透析液内毒素检测操作SOP
细菌内毒素检查法SOP(陈魏制作)
细菌内毒素检查—凝胶法标准操作程序1.简述本操作程序主要参照BP 2003 Appendix XIV C. Test for bacterial endotoxins中MethodA.Gel-clot method: limit test和Method B. Gel-clot method: semi-quantitative test以及《中国药典2010版附录ⅹⅡE细菌内毒素检查法》中凝胶法，结合实验室自身条件编写而成。
2.安全注意事项由于细菌内毒素对人体有毒害作用，且鲎试剂对人的危害作用尚不明确。
因此实验过程中一定要做好防护措施。
3.检验目的检验供试品中的的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。
4.检验原理本操作程序通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量检测内毒素。
5.供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
一般要求供试品溶液的pH 值在6.0～8.0的范围内。
对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH 值，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节pH 值。
酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
6.供试品细菌内毒素的限值(L)药典有明确规定的按照药典规定值，如无规定需经计算得出，具体计算方法见各药典。
7.供试品最大有效稀释倍数(MVD)和最小有效稀释浓度的确定(MVC)最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液被允许达到稀释的最大倍数( 1→MVD )，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。
用以下公式来确定MVD，MVD=cL /λ。
式中L 为供试品的细菌内毒素限值；c 为供试品溶液的浓度，当L 以EU / ml 表示时，则c为1ml / ml ，当L 以EU / mg 或EU / U 表示时，c的单位需为mg / ml 或U / ml。
血液透析sop操作规程2021
血液透析sop操作规程2021摘要：1.血液透析患者管理标准操作规程（血液净化2021SOP）概述2.血液透析患者营养不良的常见病因3.血液透析中心的医疗质量管理4.结构质量管理5.透析病例登记及管理规范6.人员资质7.设施与装备8.库房管理9.污物处理室与洁具间的管理正文：一、血液透析患者管理标准操作规程（血液净化2021SOP）概述血液透析患者管理标准操作规程（血液净化2021SOP）旨在为血液透析患者提供规范化的管理和护理，提高治疗效果和生存质量。
相当一部分血液透析患者存在蛋白质- 能量消耗（protein-energy, wasting，PEW），加重了各种代谢紊乱，与患者死亡和住院事件风险增加密切相关。
营养治疗是改善血液透析患者微炎症状态、贫血、骨矿物质代谢异常等并发症的重要基础。
二、血液透析患者营养不良的常见病因血液透析患者营养不良常见的病因包括：摄食减少和厌食症、高分解代谢状态、炎症和共存疾病、胰岛素抵抗等。
这些因素可能导致患者出现营养不良，从而影响治疗效果和预后。
三、血液透析中心的医疗质量管理医疗质量管理分为三大部分——结构质量、过程质量和终末质量。
血液透析中心的医疗质量管理则是包括了这三大部分的全过程质量控制。
相比医疗机构所属的血液透析室，独立透析中心存在先天劣势，诊疗能力相对不足。
因此为保障独立透析中心的医疗质量，在进行医疗质量管理时，对独立透析中心的要求更为严格。
四、结构质量管理结构质量管理包括四大方面：硬件设施；规章制度、流程与预案；透析病例登记及管理规范；人员资质。
五、透析病例登记及管理规范透析病例登记及管理规范要求对患者的基本信息、透析治疗过程、并发症等进行详细记录，以便于评估治疗效果和预测患者预后。
六、人员资质血液透析中心的医护人员需要具备相关的专业知识和技能，以保证患者的治疗效果和安全。
医护人员应定期参加培训，提高自身的业务水平。
七、设施与装备血液透析中心的设施与装备应符合相关标准和规定，以保证患者的治疗效果和安全。
透析用水、透析液细菌和内毒素的取样及检测方法
透析液的纯净度要求
• 标准透析液（ISO 11663：2014）
细菌含量
<100cfu/ml
內毒素含量
<0.5EU/ml
• 超纯透析液（ISO 11663：2014）
细菌含量
<0.1cfu/ml
內毒素含量
<0.03EU/ml
在线生成的置换液应该无菌并且没有致热源
指南推荐应用超纯透析用水和透析液
Ⅳ. 1 对流和高通量透析治疗模式 强烈推荐应用超纯透析用水
• 透析用水中的内毒素含量应不超过0.25EU/mL。必 须建立干预水平，通常，是最大允许水平的50
国内外透析用水微生物质量标准
菌落计数与内毒素水平无直接关系
透析用水的微生物试验（
YY 0572—2015 ）
• 应采用常规的微生物检测方法( 倾注平板法、涂布 平板法、薄膜过滤法) 获得细菌总数( 标准培养皿 计数) ， 薄膜过滤法是首选的检测方法，但不接受 接种环法。
• 培养基宜选用胰化蛋白胨葡萄糖培养基（TGEA）、 R2A营养琼脂培养基（R2A）或其他确认能提供相 同结果的培养基，不能使用血琼脂培养基和巧克 力琼脂培养基。
• 推荐使用17℃～23℃的培养温度和168h（7d）的 培养时间，确认能提供相同培养结果的其他培养 时间和培养温度也适用。
膜过滤法细菌培养
European Best Practice Guidelines for Hemodialysis Ref: NDT, 17 (2002), Suppl 7
JSDT 强烈推荐所有透析模式应用超纯透析液
Ref: Kawanishi et al, Ther Apher Dial, 2009
透析用水和透析液微生物污染曲线
透析液内毒素检测操作SOP
透析液及其回收率的测定革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒（显色法）即碱处理法规范操作1.目的测定透析用水、透析液等样本内毒素含量，保证透析安全。
同时对样品加入一定浓度的内毒素标准品进行回收率试验测定，保证试验结果的准确性。
2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理内毒素检测原理：革兰阴性菌脂多糖（内毒素）能激活反应主剂中的C因子、B因子、凝固酶原等，引起酶的级联反应，根据其引起的吸光度变化对革兰阴性脂多糖（内毒素）浓度进行定量测定。
样品回收率试验测定原理：仪器配套的一次性器具软件分别计算出样品溶液及含标准内毒素的样品溶液的内毒素含量Co和Ct，软件再自动按下式计算该试验条件下回收率R%。
R%=(Ct－Co)/λ×100%其中Co为样品溶液内毒素实际测定值；Ct为含标准内毒素样品溶液的内毒素实际测定值；λ为样品溶液中加入的标准内毒素的浓度。
4．产品性能指标4.1灵敏度0.01EU/ml4.2精密度批间CV≤10%。
4.3准确性回收率75-125%。
4.4标准曲线范围0.1EU-10EU/ml。
4.5相关系数r绝对值≥0.980。
5.实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统，配套软件：一次性器具检测系统3.7X洁净工作台旋涡混合器加样器（5-50μl，20~200µl，100~1000µl）5.2实验耗材：无热原吸头(100µL、200µL、1000µL)无热原平底试管(塑料)无热源转移管无热原1.5mL离心管或一次性真空采血管（4ml或5ml）5.3实验试剂：内毒素标准品（冻干品），3EU/支内毒素检查用水试剂盒组成：反应主剂、主剂溶解液、处理液A、处理液B、质控品和质控品溶解液。
其中透析液测定只需要反应主剂与主剂溶解液两种组分即可。
6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
透析液检测操作流程
透析液测定操作流程1、打开仪器电源，预热30分钟，使仪器处于稳定状态（37℃）；2、填写表头：“测定日期”默认为同电脑的系统时间相同“数据文件名”与“测定日期”相同，可以改动；“检验员”填写操作者姓名；“试剂批号”与试剂盒上的批号一致；（必填）“试剂灵敏度”的填写为0.01EU/ml；（必填）3、填写标本名称、稀释倍数（如果标本名称一样，一定要区分开（如透析液1、透析液2），否则软件会自动计算2个标本结果的平均值）。
4、确认试验方法为动态浊度法，然后点击“采集”（如图）5、进行标本操作：（1）、样品预处理：原水，RO水，透析液不用预处理，可直接进行检测；A原液，B原液须用内毒素检测用水或处理液稀释40倍后进行检测（2）、样品的检测：取样品0.2ml加入反应主试剂A中，待干粉完全溶解后完全转移至平底试管进行检测6、试验结束，返回主界面，进入数据分析：7、调入实验数据：8、查看试验结果：结果判断：（1）、《中华人民共和国医药行业标准》YY 0572-2005《血液透析和相关治疗用水》（ISO 13959：2002,MOD）用水标准在水处理装置的输出端的细菌内毒素的含量≤1EU/ml；血液透析装置入口的输送点上细菌内毒素的含量≤5EU/ml；（2）、《中华人民共和国医药行业标准》YY 0598-2006《血液透析和相关治疗用浓缩物》（ISO 13958：2002,MOD）标准浓缩物以细菌内毒素检查用水配成透析液后细菌内毒素的含量<0.5EU/ml；（3）、我国《血液透析器复用操作规范》透析复用用水标准血液透析器透析复用用水内毒素含量≤2EU/ml；（4）、血液净化标准操作规程（2010 版）透析用水的内毒素＜2 EU/ml；置换液内毒素＜0.03EU/ml；9、打印试验结果：点击功能键“打印”选择分组格式，即可打印。
打印结果如下：注意事项：1、样品的选择采取过程防止污染2、操作过程防止污染3、操作检测过程中用到的耗材须除热原。
sop细菌内毒素检查操作规程
1 目的规范操作人员检查细菌内毒素的方法，确保检验数据的准确性。
2 范围适用于本厂质监科化验室对注射用水的细菌内毒素检验。
3 责任化验员有责任按本操作规程进行正确操作，并对检验结果负责。
4 内容本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
4.1仪器、用具4.1.1旋涡混合器、注射器（2.0ml、1.0ml）、注射针（6号、9号）、保鲜纸、试管（10×75 mm）、镊子（金属）、金属盒。
4.1.2用具除去外源性内毒素：将用具放入金属盒，在250℃干烤30分钟或180℃干烤120分钟。
4.2试剂4.2.1细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.2.2细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价应不小于2EU，不大于50EU。
4.2.3细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂在37℃±1℃条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
4.2.4鲎试剂：0.1ml/支（λ=0.5EU/ml）。
4.3鲎试剂灵敏度复核试验鲎试剂灵敏度的标示值（λ，此处λ=0.5EU/ml）,将细菌内毒素国家标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混合15分钟，然后制备成合适的稀释浓度，1EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
按检查法项下试验，每一浓度平行做4支，同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管，如最大浓度管均为阳性，最低浓度管均为阴性，阴性对照管均为阴性，按下式计算鲎试剂灵敏度的测定值λc。
λc=lg-1(∑X/4)式中X为反应终点浓度的对数值(lg)。
反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。
当λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以λ为该批鲎试剂的灵敏度。
透析液及透析用水监测SOP
透析液及透析用水监测SOP文件编号：持有部门：医院感染管理科医务部护理部血透室微生物室修订时间：年月执行日期：年月日具体内容：一、透析用水、透析液等进行细菌学监测和内毒素检测1．受检材料：透析用水:普通自来水经过滤、软化、活性碳吸附及反渗处理形成反渗水（透析用水）;透析液浓缩溶液:A 液含氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁及葡萄糖等成分;B 液主要是碳酸氢钠;透析用水和透析液浓缩液按一定的比例混合即成透析液。
透析用水是用自来水作水源，经过反渗透装置产生反渗水(透析用水)，透析液由(A液+B液)与透析用水按1：3 4比例混合制成，A液主要是含各种电解质的高渗液，B液主要是碳酸氢钠溶液。
2．检测方法1：用无菌吸管分别吸取上述样品各1 m1到90mm无菌平皿中，加入已熔化的察45℃一48℃营养琼脂1 5ml一1 8ml，边倾注边摇匀待琼脂凝固放于3 5℃培养箱内48小时后计数，并鉴定致病菌。
检测方法2：采样用无菌注射器抽取1 ml 样品，加入无菌试管,吸取0. 2 ml 标本加入血琼脂平皿中均匀涂布,置36 ℃孵育箱培养48 h ,鉴定细菌及计算每毫升标本中的细菌菌落数(CFU/ ml) 。
计算公式为CFU/ ml = 平皿上的细菌菌落数×5 。
3．评价标准：透析用水细菌数<2 0 0 c fu／m1，透析液细菌数<2 000 c fu／ml，不得检出致病菌，A液和B液应无菌生长。
4．内毒素检测：使用动态凝胶法内毒素快速检测试剂盒Pyrosate检测。
具体方法根据各个公司产品使用说明。
二、可复用血液透析器使用前检测1.外观检查：标签字迹清楚；血液透析器无结构损坏和堵塞；血液透析器端口封闭良好、充满消毒液（由血液透析器颜色、用试纸或化学试剂确认该血液透析器已经过有效浓度消毒液的消毒和处理）、无泄漏；存储时间在规定期限内；血液透析器外观正常。
2.核对患者资料：确保血液透析器上的姓名和患者记录中身份信息一致，血液透析器上的标签和患者的治疗记录也应确保无误。
细菌内毒素检查SOP
细菌内毒素检查SOP1.适用范围本标准适用于细菌内毒素的检查。
2.职责QC负责人监督检验员按SOP检查检验员严格该SOP检查3.内容3.1.原理用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定，内毒素的量用内毒素的单位(EU)来表示。
3.2.实验材料及用具3.2.1.电热干燥箱温度应能达到250℃。
3.2.2. 恒温水浴箱（37±1℃）。
3.2.3.温度计，精度在1℃以下。
3.2.4. 旋涡混合器。
3.2.5. 鲎试剂应具有国家主管部门批准文号。
3.2.6. 细菌内毒素工作标准品，应使用中国药品生物制品检定所统一发放的标准品。
3.2.7. 细菌内毒素检查用水（含内毒素小于0.015EU的灭菌注射用水）。
3.3.准备工作3.3.1.试验所用器皿，250℃干烘至少≥60分钟。
3.3.2.鲎试剂灵敏度复核，按《中国药典》2005版三部287页进行。
3.3.3.供试品干扰试验，按《中国药典》2005版三部287页进行。
3.4.操作方法3.4.1. 试验准备将试验所用器皿用洗涤剂和自来水洗净除去水分后置洗液中浸泡4小时，取出将洗液滤干，用自来水将残余洗液洗净，在用新鲜蒸馏水冲洗干燥后，用锡箔纸密闭玻璃器皿口，放置适宜的密闭金属容器中，置烤箱中在250℃干烤至少1小时，容器在不打开包装的情况下可在一周内使用，否则须再加热除去热源。
3.4.2.内毒素标准溶液的制备3.4.2.1. 取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后开启，防止玻屑落入瓶内。
3.4.2.2. 按使用说明书用移液管加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严。
置旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成所需浓度的细菌内毒素标准品溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。
3.4.3. 供试品溶液的制备3.4.3.1 供试品最大有效稀释倍数的计算：MVD=λLC⨯L为供试品的细菌内毒素限值；λ为使用鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml）；C为供试品的浓度，当L以EU/ml表示时，C等于1.0ml/ml。
细菌内毒素检验SOP
干扰试验
表1凝胶法干扰实验溶液的制备
编号
配制内毒素的溶液浓度
稀释用液
当Ea在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2λ）及Et在0.5 Ea～2Ea（包括0.5 Ea和2Ea）时，认为供试品在该浓度下无干扰作用。若供试品溶液在小于MVD的稀释倍数下对实验有干扰，应将供试品溶液进行不超过MVD的进一步稀释，再重复干扰试验。
当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺或环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时，须重新进行干扰试验。
一般要求供试液的PH值在6.0～8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需要调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，可使用酸，碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜缓冲液调节PH值。酸或碱溶液必须用细菌内毒素检查用水在已除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经验证不含内毒素和干扰因子。
检测
辅助材料
鲎试剂标准品检查用水9g/L的氯化钠溶液
细菌内毒素检验
审核
日期
批准
日期
序号
作业内容及作业要项
参考图
检验方法：凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
鲎试剂灵敏度复核试验：在本检查规定的条件下，使鲎试剂生产凝集内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，EU/ml表示。当使用新批号的鲎试剂或实验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核实验。
记录原始数据，填写检验报告。
辅助材料
鲎试剂标准品检查用水9g/L的氯化钠溶液
细菌内毒素检查操作规程
细菌内毒素检查操作规程细菌内毒素检查操作规程一、实验目的细菌内毒素检查是为了检测样本中是否存在细菌产生的内毒素，可以作为细菌感染的诊断依据和治疗效果评估的指标。
二、实验材料和设备1. 细菌培养基和培养物2. 内毒素检测试剂盒3. 显微镜和载玻片4. 离心机5. 温箱和恒温水浴6. 试管、培养皿、移液器等常规实验用品三、实验步骤1. 培养细菌：将待检测的细菌接种到适当的培养基上，放入温箱中以适当的温度和时间进行培养，使细菌生长至对应的生长期。
2. 收集细菌：将培养好的细菌转移到离心管中，使用离心机将细菌离心沉淀。
3. 细菌裂解：将细菌沉淀加入合适的裂解缓冲液中，使用适当的方法将细菌完全裂解。
4. 澄清液分离：使用离心机将细菌裂解液离心，将上清液转移到新的试管中。
5. 内毒素检测：按照内毒素检测试剂盒说明书的要求，将所得上清液加入试剂盒中，进行内毒素的检测。
6. 结果解读：根据试剂盒的指示，观察试剂盒中的颜色变化或读取光密度等指标，判断样品中是否存在细菌内毒素。
7. 结果验证：使用正负对照样品验证结果的准确性和可靠性。
四、实验注意事项1. 实验过程需要遵守无菌操作的要求，避免细菌污染。
2. 实验中使用的试剂和培养基要在有效期内，并按照要求保存。
3. 实验过程中应注意个人防护，避免接触到有害物质。
4. 操作前要充分了解试剂盒的使用方法和读取结果的标准。
5. 结果解读时要考虑到阳性和阴性对照的结果，以免误判。
6. 使用的设备要事先进行验证和校准，以保证实验结果的准确性和可靠性。
五、实验结果记录和分析1. 记录实验所使用的试剂批号和有效期。
2. 记录实验过程中的注意事项和操作细节。
3. 记录实验结果，包括阳性和阴性对照的结果。
4. 对实验结果进行分析和解释，判断样品中是否存在细菌内毒素。
六、实验结果的报告和存档1. 编写实验报告，包括实验目的、材料和方法、结果分析、结论等内容。
2. 报告中要附带实验记录、数据分析和结果验证等材料。
2015版药典内毒素检测SOP
1 目的规范操作人员检查细菌内毒素的方法，确保检验数据的准确性。
2 范围适用于本公司质管部对注射用水的细菌内毒素检验。
3 责任检验员有责任按本操作规程进行正确操作，并对检验结果负责。
4 内容本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
4.1仪器、用具4.1.1天平、电热干燥箱、旋涡混合器、恒温水浴锅、反应试管、镊子（金属）、金属盒、移液器具，酒精灯、脱脂棉球、剪刀、砂轮、封口膜，记号笔。
4.1.2用具除去外源性内毒素：将用具放入金属盒，在250℃干烤30分钟或180℃干烤120分钟。
4.2试剂4.2.1细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.2.2鲎试剂4.3鲎试剂灵敏度复核试验鲎试剂灵敏度的标示值（λ，此处λ=0.5EU/ml）,将细菌内毒素国家标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混合15分钟，然后制备成合适的稀释浓度，0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.0625EU/ml，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
按检查法项下试验，每一浓度平行做4支，同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管，如最大浓度管均为阳性，最低浓度管均为阴性，阴性对照管均为阴性，按下式计算鲎试剂灵敏度的测定值λc。
λc=lg-1(∑X/4)式中X为反应终点浓度的对数值(lg)。
反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。
当λc在0.5λ≤λc≤2.0λ时，方可用于细菌内毒素检查，并以λ为该批鲎试剂的灵敏度。
每批新的鲎试剂在用于试验前都要进行灵敏度的复核。
4.4供试品干扰试验按鲎试剂灵敏度复核试验项下，用细菌内毒素检查用水和未检出内毒素的供试品溶液或其不超过最大有效稀释倍数（MVD）的稀释液分别将同一支（瓶）细菌内毒素工作标准品制成含细菌内毒素工作标准品2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ四种浓度的细菌内毒素溶液。
透析用水细菌内毒素检测流程
透析用水细菌内毒素检测流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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透析液细菌内毒素凝胶检测法流程
透析液细菌内毒素凝胶检测法流程
1. 实验前准备接通恒温水浴箱电源，温度36-37℃;实验所有器材均需去热源。
0 2. 配制细菌内毒素阳性对照液：
取内毒素标准品一支，酒精棉球消毒瓶颈，开启，加入1mlBET用水，混合15分钟备用。
将2EU/ml内毒素对照液稀释成0.25EU/ml(取0.2ml加入1.4mlBET用水)
3. 配制供试品溶液:有效稀释倍数：MVD=L/λ=1/0.125=8(倍)
(L为透析液内毒素限制1EU/ml，λ为鲎试剂灵敏度0.125 EU/ml)
透析用水(反渗水):取透析用水0.1ml加入BET用水0.7ml,混合均匀。
透析液：取透析液0.1ml加入BET用水0.49ml和酸性调节剂0.21ml，混合均匀。
4. 鲎试剂的准备：每份供试品准备8支鲎试剂(0.1ml/支)
5. 试验加样：
6. 检测
加样完毕后用封口膜密封试管，保温58-62分钟观察结果。
7. 结果判断：缓慢倒转180°，管内的内容物呈坚实凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性;不呈凝胶或虽生成凝胶，但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性。
1.。
透析液细菌 内毒素超标原因查找标准操作规程
透析液细菌/内毒素超标原因查找标准操作规程 持有部门: 文件编号:
制订者: 审核者: 版次:
制订日期: 审核日期: 执行日期:
注：a 应首先排除采样操作与检验技术的原因。
b 参照“62.透析用水细菌/内毒素超标原因查找标准操作规程”，查找原因并修改。
透析用液细菌和（或）内毒素超标a 配液桶及其配件清洁消毒是否符合要求 检测反渗水是否超标b 检测A 、B 浓缩液 配液桶清洁消毒措施是否执行到位 检测结果超标 配液桶滤芯污染情况、是否定时更换 报告采购部门 排液管是否存在污染风险 更换透析液品牌 复测A 、B 浓缩液 配液操作是否规范 复检结果符合要求 整改存在的问题 对引起反渗水超标的问题进行整改 复检反渗水 检测反渗水是否超标 复检透析液细菌/内毒素 检测结果符合要求
完成整改。
透析液细菌内毒素检查-文档资料
13828262866
2020年10月1日
博康
28
2020年10月1日
博康
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注意：1、只能在安瓿的易折点上部开启内毒素， 不能沿易折点开启，防止振荡过程中内毒素粘在封 口膜上。 2、只能取1ml的细菌内毒素检查用水复溶细菌内毒 素工作标准品。
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图示
0.2ml
0.2ml
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③ 恒温箱。 ④ 旋涡振荡器。 ⑤ 其它器具：消毒棉球，剪刀和封口膜等。
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3.2 取样
取样器具必须符合2010年版《中国药品检验标准操作 规范》310页——细菌内毒素检查法“3 实验准备”规 定：无外源性内毒素。必要时可以用真空采血管（无 添加剂）取样。
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若溶液A的两个平行管均为阴性，判供试品符合规 定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判供试品不符合 规定。若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管 为阴性，需进行复试。复试时，溶液A需做4支平行管， 若所有平行管均为阴性，判供试品符合规定；否则判 供试品不符合规定。
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2、限值的确定 内毒素限值L=1.0EU/ml。
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3、计算稀释倍数MVD=L/λ =1.0EU/ml/0.125EU/ml
=8倍
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4、操作方法
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5 复用设备及用水要求 5.1.3 水质细菌学、内毒素检测时间：最初应每周检 测1次，连续2次检测结果符合要求后，细菌学检测应 每月1次，内毒素检测应每3个月至少1次。
修改SOP细菌、内毒素的采样准则解读及临床实践0204
.
透析液内毒素超标的主要原因
透析用水超标 透析浓缩A、B液超标 透析机水路系统（消毒不良）超标 以上因素叠加
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透析液内毒素超标的主要原因
微生物污染趋势
原水（自来水） 砂滤罐
树脂罐 活性炭
反渗机
输水管路
透析机（浓缩液）
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透析用水微生物、内毒素超标的可能原因
水源、预处理部分 反渗透机
维持合理的回收率，回收率与水质成反比关系，一般控制 在70%。 透析机工作结束后，水处理系统应两小时至少启动一次， 保证水的流动抑制微生物生长。
定期消毒，防止生物膜的形成（建议至少每三个月一次）
。
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透析用水内毒素超标的对策与预防
透析用水供水管路、储水容器部分
输送管路及储存容器选用卫生级器件，管路直径合理 输送管路采用单路串联结构。选用直接供给方式 管路内水的流速大于0.4m/s：15mm管路水处理产水量大于 用水量4.2L/min，20mm管路大于用水量8.4L/min
SOP细菌、内毒素的采样准则 解读及临床实践
大纲
• 采样准则 • 临床实践 • 小结
.
大纲
• 采样准则
• 临床实践 • 小结
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内毒素检测取样
取样位置 水处理系统的末梢——验证水处理
透析机水入口处——验证管道污染情况
透析器入口透析液——验证透析液内毒素 每台透析机必须同步检测
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取样注意事项
放开阀门，放流半分内容、频率 明确相关的检测项目标准 指导了临床实践的方式和方法 有利于内容、管理和操作的标准化 完成质控检查和医院检查考核的要求 做到持续质量改进（CQI） 确保血液透析医疗安全
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内毒素检查法标准操作规程程
内毒素检查法标准操作规程编号：版本：编制：日期：审定：日期：批准：日期：生效日期：管理部门：发放部门：生产部 质管部 工程部 研发部 PMC 采购部 仓库 营销中心 人事行政中心 财务部一、目的：本标准准规定了细菌内毒素检查法的操作规程。
二、依据：不适用三、范围：适应于细菌内毒素的检查四、职责：品质科五、内容：1. 定义：1.1 细菌内毒素检查法：本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。
1.2 细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌精制得到的内毒素，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
1.3 细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准进行标定，确定其重量相当效价，每1ng工作标准品效价应不小于2EU，不大于50EU。
细菌内毒素工作标准品用于试验中鲎试剂灵敏度复核干扰试验及设置的各种对照。
1.4 细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
2. 实验设备：电热干燥箱（50~300±1）℃、电热恒温水温箱。
实验用具：注射器(精度0.02ml)、针头、试管架、白胶布、砂轮、75%酒精棉球、金属直镊、注射器盒、时钟。
试剂：鲎试剂（其标示值用λ表示）、内毒素工作标准品、内毒素检查用水。
3. 用具除热原：试验中所用的试管、注射器、针头、金属直镊等冲洗干净，置电热干燥箱中（注射器、针头、金属直镊等放入注射器盒中封好，再放入干燥箱中），经250℃加热30分钟，除去热原。
4. 检查法：4.1 打开洁净工作台的风机及照明开关，并用75%酒精棉球擦拭台面，打开恒温水温箱的开关，使水温恒定在（37±1）℃。
4.2 用75%酒精棉球擦手消毒。
4.3 内毒素阳性对照溶液的制备：4.3.1. 取内毒素工作标准品1支，用75%酒精棉球消毒瓶颈，用砂轮割开瓶颈。
透析用水采样
透析液及透析用水采样操作规程
（一）
检测内容：细菌和内毒素
检测频率：每月一次，若超标，查找原因，增加测定频次，直到达标
一．透析用水采样
1.检测员衣帽整齐，洗手戴口罩。
2.备齐用物：贴标签的内毒素试管和细菌培养试管、酒精灯、酒
精、消毒棉签、一次性注射器等
3.采样口冲洗1分钟，若消毒使用酒精，待干燥后采样，不应使
用含氯消毒剂或其他消毒剂
4.抽吸1ml透析用水按无菌操作原则注入细菌培养试管
5.抽吸5ml透析用水按无菌操作原则注入内毒素试管
6.及时送检，避免放置过久影响检测结果。
二．透析液采样
1.检测员衣帽整齐，洗手戴口罩。
2.备齐用物：贴标签的内毒素试管和细菌培养试管、酒精灯、酒精、消毒棉签、一次性注射器等
3.透析液在线生成后，酒精消毒采样口，待干燥后采样。
4.无菌注射器抽吸1ml透析液按无菌操作原则注入细菌培养试管
5.无菌注射器抽吸5ml透析液按无菌操作原则注入内毒素试管
6.及时送检，避免放置过久影响检测结果。
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透析液及其回收率的测定
革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒（显色法）即碱处理法
规范操作
1.目的
测定透析用水、透析液等样本内毒素含量，保证透析安全。
同时对样品加入一定浓度的内毒素标准品进行回收率试验测定，保证试验结果的准确性。
2.授权操作人
经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理
内毒素检测原理：革兰阴性菌脂多糖（内毒素）能激活反应主剂中的C因子、B因子、凝固酶原等，引起酶的级联反应，根据其引起的吸光度变化对革兰阴性脂多糖（内毒素）浓度进行定量测定。
样品回收率试验测定原理：仪器配套的一次性器具软件分别计算出样品溶液及含标准内毒素的样品溶液的内毒素含量Co和Ct，软件再自动按下式计算该试验条件下回收率R%。
R%=(Ct－Co)/λ×100%
其中Co为样品溶液内毒素实际测定值；
Ct为含标准内毒素样品溶液的内毒素实际测定值；
λ为样品溶液中加入的标准内毒素的浓度。
4．产品性能指标
4.1灵敏度0.01EU/ml
4.2精密度批间CV≤10%。
4.3准确性回收率75-125%。
4.4标准曲线范围0.1EU-10EU/ml。
4.5相关系数r绝对值≥0.980。
5.实验组成
5.1实验仪器及器具：
MB-80微生物快速动态检测系统，配套软件：一次性器具检测系统3.7X
洁净工作台旋涡混合器
加样器（5-50μl，20~200µl，100~1000µl）
5.2实验耗材：
无热原吸头(100µL、200µL、1000µL)
无热原平底试管(塑料)无热源转移管
无热原1.5mL离心管或一次性真空采血管（4ml或5ml）
5.3实验试剂：
内毒素标准品（冻干品），3EU/支
内毒素检查用水
试剂盒组成：反应主剂、主剂溶解液、处理液A、处理液B、质控品和质控品溶解液。
其中透析液测定只需要反应主剂与主剂溶解液两种组分即可。
6．工作环境
相对湿度：20%~80%；
温度控制：10~30℃；
电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
7.样本采集及处理
7.1检测样本:R/O水、透析液、A原液、B原液等
7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原转移管。
7.3样品采集标准
7.3.1供试液的制备[1]：
浓缩液，直接取样成供试液；
对干粉，称取样品5克，用细菌内毒素检查用水按使用说明配成浓缩液成供试
液。
取供试液按使用说明的比例混合，以细菌内毒素检查用水稀释后进行检测。
7.3.2用水标准[2]
应在透析装置和供水回路的连接处收集试样，取样点应在供水回路的末端或在混合室的入口处。
7.3.3《血液透析器复用操作规范》透析复用用水
采样位置：应在血液透析器与复用系统连接处或尽可能接近此处进行水质检
测。
检测时间：最初应每周检测一次，连续两次检测结果符合要求后，内毒素检
测应每3个月至少一次。
7.3.4《血液净化标准操作规程（2010版）》透析用水的水质监控
采样位置：反渗水输水管路的末端
检测时间：透析用水内毒素检测至少每3个月1次。
每台透析机每年至少检
测1次。
8.操作程序
8.1打开仪器电源，预热30分钟，使仪器处于稳定状态（37℃）；
8.2填写表头信息：
“测定日期”默认为同电脑的系统时间相同
“数据文件名”与“测定日期”相同，可以改动（注意避免文件名重复）；
“检验员”填写操作者姓名；
“试剂批号”与试剂盒上的批号一致；（必填）
“试剂灵敏度”的填写为0.01EU/ml；（必填）
8.3填写样本基本信息
要求回收率信息与样品信息完全一致。
注意：填写标本名称、稀释倍数（如果标本名称一样，一定要区分开（如透析液
1、透析液2），否则软件会自动计算2个标本结果的平均值）。
8.4确认输入信息无误后，然后点击“采集”按钮。
8.5样品内毒素的测定
8.5.1取样品50μl加入无热原塑料平底试管中
（不需要处理液的参与及加热及冷却过程，需要与血清试剂区分!）。
8.5.2溶解反应主剂，轻轻摇匀，避免剧烈震荡。
EKT-2M：取0.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-5M：取1.2mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-12M：取2.8mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-25M：取5.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；
8.5.3在已加入样本的平底试管中分别加入200µl溶解好的主剂，在漩涡振荡器上轻
轻震荡震荡1-2s后，插入仪器孔道即可进行数据采集。
8.6样品回收率的测定
8.6.1将内毒素工作标准品溶解并稀释至0.5EU/ml。
取3EU内毒素工作标准品，加入1000ul待测定样品溶液，放在振荡仪上振荡5分钟，使之充分混合，即得3EU/ml内毒素标准品溶液。
取100ul上述3EU/ml内毒素标准品溶液与500ul待测定样品溶液，震荡混匀一分钟，得到0.5EU/ml的内毒素标准品样本溶液。
8.6.2样品回收率的检测，与主剂反应
取0.5EU/ml的内毒素标准品样本溶液50ul加入无热原塑料平底试管中
（不需要处理液的参与及加热及冷却过程，，需要与血清试剂区分!）。
溶解反应主剂，轻轻摇匀，避免剧烈震荡。
EKT-2M：取0.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-5M：取1.2mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-12M：取2.8mL主剂溶解液溶解反应主剂；
EKT-25M：取5.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；
在已加入样本的平底试管中分别加入200µl溶解好的主剂，在漩涡振荡器上轻轻震荡1-2s后，插入仪器孔道即可进行数据采集。
每份样品回收率需做三个平行。
反应结束后仪器自动计算结果并保存。
9.透析液及回收率测定操作流程图
9.透析液及回收率测定操作流程图（以2M为例）
9.1样品内毒素测定
9.2样品回收率的测定
10.试验结果查看及判断。
10.1试验结果的查看
试验结束后，返回主界面，进入数据分析模块，调入试验数据：
打开数据后，点击“检验报告”，即可查看样品内毒素实测值及回收率值。
10.2结果判断标准
10.2.1透析用水
透析用水的定义为满足本标准的要求且适用于血液透析用途的水，包括透析液的制备用水、透析器的再处理用水、透析浓缩液的制备用水和在线置换液制备用水；
透析用水中的内毒素含量应不超过0.25EU/mL[3]。
10.2.2透析液
浓缩物以细菌内毒素检查用水配成透析液后，透析液的内毒素限量应不大于0.5EU/ml[1]；
10.2.3血液透析器透析复用用水内毒素含量≤2EU/ml[4]；
10.2.4置换液内毒素＜0.03EU/ml[5]。
10.3结果的判断
样品的检测结果若符合判断标准，且样品阳性对照的回收率在50~200%范围内，表示符合规定。
样品管检测结果若大于判断标准，则表示不符合规定。
11实验结果打印
点击功能键“打印”选择分组格式，即可打印。
打印结果如下：
12.注意事项：
1、样品的选择采取过程防止污染
2、操作过程防止污染
3、操作检测过程中用到的耗材须除热原
4、透析液操作过程中不需要处理液参与及加热冷却的步骤，需要与血清操作区分！
13.相关标准
①《中华人民共和国医药行业标准》YY0598-2015《血液透析和相关治疗用浓缩物》（ISO13958：2009,MOD）
②《中华人民共和国医药行业标准》YY0572-2015《血液透析和相关治疗用水》（ISO 13959：2009,MOD）
③《中华人民共和国医药行业标准》YY0572-2015《血液透析和相关治疗用水》（ISO 13959：2002,MOD）用水标准
④中国《血液透析器复用操作规范》透析复用用水标准
⑤血液净化标准操作规程（2010版）。