仿制药分析方法和稳定性研究--谭海松
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临床用药安全有效.
稳定性测试的趋势
包括更多的贮藏条件以使临床实验可在 不同国家进行
提早开始稳定性研究来附和不同国家药 检局的要求
稳定性测试需要控制的条件
测试内容和标准 贮存条件 测试频率 测试完成时间
原料药的测试内容和标准
外观变化: 颜色 物理性质变化: 晶型, 熔点, 热失
重, 水含量 主要成分含量: 97-103% 杂质含量：<0.15%
最大日剂量 报告限度 鉴定限度 质控限度
<= 2 g >2g
0.05% 0.03%
0.10% 或 1.0 mg
0.05%
0.15% 或 1.0 mg
0.05%
原料药中基因毒性杂质的控制
基因毒性杂质举例
alkylating electrophilic center, unstable epoxide, aromatic amines, aromatic nitro, azo-structure, N-nitroso-group
0 0
10 20 30 40 Inj. Volume
分析方法验证-准确度
准确度的定义 测定结果与真实值之间的接近程度. 向 制剂中加入已知量的被测物进行回收率 测定来验证.
准确度的测定 在3个浓度(80%,100%,120%)中,每个浓 度制备3个样品.每个浓度3个样品的平 均回收率必须在98-102%.
分析方法验证-样品溶液稳定性
样品溶液稳定性的定义 样品溶液在一定储藏条件下可被重复使 用的时间
样品溶液稳定性的测定 样品溶液稳定性测定结果是初始结果 98.5-101.5%.
仿制药分析方法的来源
中国药典 美国药典（USP） 欧洲药典（EP） 日本药典（JP） 原料药厂家 文献
分析方法验证的参考文献
仿制药对原料药的要求
与被仿制药品的原料药具有相同的物理 化学性质:如盐,晶型和异构体(对映体)
原料药的杂质限度
原料药杂质的含量应低于质控限度 杂质的种类和含量与被仿制药相同 如杂质的含量明显高于质控限度且与被仿
制药不同,应做必要的安全性研究 原料药中基因毒性杂质要被有效控制
原料药的杂质限度
分析方法验证-精密度
精密度的定义 同一样品多次取样测试结果的接近程度
精密度的测定: %RSD<=2% (6个样品)
重复性: 同一分析人所得结果的精密度 中间精密度: 同一实验室, 不同的日期, 设
备和人员所得结果的精密度 重现性: 不同实验室, 不同人员所得结果的
精密度
分析方法验证-范围
1-10mg
0.1%
0.5%, 20ug 1.0%, 50ug
10-100mg 0.1%
0.2%, 2mg 0.5%, 200ug
100mg-1g 0.1%
0.2%, 2mg 0.2%, 3mg
1 g-2 g
0.05% 0.2%, 2mg 0.2%, 3mg
>2g
0.05% 0.1%
0.15%
溶出度测定模拟人体的消化过程
溶出度测定的重要性
控制药物制剂质量的一个重要指标
决定药物制剂稳定性的一个重要依据
用来评价药物制剂质量是否受原料药, 配方, 生产工艺和生产地变化的影响
USP 1: 转篮法
溶出度测试过程中, 药品滞留在转篮里 可以调节缓冲液的 值而不影响篮里的药 品 适用于片剂,胶囊等
USP 2: 桨法
溶出度测试过程中, 药品留在容器底部的 中间 适用于片剂,胶囊和 悬浮液等
DAD, UV)
高压液相色谱的系统适用性
一 旦 进 了 城， 就必须 跟着城 市的漩 涡一起 旋转和 消失。 第 一 次 从 偏僻的 乡 村 进 入 都 市我并 没有感 到特别 好奇。 我是有 备而来 的，读 了好多 本描述 城市的 文 学 作 品 ， 城市的 气味通 过想象 早已遍 布在我 的感官 。宽阔 的街道 、如水 车流、 喧 嚷 的 人 群 、闪烁 的霓虹 、高耸 入云的 建筑、 靓女美 妇如过 江之鲫 ，呈现 在眼前 的 一 切 都 似 曾相识 。从光 到影， 城市人 的心态 也似乎 容易揣 透。 我 跟 着 在这 个 城 里 生 活 了多年 的马特 走在大 街的人 行道上 。马特 是我儿 时的朋 友，人 的命就 像 风 中 的 油 菜籽， 我和马 特都是 其中最 倒霉的 两粒， 被命运 的风吹 送到了 最贫瘠 的 土 地 上 。 我们俩 从小就 不甘命 运的无 情拨弄 ，在贫 瘠之地 生根、 发芽的 同时， 我 们 把 自 己 的理想 的姿势 伸向未 知的城 市领域 。说白 一点， 我们发 愤读书 ，一心 想 跳 出 农 门 。从小 学到高 中，我 和马特 的成绩 在班上 一直都 是最拔 尖的， 而命运 再 一 次 在 我 们的身 上显示 了严重 的不公 。马特 在应届 就考上 了重点 大学， 那时候 那 个 风 光 呀 ，县长 亲自来 给他戴 大红花 呀。而 我却躲 在自家 那个黑 暗的屋 子里哭 呀 ， 哭 得 都 昏了过 去呀。 第二年 我又考 ，同学 老师们 都指望 我能上 北大的 呀，而 我 竟 又 落 榜 了。我 又哭得 昏了过 去呀。 第三年 、第四 年……直 到第 七年， 我都没
有 考 取 呀 ， 我差点 自
色谱峰的容量因子: k=t/tM-1 色谱峰分辨率: R=2(t2-t1)/(W1+W2)
高压液相色谱的系统适用性
色谱峰的拖尾系数: T=W0.05/(2f)
高压液相色谱的系统适用性
AU
Peak 1 - 11.655 Peak 2 - 11.923
0.060 0.055 0.050 0.045 0.040 0.035 0.030 0.025 0.020 0.015 0.010 0.005 0.000
定量限: 试样中被分析物能被定量测定 的最低量, 一般定义为信噪比大于10:1
检测限和定量限信噪比的测量
分析方法验证-耐用性
耐用性的定义 测定条件发生小的变动时, 测定结果不 受影响的承受程度
耐用性测定的举例:高压液相色谱
流动相: 组成, pH值, 流速的变动 色谱柱: 厂家, 批号, 柱温的变动
分析方法验证-专属性
专属性的定义
在其它成分可能存在下,分析方法能够正确检
测出被分析物的特性.
专属性的测定举例:高压液相色谱
高压液相色谱的系统适用性
色谱峰的容量因子: 1<k<20 色谱峰分辨率: R>=1.5 色谱峰的拖尾系数: T<2.0 主要成分色谱峰纯度: >=99.9% (LC/MS,
仿制药分析方法的验证和药品 稳定性的研究
谭海松 PhD
Nov 27, 2011
主要内容
仿制药的GMP要求 仿制药分析方法的验证 仿制药稳定性的研究
FDA官员来制药公司检查时的留言
我们并不期望在检查过程中所有事 情都是完美无缺的,但是我们的确 希望所检查到的东西全在你们的有 效控制之中.
药检局对仿制药的要求
ICH Q2- Validation of Analytical Procedures
美国药典（USP）
主要内容
仿制药的GMP要求 仿制药分析方法的验证 仿制药稳定性的研究
稳定性测试目的
考察原料药或制剂的性质在温度,湿度, 光线等条件的影响下随时间变化的规律.
为药品的生产、包装、贮存、运输条件 和有效期的确定提供科学依据,以保证
分析方法的验证 API全部溶于溶剂 HPLC正确分析出样品溶液的浓度 分析结果的可靠性
分析方法验证的内容
API全部溶于溶剂 准确度, 精密度
正确分析出样品溶液的浓度 专属性, 线性, 范围, 检测限, 定量限
分析结果可靠性 耐用性, 精密度
分析方法验证内容
专属性 线性 准确度 精密度 范围 检测限, 定量限 耐用性 样品溶液稳定性
范围的定义 分析药品达到一定准确度, 精密度和线 性的区间.
范围的要求
含量测定: 80-120% 含量均匀度测定: 70-130% 溶出度: 50-150% 杂质测定: 规定限度±20%
分析方法验证-检测限和定量限
检测限: 试样中被分析物能被检测到的 最低量, 一般定义为信噪比大于3:1
8.50
9.00
9.50
10.00
10.50
11.00
11.50
12.00
12.50
13.00
13.50
14.00
Minutes
色谱峰分辨率: 2.0
色谱峰的拖尾系数: 1.0
分析方法验证-线性
线性的定义 在测定范围内,检测结果与被分析物浓 度呈线性关系的程度.
线性的测定 在被分析物浓度20%-150%内,至少测5个 浓度.例如20%,80%,100%,120%,150% 最小二乘法线性回归, R>=0.999
基因毒性杂质的控制限
< 1.5 ug/day
药物制剂的测试内容和标准
外观变化: 颜色 主要成分含量：变化小于5% 降解产物: <0.2% 溶出度: >70% at 45 min 物理性质: 水含量, 颗粒度
制剂的杂质限度
最大日剂量 报告限度 鉴定限度 质控限度
< 1mg
0.1%
1.0%, 5ug 1.0%, 50ug
分析方法的研究和验证
稳定性的研究 生物等效性临床试验 简化新药(ANDA)申请
成品药片分析样品的制备实例
把10片药品放于500毫升容量瓶中, 加入400 毫升溶剂, 以200rpm摇30分钟, 然后加入溶剂 到刻度. 摇匀后, 以8,000rpm高速离心10分钟, 取上清液用高压液相色谱(HPLC)进行分析.
来源 实验室中的工作人员要有必要的安全防
护 实验室要保持整洁
工作人员的SOP要求
每个工作人员都要有相关SOP的培训 记录
工作人员每年至少参加一次GMP培训
主要内容
仿制药的GMP要求 仿制药分析方法的验证 仿制药稳定性的研究
仿制药的研发过程
专利保护将失效或专利挑战
找到原料药
配方和生产工艺的研究
仿制药品系指仿制国家已批准正式生产 并收载于国家药品标准的品种.
仿制药与被仿制药应具有相同的剂型, 剂量,质量,用途,用法,效果和安全度.
仿制药的质量控制
药品质量 药品测试 分析方法 分析方法验证
科学性 (理论正确)
准确性 (正确反映真实值)
可靠性 (避免人为和仪器误差)
分析方法验证的前提:GMP标准
分析方法验证
标准物和试剂 仪器
实验室 操作人员 ……
标准作业程序 (SOP)
标准物和试剂的SOP要求
包装上注明生产厂家, 批号和有效期
如生产厂家没有提供有效期, SOP要规 定有效期
实验记录要有所用到的标准物和试剂的 生产厂家, 批号和有效期
分析仪器的SOP要求
所有分析仪器都要有使用记录 分析仪器在使用前要用标准物校准 分析仪器每半年进行一次仪器校准
HPLC在使用前用标准物校准举例
溶剂空白 定量限或分离效率检查 标准物溶液-1 (注射3次) 标准物溶液-2 (注射3次) 样品溶液 (每隔10个样品注射标准物溶液-1,2)
. . 标准物溶液-1 标准物溶液-2 定量限或分离效率检查 溶剂空白
实验室的SOP要求
所有仪器都要有校准日期或相应的注释 所有样品和溶液都要有批号,有效期和
USP II 溶出度测定仪器
USP II 溶出度测定举例
Release (%)
120 100 80 60 40 20
0 0
Dissolution Release
Initial 3-Month 6-Month Photo
10 20 30 40 50 60 70 Time (min)
USP 3: 往复式圆筒法
线性举例-HPLC
Peak Area
Peak Area
Waters 2690
10000000 8000000 6000000 4000000 2000000
0 0Baidu Nhomakorabea
5 10 15 20 25 Inj. Volume
Agilent 1100 with UV/VIS
5000000 4000000 3000000 2000000 1000000
药品随圆筒在溶液 中做上下运动 不同缓冲液可放在 不同容器中 适用于片剂,胶囊 和缓释药等
线性举例-HPLC
Peak Area
900000 800000 700000 600000 500000 400000 300000 200000 100000
0 0
Linearity y = 31253x - 185.39 R2 = 1
Peak Area Linear (Peak Area)
5 10 15 20 25 30 Conc. (ug/mL)
稳定性测试的趋势
包括更多的贮藏条件以使临床实验可在 不同国家进行
提早开始稳定性研究来附和不同国家药 检局的要求
稳定性测试需要控制的条件
测试内容和标准 贮存条件 测试频率 测试完成时间
原料药的测试内容和标准
外观变化: 颜色 物理性质变化: 晶型, 熔点, 热失
重, 水含量 主要成分含量: 97-103% 杂质含量：<0.15%
最大日剂量 报告限度 鉴定限度 质控限度
<= 2 g >2g
0.05% 0.03%
0.10% 或 1.0 mg
0.05%
0.15% 或 1.0 mg
0.05%
原料药中基因毒性杂质的控制
基因毒性杂质举例
alkylating electrophilic center, unstable epoxide, aromatic amines, aromatic nitro, azo-structure, N-nitroso-group
0 0
10 20 30 40 Inj. Volume
分析方法验证-准确度
准确度的定义 测定结果与真实值之间的接近程度. 向 制剂中加入已知量的被测物进行回收率 测定来验证.
准确度的测定 在3个浓度(80%,100%,120%)中,每个浓 度制备3个样品.每个浓度3个样品的平 均回收率必须在98-102%.
分析方法验证-样品溶液稳定性
样品溶液稳定性的定义 样品溶液在一定储藏条件下可被重复使 用的时间
样品溶液稳定性的测定 样品溶液稳定性测定结果是初始结果 98.5-101.5%.
仿制药分析方法的来源
中国药典 美国药典（USP） 欧洲药典（EP） 日本药典（JP） 原料药厂家 文献
分析方法验证的参考文献
仿制药对原料药的要求
与被仿制药品的原料药具有相同的物理 化学性质:如盐,晶型和异构体(对映体)
原料药的杂质限度
原料药杂质的含量应低于质控限度 杂质的种类和含量与被仿制药相同 如杂质的含量明显高于质控限度且与被仿
制药不同,应做必要的安全性研究 原料药中基因毒性杂质要被有效控制
原料药的杂质限度
分析方法验证-精密度
精密度的定义 同一样品多次取样测试结果的接近程度
精密度的测定: %RSD<=2% (6个样品)
重复性: 同一分析人所得结果的精密度 中间精密度: 同一实验室, 不同的日期, 设
备和人员所得结果的精密度 重现性: 不同实验室, 不同人员所得结果的
精密度
分析方法验证-范围
1-10mg
0.1%
0.5%, 20ug 1.0%, 50ug
10-100mg 0.1%
0.2%, 2mg 0.5%, 200ug
100mg-1g 0.1%
0.2%, 2mg 0.2%, 3mg
1 g-2 g
0.05% 0.2%, 2mg 0.2%, 3mg
>2g
0.05% 0.1%
0.15%
溶出度测定模拟人体的消化过程
溶出度测定的重要性
控制药物制剂质量的一个重要指标
决定药物制剂稳定性的一个重要依据
用来评价药物制剂质量是否受原料药, 配方, 生产工艺和生产地变化的影响
USP 1: 转篮法
溶出度测试过程中, 药品滞留在转篮里 可以调节缓冲液的 值而不影响篮里的药 品 适用于片剂,胶囊等
USP 2: 桨法
溶出度测试过程中, 药品留在容器底部的 中间 适用于片剂,胶囊和 悬浮液等
DAD, UV)
高压液相色谱的系统适用性
一 旦 进 了 城， 就必须 跟着城 市的漩 涡一起 旋转和 消失。 第 一 次 从 偏僻的 乡 村 进 入 都 市我并 没有感 到特别 好奇。 我是有 备而来 的，读 了好多 本描述 城市的 文 学 作 品 ， 城市的 气味通 过想象 早已遍 布在我 的感官 。宽阔 的街道 、如水 车流、 喧 嚷 的 人 群 、闪烁 的霓虹 、高耸 入云的 建筑、 靓女美 妇如过 江之鲫 ，呈现 在眼前 的 一 切 都 似 曾相识 。从光 到影， 城市人 的心态 也似乎 容易揣 透。 我 跟 着 在这 个 城 里 生 活 了多年 的马特 走在大 街的人 行道上 。马特 是我儿 时的朋 友，人 的命就 像 风 中 的 油 菜籽， 我和马 特都是 其中最 倒霉的 两粒， 被命运 的风吹 送到了 最贫瘠 的 土 地 上 。 我们俩 从小就 不甘命 运的无 情拨弄 ，在贫 瘠之地 生根、 发芽的 同时， 我 们 把 自 己 的理想 的姿势 伸向未 知的城 市领域 。说白 一点， 我们发 愤读书 ，一心 想 跳 出 农 门 。从小 学到高 中，我 和马特 的成绩 在班上 一直都 是最拔 尖的， 而命运 再 一 次 在 我 们的身 上显示 了严重 的不公 。马特 在应届 就考上 了重点 大学， 那时候 那 个 风 光 呀 ，县长 亲自来 给他戴 大红花 呀。而 我却躲 在自家 那个黑 暗的屋 子里哭 呀 ， 哭 得 都 昏了过 去呀。 第二年 我又考 ，同学 老师们 都指望 我能上 北大的 呀，而 我 竟 又 落 榜 了。我 又哭得 昏了过 去呀。 第三年 、第四 年……直 到第 七年， 我都没
有 考 取 呀 ， 我差点 自
色谱峰的容量因子: k=t/tM-1 色谱峰分辨率: R=2(t2-t1)/(W1+W2)
高压液相色谱的系统适用性
色谱峰的拖尾系数: T=W0.05/(2f)
高压液相色谱的系统适用性
AU
Peak 1 - 11.655 Peak 2 - 11.923
0.060 0.055 0.050 0.045 0.040 0.035 0.030 0.025 0.020 0.015 0.010 0.005 0.000
定量限: 试样中被分析物能被定量测定 的最低量, 一般定义为信噪比大于10:1
检测限和定量限信噪比的测量
分析方法验证-耐用性
耐用性的定义 测定条件发生小的变动时, 测定结果不 受影响的承受程度
耐用性测定的举例:高压液相色谱
流动相: 组成, pH值, 流速的变动 色谱柱: 厂家, 批号, 柱温的变动
分析方法验证-专属性
专属性的定义
在其它成分可能存在下,分析方法能够正确检
测出被分析物的特性.
专属性的测定举例:高压液相色谱
高压液相色谱的系统适用性
色谱峰的容量因子: 1<k<20 色谱峰分辨率: R>=1.5 色谱峰的拖尾系数: T<2.0 主要成分色谱峰纯度: >=99.9% (LC/MS,
仿制药分析方法的验证和药品 稳定性的研究
谭海松 PhD
Nov 27, 2011
主要内容
仿制药的GMP要求 仿制药分析方法的验证 仿制药稳定性的研究
FDA官员来制药公司检查时的留言
我们并不期望在检查过程中所有事 情都是完美无缺的,但是我们的确 希望所检查到的东西全在你们的有 效控制之中.
药检局对仿制药的要求
ICH Q2- Validation of Analytical Procedures
美国药典（USP）
主要内容
仿制药的GMP要求 仿制药分析方法的验证 仿制药稳定性的研究
稳定性测试目的
考察原料药或制剂的性质在温度,湿度, 光线等条件的影响下随时间变化的规律.
为药品的生产、包装、贮存、运输条件 和有效期的确定提供科学依据,以保证
分析方法的验证 API全部溶于溶剂 HPLC正确分析出样品溶液的浓度 分析结果的可靠性
分析方法验证的内容
API全部溶于溶剂 准确度, 精密度
正确分析出样品溶液的浓度 专属性, 线性, 范围, 检测限, 定量限
分析结果可靠性 耐用性, 精密度
分析方法验证内容
专属性 线性 准确度 精密度 范围 检测限, 定量限 耐用性 样品溶液稳定性
范围的定义 分析药品达到一定准确度, 精密度和线 性的区间.
范围的要求
含量测定: 80-120% 含量均匀度测定: 70-130% 溶出度: 50-150% 杂质测定: 规定限度±20%
分析方法验证-检测限和定量限
检测限: 试样中被分析物能被检测到的 最低量, 一般定义为信噪比大于3:1
8.50
9.00
9.50
10.00
10.50
11.00
11.50
12.00
12.50
13.00
13.50
14.00
Minutes
色谱峰分辨率: 2.0
色谱峰的拖尾系数: 1.0
分析方法验证-线性
线性的定义 在测定范围内,检测结果与被分析物浓 度呈线性关系的程度.
线性的测定 在被分析物浓度20%-150%内,至少测5个 浓度.例如20%,80%,100%,120%,150% 最小二乘法线性回归, R>=0.999
基因毒性杂质的控制限
< 1.5 ug/day
药物制剂的测试内容和标准
外观变化: 颜色 主要成分含量：变化小于5% 降解产物: <0.2% 溶出度: >70% at 45 min 物理性质: 水含量, 颗粒度
制剂的杂质限度
最大日剂量 报告限度 鉴定限度 质控限度
< 1mg
0.1%
1.0%, 5ug 1.0%, 50ug
分析方法的研究和验证
稳定性的研究 生物等效性临床试验 简化新药(ANDA)申请
成品药片分析样品的制备实例
把10片药品放于500毫升容量瓶中, 加入400 毫升溶剂, 以200rpm摇30分钟, 然后加入溶剂 到刻度. 摇匀后, 以8,000rpm高速离心10分钟, 取上清液用高压液相色谱(HPLC)进行分析.
来源 实验室中的工作人员要有必要的安全防
护 实验室要保持整洁
工作人员的SOP要求
每个工作人员都要有相关SOP的培训 记录
工作人员每年至少参加一次GMP培训
主要内容
仿制药的GMP要求 仿制药分析方法的验证 仿制药稳定性的研究
仿制药的研发过程
专利保护将失效或专利挑战
找到原料药
配方和生产工艺的研究
仿制药品系指仿制国家已批准正式生产 并收载于国家药品标准的品种.
仿制药与被仿制药应具有相同的剂型, 剂量,质量,用途,用法,效果和安全度.
仿制药的质量控制
药品质量 药品测试 分析方法 分析方法验证
科学性 (理论正确)
准确性 (正确反映真实值)
可靠性 (避免人为和仪器误差)
分析方法验证的前提:GMP标准
分析方法验证
标准物和试剂 仪器
实验室 操作人员 ……
标准作业程序 (SOP)
标准物和试剂的SOP要求
包装上注明生产厂家, 批号和有效期
如生产厂家没有提供有效期, SOP要规 定有效期
实验记录要有所用到的标准物和试剂的 生产厂家, 批号和有效期
分析仪器的SOP要求
所有分析仪器都要有使用记录 分析仪器在使用前要用标准物校准 分析仪器每半年进行一次仪器校准
HPLC在使用前用标准物校准举例
溶剂空白 定量限或分离效率检查 标准物溶液-1 (注射3次) 标准物溶液-2 (注射3次) 样品溶液 (每隔10个样品注射标准物溶液-1,2)
. . 标准物溶液-1 标准物溶液-2 定量限或分离效率检查 溶剂空白
实验室的SOP要求
所有仪器都要有校准日期或相应的注释 所有样品和溶液都要有批号,有效期和
USP II 溶出度测定仪器
USP II 溶出度测定举例
Release (%)
120 100 80 60 40 20
0 0
Dissolution Release
Initial 3-Month 6-Month Photo
10 20 30 40 50 60 70 Time (min)
USP 3: 往复式圆筒法
线性举例-HPLC
Peak Area
Peak Area
Waters 2690
10000000 8000000 6000000 4000000 2000000
0 0Baidu Nhomakorabea
5 10 15 20 25 Inj. Volume
Agilent 1100 with UV/VIS
5000000 4000000 3000000 2000000 1000000
药品随圆筒在溶液 中做上下运动 不同缓冲液可放在 不同容器中 适用于片剂,胶囊 和缓释药等
线性举例-HPLC
Peak Area
900000 800000 700000 600000 500000 400000 300000 200000 100000
0 0
Linearity y = 31253x - 185.39 R2 = 1
Peak Area Linear (Peak Area)
5 10 15 20 25 30 Conc. (ug/mL)