血液常规检查检验程序(1)

第八章血液常规检查检验程序

检测血液中红细胞、白细胞和血小板数量、白细胞分类及相关参数(HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW及MPV等)的变化对临床有关疾病的诊断、观察疾病的变化及治疗效果具有重要参考价值。现根据ISO15189文件―《医学实验室质量与能力专用要求》的规定，以SF-3000、ADVIA-120和BC-2000血细胞分析仪为例进行介绍。

第一节血细胞分析仪检测原理

血常规检查方法采用血细胞自动分析仪法，参见《全国临床检验操作规程》p7～11，白细胞分类计数采用显微镜检查法，参见《全国临床检验操作规程》p5～7。现简要介绍如下。

一、电阻抗法血细胞计数

在细胞检测器微孔的两侧各有一个电极，两电极间通有恒定电流，经过稀释液(电解质溶液)稀释的血样(血细胞)在通过检测器微孔时，产生了一个电脉冲；脉冲的高低代表细胞体积的大小，脉冲的个数代表细胞的数目。记录脉冲的数目可以得到细胞计数的结果。

二、细胞化学和光散射法白细胞计数

将血液经过细胞化学试剂染色，不同的白细胞胞浆内部即可出现不同的酶化学反应。当这些白细胞通过测量区时，由于酶反应强度不同和细胞体积大小差异，激光束射到细胞上的前向角和散射角不同，以X轴为吸光率，Y轴为光散射，每个细胞产生两个信号结合定位在细胞分布散点图上。计算机对存储的测量信息进行分析处理，得出白细胞总数和分类计数结果。适用于ADVIA-120血细胞分析仪。

三、多角度激光法白细胞计数

在白细胞分类通道：全血加入溶血剂(FD-Ⅰ和FD-Ⅱ)作用后，嗜酸性粒细胞内颗粒被染色；其他白细胞略有皱缩。WBC/BASO通道：全血加入溶血剂(FB)溶血。除BASO外，其他白细胞均明显皱缩。仪器从低角度及高角度分析白细胞的内部结构。计算机对存储的测量信息进行分析处理，得出白细胞总数和分类计数结果。适用于SF-3000血细胞分析仪。

四、光电比色法测量血红蛋白

在稀释的血样中加入溶血剂使红细胞膜破裂释放出血红蛋白，后者与溶血剂中有关成分结合形成Hb衍生物，进入Hb测试系统，在特定波长(一般在530～550nm)下比色，吸光度的变化与液体中Hb含量成正比，仪器便可显示其浓度。不同型号的血细胞分析仪配套溶血剂配方不同，形成的Hb衍生物亦不同，其吸收光谱各异但最大吸收均接近540nm。

五、光散射法红细胞和血小板计数

以二维激光散射法检测红细胞和血小板。红细胞测试原理是：在测试系统中，全血与红细胞/血小板稀释液混合，使自然状态下双凹盘状扁平圆形的红细胞成为球形并经戊二醛固定，此种处理并不影响MCV体积。红细胞无论以何种方位通过测量区时，被激光束照射后所得的信号是相同的。激光束以低角度前向光散射和高角度光散射同时测量一个红细胞，根据低角度光散射转换能量大小，测量单个红细胞体积与总数；根据高角度光散射得出单个红细胞内血红蛋白浓度。血小板与红细胞在一个系统中测量，其原理是：根据同质性球体光散射的Mie理论，当球形化的血小板单个通过激光照射区时，仪器在两个角度测定激光的散射强度：高角度主要测细胞的折射指数(RI)，它与细胞的密度有关；低角度主要测细胞体积的大小。血小板的体积在1～30fl，RI在1.35～1.40。计算机对存储的测量信息进行分析处理，得出红细胞和血小板计数结果。适用于ADVIA-120血细胞分析仪。

六、显微镜白细胞分类计数

把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，经瑞氏染料染色后，在显微镜下根据白细胞形态特征予以分类计数，得出相对比值(百分率)，并观察细胞形态的变化。

第二节仪器性能参数

血细胞分析仪的操作性能因仪器的种类与型号不同而异。

一、SF-3000血细胞分析仪

1.该仪器检测血细胞的测量范围为WBC：(0.0～99.99)×109/L；RBC：(0.00～9.99)×1012/L、HGB：1～300g/L；PLT：(0～999)×109/L。

2.本仪器检测血细胞的精密度为WBC：±

3.0%；RBC：±1.5%；HGB：±1.5%；PLT：±5.0%。

二、ADVIA-120血细胞分析仪

1.本仪器检测血细胞的测量范围为WBC：(0.00～400)×109/L；RBC：(0.00～6.76)×1012/L；HGB：0～225g/L；PLT：(0～3980)×109/L。

2.本仪器检测血细胞的精密度为WBC：±

3.0%；RBC：±1.5%；HGB：±1.5%；PLT：±5.0%。

三、BC-2000血细胞分析仪

1.本仪器检测血细胞的测量范围为WBC：(0.0～99.99)×109/L；RBC：(0.00～9.99)×1012/L；HGB：0～300g/L；PLT：(0～999)×109/L。

2.本仪器检测血细胞的精密度为WBC：±

3.0%；RBC：±2.0%；HGB：±2.0%；PLT：±5%。

第三节血常规检验程序主要内容

一、标本

1.临床护士抽取患者抗凝静脉血2ml。

2.采血后立即送到临床检验科。

3.血量不够1ml或血液凝固、溶血或严重脂血标本不能进行检测。

二、设备和试剂

1.设备SF-3000、ADVIA-120、MEK-6108K和BC-2000血细胞分析仪。

2.试剂

（1）稀释液、溶血剂和清洗液。

（2）CBC试剂、DIFF试剂、消泡剂和鞘液冲洗液。

（3）瑞氏染液及缓冲液。

3.购买的试剂应放室温保存，注意防尘、防潮。

4.开封后的试剂应尽快用完，变质、超过有效期的试剂不能使用。

三、容器及试剂添加剂

抗凝剂的真空采血管；血液标本必需添加剂血液标本采集的容器是一次性含EDTA-K

2

是EDTA-K

抗凝剂。

2

四、校准步骤

血细胞分析仪的操作过程分别见SF-3000血细胞分析仪标准操作程序(PLA 301-LJK-ZY-YQ-07)、ADVIA-120血细胞分析仪标准操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-08)和BC-2000血细胞分析仪标准操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-09)中6 仪器校准程序。

五、操作步骤

1.申请单及标本编号整理血液常规检验申请单及血液标本，审核合格后，对检验申请单和血液标本进行编号。

2.上机测试操作过程分别见SF-3000血细胞分析仪标准操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-07)、ADVIA-120血细胞分析仪标准操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-08)、BC-2000血细胞分析仪标准操作程序(PLA301-LJK-ZY-YQ-09)和MEK6108-K血细胞分析仪标准操作程序标准操作程序