淋巴细胞亚群检测PPT参考幻灯片
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B淋巴细胞针对细胞外的细菌病原体，引发吞噬作用，介导体液免疫 T淋巴细胞抵抗细胞内复制的病原体（病毒、结核菌），介导细胞免疫
5
T细胞与B细胞系统的特性(共性：产生记忆细胞）
T细胞系统（cell mediated mmunity,CMI) B细胞系统(humoral immunity)
-介导细胞免疫，自身分化效应细胞 -来源于胸腺 -巨噬细胞处理后的抗原识别 -分两大类：细胞毒性T细胞（cytotoxic T cells,CTL)和调节T细胞（regulatory T cells,T reg),Treg=辅助性T细胞Th + 抑制 性T细胞Ts -Th:识别特异性抗原,正反馈免疫调节； Th=Th1+Th2+Th0 -Ts:负反馈免疫调节； -CTL：杀伤表达特异抗原的靶细胞，如病毒 、结核菌等感染的靶细胞或肿瘤细胞 -T细胞活化先天性免疫系统的防御机制，如 巨噬细胞 -Th1(IFN-α)
7
Sheep erythrocyte rosetter ( E-rosettes) for
T-cells
8
Surface immunoglobulin (sIg) for B-cells
9
流式细胞仪检测原理
Surface immunoglobulin (sIg) for B-cells
•评价免疫功能（血常规、Ig、补体、淋巴细胞亚群）
术前； 新生儿筛查（原发性免疫缺陷病）； 体检
•诊断免疫相关疾病（如HIV初筛有反应时）
•免疫治疗疗效观察
•出现免疫功能低下症状时检测
1、经常感到疲劳；
2、经常感冒；
4、肠胃功能下降；自身保护能力差；
6、精神萎靡；
7、易昏睡
9、身心憔悴
3、伤口容易感染； 5、易受到传染病的侵袭； 8、爱做梦（恶梦）
13
wk.baidu.com
淋巴细胞亚群流式术的基本内容
荧光染料标记的单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，结合多色荧光 分析，即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的 相对比例。
淋巴细胞为CD45阳性，颗粒度较低的一群细胞 淋巴细胞主要分为T淋巴细胞（CD3+）、B淋巴细胞（CD19+）和 NK细 胞（CD16+56+） T淋巴细胞又分为 T helper/T inducer（CD3+CD4+）， (ThCD29+ /Ti CD45RA+) 、 T suppressor/ T cytotoxic（CD3+CD8+） (TsCD28-/Tc CD28+)
机械性防御机制：皮肤、粘膜（口腔、呼吸道、消化道、泌尿）； 体液免疫机制：补体系统；急性相蛋白（CRP等）；吞噬细胞（单核-巨噬细胞、 粒细胞）；NK（肿瘤、病毒感染细胞、异源）；ADCC。感染早期数分或96h内执行防卫。
2、适应性免疫应答：识别特异的病原体，特异性应答
T及B淋巴细胞，感染后4-5天对识别的病原体进行杀伤清除，发生在固有 性免疫应答之后。
4、（CD3+%）+（CD19+%）+（CD16/56+%）=100%±5%，如相差过于 悬殊，临床具有一定提示意义。研究表明感染和血液肿瘤最易出 现等式严重偏离
17
解读原则：
5、NK细胞：
天然免疫系统的一个重要组成部分，约占外周血单核细胞的15-30%，可通过非 MHC性限制性途径识别并在多数情况下杀伤被病毒感染细胞。
应用抗CD（cluster of differentiation,CD)单抗将免疫细胞区分 得更细、更科学、更能描述免疫细胞的机能状态
由于流式细胞仪将静态的、显微镜下肉眼观察改为动态的、 计算机信号处理，因此，在流式细胞仪上T细胞亚群统计方 式已从传统的荧光显微镜下计数200个细胞成为几秒钟内计 数上万个，因此，结果更真实、更具有统计意义。
-介导体液免疫，经Ab执行免疫功能
-来源于骨髓 -识别天然蛋白质抗原 -增殖时需要T辅助细胞Th的刺激 -分化成浆细胞 -合成抗原特异性抗体 -发挥抗独特型抗体的免疫调节 -防御细胞外病原体(细菌)，以抗体介导，促使 巨噬细胞和补体系统活化，ADCC -Th2(IL-4,IL-5)
6
何时检测“淋巴细胞亚群”？
量 具有明显的统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况 高分辨率(CV<2%)、高灵敏度(荧光检测灵敏度≤100MESF，前向角散射光检
测灵敏度(0.2∼0.5um) 既是细胞分析技术，又是精确的分选技术，分选纯度可达99%以上
12
流式细胞术的应用使得过去应用E-玫瑰花结试验或EAC-花环 试验检测T或B淋巴细胞成为历史
淋巴细胞亚群检测的临床应用
检验科 梁红萍 2012-5
1
主要内容
为何要检测“淋巴细胞亚群”？ 何时检测？ 如何解读？ 如何应用？（肿瘤、自身免疫、感染、儿科） 案例分析 标本要求
2
为何要检测“淋巴细胞亚群”？
3
关键词：免疫（拉丁文，免…)
免疫基本功能: 识别自己与非己---》动态平衡
10
11
流式细胞术的特点
流式细胞术：利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参 数、快速的定量分析及分选的技术
流式细胞术 = 细胞荧光化学技术+单克隆抗体技术+激光技术+流体力学+光 电测量技术+计算机技术
测量速度快：最快可在1秒种内检测上万个细胞 可进行多参数测量：可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测
14
15
如何解读“淋巴细胞亚群”报告
16
解读原则：
1、综合判断， CD4+%、CD8+%、CD4+/CD8+：初步评估机体免疫状态，快速便利
2、结合血常规结果，同时关注百分比和绝对数
3、当CD4+/CD8+比例倒置时，一定要确认是CD4+细胞绝对数降低， 还是CD8+细胞绝对数增加所致，两种情况的临床意义不同
免疫系统：由免疫器官、免疫细胞及免疫分子组成，遍布全身、相互制约的 网络
免疫相关疾病： 应答过高:变态反应(过敏性疾病,四型)
不平衡: 应答不足:感染、肿瘤、放射病、血液病、免疫缺损症 自身组织应答：自身免疫疾病（SLE、类风湿性关节炎）
4
免疫应答类型：二种 1、固有性免疫应答：识别多种病原体的共有成分（多糖），非特异性应答。
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T细胞与B细胞系统的特性(共性：产生记忆细胞）
T细胞系统（cell mediated mmunity,CMI) B细胞系统(humoral immunity)
-介导细胞免疫，自身分化效应细胞 -来源于胸腺 -巨噬细胞处理后的抗原识别 -分两大类：细胞毒性T细胞（cytotoxic T cells,CTL)和调节T细胞（regulatory T cells,T reg),Treg=辅助性T细胞Th + 抑制 性T细胞Ts -Th:识别特异性抗原,正反馈免疫调节； Th=Th1+Th2+Th0 -Ts:负反馈免疫调节； -CTL：杀伤表达特异抗原的靶细胞，如病毒 、结核菌等感染的靶细胞或肿瘤细胞 -T细胞活化先天性免疫系统的防御机制，如 巨噬细胞 -Th1(IFN-α)
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Sheep erythrocyte rosetter ( E-rosettes) for
T-cells
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Surface immunoglobulin (sIg) for B-cells
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流式细胞仪检测原理
Surface immunoglobulin (sIg) for B-cells
•评价免疫功能（血常规、Ig、补体、淋巴细胞亚群）
术前； 新生儿筛查（原发性免疫缺陷病）； 体检
•诊断免疫相关疾病（如HIV初筛有反应时）
•免疫治疗疗效观察
•出现免疫功能低下症状时检测
1、经常感到疲劳；
2、经常感冒；
4、肠胃功能下降；自身保护能力差；
6、精神萎靡；
7、易昏睡
9、身心憔悴
3、伤口容易感染； 5、易受到传染病的侵袭； 8、爱做梦（恶梦）
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wk.baidu.com
淋巴细胞亚群流式术的基本内容
荧光染料标记的单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，结合多色荧光 分析，即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的 相对比例。
淋巴细胞为CD45阳性，颗粒度较低的一群细胞 淋巴细胞主要分为T淋巴细胞（CD3+）、B淋巴细胞（CD19+）和 NK细 胞（CD16+56+） T淋巴细胞又分为 T helper/T inducer（CD3+CD4+）， (ThCD29+ /Ti CD45RA+) 、 T suppressor/ T cytotoxic（CD3+CD8+） (TsCD28-/Tc CD28+)
机械性防御机制：皮肤、粘膜（口腔、呼吸道、消化道、泌尿）； 体液免疫机制：补体系统；急性相蛋白（CRP等）；吞噬细胞（单核-巨噬细胞、 粒细胞）；NK（肿瘤、病毒感染细胞、异源）；ADCC。感染早期数分或96h内执行防卫。
2、适应性免疫应答：识别特异的病原体，特异性应答
T及B淋巴细胞，感染后4-5天对识别的病原体进行杀伤清除，发生在固有 性免疫应答之后。
4、（CD3+%）+（CD19+%）+（CD16/56+%）=100%±5%，如相差过于 悬殊，临床具有一定提示意义。研究表明感染和血液肿瘤最易出 现等式严重偏离
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解读原则：
5、NK细胞：
天然免疫系统的一个重要组成部分，约占外周血单核细胞的15-30%，可通过非 MHC性限制性途径识别并在多数情况下杀伤被病毒感染细胞。
应用抗CD（cluster of differentiation,CD)单抗将免疫细胞区分 得更细、更科学、更能描述免疫细胞的机能状态
由于流式细胞仪将静态的、显微镜下肉眼观察改为动态的、 计算机信号处理，因此，在流式细胞仪上T细胞亚群统计方 式已从传统的荧光显微镜下计数200个细胞成为几秒钟内计 数上万个，因此，结果更真实、更具有统计意义。
-介导体液免疫，经Ab执行免疫功能
-来源于骨髓 -识别天然蛋白质抗原 -增殖时需要T辅助细胞Th的刺激 -分化成浆细胞 -合成抗原特异性抗体 -发挥抗独特型抗体的免疫调节 -防御细胞外病原体(细菌)，以抗体介导，促使 巨噬细胞和补体系统活化，ADCC -Th2(IL-4,IL-5)
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何时检测“淋巴细胞亚群”？
量 具有明显的统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况 高分辨率(CV<2%)、高灵敏度(荧光检测灵敏度≤100MESF，前向角散射光检
测灵敏度(0.2∼0.5um) 既是细胞分析技术，又是精确的分选技术，分选纯度可达99%以上
12
流式细胞术的应用使得过去应用E-玫瑰花结试验或EAC-花环 试验检测T或B淋巴细胞成为历史
淋巴细胞亚群检测的临床应用
检验科 梁红萍 2012-5
1
主要内容
为何要检测“淋巴细胞亚群”？ 何时检测？ 如何解读？ 如何应用？（肿瘤、自身免疫、感染、儿科） 案例分析 标本要求
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为何要检测“淋巴细胞亚群”？
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关键词：免疫（拉丁文，免…)
免疫基本功能: 识别自己与非己---》动态平衡
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流式细胞术的特点
流式细胞术：利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参 数、快速的定量分析及分选的技术
流式细胞术 = 细胞荧光化学技术+单克隆抗体技术+激光技术+流体力学+光 电测量技术+计算机技术
测量速度快：最快可在1秒种内检测上万个细胞 可进行多参数测量：可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测
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如何解读“淋巴细胞亚群”报告
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解读原则：
1、综合判断， CD4+%、CD8+%、CD4+/CD8+：初步评估机体免疫状态，快速便利
2、结合血常规结果，同时关注百分比和绝对数
3、当CD4+/CD8+比例倒置时，一定要确认是CD4+细胞绝对数降低， 还是CD8+细胞绝对数增加所致，两种情况的临床意义不同
免疫系统：由免疫器官、免疫细胞及免疫分子组成，遍布全身、相互制约的 网络
免疫相关疾病： 应答过高:变态反应(过敏性疾病,四型)
不平衡: 应答不足:感染、肿瘤、放射病、血液病、免疫缺损症 自身组织应答：自身免疫疾病（SLE、类风湿性关节炎）
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免疫应答类型：二种 1、固有性免疫应答：识别多种病原体的共有成分（多糖），非特异性应答。