胎鼠神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠海马区的GFAP与S-100β表达的影响
电针对脑功能障碍大鼠海马物质影响的研究进展
电针对脑功能障碍大鼠海马物质影响的研究进展（作者： _________单位：____________ 邮编：___________ ）【摘要】目前，电针对脑缺血模型大鼠海马细胞影响的研究报道很多，对海马与学习记忆关系的研究已成为国内研究的重点。
本文就电针对脑功能障碍大鼠海马物质影响的研究作简要综述。
【关键词】电针海马物质海马的生理功能目前仍在探讨之中.大量的动物模型研究表明，海马与学习记忆有关。
当脑缺血等致海马受损时，可引起学习记忆功能的严重障碍。
电针刺特定穴位可影响脑功能障碍大鼠海马物质的表达。
现就目前电针对脑功能障碍大鼠海马物质影响的研究作一综述。
1电针对海马细胞凋亡相关蛋白表达的影响1.1 Bel ]2是功能最为明确的细胞凋亡拮抗基因Bcl[2蛋白基本生物学功能为延长细胞的生命期限、增加细胞对多种凋亡刺激因素的抗性。
Bax与Bcl]2作用相反，能够促进凋亡，Bcl〕2表达水平较高时，形成Bcl[2/Bcl[2同源二聚体，抑制细胞凋亡；Bax表达水平较高时，形成Bax/Bax同源二聚体，加速细胞凋亡；BcL2和Bax水平相当时，则形成Bcl[2/Bax异源二聚体，终止细胞凋亡。
近年的研究提示Bcl[2与Bax调节细胞凋亡，不仅取决于自身表达的高低，还与Bax/Bcl_2比率有关，当比率增大时，细胞趋于凋亡[1 ]o caspase ]3 激活是触发凋亡的关键（有“分子开关”之称是凋亡的最终执行蛋白。
Bcl]2家族基因在调节线粒体通透性上发挥重要作用，Bcl]2或其他抗凋亡Bcl_2家族成员下调，或促凋亡Bcl_2家族成员如Bax在线粒体膜上过度表达和移位，均导致线粒体通透性增加，使细胞色素C 从线粒体释放入胞浆，与Apaf”、dADP形成复合体，再与胞浆中的caspase ]9前体形成凋亡小体，导致caspase[9被裂解激活，随后再裂解caspase家族其他成员包括caspase[3,引发凋亡。
血管性痴呆大鼠海马NR2B受体与学习记忆的研究进展
7BIOTECHWORLD 生物技术世界1 NR2B 受体特性与学习记忆功能NMDA受体由多个亚单位组成,包括NR1、NR2 (包括NR2A-D)、NR3。
而NR2B亚基作为最重要的调节单位,在神经元突触形成与维持、突触传递可塑性及学习和记忆等调节过程中起重要作用。
Goebl等检测中枢神经系统NR2B mRNA分布时发现,NR2B在与学习记忆有关大脑皮层和海马等部位密度最高,奠定了NR2B受体参与学习记忆的物质基础。
Bliss称NR2B为“聪明基因”,并且证实NR2B亚基过度表达的小鼠学习记忆能力增强,海马组织NR2B基因敲出的小鼠出现空间或非空间的记忆缺陷。
所以说,NR2B作为调节亚单位,在学习和记忆等脑高级功能的调控中起关键作用。
2 脑缺血后NR2B 受体的改变与学习记忆功能在缺血缺氧的病理情况下,NR2B受体的数量及功能发生改变,导致神经元损害和神经功能受损,使得学习记忆功能发生障碍。
研究发现,采用永久性双侧颈总动脉结扎模型模拟大鼠慢性脑低灌注,神经生长因子连用21天,可降低海马NR2B的过度表达,增强脑缺血再灌注大鼠学习与记忆功能[1],说明NR2B表达水平的变化可能是影响学习记忆的机制之一。
同时发现人参皂苷Rg1联合美满霉素也可逆转海马NR2B过度表达,明显改善脑缺血再灌注大鼠的学习记忆能力[2],具有脑保护作用。
大鼠多发性脑梗死10天后给予塞络通胶囊干预60天,可下调大鼠多发性脑梗死恢复期NR2B表达,减轻缺血缺氧诱导NR2B活性升高而引起的神经元损伤[3],改善中枢神经系统学习、记忆功能。
另有研究表明,缺血性血管性痴呆(VD)大鼠海马NR2B含量显著减少,美金刚连用4周可上调NR2B含量[4],说明慢性缺血缺氧损伤引起能量供应不足,存活神经元功能受损,影响受体合成,美金刚通过调节谷氨酸能信号通路并恢复其功能,从而改善慢性缺血导致的认知功能障碍。
综上所述,NR2B在脑缺血缺氧的疾病过程中表现出上调或者下调的变化,原因可能与在不同的模型中缺氧的程度、快慢、持续时间有关。
勤能补拙，过目不忘，提高m6A助力好记性？中科院王秀杰杨运桂合作最新成果
勤能补拙，过目不忘，提高m6A助力好记性？中科院王秀杰杨运桂合作最新成果长时记忆的形成（long-term memory formation）是哺乳动物适应环境变化、智力发展所必需的，对于人类的社会活动尤其重要。
大脑的海马体是人类形成长时记忆的主要物质载体1。
一些参与记忆形成的基因（如Arc, c-Fos, Egr1, Npas4, Nr4a1等）可以激活下游的神经营养因子介导突触可塑性（生信宝典之傻瓜式(六)查找转录因子的靶基因），但关于记忆形成过程的调控因素与机制仍存在很多未知。
N6-甲基腺嘌呤（m6A）是哺乳动物细胞中mRNA上最为普遍的修饰，主要由METTL3/METTL14/WTAP复合物催化形成，其中METTL3是催化m6A形成的关键甲基转移酶2。
2017年至2018间，有三篇文章先后发表在Cell，NatureNeuroscience与PLOS Biology （王秀杰老师组文章，见王秀杰研究组合作发现m6A修饰在小脑发育中的新功能（附2018上半年m6A研究文章和点评））上，利用胚胎发育期敲除METTL14或METTL3的小鼠模型，分别揭示了m6A缺失对大脑皮层发育、神经干细胞自我更新以及小脑发育存在显著影响3-5，然而，由于上述工作获得的基因敲除小鼠神经系统发育缺陷，通常在断奶期前后死亡，所以m6A修饰在成体神经系统中的功能仍不清楚。
The Journal of Neuroscience曾在2016年发表研究称小鼠前额叶中m6A丰度会随着学习训练增加，提示m6A修饰与小鼠记忆形成具有一定相关性6。
然而该研究主要是围绕FTO展开的。
由于FTO在细胞内存在非m6A修饰相关的功能，因此m6A修饰是否调节记忆形成及其分子机制仍不明确。
（FTO是很有意思的基因，之前被认为跟肥胖相关。
后来发现是FTO内含子的突变与IRX3的表达有关，IRX3才是调节脂肪和肥胖的关键。
）10月8日，中国科学院遗传发育与生物学研究所的王秀杰研究组联合中国科学院北京基因组研究所的杨运桂研究组系统阐明了m6A修饰在学习过程中对长时记忆形成的调节作用及其相应的分子机制。
嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植对阿尔茨海默病大鼠的治疗作用
嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植对阿尔茨海默病大鼠的治疗作用姚柏春孙天敏冯娜王军唐慕湘王金勇王配军（湖北医药学院，湖北十堰442000）〔摘要〕目的探讨嗅成鞘细胞（OECs ）对神经干细胞（NSCs ）移植治疗大鼠阿尔茨海默病（AD ）的影响。
方法SD 大鼠双侧海马注射A β1 40，建立AD 大鼠模型。
实验动物分为4组：NSCs 移植组、NSCs 与OECs 移植组、AD 模型组、正常对照组，每组30只。
从SD 胎鼠（孕16 18d ）取材，在体外分别培养和共培养OECs 与NSCs ，并将共培养的OECs 与NSCs 移植于AD 大鼠大脑；观察各组大鼠行为学、移植细胞存活、迁移和分化以及宿主脑海马突触素表达的变化。
结果①行为学测试：NSCs 与OECs 移植组潜伏期明显缩短、过平台次数明显增加，与NSCs 移植组、AD 模型组有显著性差异（P ＜0.05）。
②根据标记跟踪，植入的NSCs 与OECs 大量存活，从注射部位分别向两侧海马区及其周围皮质迁移。
③免疫荧光检测：植入NSCs 能在AD 脑内分化为神经元、神经胶质细胞以及少量胆碱能神经元，NSCs 与OECs 移植组分化为神经元的分化率13.97%，与NSCs 移植组8.35%差异显著（P ＜0.05）。
④海马突触素表达：NSCs 与OECs 移植组IA 值最高，与NSCs 移植组、AD 模型组有显著性差异（P ＜0.05）。
结论嗅成鞘细胞通过改善植入神经干细胞在AD 脑内的存活、迁移和分化能力以及与宿主脑的联系，提高NSCs 移植治疗大鼠AD 的效果。
〔关键词〕阿尔茨海默病；嗅成鞘细胞；神经干细胞；细胞培养；共培养、共移植〔中图分类号〕R741.02〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）11-2314-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.11.047基金项目：十堰市科学技术研究与开发计划项目（No.SYKJ20090030）；湖北医药学院2010年学生科研项目（No.2010XSB27）通讯作者：王配军（1969-），男，教授，硕士，主要从事神经系统疾病基础与临床研究。
运动对不同年龄大鼠海马神经发生的影响
运动对不同年龄大鼠海马神经发生的影响张葆欣;温晓妮【摘要】目的探讨运动对不同年龄大鼠海马神经发生的影响.方法应用免疫荧光单标记和激光共聚焦显微镜观察不同年龄大鼠在中等负荷运动后海马新生神经元的表达情况；应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量分析不同年龄大鼠在中等负荷运动后海马脑源性神经生长因子(BDNF)的表达情况.并探讨二者的相关性.结果运动组幼年大鼠与青年大鼠海马齿状回5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)的表达均比相应年龄段未运动组大鼠增加,且运动组幼年大鼠比青年大鼠海马齿状回BrdU表达增加,各组差异均有统计学意义(P＜0.01)；运动组大鼠海马BDNF基因表达上调,以幼年运动组上调明显,差异有统计学意义(P＜0.05),且海马BDNF基因表达与齿状回BrdU的表达规律基本一致.结论中等负荷的运动可增加海马新生神经元的表达,而年龄因素可影响运动对海马新生神经元的增殖效应；海马神经发生的快慢与年龄依赖的BDNF表达有关.【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(033)006【总页数】4页(P793-796)【关键词】运动;海马;神经发生;5-溴脱氧尿核苷;不同年龄;脑源性神经生长因子【作者】张葆欣;温晓妮【作者单位】西安体育学院运动医学教研室,陕西西安710068;西安体育学院运动医学教研室,陕西西安710068【正文语种】中文【中图分类】R875早在20世纪中期就有人报道，成年哺乳动物海马区能生成一定数量的新神经元。
近年来随着神经干细胞研究的逐步深入以及 5－溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-deoxyuridine，BrdU）这一增殖细胞标记物的广泛应用，研究者发现成年海马区不但确实存在可分化为神经元的增殖细胞，而且其数目远多于人们的想象。
该部位神经干细胞微环境的改变将能阻抑或增强海马齿状回的神经发生。
近年来的研究表明，规律的中等强度运动的脑保护效应，可能与运动刺激了海马的神经发生、血管的生成及一些神经营养因子的表达有关［1－3］。
神经营养素家族类细胞因子对神经干细胞分化影响的研究现状
神经营养 素家族类细胞 因子
时神经干细 分 影 响的研究现
张任飞 肖诗柔 中国 医科 大学七年制 临床 医学 系
摘 要
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１ 神经千细胞 （ｅｒｌｓ ｍ ｃ ｌ ， ｎｕａ ｔ ｅ ｓ ｅ ｔ
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自从 １ ９ ９ ２年 Ｒｅ ｎ ｌ ｓ和 Ｗ ｅｓ ｙ ｏｄ ｉｓ
退 行 性 疾 病 的 治 疗 提 供 了新 的 方 向 。
挥 生物学 效 应 。 ２． １神 经 生 长 因子 （ ＮＣＦ） ２． ． ｌ １Ｉ ＮＧＦ的特 性 和分 布
因 此 ，对 ＮＳ 增 殖 和 分 化 调控 的研 ＣＳ
阳性 细 胞 的 数 目增 加 ３倍 【 。 １ １
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大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测
大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测【摘要】目的: 建立成年大鼠海马脑区注射脑源性神经营养因子(BDNF)慢病毒表达载体的方法，并检测BDNF慢病毒载体体内表达目的基因的能力。
方法: 健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH)、生理盐水组(NS) 、 GFP慢病毒注射组(GFP)和BDNF慢病毒注射组(BDNF)，每组15只。
所有实验大鼠在脑立体定位仪下定位海马组织。
NS、 GFP和BDNF组分别给予盐水（2 μL）、 GFP慢病毒（2μL）和BDNF慢病毒（2 μL）， SH组只实行手术操作。
注射手术7 d、 14 d 和30 d 后，分别处死大鼠并进行在冰上取各组大鼠海马组织，分别提取海马总RNA和总蛋白质通过RT��PCR和Western blot检测各组大鼠海马组织BDNF mRNA 和蛋白表达水平的变化。
同时通过原位杂交方法检测BDNF的表达水平和脑区分布。
结果: BDNF慢病毒注射成年大鼠7 d、 14 d和30 d 后，均可以成功检测到BDNF在mRNA和蛋白水平在海马脑区都有明显的表达，同假手术组相比具有显著性差异; 原位杂交检测显示BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区7 d、 14 d和30 d 的BDNF表达水平和脑区分布均保持稳定。
结论: 成功地建立了BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区的方法，并可在注射后不同时间段检测到BDNF高水平的表达和均匀的海马脑区分布，为进一步将其应用于神经系统损伤性疾病的治疗奠定了基础。
【关键词】 BDNF; 慢病毒; 治疗性基因操作; 海马注射［Abstract］ AIM: To explore the method of injecting the BDNF gene lentiviral vector in rat hippocampus and detecting its expression. METHODS: SD rats were randomly pided into four groups: sham operated group(SH)， normal saline group (NS)， GFP gene lentiviral vector injection group(GFP) and BDNF lentiviral vector injectiongroup(BDNF).The expression of BDNF was detected by Western blot，RT��PCR and situ hybridization(ISH) at day 7， 14 and 30 after the injection. RESULTS: BDNF Gene lentiviral vector can up��regulated the expression of BDNF in rat hippocampus. The result of RT�� PCR and Western blot detection show that the level of mRNA and the protein level was remarkably increased. The result of in��situ hybridization showedthe stable expression and distribution of BDNF. CONCLUSION: Successfully established the method of injecting BDNF gene lentiviral vector in rat hippocampus and detected the high level of BDNF expression following with the time， which lays the basis for its application in the treatment of the neurodamaged disease.［Keywords］BDNF; lentiviral vector; gene therapy; rat hippocampus目前在许多神经系统疾病的治疗研究中，采用关键基因的过表达技术已成为新发展起来极有前景的治疗策略。
淫羊藿苷对阿尔茨海默病模型大鼠记忆能力及其海马内GFAP、TNF-α、IL-6表达的影响
关键 词 ： 阿 尔 茨海 默 病 ； 淫羊藿苷 ； 胶质纤维酸性蛋 白； 肿 瘤坏 死 因子 ｄ ； 白细 胞 介 素 ６ 中图分类号 ： Ｒ ７ ４ ３ Ｒ ２ ８ ５ ． ５ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ —１ ３ ４ ９ （ ２ ０ １ ３ ） Ｏ ２一 Ｏ １ ９ ２— ０ ３
Ｚ ｈ ｅ ｎ Ｊ ｉ ｎ， Ｌｉ Ｒｕ ｎ ｊ ｉ ｎ ， Ｗａ ｎ ｇ Ｍｅ ｉ ｌ ｉ ｎ ｇ／ ／Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｎｅ ｕ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ， Ｉ ｎ ｎ ｅ ｒ Ｍｏ ｎ ｇ ｏ ｌ ｉ ａ ｎ Ｐ ｅ ｏ ｐ ｌ ｅ ’ ｓ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ（ Ｈｕ ｈ ｈ ｏ ｔ ０ １ ０ ０ １ ７ ）
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１９ ２ ・
Ｃ ＨＩ ＮＥ Ｓ Ｅ Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ Ｉ ＮＴＥＧＲＡＴ Ｉ ＶＥ ＭＥ ＤＩ Ｃ Ｉ ＮＥ ＯＮ ＣＡＲＤＩ Ｏ一 ／ Ｃ Ｅ ＲＥ Ｂ ＲＯＶＡＳ ＣＵＩ ＡＲ Ｄ Ｉ Ｓ Ｅ ＡＳ Ｅ Ｆｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ ２ ０１ ３ Ｖｏ １ ．１ １ Ｎｏ ． ２
七氟醚通过诱导海马神经元细胞凋亡损害阿尔茨海默病转基因小鼠模型学习和记忆的功能
七氟醚通过诱导海马神经元细胞凋亡损害阿尔茨海默病转基因小鼠模型学习和记忆的功能本公众号每天分享一篇最新一期Anesthesia & Analgesia等SCI 杂志的摘要翻译，敬请关注并提出宝贵意见Sevoflurane impairs learning and memory function intransgenic mice model of Alzheimer’s disease byinduction of hippocampal neuron apoptosis背景与目的研究七氟醚对阿尔茨海默病转基因小鼠模型的学习和记忆功能的机制和作用。
方法总共使用 Tg2576小鼠45只，并随机分为对照组、假手术组和七氟醚组。
利用莫里斯水迷宫（MWM）和y-迷宫进行行为测试，测试吸入七氟醚前后的空间学习和记忆能力。
此外，为了确定海马体（CA）1、CA3和齿状回（DG）区域内的细胞凋亡，进行了TUNEL分析。
使用蛋白免疫印迹法对海马中的凋亡相关蛋白（caspase-3和抗凋亡基因bcl-xL）的表达进行了分析。
结果MWM的结果表明，吸入七氟醚后三组在游泳速度上并没有显著的差异。
然而，七氟醚组吸入七氟醚后，与假手术组和对照组（P<0.05）相比，在原象限的逃避潜伏期、时间和y-迷宫的正确反应次数减少。
此外，七氟醚组CA1和CA3区域的凋亡细胞数明显高于假手术组和对照组（P<0.05）。
蛋白免疫印迹法结果表明，Bcl-xL的蛋白质表达水平明显更高，但在七氟醚组中，caspase-3水平明显低于对照组和假手术组（P<0.05）。
结论我们的研究结果表明，七氟醚可能会通过诱导AD小鼠模型海马神经元细胞凋亡来损害学习和记忆功能。
原始文献摘要Jia Z, Geng L, Xie G, et al. Sevoflurane impairs acquisition learning and memory function in transgenic mice model ofAlzheimer’s disease by induction of hippocampal neuron apoptosis[J]. Int J Clin Exp Med, 2015, 8(9):15490-15497.Objectives: To investigate the mechanism and effect of sevoflurane on learning and memory function in transgenic mice model of Alzheimer s disease (AD).Methods: A total of 45 Tg2576 mice were used and randomly assigned to control, sham, and sevoflurane group. Spatial learning and memory ability were measured before and after sevoflurane exposure using morris water maze (MWM) and Y-maze behavioral tests. Moreover, TUNEL assay was carried out to determine the cell death in hippocampal cornuammonis (CA) 1, CA3, and dentate gyrus (DG) region. Apoptosis-related protein (caspase-3 and Bcl-xL) expression in the hippocampus was analyzed by Western blotting.Results: The MWM results showed that there were no significant differences in the swimming speed after sevoflurane exposure among the three groups. However, the escape latency, time spent in original quadrant, and the number of correct trials (Y-maze) were significantly lower after sevoflurane anesthesia exposure in the sevoflurane group than the sham group and control group (P < 0.05). Besides, the apoptotic cell numbers of the CA1 and CA3 region in the sevoflurane group were significantly higher than those in the sham group and control group (P < 0.05). Western blotting results showed that the protein expression levels of Bcl-xL were significantly higher, but the caspase-3 levels were significantly lower in the sevoflurane group than those in the control group and sham group (both P < 0.05).Conclusion: Our results indicate that sevoflurane might impair acquisition learning and memory function in AD byinduction of hippocampal neuron apoptosis.罂粟花麻醉学文献进展分享。
碱性成纤维细胞生长因子影响痴呆大鼠海马神经发生
碱性成纤维细胞生长因子影响痴呆大鼠海马神经发生周思朗; 陈俊抛; 曹东林; 涂小文; 袁岱军【期刊名称】《《中国现代医学杂志》》【年(卷),期】2004(014)009【摘要】目的探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对海马伞切断造成的阿尔茨海默氏病 (AD)模型大鼠海马齿状回神经发生的影响。
方法AD处理组及AD对照组大鼠左侧海马伞切断制造阿尔茨海默病模型 ;正常对照组注射生理盐水。
AD 处理组造模后每天侧脑室注射bFGF共 7d ;AD对照组及正常对照组同时间注射生理盐水。
BrdU标记增殖细胞。
TUNEL方法标记DNA片段 ,原位检测凋亡细胞。
计数海马齿状回BrdU阳性细胞与凋亡细胞数。
结果AD处理组大鼠与AD对照组大鼠相比 ,海马齿状回BrdU阳性细胞增加非常显著 (P 0 .0 5 ) ,AD对照组大鼠与正常对照组大鼠相比 ,海马齿状回BrdU阳性细胞数及凋亡细胞差异均不显著(P >0 .0 5 )。
结论bFGF可刺激AD模型大鼠海马神经发生。
【总页数】3页(P67-69)【作者】周思朗; 陈俊抛; 曹东林; 涂小文; 袁岱军【作者单位】第一军医大学珠江医院神经内科，广东广州510282【正文语种】中文【中图分类】R742.89【相关文献】1.碱性成纤维细胞生长因子对血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元的影响 [J], 叶建新;林航;穆军山;崔晓萍;林敏;武雷;翁婧;林晓姝2.皮下注射碱性成纤维细胞生长因子促进血管性痴呆大鼠海马神经干细胞的增殖[J], 刘森;戴振霞;吴春芳;胡敬;崔蓓;3.皮下注射碱性成纤维细胞生长因子促进血管性痴呆大鼠海马神经干细胞的增殖[J], 刘森;戴振霞;吴春芳;胡敬;崔蓓4.碱性成纤维细胞生长因子影响痴呆大鼠海马神经发生 [J], 周思朗; 陈俊抛; 曹东林; 涂小文; 袁岱军5.西酞普兰对血管性痴呆大鼠海马DG神经发生和认知障碍影响的初步研究 [J], 黄河清;唐军;周振华;李志方;刘国军;陈康宁;徐海伟;李露斯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
左旋丁基苯酞对血管性痴呆大鼠神经功能、线粒体氧化应激及海马组织胶质细胞源性神经营养因子表达的影响
-1444-中国老年学杂志2019年3月第39卷20舒榕，刘冬玲,王强.瑞芬太尼对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质bcl-2和Caspase-3表达的影响〔J〕.华中科技大学学报，2012；41(2)：72-5.21张野，陈志武.瑞芬太尼预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响〔J〕.中华麻醉学杂志,2005；25(5):449-52.22Ellon DM,Opie LH.Postconditioning for pn)tection of the infarcting heart[J].Lancet,2006；367(9509)：456-8.23王美芳，孟尽海,魏华.舒芬太尼预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠脑保护功能的影响〔J〕.宁夏医科大学学报,2011；33(11)：1023-32.24贾丽玲，曹定睿,张维智，等.瑞芬太尼预处理对脑缺血/再灌注大鼠脑组织MDA含量和SOD活性的影响〔J〕.中国医药指南，2010；8(5)：27-9.25程倚萌，娄季宇,王金兰，等.大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2.Bax蛋白的表达〔J〕.中国实用神经疾病杂志,2007；10(3):95-7.26Hu X,Wang J,Chen J,et al.Optimal temporal delivery of bone marrow mesenchymal stem cells in rats with myocardial infarction〔J〕.Eur J Cardiothorac Surg,2007；31(3)：438-43.27Van den Akker F,Deddens JC,Doevendans PA,et al.Cardiac stem cell therapy to modulate inflammation upon myocardial infarction 〔J〕.Biochim Biophys Acta,2013；1830(2)：2449-58.28Henning RJ.Stem cells in cardiac repair[J].Future Cardiol,2011；7(1):99-117.29万兴,王文宏，樊欣鑫.骨髓间充质干细胞移植对颅脑损伤大鼠神经功能的影响〔J〕•江苏医药,2014；40(9)=1006-10.30Fung C,Evans E,Shin D,et al.Hypoxic-ischemic brain injury exacerbates neuronal apoptosis and precipitates spontaneous seizures in glucose transporter isoform3heterozygous null mice〔J〕.J Neurosci Res,2010；88(15)：3386-98.31王伟.景桂霞,赵新京，等.瑞芬太尼预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响〔J〕•西安交通大学学报,2011；32(1): 128-30.32谭来勋，孙圣刚,段申汉，等.大鼠海马星形胶质细胞对突触可塑性的影响〔J〕.卒中与神经疾病,2005；12(6)：15&33王敏，张秋霞,邹海艳，等.竹节参总皂昔对慢性脑缺血大鼠海马GFAP、GAP43表达的影响〔J〕.世界中医药,2013；8(2)：183-5.34Van Breukelen F,Krumschnabel G,Podrabsky JE.Vertebrate cell death in energy limited conditions and how to avoid it:what we might learn from mammalian hibernators and other stress-tolerant vertebrates]J〕.Apoptosis,2010；15(3):386-99.35Metrailler-Ruchonnet I,Pagano A,Camesecchi S,et al.Bcl-2protects against hyperoxia-induced apoptosis through inhibition of the mitochondria-dependent pathway[J].Free Radic Biol Med,2007；42(7)：1062-74.36Inamura Y,Migamae M,Sugika S,et al.Sevofliurane postconditioning prevents activation of caspase-3and9through antiapoptotic signaling after myocardial ischemia-reperfusion〔J〕.J Anesch,2010；24(2): 215-24.37卢培刚，冯华，王宪荣，等.高压氧预处理对大鼠脊髓损伤后GFAP和巢蛋白表达的影响〔J〕.中华神经外科疾病研究杂志，2008；7(1)：149-53.38朱舟，王伟，谢敏杰，等.CDK抑制剂olomoucine对星形胶质细胞增殖活化的影响〔J〕•华中科技大学学报(医学版)，2005；34(1):159-63.39段艳萍，黄素群，冯林森，等.GAP43治疗大鼠完全性脊髓损伤后CFAP表达的变化及意义〔J〕.神经解剖学杂志,2011；27(6)：6704(2018-01-27修回〕(编辑曹梦园)左旋丁基苯駄对血管性痴呆大鼠神经功能、线粒体氧化应激及海马组织胶质细胞源性神经营养因子表达的影响郭鹏(济南市第三人民医院神经内科，山东济南250132)〔摘要〕目的通过建立血管性痴呆(VD)大鼠模型，观察左旋丁基苯酰(L-NBP)对VD大鼠神经功能、线粒体氧化应激水平及海马组织胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响。
血清S100B蛋白抗脑抗体海马体积变化与阿尔茨海默病患者认知功能变化的关系
【摘要】目的探讨血清S100B 蛋白、抗脑抗体（ABAb ）、海马体积大小变化与阿尔茨海默病（AD ）患者认知功能变化的关系。
方法选取濮阳市油田总医院确诊的88例阿尔茨海默病患者（AD 组），选取正常体检者90例为对照组，检测并对比2组血清S100B 蛋白、ABAb 、海马体积，采用线性相关、多元线性回归分析各项研究指标与简易精神状态量表（MMSE ）的相关性。
结果AD 组血清S100B 蛋白、ABAb 测定值均高于对照组（P <0.05）；AD 组海马体积、MMSE 评分均低于对照组（P <0.05）；AD 组血清S100B 蛋白、ABAb 测定值与MMSE 评分呈负相关性（P <0.05）；AD 组海马体积与MMSE 评分呈正相关性（P <0.05）；多元线性回归模型显示，血清S100B 蛋白、ABAb 增高与AD 患者MMSE 评分呈负相关（P <0.05），海马体积、受教育年限与MMSE 评分呈正相关（P <0.05）。
结论AD 患者的血清S100B 蛋白、ABAb 增高，海马体积较健康人群降低，且与患者认知功能受损程度有关。
【关键词】阿尔茨海默病；S100B 蛋白；抗脑抗体；海马体积；认知功能障碍【中图分类号】R743【文献标志码】A【文章编号】1673-5110（2021）07-0597-05贾天松王继涛周占军濮阳市油田总医院，河南濮阳457001Relationship between changes in serum S100B ，ABAb ，hippocampus volume and cognitive function changes in AD patientsJIA Tiansong ，WANG Jitao ，ZHOU ZhanjunPuyang Oilfield General Hospital ，Puyang 457001，China【Abstract 】ObjectiveTo explore the relationship between changes in serum S100B protein ，anti-brain antibody （ABAb ），hippocampus volume and cognitive function in patients with Alzheimer s disease.MethodsA total of 88patients with Alzheimer sdisease （AD group ）diagnosed in Puyang Oilfield General Hospital were selected ，and 90healthy people with age and gender matched as normal controls were selected as the control group.Serum S100B protein ，ABAb ，hippocampus were detected and compared between the two groups ，and use linear correlation and multiple linear regression to analyze the correlation between various research indicators and the mini mental state scale （MMSE ）.ResultsThe measured values of serum S100B protein and ABAb inAD group were higher than those in control group （P <0.05）；the hippocampal volume and MMSE score of AD group were lower than those in control group （P <0.05）；the measured values of serum S100B protein and ABAb in AD group was negatively correlated with MMSE score （P <0.05）；the hippocampus volume of AD group was positively correlated with MMSE score （P <0.05）；the results ofmultiple linear regression model showed that the increase of serum S100B protein and ABAb was negatively correlated with MMSE score of AD （P <0.05），hippocampus volume and years of education were positively correlated with MMSE score （P <0.05）.ConclusionThe serum S100B protein and ABAb of AD patients are increased ，the hippocampus volume is lower than that ofhealthy people ，and it is related to the degree of impairment of patients ’cognitive function.【Key words 】Alzheimer ’s disease ；S100B protein ；Anti-brain antibody ；Hippocampal volume ；Cognitive dysfunctionDOI ：10.12083/SYSJ.2021.04.002·论著临床诊治·血清S100B 蛋白抗脑抗体海马体积变化与阿尔茨海默病患者认知功能变化的关系基金项目：河南省医学科技攻关计划（编号：SB201901061）作者简介：贾天松，Email ：阿尔茨海默病（Alzheimer ’s disease ，AD ）是由多种因素共同诱发的神经系统退行性疾病，认知功能障碍是本病的主要表现之一，严重影响患者和其家庭的正常生活。
归根汤抑制中枢神经细胞损伤模型大鼠海马组织损伤及其对相关基因表达水平的影响
归根汤抑制中枢神经细胞损伤模型大鼠海马组织损伤及其对相关基因表达水平的影响文 洁,朱根福摘要 目的:探讨归根汤对抑制中枢神经细胞模型大鼠海马组织损伤及对相关基因表达水平的影响㊂方法:30只SD 大鼠建立轻微脑中枢神经损伤模型,并随机分为空白对照组㊁损伤模型组和归根汤组,每组10只,持续给药2周;空白对照组和损伤模型组大鼠同时给予等量普通饲料㊂造模结束后空白对照组和损伤模型组大鼠给予同等剂量生理盐水,归根汤组给予中药汤剂归根汤,按每千克体质量大鼠的给药量为人的6.3倍计算,每天灌胃1次,共给药2周㊂给药结束后处死大鼠,手术取出大鼠大脑海马组织,采用流式细胞术双染色法检测海马组织细胞凋亡情况,再用逆转录聚合酶链式反应(qRT -PCR )检测相关细胞通路因子的基因表达水平㊂结果:体内实验中,相比于空白对照组大鼠海马组织神经细胞数目(0.418ʃ0.019)%,损伤模型组大鼠海马组织神经细胞数目坏死增加为(0.809ʃ0.009)%,早期㊁晚期细胞凋亡也增多[(0.114ʃ0.009)%与(3.346ʃ0.112)%]㊂归根汤组与损伤模型组比较,细胞坏死数量降低为(0.611ʃ0.014)%,差异有统计学意义(P <0.05);与损伤模型组比较,归根汤组哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR )信号蛋白降低,自噬标志物(LC3)和自噬相关蛋白(Beclin )蛋白表达升高,差异有统计学意义(P <0.05),提示归根汤可能通过下调mTOR 信号通路促进神经细胞自噬而抑制神经细胞损伤㊂结论:归根汤可减轻中枢神经细胞破坏,缓解轻微中枢神经细胞损伤㊂关键词 归根汤;细胞凋亡;中枢神经细胞损伤;实验研究d o i :10.12102/j.i s s n .1672-1349.2023.22.015 轻微中枢神经细胞损伤大多由于外伤,如车祸㊁体育运动等造成,表现为轻度脑㊁脊髓挫伤并伴随不同程度的细胞变性和凋亡,影响病人的认知功能和运动协调能力[1-3]㊂神经细胞是中枢神经系统的基本结构和功能单位之一,作为高度极化的终末分化细胞,神经细胞再生能力较差,一旦受到损伤,很难得到修复和补充,因此,临床上治疗中枢神经细胞损伤的手段非常有限[4]㊂归根汤名源于‘道德经“ 归根曰静 之意,药方来源于‘三因极一病证方论“中的人参养荣汤,是治疗失眠抑郁㊁温阳补肾的中药方剂㊂本研究观察归根汤对轻微脑中枢神经损伤大鼠的干预,检测大鼠海马组织细胞凋亡情况,研究其对抑制中枢神经细胞模型大鼠海马组织损伤及相关蛋白和基因表达水平的影响,以期为归根汤在治疗轻微中枢神经细胞损伤方面提供参考㊂1 材料与方法1.1 实验药物㊁试剂及仪器归根汤药方组方:黄芪㊁肉桂㊁白芍㊁当归㊁党参㊁白术㊁干姜㊁远志㊁川芎㊁炙甘草㊁生龙齿;微晶纤维素(广州天盛化工有限公司,货号2020-1);枸橼酸三乙酯(阿拉丁生化科技股份有限公司,批号T106153);玉米基金项目 广东省中医药局科研课题(No.20194008)作者单位 广州中医药大学第三附属医院(广州510000)通讯作者 朱根福,E -mail :****************引用信息 文洁,朱根福.归根汤抑制中枢神经细胞损伤模型大鼠海马组织损伤及其对相关基因表达水平的影响[J ].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21(22):4149-4152.淀粉(山东蕴涵精细化工有限公司,批号05612);纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司);EUDRAGIT L30D -55(上海昌为医药辅料技术有限公司);海藻酸钠(阿拉丁生化科技股份有限公司,批号S100128);硬脂酸镁(阿拉丁生化科技股份有限公司,批号M110510)㊂流式细胞术双染色凋亡检测试剂盒(Annexin V -FITC Apoptosis Detection Kit ,CA1020-20T ,Solarbio )㊂流式分析仪器(BD Calibur ,美国BD 公司);甲醇(色谱纯,北京化学试剂公司)㊂1.2 动物造模与分组㊁给药健康无特定病原体(SPF )级Sprague Dawley (SD )大鼠30只,6周龄,体质量120~150g ,购自北京维通利华实验动物有限公司,合格证号:SCXK (京)2012-0001;实验设计和对动物的处置方法符合3R 原则[5],并经过广州中医药大学实验动物管理委员会批准㊂大鼠随机分为空白对照组㊁损伤模型组和归根汤组,每组10只㊂轻微脑损伤模型参考文献[6]方法制备㊂空白对照组大鼠则不做任何处理㊂造模结束后空白对照组和损伤模型组大鼠给予同等剂量生理盐水,归根汤组给予中药汤剂归根汤,按每千克体质量大鼠的给药量为人的6.3倍计算,每天灌胃1次,共给药2周㊂1.3 标本与检测指标标本取样及样品处理:给药结束后,麻醉并安乐死所有大鼠,手术取出大鼠大脑组织㊂每组随机选取5只大鼠的脑组织进行裂解,获得单细胞悬液㊂麻醉药物采用1.2%的Avertin 溶液,腹腔注射0.2mL/10g 体质量㊂大鼠安乐死采用二氧化碳窒息法㊂流式分析:所得单细胞悬液通过Annexin V/PI 双染色法进行流式分析,获得造模前后㊁给药前后组织凋亡细胞的情况㊂逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析每组剩余5只大鼠,分离海马组织并于-80ħ冷冻保存用于通过qRT-PCR分析细胞自噬相关基因表达水平的变化㊂1.4统计学处理采用Graphpad6.0软件分析,定量资料符合正态分布以均数ʃ标准差(xʃs)表示,组间比较采取独立样本t检验,釆用完全随机分组设计的多样本均数比较,以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1双染色法检测大鼠海马组织细胞凋亡情况细胞坏死与空白对照组比较,损伤模型组大鼠的大脑海马组织细胞凋亡数量增加,由(0.418ʃ0.019)%增加到(0.809ʃ0.009)%,提示模型建立后大鼠的海马组织受到了一定的损伤,初步判断建模成功㊂归根汤组给药后,与损伤模型组比较,细胞坏死数量降低到(0.611ʃ0.014)%,差异有统计学意义(P<0.05)㊂无论是早㊁晚期的细胞凋亡,还是活细胞总数,经过归根汤治疗后的动物模型都有恢复到正常水平的趋势㊂详见图1㊁表1㊂图1流式Annexin V/PI双染色法检测大鼠海马组织细胞凋亡情况(A为流式图;B为柱状图㊂损伤模型组与空白对照组比较,*P<0.05;与归根汤组比较,#P<0.05)表1双染色法检测大鼠海马组织细胞凋亡情况(xʃs)单位:%组别只数坏死细胞晚期凋亡细胞早期凋亡细胞活细胞空白对照组50.418ʃ0.0190.017ʃ0.004 1.439ʃ0.04598.121ʃ0.054损伤模型组50.809ʃ0.009①0.114ʃ0.009① 3.346ʃ0.112①95.598ʃ0.421①归根汤组50.611ʃ0.014①②0.040ʃ0.005①② 1.351ʃ0.007①②97.626ʃ0.323①②F值702.482269.3171044.15075.419P<0.001<0.001<0.001<0.001注:与空白对照组比较,①P<0.05;与损伤模型组比较,②P<0.05㊂2.2大鼠海马组织自噬蛋白表达变化与损伤模型组比较,归根汤组大鼠的海马组织相关蛋白表达水平变化,其中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号蛋白降低,差异有统计学意义(P<0.05);而自噬标志物(LC3)和自噬相关蛋白(Beclin)蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)㊂归根汤给药后细胞自噬能力得到提高,这对组织细胞修复具有重要意义㊂详见表2㊂表2各组大鼠海马组织相关蛋白表达阳性指数比较(xʃs)组别只数mTOR LC3Beclin空白对照组50.107ʃ0.0050.030ʃ0.0090.064ʃ0.004损伤模型组50.094ʃ0.003①0.014ʃ0.004①0.051ʃ0.002①归根汤组50.039ʃ0.031①②0.055ʃ0.004①②0.115ʃ0.011①②F值302.23953.751131.114P<0.001<0.001<0.001注:与空白对照组比较,①P<0.05;与损伤模型组比较,②P<0.05㊂2.3qRT-PCR检测大鼠海马组织自噬相关基因的mRNA表达水平为了进一步评估大鼠海马组织自噬水平变化,通过qRT-PCR检测自噬相关基因的mRNA表达水平的变化,与损伤模型组比较,归根汤组的LC3和Beclin 基因相对表达水平升高,差异有统计学意义(P< 0.05),mTOR基因相对表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)㊂详见图2㊂图2qRT-PCR检测大鼠海马组织自噬相关基因的mRNA表达水平比较(A为各组mTOR相对表达水平;B为各组LC3相对表达水平;C为各组Beclin相对表达水平㊂与空白对照组比较,*P<0.05;与损伤模型组比较,#P<0.05)3讨论中枢神经系统损伤后,神经细胞之间的联系被破坏,导致细胞变性和死亡,损伤的轴突周围的外源性生长抑制因子阻止细胞再生[6-7]㊂轴突损伤是一种急性神经元应激,可触发轴突和细胞体的剧烈反应,包括钙内流㊁轴突膜封闭㊁损伤信号转导和转录改变[8]㊂中枢神经的再生能力较低,受到损伤时,神经功能较难恢复㊂现西医治疗多应用外源性神经营养因子,虽然可促进轴突的再生和神经功能的恢复,但存在半衰期短㊁不能透过血脑屏障等问题[9]㊂中医学认为,肾主志,生髓通于脑㊂轻微神经损伤,肾精不足,则不能生发气血润养肌肉而认知功能降低㊂归根汤药方组成为黄芪㊁肉桂㊁白芍㊁当归㊁党参㊁白术㊁干姜㊁远志㊁川芎㊁炙甘草㊁生龙齿㊂方中黄芪大补元气,肉桂引诸药入心,远志能通肾气上达于心,全方补肾益精生髓,促进神经系统损伤修复㊂为了研究归根汤对治疗中枢神经细胞损伤的潜在价值,评估其抑制神经细胞损伤㊁凋亡的情况,本研究对轻微脑中枢神经损伤模型的大鼠使用归根汤干预,发现归根汤可以有效抑制大鼠海马组织细胞凋亡㊂轻微大脑神经损伤常伴随着海马组织细胞的坏死和凋亡,有研究报道机体的细胞自噬可以通过胞内成分的降解㊁病原体的清除阻止细胞进一步损伤[10],无论是阿尔茨海默病动物模型还是阿尔茨海默病病人,其脑组织自噬功能均存在障碍[11]㊂自噬是机体自身严格调控的过程,是细胞应激反应的核心组成部分[12]㊂它通过自噬体-溶酶体途径降解功能失调的蛋白质㊁脂质和细胞器,在维持细胞内稳态中发挥保守作用[13]㊂近期报道显示,自噬在损伤后轴突再生中发挥重要作用,LC3在急性脊髓损伤后表达上调[14],LC3是自噬小体形成的关键,也是自噬的标志㊂使用自噬诱导肽激活自噬可以通过限制神经生长相关蛋白SCG10促进轴突再生[15]㊂mTOR信号通路可调节细胞增殖㊁生存㊁蛋白质合成㊁自噬和细胞代谢㊂此外,有报道称mTOR可影响整个中枢神经系统损伤神经的再生,mTOR作为自噬的负调控因子之一,在激活自噬中具有门控作用[16]㊂另外,mTOR信号通路在归根汤组的小鼠模型中明显下调,这可能是因为归根汤是通过mTOR信号通路起作用的,即通过下调mTOR促进神经细胞自噬的上调,从而起到较好的组织细胞损伤的作用效果㊂Bcl-2同源结构域蛋白抗体(Beclin1)是自噬信号通路中重要的因子,参与缺氧缺血诱导的自噬发生,干扰Beclin1表达能够降低缺氧缺血诱导的自噬[17]㊂因此,通过检测分析自噬相关蛋白的水平,可以有效地评估神经损伤的程度㊂研究报道,以温阳补肾方剂可增加大鼠血浆和脑组织中的促红细胞生成素(EPO)表达,从而降低大鼠大脑组织细胞的凋亡[18]㊂归根汤坚阳道而补肾气可益精健脑,对于治疗中枢神经损伤有一定的潜力㊂在本研究中,归根汤组大鼠的大脑海马组织细胞损伤数目明显减少,活细胞与空白对照组比较差异无统计学意义,与损伤模型组大鼠比较,归根汤组mTOR信号蛋白降低,LC3和Beclin蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05),提示归根汤对海马组织损伤有较好的抑制作用㊂药物制剂能否抑制细胞凋亡是验证其能否抑制神经细胞损伤的重要影响因素之一[7,19]㊂细胞凋亡是细胞的基本特征之一,在机体的胚胎发育㊁组织修复㊁内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用㊂FITC-Annexin V与PI匹配使用,可以有效分析给药前后细胞的坏死㊁早期和晚期细胞凋亡㊂本实验对比了正常大鼠㊁损伤模型大鼠及归根汤治疗后的损伤模型大鼠的海马组织,结果发现,归根汤治疗后的海马组织细胞坏死㊁细胞早晚期凋亡与空白对照组差异有统计学意义,而损伤大鼠模型组海马组织细胞凋亡明显,细胞坏死增加,一定程度说明归根汤对抑制神经细胞损伤具有重要的潜力㊂归根汤可降低神经损伤模型大鼠的海马组织细胞损伤程度,其作用机制有可能是通过下调mTOR信号通路,促进损伤细胞的自噬而抑制神经细胞损伤实现的㊂参考文献:[1]刘志敏,杨柳竹.中枢神经损伤后小胶质细胞的形态及功能[J].河北医学,2008,14(12):1481-1483.[2]刘相名,惠国桢.中枢神经系统疾病的细胞替代治疗[J].中华神经外科疾病研究杂志,2002,1(2):187-189.[3]吴俊芳,刘少林,潘鑫鑫,等.小檗碱对氧化应激损伤中枢神经细胞的保护作用[J].中国药学杂志,1999,34(8):525-529.[4]ASHRAF U,DING Z,DENG S Z,et al.Pathogenicity and virulenceof Japanese encephalitis virus:neuroinflammation and neuronalcell damage[J].Virulence,2021,12(1):968-980.[5]瞿叶清,哈惠馨,郭玉琴,等.3R原则在医学动物实验工作中的应用[J].实验动物科学,2010(6):84-85.[6]邹阳,王昌兴.右归饮对轻微中枢神经损伤模型大鼠海马组织细胞自噬表达的影响[J].浙江中西医结合杂志,2019,29(7):534-537.[7]MOVAHEDPOUR A,VAKILI O,KHALIFEH M,et al.Mammaliantarget of rapamycin(mTOR)signaling pathway and traumaticbrain injury:a novel insight into targeted therapy[J].Cell BiochemFunct,2022,40(3):232-247.[8]HE Z G,JIN Y S.Intrinsic control of axon 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移植入阿尔茨海默病大鼠海马内神经干细胞的存活、迁移和分化
移植入阿尔茨海默病大鼠海马内神经干细胞的存活、迁移和分化作者：杨春白琳琳王书春乔鹏章茜【摘要】目的观察新生大鼠海马齿状回的神经干细胞(NSCs)移植到阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马内的存活、迁移和分化。
方法将Hoechst33258标记的NSCs植入AD模型大鼠海马，移植2、4和6 w 后，行Y迷宫检测大鼠的学习记忆能力，结合Hoechst33258标记和荧光免疫组化技术，分析NSCs在AD大鼠海马中的存活、迁移和分化。
结果移植的NSCs在宿主脑内能够存活至少6 w，沿海马回向两侧迁移，NSCs移植2 w后，免疫荧光检测无明显神经丝蛋白200(NF 200)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、谷氨酸(Glu)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性反应，而移植后4、6 w，则可见免疫阳性反应细胞。
Y迷宫测试结果显示移植NSCs 2、4、6 w后大鼠学习、记忆能力明显得到恢复，与AD模型组比较有统计学意义（P<0.05)，与正常对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05)。
结论自新生大鼠海马齿状回分离培养的NSCs在AD模型大鼠海马内能够存活、迁移并分化为胆碱能、谷氨酸能神经元及神经胶质细胞。
【关键词】阿尔茨海默病；神经干细胞；移植；分化阿尔茨海默病(AD)是中枢神经退行性疾病之一，现已成为严重威胁老年人健康的四大疾病之一。
有研究表明前脑胆碱能投射系统胆碱能神经元变性、细胞数量减少,导致AD认知功能不可逆的减退〔1〕。
目前药物治疗效果不理想,因此寻找有效的治疗方法已迫在眉睫，而神经干细胞(NSCs)的自我更新和多分化潜能等特性使得NSCs 移植成为一个较理想的治疗策略。
我们之前的研究已观察到NSCs移植到AD大鼠海马内能够存活、增殖〔2〕，但能否分化为神经元尚不清楚。
因此本研究将进一步观察移植的NSCs在AD模型大鼠脑内的分化，即是否能分化为神经元，特别是胆碱能和谷氨酸（Glu)能神经元，为临床治疗AD提供新思路和可借鉴的动物实验依据。
血管性痴呆小鼠海马NOS活力和nNOS蛋白表达的改变
血管性痴呆小鼠海马NOS活力和nNOS蛋白表达的改变【关键词】血管Changes of NOS activity and nNOS expression in hippocampus of vascular dementia mice【Abstract】 AIM: To observe the activity changes of nitric oxide synthase (NOS) and the expression level of neuronal nitric oxide synthase (nNOS) in the hippocampus of vascular dementia (VD) mice and to investigate the mechanism underlying VD. METHODS: Models of VD mice were made. NADPHd histochemistry and nNOS immunohistochemistry were used to investigate the changes of NOS in different groups and Ymaze test was conducted to observe the changes of their learning and memory abilities. RESULTS: Compared with those of the control group， the learning and memory abilities of the VD group significantly decreased (P<0.01) and the number of NOS positive neurons and nNOS positive neurons in the hippocampus significantly increased (P<0.05). CONCLUSION: VD is probably related to the increase of the numbers of NOS positive neurons and nNOS positive neurons in the hippocampus.【Keywords】 dementia， vascular ; hippocampus; neuronal nitric oxide synthase; nitric oxide synthase【摘要】目的：观察血管性痴呆(VD)小鼠海马内一氧化氮合酶（NOS）的活性和神经元型一氧化氮合酶（nNOS）阳性神经元的表达，探讨VD的发生机制. 方法：复制小鼠VD模型，利用Y迷宫检测VD模型小鼠学习记忆能力，采用NADPHd组织化学和nNOS免疫组织化学方法，研究VD小鼠与正常小鼠海马NOS和nNOS阳性神经元数量的变化. 结果： VD小鼠比正常小鼠Y迷宫学习记忆训练次数明显增多，差异有显著性（P<0.01）；海马CA1区NOS和 nNOS阳性神经元的数量明显增多，差异有统计学意义（P<0.05）. 结论： VD的发生可能与海马NOS和nNOS阳性神经元的数量增多有关.【关键词】痴呆，血管性；海马；神经元型一氧化氮合酶；一氧化氮合酶0引言自20世纪80年代发现内源性一氧化氮（nitric oxide， NO）以来，其复杂的生理及病理作用已引起人们的广泛重视. NO是由一氧化氮合酶(nitric oxidesynthase， NOS)催化L精氨酸而生成，NOS在脑缺氧缺血中的双重作用已日益受到重视. 我们采用组织化学和免疫组织化学的方法，探讨(vascular dementia，VD)小鼠海马结构内NOS和nNOS阳性神经元数目的变化以期揭示VD的发生机制.1材料和方法1.1材料成年健康昆明系雄性小鼠共36只（购自天津市实验动物中心），体质量(30±3) g，随机等分为3组：正常对照组、假手术组、VD模型组（n=12）.1.2方法1.2.1小鼠VD模型的制备室温18～22℃，将小鼠称质量后用4 g/L戊巴比妥钠（10 mL/kg， ip）麻醉后，仰卧固定在手术台上，颈正中切口，手术分离双侧颈总动脉（common carotid arteries， CCA）穿线备用，模型组在夹闭双侧CCA之前，腹腔注射硝普钠（2.5 mg/kg），随即用无创动脉夹夹闭双侧CCA 10 min，通10 min，再夹闭10 min，再通后缝合伤口，放回笼中保温饲养［1］. 假手术组麻醉及手术方法与模型组相同，但仅暴露双侧CCA，不阻断CCA，不注射硝普钠，观察时间与模型组相同.1.2.2学习记忆能力的测定造模后7 d，根据小鼠既怕光刺激又怕电刺激的本性，开始Y迷宫行为学测试. Y迷宫分为三臂，臂与臂之间角度为120°. 在每支臂内，有光刺激时无电刺激，无光刺激时有电刺激，迷宫实验时，三臂中两臂有电刺激而无光刺激，一臂有光刺激而无电刺激. 将动物放入迷宫的一臂（有光、无电）适应60 s后切换光源（无光源的两臂及三臂连接处有电），待动物进入有光无电处后开始记时，30 s时切换光源. 如此进行切换20次，每次切换光源都使动物学习1次，每日每只动物最多如此学习20次，第20次切换后待动物进入有光无电处后适应30 s将动物取出. 每只动物连续9次从无光有电处直接进入有光无电处为学会，第1日学不会者第2日继续学习，直至学会. 将学会次数进行统计学分析.1.2.3组织的制备各组小鼠经4 g/L戊巴比妥纳（10 mL/kg， ip）麻醉后，剪开胸腔，暴露心脏，从心尖插入灌注针至左心室，并剪开右心耳形成灌注液排出通道，从左心室快速灌注温生理盐水，至流出液清亮，此时接着灌入4℃的40 g/L多聚甲醛，30~40 min灌毕，迅速取脑置于4℃的40 g/L多聚甲醛固定液中后固定6 h，100， 200和300 g/L蔗糖溶液梯度脱水. 将大脑沿矢状面切开，将左侧大脑半球置于恒冷箱冰冻切片机内做连续冠状冰冻切片，片厚约50 μm， 0.01 mol/L PBS（pH 7.4）接片后进行NADPHd组化染色和nNOS免疫组化染色.1.2.4NADPHd组化染色切片移入NADPHd反应液，37℃孵育1 h，反应液成分：NADPHⅡ（Sigma公司）5 mg， NTB(氯化硝基四氮唑蓝，华美公司)2.5 mg， 3 mL/L的TritonTBS 5 mL. 终止反应后裱片，脱水，透明，封片.1.2.5免疫组化反应切片移入37℃ 3 mL/L的TritonH2O2中孵育30 min， PBS缓冲液漂洗后以30 mL/L的正常羊血清封闭30 min，然后加nNOS抗体（1∶200， Santa Cruz公司），4℃温盒内孵育72 h. 漂洗后加生物素标记的兔抗羊血清（1∶200），37℃孵育1 h，漂洗后ABC液（1∶100， Vector公司）37℃孵育1 h，漂洗后加0.5 mL/L的DAB和0.1 mL/L的H2O2显色，镜下控制反应时间5~10 min，常规裱片，脱水，透明，封片.1.2.6计数方法选取每只小鼠对应断面的背侧海马脑片2张置于PBS缓冲液中，每组共选取脑片24张，分别计数海马结构CA1， CA3，齿状回（DG）三区所有NOS和nNOS阳性细胞数.统计学处理：利用SPSS11.0统计软件对数据进行统计学分析，结果以x±s表示，经方差齐性检验，表1方差不齐，采用多个样本的秩和检验，表2和表3方差齐，组间差异比较采用单因素方差分析和两两比较的q检验.2结果2.1VD小鼠行为学测试与正常对照组和假手术组相比，VD模型组小鼠Y迷宫学习记忆次数明显增加，差异显著［(134±41) vs (43±14)和（47±10），P<0.01］；而正常对照组与假手术组相比，差异无统计学意义； VD模型组小鼠学习记忆能力明显降低.2.2VD模型组小鼠海马各区NADPHd阳性神经元数量的变化与正常对照组和假手术组相比，VD模型组小鼠海马及其CA1区NADPHd阳性神经元数量明显增多，差异有统计学意义（P<0.01），CA3区和DG无明显差别；而正常对照组与假手术组相比，海马各区神经元数量均无统计学差异，说明VD模型组小鼠海马及其CA1区NOS阳性神经元数量明显增多（表1，图1).表1VD小鼠海马及其各分区的NOS阳性神经元数量（略）2.3VD模型组小鼠海马各区nNOS阳性神经元数量的变化与正常对照组和假手术组相比，VD模型组小鼠海马及其CA1区nNOS阳性神经元数量明显增多，差异有统计学意义（P<0.01），CA3区和DG无明显差别；而正常对照组与假手术组相比，海马各区神经元数量均无统计学差别； VD模型组小鼠海马及其CA1区nNOS 阳性神经元数量明显增多（表2，图2).表2VD小鼠海马及其各分区nNOS阳性神经元数量（略）3讨论目前常用于VD研究的动物模型主要有四血管阻断（4VO）法和两血管阻断（2VO）法. 有报道表明，较严重的不完全性脑缺血动物大脑损伤较相同时间完全脑缺血的动物恢复差. 因此本研究采用王蕊等［1］的VD模型方法制作动物模型.NO性质活泼，半衰期极短，在体内生物半衰期仅数秒钟，故NO的作用与NOS水平密切相关，对NOS蛋白表达变化的研究是对NO进行深入探讨的重要环节. NOS有3种类型，分别为nNOS， eNOS 和iNOS，其中nNOS产生的NO可致脑缺氧缺血的早期脑损伤. NO作为细胞内信使参与长时程增强（LTP）的诱导和形成，NOS与NO可影响学习记忆等过程，nNOS 被认为是影响学习记忆的关键酶.海马是脑组织对缺氧缺血最敏感的部位之一，脑缺氧缺血时，由于能量代谢衰竭，可致离子泵功能障碍，兴奋性氨基酸释放，大量Ca2＋内流，激活Ca2＋依赖性NOS，导致NO的过量合成，NO在缺氧缺血性脑损害中的作用已日益受到重视. 任何来源的NO在高浓度时均可抑制多种线粒体电荷传递系统的酶，从而抑制细胞呼吸和能量代谢；NO还可以通过与氧自由基反应形成活性更高的毒性基团，通过脂质过氧化作用、酶灭活及DNA硝化作用导致神经元的死亡. 有实验表明NO作为一种血管、神经活性物质，具有调节脑血流、促进或抑制神经递质释放、参与突出可塑性、神经元兴奋毒性及炎症损害等多种作用，且与学习和记忆有关. 据报道给大鼠腹腔注射NOS抑制剂，可损害大鼠学习记忆能力，而注射NO的合成原料可减轻这种损伤，脑组织NOS的持续性激活及一氧化氮含量的升高不仅参与缺血性脑损害，而且在痴呆形成中可能发挥重要作用［2］. 本结果显示VD小鼠海马CA1区NOS及nNOS阳性神经元数量明显升高，并且与行为学上变化相一致，而CA3区和DG无明显变化，这可能与海马CA1区是缺氧易损区、海马CA3区和DG是缺氧抵抗区有关［3］，说明海马中的NOS阳性神经元可能参与了VD的形成，为将来探讨VD的防治提供了进一步研究的基础.【参考文献】［1］王蕊，杨秦飞，唐一鹏，等. 大鼠拟“血管性痴呆”模型的改进［J］. 中国病理生理杂志，2000，16（10）:914-916.［2］Meyer RC， Spangler EL， Patel N， et al. Impaired learning in rats in a 14unit Tmaze by 7nitroindazole， a neuronal nitric oxide synthase inhibitor， is attenuated by the nitric oxide donor，molsidomine ［J］. Eur J Pharmacol， 1998， 341(1):17-22.［3］宋立新，张金波，王亚军，等. 急性重复缺氧小鼠海马CA1区的超微结构观察［J］. 武警医学，2000， 11(6): 326-329.。
胎鼠、新生大鼠原代海马神经元培养及鉴定
胎鼠、新生大鼠原代海马神经元培养及鉴定熊丽娇;郭阗廷;曾治平;黄志华;曾靖【摘要】目的:建立胎鼠、新生鼠海马神经元体外培养方法.方法:分别取胎鼠、新生鼠海马,消化后种植,用含有2%B27的neurobasal培养液培养,第3天加入5 μmol·L-1的阿糖胞苷,换液后继续培养,以获得纯度较高的海马神经元.培养第3、7天观察细胞生长及突起情况,用neurofilament抗体以免疫荧光方法鉴定神经元细胞.结果:海马神经元种植24 h后贴壁,7天时神经元突起相互连接成网络.经neurofilament染色,培养细胞阳性率高,新生鼠原代培养海马神经元阳性率达(89±3.4)%,胎鼠海马神经元阳性率达(98±1.5)%.结论: 本方法培养出的胎鼠、新生大鼠海马神经元纯度较高,可作为海马神经元模型用于进一步研究.【期刊名称】《赣南医学院学报》【年(卷),期】2017(037)003【总页数】3页(P354-356)【关键词】海马神经元;细胞培养;胎鼠;新生鼠【作者】熊丽娇;郭阗廷;曾治平;黄志华;曾靖【作者单位】赣南医学院第一附属医院全科医学VIP科;赣南卫生健康职业教育学院外科教研室,江西赣州 341000;赣南医学院第一附属医院全科医学VIP科;赣南医学院;赣南医学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5海马是大脑边缘系统重要部分，神经元分布高度集中，在认知、记忆、情绪、植物神经系统方面起着不可替代的作用[1-3]。
海马神经元体外培养模型已经成为研究神经元发育分化、神经疾病的发生机制的重要技术手段[4-6]。
海马神经元体外培养文献报道方法多样，动物来源主要有胎鼠和新生鼠，根据实验条件，我们摸索出了原代胎鼠、新生大鼠的海马神经元培养方法，并进行了细胞鉴定，获得了高纯度的胎鼠、新生大鼠海马神经元。
1.1 材料1.1.1 实验动物孕17天SD大鼠及出生24 h内的SD大鼠。
1.1.2 主要试剂 DMEM培养基、neurobasal培养基、胎牛血清(FBS)和B27培养基添加剂(Gibco公司)、青链霉素、胰酶、多聚L赖氨酸(sigma公司)。
胎鼠海马神经元原代培养及转染条件的优化
２ 结果
２．１ 胎鼠海马神经元原代培养 经胰蛋白酶消化后接种的神经元细胞分布均匀
（图１Ａ），折光性好，于第４ｈ左右贴壁， 圆而透 明， 折光性好，分布较均匀。培养１８￣２４ｈ后，多数 神经元贴壁牢固，少数胞体较大的神经元有突起生 成； 培养第７２ｈ（图１Ｂ），神经元胞体增大，饱满突 起较长相互交汇成网状神经网格基本形成（图１Ｃ ）；培养第６ｄ ，神经细胞胞体不再继续增大，突起长 度稳定，光晕明显 ，形成完整神经网络（图１Ｄ）。 ２．２ 荧光染色结果
Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔ
Ｃｏｎｔｒｏｌ
９１．６８±３．２９
用乙醚麻醉孕１８ｄ大鼠，无菌条件取胚胎，断 头、分离海马组织，胰蛋白酶３７ ℃消化 １０～２０ｍｉｎ ２００目不锈钢网过筛，种植液配制成 ３ ×１０５ ／Ｌ 细胞 悬液加入预先用 １０ ｍｇ／Ｌ多聚赖氨酸包被的 ６孔培养 板中，培养后４ｈ换成无血清神经元培养基，置５％ ＣＯ２ ，３７ ℃培养条件下培养，每周半量换液２次。不 同时间段于倒置显微镜下观察细胞生长状况并照像 分析。对于纯度的鉴定用ＭＡＰ２一抗（１：１００）标记神 经元，以ＣＹ３标记红色荧光二抗（１：２００）于荧光显 微镜镜下观察分析。 １．３ 大鼠胎鼠海马神经元的转染及优化
转染方法分别按照ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＴＭ ２０００转染试剂 盒，大鼠神经元电转试剂盒及ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＴＭ ＬＴＸ转 染试剂盒的方法进行转染。用三种不同试剂转染体 外培养的海马神经元试剂及用量，见表１。细胞转染
Ｔａｂｌｅ １． Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｄ
Ｔａｂｌｅ ２． Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ
胎鼠海马神经元体外原代培养与鉴定文档资料
胎鼠海马神经元体外原代培养与鉴定在神经生物学及相关学科领域中，原代培养的神经元因其排除机体生理病理状态干扰的影响而成为较为理想的实验模型，是研究神经元形态、物质代谢、分子机制及电活动的主要前提。
海马是大脑边缘系统重要的组成部分，在学习、记忆、情绪反应及中枢神经系统疾病的病理生理变化方面发挥着重要作用。
对于原代海马神经元的培养，主要供体主要有胎鼠与新生鼠两种，培养方法有含血清培养和不含血清培养两种。
我们通过实验摸索，取得一种较稳定且简便实用的方法，能获得较高存活率的海马神经元。
1 材料与方法1.1 实验动物来源清洁级孕17-19天SD大鼠上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，生产许可证号：SCXK（沪）2012-0002。
1.2 主要仪器与试剂 CO2培养箱（Thermo公司），倒置相差显微镜为（Olympus公司），激光共聚焦显微镜型号为ZEISS LSM710，小鼠抗大鼠classⅢβ-Tubulin单抗（Beyotime公司），NSE免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒（武汉博士德生物工程XX公司），B27添加剂、Neuralbasal、Hoechst 33342Sigma 公司），DMEM（高糖型）培养基、胎牛血清（Gibco公司）。
1.3 培养方法与鉴定取孕17-19天大鼠，水合氯醛麻醉后70%酒精浸泡20min，颈椎脱臼法处死孕鼠，将子宫立即放入冰浴含DMEM的大平皿中，在解剖显微镜下取下海马组织，剪成约1mm×1mm×1mm大小，用0.125%胰蛋白酶于37℃、5%CO2培养箱中消化15min，中间每隔5min振荡一次，加入含10%FBS的DMEM 液终止消化，巴氏管轻柔吹打，200目筛网过滤。
1000r/min离心5min，弃上清，并加入适量的含2%B27无血清Neuralbasal培养基，用巴氏管吹打成细胞混悬液。
吹打后以0.4%台盼蓝染色计数活细胞并调整细胞悬液的细胞密度，以5×105个/ml的细胞密度接种于预先经0.05%多聚赖氨酸包被的6孔板（1.5ml/孔），置于37℃、5%CO2培养箱培养，24h后换培养基继续培养，以后每周更换维持培养基2次，每次半量换液。
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１８ ・ ２
中华老年 脑血管病杂志 ２ｏ 年 ２ 第 ９ 第 ２ ｏ７ 月 卷 期 （ｉ Ｊ ｅａ Ｈ ａ 晰 ｎ １ｎ ｉｔ ｅｔ ａ Ｇ ｉｒ ｒ ｖ
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Ｆ ｂ２ ０ ． ｏ ９ № ． ｅ ０ ７ ｖ ｌ ． ２
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基 础研 究 ．
ｃ ｎｒｌ ｒｕ ｄ ｎ ｒ ａ ｒｕ ｏ ｔ ｏ ｐａ ｏｍ ｌ ｏ ｐ．Ｆ ｕ ｅｋ ｆ ｒ Ｓ ｓｔ ｎ ｐａ ｔｔ ｎ ｔｅｅ ｐ ｓｉｎｏ Ｆ Ｐ ａｄ Ｓ １０ ｏｇ ｎ ｇ ｏ ｒ ｅ ｓａｔ Ｃ ｒ ｓ ｌ ａｉ ． ｘ ｒ ｓ ｆ Ａ 一０ １ ｉ ｗ ｅＮ ａ ｎ ｏ ｈ ｅ ｏ Ｇ ｎ ３ｎ
马 区均 可 见 棕 褐 色的 Ｓ１０ －０￣阳性 细胞 存 在 ， 分 细 胞 呈 细 胞 质 性 染 色 阳性 。 生 理 盐 水 对 照 组 Ａ 部 Ｄ模 型 大 鼠 的 海 马
区切片上可见大量阳性 细胞 染色 ， 与其他 各组 比较 差异有 显著性 （Ｐ ＜０ ０ ） 结论 ．１ 。
Ａ Ｄ模 型 大鼠 脑 内神 经 元 更 好 的 恢 复 。
ｏ ｅ ｔｏ ｓ ｓａ ｌｓ ｅ ｄ ＮＳ ａ ｅ ｒｍ ｉ ｐ ｃ ｍｐ ｓ ｏ ｅａ ａｓ ｗｅｅ ｃ ｌ ｒ ｄ． ｔｒｔｅ Ａｌｈ ｉ ｒ ｐ ｒ ｉｎ Ｗａ ｅ ｔｂ ｉｈ ｄ ａ Ｃｓ ｔｋ ｎ ｆｏ ｈ ｐ ｏ ａ ｕ ｆｆｔｌ ｒｔ ｒ ｕ ｔ ｅ Ａｆｅ ｚ ｅｍｅ ａ ｎ ｕ ｈ ｍｏ ｅ ａ ｓａ ｌ ｈ ｄ， ｅ ｒｔ ｒ ａ ｄ ｍｌ ｉｉｅ ｎ ｏ ＮＳ ｒｎ ｐａ ｔｔｏ ｒｕ ｄ ｌＷ ｅ ｔｂ ｉ ｅ ｔ ａｓ ｗｅｅ ｒ ｎ ｏ ｙ ｄｖｄ ｄ ｉｔ Ｃｓ ｔａ ｓ ｌ ａ ｉｎ ｇｏ ｐ， ｐ ｙ ｉｌｇｃ ｌ ｓ ｉｅ ｓ ｓ ｈ ｎ ｈ ｓｏｏ ｉａ ａ ｎ ｌ
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ｒ ｔ ｔ ｚ ｅｍ ｅ Ｓｄ ｓａ ｅ ａ ｓｗｉｈ Ａｌｈ ｉ ｒ’ ｉｅ ｓ
ＺＨＡＮ ｎ， Ｙａ ＭＡ － ｕ ， ＨＡＮＧ Ｄｉｈ ｉ Ｚ Ｙｕ
神 经干 细胞移植 可 以促 进
关键词 ： 阿尔茨海默病 ； 经元 ； 神 造血干细胞移植； 海马 ； 经胶质原纤维酸性蛋 白质 神
中 图 分 类 号 ：７９ １ Ｒ４ ． 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０９０２ （０ ／０－１８０ １ ．１６２０ ）２０２．４ ０
Ｅ ｃｓ０ ｔｌ ａ ｅ ｒ ｌ ｔｍ ｅ ｓ（ Ｓ ｓ ｒ ｎ ｐａ ｔｔ ｎ ｏ ｅｔ ｆ ｌａ ｒ ｔ ｕ ａ ｅ ｃ ｌ Ｎ Ｃ ）ｔ ｓ ｌｎａｉ ｎ ｆ ｎ ｅ ｓ ａ ｏ
Байду номын сангаас
胎 鼠神 经 干 细胞 移植 对 阿尔 茨 海 默病 大 鼠 海 马区的 Ｇ Ａ Ｆ Ｐ与 Ｓ１０ 表 达 的影 响 一０ １ ￣
詹焱， 马涤 辉 ， 昱 张
（ 吉林大学第一临床医院 ， 吉林 长春 １０ ２ ） ３０ １
摘要 ： 目的
探讨胎 鼠神 经干细胞移植对 阿尔茨海默病（ Ｄ） Ａ 大鼠海马区的 Ｇ Ａ Ｆ Ｐ与 Ｓ１０ 表达 的影响。方 法 通 －０ ￣
ｐ ｏ ｅ ａ ｅ ｃ ｌ ｅｅ Ｎ Ｃ ．Ａ ｔｒｔ ｎ ｐａ ｔ ｇ ＮＳ ｓ ｉｔ ｅ ｈ ｐ ｏ ａ ｕ ， ｅ ａ ｕ ｔ ｆＧＦ Ｐ ｐ ｓｉ ｒｖ ｔ ｔｔ ｅｌ ｗ ｒ Ｓ ｓ ｆ ｒ ｓ ｌ ｉ Ｃ ｏ ｔ ｉ ｐ ｃ ｍｐ ｓ ｔ ｍｏ ｎ Ａ － ｏ ｔ ｅ ｄ ｈ ｈ ｓ ｅ ａ ｎ ｎ ｎ ｈ ｈ ｏ ｖ ｓ ｒ ｙｅ ｎ ｒ ａ ｄ ｉ ｉｐ ｃ ｍｐ ｓｏ ａ ｎ ｏ ｔ ｏ ｐ ａ ａ ｓ ｉ ｃ ｌ ｄｆ ｒｎ ｏ ｔ ｔ ｈ ｒ ａ ｔ ｃ ｔｓ ｉｃｅ ｅ ｎ ｈｐ ｏ ａ ｕ ｆ ｅ ｓ ｉ ｅｃ ｎｒｌ ｒｕ ｄ Ｗ ｉｎｆ ａ ｔ ｉｅ ｅ ｔ ｒｍ ａ ｆ ｔ ｅ ｏ ｓ ｈ ｔ ｌ ｏ ｇ ｎ ｓ ｇ ｉｎ ｙ ｆ ｈ ｏｏ
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过切断 Ｗｉａ 大鼠海马穹窿伞 制备 Ａ ｓｒ ｔ Ｄ模型大鼠。我们将 大鼠随机 分为神 经干细胞移植组 、 生理 盐水对照组 和正 常组。培养胎鼠的神经干细胞 ， 将其移植入 Ａ Ｄ模 型大鼠脑 内， 并用等 量生理盐水脑 内注射 对比观察 。１个 月后处
死大鼠 ， 进行免疫组 织化 学实验检测 鼠海马 区的 Ｇ Ａ Ｆ Ｐ与 Ｓ１ｏ －０ｐ的表达。 结果 神 经干细胞 显示 巢蛋 白阳性。各 组 实验鼠海马 区有 Ｇ Ａ Ｆ Ｐ的 阳性表达 ， 生理 盐水对照组与 其他 各组之 间有显 著差异（Ｐ ＜０ ０ ） ．１。对各组 大鼠在 海
Ｓ １０ ｉｐ ｃ ｍｐ ｓｏ ａｓｗ ｔ Ｄ．Ｍ ｅ ｄ Ｔ ｅＡ ｒｔｍｏ ｅ ｏｅｈｐ ｏ ｏ ｕ ａ ａ ｇ ｄ ｂ 一 ０ １ ｉ ｈｐ ｏａ ｕ ｆ ｔ ｉ Ａ ３ｎ ｒ ｈ ｔ ｓ ｈｏ ｈ Ｄ ａ ｄ ｌ ｗｈｓ ｉｐ ｃｍｐ ｓｗ ｓ ｄｍａ ｅ ｙ