菌落总数检验操作规程
菌落总数检测操作规程
微生物检测操作规范1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法本标准适用于遂平克明面业有限公司方便面生产线微生物控制及验证计划。
本标准适用于遂平克明面业有限公司方便面产品菌落总数、大肠菌群检测。
2 规范性引用标准GB 4789.1-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》。
GB/T 4789.3-2003《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》。
GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。
4 设备和材料恒温培养箱：36℃±1℃。
恒温水浴箱：46℃±1℃。
天平：感量为0.1g。
无菌吸管：1ml（具有0.01ml刻度）、10ml（具有0.1ml刻度）。
无菌培养皿：直径90mm。
无菌锥形瓶：容量500ml；或225ml塑料稀释瓶（带内垫，可高温灭菌）。
灭菌试管：16mm×160mm；或10ml-20ml无菌管。
显微镜：10×-100×4 培养基和试剂平板计数琼脂培养基：GB 4789.2-2016 附录A.1。
无菌生理盐水：GB 4789.2-2016 附录A.3。
乳糖胆盐发酵管：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。
伊红美蓝琼脂平板：按GB/T 4789.3-2003中4.25规定。
乳糖发酵管：按GB/T 4789.3-2003中2.2规定。
EC肉汤：按GB/T 4789.28-2003中4.11规定。
格兰仕染色液：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。
5菌落总数检验程序实验前准备移液管、三角瓶、试管包扎、灭菌移液管：洗净烘干后在吸管粗头顶端约0.5cm处，塞上一小段棉花，后用4-5cm宽的报纸或牛皮纸将其以下图所示包扎好。
三角瓶包扎图例将包扎后的器具放入灭菌锅，121℃ 15min灭菌。
a.样品处理面饼样品经粉碎机粉碎后，称取25g粉碎样加入装有225ml无菌生理盐水的稀释瓶内，充分振摇，做成1:10的均匀稀释液。
菌落总数测试片安全操作及保养规程
菌落总数测试片安全操作及保养规程前言菌落总数测试片是在食品、饮料、制药等行业中广泛应用的一种实验室用品，用于检测样品中的微生物数量。
正确的操作和保养，不仅能够保证测试数据的准确性，还能延长设备的使用寿命。
本文档旨在为使用菌落总数测试片的实验室人员提供安全操作及保养规程，以便正确且有效地使用该设备。
安全操作规程1.检测前准备工作在进行菌落总数测试前，需要进行一些准备工作。
•首先，检查试剂盒是否完整、完好。
•其次，需要对实验室进行清洁，确保试样不会受到外来污染。
•最后，检查检测设备是否工作正常。
2.操作步骤具体的菌落总数测试操作步骤如下：1.将手持菌落计瓶插入加热设备中，加热到80℃左右（不要超过90℃）。
2.准备好待测样品，并使用消毒液将样品平台擦拭消毒。
待样品平台干燥后，打开试剂盒，取出测试片。
3.拿起测试片，用过滤棉球沾取少量样品，涂在测试片的圆形区域上，记得不要涂满，要注意对称，以避免对测试结果的影响。
4.将测试片放入一个透明的塑料袋里，将原袋弯角45°折叠，收紧口部，放置在加热设备中，加热时间为30min ± 1min。
5.取出加热设备中的透明袋，打开袋口，拿起测试片，将其反转在富营养液培养皿中，培养时间为48小时± 4小时。
6.在培养后的菌落数量区域，数清菌落数量，并将结果记录在实验记录簿上。
3. 注意事项在使用菌落总数测试片过程中，还需要注意以下事项：1.尽量避免使用过期的试剂盒和菌落计瓶。
2.操作过程中需要佩戴手套和口罩。
3.遵循操作规程，严禁进行任何私自操作或修改设备设置。
4.由专人负责使用和保养设备，不得擅自借用或转移使用。
5.每次操作后，要及时清洗设备以保证设备的清洁度和准确性。
保养规程菌落总数测试片是一种高精度、高灵敏度的实验室设备，因此需要进行专业的保养和维修。
1.日常保养日常保养是延长菌落总数测试片使用寿命和保证测试结果准确性不可缺少的一部分。
菌落总数的检验程序的流程
菌落总数的检验程序的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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菌落总数操作手册
菌落总数操作手册
一、概述
菌落总数是指在一定条件下生长的细菌菌落数，用于评估食品或环境的卫生质量。
本操作手册将详细介绍如何进行菌落总数检测，以确保实验结果的准确性和可靠性。
二、实验材料
1. 培养基：平板计数琼脂（PCA）
2. 试剂：无菌生理盐水
3. 器具：无菌棉签、无菌培养皿、无菌移液管（1mL）、天平、pH计、恒温培养箱、计时器、灭菌锅
三、实验步骤
1. 样品采集：使用无菌棉签采集适量样品，并放入无菌容器中。
对于液体样品，直接使用无菌移液管取样；对于固体或半固体样品，需将样品研磨或搅拌均匀后取样。
2. 样品稀释：将采集的样品进行稀释，使细菌能更好地在培养基上生长。
根据样品性质和预计菌落数，选择适当的稀释倍数。
一般采用10倍稀释法。
3. 制备平板：将PCA培养基加热融化后，冷却至45℃左右，倒入无菌培养皿中，每皿约15mL。
4. 接种样品：将稀释后的样品取1mL加入已制备好的平板中，用无菌玻璃棒均匀涂布在培养基上。
5. 培养：将培养皿倒置放入恒温培养箱中，在37℃下培养24-48小时。
6. 计数：计数平板上的菌落数，并记录结果。
根据实验要求，计算出样品中的菌落总数。
7. 结果报告：根据实验数据，撰写实验报告并向上级汇报检测结果。
四、注意事项
1. 实验前应保证所有器具和试剂的无菌状态，避免交叉污染。
2. 实验过程中要保持清洁卫生，避免人为误差。
菌落总数的测定方法
菌落总数的测定
配药品平板计数琼脂培养基，配0.85%生理盐水，将配好的培养基、生理盐水、培养皿、吸管、吸球，都用报纸包起来，放入灭菌锅中灭菌121℃15分钟，灭菌的同时，开紫外线照射灯20分钟，然后关闭操作之前先点燃酒精灯，用酒精棉擦手3遍，擦超净工作台3遍，最后用酒精棉过一下火，擦超净工作台一遍后，弃去棉球，然后从灭菌锅中取出物品，放在超净工作台中，开始操作，开始在超净工作台中吸取25ml样品，置盛有225ml灭菌生理盐水中，充分混匀，制成1:10的样品匀液，
用1ml无菌吸管吸取1:10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注入盛有9ml 生理盐水的无菌试管中制成1:100的样品匀液。
再用1ml无菌吸管吸取1:100的样品匀液1ml沿管壁缓慢注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中制成1:1000的样品匀液。
每个稀释度1:10,1:100,1:1000都取1ml试样放入无菌培养皿然后逐个加入培养基，以铺满培养皿铺匀为止，然后摇匀，每个稀释度做两个平皿，同时做空白，空白只加琼脂，待琼脂凝固后，翻转平板，培养皿放入电热恒温培养箱36℃，培养48h±2h
检验人员：。
菌落总数检验操作规程
菌落总数检验操作规程一、实验室准备工作1.准备培养基：根据实验需求选择适当的培养基，如营养琼脂培养基、大肠埃希氏菌选择性培养基等。
注意培养基的成分和质量。
2.准备培养基平板：测量合适的培养基量并加入培养皿中，使用无菌技术将培养基均匀倒入培养皿，标明编号和日期。
二、样品处理1.准备样品：如食品样品，需要将样品称重并加入适当的生理盐水中，用搅拌器或均质仪进行均匀悬浮。
2.稀释样品：根据实验需要，对样品进行系列稀释。
取适量的悬浮样品，依次加入尺量瓶中的生理盐水，振摇均匀。
三、接种培养1.无菌操作：在无菌工作台内进行操作，穿戴好无菌手套，将培养皿放入工作台上，注意防止污染。
2.接种样品：使用无菌移液器，取适量的稀释样品均匀滴入培养皿上。
3.均匀涂布：使用无菌匀涂棒，将样品在培养皿上均匀涂抹，注意避免混入外来微生物。
四、培养条件1.始菌箱：将接种后的培养皿置于始菌箱中，设定适当的温度和湿度（如37℃，24小时）。
2.孵化箱：将始菌箱中的培养皿转移到恒温培养箱中适当孵育时间，保持适宜温度及湿度。
五、菌落计数1.观察菌落：取出培养好的菌落总数平板，放在均匀光源下观察菌落的形态、颜色、大小等特征，标记异常菌落。
2.计数菌落：使用计数器或显微镜对菌落进行计数，记录结果，并用公式计算菌落总数。
每个菌落总数平板至少计数两遍，计算平均值。
六、数据分析与结果判定1.数据分析：对不同样品的检测结果进行归类整理，统计菌落总数的分布情况。
2.结果判定：根据相应的标准或规定，比较样品的检测结果与标准要求，判定样品是否合格。
七、清洗和消毒1.清洗：将培养皿彻底清洗干净，清除残留的培养基和菌落。
2.消毒：将使用过的器材进行高温高压消毒或化学消毒，确保无菌环境。
以上就是菌落总数检验操作规程的简要示例，实验过程中需严格遵守无菌操作规范，并根据具体实验要求进行相应的调整。
在实验过程中，及时记录实验数据，注意安全操作。
实验完成后，对结果进行统计分析和归档保存。
菌落总数检验步骤
菌落总数检验步骤第一法平板菌落计数法6 操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，5 000r/min~10 000r/min 均质1 min~2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min ，制成1：10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 ：10 的样品匀液。
6.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1：10 样品匀液1 mL ，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100 的样品匀液。
6.1.4 按6.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用一次1 mL 无菌吸管或吸头。
6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）, 在进行10 倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液加人两个无菌平皿内。
同时分别取1 mL 稀释液加人两个无菌平皿作空白对照。
6.1.6 及时将15 mL~20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
6.2 培养6.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48h±2h 。
水产品30 ℃±1 ℃培养72h±3h.6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL ) ，凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。
(完整版)菌落总数检测操作规程(国标word版)摘要
山西梁汾醋业有限公司文件类别及编号： LF-GC—01 版次共页第页菌落总数测定的标准操作规程1。
目的规范山西老陈醋菌落总数测定的操作规程,保证山西老陈醋产品的质量。
2。
适用范围酿造食醋和配制食醋菌落总数的测定。
3. 仪器设备恒温培养箱，冰箱,恒温水浴箱，天平（0.1g）,均质器,振荡器；无菌吸管1ml(0。
01刻度）、10ml（0.1ml刻度）或微量移液器及吸头；无菌锥型瓶，250ml/500ml;无菌培养皿：直径90mm；PH计或精密PH试纸；放大镜或菌落计数器4.培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基,成分：胰蛋白胨 5.0g酵母浸膏 2。
5g葡萄糖 1。
0g琼脂 15.0g 蒸馏水 1000ml PH7.0±0.2制法：将上述加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节PH 。
分装试管或锥型瓶，121℃高压灭菌15min 。
4.2磷酸盐缓冲液 成分:磷酸二氢钾(KH 2PO 4） 34。
0g 蒸馏水 500ml PH 7.2 制法：贮存液:称取34。
0g 磷酸二氢钾溶于500ml 蒸馏水中，用大约175ml 的1mol/L 氢氧化钠溶液调节PH,蒸馏水稀释至1000ml 存于冰箱.稀释液：取贮存液1。
25ml,用蒸馏水稀释至1000ml ，分装于适宜容器中，121摄氏度高压灭菌15分钟。
4.3无菌生理盐水 成分：氯化钠 8。
5g 蒸馏水 1000ml制法：8.5克氯化钠溶于100ml 蒸馏水中121摄氏度高压灭菌15分钟。
5 检验程序6操作步骤6。
1样品的稀释6.1.1固体和半固体样品:称取25 g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1min~2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min，制成1：10的样品匀液。
6。
1。
2液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀,制成1：10的样品匀液。
微生物室细菌菌落总数测定操作规程
微生物室菌落总数测定操作规程菌落总数：将一定量的待测样在营养琼脂上，有氧条件下37℃培养48h后，营养琼脂中所含菌落的总数1材料准备1.1培养基与试剂1.2营养琼脂培养基1.2.1.1成分a．蛋白胨 10gb．牛肉膏 3gc．氯化钠 5gd．琼脂 10—20ge．蒸馏水 1000mlf．生理盐水约1000ml1.1.1.2 制法将上述成分混合并加热溶解后，加入琼脂加热溶化，然后补足所需要的水分，再调整pH为7.4—7.6，然后放入三角瓶中包扎好后，在121℃条件下灭菌20min，冷却备用。
1.3仪器a．高压蒸汽灭菌器（锅）b．恒温培养箱（37℃±1℃）c．电炉d．天平e．冰箱f．放大镜g．pH计（或精密pH试纸）h．灭菌试管、平皿（φ=9cm）、刻度吸管、管塞等i．灭菌移液枪枪头j．玻璃菌落涂布器2检验步骤2.1取样并稀释2.1.1制备无菌生理盐水制取1000ml生理盐水，在121℃条件下灭菌20min冷却至室温，放置于无菌条件下备用。
2.1.2 取样稀释用灭菌注射器（或灭菌吸管）吸取一定量的待测样品注入已盛有一定量灭菌生理盐水和足够的玻璃珠的灭菌三角瓶中，扎好瓶口，在震荡器中振摇20min，制成10-1的菌悬液，再用无菌吸管（或移液枪）在10-1的菌悬液取1ml，加入另一个已盛有9ml无菌生理盐水的试管中，混匀，制成10-2的菌悬液。
按此法依次制成10-3,10-4,10-5,10-6,10-7等不同稀释度的菌悬液备用。
2.2.1制平板并涂布将灭菌后的培养皿取出，冷却。
将每个培养皿里倾注约15-35ml已溶融化并冷却到45℃左右的培养琼脂，待其完全凝固后选择3～4个合适的稀释度的菌悬液，移取0.1ml于培养基上，用灭菌的涂布器将菌悬液均匀的涂布于培养基表面，将培养皿放置于水平桌面上至少20min，使微生物完全吸附于培养基上。
每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作空白对照(视情况可不做空白对照)。
菌落总数测定操作规程
1 规范性引用文件：下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，起随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用与本标准，然而，鼓励根据本标准达成的协议的各方研究是否适用这些文件最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
中华人民共和国药典2005 版附录2 抽样方法成品同一批号的产品中至少随机抽取 3 包装样品，取好的样品应用无菌袋装好，检验前不得打开。
3 设备和材料3.1 冰箱0 C〜4°C。
3.2 恒温培养箱：36C±1 C和25土1C3.3 恒温水浴锅：46C±1C。
3.4 电子天平：0g〜500g，精确至0.01g.3.5 可调试移液枪：1ml〜5ml3.6 旋涡混匀器3.7 薄膜过滤器：三联3.8 灭菌吸管：1ml（具0.01ml 刻度）、10ml （0.1ml 刻度）。
3.9 灭菌锥形瓶：500ml,250ml.3.10 灭菌培养皿：直径约90mm3.11 灭菌剪子、镊子、滤头、移液枪头等。
4 试剂和培养基4.5 0.1%2 , 3, 5-三苯基氯化四氮咗溶液121C, 15min灭菌备用。
4.2 磷酸24.1 营养琼脂培养基：取15.2g营养琼脂培养基溶于400ml水中，装入500ml锥形瓶121C, 15min灭菌备用。
4.2 沙氏琼脂培养基：取25.6g 沙氏琼脂培养基溶于400ml 水中,装入500ml 锥形瓶121C, 15min灭菌备用。
4.3 洗脱液：取0.9g氯化钠溶于100水中（加入2 g山梨酸脂80）,装入100ml锥形瓶，另外再取0.9%氯化钠溶液分别以9ml/支分装于试管中121C, 15min灭菌备用。
4.4 75% 乙醇溶液4.5 0.1%2 , 3, 5-三苯基氯化四氮咗溶液121C, 15min灭菌备用。
5 操作步骤5.1 检样稀释及培养5.1.1以无菌操作将检样10g（ml）放于含有100mL灭菌生理盐水灭菌玻璃瓶，经充分振摇制成1 ：10 的均匀稀释液。
菌落总数检验操作规程
菌落总数检验操作规程目的：该操作规程用于规范公司产品及原料的活菌数量检验操作。
范围：该操作规程适用于公司要求检查该项的产品和原料的菌落总数检验责任人：微生物检验员，QC主管内容：1 技术依据及原理菌落总数计数采用平板菌落计数法，这是活菌计数方法之一。
该方法以在琼脂平板上，样品经过处理在一定条件下培养后，所得1ml（或1g）检样中形成菌落的总数。
测定结果只反映在规定条件下，只包括一群在平板计数琼脂生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。
在进行本法测定时，必须严格按本法规定的条件操作，以免产生实验误差。
2 材料、仪器、试剂的准备及基本要求2.1 无菌室2.1.1 结构和要求无菌室面积不超过10m2，高度不超过2.4m，应采光良好、避免潮湿、远离厕所所及污染区，有缓冲间（2个）、操作间组成。
操作间与缓冲间之间应有样品传递窗（箱），出入操作间和缓冲间的门不应直对。
无菌室应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。
墙与地面及墙壁、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。
操作间内不得安装下水道。
无菌室照明灯应嵌装在天花板内，室内光照分布均匀，光照度不低于300勒克斯。
缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯（2～2.5W/m3）, 紫外线杀菌灯距实验台面高度不超过1 m，并定期检查其辐射强度，辐射强度不低于70µW·cm-2（1 m距离），不符合要求的紫外线杀菌灯应即使更换。
2.1.2 温度、湿度无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外线杀菌灯的杀菌效果，故应控制温度18～26℃，相对湿度40～60%。
操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，压差不低于4.9Pa。
2.1.3 操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。
洁净度应不低于10000级，局部净化度100级，或放置同等级净化工作台，并准备药物天平，乙醇灯、打火机、大小橡皮乳头等。
2.1.4 缓冲间缓冲间应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。
实验十四样品中菌落总数的检测
实验十四样品中菌落总数的检测一、目的要求学习并掌握样品中菌落总数（平板菌落计数）的原理和方法。
二、实验材料1.样品：鲜啤酒2.培养基:营养琼脂培养基3.设备仪器:10ml无菌吸管1支、1ml无菌吸管4支、无菌带塞空试管3支、无菌空培养皿9套、酒精灯、试管架、无菌生理盐水、玻璃珠、温箱36℃±1℃、天平等。
三、基本原理菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1克或1毫升检样中所含细菌菌落的总数。
菌落总数主要作为制定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
每种细菌都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、pH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。
但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法去作细菌菌落总数的测定。
所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。
四、检验程序菌落总数的检验程序如下：五、操作步骤1．检样稀释及培养(1)以无菌操作，将检样25g(或25ml)剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨作成1:10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释后，最好置灭菌均质器中以8000～10000r/min的速度处理1分钟，作成1:10的均匀稀释液。
(2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml时，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管混合均匀，作成1:100的稀释液。
(3)另取1ml灭菌吸管，按上面各项操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支灭菌吸管。
(4 )根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
菌落总数测定操作规程
1规范性引用文件：下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，起随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用与本标准，然而，鼓励根据本标准达成的协议的各方研究是否适用这些文件最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
中华人民共和国药典2005版附录2 抽样方法成品同一批号的产品中至少随机抽取3包装样品，取好的样品应用无菌袋装好，检验前不得打开。
3设备和材料3.1 冰箱 0℃～4℃。
3.2 恒温培养箱：36℃±1℃和25±1℃3.3 恒温水浴锅：46℃±1℃。
3.4 电子天平：0g～500g，精确至0.01g.3.5 可调试移液枪：1ml～5ml3.6 旋涡混匀器3.7 薄膜过滤器：三联3.8 灭菌吸管：1ml(具0.01ml刻度)、10ml（0.1ml刻度)。
3.9 灭菌锥形瓶：500ml,250ml.3.10 灭菌培养皿：直径约90mm3.11 灭菌剪子、镊子、滤头、移液枪头等。
4试剂和培养基4.5 0.1%2，3，5-三苯基氯化四氮咗溶液121℃，15min灭菌备用。
4.2 磷酸24.1 营养琼脂培养基：取15.2g营养琼脂培养基溶于400ml水中，装入500ml锥形瓶121℃，15min灭菌备用。
4.2 沙氏琼脂培养基：取25.6g沙氏琼脂培养基溶于400ml水中，装入500ml锥形瓶121℃，15min灭菌备用。
4.3 洗脱液：取0.9g氯化钠溶于100水中（加入2 g山梨酸脂80），装入100ml锥形瓶，另外再取0.9%氯化钠溶液分别以9ml/支分装于试管中121℃，15min灭菌备用。
4.4 75%乙醇溶液4.5 0.1%2，3，5-三苯基氯化四氮咗溶液121℃，15min灭菌备用。
5 操作步骤5.1检样稀释及培养5.1.1以无菌操作将检样10g(ml) 放于含有100mL灭菌生理盐水灭菌玻璃瓶，经充分振摇制成1：10的均匀稀释液。
菌落计数器操作规程
菌落计数器操作规程
《菌落计数器操作规程》
一、概述
菌落计数器是用于计算微生物菌落数量的仪器，通常应用于食品、药品、环境等领域。
正确的操作规程对于准确测得样品中的微生物菌落数量至关重要。
二、操作规程
1. 准备
在进行菌落计数之前，应确保工作台面干净整洁，使用紫外线灯或75%酒精擦拭工作台面。
同时确认菌落计数器灯管是否正常工作，灯管是否需要更换。
2. 样品处理
将待测样品放入灭菌的培养皿中，转动培养皿使样品均匀地分布在培养基表面。
3. 计数
将培养皿放入菌落计数器中，使用放大镜观察培养皿中的微生物菌落。
注意：在观察过程中要避免培养皿与灯管直接接触，以免造成灯管污染。
4. 记录结果
使用计数器进行菌落计数，记录每个培养皿中的菌落数量。
注意：每个培养皿中大于300个菌落的样品，应选取少于300个菌落的培养皿进行计数。
5. 结果分析
根据计数结果计算出菌落的数量，并根据需求制作相应的报告。
6. 清洁消毒
使用75%酒精或其他消毒液清洁菌落计数器的工作台面，确
保下次使用前的卫生条件。
三、注意事项
1. 在操作时要做到轻拿轻放，避免碰撞造成培养皿破裂。
2. 观察过程中注意保持适当的距离，避免过多照射紫外线对人体健康造成伤害。
3. 每次使用后及时进行清洁消毒，保持设备的卫生条件。
通过严格按照菌落计数器的操作规程进行操作，可以保证结果的准确性，为食品、药品、环境等领域的微生物检测提供可靠的数据支持。
微生物菌落总数的测定—菌落总数的计数方法
混合均匀。
•
6、 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温
箱内培养48±2h，水产品30±1℃温箱内培养72±3h。
•
如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生
长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼
脂培养基（约4毫升），凝固后培养。
• （二） 菌落记录方法 做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要
菌落总数的测定
三 、 材料
1、 食品检样 2、 培养基 平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 3、 其它 无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培养箱等。
四、 流程
• 1、检样 • 2、做几个适当倍数的稀释液 • 3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入
灭菌平皿内 • 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 • 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小时 • 6、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量 • 7、 计算菌落总数 → 报告
10-4
3.1x106
• 2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜
计数范围内时，应以两者比值决定。若其比值小 于2，应报告两者的平均数；若大于等于2，则报 告稀释度较小的菌落数。
试样 稀释度
例次 10-2
10-3
1
380
52
平
2 均 526
205
菌
3 落 271
60
数
4
284
152
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
18
10-3
5.2x104
32
10-3，10-4
2.6x105
12
菌落总数检验操作规程
菌落总数检验操作规程菌落总数检验操作规程一、目的建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。
二、适用范围适用于菌落总数的检验操作。
三、职责1. 检验人员严格按检验操作规程进行检验。
2. QC主管监督检查执行情况。
四、程序1.范围本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定2.术语和定义菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
3. 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ℃ ±1 ℃。
3.4天平：感量为0.1 g。
3.5均质器。
3.6振荡器。
3.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。
3.9无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
3.11放大镜或和菌落计数器。
4.培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。
4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.24.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。
5.检验程序菌落总数的检验程序见图1。
图1 菌落总数的检验程序6.操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～***** r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液6.1.3用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
菌落总数快速测试仪安全操作及保养规程
菌落总数快速测试仪安全操作及保养规程1. 引言菌落总数快速测试仪是一种用于测定食品、饮料、水质等样品中菌落总数的设备。
为了确保操作人员的安全，并保证设备的正常运行和精确测量结果，本文档将介绍菌落总数快速测试仪的安全操作规程和保养规程。
2. 安全操作规程2.1 准备工作在操作菌落总数快速测试仪之前，请确保已经阅读并理解设备的使用说明书。
确保设备处于良好的工作状态，并检查以下准备工作：•确认电源线没有损坏，并插入正确的电源插座；•检查仪器与电源之间的接口是否正常连接；•检查试剂和培养基的有效期，并确保储存条件符合要求；•准备好所有需要的样品管、培养皿等样品容器；•确保操作区域干净整洁，并准备好相关的消毒液和清洁工具。
2.2 操作步骤以下是菌落总数快速测试仪的安全操作步骤：1.打开电源开关，确保仪器的电源指示灯亮起；2.进入菜单界面，选择正确的测量模式；3.根据实验要求，准备样品，将样品放入样品容器中；4.打开仪器顶部的取样口，将样品注入仪器；5.操作界面上根据提示选择相关参数，并开始测量；6.等待测量结果显示，记录结果并做相应的数据处理。
2.3 注意事项在操作菌落总数快速测试仪时，请注意以下事项：•在操作过程中，避免将手指或其他物体插入取样口；•避免在测量过程中移动或震动仪器，以免影响测量精度；•使用前请保证样品容器和相关器具的清洁和无菌状态；•注意避免接触试剂和培养基，以免引起过敏或污染；•定期进行仪器的校准和质控检测，确保测量结果的准确性；•使用完毕后，关闭电源开关，拔掉电源插头。
3. 设备保养规程为了延长菌落总数快速测试仪的使用寿命，并保证仪器的准确性和稳定性，需要进行定期的清洁和保养。
3.1 日常保养每次使用完菌落总数快速测试仪后，请进行以下日常保养工作：1.关闭电源开关，断开电源插头；2.使用干净的柔软布擦拭仪器外表面，清除尘埃和杂质；3.使用稀释的中性清洁剂擦拭仪器的操作面和仪器顶部的取样口，清除污染物和残留的样品；4.使用干净的湿布擦拭仪器的显示屏和按键。
菌落总数的检验程序的流程
菌落总数的检验程序的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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菌落总数国标法验证
菌落总数国标法验证菌落总数测试片验证——国标法1.样品的前处理：（建议使用蔬菜瓜果、自来水及标准细菌作为样品）（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。
（2）自来水：以无菌直接吸吸取1mL自来水进行检测。
（3）标准细菌：挑取平板上标准细菌的单菌落，于盛有5mLLB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。
用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL 菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。
2.样本稀释倍数：用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液必要时用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。
（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证。
（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证。
（3）大肠菌群标准菌的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证。
（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。
3.接种：3.1选取1~2个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL。
同时取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
3.2 及时将15mL~20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均与。
3.3 琼脂凝固后，将平板翻转，置于36℃±1℃培养48h左右。
4.计数:选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数，低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。
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A.1
月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤
A.1.1
成分
胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g
氯化钠5.0 g
乳糖5.0 g
磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75 g
磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75 g
月桂基硫酸钠0.1 g
蒸馏水1 000 mL pH 6.8±0.2 制法
将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。
分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL 。
121 ℃高压灭菌15 min 。
菌落总数检验操作规程
一、目的
建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。
二、适用范围
适用于菌落总数的检验操作。
三、职责
1.检验人员
严格按检验操作规程进行检验。
2.QC主管
监督检查执行情况。
四、程序
1.范围
本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定
2.术语和定义
菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
3. 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
3.4天平：感量为0.1 g。
3.5均质器。
3.6振荡器。
3.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。
3.9无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
3.11放大镜或和菌落计数器。
4.培养基和试剂
4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。
4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2
4.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。
5.检验程序
菌落总数的检验程序见图1。
图1 菌落总数的检验程序
6.操作步骤
6.1 样品的稀释
6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液
6.1.3用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支
无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
6.1.4 按6.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。
6.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时，分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6.1.6及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
6.2培养
6.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1 ℃培养48 h±2 h。
水产品30℃±1 ℃培养72 h±3 h。
6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 mL），凝固后翻转平板，按 6.2.1 条件进行培养。
6.3 菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
6.3.1 选取菌落数在30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
6.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数
7.结果与报告
7.1菌落总数的计算方法
7.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。
7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按以下公式计算：
N=∑C (n1+0.1n2)d
式中：
N——样品中菌落数；
C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数
d——稀释因子（第一稀释度）.
7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.1.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于乘以最低稀释倍数计算。
7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计
7.2菌落总数的报告
7.2.1菌落数小于100 CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
7.2.2菌落数大于或等于100 CFU 时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
7.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
7.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
7.2.5称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。
8.编制依据：GB 47892-2010 食品微生物学检验菌落总数的测定
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂
A.1平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基
A.1.1 成分
胰蛋白胨 5.0 g
酵母浸膏 2.5 g
葡萄糖 1.0 g
琼脂15.0 g
蒸馏水1000 mL
pH 7.0±0.2
A.1.2制法
将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15 min。
A.2磷酸盐缓冲液
A.2.1成分
磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0 g
蒸馏水500 mL pH 7.2
A.2.2 制法
贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中，用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1 000 mL后贮存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，分装于适宜容器中，121 ℃高压灭菌15 min。
A.3无菌生理盐水
A.3.1 成分
氯化钠8.5 g
蒸馏水 1 000 mL
A.3.2
称取8.5ｇ氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。
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