辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG使用说明
GoatAnti-RabbitFcspecificIgG产品使用说明书
Goat Anti-Rabbit (Fc specific)IgG产品使用说明书
技术背景： NanoGen TM提供的多克隆抗体主要来自于宿主动物（BALB/c小鼠、家兔、山羊）抗血清、鸡卵黄等，单克隆抗体主要来自于小鼠杂交瘤克隆株。
本产品为以兔IgG Fc片段作为免疫原，制备山羊抗血清，经阴离子交换柱纯化，去除羊血清中其他非特异蛋白，特异识别兔IgG Fc片段的抗体，酶类如碱磷酶（AP）、辣根过氧化物酶（HRP）及其衍生物，荧光染料如荧光素（FITC）、罗丹明及其衍生物，TRITC，青色素（Cy3），藻红蛋白（R-PE）标记后，可用于科学研究。
与鼠IgG、山羊IgG和人IgG 无交叉反应。
二抗克隆性：多克隆
二抗免疫原：兔IgG Fc片段
二抗宿主动物：山羊
应用：免疫组化、免疫荧光、蛋白印记、细胞相关分析实验、流式细胞术。
产品推荐使用浓度：Western blotting/1:5000-1:10000
Enzyme immunoassays/1:1000-1:5000
具体实验过程中，应根据不同的使用用途选择IgG最适工作浓度。
保存说明：自生产之日起，-20℃可保存1年，经常使用可置4℃；为了更好保存、使用试剂，使用前后请适当离心（盖帽）；禁止反复冻溶。
备注：本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
HRP标记二抗
二抗：山羊抗小鼠（HRP标记）山羊抗小鼠说明本二抗为辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L)(HRP-labeled Goat Anti-Mouse IgG(H+L))，用于Western、ELISA和IHC等的二抗。
HRP，即horseradish peroxidase，中文名为辣根过氧化物酶，可以在Western检测时催化ECL 类试剂(如ECL、BeyoECL等)产生化学发光，可以在ELISA时催化TMB产生蓝色，也可以在IHC 或Western blot检测时催化DAB产生棕色沉淀。
本辣根过氧化物酶标记山的羊抗小鼠IgG(H+L)用于WB、ELISA和IHC的推荐稀释比例参考上表，实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节二抗的稀释比例。
对于WB，推荐的稀释范围为1:500-2000。
本二抗为用纯化的小鼠IgG免疫山羊，然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化，并经过人IgG吸附纯化的优质山羊抗小鼠二抗。
对人IgG几乎没有结合能力。
·二抗用途本山羊抗小鼠二抗如果用于常规的Western检测，以每次检测需5毫升1:1000稀释的二抗计，至少可以检测20次。
·使用方法Western、ELISA或IHC请参考相关实验步骤进行。
起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。
叠氮钠会抑制辣根过氧化物酶的活性，在含有辣根过氧化物酶的二抗中不可加入叠氮钠。
·使用建议稀释比：ELISA，1:200；Western blot，1:1000；Immunohistochemistry，1：50.稀释后的一抗，回收后可重复使用，回收后的稀释一抗可在4°C短期保存。
·保存条件本山羊抗小鼠二抗4°C保存，一年有效。
·其他说明详细内容请参考说明书。
过氧化物酶标记亲和素使用说明
过氧化物酶标记亲和素使用说明
HRP-Avidin
货号：SE065
规格：0.1ml
保存：-20℃保存至少一年，避免反复冻融。
2-8℃可保存3-6个月。
产品说明：
HRP标记亲和素是采用进口亲和素和高活性过氧化物酶HRP，用改良过的碘酸钠氧化法制成复合物，可广泛用于免疫病理、酶联免疫测定、基因探针及其他学科的放大检测系统。
过氧化物酶标记亲和素每毫升含有 1.5-2mg的Avidin和HRP，3mgBSA。
工作效价：
ELISA法：1：500～1000
组织化学：1：30～100
免疫印迹：1：200～500。
斑点免疫：1：200～500。
具体效价以产品标签为准，最佳使用条件需根据所检测样本的抗原及一抗效价优化而定。
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SF134羊抗兔IgG-FITC
SE237兔抗猪IgG-HRP
A1800抗体稀释液。
分子实验--Western Blotting检测人IgG
Western Blotting检测人IgG作者兰州大学生命学院生物学基地班摘要本实验采用人血清为材料，对此样品进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳后，用电转移法将蛋白质转印到硝酸纤维素薄膜上，用兔抗人IgG为第一抗体，用辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为第二抗体，在过氧化物酶底物存在的情况下，检测人的IgG。
关键词Western Blotting 抗体电泳前言Western Blotting是将经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质为抗原，与对应的第一抗体发生免疫结合反应，一抗再与酶或同位素标记的第二抗体发生免疫结合反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异目的蛋白成分。
该技术也广泛应用于检测目的蛋白质的表达水平。
正文一、实验试剂，器材和材料的准备试剂（1）药品：丙烯酰胺N,N'—甲叉双丙烯酰胺，四甲基乙二胺，过硫酸铵，三羟甲基氨基甲烷（Tris），甘氨酸，琼脂，蔗糖，溴酚蓝，十二烷基硫酸钠，甲醇，甘油，巯基乙醇，考马斯亮蓝R-250标准分子量蛋白，冰乙醇，兔抗人IgG，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG，脱脂奶粉，HCL，NaCL，过氧化氢，CoCl2.（2）电极缓冲液：甘氨酸28.2g，SDS1g，Tris6g,加水至1000ml，ph8.3.用时稀释一倍。
（3）转移缓冲液：25mmol/lTris,192mmol/l甘氨酸，20%甲醇，ph8.3 （4）TBS缓冲液：20mmol/LTris-HCl,500mmol/LNaCl,ph7.5（5）TTBS:取100mlTBS,加50ul Tween-20（6）封闭液及抗体稀释液：3%脱脂奶粉-TBS（7）底物溶液： 2.5mg二氨基联苯胺+9mlTBS+1ml0.3%CoCl2+10ulH2O2,临用前配置。
（8）30%丙烯酰胺贮备液:29.2g丙烯酰胺，0.8g甲叉双丙烯酰胺，加重蒸水至100ml。
纯化抗体IgG使用说明
纯化抗体IgG使用说明
Purification Antibody
规格：1mg/5mg/10mg
保存-20℃保存，有效期一年以上
产品说明:
纯化抗体IgG采用Protein A/G亲和层析纯化，制成高纯度（﹥95%）和高活性的纯化羊或兔IgG抗体。
纯化抗体IgG为PBS溶液，可根据用户要求，配成不同浓度，用前最好-20℃存放，可根据使用方法采用不同浓度稀释。
通常不同使用目的可分别用下列缓冲液稀释，注意完全溶解后充分混匀。
冻存过久会产生少量聚合体，用前最好低温高速离心，去除冷聚合球蛋白及变性蛋白后重新定量。
抗体标记：500ug～20mg/ml，ELISA包板：10～20ug/ml，层析金条对照线：2mg/ml等。
胶体金标记：用pH9.0硼酸缓冲液稀释。
HRP标记：用0.01mol/L pH9.0CB或用包被液CB稀释。
荧光素标记：用0.5mol/L pH9.5CB（碳酸盐缓冲液）稀释。
生物素标记：用0.1mol/L NaHCO3稀释。
其它方法：如免疫扩散可用0.01mol/L pH7.2PBS稀释。
浓度：
一般情况10mg/ml，具体信息见标签。
相关试剂：
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A1820HRP标记的抗体稀释液。
几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记
几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记抗体标记主要有酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记等，还有一些其他的标记方法例如金标记，本文主要讲述了这些抗体标记的基本原理、操作步骤。
一、酶标记1、辣根过氧化物酶(HRP)标记辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。
其原理是HRP的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体IgG 后该醛基与IgG氨基结合，形成Schiff氏碱。
为了防止HRP 中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合，在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。
氧化反应末了，用硼氢化钠稳定Schiff氏碱。
这里介绍两种程序。
程序一：(1)将5mg HRP溶于0.5ml 0.1mol/L NaHCO3溶液中;加0.5ml 10mmol/LNaIO4溶液，混匀，盖紧瓶塞，室温避光作用2小时。
(2)加0.75ml 0.1mol/L Na2CO3混匀。
(3)加入0.75ml小鼠已处理的腹水，或纯化单抗等(15mg/ml)，混匀。
(4)称取SephadexG25干粉0.3g，加入一支下口垫玻璃棉的5ml注射器外筒内;随后将上述交联物移入注射器外套;盖紧，室温作用(避光)3小时或4℃过夜。
(5)用少许PBS将交联物全部洗出，收集洗出液，加1/20V体积新鲜配制的5mg/mlNaBH4溶液，混匀，室温作用30分钟;再加入3/20V NaBH4溶液，混匀，室温作用1小时(或4℃过夜)。
(6)将交联物过Sephadex g200或Sepharose6B(2.6×50cm)层析纯化，分管收集第一峰。
(7)酶结合物质量鉴定：克分子比值测定酶量(mg/ml)=OD403×0.4IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.3)×0.62克分子比值(E/P)=酶量×4/IgG量，一般在1-2之间。
酶结合率=酶量×体积/抗体，标记率一般为0.3-0.6，即1-2个HRP分子结合在一个抗体分子上，标记率可大于0.6，0.8，0.9;OD403/OD280等于0.4时，E/P约为1。
间接法Elisa
间接法ELISA SOP一、包被1．抗原包被量为20µg/板。
2．例如：抗原浓度为0.8mg/ml。
3．取25µl抗原与20mlCBS（抗原包被液）混匀，100µl/孔。
4．包被完毕后，4℃过夜。
二、封闭1．从4℃冰箱中取出酶标板，甩干包被液，拍板。
2．加封闭液，200µl/孔。
3．37℃孵育2h。
4．甩干，洗板（3次）。
5．用干燥的自封袋4℃保存。
【注】：洗板，将孔内液体甩出，每孔加200µl -300µl洗板液，静置2min，甩出，将板拍在干的纱布上，将孔内液体拍干为佳。
三、一抗1．可洗板一次。
2．阳性对照：1µl阳性血清加入1ml抗原稀释液中，做1：1000稀释（第一孔）。
3．阴性对照：做1：2万稀释。
用1µl阴性血清加入100µl抗原稀释液中，先做1：100稀释。
再从此液取出5µl加入995µl的抗原稀释液中，最终稀释为1：2万。
4．空白对照：只加抗原稀释液。
5．除第一孔和阴性对照孔外，每孔加100µl抗原稀释液。
6．第一孔加100µl（1：1000）的阳性对照。
7．第二孔加100µl（1：1000）的阳性对照，吹打混匀，再从二号孔中吸取100µl加到3号孔中，做倍比稀释，最后两孔为阴性对照或空白对照。
1：10001：20001：40001：80001：160001：32000阴性对照（1：2万）空白对照8．将酶标板37℃孵育1h，洗板3次。
【注】：①通常在第一次做Elisa时，应该做阴性对照的梯度稀释，从中选择最佳的稀释倍数(一般认为吸光值小于0.1的阴性稀释倍数为易)。
②更为严格的操作是，阳性，阴性，空白的对照空均为双复孔或三复孔。
③在稀释一抗，或者二抗的时候，要算好每次的用量。
四、二抗本次检测采用二抗为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG1．用0.01MPBS做1：5000稀释（现用现配）。
几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记
几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记抗体标记主要有酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记等，还有一些其他的标记方法例如金标记，本文主要讲述了这些抗体标记的基本原理、操作步骤。
、酶标记1 、辣根过氧化物酶(HRP) 标记辣根过氧化物酶(HRP) 标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。
其原理是HRP 的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体IgG后该醛基与IgG 氨基结合，形成Schiff 氏碱。
为了防止HRP中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合，在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。
氧化反应末了，用硼氢化钠稳定Schiff 氏碱。
这里介绍两种程序。
程序一：(1)将5mg HRP 溶于0.5ml 0.1mol/L NaHCO3 溶液中加0.5ml 10mmol/LNaIO4 溶液，混匀，盖紧瓶塞，室温避光作用2 小时。
(2)加0.75ml 0.1mol/L Na2CO3 混匀。
(3)加入0.75ml 小鼠已处理的腹水，或纯化单抗等(15mg/ml) ，混匀。
(4)称取SephadexG25 干粉0.3g ，加入一支下口垫玻璃棉的5ml 注射器外筒内;随后将上述交联物移入注射器外套;盖紧，室温作用(避光)3小时或4C过夜。
(5)用少许PBS 将交联物全部洗出，收集洗出液，加1/20V 体积新鲜配制的5mg/mlNaBH4 溶液，混匀，室温作用30 分钟;再加入3/20V NaBH4溶液，混匀，室温作用1小时(或4C过夜)。
(6)将交联物过Sephadex g200 或Sepharose6B(2.6 X 50cm)层析纯化，分管收集第一峰。
(7)酶结合物质量鉴定：克分子比值测定酶量(mg/ml)=OD403 X 0.4IgG 量(mg/ml)=(OD280- OD403X 0.3) X 0.62克分子比值(E/P)=酶量X 4/IgG量，一般在1-2之间。
酶结合率=酶量X体积/抗体，标记率一般为0.3-0.6，即1-2个HRP 分子结合在一个抗体分子上，标记率可大于0.6，0.8，0.9;OD403/OD280 等于0.4 时，E/P 约为1 。
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辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG使用说明
规格：0.1ml/1ml
抗体来源：Goat
克隆类型：Polyclonal
交叉反应：Rb
产品应用：WB=1:1000-10000ELISA=1:1000-10000IHC-P=1:100-1000IHC-F=1:100-1000 not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
分子量：150kDa
性状：Lyophilized or Liquid
浓度：2mg/1ml
免疫原：Full length plasma protein
亚型：IgG
纯化方法：affinity purified by Protein A
储存液：0.01M PBS,pH7.4with10mg/mL BSA and0.1%Gentamicin
保存条件：Storage:Store at–20℃for one year.Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at-20oC.When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied,theantibody is stable for at least two weeks at2-4℃。
产品介绍：
Immunoglobulin G(IgG),is one of the most abundant proteins in serum with normal levels between8-17mg/mL in adult blood.IgG is important for our defence against
microorganisms and the molecules are produced by B lymphocytes as a part of our adaptive immune response.The IgG molecule has two separate functions;to bind to the pathogen that elicited the response and to recruit other cells and molecules to destroy the antigen.The variability of the IgG pool is generated by somatic recombination and the number of specificities in an individual at a given time point is estimated to be1011variants.
Important Note:
This product as supplied is intended for research use only,not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.。