菌种的复苏、传代管理规程

目的：建立菌种的复苏、传代管理规程，保证检验人员操作规范化、标准化。范围：菌种的复苏、传代。

责任人：QC科化验员。

内容：

1 菌种的复苏

1.1 准备好冷冻菌种安瓿、灭菌的毛细滴管、培养皿、镊子、注射器、普通肉汤培养基、灭菌水及普通琼脂斜面，移入接种室（或超净工作台）。

1.2 在接种室（或超净台）按无菌操作要求操作。

1.3 用75%酒精棉擦净菌种安瓿外壁放在无菌培养皿内稍干。

1.4 点燃煤气灯或酒精灯，将安瓿的封口一端在火焰上烧灼红热，用毛细管吸取灭菌水少许在灼热处，使其骤冷而炸裂。

1.5 在不离开火焰圈内，迅速用注射器抽取0.3ml肉汤培养基加入安瓿内，并摇动使冷冻块溶解，摇匀，用注射器吸取安瓿内容物分别接种至1支肉汤培养基、2支普通琼脂斜面培养基。

1.6 将接种后肉汤培养基及普通琼脂斜面培养基于35～37℃恒温培养12～24h。

1.7 取出培养物，仔细观察菌苔形态，有无杂菌，并转接3支普通琼脂斜面，于35～37℃恒温培养12～24h，供菌种保存与传代用，同时作平板分离单个菌落及涂片镜检，应为典型的菌型。

2 工作用菌种保存与传代

2.1 将上述斜面培养物作为日常工作中使用的菌种，置于冰箱保存。每月用普通琼脂斜面传代1次，将新传代的培养物代替原有的菌种，作为工作用菌种。

2.2 工作用菌种，每半年在琼脂平板上分离单个菌落1次，选典型的菌落接种于普通琼脂斜面上，可以代替原有的工作用菌种。

2.3 培养好的斜面，应仔细观察有无杂菌，可涂片镜检，或再移植斜面于35～37℃培养48h检查有无杂菌，有可疑即应废弃，重新取原始冷冻安瓿接种。