菌种的复苏、传代管理规程
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程传代用菌种采用甘油冷冻管保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合甘油并分装至冷冻管中，冷冻管标注菌种名称、代数、保存日期等信息，然后放置于-80℃冰箱中保存。
每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。
5.3.2.2液体石蜡保存法对于一些难以保存的菌种，采用液体石蜡保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合液体石蜡并分装至玻璃瓶中，瓶口用铝箔密封，标注菌种名称、代数、保存日期等信息，保存温度为-70℃。
每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。
5.4菌种的传代传代用菌种每年进行一次复苏和传代。
复苏后，将菌种接种至适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，按照规定的传代代数制备传代用菌种，并及时更新菌种库存记录。
5.5菌种的使用使用菌种前，应先确认菌种的品质和纯度，并按照规定的传代代数制备工作用菌种。
使用后，应及时更新菌种库存记录，并进行相应的消毒处理。
5.6菌种的销毁菌种在使用过程中，如出现变异或污染等情况，应及时进行应灭活处理，并填写《菌种销毁记录表》，经主管部门审核同意后，进行销毁处理。
菌种库存中长期未使用的菌种，应定期进行清理和销毁处理。
菌复苏、复壮；Sabouraud葡萄糖琼脂培养基：用于白色念珠菌复苏、复壮；青霉素-链霉素琼脂培养基：用于铜绿假单胞菌复苏、复壮。
5.4.1.1.3复苏步骤：1.取出保存好的菌种管，用接种针在酒精灯上消毒；2.将接种针在75%酒精中消毒，再用酒精棉球擦拭消毒；3.用接种针在相应的培养基上进行接种；4.置于适宜温度下孵育，待菌落出现后进行传代或进行实验。
5.4.1.2标准菌株的确认通过形态学、生理生化特性、分子生物学等方法进行鉴定，确认菌株的纯度和种属。
5.4.1.3标准菌株的传代将菌株从原始保存方式中转移到新的保存方式中，确保菌株的保存和传承。
传代次数不宜过多，一般不超过10代。
菌种传代操作规程
从5℃的冰箱内取出第三代工作菌种，用冷却的灭菌接种环挑取1个 菌落接种于相应的琼脂斜面培养基中，置于30～35℃的培养箱内培 养18～24小时后，确认符合后置于5℃的冰箱内作为第四代工作菌 种保存，备用。 3.5 接种操作规范 3.5.1点燃酒精灯，左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手 拿接种棒后端，将接种环烧红30秒钟，随后将全部接种棒金属部分 在火焰上烧灼，往返通过3次。右手用无名指、小指及掌部夹住硅 胶塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拨开硅胶塞，将 接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔 上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。 塞上硅胶塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂小斜面一支，右手用 无名指、小指及掌部夹住硅胶塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼， 右手再轻轻拨开硅胶塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部，由 低向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使菌划在斜面的表面 上。 3.5.2 取出接种环，在火焰旁将培养基管硅胶塞堵上，然后将接 种过菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。 3.5.3 将已接种好的细菌管置30—35℃细菌培养箱培养18—24小 时，霉菌管置23—28℃霉菌培养箱培养5-7日。取出后放入冰箱保 存并上锁。 3.6 菌种的传代次数不得超过5代，每一菌株每次传代不超过15 支；1支作为下次传代用，其余作为检验用，每月传代一次。 3.7 传代完毕后，在每支试管上标明菌株名称、代数、序号、传 代日期、有效期。 3.8 实验用菌株均来自于上海市食品药品检验所。
实验室菌种管理规程
实验室菌种管理规程目的：保证菌种合理、有效地使用和保存，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，保证实验室和社会的生物安全。
职责：主管负责菌种的出入库保管、保存、分发，组员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
范围：本规程适用于实验室菌种的管理，包括菌种的保存、传代、使用及销毁等。
1菌种的保存1.1工作用菌种的保存工作用菌种采用平板低温保存法。
将菌种接种在适宜的固体培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间为1周，超过该期限前挑取单菌落重新于琼脂平板划线活化，若菌落活力下降则从-80℃冰箱中取用甘油冷冻管。
1.2传代用菌种的保存采用甘油冷冻管收藏法。
1.2.1甘油冷冻管保存法用无菌接种环轻轻刮平板上的单菌落并接种至适宜的液体培养内，置于适宜的培养条件下培养，菌液充分振荡后取适宜体积加入到已灭菌的冷冻管内，再加入等体积的无菌甘油（浓度40%），即为20%甘油菌悬液，轻轻振摇，使内容物充分混合，在-80℃冷冻条件下保存，保存期限为3年。
每个菌株保存至少30个无菌冷冻管。
使用时，取出一支放至室温，接种增菌培养或接种至琼脂平板复苏，挑取纯菌落传代或工作用。
2菌种的传代2.1工作用菌种的传代当工作用菌种代数小于5时，在规定保存期限内，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。
取在冰箱2～8℃保存的工作用菌种用普通琼脂平板传代，并将新传代的培养物替代原有的菌种，作为工作用菌种。
也可取用“甘油冷冻管保藏法”保存的菌种，进行复苏，直接作为工作用菌种。
菌种每1周传代一次，当超过5代，须用“甘油冷冻管保藏法”保存的原始菌种传代。
2.2传代用菌种的传代首先划线接种确认，根据日常检修事情的需要量，挑取纯菌落转接平板，作为事情用菌种；同时，结合菌种的代数和最长保存期限，挑取纯菌落制成菌悬液，按“1.2”的办法制备甘油冷冻管数支，作为传代用菌种。
菌种复苏传代保存操作规程
菌种复苏传代保存操作规程菌种复苏传代保存是微生物实验室中常见的操作之一，其目的是将冷冻保存的菌种从冷冻状态中恢复出来，并按照一定的方法传代保存。
以下是菌种复苏传代保存操作规程，共1200字。
一、实验准备1.1 准备所需物资：包括菌种冻存试管、培养基、称量仪器、吸管、移液器、贴标纸等。
1.2 检查完整的实验设备：包括洁净台、离心机、培养箱、移液枪等，确保设备无损坏。
1.3 检查所需培养基的质量：检查培养基的配制日期、有效期等，确保培养基适用于所需菌种。
二、复苏菌种2.1 取出含菌种的冻存试管：从冷冻保存箱中取出所需菌种的冻存试管，并将试管放置于洁净台上。
2.2 快速复苏：将冻存试管置于培养基底部，用力旋转数次，使菌种快速复苏。
2.3 开孔放气：用火焰消毒后的吸管尖端取出菌种后将其放入含菌种的冻存试管中，并迅速封闭试管口，以防菌种污染。
2.4 培养基选择：根据菌种类型的不同，选择相应的培养基进行培养。
如需选择无菌培养基时，需要在使用前先进行灭菌处理。
2.5 培养条件：将含菌种的试管放入预先灭菌处理过的培养基中，确保培养基将菌种完全覆盖，并在适当的培养条件下培养，包括温度、湿度、光照等。
三、传代保存3.1 菌种鉴定与纯化：复苏后的菌种应进行鉴定与纯化，以确保菌种的纯度和正确性。
3.2 菌种传代：将复苏后的菌种接种到新的培养基中，进行传代培养。
传代时应注意传代次数，一般不超过10次。
3.3 传代培养条件：传代时应保持相同的培养条件，以保证菌种的生长状态和性状的稳定。
3.4 保存方式选择：根据菌种的特性和实验需求，选择适当的保存方式，包括持续传代培养、冷冻保存、冷冻干燥等。
3.5 标识和记录：每次传代后，应及时贴标记于保存容器上，并记录传代时间、次数和相关信息，以便后续使用和管理。
四、实验安全与废弃物处理4.1 实验环境安全：在进行菌种复苏传代保存操作时，应注意实验室的环境安全，保持实验室干净、整洁，并严格遵守实验室操作规范。
菌种复苏传代操作规程
菌种复苏传代操作规程一、背景介绍菌种复苏传代操作是微生物实验室中常见的实验操作之一。
通过复苏并传代菌种，能够恢复其活性并扩大其数量，为后续的实验研究提供足够的菌种量。
本文将对菌种复苏传代操作进行详细的介绍和规程。
二、菌种复苏1.准备工作–检查实验室条件：确保工作台面、培养箱和工具的清洁程度，防止交叉污染。
–准备所需培养基：根据菌种类型选择合适的培养基，如琼脂培养基、液体培养基等，并按照要求配制。
–检查试剂：检查培养基和其他试剂的质量和保存情况，确保使用的试剂没有变质。
–备注标签：为每个培养皿或试管添加标签，标明菌种名称、菌株编号和日期等信息。
2.菌种复苏步骤–从冷冻细胞库中选择合适的冻存物：确保选择与实验目的一致的菌种冻存物进行复苏。
–快速复苏：将冻存物迅速取出，放在含有适量温和培养基的试管中，轻轻摇匀。
–孵育：将试管置于适当的温度和湿度条件下，进行孵育。
通常温度为30°C，孵育时间根据菌种不同而异，一般为24-48小时。
–观察生长情况：观察菌种的生长情况，包括菌落数量和形态特征等。
确认菌种是否成功复苏。
三、菌种传代1.准备工作–准备培养基和试剂：根据菌种特性选择合适的培养基，并按照要求配制好。
–准备培养皿或试管：确保培养皿或试管干净，不含任何污染。
–注射器和接种环的消毒：使用75%乙醇对注射器和接种环进行消毒处理，避免交叉感染。
2.菌种传代步骤–挑取菌落：使用消毒过的注射器，挑取菌落，并迅速划线于新的培养皿或试管中。
–均匀接种：使用消毒过的接种环，将菌落均匀划线于培养皿或试管表面。
–孵育：培养皿或试管置于适当的温湿度条件下，进行孵育。
温度和孵育时间根据菌种特性而异，需根据实验需求进行调整。
–观察生长情况：观察菌种的生长情况，如菌落数量、形态特征和菌落色泽等。
四、菌种传代操作注意事项1.严格消毒–操作前要进行充分的手部卫生和工作台面的消毒。
–使用消毒过的工具，如注射器、接种环等，避免交叉感染。
菌种传代、使用、保存操作规程
菌种传代、使用、保存操作规程1.目的本文件规定了微生物检验用菌、无菌检验用菌及抗生素检验用菌的接种、保存，传代方法及要求，适用于中心化验室进行检验用菌的接种和传代操作。
2. 适用范围适用于中心化验室菌种管理人员进行检验用菌的接种、保存和传代操作。
3.职责菌种管理人员应按本程序的规定操作。
4.参考文件及相关程序B08(02)005 微生物实验室标准管理程序B08(02)019 微生物检验用菌标准管理程序B08(02)020 检验用培养基标准管理程序5. 程序5.1.对照菌株名称·金黄色葡萄球菌〔CMCC(B) 26 003〕·铜绿假单胞菌〔CMCC(B) 10 104〕·生孢梭菌〔CMCC(B) 64 941〕·枯草芽孢杆菌〔CMCC(B) 63 501〕·大肠埃希菌〔CMCC(B) 44 102〕·白色念珠菌〔CMCC(F) 98 001〕·黑曲霉〔CMCC(F) 98 003〕·短小芽孢杆菌〔CMCC(B) 63 202〕·藤黄微球菌〔CMCC(B) 28 001〕·乙型副伤寒沙门菌〔CMCC(B) 50 094〕5.2.菌种来源中国药品生物制品检定所提供的冷冻干燥菌种（即安瓿）。
5.3. 微生物检验用菌菌悬液的制备5.3.1.菌种的复苏与传代5.3.1.1. 取备妥的冷冻菌种安瓿，灭菌的毛细滴管、双碟、镊子、注射器、灭菌水及复苏菌种所需的培养基等物品，移入超净工作台。
5.3.1.2. 用75%酒精棉球擦净冷冻菌种安瓿外壁，放在灭菌双碟内，待干。
5.3.1.3. 点燃酒精灯，将安瓿的封口一端在火焰上烧灼，用灭菌毛细管吸取灭菌水或胰酪大豆胨液体培养基少许在灼热处，使其骤冷,用干燥无菌纱布包裹安瓿，安瓿掰开。
5.3.1.4. 在不离开火焰圈内，迅速用注射器抽取约0.5ml胰酪大豆胨琼液体培养基，注入安瓿内，轻轻震摇使冷冻菌块溶解、混匀，随即用注射器吸取安瓿内容物分别接种至1支胰酪大豆胨液体培养基，1支普通胰酪大豆胨胰酪大豆胨琼脂斜面培养基内。
菌种传代操作规程2024版药典菌种传代
菌种传代操作规程2024版药典菌种传代
菌种传代操作规程2024版药典菌种传代将依照以下步骤进行：
1. 准备工作：确保操作台面和工具已经经过清洁和消毒处理，确保操作室内环境的无
菌状况。
准备所需的培养基、试管、移液器、平板等。
2. 菌种接种：将初代培养物中适量的菌液采用无菌的移液器转接到新的无菌培养基中，或将菌液均匀地刷在无菌平板上。
注意避免交叉污染。
3. 培养：将接种好的培养基或平板放置于恒温箱中，在适当的温度和湿度条件下培养
一定时间，以确保菌种生长繁殖。
4. 传代：在培养基的不同时间点上，将菌种取出进行传代。
传代时，选择菌落或液体
中适量的菌液接种到新的无菌培养基中，或刷在无菌平板上。
5. 观察和记录：观察传代后菌种的生长情况，如菌落形态、色素等，进行记录。
注意
观察菌种的纯度和无菌状态。
6. 储存：将传代后的菌种保存在适当的条件下，如冷冻保存或冷藏保存，以备后续使用。
7. 清理：完成菌种传代后，及时清理操作区域和工具，进行消毒处理，确保无菌状态。
以上操作规程为菌种传代的基本步骤，根据具体的实验目的和条件，还可以根据需要
进行相应的修改和调整。
★菌种传代与复苏★
★菌种传代与复苏★菌种传代与复苏（实操）一、菌种传代与复苏1.1 菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的生产、微生物致病性研究，药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的菌种、微生物具有生命活力，在传代过程中易发生变异甚至死亡，因此菌种传代与保藏是一项重要的基础工作。
1.2 菌种代号国内药品微生物检验所用的菌种代号是CMCC(F)或CMCC(B)，CMCC--中国医学菌种保藏中心， B——代表细菌，F——代表真菌。
金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003大肠杆菌CMCC(B)44102 枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501 白色念珠菌CMCC(F)98001 黑曲霉CMCC(F)980031.3 传代和接种1.3.1 菌种冻干粉复苏1.3.1.1把冻干菌种管、灭菌1ml滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或净化台。
1.3.1.2 先用砂轮将冻干菌种安瓿瓶颈部挫出挫痕，再将冻干菌种管外壁用75%酒精擦洗消毒，稍干，用75%乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。
点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，是骤冷而炸裂。
1.3.1.3取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，领取一只灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面进行培养。
1.3.2菌种斜面传代操作1.3.2.1 培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。
标签上注明菌种名及菌种编号。
至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。
1.3.2.2点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。
205菌种复苏、传代、保存、使用、销毁标准操作规程
1 目的规范微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2 适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。
3 术语3.1 标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
3.2 传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
3.3 工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
3.4 菌种的传代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4 职责4.1 品管部主管负责菌种的申购、接收、保存、分发。
4.2 微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5内容5.1冻干菌种的复苏菌种复苏、接种在超净工作台内按无菌操作要求进行。
准备好菌种安瓿管（安瓿管从冰箱取出后首先置室温30分钟）、灭菌的毛细滴管、培养皿、镊子、1ml注射器（配有长针头）、营养肉汤培养基、灭菌水及琼脂斜面，将以上物品移入菌种室，用75%乙醇棉球擦净安瓿管外壁放在无菌培养皿内晾干，点燃酒精灯，将安瓿管的封口一端在火焰烧灼红热，用毛细管吸取灭菌水少许滴在灼热处，使其骤冷而炸裂。
在不离开火焰圈内，迅速用1ml注射器抽取0.3ml肉汤培养基加入安瓿管内并摇动使冷冻块溶解，摇匀。
用注射器吸取该安瓿管中内溶物分别接种至1支肉汤培养基、2支琼脂斜面培养基。
将接种后的肉汤及培养基斜面根据菌种特性分别置于菌种相适宜的温度培养，培养完毕，取出培养物，用无菌接种环蘸取少许肉汤培养物，然后在平皿接种处进行划线使其形成单菌落，根据菌种特性分别置于适宜的温度下培养18-24小时，进行革兰染色镜检及相应的生化试验或采用细菌鉴定条对其进行确认。
如不符合要求，应及时与生产商联系。
5.2菌种传代5.2.1准备准备需用的培养基斜面，在培养基管上贴注牢固的标签，标签上注明菌名及接种日期。
菌种的复苏传代及保存标准程序资料
菌种的复苏传代及保存标准程序目的：建立菌种的复苏、传代及保存标准程序。
范围：适用于检定用菌种的复苏、传代及保存的操作。
职责：质管部生物测定人员对本规程的实施负责。
内容：菌种的复苏与传代操作均应在生物检定室阳性对照间或专用超净工作台内进行。
操作中使用过的滴管、吸管及菌种管等均需放入消毒液中浸泡，试验结束后经121℃30分钟高温灭菌处理。
1.菌种的复苏1.1冻干菌种的复苏检定用标准菌种，由中国药品生物制品检定所提供，为冷冻干燥菌种(0代)。
使用前需将其复苏。
1.1.1准备：①用具：灭菌1ml滴管、灭菌双碟、灭菌镊子、砂轮、酒精灯、接种环。
②培养基：根据菌种的性质选择合适的液体培养基（营养肉汤培养基或改良马丁培养基）、营养琼脂（或改良马丁琼脂）斜面数支。
③消毒液：75%酒精、碘酒、0.1%新洁尔灭或84消毒液等。
1.1.2操作：1.1.2.1将准备妥的冷冻菌种管、灭菌滴管、灭菌双碟及镊子、培养基移入工作台。
1.1.2.2用砂轮将冻干菌种管颈部挫出刻痕，再75%酒精棉擦净菌种管外壁，放在灭菌双碟内待干。
1.1.2.3点燃酒精灯，将菌种安瓿的封口一端在火焰上灼烧红热，用灭菌滴管吸取液体培养基少许，滴在灼热的菌种安瓿封口一端，使其骤冷而炸裂。
1.1.2.4取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开后，把菌种安瓿放入灭菌双碟内。
1.1.2.5另取一支灭菌滴管，在火焰旁吸取适用液体培养基少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，接种至液体培养基内。
用接种环取菌液划线接种于琼脂斜面培养基上。
1.1.2.6将已接种的液体培养基及琼脂斜面培养基置规定温度下（一般细菌在30~35℃，真菌在23~28℃）培养24h。
1.1.2.7 取出培养物（第1代），仔细观察菌苔形态、有无杂菌，必要时涂片、革兰氏染色镜检，若呈典型菌落即可应用。
如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。
1.2 为保证工作用菌株的传代次数不超过5代，并减少购买冻干菌种的次数，可在对冻干菌种复苏的同时制备部分菌悬液（第1代）冷冻保存，并将此冻存菌液复苏后的第2代培养物冻存保藏。
菌种的复苏传代及保存标准程序
菌种得复苏传代及保存标准程序目得:建立菌种得复苏、传代及保存标准程序、范围:适用于检定用菌种得复苏、传代及保存得操作、职责:质管部生物测定人员对本规程得实施负责。
内容:菌种得复苏与传代操作均应在生物检定室阳性对照间或专用超净工作台内进行、操作中使用过得滴管、吸管及菌种管等均需放入消毒液中浸泡,试验结束后经1２1℃３0分钟高温灭菌处理。
１.菌种得复苏1.1冻干菌种得复苏检定用标准菌种,由中国药品生物制品检定所提供,为冷冻干燥菌种(0代)。
使用前需将其复苏。
1．１.１准备:①用具:灭菌1ｍl滴管、灭菌双碟、灭菌镊子、砂轮、酒精灯、接种环。
②培养基:根据菌种得性质选择合适得液体培养基(营养肉汤培养基或改良马丁培养基)、营养琼脂(或改良马丁琼脂)斜面数支。
③消毒液:7５%酒精、碘酒、0.1％新洁尔灭或84消毒液等。
1.１。
2操作:1。
1。
２.１将准备妥得冷冻菌种管、灭菌滴管、灭菌双碟及镊子、培养基移入工作台、1.1.2。
2用砂轮将冻干菌种管颈部挫出刻痕,再７5％酒精棉擦净菌种管外壁,放在灭菌双碟内待干。
1.1。
2。
3点燃酒精灯,将菌种安瓿得封口一端在火焰上灼烧红热,用灭菌滴管吸取液体培养基少许,滴在灼热得菌种安瓿封口一端,使其骤冷而炸裂。
１．1.2.4取灭菌镊子,在火焰旁,将炸裂得管口打开后,把菌种安瓿放入灭菌双碟内。
1．1。
2、5另取一支灭菌滴管,在火焰旁吸取适用液体培养基少许,加至菌种管底部,将冻干菌搅动促使溶解,随即吸出管内菌液,接种至液体培养基内、用接种环取菌液划线接种于琼脂斜面培养基上。
1.1。
2。
6将已接种得液体培养基及琼脂斜面培养基置规定温度下(一般细菌在3０~35℃,真菌在23~28℃)培养24ｈ。
１。
1.2。
7 取出培养物(第1代),仔细观察菌苔形态、有无杂菌,必要时涂片、革兰氏染色镜检,若呈典型菌落即可应用。
如发现菌型不典型,可进行平板分离单菌落。
１、２为保证工作用菌株得传代次数不超过5代,并减少购买冻干菌种得次数,可在对冻干菌种复苏得同时制备部分菌悬液(第1代)冷冻保存,并将此冻存菌液复苏后得第２代培养物冻存保藏。
菌种复苏传代操作规程
菌种复苏传代操作规程一、引言菌种复苏传代操作规程是生物实验室中非常重要的一项工作，它关系到实验的可靠性和成功率。
本文将详细介绍菌种复苏传代操作规程，包括前期准备、菌液制备、培养基制备、菌种接种、传代等步骤。
二、前期准备1.准备好所需设备：无菌培养箱、移液器、显微镜等；2.准备好所需试剂：琼脂、葡萄糖等；3.清洗设备并消毒。
三、菌液制备1.从冰箱中取出需要复苏的菌株，将其在无菌条件下解冻；2.取出一定量的琼脂加入到试管中，并加入适量的葡萄糖和其他所需成分；3.将琼脂溶液加热至沸腾，然后冷却至50℃左右；4.将解冻后的菌株用移液器吸取适量细胞悬浮液，并滴入琼脂溶液中；5.轻轻摇晃试管使得细胞均匀分布在琼脂中；6.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。
四、培养基制备1.准备好所需试剂：琼脂、葡萄糖等；2.将琼脂加入到试管中，并加入适量的葡萄糖和其他所需成分；3.将琼脂溶液加热至沸腾，然后冷却至50℃左右；4.将制备好的菌液接种到琼脂溶液中，并轻轻摇晃使得细胞均匀分布在琼脂中；5.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。
五、菌种接种1.准备好所需设备：无菌移液器、显微镜等；2.从前一代培养基中取出需要传代的菌株；3.用移液器吸取一定量的细胞悬浮液，并滴入新的培养基中；4.轻轻摇晃试管使得细胞均匀分布在琼脂中；5.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。
六、传代1.在前一代培养基中进行培养，当菌落数量达到一定程度时，即可进行传代；2.从前一代培养基中取出需要传代的菌株；3.用移液器吸取一定量的细胞悬浮液，并滴入新的培养基中；4.轻轻摇晃试管使得细胞均匀分布在琼脂中；5.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。
七、结论通过以上步骤，我们可以成功地进行菌种复苏传代操作。
在实验过程中，我们需要注意保持无菌条件，并严格按照操作规程进行操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。
菌种的复苏传代及保存标准程序之欧阳家百创编
菌种的复苏传代及保存标准程序欧阳家百（2021.03.07）目的：建立菌种的复苏、传代及保存标准程序。
范围：适用于检定用菌种的复苏、传代及保存的操作。
职责：质管部生物测定人员对本规程的实施负责。
内容：菌种的复苏与传代操作均应在生物检定室阳性对照间或专用超净工作台内进行。
操作中使用过的滴管、吸管及菌种管等均需放入消毒液中浸泡，试验结束后经121℃30分钟高温灭菌处理。
1.菌种的复苏1.1冻干菌种的复苏检定用标准菌种，由中国药品生物制品检定所提供，为冷冻干燥菌种(0代)。
使用前需将其复苏。
1.1.1准备：①用具：灭菌1ml滴管、灭菌双碟、灭菌镊子、砂轮、酒精灯、接种环。
②培养基：根据菌种的性质选择合适的液体培养基（营养肉汤培养基或改良马丁培养基）、营养琼脂（或改良马丁琼脂）斜面数支。
③消毒液：75%酒精、碘酒、0.1%新洁尔灭或84消毒液等。
1.1.2操作：1.1.2.1将准备妥的冷冻菌种管、灭菌滴管、灭菌双碟及镊子、培养基移入工作台。
1.1.2.2用砂轮将冻干菌种管颈部挫出刻痕，再75%酒精棉擦净菌种管外壁，放在灭菌双碟内待干。
1.1.2.3点燃酒精灯，将菌种安瓿的封口一端在火焰上灼烧红热，用灭菌滴管吸取液体培养基少许，滴在灼热的菌种安瓿封口一端，使其骤冷而炸裂。
1.1.2.4取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开后，把菌种安瓿放入灭菌双碟内。
1.1.2.5另取一支灭菌滴管，在火焰旁吸取适用液体培养基少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，接种至液体培养基内。
用接种环取菌液划线接种于琼脂斜面培养基上。
1.1.2.6将已接种的液体培养基及琼脂斜面培养基置规定温度下（一般细菌在30~35℃，真菌在23~28℃）培养24h。
1.1.2.7取出培养物（第1代），仔细观察菌苔形态、有无杂菌，必要时涂片、革兰氏染色镜检，若呈典型菌落即可应用。
如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。
1.2为保证工作用菌株的传代次数不超过5代，并减少购买冻干菌种的次数，可在对冻干菌种复苏的同时制备部分菌悬液（第1代）冷冻保存，并将此冻存菌液复苏后的第2代培养物冻存保藏。
菌种的复苏传代与保存标准程序文件
菌种的复传代及保存标准程序目的：建立菌种的复、传代及保存标准程序。
围：适用于检定用菌种的复、传代及保存的操作。
职责：质管部生物测定人员对本规程的实施负责。
容：菌种的复与传代操作均应在生物检定室阳性对照间或专用超净工作台进行。
操作中使用过的滴管、吸管及菌种管等均需放入消毒液中浸泡，试验结束后经121℃30分钟高温灭菌处理。
1.菌种的复1.1冻干菌种的复检定用标准菌种，由中国药品生物制品检定所提供，为冷冻干燥菌种(0代)。
使用前需将其复。
1.1.1准备：①用具：灭菌1ml滴管、灭菌双碟、灭菌镊子、砂轮、酒精灯、接种环。
②培养基：根据菌种的性质选择合适的液体培养基（营养肉汤培养基或改良马丁培养基）、营养琼脂（或改良马丁琼脂）斜面数支。
③消毒液：75%酒精、碘酒、0.1%新洁尔灭或84消毒液等。
1.1.2操作：1.1.2.1将准备妥的冷冻菌种管、灭菌滴管、灭菌双碟及镊子、培养基移入工作台。
1.1.2.2用砂轮将冻干菌种管颈部挫出刻痕，再75%酒精棉擦净菌种管外壁，放在灭菌双碟待干。
1.1.2.3点燃酒精灯，将菌种安瓿的封口一端在火焰上灼烧红热，用灭菌滴管吸取液体培养基少许，滴在灼热的菌种安瓿封口一端，使其骤冷而炸裂。
1.1.2.4取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开后，把菌种安瓿放入灭菌双碟。
1.1.2.5另取一支灭菌滴管，在火焰旁吸取适用液体培养基少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管菌液，接种至液体培养基。
用接种环取菌液划线接种于琼脂斜面培养基上。
1.1.2.6将已接种的液体培养基及琼脂斜面培养基置规定温度下（一般细菌在30~35℃，真菌在23~28℃）培养24h。
1.1.2.7 取出培养物（第1代），仔细观察菌苔形态、有无杂菌，必要时涂片、革兰氏染色镜检，若呈典型菌落即可应用。
如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。
1.2 为保证工作用菌株的传代次数不超过5代，并减少购买冻干菌种的次数，可在对冻干菌种复的同时制备部分菌悬液（第1代）冷冻保存，并将此冻存菌液复后的第2代培养物冻存保藏。
菌种的复苏传代及保存标准程序
菌种的复苏传代及保存标准程序目的：建立菌种的复苏、传代及保存标准程序。
范围：适用于检定用菌种的复苏、传代及保存的操作。
职责：质管部生物测定人员对本规程的实施负责。
内容：菌种的复苏与传代操作均应在生物检定室阳性对照间或专用超净工作台内进行。
操作中使用过的滴管、吸管及菌种管等均需放入消毒液中浸泡，试验结束后经121℃30分钟高温灭菌处理。
1.菌种的复苏1.1冻干菌种的复苏检定用标准菌种，由中国药品生物制品检定所提供，为冷冻干燥菌种(0代)。
使用前需将其复苏。
1.1.1准备：①用具：灭菌1ml滴管、灭菌双碟、灭菌镊子、砂轮、酒精灯、接种环。
②培养基：根据菌种的性质选择合适的液体培养基（营养肉汤培养基或改良马丁培养基）、营养琼脂（或改良马丁琼脂）斜面数支。
③消毒液：75%酒精、碘酒、0.1%新洁尔灭或84消毒液等。
1.1.2操作：1.1.2.1将准备妥的冷冻菌种管、灭菌滴管、灭菌双碟及镊子、培养基移入工作台。
1.1.2.2用砂轮将冻干菌种管颈部挫出刻痕，再75%酒精棉擦净菌种管外壁，放在灭菌双碟内待干。
1.1.2.3点燃酒精灯，将菌种安瓿的封口一端在火焰上灼烧红热，用灭菌滴管吸取液体培养基少许，滴在灼热的菌种安瓿封口一端，使其骤冷而炸裂。
1.1.2.4取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开后，把菌种安瓿放入灭菌双碟内。
1.1.2.5另取一支灭菌滴管，在火焰旁吸取适用液体培养基少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，接种至液体培养基内。
用接种环取菌液划线接种于琼脂斜面培养基上。
1.1.2.6将已接种的液体培养基及琼脂斜面培养基置规定温度下（一般细菌在30~35℃，真菌在23~28℃）培养24h。
1.1.2.7 取出培养物（第1代），仔细观察菌苔形态、有无杂菌，必要时涂片、革兰氏染色镜检，若呈典型菌落即可应用。
如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。
1.2 为保证工作用菌株的传代次数不超过5代，并减少购买冻干菌种的次数，可在对冻干菌种复苏的同时制备部分菌悬液（第1代）冷冻保存，并将此冻存菌液复苏后的第2代培养物冻存保藏。
菌种传代操作规程
菌种传代操作规程
《菌种传代操作规程》
一、实验室环境准备
1.1 实验室应保持干净整洁，确保操作台面无细菌污染。
1.2 实验室应配备足够的生物安全柜和消毒设备，以确保菌种操作过程的无菌性。
1.3 操作人员应穿戴实验服、手套和口罩，避免人员因素的污染。
二、菌种接种和传代
2.1 原始菌种接种时需注意避免外部污染，遵循良好的接种操作规程。
2.2 传代操作时需使用无菌培养基和器具，并在生物安全柜中进行操作，避免细菌的外源性污染。
2.3 每次传代应记录详细的操作过程和传代次数，以维护菌种的纯度和稳定性。
2.4 传代后的菌种应进行鉴定和测试，确保其遵循传代后的特性和功能。
三、菌种保管和管理
3.1 传代后的菌种应及时进行冻存或其他保藏方式，用于备份和长期保存。
3.2 菌种的标本信息应进行规范的管理和归档，确保其可追溯性和可查性。
3.3 实验室应建立完善的菌种管理制度，明确菌种的使用和处置程序，避免滥用和误用。
四、操作规程的培训和执行
4.1 实验室应对操作人员进行菌种传代操作规程的培训和考核，确保他们掌握正确的操作技能和知识。
4.2 操作人员应严格执行操作规程，避免不当的操作和污染行为，确保菌种的纯度和可靠性。
以上是关于菌种传代操作规程的基本内容，希望能够为实验室的菌种操作提供一定的参考和指导。
菌种的复苏传代与保存标准程序文件
菌种的复苏传代及保存标准程序目的：建立菌种的复苏、传代及保存标准程序。
范围：适用于检定用菌种的复苏、传代及保存的操作。
职责：质管部生物测定人员对本规程的实施负责。
内容：菌种的复苏与传代操作均应在生物检定室阳性对照间或专用超净工作台内进行。
操作中使用过的滴管、吸管及菌种管等均需放入消毒液中浸泡，试验结束后经121℃30分钟高温灭菌处理。
1.菌种的复苏1.1冻干菌种的复苏检定用标准菌种，由中国药品生物制品检定所提供，为冷冻干燥菌种(0代)。
使用前需将其复苏。
1.1.1准备：①用具：灭菌1ml滴管、灭菌双碟、灭菌镊子、砂轮、酒精灯、接种环。
②培养基：根据菌种的性质选择合适的液体培养基（营养肉汤培养基或改良马丁培养基）、营养琼脂（或改良马丁琼脂）斜面数支。
③消毒液：75%酒精、碘酒、0.1%新洁尔灭或84消毒液等。
1.1.2操作：1.1.2.1将准备妥的冷冻菌种管、灭菌滴管、灭菌双碟及镊子、培养基移入工作台。
1.1.2.2用砂轮将冻干菌种管颈部挫出刻痕，再75%酒精棉擦净菌种管外壁，放在灭菌双碟内待干。
1.1.2.3点燃酒精灯，将菌种安瓿的封口一端在火焰上灼烧红热，用灭菌滴管吸取液体培养基少许，滴在灼热的菌种安瓿封口一端，使其骤冷而炸裂。
1.1.2.4取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开后，把菌种安瓿放入灭菌双碟内。
1.1.2.5另取一支灭菌滴管，在火焰旁吸取适用液体培养基少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，接种至液体培养基内。
用接种环取菌液划线接种于琼脂斜面培养基上。
1.1.2.6将已接种的液体培养基及琼脂斜面培养基置规定温度下（一般细菌在30~35℃，真菌在23~28℃）培养24h。
1.1.2.7 取出培养物（第1代），仔细观察菌苔形态、有无杂菌，必要时涂片、革兰氏染色镜检，若呈典型菌落即可应用。
如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。
1.2 为保证工作用菌株的传代次数不超过5代，并减少购买冻干菌种的次数，可在对冻干菌种复苏的同时制备部分菌悬液（第1代）冷冻保存，并将此冻存菌液复苏后的第2代培养物冻存保藏。
菌种传代与复苏
菌种传代与复苏菌种是从事微⽣物学及⽣命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的⽣产、微⽣物致病性研究，药物的抑菌试验及药品微⽣物检验等都有⼀套完整的菌种、微⽣物具有⽣命活⼒，在传代过程中易发⽣变异甚⾄死亡，因此菌种传代与保藏是⼀项重要的基础⼯作。
菌种代号国内药品微⽣物检验所⽤的菌种代号是CMCC(F)或CMCC(B)，CMCC--中国医学菌种保藏中⼼，、，B——代表细菌，F——代表真菌。
⾦黄⾊葡萄球菌CMCC(B)26003⼤肠杆菌CMCC(B)44102 枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501 ⽩⾊念珠菌CMCC(F)98001 ⿊曲霉CMCC(F)98003传代和接种菌种冻⼲粉复苏把冻⼲菌种管、灭菌1ml滴管、双碟、镊⼦、营养⾁汤培养基、营养琼脂斜⾯数⽀，移⼊接种室或净化台。
先⽤砂轮将冻⼲菌种安瓿瓶颈部挫出挫痕，再将冻⼲菌种管外壁⽤75%酒精擦洗消毒，稍⼲，⽤75%⼄醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待⼲。
点燃酒精灯，将菌种管的封⼝⼀端在⽕焰上烧灼红热，⽤灭菌滴管吸取营养⾁汤培养基，滴在灼热的菌种管封⼝⼀端，是骤冷⽽炸裂。
取灭菌镊⼦，在⽕焰旁，将炸裂的管⼝打开，放⼊灭菌双碟内，领取⼀只灭菌滴管，在⽕焰旁吸取营养⾁汤少许，加⾄菌种管底部，将冻⼲菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种⾄营养琼脂斜⾯及普通⾁汤内，并将滴管及菌种管投⼊消毒液内，将已接种的营养⾁汤及营养琼脂斜⾯进⾏培养。
菌种斜⾯传代操作培养基应新鲜制备，如斜⾯已⽆冷凝⽔者，不宜再使⽤。
标签上注明菌种名及菌种编号。
⾄冰箱取出的菌种斜⾯，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移⼊接种室或超净⼯作台。
点燃酒精灯，⽤左⼿握住菌种斜⾯，将管⼝靠近⽕焰旁，右⼿拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒⾦属部分在⽕焰上烧灼，往返通过3次。
左⼿将管⼝在⽕焰上旋转烧灼，右⼿⽆名指，⼩指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环深⼊管内先在近壁的琼脂斜⾯上靠⼀下，稍冷却再移⾄菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种环，并将菌种管⼝移⾄⽕焰旁。
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目的：建立菌种的复苏、传代管理规程，保证检验人员操作规范化、标准化。
范围：菌种的复苏、传代。
责任人：QC科化验员。
内容：
1 菌种的复苏
1.1 准备好冷冻菌种安瓿、灭菌的毛细滴管、培养皿、镊子、注射器、普通肉汤培养基、灭菌水及普通琼脂斜面，移入接种室（或超净工作台）。
1.2 在接种室（或超净台）按无菌操作要求操作。
1.3 用75%酒精棉擦净菌种安瓿外壁放在无菌培养皿内稍干。
1.4 点燃煤气灯或酒精灯，将安瓿的封口一端在火焰上烧灼红热，用毛细管吸取灭菌水少许在灼热处，使其骤冷而炸裂。
1.5 在不离开火焰圈内，迅速用注射器抽取0.3ml肉汤培养基加入安瓿内，并摇动使冷冻块溶解，摇匀，用注射器吸取安瓿内容物分别接种至1支肉汤培养基、2支普通琼脂斜面培养基。
1.6 将接种后肉汤培养基及普通琼脂斜面培养基于35～37℃恒温培养12～24h。
1.7 取出培养物，仔细观察菌苔形态，有无杂菌，并转接3支普通琼脂斜面，于35～37℃恒温培养12～24h，供菌种保存与传代用，同时作平板分离单个菌落及涂片镜检，应为典型的菌型。
2 工作用菌种保存与传代
2.1 将上述斜面培养物作为日常工作中使用的菌种，置于冰箱保存。
每月用普通琼脂斜面传代1次，将新传代的培养物代替原有的菌种，作为工作用菌种。
2.2 工作用菌种，每半年在琼脂平板上分离单个菌落1次，选典型的菌落接种于普通琼脂斜面上，可以代替原有的工作用菌种。
2.3 培养好的斜面，应仔细观察有无杂菌，可涂片镜检，或再移植斜面于35～37℃培养48h检查有无杂菌，有可疑即应废弃，重新取原始冷冻安瓿接种。