大肠杆菌DH5a使用说明
大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α、DH10B
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU ，galK ，rps，(Strr) endA1，nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1。
大肠杆菌DH5a感受态细胞转化率的改进
大肠杆菌DH5α感受态细胞转化率的改进桓明辉摘要：针对实验材料E．coli DH5α，对该茵株在不同生长时期的转化效率进行测定，确立了一个能制备高转化率感受态细胞的实验方案。
结果表明：在细茵的生长繁殖过程中，其转化率有很大变化；结果：得到了E．coil DH5α茵株制备感受态细胞的最佳条件。
关键词：大肠杆茵；感受态；转化率DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC 系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补，可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
感受态细胞的制备和转化是分子生物学实验室频繁使用的一项重要的常规操作。
对细菌而言，为达到高效转化，活细胞数务必少于l08细胞／m1。
对于大多数E.coli来说，相当与OD600为0.4左右，但由于转化是一个很复杂的过程，具体的作用机理仍在探究中。
有文献指出[1]，细菌的最佳感受态细胞制备期对于不同菌株是不同的，并不一定都是在活细胞浓度为l08细胞／ml的时候最适宜，有必要针对所使用的菌株确定其最佳转化条件。
1 材料与方法1.1 材料与试剂菌株与质粒：E．coli DH5α，pUC18质粒由本实验室保存。
X-gal，IPTG，LB培养基，氨苄青霉素溶液，0.1 mol／L CaCl2溶液，均按《分子克隆实验指南》的要求配制。
1.2 方法1.2.1大肠杆菌生长情况的测定：从平板上挑取单个菌落(直径2～3 mm)到含有30ml LB培养基的锥形瓶中，37℃下250 r／min培养过夜。
取出0.3 ml培养物到含有l5 ml LB培养基的摇菌试管中，继续振荡培养，每隔20 min 取出一支摇菌试管，放于冰箱．统一测定菌液的OD600，绘制生长曲线。
选取几个不同时相的菌液倍比稀释从lO-1～lO-6，各取0.1 ml 稀释液涂布LB平板培养基，37℃正向培养1 h后，倒置培养l2～16 h。
每个稀释度铺3个平板，计数，作OD600一活菌细胞浓度图。
dh5a感受态细胞的制备
dh5a感受态细胞的制备DH5α感受态细胞的制备引言：大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，也是生物学实验中最常用的模式生物之一。
在分子生物学和基因工程领域，大肠杆菌被广泛用于蛋白质表达、基因克隆、DNA测序等实验中。
其中，DH5α感受态细胞是最常用的一种。
本文将介绍DH5α感受态细胞的制备方法。
一、实验前准备1.1 菌种选取首先需要选择适合自己实验需求的大肠杆菌质粒转化菌株。
DH5α感受态细胞是含有F-质粒（Fertility factor）的E. coli K12株系，具有高度敏感性和高转化效率，广泛应用于基因克隆、DNA测序等领域。
1.2 质粒DNA提取在进行质粒转化前，需要提取所需质粒DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳等方法进行检测和纯化。
质粒DNA的提取方法有多种，如碱裂解法、酚/氯仿法等。
1.3 化学试剂准备进行DH5α感受态细胞制备的实验中，需要准备一些常用的化学试剂，如CaCl2、MgCl2、LB培养基等。
二、DH5α感受态细胞的制备方法2.1 菌株处理将DH5α感受态细胞从-80℃冰箱中取出，用无菌吸管取出适量菌液接种到含有LB培养基的50mL离心管中。
在37℃恒温振荡培养器中进行预培养，转速为200rpm，时间为8小时左右。
2.2 转化体系制备将质粒DNA加入到含有CaCl2和MgCl2的转化缓冲液中，并在室温下静置15分钟。
其中转化缓冲液的配方为：10mM Tris-HCl（pH 7.4）、100mM CaCl2、50mM MnCl2、100mM MgCl2。
2.3 转化处理将预培养后的DH5α感受态细胞进行离心处理，去掉上清液。
然后加入转化体系，并在室温下静置30分钟。
之后将样品加热至42℃水浴中进行热激处理，时间为45秒左右。
然后将样品放入冰水中进行冷激处理，时间为2分钟左右。
2.4 恢复处理将转化后的细胞加入到含有LB培养基的离心管中，并在37℃恒温振荡培养器中进行恢复处理，转速为200rpm，时间为1小时左右。
DH5α大肠杆菌克隆菌株
产品信息：
货号
名称
产品形式
规格
储存
P1435
DH5α Strain
100μl
-20℃
基因型：
F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
基本信息：
抗性：无
培养基：LB
菌株类别：大肠杆菌克隆菌
培养条件：37℃，有氧，LB
质粒转化：42℃热激
保存方式：20%甘油，-20℃
基本应用：用于基因克隆
备注：
菌株简介：
DH5α菌株是实验室最常用的菌株。缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；DH5α在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和DH5α编码的lacZ△M15相结合，从而显示β-半乳糖苷酶活性(α-互补性)，使DH5α可用于蓝、白斑筛选。DH5α可以用于制作基因库、进行亚克隆，同时于DH5α具有deoR变异，可以作为较大质粒的宿主菌使用。DH5α菌株的缺点是生长缓慢，37℃需培12-14小时才能看见克隆。
大肠杆菌DH5a感受态的制备,质粒验证
⼤肠杆菌DH5a感受态的制备,质粒验证⼤肠杆菌感受态细胞DH5α的制备，质粒的转化及提取⼀实验⽬的1，了解和掌握⼤肠杆菌感受态细胞的制备⽅法的原理和操作技术。
2，了解和掌握质粒转化的原理和操作步骤。
3，掌握碱裂解法提取质粒的原理和⽅法，以及提取过程中各试剂的作⽤。
⼆实验原理1，⼤肠杆菌感受态细胞制备的原理感受态是细菌细胞具有的能接受外源DNA的⼀种特殊⽣理状态，将正在⽣长的⼤肠杆菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中，会膨胀成球形，细胞膜的通透性发⽣变化，此时的细胞呈现出感受态。
2，质粒转化原理在0℃下外源DNA可吸附到感受态细胞表⾯，短时间的热刺激可诱导细胞吸收DNA。
转化了质粒DNA的⼤肠杆菌经培养可以使质粒编码的抗⽣素抗性基因得到表达，因此，转化了质粒的⼤肠杆菌细胞可以在含有相应抗⽣素的培养基上涂布⽣长，⽽没有转化的细胞则⽆法⽣长。
3，质粒提取原理质粒的分离是利⽤质粒DNA与染⾊体DNA在变性与复性中的差异来达到的⽬的。
当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋⽩质与DNA发⽣变性，由于染⾊体DNA与质粒DNA拓朴构型不同,染⾊体DNA双螺旋结构解开，⽽共价闭环质粒DNA的氢键虽被断裂，但两条互补链彼此相盘绕仍会紧密地结合在⼀起。
当加⼊中和液后, 溶液pH 调恢复⾄中性，在⾼盐浓度的情况下，染⾊体DNA之间交联形成不溶性⽹状结构并与蛋⽩质-SDS复合物等形成沉淀；不同的是，质粒DNA复性迅速⽽准确，保持可溶状态⽽留在上清中。
这样，通过离⼼可沉淀⼤部分细胞碎⽚、染⾊体DNA、RNA及蛋⽩质。
除去沉淀后上清中的质粒可⽤酚氯仿抽提进⼀步纯化质粒DNA。
三仪器，材料及试剂仪器：恒温培养箱，离⼼机，恒温摇床，超净⼯作台，⾼压灭菌锅，电泳仪，⽔浴锅等材料：⼤肠杆菌DH5α菌株，⼤肠杆菌BL21菌株，pCMV质粒试剂：Solution I，Solution II，Solution III，1 mol/L CaCl2，TE缓冲液，70%⼄醇，酚：氯仿（1:1）等。
DH5a说明书
Code No. 9057 研究用E. coli DH5αCompetent Cells说明书v201412Da目录内容页码●制品内容 1 ●制品说明 1 ●使用方法 1 ●注意事项 1 ●转化效率 2 ●β-半乳糖苷酶的α-互补性 2 ● Genotype 2 ●细胞浓度 2 ●保存 2 ●参考文献 2 ●关联产品 2●制品内容E. coli DH5α Competent Cells 100 μl×10pUC19 plasmid (0.1 n g/μl) 10 μlSOC medium* 1 ml×10＊ SOC medium: 2% Bacto tryptone0.5% Bacto yeast extract10 mM NaCl2.5 mM KCl10 mM MgSO410 mM MgCl220 mM Glucose●制品说明Takara公司在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E.coli DH5α Competent Cells。
E.coli DH5α Competent Cells在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，利用β-半乳糖苷酶活性（α-互补性），通过蓝白斑方法可以很容易地鉴别重组体菌株。
由于菌株无lac l q，故不需要IPTG。
因此，当制作基因文库或进行亚克隆时，可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside●使用方法质粒载体转化1.E.coli DH5α Competent Cells 使用前在冰上融化。
2. 轻微混匀，取100 μl装入14 ml 圆底 tube中（BD Falcon 352059 或352057）。
注意：不能剧烈振荡混合细胞。
3. 加入DNA样品（建议≤10 ng）。
4. 冰中放置30分钟。
5. 42℃放置45秒。
大肠杆菌DH5a感受态的制备,质粒验证
大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备，质粒的转化及提取一实验目的1，了解和掌握大肠杆菌感受态细胞的制备方法的原理和操作技术。
2，了解和掌握质粒转化的原理和操作步骤。
3，掌握碱裂解法提取质粒的原理和方法，以及提取过程中各试剂的作用。
二实验原理1，大肠杆菌感受态细胞制备的原理感受态是细菌细胞具有的能接受外源DNA的一种特殊生理状态，将正在生长的大肠杆菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中，会膨胀成球形，细胞膜的通透性发生变化，此时的细胞呈现出感受态。
2，质粒转化原理在0℃下外源DNA可吸附到感受态细胞表面，短时间的热刺激可诱导细胞吸收DNA。
转化了质粒DNA的大肠杆菌经培养可以使质粒编码的抗生素抗性基因得到表达，因此，转化了质粒的大肠杆菌细胞可以在含有相应抗生素的培养基上涂布生长，而没有转化的细胞则无法生长。
3，质粒提取原理质粒的分离是利用质粒DNA与染色体DNA在变性与复性中的差异来达到的目的。
当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，由于染色体DNA与质粒DNA拓朴构型不同,染色体DNA双螺旋结构解开，而共价闭环质粒DNA的氢键虽被断裂，但两条互补链彼此相盘绕仍会紧密地结合在一起。
当加入中和液后, 溶液pH调恢复至中性，在高盐浓度的情况下，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构并与蛋白质-SDS复合物等形成沉淀；不同的是，质粒DNA复性迅速而准确，保持可溶状态而留在上清中。
这样，通过离心可沉淀大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质。
除去沉淀后上清中的质粒可用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。
三仪器，材料及试剂仪器：恒温培养箱，离心机，恒温摇床，超净工作台，高压灭菌锅，电泳仪，水浴锅等材料：大肠杆菌DH5α菌株，大肠杆菌BL21菌株，pCMV质粒试剂：Solution I，Solution II，Solution III，1 mol/L CaCl2，TE缓冲液，70%乙醇，酚：氯仿（1:1）等。
DH5α感受态的制备
E.coli DH5α感受态细胞的制备大肠杆菌DH5α是一种诱变菌株，主要表现对外源DNA的免疫缺乏。
是用于基因工程的菌种，相比于正常菌种缺少了一定的免疫机制。
DH5α菌株是一种能够摄入外源DNA的受容菌，普通的大肠杆菌细胞内有一种“免疫”机制，即当外源DNA侵入时，会产生诸如限制性内切酶类的物质，将外源的DNA剪切掉，而其自身DNA因被修饰（如甲基化）所以不被限制酶识别，不会被剪切。
这样的菌是不能直接用于基因工程的，我们总不希望目的基因导入进去还来不及复制就被剪切掉。
DH5α菌株是一种经诱变的菌株，其基本特性是：Rˉ、Mˉ、AMPˉ。
Mˉ是指DH5α菌株缺乏DNA修饰，即其自身DNA不会被修饰。
Rˉ是指其缺乏“免疫”机制，不会对导入的外源DNA切割。
AMPˉ是指其对氨苄青霉素敏感。
DH5α菌株可以用于制作基因库、质粒克隆等，可用作基因工程的受体菌。
一、实验准备（一）实验材料大肠杆菌E.coli DH5α（二）试剂与耗材LB平板、LB液体培养基、50ml无菌离心管、1.5ml无菌离心管、无菌枪头、0.1M CaCl2、0.1M CaCl2+甘油、过滤器、无菌水。
（三）仪器与设备恒温培养箱、冷冻离心机、制冰机、超净工作台。
二、实验步骤（一）平板制备流程1.将超净工作台的紫外灯打开，将平皿、酒精灯、70%酒精、1000uL枪头放入超净工作台内，对超净工作台进行紫外灭菌30分钟；2.超净工作台灭菌后打开风机至3档并关闭紫外灯，风机运行5分钟后将已灭菌的固体培养基放在超净工作台上；3.准备进行无菌操作时，将70%的酒精喷洒在手套及袖口上和融化好的固体培养基（以不烫手为宜）、抗生素上，然后放入工作台中，待手套上酒精挥发完全后点燃酒精灯；4.将平皿的外包装胶袋拆开，将平皿皿底朝下摆放整齐；5.向培养基中加入一定量所需的抗生素（工作浓度为配置浓度的1/1000，例如300mL的培养基中加入300μL抗生素），轻轻摇匀，不要摇起气泡；若制备无抗平板，则此步骤省略；6.将培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔开无菌透气膜；7.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰；8.用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿中（布满平皿底面积2/3即可），左手立即盖上培养皿的皿盖，轻轻摇匀，使培养基均匀分布在平皿上；9.等待平板冷却凝固（约需20min）后，将平板倒置，使皿盖在下，皿底在上，再将平皿用保鲜袋装好，标明倒板的日期和相应抗性后放入4℃冰箱保存。
DH5α感受肽细胞制备
感受态细胞的制备一、实验试剂及材料 1. AMP－ LB液体培养基 2. 0.1M CaCL2溶液； 3. AMP+固体培养板 4. DH5α大肠杆菌；5. 10ml玻璃试管、牙签、5ml刻度吸管、1.5ml离心管、150ml三角烧瓶均需高压灭菌；6. 20μl枪头、200μl枪头、1000μl枪头及加样器（法国Gilson公司）。
二、实验设备 1. YJ-875医用净化工作台 2. CF16RX低温高速离心机 3. HH.B11-500型电热恒温培养箱 4. BCD-216KF冰箱 5.CHB-100恒温金属浴三、实验方法(一) DH5α大肠杆菌活化（注意无菌操作） 1. 实验前30分钟紫外消毒净化工作台。
2.取两只高压过的10ml玻璃试管，向其中各加入3ml AMP- LB液体培养基。
3.用无菌牙签挑取少量冻存DH5α大肠杆菌菌液，加入到试管中。
4.将试管固定于37℃预热的空气浴振荡器中， 200-250转∕分，过夜振荡培养。
(二) DH5α大肠杆菌增殖（注意无菌操作） 5. 实验前30分钟紫外消毒净化工作台。
6.取20ml AMP- LB液体培养基（根据所要制备的感受态的量确定AMP- LB液体培养基的体积）加入到150ml三角烧瓶中。
7.取200μlDH5α大肠杆菌（与AMP-LB液体培养基的体积比为1:1000）菌液加入到三角烧瓶中。
8. 将三角烧瓶固定于37℃预热的空气浴振荡器中，200转∕分，振荡培养至菌液呈现均匀细沙状。
（约1-1.5小时）(三) （大量或小量）制备感受态细胞100X100μl感受态15. 实验前30分钟紫外消毒净化工作台。
制冰1kg。
16. 取1.5ml（二）中的DH5α大肠杆菌菌液加入到1.5ml离心管，根据实验具体要求确定管数。
17. 4℃ 4000g 离心10分钟。
18. 弃上清，向各1.5ml离心管中加入冰预冷的0.1M CaCL2溶液500μl，混匀后置于冰上10分钟。
大肠杆菌DH5α化学感受态细胞
倒置培养，37℃培养 12-16 小时。 注意： 1 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板； 若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少， 可通过离心（4,000 rpm ，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。 2 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。 3 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂 布新培养基进行培养。
天 净 沙 系 列
CAT#:81024-10 干冰运输、-80℃保存
大肠杆菌 DH5α化学感受态细胞
E.coli DH5α Chemical Competent Cell
使用手册 V1.1
北京天恩泽基因科技有限公司
北京市海淀区上地信息路 26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦 506
网址：；电话：400-6765278；电邮：order@
适用于高效的质粒 DNA 克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。
本菌种来源于 Hoffman-Berling 1100 菌种，具有下列特点：基因型Fra bibliotek表现型
deo R end A1 gyr A96 hsd R17 △(lac )U169 rec A1 relA1
sup E44 thi -1
φ80（lac ZΔM15）
组成型合成脱氧核糖
核酸内切酶 I 缺失 具有萘啶酮酸抗性 限制性酶 EcoK 缺失
lac 基因缺失 DNA 重组活性降低 允许在无蛋白质合成时有 RNA 合
成 抑制琥珀突变突变，为某些噬菌
体必需 不能自身合成硫氨 提供α-互补所需的ω片断
大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α、DH10B
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，p h o A，s u p E44，λ-，t h i-1，g y r A96，r e l A 12：B L21(D E3)菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，o m p T，h s d S（r B B-m B－），g a l，d c m（D E3）3：B L21(D E3)p L y s S菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，o m p T h s d S（r B B-m B－），g a l，d c m（D E3，p L y s S，C a m r4：J M109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’5：T O P10菌株该菌株适用于高效的D N A克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F-，mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)，φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1，a r aΔ139Δ(a r a-l e u)7697，g a l U，g a l K，r p s，(S t r r)e n d A1，n u p G6：H B101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，m t l-1，l e u B6，t h i- 1。
大肠杆菌BL21和DH5α的区别
大肠杆菌B L21和D H5α的区别(总1页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr最直接的区分就是克隆菌株和表达菌株的区别大肠杆菌DH5α做克隆或保存质粒用，BL21用来做原核表达用。
当然也有人用DH5α做表达也能表达出来。
也有人用BL21保存质粒的，但时间久了，质粒容易丢失。
你要是做原核表达的话，应该会现用前者克隆得到重组质粒，转化入后者进行表达2。
大肠杆菌DH5a使用说明
E.coli Competent CellsDH5α使 用 说 明 书Takara Code : D9057A 包 装 量 Competent Cells DH5α 100 μl × 10 支 Control DNA （pUC19，0.1 ng/μl ） 10 μl × 1 支 保 存 : -80℃ 制品说明 感受态细胞（Competent Cells ）是一种具有摄入外源DNA 能力的受容菌，它可以摄取外源的质粒DNA 等。
在进行基因重组实验时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。
在制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是在目的基因含量十分低的情况时，使用高效的感受态细胞显得十分重要。
Takara 公司在Hanahan 方法的基础上进行了改良，制备出了高效的感受态细胞（都为EK1系列的宿主大肠杆菌）。
Genotype F -,φ80d lac Z △M15, △(lacZYA-argF )U169, deoR , recA 1, endA 1, hsdR 17(r k -,m k + ), phoA , supE 44, λ-, thi -1, gyrA 96, relA 1 细胞种类 α-互补性选择宿主 E.coli DH5α E.coli DH5α在使用pUC 系列质粒载体进行DNA 转化时，由于载体DNA 产生的LacZ α多肽和DH5α编码的lacZ △M15相结合，从而显示β-半乳糖苷酶活性（α-互补性）。
利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。
DH5α可以用于制作基因库、进行亚克隆等，由于DH5α具有decR 变异，可以作为较大质粒的宿主菌使用。
细胞浓度 : 1～2×109 Bacteria/ml 质量标准 1. 使用1 ng 的质粒DNA 进行转化时： 100 μl Competent Cells DH5α/1 ng pUC19 Plasmid 进行转化时产生的菌落＞1×108 transformants/1 μg pUC19 Plasmid 2. β-半乳糖苷酶、α-互补性的确认 对E.coli Competent Cells DH5α使用pUC19 DNA 进行转化后，在含有100 μg/ml 的Ampicillin 、40 μg/ml 的X-Gal 的L-琼脂平板培养基上，产生蓝色菌落。
DH5a大肠杆菌克隆菌株使用说明
DH5a大肠杆菌克隆菌株编号 名称北京华越洋生物NRR01300 DH5a大肠杆菌克隆菌株基本信息：名称 DH5a大肠杆菌克隆菌株规格 300ul甘油菌类别 大肠杆菌克隆菌株抗性 无培养基 LB培养方式 37℃，有氧保存方式 20%甘油，-‐80℃基因型:F-‐ endA1 glnV44 thi-‐1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-‐argF)U169, h sdR17(rK-‐ m K+), λ–菌株简介:DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。
缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。
DH5α菌株的缺点是生长缓慢，37℃需培12-‐14小时才能看见克隆；如需加快试验速度，请选用TG1，Mach1-‐T1，XL10-‐Gold等生长速度快的感受态细胞。
操作说明：1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。
也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
冷冻管开封：用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶：无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。
轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。
做好标识，在适宜温度下培养。
细菌在30-‐35℃培养箱中培养24-‐48h，真菌在23-‐28℃培养箱中培养24-‐72h （必要时，可适当延长培养时间）。
JM109,DH5a,BL21等感受态细菌特点及应用
1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株BL21菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株BL21(DE3) pLysS菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株JM109菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株TOP10菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG6：HB101菌株HB101菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1。
常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21等的区别-用途-特征解析
常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21等的区别-用途-特征解析常用大肠杆菌感受态 JM109, DH5a , BL21等的区别1:DH5a 菌株DH5a 是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用 pU C 系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F -, φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF U 169, deoR , recA 1, endA 1,hsdR17(rk-, mk+, phoA , supE44, λ-, thi-1, gy rA 96, relA 12:BL21(DE3 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET 系列的基因。
T7噬菌体 RNA 聚合酶位于λ 噬菌体 DE3区,该区整合于 BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F -, ompT , hsdS (rBB-mB -, gal , dcm (DE33:BL21(DE3 pLysS 菌株该菌株含有质粒 pLy sS ,因此具有氯霉素抗性。
PLy sS 含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F -, ompT hsdS(rBB-mB -, gal , dcm (DE3, pLy sS , C amr4:JM109菌株该菌株在使用pU C 系列质粒载体进行DNA 转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体 DNA 产生的 LacZa 多肽和 JM09编码的La cZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA 1, endA 1, gy r A 96, thi -1, hsdR17, supE44, re lA 1, Δ(lac -proA B /F’[traD36, proAB+, lacIq , lacZΔM15] 5:TO P10菌株该菌株适用于高效的DNA 克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
大肠杆菌BL21和DH5α的区别
大肠杆菌B L21和D H5α的区别(总1页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr最直接的区分就是克隆菌株和表达菌株的区别大肠杆菌DH5α做克隆或保存质粒用，BL21用来做原核表达用。
当然也有人用DH5α做表达也能表达出来。
也有人用BL21保存质粒的，但时间久了，质粒容易丢失。
你要是做原核表达的话，应该会现用前者克隆得到重组质粒，转化入后者进行表达2。
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E.coli Competent Cells
DH5α
使 用 说 明 书
Takara Code : D9057A 包 装 量 Competent Cells DH5α 100 μl × 10 支 Control DNA （pUC19，0.1 ng/μl ） 10 μl × 1 支 保 存 : -80℃ 制品说明 感受态细胞（Competent Cells ）是一种具有摄入外源DNA 能力的受容菌，它可以摄取外源的质粒DNA 等。
在进行基因重组实验时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。
在制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是在目的基因含量十分低的情况时，使用高效的感受态细胞显得十分重要。
Takara 公司在Hanahan 方法的基础上进行了改良，制备出了高效的感受态细胞（都为EK1系列的宿主大肠杆菌）。
Genotype F -,φ80d lac Z △M15, △(lacZYA-argF )U169, deoR , recA 1, endA 1, hsdR 17(r k -,m k + ), phoA , supE 44, λ-, thi -1, gyrA 96, relA 1 细胞种类 α-互补性选择宿主 E.coli DH5α E.coli DH5α在使用pUC 系列质粒载体进行DNA 转化时，由于载体DNA 产生的LacZ α多肽和DH5α编码的lacZ △M15相结合，从而显示β-半乳糖苷酶活性（α-互补性）。
利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。
DH5α可以用于制作基因库、进行亚克隆等，由于DH5α具有decR 变异，可以作为较大质粒的宿主菌使用。
细胞浓度 : 1～2×109 Bacteria/ml 质量标准 1. 使用1 ng 的质粒DNA 进行转化时： 100 μl Competent Cells DH5α/1 ng pUC19 Plasmid 进行转化时产生的菌落＞1×108 transformants/1 μg pUC19 Plasmid 2. β-半乳糖苷酶、α-互补性的确认 对E.coli Competent Cells DH5α使用pUC19 DNA 进行转化后，在含有100 μg/ml 的Ampicillin 、40 μg/ml 的X-Gal 的L-琼脂平板培养基上，产生蓝色菌落。
3. 100 μl 的E.coli Competent Cells DH5α在含有 100 μg/ml Ampicillin 的L-琼脂平板培养基上过夜培养40 hr 不产生菌落。
使用方法 质粒DNA 的转化方法* 1. 把感受态细胞置于冰中融化。
2. 把100 μl 的感受态细胞移至灭菌处理的试管内。
3. 加入用于转化的DNA （10 ng 以下）。
4. 冰中放置30分钟。
5. 42℃ 放置45～60秒。
6. 冰中放置2～3分钟。
7. 加入37℃预温好的SOC 培养基，使终体积为1 ml 。
8. 37℃振荡培养1小时（160～225 rpm ）。
9. 取适量涂布琼脂平板培养基。
10. 37℃过夜培养。
*：也可以使用以下快速转化方法，但效率会有所下降。
1. 取适量质粒加入到microcentrifuge tubes 中，冰上冷却2 min 。
2. 取100 μl 感受态细胞加入到上述microcentrifuge tubes 中，混匀 并冰浴5 min 。
3. 在含有X-Gal 、IPTG 、Amp 的L-琼脂平板培养基上培养（平板 使用前需要在37℃预热30分钟），形成单菌落。
计数白色、蓝 色菌落。
注意事项 1. 一定要用干冰运输。
2. 不立即使用的感受态细胞请在-80℃下保存（融化后的感受态细胞不能再冻结保存）。
3. 转化时请使用传热性能较好的试管。
一般的 1.5 ml 微型离心管也可使用，但转化效率会有所下降（此时请在使用方法5.的42℃下放置60秒）。
4. 对100 μl 的感受态细胞，用于转化的质粒DNA 量请控制在10 ng 以下，并保证DNA 溶液的体积在20 μl 以下。
否则会影响转化效率。
5. 使用SOC 培养基的地方也可使用 LB 培养基，但此时转化效率会有所下降。
6. 包装中附有0.1 ng/μl 的pUC19 DNA ，供作对照实验使用。
备 注
V2012.01。