好实验四 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告引言：血清蛋白是人体内一类重要的生物大分子，对于维持人体正常生理功能具有重要作用。
因此，对血清蛋白的研究一直备受关注。
本实验旨在利用醋酸纤维薄膜电泳技术，对血清蛋白进行分离和鉴定，以期获得关于血清蛋白的更深入了解。
实验方法：1. 实验仪器和试剂准备本实验所需仪器包括电泳装置、电源、薄膜电泳槽等。
试剂包括醋酸纤维、缓冲液、血清样品等。
2. 实验步骤（1）制备醋酸纤维薄膜：将醋酸纤维溶液均匀涂布在玻璃板上，待干燥后剥离，得到醋酸纤维薄膜。
（2）制备电泳槽：将醋酸纤维薄膜固定在电泳槽中，保证其平整并与电极接触良好。
（3）样品准备：将待测血清样品离心，取上清液作为实验样品。
（4）电泳操作：将实验样品均匀涂布在醋酸纤维薄膜上，接通电源进行电泳，设定适当的电压和时间。
（5）染色和观察：将电泳结束后的薄膜进行染色处理，然后观察薄膜上蛋白带的分布情况。
实验结果：经过实验，我们观察到在醋酸纤维薄膜上形成了多个蛋白带，这些蛋白带代表了血清中不同种类的蛋白质。
通过比较不同样品的蛋白带分布情况，我们可以发现不同样品中蛋白质的种类和含量存在差异。
讨论：1. 醋酸纤维薄膜电泳技术的优势相比于传统的凝胶电泳技术，醋酸纤维薄膜电泳具有以下优势：操作简单、分辨率高、分离效果好、重复性好等。
因此，该技术在血清蛋白分离和鉴定中具有广泛应用前景。
2. 血清蛋白的研究意义血清蛋白是人体内一类重要的生物大分子，对于维持人体正常生理功能具有重要作用。
通过对血清蛋白的研究，可以了解人体内不同蛋白质的种类和含量，从而为临床医学、生物医学研究等领域提供重要的参考依据。
结论：本实验利用醋酸纤维薄膜电泳技术成功分离和鉴定了血清蛋白，观察到了不同蛋白质在薄膜上的分布情况。
该实验结果为进一步研究血清蛋白的功能和生理意义提供了基础数据。
醋酸纤维薄膜电泳技术的应用前景广阔，有望在血清蛋白研究领域发挥重要作用。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果一、前言醋酸纤维薄膜电泳是一种常见的分离血清蛋白的方法，它能够将复杂的血清样品中的蛋白质分离出来，从而便于进行后续的研究。
本文将详细介绍醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果。
二、实验方法1. 样品制备将血清样品加入到离心管中，并进行离心处理，去除其中的颗粒物和红细胞等杂质。
然后取出上清液，进行下一步处理。
2. 薄膜电泳将制备好的样品加入到电泳槽中，并在两端接上电极。
然后通过调节电场强度和时间等参数，使得不同分子量的蛋白质在电场作用下向不同方向移动，并最终被分离开来。
3. 银染将分离好的样品进行银染处理，使得其中存在的蛋白质能够被显色。
然后观察显色效果，并对其进行记录和分析。
三、实验结果经过以上实验步骤，我们成功地得到了血清样品中的蛋白质分离结果。
具体结果如下：1. 蛋白质谱图通过醋酸纤维薄膜电泳分离出来的血清蛋白质谱图如下图所示：（图片略）从图中可以看出，我们成功地将血清样品中的蛋白质分离成了不同的条带，并且这些条带在电泳过程中向不同方向移动，最终被分离开来。
2. 蛋白质种类通过对分离出来的蛋白质进行银染处理后，我们可以看到其中存在多种不同种类的蛋白质。
具体包括：（1）白蛋白（2）球蛋白（3）免疫球蛋白（4）转铁蛋白等。
3. 调整实验参数对结果的影响在实验过程中，我们还尝试了调整一些实验参数，以观察其对结果的影响。
具体包括：（1）电场强度：当电场强度较大时，不同分子量的蛋白质能够更快地向两端移动，并且更容易被分离开来。
但是，如果电场强度过大，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
（2）电泳时间：当电泳时间较长时，不同分子量的蛋白质能够更充分地被分离开来，并且条带也更加清晰。
但是，如果电泳时间过长，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
四、结论通过以上实验结果的观察和分析，我们可以得出以下结论：1. 醋酸纤维薄膜电泳是一种有效的血清蛋白质分离方法。
实验4 醋酸纤维薄膜法分离血清蛋白质
表 血清中各Biblioteka 白组分的等电点和相对分子量清
三、实验试剂和材料
血清：抗A血清（医用） 巴比妥-巴比妥钠缓冲溶液（pH8.6） 染色液：1％氨基黑10B染料 漂洗液 浸出液 透明液 醋酸纤维薄膜：2×8 cm，厚度120μm 用普通的薄载玻片自制点样器 直流稳压电泳仪，水平电泳槽
事先可在滤纸上练习点样，掌握点样技术，这是获得具有清晰区带 的电泳图谱的重要环节之一。
将点好样的薄膜 (无光泽面朝下)两端紧贴在支架的滤纸桥上(加血清 端靠负极)，中部悬空平直。加上槽盖平衡10min，仔细检查电泳装 臵的线路是否正确，然后通电。
Ⅱ.电泳条件
电压90-110V，电流0.4-0.6mA/cm2，通电时间45-60min。泳动距离 约达3.5-4.0cm时即可断电。
将血清样品点样于醋酸纤维膜上，在pH 8.6的缓冲液中 电泳，血清蛋白质均带负电荷移向正极。由于血清中各 蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，分子大小 和形状各异，氨基酸组分、立体构象和相对分子量不同， 因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。电泳后，CAM 经染色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、α1、α2、β、γ—球 蛋白5条区带。 在一定的范围内，蛋白质的含量与结合的染料量呈正比， 故可将各蛋白质区带剪下，分别用0.4 mol/LNaOH溶液浸 洗下来，进行比色，测定其相对含量。
四、实验操作流程
薄膜的准备 电泳槽的准备 点样 电泳 染色与漂洗脱色
Ⅰ.准备和点样：
在浸泡薄膜前应辩清薄膜的正反面，因为浸泡打湿后不易辩别正 反面。 在距膜一端1.5cm用铅笔作好标记，将薄膜漂在缓冲液液面上，迅 速湿润，整条薄膜一致而无白点。然后用竹镊子将薄膜轻轻完全 浸入缓冲液中，待膜完全浸透后使用(约0.5h)。 然后将薄膜制作电桥：将电泳缓冲液倒入电泳槽两边，平衡两边 液面。根据电泳槽的纵向尺寸，剪裁尺寸合适的滤纸条,附着在电 泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电 泳槽的缓冲液内。然后，用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡， 使滤纸紧贴在支架上，即为“滤纸桥”。按照同样的方法，在另 一个电极槽的支架上制作相同的“滤纸桥”。它们的作用是联系 醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的中间“桥梁”。
实验四血清醋酸纤维薄膜电泳
2、点样：将浸透的薄膜从缓冲液取出，夹在两层 点样：将浸透的薄膜从缓冲液取出， 粗滤纸内吸干多余的液体， 粗滤纸内吸干多余的液体，然后平铺在干净玻璃 板或不吸水的纸上（无光泽面朝上）， ），使其底边 板或不吸水的纸上（无光泽面朝上），使其底边 与模板底边对齐。点样时， 与模板底边对齐。点样时，先在点样器上均匀地 沾上血清，再将点样器轻轻地印在点样区内， 沾上血清，再将点样器轻轻地印在点样区内，使 血清完全渗透至薄膜内，形成一定宽度、 血清完全渗透至薄膜内，形成一定宽度、粗细均 匀的直线。点样区距阴极端1.5cm处 见图）。 1.5cm 匀的直线。点样区距阴极端1.5cm处（见图）。
（2）做滤纸桥：根据电泳槽膜支架的宽度，裁剪尺寸 做滤纸桥：根据电泳槽膜支架的宽度， 合适的滤纸条。在两个电极槽中， 合适的滤纸条。在两个电极槽中，各倒入等体积的电 泳缓冲液，在电泳槽的两个膜支架上， 泳缓冲液，在电泳槽的两个膜支架上，放两层滤纸 使滤纸一端的长边与支架前沿对齐， 条，使滤纸一端的长边与支架前沿对齐，另一端浸入 电泳缓冲液中。当滤纸全部润湿后， 电泳缓冲液中。当滤纸全部润湿后，用玻璃棒轻轻挤 压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡， 压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡，使滤纸的一端能紧 贴在膜支架上，即为滤纸桥。（已准备好） 。（已准备好 贴在膜支架上，即为滤纸桥。（已准备好）
NH3+ P COOH
PH﹤ PH﹤PI 阳离子 移向负极
OH– H+
NH3+OH– P COOPH=PI 兼性离子 不动
H+
NH2 P COOPH﹥PI PH﹥ 阴离子 移向正极
⒊溶液的离子强度 电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低。 电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低。 而离子浓度过低，会降低缓冲液的总浓度及缓冲容量， 而离子浓度过低，会降低缓冲液的总浓度及缓冲容量， 不易维持溶液的pH 不易维持溶液的pH值，影响质点的带电量，改变泳 pH值 影响质点的带电量， 动速度。 动速度。 ⒋电渗 在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质(山东大学）Xxxx20190014xxxx生科三班同组者：xxx一、实验目的：掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。
二、实验原理：蛋白质是两性电解质。
在pH 小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH 大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH 的溶液中，所带静电荷不同，因此在电场中移动速度不同，故可利用电泳法奖它们分离。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白，β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同（见表1），在电场中迁移速度不同。
由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH7.0，所以在缓冲液（pH8.6）中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
表1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量蛋白质名称白蛋白α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白γ-球蛋白三、实验器材：醋酸纤维薄膜（2㎝×8㎝，厚度120μm ）、人血清（新鲜、无溶血现象）、培养皿Φ10㎝（×5）、点样器（或玻璃片）、镊子、玻璃棒、电吹风、吸管5.0㎝（×1）、电泳槽、直流稳压电泳仪。
等电点（pI ） 4.88 5.06 5.06 5.12 6.85~7.50 相对分子质量 69000 200000 300000 90000~150000 156000~300000四、实验试剂：1. 巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）：称取巴比妥钠（A.R. ）12.76g 和巴比妥（A.R. ）1.66g ，溶于蒸馏水并稀释至1000ml 。
用pH计校正后使用。
2. 染色液：氨基黑10B0.5g 、甲醇（A.R. ）5ml 、冰乙酸（A.R. ）10ml ，加蒸馏水40ml ，混匀即可。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告引言：血清蛋白是人体内一种重要的生物大分子，它在维持人体正常生理功能中起着至关重要的作用。
因此，对血清蛋白的研究一直备受科学家的关注。
本实验旨在利用醋酸纤维薄膜电泳技术，对血清蛋白进行分离，以期进一步了解血清蛋白的组成和功能。
实验方法：1. 准备样品：从健康人体中提取血清样品，将其离心，得到血清上清液。
2. 制备醋酸纤维薄膜：将醋酸溶液倒入玻璃容器中，将玻璃容器放置在恒温槽中，使醋酸溶液温度保持在60℃左右。
然后，将玻璃容器从恒温槽中取出，迅速浸入冷水中，使醋酸溶液迅速凝固形成醋酸纤维薄膜。
3. 实验操作：将醋酸纤维薄膜放置在电泳槽中，加入足够的电泳缓冲液，使醋酸纤维薄膜完全浸泡其中。
然后，将血清样品均匀涂抹在醋酸纤维薄膜上，并连接电源进行电泳分离。
4. 电泳条件：设置电泳电压和时间，一般情况下，电泳电压为100V，电泳时间为30分钟。
5. 实验结果：观察电泳结束后的醋酸纤维薄膜，记录血清蛋白的分离情况。
实验结果与讨论：经过电泳分离后，观察到醋酸纤维薄膜上出现了多个带状条纹，这些条纹代表了不同的血清蛋白组分。
根据条纹的迁移距离和形状，我们可以初步判断血清蛋白的分子量和电荷特性。
通过对实验结果的分析，我们可以发现，血清蛋白主要可以分为白蛋白、球蛋白、半胱氨酸蛋白和β-球蛋白等几个主要组分。
白蛋白是血清蛋白中含量最高的成分，迁移速度最快；球蛋白次之，迁移速度较慢；半胱氨酸蛋白和β-球蛋白迁移速度最慢。
这些血清蛋白的分离结果与其分子量和电荷特性有关。
白蛋白分子量较小，电荷较弱，因此迁移速度最快；球蛋白分子量较大，电荷较强，迁移速度较慢；半胱氨酸蛋白和β-球蛋白分子量更大，电荷更强，迁移速度最慢。
结论：本实验利用醋酸纤维薄膜电泳技术成功地对血清蛋白进行了分离，并初步了解了血清蛋白的组成和特性。
通过观察醋酸纤维薄膜上的带状条纹，我们可以对血清蛋白的分子量和电荷特性进行初步判断。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告实验室报告
题目：醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
一、实验目的
本实验旨在使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离血清蛋白，并分析其分离效果。
二、实验原理
醋酸纤维薄膜电泳技术是一种利用薄膜作为电泳载体，在交流电场中将带电微粒体分离的方法。
其分离原理在于不同电动力学直径的带电微粒体在局部电场中受到的电离流和离子机动力学的影响不同，导致粒径较小的微粒体在电场中移动的速度较快，粒径较大的微粒体则移动较慢，从而实现了分离。
三、实验步骤
1.将5μL血清样品加入凝胶载体中。
2.在醋酸纤维薄膜电泳仪中进行样品电泳分离，设置电场参数：电压300 V，电泳时间30分钟。
3.将分离后的血清蛋白样品涂在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳定
量和分析。
四、实验结果
通过电泳定量和分析，我们可以得到血清蛋白的分离效果。
我
们发现，血清蛋白样品在30分钟内可以被醋酸纤维薄膜电泳技术
有效地分离，分离效果良好，明显区分了不同种类的蛋白。
五、结论
醋酸纤维薄膜电泳技术是一种非常有效的血清蛋白分离方法。
通过本次实验，我们得到了良好的分离效果和明确的蛋白种类区分。
这种技术具有高分离效率、高通量、简单易行等特点，可以
在临床医学、药物研发、生命科学等领域得到广泛应用。
此外，在使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离血清蛋白时，需要注意控制一定的电场参数，以确保实验效果。
实验四血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
• 4. 染色
取出纤维薄膜——放于培养皿染色液中染 色10min.
• 5. 漂洗
取出纤维薄膜——放在漂洗液中漂洗数 次——漂洗到可见色带清晰的电泳图谱。
• 6. 定量测定
• 2 点样：
• 取出2块载玻片——分别滴一滴血清蛋 白A和血清蛋白B——然后用盖玻片的平边 取样（注意均匀）——然后轻轻的在纤维 薄膜的铅笔横线上点样（注意要轻）
• 3 电泳：
• 在电泳槽中搭建好滤纸桥——倒入缓冲 液（注意两边液面高度一致）——将纤维 薄膜架于桥上（点样端靠近负极，点样面 朝下）——接好导线——调节电泳仪参 数——电泳30min
• 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄 膜作为支持物的电泳方法。
• 醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ它具有均一的泡沫样的结构，有强渗透 性，对分子移动无阻力，作为区带电泳 的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、 样品用量少，应用范围广，分离清晰， 没有吸附现象等优点。
二 实验步骤
• 1. 浸泡
用镊子取醋酸纤维薄膜1张——分别 光泽面和粗糙面——然后在粗糙面离 边缘2cm处用铅笔轻轻的画一条与边 缘平行的直线（为了点样方便）—— 然后将薄膜放在巴比妥缓冲液中浸泡 20min——用镊子取出纤维薄膜——y 用滤纸吸干——平置于载玻片上（粗 糙面朝上）
实验四 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
• 由于血清中各蛋白组分等电点不同而使表面净电荷量 不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不 同，彼此得以分离。
• 电泳后，CAM经染色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、 α120、20/6/13α2、β、γ—球蛋白5条区带。
5．连接电泳槽与电泳仪对应的正负极，开启电源通电。电压160V 。电泳50分钟，断电。
6．染色：用镊子取出薄膜条投入染液8分钟，染色期间轻轻晃动染 色皿，使染色充分。
7. 漂洗 :从染液中取出薄膜条并尽量沥去染液，投入漂洗皿中反复 漂洗，直至背景漂净为止。此时清晰可见5条色带，待干。
2020/6/13
• 1）先加还原剂如巯基乙醇打开-S-S-；
• 2）SDS破坏蛋白质构象，与氨基酸侧链充分结合，形成蛋白质 亚基-SDS胶束。SDS是阴离子，使多肽链带上负电荷，该电荷 量远远超过蛋白质分子原有电荷量，掩盖了不同蛋白质之间的电 荷差别。电泳迁移率主要取决于蛋白质或亚基分子量的大小。
2020/6/13
泳动度U
•
泳动度：带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度
U=v/E=dl/Vt
•
E:电场强度，每cm的电压降，V/l
•
v:颗粒的移动速度，d/t
•
d:颗粒的移动距离
•
t:通电时间
•
V:加在支持物两端的实际电压
•
l:支持物的有效长度
2020/6/13
影响泳动速度的主要因素
1）电场强度：（越大，移动速度越快）
• 凝胶可以是平板（垂直板型）或柱子（盘状）
2020/6/13
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白【实验目的】掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。
【实验原理】蛋白质是两性电解质。
在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
表1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量蛋白质名称等电点相对分子质量白蛋白 4.88 69000α1-球蛋白 5.06 200000α2-球蛋白 5.06 300000β-球蛋白 5.12 90000~150000γ-球蛋白 6.85~7.50 156000~300000 在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH 溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。
也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。
肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。
肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。
【实验器材及试剂】器材：醋酸纤维薄膜，人血清或牛血清，烧杯，培养皿，镊子，载玻片，盖玻片，电吹风，电泳槽，直流稳压电泳仪，剪刀，手套，滤纸；试剂：巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）染色液（可重复使用，使用后回收）漂洗液（100ml每组）：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml，水50ml 透明液（20ml每组）：无水乙醇14ml+冰乙酸4ml，混匀【操作方法】1. 薄膜浸泡：将醋酸纤维薄膜在缓冲液中浸透（30min），取出后用滤纸吸去多余缓冲液。
实验四 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
实验四 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
实验目的
1、了解电泳技术的一般原理。 2、掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的原理
和方法。 3、了解常用的蛋白分离的方法。
实验四 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
背景知识
电泳技术，是指在电场作用下，带电颗粒在由于所带 的电荷不同以及分子大小差异而有不同的迁移行为从 而彼此分离开来的一种实验技术。
实验四 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
由于迁移率不同而被分离。 成分：性质稳定，不易电解。 条点样的一端放在负极上。
实验原理 点样时,应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去,以免液体引起样品扩散,但不宜太干,否则样品难以进入膜内,影响分离效果.
电泳技术，是指在电场作用下，带电颗粒在由于所带的电荷不同以及分子大小差异而有不同的迁移行为从而彼此分离开来的一种实验 技术。 染色： 电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡5-10分 次至无蛋白区底色脱净为止，可得到色带清晰的 等高，将膜条上样面平行扣于电泳槽支架的滤纸桥上。
钟。 酯。该膜具有均一的泡沫状结构，渗透性强，对分子移动阻力小，厚度为120
（3）缓冲液：pH 决定Q，(pH-PI)越大，Q越多，V越大；
6巴）比，妥氨缓μ基冲黑m液1（。0Bp，H广8漂.泛洗液应（配用方于同书医上学） 临床中各种生物分子的分离分析中，如血清蛋白、血
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
点样时,应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去,以免液体引起样品扩散,但不宜太干,否则样品难以进入膜内,影响分离效果.
实验四 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
结果示意图：
γ
β
α2 α1 清蛋白
分子量小、等电点低的，在相同碱性PH缓冲体系中， 带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。例 如人血清蛋白在PH8.6的缓冲体系中电泳，染色后 可显示5条区带。清蛋白泳动最快，其余依次是球 蛋白 。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验原理
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验原理大家好，今天我要给大家讲解一下醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验的原理。
我们要明白这个实验是用来干什么的。
它的主要目的就是研究血清蛋白的结构和性质，以及它们在生物体内的作用。
那么，这个实验到底是怎么做的呢？下面我就要为大家详细地介绍一下。
我们要准备一些材料和设备。
这些材料包括：血清、醋酸纤维薄膜、电泳缓冲液、电极等。
而设备则包括：电泳仪、紫外线照射仪、显微镜等。
接下来，我们就要开始实验了。
1. 实验步骤(1)样品制备我们需要将血清样品进行处理，使其达到一定的浓度。
然后，将样品加入到电泳缓冲液中，使之均匀分散。
这样，我们就得到了一个含有血清蛋白的电泳缓冲液。
(2)电泳接下来，我们要将电泳缓冲液倒入到电泳仪中。
在电泳过程中，电极会不断地向样品中施加电压，使得血清蛋白在电场的作用下发生迁移。
我们还要控制电泳的速度和时间，以便观察到血清蛋白的变化情况。
(3)染色为了让我们更好地观察到血清蛋白的结构和性质，我们需要对电泳后的样品进行染色。
常用的染色方法有荧光染色和银染法。
通过这些方法，我们可以清晰地看到血清蛋白的各种形态和分布情况。
(4)检测与分析我们需要对染色后的样品进行检测和分析。
这包括使用显微镜观察样品的形态和结构，以及利用各种仪器对血清蛋白进行定量和定性分析。
通过对这些数据的收集和整理，我们就可以得出关于血清蛋白的一些重要结论。
2. 实验原理那么，为什么醋酸纤维薄膜电泳可以实现血清蛋白的分离呢？这是因为醋酸纤维薄膜具有一些特殊的性质。
它的孔径非常小，只能让较小的分子通过。
这样一来，大的分子如血清蛋白就会被排斥在外，无法进入到薄膜内部。
醋酸纤维薄膜具有良好的亲水性，可以与水形成氢键。
这样一来，水分子就会聚集在薄膜表面，形成一层水膜。
而血清蛋白则会在水膜中自由移动，从而实现分离的目的。
电泳过程中的电流也会对血清蛋白产生影响。
当电流通过样品时，会使样品中的离子发生定向移动。
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
三、操作
1、准备： （1）浸泡：取8cm2cm醋酸纤维薄膜条一 张，浸入pH8.6的巴比妥-巴比妥钠缓冲液中， 浸泡约30min，完全浸透后，用镊子轻轻取 出，夹在滤纸中吸去多余的缓冲液，然后无 光泽面向上平放在干净滤纸上。 （ 2 玻片宽度应小于 膜条），然后在距膜条一端1.5cm处轻轻落 下并随即提起。加样应力求均匀（可先在普 通滤纸上练习点样几次），要求在膜条上点 上细条状的血清样品。
醋酸纤维薄膜、滤纸、电泳仪、电泳槽、小镊子（无 齿）、烧杯、量筒、载玻片、培养皿。
本实验以醋酸纤维薄膜作为支持物，于浸 有缓冲液的薄膜一端加微量血清，膜两端连 接于缓冲液。所用缓冲液的pH为8.6，大于 血清中各种蛋白质的等电点。因此，各种蛋 白质皆带负电荷，在电场中向正极方向泳
动，因泳动速度不同而被分离。从正极端起， 依次为清蛋白、α1- 、α2- 、β-和γ-球蛋白， 将蛋白质染色后，可按染色区带位置进行定 性观察，也可对各条色带进行定量测定。
四、结果 将电泳图谱贴在实验报告中。
试剂和器材
1. 试剂： （1）血清：人血清或动物血清； （2）pH8.6巴比妥-巴比妥钠缓冲液：称取巴比妥钠 12.76g和巴比妥1.66g，溶于蒸溜水，定容至1000mL 。 （3）染色液：称取氨基黑10B 0.5g，加蒸溜水40mL， 甲醇50mL和冰醋酸10mL，混匀即可。 （4）漂洗液：取95％乙醇45mL，冰醋酸5mL和蒸溜水 50mL ，混匀即可。 2. 器材 ：
1.5cm
6.5cm
（－）
（＋）
（3）上槽：将点好样的膜条，无光泽面向 下，平悬于电泳槽支架的滤纸桥上，两端紧 贴在滤纸桥上，点样端置于负极，（把膜条 摆平拉直后）盖好电泳槽盖，平衡10min。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
图3-6 醋酸纤维素薄膜规格及点样位置示意图 （虚线处为点样位置）
3、
电泳
用竹夹子将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的 滤纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支 架上，如图3-7所示，要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直， 中间不能下垂。如一电泳槽中同时安放几张薄膜， 则薄膜之间应相隔几毫米。盖上电泳槽盖，使薄膜 平衡10min。 用导线将电泳槽的正、负极与电泳仪的正、负极分 别连接，注意不要接错。在室温下电泳，打开电源 开关，用电泳仪上细调节旋扭调到每厘米膜宽电流 强度为0.3mA（8片薄膜则为4.8mA）。通电10-15min 后，将电流调节到每厘米膜宽电流强度为 0.5mA （ 8 片共8mA），电泳时间约50-80min。电泳后调节旋扭 使电流为零，关闭电泳仪切断电源。
⑷ 电量的选择
电泳过程应选择合适的电流强度，一般电流强度 为0.4-0.5mA/cm宽膜为宜。
电流强度高，则热效应高，尤其在温度较高的环 境中，可引起蛋白变性或由于热效应引起缓冲液 中水分蒸发，使缓冲液浓度增加，造成膜片干涸。 电流过低，则样品泳动速度慢且易扩散。
⑸ 染色液的选择 对醋酸纤维素薄膜电泳后染色应根据样品的特点 加以选择。其原则是染料对被分离样品有较强的 着色力，背景易脱色；应尽量采用水溶性染料， 不宜选择醇溶性染料，以免引起醋酸纤维素薄膜 溶解。 应控制染色时间。时间长，薄膜底色深不易脱去； 时间太短，着色浅不易区分，或造成条带染色不 均匀，必要时可进行复染。
⑹透明及保存 透明液应临用前配制，以免冰乙酸及乙醇挥发而 影响透明效果。这些试剂最好选用分析纯。透明 前，薄膜应完全干燥。透明时间应掌握好，如在 透明乙液中浸泡时间太长则薄膜溶解，太短则透 明度不佳。 透明后的薄膜完全干燥后才能浸入液体石蜡中， 使薄膜软化。如有水，则液体石蜡不易浸入，薄 膜不易展平。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果引言醋酸纤维薄膜电泳是一种常用于生物分离和分析的技术，可以通过电场作用将带电粒子在纤维薄膜上移动，实现对混合物的分离。
本实验旨在利用醋酸纤维薄膜电泳技术对血清蛋白进行分离，以便进一步研究其组成和功能。
实验方法1.准备醋酸纤维薄膜：将醋酸纤维薄膜切割成所需尺寸，并在实验室条件下保持干燥。
2.准备电泳槽：将醋酸纤维薄膜放置在电泳槽中，确保其与电极接触良好。
3.准备样品：采集血清样品，并将其稀释至适当浓度。
4.进行电泳分离：将稀释后的血清样品均匀地涂抹在醋酸纤维薄膜上，然后施加适当电场使样品在薄膜上移动。
5.停止电泳：根据需要的分离程度，适时停止电泳过程。
6.分析结果：观察血清蛋白在醋酸纤维薄膜上的分离情况，并记录相关数据。
实验结果血清蛋白分离图谱根据实验结果，我们观察到在醋酸纤维薄膜上成功地分离了血清蛋白。
下图展示了血清蛋白分离图谱，其中纵轴表示电迁移率，横轴表示时间。
1.血清蛋白A的电迁移率为X，迁移时间为Y。
2.血清蛋白B的电迁移率为X，迁移时间为Y。
3.血清蛋白C的电迁移率为X，迁移时间为Y。
4.…血清蛋白组成分析根据血清蛋白分离图谱，我们可以进一步分析血清蛋白的组成。
通过与已知标准品进行比对，我们确定了以下血清蛋白的组成及相对含量：1.血清蛋白A占总蛋白的X%。
2.血清蛋白B占总蛋白的X%。
3.血清蛋白C占总蛋白的X%。
4.…血清蛋白功能研究根据血清蛋白的组成分析结果，我们可以进一步研究血清蛋白的功能。
以下是我们对某些血清蛋白功能的初步研究结果：血清蛋白A的功能1.血清蛋白A在某种生理过程中起到重要的调节作用。
2.进一步研究表明血清蛋白A可能与X疾病的发生和发展有关。
血清蛋白B的功能1.血清蛋白B与免疫系统的调节密切相关。
2.研究发现血清蛋白B在X疾病的治疗中具有潜在的应用价值。
血清蛋白C的功能1.血清蛋白C参与了血液凝固过程的调控。
2.进一步研究表明血清蛋白C可能与X疾病的预后有关。
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4.醋酸纤维素溶于有机溶剂（ 丙酮、氯仿、 4.醋酸纤维素溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯 醋酸纤维素溶于有机溶剂 乙烯、乙酸乙酯等） 乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成 为醋酸纤维素薄膜。 为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结 厚度约为120 有很强的通透性， 构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，对分 子移动阻力很小。该薄膜电泳具有微量、快速、 子移动阻力很小。该薄膜电泳具有微量、快速、 微量 简便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附现象 无拖尾和吸附现象等优 简便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附现象等优 点。现已广泛用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、 现已广泛用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、 血红蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。 血红蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。
4.电泳 4.电泳
点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤 端的薄膜平贴在阴极 将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤 纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支 朝下）， 纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支 架上(见下图) 要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直， 架上(见下图)。要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直，中 间不能下垂。 间不能下垂。 连接好电泳仪。在室温下电泳， 连接好电泳仪。在室温下电泳，打开电源开 调节电流强度0.3mA/cm 0.3mA/cm膜宽度电泳时间约为 关，调节电流强度0.3mA/cm膜宽度电泳时间约为 1h。电泳后，关闭电泳仪切断电源。 1h。电泳后，关闭电泳仪切断电源。
实验器材
1. 2. 3. 4. 5. 电泳仪：为电泳提供直流电源。 电泳仪：为电泳提供直流电源。 电泳槽：为电泳提供场所。 电泳槽：为电泳提供场所。 可用盖玻片或微量加样器。 血清加样器 ：可用盖玻片或微量加样器。 醋酸纤维素薄膜：2cm× 醋酸纤维素薄膜：2cm×8cm 其它： 培养皿（直径9 10cm）、滤纸、镊子等。 ）、滤纸 其它： 培养皿（直径9-10cm）、滤纸、镊子等。
思考题
比较醋酸纤维薄膜电泳与纸电泳的异同点。 1、比较醋酸纤维薄膜电泳与纸电泳的异同点。 指出醋酸纤维薄膜用作电泳的支持物有何特点。 2、指出醋酸纤维薄膜用作电泳的支持物有何特点。 点样为什么要在粗糙面？ 3、点样为什么要在粗糙面？电泳时为什么点样面要向下 放置？ 放置？ 如果区带的分离效果不好， 4、如果区带的分离效果不好，试分析可能存在有哪些因 素的影响？ 素的影响？
正常血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图
1．为清蛋白 ． 2，3，4，5，分别为 1-，α2-，β-，及γ-球蛋白 ， ， ， ，分别为α ， ， ， 球蛋白 6.为点样原点 为点样原点
注意事项
薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。 1、薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。 2、点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸 点样时， 以不干不湿为宜 吸水量以不干不湿为宜。 去，吸水量以不干不湿为宜。 点样时，动作要轻、 用力不能太大， 3、点样时，动作要轻、稳，用力不能太大，以免 片或印出凹陷影响电泳区带分离效果。 损坏膜 片或印出凹陷影响电泳区带分离效果。 点样应点在薄膜的毛面 毛面上 点样量要适量， 4、点样应点在薄膜的毛面上，点样量要适量，不 宜过多或过少。 宜过多或过少。 电泳时应将薄膜的点样端置于电泳槽的负极端， 5、电泳时应将薄膜的点样端置于电泳槽的负极端， 且点样面向下。 且点样面向下。 应控制染色时间。时间长，薄膜底色不易脱去； 6、应控制染色时间。时间长，薄膜底色不易脱去； 时间太短，着色不易区分， 时间太短，着色不易区分，或造成条带染色不均 必要时可进行复染。 匀，必要时可进行复染。
实验材料和试剂
材料： 材料：牛血清 试剂： 试剂： 巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6) 1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6) 氨基黑10B 10B染色液 2、0.5% 氨基黑10B染色液 3、漂洗液
实验操作
1. 电泳槽的准备
电泳槽有两个互相隔离的槽， 电泳槽有两个互相隔离的槽，各自装有缓冲 接不同的电极，红色为 黑色为 液，接不同的电极，红色为正极，黑色为负极。 每个槽上都有一根可移动的横杆， 每个槽上都有一根可移动的横杆，滤纸的一头搭 在横杆上，另一头浸入缓冲液中，形成了滤纸桥。 在横杆上，另一头浸入缓冲液中，形成了滤纸桥。 点好样的醋酸纤维薄膜就搭在滤纸桥上。 点好样的醋酸纤维薄膜就搭在滤纸桥上。
5. 经醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白按电泳速 度分为5条区带， 极端依次为清蛋白 α1球 清蛋白、 度分为5条区带，从正极端依次为清蛋白、α1球 蛋白、α2球蛋白 球蛋白、 球蛋白及 球蛋白， 蛋白、α2球蛋白、β球蛋白及γ球蛋白，经染 色可计算出各蛋白质的百分含量。 色可计算出各蛋白质的百分含量。
2. 醋酸纤维素薄膜的润湿
将醋酸纤维素薄膜完全浸泡于缓冲液中约30min后 将醋酸纤维素薄膜完全浸泡于缓冲液中约30min后， 30min 用镊子小心夹住薄膜一端，放在折叠的滤纸中， 用镊子小心夹住薄膜一端，放在折叠的滤纸中，并用滤 纸吸干表面液体。 纸吸干表面液体。
3.点样 3.点样
把膜条铺在玻璃板上（无光泽面朝上），将点样器 把膜条铺在玻璃板上（无光泽面朝上），将点样器 ）， 在血清中沾一下（量薄薄一层为好）， ），再在膜条一端 在血清中沾一下（量薄薄一层为好），再在膜条一端 1.5-2cm处轻轻水平地落下并随即提起 处轻轻水平地落下并随即提起， 1.5-2cm处轻轻水平地落下并随即提起，这样即在膜条上 点上了细条状的血清样品。（此步是实验的关键 。（此步是实验的关键! 点上了细条状的血清样品。（此步是实验的关键!）
5.染色： 5.染色： 染色 电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B 10B染 电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染 色液的培养皿中浸泡5 10min。（染色液回收 。（染色液回收） 色液的培养皿中浸泡5-10min。（染色液回收） 6.漂洗： 6.漂洗： 漂洗 将薄膜从染色液中取出, 将薄膜从染色液中取出,自来水下冲洗除去多 余的染色液后放入盛有漂洗液的培养皿中漂洗， 余的染色液后放入盛有漂洗液的培养皿中漂洗， 直至背景蓝色脱尽，条带清晰为止， 直至背景蓝色脱尽，条带清晰为止，可得到色带 清晰的电泳图谱 。
Байду номын сангаас
3.血清中各种蛋白质的等电点在pH4.0～ 3.血清中各种蛋白质的等电点在pH4.0～7.3 血清中各种蛋白质的等电点在pH4.0 之间，在pH8.6的缓冲溶液中均带负电荷， 之间， pH8.6的缓冲溶液中均带负电荷， 的缓冲溶液中均带 在电场中向正极泳动。 在电场中向正极泳动。血清中各种蛋白质 正极泳动 的等电点不同，所以带电荷量也不同。 的等电点不同，所以带电荷量也不同。此 外各种蛋白质的分子大小各有差异， 外各种蛋白质的分子大小各有差异，因此 在同一电场中泳动的速度不同。 在同一电场中泳动的速度不同。分子小而 带电荷多者，泳动较快；反之，则较慢。 带电荷多者，泳动较快；反之，则较慢。
实验五
醋酸纤维薄膜电泳法分离 血清蛋白
实验目的
掌握电泳法分离血清蛋白质的原理； 掌握血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的操 作方法。
实验原理
1.电泳： 1.电泳：是指带电粒子在电场中向本身所带电荷相 电泳 反的电极移动的现象。 反的电极移动的现象。 在一定pH条件下， pH条件下 在一定pH条件下，不同的蛋白质由于具有不 同的等电点而带不同性质的电荷， 同的等电点而带不同性质的电荷，因而在一定的 电场中它们的移动方向和移动速度也不同， 电场中它们的移动方向和移动速度也不同，即它 们的电泳迁移率不同，因此， 们的电泳迁移率不同，因此，可使它们分离 2.影响电泳迁移率的因素 影响电泳迁移率的因素： 2.影响电泳迁移率的因素： 内在因素：蛋白所带净电荷的量、 内在因素：蛋白所带净电荷的量、蛋白的大小和 形状 外界因素：电场强度、溶液的pH pH值 外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离子 强度和电渗现象