溶菌酶的纯化以及活性鉴定

本实验我们致力于研制出安全、有效的新型海洋溶菌酶，通过Ni-NTA介质纯化带有his标签的重组蛋白，并从pH、温度、金属离子、去垢剂和抑制剂等方面对海洋溶菌酶进行研究。。在实验过程中，出现了许多之前没有想到的难题，我们不断完善实验步骤，在这过程中收获了很多。

接菌和扩大培养的实验中要确保无菌操作，保证自己的菌液不会被污染。在保菌的时候要控制甘油的浓度在15%~20%之间，甘油浓度太高会诱使菌种产生变异。诱导剂的量要严格把控，诱导剂的含量过低会使得扩大培养的菌液诱导不充分最后纯化出的蛋白含量低，诱导剂含量过高会使得菌液诱导过度导致最后纯化出的蛋白中含有很多杂蛋白。配胶的时候玻璃板一定要清洗干净，否则配出的胶会有很多气泡，一定要先配分离胶再配浓缩胶，顺序不能颠倒，配好分离胶后要用蒸馏水或者乙醇液封，保证分离胶上边水平。染色时开始用快染法发现效果不好，导致蛋白条带不清晰，换用考马斯亮蓝R-250染色会好很多。在测量酶活的实验过程中发现用溶壁微球菌菌粉配置菌液在后续的测量中会出现菌粉沉降影响实验结果的现象，后来换用LB培养基培养出来的溶壁微球菌菌液再测量的时候测量数值就比较稳定，没有在出现吸光度一直下降的现象。实验中还发现虽然使用酶标仪测酶活的时候用的蛋白样品比较少且操作简单快捷，但是误差要比分光光度仪的误差大很多。试验中出现过菌液加入溶菌酶蛋白后吸光度没有下降反而上升的现象，经过思考得知可能是由于自己的蛋白样品浓度较低，而且样品本身也有一定的吸光度，可能是由于一开始加入溶菌酶后溶菌酶与菌液反应时间过短所以导致菌液加入溶菌酶蛋白后吸光度没有下降反而上升，解决方法是把蛋白样品超滤提高样品浓度，并且增加菌液和溶菌酶的反应时间。

这次实验中我学习了很多相关的原理知识，学会了使用高速离心机、超声细胞波破碎仪、SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳设备、干式恒温器、漩涡振荡器等之前很少接触到的仪器，也培养了团队协作的能力，更明白了科学研究更重要的是实践和领悟，不能只做试验而不思考，也不么能每天只看文献而不动手去做，应该思考过后再动手去验证自己的想法，这样才能有最大的收获。成功来之不易，认真做每一件事才能取得做后的成功。