PH0728 DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒使用手册
碧云天生物技术过氧化氢酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号过氧化氢酶检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0051过氧化氢酶检测试剂盒100次产品简介：过氧化氢酶检测试剂盒(Catalase Assay Kit)是一种简单易行的通过显色反应来检测细胞、组织或其它样品中过氧化氢酶(Catalase)活性的试剂盒。
在过氧化氢相对比较充足的情况下，过氧化氢酶可以催化过氧化氢产生水和氧气。
残余的过氧化氢在过氧化物酶(Peroxidase)的催化下可以氧化生色底物，产生红色的产物(N-(4-antipyryl)-3-chloro-5-sulfonate-p- benzoquinonemonoimine)，最大吸收波长为520nm 。
用过氧化氢标准品，制作标准曲线，这样就可以计算出样品中的过氧化氢酶在单位时间单位体积内催化了多少量的过氧化氢转变为水和氧气，从而可以计算出样品中过氧化氢酶的酶活力。
过氧化氢酶分布非常广泛。
在肝脏、肾脏和红细胞中，过氧化氢酶的水平非常高，是清除能导致氧化损伤的过氧化氢的主要场所。
过氧化氢酶的活性也可以用紫外分光光度计测定A 240，但蛋白质或其它组份在A 240附近都有比较强的吸收，会对测定产生严重干扰。
因此，用紫外法测定过氧化氢酶的活性，比较适合纯化的过氧化氢酶。
本试剂盒通过检测A 520来测定过氧化物酶催化下由过氧化氢氧化生色底物产生的红色产物，受干扰的因素小，检测灵敏度高，可以检测出低达1U/ml 的过氧化氢酶。
本试剂盒可以检测全血、红细胞裂解产物、血清、组织匀浆产物、细胞裂解产物等生物样品中的过氧化氢酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
包装清单：产品编号 产品名称包装 S0051-1 过氧化氢酶检测缓冲液 60ml S0051-2 过氧化氢 (约1M) 5ml S0051-3 过氧化氢酶反应终止液50ml S0051-4 显色底物 20ml S0051-5 过氧化物酶 20µl —说明书1份保存条件：-20ºC 保存，一年有效。
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书一、测定原理：利用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢反应的原理，通过测定420nm 处吸光度的变化得出其酶活性。
二、实际的组成和配置试剂一：液体60ml×4瓶，4℃保存6个月试剂二：粉剂×3瓶，4℃保存6个月试剂二应用液的配置：临用每瓶粉剂加入10ml 的双蒸水溶解，4℃避光保存试剂三：液体5ml×1瓶，4℃保存6个月试剂三应用液的配制：临用前用双蒸水15倍稀释，使得1cm 光径，双蒸水调零时A240保持在0.4左右，现用现配。
若A 值太高，则加双蒸水稀释，若A 值太低，则加入适量试剂三。
（一般在25倍左右稀释）试剂四：液体50ml×2瓶，4℃保存6个月。
三、操作步骤：1、前处理：植物组织匀浆的制备：准确称取组织重量，按照重量(g):体积(ml)=1:9的比列加入9倍体积的匀浆介质(推荐使用生理盐水或磷酸盐缓冲液:0.1 mol/L pH 7-7.4)，冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液，3500r/min 离心10min ，取上清液进行测定。
混匀后，3500r/min 离心10min ，取上清于波长420nm 处，1cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
四、计算及举例1、定义：在37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化1ug 底物的酶量定义为一个酶活力单位。
2、植物组织中过氧化物酶(POD)活力计算公式：10)/()min 30()()()1(12-)/(⨯÷÷⨯⨯=ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD 匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力 3.计算举例取新鲜桑叶，制备成10%匀浆，取100ul 匀浆上清，按照操作表进行操作，测得数据如下：对照OD 0.237；测定OD 0.665；同时测得10%桑叶匀浆蛋白浓度是1.80mgprot/ml 根据公式计算如下:mgprotU ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD / 26.42010001.80300.14.01120.237-0.6651000)/()min 30()()()1(12-)/(=⨯÷÷⨯⨯=⨯÷÷⨯⨯=匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力。
过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书
过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书一、测定原理：过氧化氢酶(CAT)分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm 处测定其变化量，可计算出CAT 的活力。
试剂一(ml)二、试剂组成与配制：试剂一：液体100 ml×1瓶，4℃保存6个月。
试剂二：底物液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。
试剂三：显色粉剂×1瓶，4℃保存6个月。
加双蒸水至100 ml 溶解，4℃保存1个月。
（如果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影响测定结果）试剂四：液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。
天冷时会凝固，临用前37℃水浴至透明方可使用。
三、组织样本的检测1、组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500转/分离心10分钟，取上清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，待测(最佳取样浓度摸索减附录)。
混匀，波长405nm ，光径0.5cm ，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
注：一般样本没有高脂等导致显著差异情况，对照管的样本更换成双蒸水，做1-2管对照即可。
如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至48样。
3.组织中CAT 活力的计算：（1）定义：每毫克组织蛋白每秒种分解1umol 的H2O2的量为一个活力单位。
（2）计算公式：)ml /mgprot (601271)OD -OD ()mgprot /U (CAT *待测样本蛋白浓度取样量值测定值对照活力组织匀浆中÷⨯⨯⨯=注：*271为斜率的倒数（3）计算举例：取10%水稻叶片匀浆0.05ml 做CAT 检测，测得对照管吸光度为0.605，测定管吸光度为0.332，同时测得10%水稻叶片匀浆蛋白浓度为3.1303 mgprot/ml 。
则计算结果为：()/mgprot U 7351.101303.305.0601271332.0704.0)mgprot /U (CAT =÷⨯⨯⨯-=活力组织匀浆中注：1.测定血清和血浆时，如果样本不溶血，每批样本只需要随机挑2个样本做对照或者用双蒸水代替额样本做对照；如果样本溶血的话，必须每个样本都要做对照。
PH0728 DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒实验方法与常见问题
PH0728|DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒DAB Horseradish Peroxidase Color Development KitCatalog No：PH0728Size：☐2×50mL|☐2×100mL Store at-20℃DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种借助辣根过氧化物酶(HRP)，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色的试剂盒。
DAB，即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride，是辣根过氧化物酶的常用底物。
在辣根过氧化物酶的催化下，DAB会产生棕色沉淀。
该棕色沉淀不溶于水和乙醇。
因此在DAB显色后，还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。
本试剂盒可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可以用于Western等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。
同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。
组分Component2×50mL2×100mL StorageDAB显色液A50mL100mL-20℃避光DAB显色液B50mL100mL-20℃使用参考1.对于组织切片或细胞样品或膜，在与辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
2.按照1:1的比例将显色液A、B液混匀，混匀后即配制成DAB染色工作液。
3.最后一次洗涤完毕后，去除洗涤液，加入适量DAB染色工作液，确保能充分覆盖样品。
4.室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。
5.去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应。
辣根过氧化物酶标记 Streptavidin
辣根过氧化物酶标记Streptavidin产品简介：本辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-labeled Streptavidin)也称HRP-Streptavidin、Streptavidin-HRP或辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，为进口分装，可以用于生物素(Biotin)标记的抗体、核酸、蛋白或其它生物素标记分子的检测。
具体用途包括Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、原位杂交、Southern、Northern、EMSA等。
本HRP-Streptavidin用高纯度的Streptavidin和超纯的辣根过氧化物酶交联而成，确保产生最低的本底和最高的灵敏度。
本产品的浓度为1mg/ml。
Streptavidin的分子量为66kD，可以高度特异性地和生物素(Biotin)结合。
Streptavidin和生物素的亲和常数为K d=10-15M。
Streptavidin是一个4聚体蛋白，可以同时结合4个生物素分子。
Streptavidin的中文名为链霉亲和素，从Streptomyces adidinii 中纯化获得，和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。
和Avidin不同的是，Streptavidin是一种非糖基化蛋白，并且基本不带电荷。
Avidin的pI= ~10.5，在中性pH条件下呈碱性。
由于Streptavidin 和Avidin相比在中性条件下不带电荷，因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多，这样检测时的非特异性背景就低很多。
因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。
辣根过氧化物酶即horseradish peroxidase (HRP)，可以在Western、EMSA、Southern或Northern等检测时催化ECL类试剂(如ECL、BeyoECL等)产生化学发光，可以在ELISA时催化TMB产生蓝色，也可以在免疫组化、免疫细胞化学或Western blot 检测时催化DAB产生棕色沉淀。
过氧化物酶显色
过氧化物酶显色
过氧化物酶显色是一种常见的生物学实验技术，它利用过氧化物酶催
化底物产生颜色反应，从而实现对样品中过氧化物酶活性的定量分析。
下面，我将从原理、实验步骤、应用等方面介绍这种技术。
一、原理
过氧化物酶显色技术的主要原理是利用底物发生氧化还原反应，从而
产生可见光吸收，实现对过氧化物酶活性的定量分析。
过氧化物酶催
化底物如TMB（3,3',5,5'-tetramethylbenzidine）在存在过氧化氢（H2O2）的情况下，底物发生氧化反应，生成过氧化物，过氧化物再将底物氧化产生高分子产物，在酸性环境中产生深蓝色或棕色沉淀，
可通过比色法分析结果。
二、实验步骤
1. 准备样品：将待测样品加入显色液中，显色液的具体组成根据样品
的性质而定。
注意：样品中不要含有过氧化氢，否则会干扰结果。
2. 添加底物：加入TMB底物。
3. 加入过氧化氢：加入H2O2。
4. 活化催化剂：等待5-10分钟，让催化剂活化。
5. 加入停止液：加入酸性停止液，停止反应。
6. 分析结果：通过分析样品颜色深浅或光密度值，计算出样品中过氧化物酶的活性。
三、应用
过氧化物酶显色技术被广泛应用于各种生物学、医学领域中。
例如，利用过氧化物酶显色技术可以进行酶动力学研究、检测样品中过氧化物酶的活性、检测生物体内一氧化氮的浓度等。
此外，它还可以应用于药物筛选、抗氧化剂研究等。
总之，过氧化物酶显色技术具有操作简单、灵敏度高、准确性好等优点，是一种常用的生物学实验技术。
它的应用领域广泛，对于生物学和医学领域的研究和工作有着重要的意义。
植物过氧化物酶(POD)ELISA试剂盒使用说明书
植物过氧化物酶（POD）ELISA试剂盒使用说明书药品名称：通用名：过氧化物酶（POD）酶联免疫诊断试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定组织，细胞及其它相关样本中过氧化物酶（POD）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中过氧化物酶（POD）水平。
用纯化的过氧化物酶（POD）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入过氧化物酶（POD）抗原，再与HRP标记的过氧化物酶（POD）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化物酶（POD）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中过氧化物酶（POD）抗原浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为240 U/L，160 U/L ，80 U/L，40U/L，20 U/L）。
辣根过氧化物酶显色原理
辣根过氧化物酶显色原理
辣根过氧化物酶（Peroxidase，POD）是一种植物存在的类固醇调节的酶，广泛存在于植物细胞中。
辣根过氧化酶有着独特的特性，可以在低温和低pH环境下保持稳定，具有高活性，可以用于检测和分析，是一种重要的工业应用酶。
辣根过氧化物酶的显色原理是，它可以将过氧化物与细胞膜上的特定色素结合，从而产生一种特定的色彩。
辣根过氧化酶显色原理的概述如下：
1、辣根过氧化物酶可以与过氧化物结合，同时在细胞膜上形成一种特定的色素。
2、过氧化物与辣根过氧化酶形成的特定色素具有某种特定的光谱特性，当这种特定的色素与一定波长的光谱相互作用时，就会发生发射现象，形成一定的色彩。
3、辣根过氧化物酶与特定色素之间的反应可以调节，以达到检测和分析的目的。
辣根过氧化酶显色原理的实际应用可以运用到生物技术领域，如在生物技术的检测中，可以使用辣根过氧化酶显色原理，通过调节过氧化物与辣根过氧化酶之间的反应，检测特定物质的含量，从而达到检测和分析的目的。
此外，辣根过氧化物酶显色原理可以用于食品安全检测，在食品安全检测中，可以使用辣根过氧化酶显色原理，通过调节过氧化物与辣根过氧化酶之间的反应，检测是否存在有害物质，及其含量，从而保证食品安全。
因此，辣根过氧化物酶显色原理的应用可以得到广泛的应用，它可以用于生物技术的检测，也可以用于食品安全检测，确保食品中没有有害物质，从而保证人们的健康。
辣根过氧化物酶显色原理的发展，将为医学检测、食品检测、环境检测等提供更为准确、快速、灵敏的检测方法，让人们拥有一个更加安全、健康的生活和环境。
DAB显色——精选推荐
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS12048.1 v.A GENMED二氨基联苯胺（DAB）显色溶液产品说明书（中文版）主要用途GENMED二氨基联苯胺（DAB）显色溶液是一种旨在通过过氧化物酶的催化，而形成棕褐色不溶性产物，以鉴定过氧化物酶活性，进而确定目标印记的实验辅助试剂。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于辣根过氧化酶标记蛋白的免疫学检测包括蛋白质西方杂交和免疫化学，以及原位杂交染色等。
产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，显色清晰，重复性好。
技术背景二氨基联苯胺（3，3’-diaminobenzidine，DAB）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成棕褐色不溶性产物，且不受乙醇影响。
用于检测过氧化物酶的活性，灵敏度高，特异性好。
产品内容GENMED染色液（Reagent A）毫升GENMED反应液（Reagent B）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，GENMED反应液（Reagent B）在4℃冰箱里；GENMED 染色液（Reagent A），避免光照，有效保证12月用户自备甲基绿复染试剂盒（GMS40010）或苏木素复染试剂盒（GMS80050）：用于常规染色后复染15毫升锥形离心管：用于显色工作液配制的容器平式摇荡仪：用于孵育和混匀反应1.5毫升离心管：用于配制染色工作液的容器光学显微镜：用于细胞染色后观察分析实验步骤一、 免疫印迹染色实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent A）和4℃冰箱里GENMED反应液（Reagent B）置入室温下，分别移出 毫升GENMED染色液（Reagent A）和 毫升GENMED 反应液（Reagent B）到15毫升锥形离心管，混匀后标记为GENMED显色工作液，避免光照。
植物过氧化物酶(POD)检测试剂盒(愈创木酚比色法)说明书
检测试剂盒(愈创木酚比色法)说明书
4ml预冷的PODLysisBuffer研磨或匀浆，4 POD粗提液，-20℃冻存，用于过氧化物酶的
A测定0=加入PODAssaybuffer工作液后立即测定的测定孔吸光度值t=反应时间(min)=3
注意事项：
1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、POD酶液提取时注意低温操作，防止酶活性。
3、以煮沸的酶液为对照时，酶要充分失活。
4、POD氧化剂和POD终止液具有一定腐蚀性，请小心操作。
5、POD氧化剂易挥发，请密闭保存，否则检测效率下降。
6、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
DAB显色试剂盒(20×)说明书
DAB显色试剂盒（20×）说明书货号：DA1010规格：DA1010-3DA1010-10溶液A3ml10ml溶液B3ml10ml保存：-20℃避光密闭保存，一年有效，避免反复冻融；短期可2-8℃保存。
产品简介：DAB是过氧化物酶（POD）的显色底物，DAB显色液主要用于免疫过氧化物酶法，适用于辣根过氧化物酶HRP标记的免疫印记或免疫组化反应。
过氧化物酶催化底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物，免疫印记可直接在膜上显示条带；免疫组化标本显色时间一般为室温5-20分钟，随后在显微镜下观察显色情况，显色充分后应将标本及时脱水封固，其终产物可直接在光镜下观察，也可经OsO4处理后，增加反应产物的电子密度，用于电镜观察。
操作说明：1.对于组织切片或蛋白质印记膜，在与辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
2.取900μl PBS（或双蒸水），加入50μl溶液A，50μl溶液B混合均匀，即配成DAB工作液。
如需要更大体积工作液，可按比例放大。
此溶液必须现用现配，配好后避光保存，1小时内使用，过期后请将剩余的液体废弃。
3.向组织切片或印记膜上加入适量DAB工作液，确保能充分覆盖样品。
4.室温避光孵育3-10分钟或更长时间，避免光照，直至显色至预期深浅。
5.去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤2-3次即可终止显色反应。
6.对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可对其进行其他染料复染。
对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
注意事项：1.DAB溶液应低温密封保存。
如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用。
2.显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用。
3.显色时间严格控制，根据情况调整，以免显色过度。
固相膜显色数小时后即会褪色，不能永久存在。
4.DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。
操作时应戴手套，尽量避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗，接触DAB的实验用品最好经洗液浸泡24h后使用。
DAB显色试剂盒说明书
产品说明书 / Specification Sheet辣根过氧化氢酶DAB显色试剂盒产品编号：PW017产品简介：DAB即：二氨基联苯胺（3，3’-diaminobenzidine）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。
用于检测过氧化物酶的活性，它灵敏度高，特异性好。
是HRP结合物最常用的底物,常在免疫组化,原位杂交,Western blot等膜显色或检测细胞或组织内源性的过氧化物酶中应用广泛。
运输和保存条件：常温下运输，收到后，将溶液A, 溶液C在-20度闭光的环境中保存，反应液2-8度保存，保质期一年。
组成:本试剂是为免疫组化,原位杂交,Western blot等膜显色专门配制的,由反应液,溶液A, 溶液C三部分构成:能够使用5次1: PW017-1 反应液50ml2:PW017-2 溶液A 1 ml3:PW017-3 溶液C 0.12ml使用方法:1:在免疫印迹(western blot)实验中,先将相应的HRP（辣根过氧化氢酶）标记的二抗覆盖膜后,在37度的情况下,于震荡器上,震荡一个半小时左右,再用TBST或者PBST洗涤膜3~4次,最后一次用TBS或PBS洗涤膜,再将膜转移到阴暗处。
2:显色前,先取反应液10 ml在一个15ml的干净棕色瓶子中，再取200ul左右的溶液A和溶液C 20ul形成显色工作液, 加入充分混匀。
3在阴暗处.将显色工作液加入膜上,将膜覆盖, 在37度的情况下,震荡反应十分钟左右即可.这时浅棕色的条带出现。
4倒掉反应液，双蒸水冲洗条带3~4次，自然干燥。
5照像记录实验结果。
注意事项:1: 溶液A在使用之前，37度温育10分钟，以免产生沉淀。
2: 显色时间严格控制，非常小心，一般10分钟左右。
以免造成过度显色，而且显色后数小时将会褪色。
3: 请使用完后，将反应液，溶液A, 溶液C的盖子旋紧,以防止溶液挥发和与空气中的成分发生化学反应。
DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(20×)
仅供科研版本号：161208 DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(20×)【产品组成】【保存条件】-20℃,避光,12个月【产品概述】DAB辣根过氧化物酶显色液(DABHorseradishPeroxidaseColorDevelopmentKit)是一种依据辣根过氧化物酶(HRP)结合显色，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色的试剂盒。
DAB即3,3N-DiaminobenzidineTertrahydrochloride,是辣根过氧化物酶的常用底物。
在辣根过氧化物酶的催化下,DAB会产生棕色沉淀，该棕色沉淀丌溶于水和乙醇。
因此在DAB显色后,还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。
本显色液可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western 等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。
同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。
【使用方法】1、常规组织切片、细胞样品、膜不辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也可用洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
2、按(A):试剂(B):蒸馏水=1:1:18的比例混合,即为DAB染色工作液，即配即用。
3、洗涤过组织后，去除洗涤液，加入适量DAB染色工作液，确保覆盖样品。
4、室温避光孵育30min或更长时间，直至显色至预期深浅。
5、去除DAB染色工作液，用蒸馏水清洗1～2次即可终止显色反应。
6、对组织切片或细胞样品，反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，便于观察。
对于膜染色，反终止后可室温晾干避光保存。
【常见问题及可能原因】1、背景显色太深①在免疫组化时如果背景显色太深，考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书一、测定原理：利用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢反应的原理，通过测定420nm 处吸光度的变化得出其酶活性。
二、实际的组成和配置试剂一：液体60ml×4瓶，4℃保存6个月试剂二：粉剂×3瓶，4℃保存6个月试剂二应用液的配置：临用每瓶粉剂加入10ml 的双蒸水溶解，4℃避光保存试剂三：液体5ml×1瓶，4℃保存6个月试剂三应用液的配制：临用前用双蒸水15倍稀释，使得1cm 光径，双蒸水调零时A240保持在0.4左右，现用现配。
若A 值太高，则加双蒸水稀释，若A 值太低，则加入适量试剂三。
（一般在25倍左右稀释）试剂四：液体50ml×2瓶，4℃保存6个月。
三、操作步骤：1、前处理：植物组织匀浆的制备：准确称取组织重量，按照重量(g):体积(ml)=1:9的比列加入9倍体积的匀浆介质(推荐使用生理盐水或磷酸盐缓冲液:0.1 mol/L pH 7-7.4)，冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液，3500r/min 离心10min ，取上清液进行测定。
混匀后，3500r/min 离心10min ，取上清于波长420nm 处，1cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
四、计算及举例1、定义：在37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化1ug 底物的酶量定义为一个酶活力单位。
2、植物组织中过氧化物酶(POD)活力计算公式：10)/()min 30()()()1(12-)/(⨯÷÷⨯⨯=ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD 匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力 3.计算举例取新鲜桑叶，制备成10%匀浆，取100ul 匀浆上清，按照操作表进行操作，测得数据如下：对照OD 0.237；测定OD 0.665；同时测得10%桑叶匀浆蛋白浓度是1.80mgprot/ml 根据公式计算如下:mgprotU ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD / 26.42010001.80300.14.01120.237-0.6651000)/()min 30()()()1(12-)/(=⨯÷÷⨯⨯=⨯÷÷⨯⨯=匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力。
辣根过氧化物酶标记凝聚素的组织化学染色程序
辣根过氧化物酶标记凝聚素的组织化学染色程序
辣根过氧化物酶标记凝聚素的组织化学染色程序
1．组织切片脱蜡处理等同前；
2．流水冲洗5分钟，3％H2O2孵育10分钟(阻断内源性过氧化物酶，避免假阳性)；
3．漂洗3次，每次5分钟；
4．1％牛血清白蛋白孵育，室温20分钟，移去多余液体；
5．加入稀释的辣根过氧化物酶—凝集素，置湿盒内孵育。
室温1．5小时；
6．漂洗3次．每次5分钟；
7．呈色 DAB液(配制：DAB 5mg，pH 7．6 Tris—HCl 10ml，3％H2O2 40ul)室温暗处10—15分钟；
8．蒸馏水洗5分钟，流水短暂冲洗后，常规乙醇脱水，二甲苯透明，封片；
9．光镜观察?阳性反应部位呈棕褐色。
10．注意事项
(1)为防止染色过程中切片脱落，载玻片可用铬矾/明胶或赖氨酸等黏片剂处理；
(2)脱水时与普通石蜡切片不同，70％乙醇时间不宜太长，以免阳性反应褪色；
(3)辣根过氧化物酶—凝集素的最佳工作浓度亦需经预实验确定；
(4)H2O2对碳水化合物有一定影响，可能改变凝集素的结合情况，但影响不显著。
DAB显色剂说明书
DAB显色试剂盒
Data sheet: 40412a
Cat.No:DAB-0031/1031
前言
本试剂盒适用于辣根过氧化酶(HRP)系统的免疫组化染色，如PAP、ABC和SP法等。
试剂盒组成
试剂A: DAB缓冲液(DAB Buffer，20×) 3 ml/ 12 ml 试剂B: DAB底物 (DAB Substrate，20×) 3 ml/ 12 ml 试剂C: DAB显色剂(DAB Chromogen，20×) 3 ml/ 12 ml 使用方法
在小试管中先加入0.85ml蒸馏水，再按试剂A、B、C顺序加入试剂各50μl，混匀即成1ml的DAB显色液。
若出现沉淀可过滤后使用。
配制好的溶液应避光存放，30分钟内有效。
染色结果为棕色。
室温下染色时间约3-10分钟，一般在显微镜下根据颜色的发展情况掌握染色时间。
试剂盒规格及贮存条件
规格：3ml (600片)/ 12ml (2400片)
贮存条件：本试剂盒宜4℃保存，稳定期1年
注意事项
本试剂盒仅适合研究使用。
在使用过程中，请勿将试剂沾染到皮肤或衣物上。
辣根过氧化物酶及其使用介绍
辣根过氧化物酶及其使用介绍酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。
酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。
酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。
酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。
目前，高质量的酶(如辣根过氧化物酶，简称HRP)国内已有商品供应。
高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。
在制备方法上，宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便易行的方法。
(一) 酶制剂及其底物凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶，原则上均可作为标记用。
但作为标记抗体用的酶应满足下列要求：(1)来源方便，易于纯化；(2)比活性高，性质稳定；(3)酶活性和量能用简单方法测定。
目前在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和硷性磷酸酶(AP)，其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。
由于辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)比活性高，稳定，分子量小，纯酶容易制备，所以最常用。
HRP广泛分布于植物界，辣根中含量高，它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18％。
HRP由多个同功酶组成，分子量为40,000,等电点为PH3～9,酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差异，但多在PH5左右。
酶溶于水和58％以下饱和度硫酸铵溶液。
HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm ／OD275nm 的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯度。
高纯度的酶RZ值应在3.0左右(最高可达3.4)。
RZ值越小，非酶蛋白就越多。
值得注意的是，纯度并不表示酶活性，如当酶变性后，RZ值仍可不变。
HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2)。
供氢体多为无色的还原型染料，通过反应可生成有色的氧化型染料(D)。
过氧化物酶染色液（DAB法）使用说明书
过氧化物酶染色液（DAB法）使用说明书过氧化物酶染色液(DAB法)使用说明书货号：G2370有效期：6个月有效。
产品内容：名称4×10ml4×20ml Storage 试剂(A):BFA固定液10ml20ml4℃避光试剂(B): POX孵育液B1:DAB染色液10ml20ml-20℃避光B2:DAB氧化剂2×100μl4×100μl RT临用前，按B1:B2=1000:1比例混合，即为POX孵育液，即配即用。
试剂(C):WG染色液10ml20ml RT避光试剂(D):WG buffer10ml20ml RT产品说明：过氧化物酶(Peroxidase，简称POX或MPO)是由微生物或植物所产生的一类能催化很多反应的以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶氧化还原酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
过氧化物酶染色液(DAB法)是ICSH推荐采用的POX染色液，其原理是细胞内的过氧化物酶能将无色的DAB的氢原子传递给过氧化氢，使前者催化成有色染料沉积在细胞质中的POX所在部位。
该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片过氧化物酶染色,POX活性部位呈棕黄色。
自备材料：1、载玻片2、显微镜操作步骤(仅供参考)：1、血液、骨髓或细胞涂片滴加预冷的BFA固定液，4℃固定30～60s，稍水洗。
2、滴加配制好的POX孵育液，室温(20～25℃)避光孵育10～15min，水洗2min。
3、滴加WG染色液，孵育30～60s。
4、直接滴加等量WG buffer，染色10～15min。
5、水洗、晾干、镜检。
染色结果：POX活性部位棕黄色细胞核蓝色粒细胞系除早期原粒细胞阴性外，分化好的原粒细胞以下阶段细胞随细胞成熟而阳性反应增强，衰老中性粒细胞反应程度减弱单核细胞系弱阳性，淋巴细胞系为阴性。
浆细胞及巨核细胞均为阴性。
过氧化物酶(Peroxidase POD)试剂盒说明书
货号：MS1502 规格：100管/96样过氧化物酶(Peroxidase，POD)试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
测定原理：POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水试剂的组成：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体×1瓶，4℃保存；用时加入3mL试剂一充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；试剂三：液体3 mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二和三在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上。
470nm下30s时第1页，共3页的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。
计算ΔA＝A2-A1。
注意事项：1、若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上，测定时加入10µL样本和240µL混合液测定。
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1PH0728|DAB 辣根过氧化物酶显色试剂盒
Catalog No ：PH0728
Size ：☐100mL Storage ：Store@-20℃避光保存
◆产品简介DAB 辣根过氧化物酶显色液(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种依据辣根过氧化物酶(HRP)结合显色，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA 等膜显色的试剂盒。
DAB 即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride,是辣根过氧化物酶的常用底物。
在辣根过氧化物酶的催化下,DAB 会产生棕色沉淀。
该棕色沉淀丌溶于水和乙醇。
因此在DAB 显色后,还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。
本显色液可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western 等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。
同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。
◆试剂组分
试剂(A):DAB 显色液A---50mL (-20℃避光)
试剂(B):DAB 显色液B---50mL (-20℃避光)
试剂(C):DAB 显色液C---100uL (RT)
自备材料：
1、洗涤液
2、蒸馏水◆使用参考
1、常规组织切片、细胞样品、膜不辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也可用洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
2、按(A):试剂(B):试剂(C)=5000:5000:3的比例混合,即为DAB 染色工作液，即配即用。
3、洗涤过组织后，去除洗涤液，加入适量DAB 染色工作液，确保覆盖样品。
4、室温避光孵育或更长时间，直至显色至预期深浅。
5、去除DAB 染色工作液，用蒸馏水清洗1～2次即可终止显色反应。
6、对组织切片或细胞样品，反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，便于观察。
对于膜染色，反终止后可室温晾干避光保存。
◆注意事项
1、DAB 是致癌物，请注意适当防护。
2、试剂(A)、试剂(B)避免反复冻融。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
◆常见问题
1、背景显色太深
①在免疫组化时如果背景显色太深，考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。
②在进行含内源性过氧化氢酶的免疫组化时，如果背景显色太深，需注意灭活内源性过氧化氢酶。
③可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。
④选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间。
2、没有显色或显色太弱
①当提高一抗或二抗的浓度。
检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在膜上，检测二抗是否可以被正常显色。
②考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。
③适当延长显色时间，另外确定抗原修复是否对于使用的一抗是必需的。