透析液内毒素检测操作SOP

透析液及其回收率的测定

革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒（显色法）即碱处理法

规范操作

1.目的

测定透析用水、透析液等样本内毒素含量，保证透析安全。同时对样品加入一定浓度的内毒素标准品进行回收率试验测定，保证试验结果的准确性。

2.授权操作人

经培训合格的微生物实验室检验人员。

3.实验原理

内毒素检测原理：革兰阴性菌脂多糖（内毒素）能激活反应主剂中的C因子、B因子、凝固酶原等，引起酶的级联反应，根据其引起的吸光度变化对革兰阴性脂多糖（内毒素）浓度进行定量测定。

样品回收率试验测定原理：仪器配套的一次性器具软件分别计算出样品溶液及含标准内毒素的样品溶液的内毒素含量Co和Ct，软件再自动按下式计算该试验条件下回收率R%。

R%=(Ct－Co)/λ×100%

其中Co为样品溶液内毒素实际测定值；

Ct为含标准内毒素样品溶液的内毒素实际测定值；

λ为样品溶液中加入的标准内毒素的浓度。

4．产品性能指标

4.1灵敏度0.01EU/ml

4.2精密度批间CV≤10%。

4.3准确性回收率75-125%。

4.4标准曲线范围0.1EU-10EU/ml。

4.5相关系数r绝对值≥0.980。

5.实验组成

5.1实验仪器及器具：

MB-80微生物快速动态检测系统，配套软件：一次性器具检测系统3.7X

洁净工作台旋涡混合器

加样器（5-50μl，20~200µl，100~1000µl）

5.2实验耗材：

无热原吸头(100µL、200µL、1000µL)

无热原平底试管(塑料)无热源转移管

无热原1.5mL离心管或一次性真空采血管（4ml或5ml）

5.3实验试剂：

内毒素标准品（冻干品），3EU/支

内毒素检查用水

试剂盒组成：反应主剂、主剂溶解液、处理液A、处理液B、质控品和质控品溶解液。其中透析液测定只需要反应主剂与主剂溶解液两种组分即可。

6．工作环境

相对湿度：20%~80%；

温度控制：10~30℃；

电源电压：220V±10%，50Hz±2%。

7.样本采集及处理

7.1检测样本:R/O水、透析液、A原液、B原液等

7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原转移管。

7.3样品采集标准

7.3.1供试液的制备[1]：

浓缩液，直接取样成供试液；

对干粉，称取样品5克，用细菌内毒素检查用水按使用说明配成浓缩液成供试

液。

取供试液按使用说明的比例混合，以细菌内毒素检查用水稀释后进行检测。

7.3.2用水标准[2]

应在透析装置和供水回路的连接处收集试样，取样点应在供水回路的末端或在混合室的入口处。

7.3.3《血液透析器复用操作规范》透析复用用水

采样位置：应在血液透析器与复用系统连接处或尽可能接近此处进行水质检

测。

检测时间：最初应每周检测一次，连续两次检测结果符合要求后，内毒素检

测应每3个月至少一次。

7.3.4《血液净化标准操作规程（2010版）》透析用水的水质监控

采样位置：反渗水输水管路的末端

检测时间：透析用水内毒素检测至少每3个月1次。每台透析机每年至少检

测1次。

8.操作程序

8.1打开仪器电源，预热30分钟，使仪器处于稳定状态（37℃）；

8.2填写表头信息：

“测定日期”默认为同电脑的系统时间相同

“数据文件名”与“测定日期”相同，可以改动（注意避免文件名重复）；

“检验员”填写操作者姓名；

“试剂批号”与试剂盒上的批号一致；（必填）

“试剂灵敏度”的填写为0.01EU/ml；（必填）

8.3填写样本基本信息

要求回收率信息与样品信息完全一致。

注意：填写标本名称、稀释倍数（如果标本名称一样，一定要区分开（如透析液

1、透析液2），否则软件会自动计算2个标本结果的平均值）。

8.4确认输入信息无误后，然后点击“采集”按钮。

8.5样品内毒素的测定

8.5.1取样品50μl加入无热原塑料平底试管中

（不需要处理液的参与及加热及冷却过程，需要与血清试剂区分!）。

8.5.2溶解反应主剂，轻轻摇匀，避免剧烈震荡。

EKT-2M：取0.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；

EKT-5M：取1.2mL主剂溶解液溶解反应主剂；

EKT-12M：取2.8mL主剂溶解液溶解反应主剂；

EKT-25M：取5.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；

8.5.3在已加入样本的平底试管中分别加入200µl溶解好的主剂，在漩涡振荡器上轻

轻震荡震荡1-2s后，插入仪器孔道即可进行数据采集。

8.6样品回收率的测定

8.6.1将内毒素工作标准品溶解并稀释至0.5EU/ml。

取3EU内毒素工作标准品，加入1000ul待测定样品溶液，放在振荡仪上振荡5分钟，使之充分混合，即得3EU/ml内毒素标准品溶液。

取100ul上述3EU/ml内毒素标准品溶液与500ul待测定样品溶液，震荡混匀一分钟，得到0.5EU/ml的内毒素标准品样本溶液。

8.6.2样品回收率的检测，与主剂反应

取0.5EU/ml的内毒素标准品样本溶液50ul加入无热原塑料平底试管中

（不需要处理液的参与及加热及冷却过程，，需要与血清试剂区分!）。

溶解反应主剂，轻轻摇匀，避免剧烈震荡。

EKT-2M：取0.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；

EKT-5M：取1.2mL主剂溶解液溶解反应主剂；

EKT-12M：取2.8mL主剂溶解液溶解反应主剂；

EKT-25M：取5.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；

在已加入样本的平底试管中分别加入200µl溶解好的主剂，在漩涡振荡器上轻轻震荡1-2s后，插入仪器孔道即可进行数据采集。每份样品回收率需做三个平行。

反应结束后仪器自动计算结果并保存。

9.透析液及回收率测定操作流程图

9.透析液及回收率测定操作流程图（以2M为例）

9.1样品内毒素测定

9.2样品回收率的测定