （ 植物 、 动物 、 微生物 ） 的基因组 DNA的提取难易度不同： 的提取难易度不同： 的提取难易度不同 对于低等生物，如从病毒中提取DNA比较 对于低等生物，如从病毒中提取 比较 容易，多数病毒DNA分子量较小，提取时易保 分子量较小， 容易，多数病毒 分子量较小 持其结构完整性。 持其结构完整性。 从细菌及高等动植物中提取DNA难度大一 难度大一 从细菌及高等动植物中提取 细菌DNA 分子量较大，一般达 ×10 道尔 分子量较大，一般达2× 些。细菌 因此易被机械张力剪断。细菌DNA，除核 顿。因此易被机械张力剪断。细菌 ， DNA 外，还有质粒 还有质粒DNA 等。
植物dna鉴定
植物dna鉴定
植物DNA鉴定是一种通过分析植物细胞中DNA序列来确定
植物的种类或品种的方法。
它主要依靠PCR（聚合酶链反应）技术、测序技术、分子标记等手段进行。
植物DNA鉴定的步骤包括：
1. 提取植物样品的DNA：首先需要从植物样品中提取纯粹的DNA。
这通常通过碎裂细胞壁、跨膜和核膜，然后使用化学
方法来提取DNA。
2. PCR扩增：使用特定的引物和DNA聚合酶，选择性地扩增
所需的DNA区域。
这些DNA区域通常是被广泛保守的基因
或DNA序列，可用于种类或品种的鉴定。
3. 凝胶电泳：将PCR扩增产物分离和检测。
通常使用琼脂糖
凝胶电泳来分离和可视化PCR产物。
凝胶电泳后，可以根据PCR产物的大小和带状图谱确认特定的基因型。
4. DNA测序：对所扩增的DNA进行测序分析，以获得更精确的DNA序列信息。
测序的结果可以与数据库中的DNA序列
进行比对，以鉴定植物的种类或品种。
5. 分子标记分析：利用特定的分子标记（如SNP、SSR等）
对植物DNA进行分析和鉴定。
这些标记可以根据不同的基因
型产生不同的片段或变异，从而确定植物的种类或品种。
植物DNA鉴定在植物分类、品种鉴定、遗传多样性评估以及植物保护等领域具有重要的应用价值。
分子实验-植物DNA提取
0 1 实验原理
1、破壁：在液氮中对植物组织进行研磨，破碎细胞。并减少 研磨过程中各种酶类的作用。
2、溶解：CTAB离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜， 使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来。
3、分离：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提 液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去 细胞碎片和大部分蛋白质。
三、主要仪器及耗材： 研钵及研钵棒、水浴锅、移液枪及配套枪头、2.0ml离心管、 离心机、 电子天平、通风橱、冰箱、电泳仪、 凝胶成像系统、超微量核酸蛋白测 定仪系统。
04
PART FORE
操作步骤
0 4 操作步骤
1.配置试剂： （1）10 ml 4% CTAB提取缓冲液
CTAB NaCl 1 M Tris- HCl(pH 8.0) 0.5 mol/L EDTA(pH 8. 0) ddH2O
(二)琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA:
1、将溶液加入样品槽时，勿划破或戳破加样孔，勿带入气泡; 2、使用干净的电泳溶液。
THANKS
心管，使之充分作用15 min。
0 4 操作步骤
10.重复第7步骤。 11.在上清液中，加入2倍体积预冷的无水乙醇，轻柔颠倒，充分混匀，
室温放置 10min。 12.12 000 r/min 离心 5 min，弃上清，用70%的乙醇洗涤沉淀2次。 13.室温挥发乙醇5-10min，加入适量的ddH2O溶解。 14.电泳检测。取3 μL提取的植物总DNA，加入 1μL 6x Loading buffer，
0.4g 1.64g 20ml 0.8ml 7.2ml
（2）10ml 70%乙醇
无水乙醇
7ml
水
3ml
0 4 操作步骤
植物品种鉴定dna指纹方法总则
植物品种鉴定dna指纹方法总则植物品种鉴定是通过比较不同植物品种之间的遗传差异来确定其真实身份的过程。
DNA指纹方法是一种常用的鉴定手段，通过分析植物DNA中的特定位点或序列的差异来进行鉴定。
以下是植物品种鉴定DNA指纹方法的总则：1. DNA提取：首先从待鉴定植物样本中提取DNA。
提取方法可以根据具体实验室的设备和试剂选择合适的方法，如CTAB法、酚/氯仿法等。
2. 选择分子标记：选择适合的分子标记来分析DNA指纹。
常用的分子标记包括核酸序列重复（SSR）、随机扩增多态性DNA (RAPD)、序列特定扩增（STS）等。
选择合适的分子标记取决于目标植物种群的遗传特点和研究目的。
3. PCR扩增：使用PCR（聚合酶链反应）技术扩增DNA片段。
根据选择的分子标记，设计引物使其能够特异性扩增目标区域。
PCR反应条件与所选的引物和目标区域有关，需进行优化。
4. 凝胶电泳：将PCR扩增产物分离和可视化。
通常使用琼脂糖凝胶电泳将扩增产物按照大小进行分离，然后通过染色或其他方法可视化DNA条带。
5. 数据分析：根据凝胶电泳结果，对DNA条带进行解读和分析。
比较不同品种之间的DNA条带差异，可以鉴定品种是否相同或相关。
6. 统计分析：使用适当的统计方法对分析结果进行处理和解读。
通过计算相似性指数、聚类分析等统计方法，可以得出植物品种之间的遗传关系和相似性。
需要注意的是，植物品种鉴定的DNA指纹方法虽然被广泛应用，但在具体实施时要根据植物物种的特点和研究目的进行调整和优化。
另外，为了确保结果的准确性和可靠性，应该在实验过程中采取严格的质量控制和验证步骤。
总之，植物品种鉴定的DNA指纹方法主要包括DNA提取、分子标记选择、PCR扩增、凝胶电泳、数据分析和统计分析等步骤。
这些步骤的选择和实施应根据具体的研究需求进行调整和优化。
植物DNA的提取与鉴定
5，置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min 轻轻摇动，30~60min后取出； 6，冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1） 至满管，充分混匀2~3 min 7，放入离心机中10000 rpm离心10 min，与此 同时，将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心 管中； 8， 10000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸 取上清液，转入含有异丙醇的离心管内，将离心 管慢慢上下摇动30 s，使异丙醇与水层充分混合 至能见到DNA絮状物；
,
思考
1. 用酚抽提细胞 DNA 时，有什么作用？ 使蛋白质变性，同时抑制了 DNase 的降解作用。用苯酚处理匀浆液时 , 由于蛋白与 DNA 联结键已断 , 蛋白分 子表面又含有很多极性基团与苯酚 相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而 DNA溶于水相。
2.氯仿的作用？ 克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提，去除核酸溶液中的迹量 酚。（酚易溶于氯仿中） 3.异戊醇的作用？
①化学因素，核酸的结构在 pH 值 4.0 — 11.0 间较稳定，pH值在此范围外就会使核酸变性 降解，故制备过程应避免过酸过碱。
②物理因素， DNA 分子链很长，是双螺旋结 构，既有一定的柔性。又有一定的刚性，故 强机械作用如剧烈搅拌会令 DNA 分子断裂酶 在细胞壁或膜遭到破坏时被释放出来， 它会降解DNA 分子。故须用酶的变性剂、 抑制剂使之失活。操作过程最好在低 温(0℃左右)下进行。 2 ，所有操作均须温和，避免剧烈震荡。
170乙醇液氮70乙醇液氮实验器材冷冻高速离心机台式高速离心机移液器水浴锅37100陶瓷研钵离心管50ml有盖离心管5ml和15ml小玻棒形状为弯成钩状的天平冷冻高速离心机台式高速离心机移液器水浴锅37100陶瓷研钵离心管50ml有盖离心管5ml和15ml小玻棒形状为弯成钩状的天平实验步骤1将10mlctab提取缓冲液加入50ml离心管中置于60水浴中预热
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DNA是遗传信息的载体和基本遗传物质，它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用，是分子生物学和基因工程研究的对象，但无论是研究植物DNA的结构和功能，还是开展外源DNA的转化、转导的研究，首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的纯化DNA。因此，本实验的目的是学习植物基因组DNA提取方法、原理和DNA的鉴定技术。
Ⅰ 植物基因组DNA 的提取（CTAB法）
一、原理
植物组织中绝大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在一起，以核蛋白（即染色质或染色体）的形式存在于细胞核内。CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide，简称CTAB)：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中(0.7mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度(0.3mol/L NaCl)时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。
纯度鉴定时，需测定在230、260和280nm处的消光值，经验数据表明，
纯净的核酸溶液A260/A230的消光值比大于或等于2.0；A260/A280大于或等于1.80。A260/A280值过小，说明蛋白未脱净；A260/A230过小，说明有杂质（一般为多酚类或色素）。
含量测定时，对于纯净的DNA来说，在实际应用中可根据260nm处的消光值O.D260值换算成含量，一般认为O.D260值为1时，相当于50μg/ml。在测定核酸粗制品时，样品中残留的蛋白质和色素等与其它具紫外吸收的杂质对测定有明显干扰作用，大分子核酸制备过程中变性降解后有增色效应，因此有时此法测定的结果会高于定磷法。
二、操作方法
（1） 取200mg样品(在液氮中研磨成粉末状)放入1.5mL离心管中，加入600μL DNA提取液，颠倒混匀5-6次。65℃保温35分钟以上，其间颠倒混匀一次。
（2）再加等体积的氯仿异戊醇(24：1)溶液轻轻摇晃30秒，在4℃下10000rpm/分钟离心10分钟后，取吸上清液(450μL)
2．加样：将样品与溴酚蓝按4：1的比例混合，用移液器缓慢加入凝胶样品孔中，点样量为每孔5μgDNA。
3．电泳：点样端接负极，电泳开始时，可用较高的电压，如100伏特，这样可使样品很快进入胶内，而减少样品扩散，待样品进入胶内即可保持每厘米
5伏特左右的电压，DNA在电泳中向正极移动。当溴酚蓝的区带移至距凝胶底部1-2cm，停止电泳，当胶板为10-15cm的长度时，电泳时间一般为2小时左右。
Ⅱ 植物DNA 纯度的鉴定——紫外分光光度计法
一、原理
由于核酸中的碱基都具有共轭双键，所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线，其吸收高峰在260nm处，吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处，所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一。但紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来鉴定核酸的纯度和含量。
（3） 再加两倍体积的预冷异丙醇，混匀静止10分钟以上，在4℃下10000rpm/分钟离心10分钟后，弃上清。
（4） 用600μL70%乙醇洗涤沉淀，重复一次，在室温下倒置晾干。
（5）沉淀用TE溶液溶解DNA，再加入RNase至终浓度50μg/mL，在37℃下保温半小时，将DNA样品放入冰箱保存。
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题：
（1）DNA的二级结构和双链易受多种因素（如强酸、强碱、加热、低盐浓度、有机溶剂、酰胺类、尿素等）的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时避免使用变性的条件。
（2）抑制内外源DNase的活力。DNase就象一把刀，它能把大分子的DNA切成碎片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a、低温操作；b、调节pH，使偏碱（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯合剂（EDTA）除去酶的铺助因子（Mg2+），使酶活性丧失。
B．使用浓度：0.04mol/L Tris-HAc/0.04mol/L EDTA。
（2） 琼脂糖：电泳纯以上。
（3）溴酚蓝甘油溶液（0.05%溴酚蓝-50%甘油溶液）：先配制0.1%溴酚蓝水溶液，然后取1份0.1%溴酚蓝溶液与等体积的甘油混合即成。
（4）已知分子量的标准DNA（λDNA-ECORI/Hind III）。
（3）防止化学降解。如过酸或过碱以及其它化学因素，会使DNA降解，一般综合考虑，取pH8.0左右为宜。
（4）防止物理因素降解。如温度太高或机械张力剪切等，DNA分子特别大，其分子量可达1012道尔顿，极易被机械张力拉断，甚至在细管中稍急一些的流动也会使DNA断裂，所以在抽提过程中要特别注意这一点，操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数，也不要剧烈摇动。
Ⅲ 植物DNA 分子量的测定——琼脂糖凝胶电泳法
一、原理
以琼脂糖凝胶为支持介质的电泳广泛应用于核酸研究中，其操作简单、快速，是分离、鉴定、纯化DNA的标准方法。DNA分子在高于其等电点的pH溶液带负电荷，在电场中向正极移动。DNA分子在电场中通过凝胶介质而泳动，除电荷效应外，还有凝胶介质的分子筛效应，也就是说与分子大小构象有关。实验表明DNA迁移率与其分子量的对数成反比。因此通过参比已知标准分子量的DNA迁移率，可测定样品DNA的分子量。用低浓度的荧光物质，插入性染料溴化乙锭（EB）使凝胶中DNA区带染色，在紫外光下可直接显示DNA在凝胶中的位置，灵敏度很高，可检出10ng（10-9g）或更少的DNA含量。
（5）植物的次生代谢物（主要是胞质内的多酚类或色素类化合物）对核酸提取有干扰作用。因此，一般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取DNA的材料，这是因幼嫩的新生组织次生代谢物较少，DNA含量高，且易于破碎，植物材料最好是新鲜的。
分离提取植物DNA的方法很多，本实验采用CTAB法提取DNA并通过紫外吸收法和电泳鉴定。
(4)观察与鉴定
电泳结束后，取出凝胶板，在波长为254nm的凝胶成像系统下，观察电泳图谱，如果电泳条带清晰(如果EB染色看到桔黄色荧光条带，GV染色则看到绿色荧光条带)，将凝胶照相。根据标准DNA的电泳图谱，可以得知样品DNA的分子大小。 �
（5） 10mg/mL溴化乙锭水溶液（EB）或GV水溶液。
三、操作方法
1．琼脂糖凝胶板的制备
称取0.7g琼脂糖置于三角瓶中，加入100mlTAE缓冲液，在沸水浴中加热至琼脂糖完全溶解，冷却至50℃，然后加入EB溶液使终浓度为0.5μg/ml。倒入凹形有机玻璃槽（事先用胶带封住有机物玻璃板的边缘）。使其成2mm左右的凝胶板。在其未凝固前将样品槽模板（梳子）插入凝胶的一端，注意梳齿底与凝胶底之间应至少保持0.5-1.0mm的凝胶。待全部凝固后（室温，约30-45分钟），取出梳子及除去胶带，将凝胶板与玻璃板一起放入电泳槽内，加入TAE缓冲液使刚好超过凝胶面约1mm。
二、实验材料、仪器及试剂
1、材料 植物DNA
2、器材：紫外分光光度计、移液管、试管
3、试剂：TE溶液（pH8.0）（见前述）
三、操作方法
将纯化的DNA溶液用TE（pH8.0）稀释至每毫升含5-50μg DNA浓度范围，用TE（pH8.0）作空白对照，于紫外分光光度计上测定260nm、280nm和230nm吸收值，计算A260/A230和A260/A280的比值，并换算出核酸的含量。
二、实验材料、仪器及试剂
1、材料： 植物DNA
2、器材：水平板型电泳槽装置 电泳仪 254nm波长的紫外分析仪塑料手套 移液管 水浴锅
3、试剂：
（1）T ris-HAc(TAE)缓冲液
A．浓缩的贮备液（50倍）每升含：242gTris 57.1ml冰醋酸，100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）。