Q-琼脂糖凝胶说明书
琼脂糖凝胶
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琼脂糖 Agarose，缩写为AG，是琼脂中不带电荷的中性组成成份，也译为琼胶素或琼胶糖。琼脂糖化学结构 由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基单位构成.
制作方法
把琼脂糖，即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂，溶于热水，冷却制成的凝胶。
作用
制成的小颗粒用于凝胶过滤。适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤，若使用5%以下浓度的凝胶， 也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点，有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降 反应的支持物。
琼脂糖凝胶
以琼脂糖为支持介质制备的凝胶
01 商品名称
03 制作方法
目录
02 基本结构 04 作用
琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼 脂糖，琼脂糖的熔点在62〜65°C之间，融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。多用于对染色 体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。
商品名称
琼脂糖凝胶agarose gel 储藏温度:常温 商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）链如氢键来维持状结构，状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下， 它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化， 也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。
琼脂糖凝胶电泳常考操作流程
琼脂糖凝胶电泳常考操作流程
准备工具：用蒸馏水将制胶工具洗干净，准备好制胶平板，用琼脂将模具边缘封闭，架好梳子。
配制琼脂糖凝胶：根据要分离的样品（DNA）大小配制合适浓度的琼脂糖凝胶。
将一定量的琼脂糖干粉加入到合适体积的锥形瓶中，加入一定量的电泳缓冲液（30ml左右TAE）。
融化琼脂糖：将琼脂糖放入到微波炉内加热融化，冷却片刻（不烫手即可）。
浇灌凝胶：融化后的琼脂溶液摇晃混匀，倒入电泳槽中，等其凝固。
凝固凝胶：室温下凝固30-40min左右，小心的拔出梳子，取出凝固好的凝胶放入电泳槽内，准备上样。
加入电泳缓冲液：在电泳槽中倒入电泳缓冲液（TAE）；没过胶面1mm左右，去除胶孔内的气泡。
上样：将DNA样品和对应体积的上样缓冲液（loading buffer）和染料混合，用抢混匀后加入到凝胶孔内。
电泳：上样结束，接通电源，红色正极，黑色负极，DNA样品有负极往正极运动，加样孔侧为负，，40-50v电压，电压30敏左右即可（<40min）。
观察结果：电压结束，关闭电源，凝胶成像仪上观察电压位置并比对marker 判断大小。
ProteinG琼脂糖凝胶说明书
Version 11302010ProteinG-Sepharose Protein G 琼脂糖凝胶Cat. No. CW0012保存：2-8 ℃组分说明CW0012 CW0012A Cat.No.Volume 1 ml 5 mlose 本产品具有广谱IgG 结合、高Fc 段结合活性、高抗体吸附量和性，可重复多次使用。
左右），以利于维持抗体的生物活性，避免抗脱5-10个柱床体积，可洗脱脂类和疏水性较强的蛋白质，避免使亲和介质的载量下降、干扰亲和介质的应用效果。
产品简介本产品为Protein G 与Sephar 偶联后产物，可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc 片段的基因工程重组蛋白。
Protein G 是链球菌(group C 和G)细胞表面蛋白。
它与Protein A 类似，通过与免疫球蛋白的Fc 区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。
但两者结合特异性有所不同。
Protein G 对人IgG3，小鼠IgG1，大鼠IgG2a 等具有高亲和力。
天然Protein G 具有白蛋白和细胞表面结合域。
重组Protein G 去除了白蛋白和细胞表面结合域，以减少非特异性结合。
能稳定等特点注意事项1. 凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温， 装柱， 避免产生气泡影响柱效。
2. 装柱时尽可能维持凝胶长径比为5：3-2：1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。
3. 若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2mg/ml，以免上样浓度过高影响柱效。
4. 可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5. 凝胶用低 pH 缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至 pH 中性，以延长亲和介质的使用寿命。
6. 洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性（pH7.4体失活。
Q-琼脂糖凝胶HP的使用方法说明
Q-琼脂糖凝胶HP的使用方法说明产品简介Q-琼脂糖凝胶HP是将季铵基团键合在琼脂糖微球上形成的一种强阴离子交换介质。
具有高分辨率，高载量，回收率高和再生能力强等特点。
化学稳定性好，可用氢氧化钠在位清洗。
基质的亲水特性保证在洗脱过程中减少细胞衍生杂质的非特异性吸附。
可用于蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
产品参数产品名称：Q-琼脂糖凝胶HP (Q- Sepharose High Performance)货号：S9200基质：6% 交联琼脂糖凝胶配基：季铵交换基团：- N+(CH3)3离子容量：0.14-0.20 mmolCl-/mL颗粒大小：34μm蛋白载量：10mg lgG，24mg HAS/mL工作pH：1~14(短时间，在位清洗)；2~12(长时间)化学稳定性：在以下溶液中稳定- 1mol/L NaOH；8mol/L尿素；6mol/L盐酸胍；30%异丙醇；70%乙醇；30%SDS，30%乙腈；使用方法1.装柱（1）将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。
（2）根据柱子大小取所需凝胶的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3:1比例）配成匀浆。
（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意不要使用气泡。
打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。
用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
2.平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如：Tris、PBS等。
3.上样（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心、过滤后上柱；（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡洗液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。
琼脂糖凝胶主要成分
琼脂糖凝胶主要成分
琼脂糖凝胶是一种常用的实验室试剂，广泛应用于生物学、化学等领域。
它是由琼脂糖和其他添加剂组成的一种凝胶状物质。
本文将重点介绍琼脂糖凝胶的主要成分，包括琼脂糖、硼酸、EDTA、Tris 等。
一、琼脂糖
琼脂糖是琼脂的水解产物，是一种天然高分子聚糖。
它是一种无色、透明、呈块状的物质，具有良好的凝胶性和稳定性，广泛应用于食品、制药、化妆品等领域。
在实验室中，琼脂糖主要用于制备凝胶、缓冲液等。
二、硼酸
硼酸是一种无机化合物，化学式为H3BO3。
它是一种白色结晶体，具有良好的溶解性和稳定性。
硼酸在琼脂糖凝胶中的作用是维持凝胶的稳定性，防止凝胶变形或失去凝胶性。
三、EDTA
EDTA是一种螯合剂，全称为乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid）。
它是一种无色晶体，具有良好的稳定性和螯合性。
在琼脂糖凝胶中，EDTA的作用是螯合金属离子，防止金属离子对凝胶的影响，从而保持凝胶的稳定性。
四、Tris
Tris是三羟甲基氨基甲烷（tris(hydroxymethyl)aminomethane）的缩写。
它是一种有机化合物，具有良好的缓冲性能。
在琼脂糖凝胶
中，Tris的作用是调节凝胶的pH值，使其处于最适合实验的pH范围内。
综上所述，琼脂糖凝胶的主要成分包括琼脂糖、硼酸、EDTA和Tris等。
这些成分在琼脂糖凝胶中发挥着不同的作用，共同维持凝胶的稳定性和性能，为实验提供了重要的支持。
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。
对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广，尤其适于分离大片段DNA。
普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。
琼脂糖凝胶电泳操作流程准备干净的配胶板和电泳槽注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。
选择电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。
注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。
正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。
低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。
注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
适合的电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。
电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
电泳的合适电压和温度电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA 电泳，温度应该低于15℃。
注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。
琼脂糖凝胶4B
琼脂糖凝胶4B货号：S8711规格：100mL/500mL保存：产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。
不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。
保质期：5年。
产品说明：琼脂糖凝胶4B是用4%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒，作为凝胶层析介质使用。
1理化指标项目指标基质4%琼脂糖凝胶分离范围70000~20×106(球蛋白)形状球型粒径45~165μm推荐流速11cm/h*耐压0.018MPapH适用范围4~9化学稳定性可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高5cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。
2应用本产品为传统的琼脂糖介质，非特异性吸附低，回收率高，可多次重复使用等特点，用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。
3.1装柱（1）让所有的材料和试剂达到室温。
配制缓冲液。
（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，用去离子水清洗掉20%乙醇，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。
（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。
打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。
3.2平衡让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
建议使用离子强度为0.15或更大的缓冲液，以避免溶质分子和基质之间的任何不需要的离子相互作用。
对于各Sepharose凝胶的推荐流速，请参考推荐流速越低，分离度越高。
3.3上样（1）样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样。
（2）推荐的样品体积为总床体积的2-5%。
3.4洗脱用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
3.5再生一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。
琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书
5. 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要 乙醇沉淀。
注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的 传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 溶胶液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染 皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水 或者生理盐水冲洗。
1. 在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽 量切除不含DNA的凝胶，得到凝胶体积越小越好。
2. 将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5ml离心管，称重。 先称一个空1.5ml离心管重量，然后放入凝胶块后再称一次，两次 重量相减，得到凝胶的重量。
3. 加3倍体积溶胶液DD。 如果凝胶重为100mg，其体积可视为100μl，则加入300μl溶胶液。 如果凝胶浓度大于2％，应加入6倍体积溶胶液。 4. 56℃水浴放置10分钟（或直至胶完全溶解）。每2-3分钟涡旋震
3. 回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间，过长、过短片段 的回收效率迅速降低。
4. 回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有 关。一般1-15μg， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可高达85％。
5. 切胶回收时，紫外灯观察对DNA片段有损坏作用，应该尽可能 使用能量低的长波紫外线，并且尽可能的缩短紫外线下处理的 时间。
试剂盒组成保存50次dr0101100次dr0102200次dr0103平衡液室温5ml10ml20ml溶胶液dd室温50ml50ml2200ml漂洗液wb室温15ml25ml50ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液eb室温10ml15ml15ml吸附柱ec室温50个100个200个收集管2ml室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果
3%琼脂糖凝胶的配制
3%琼脂糖凝胶的配制
琼脂糖凝胶是生命科学中常用的一种凝胶，能够用于电泳、色谱、免疫印迹等实验中。
下面介绍一下3%琼脂糖凝胶的配制方法：材料：
- 琼脂糖（海藻酸钠） 3g
- TAE缓冲液 100mL
- 蒸馏水
步骤：
1. 在100mL的TAE缓冲液中加入3g的琼脂糖，搅拌至溶解。
2. 将溶液加热至沸腾，持续加热1-2分钟。
3. 关闭火源，让溶液冷却至约60°C左右。
4. 将溶液倒入凝胶模具中，注意不要产生气泡。
5. 将凝胶模具放置于室温下静置，凝胶定型。
6. 凝胶定型后，可以将凝胶取出，用TAE缓冲液或PBS缓冲液进行清洗。
7. 凝胶清洗后即可用于实验中。
注意事项：
1. 请务必使用蒸馏水进行琼脂糖凝胶的配制。
2. 在加热琼脂糖溶液时，要注意不要加热时间过长，以免影响凝胶质量。
3. 在倒入凝胶模具时，要慢慢倒入，避免产生气泡。
4. 凝胶定型后，要小心取出凝胶，以免损坏凝胶结构。
5. 凝胶清洗时，要使用缓冲液轻柔地清洗，不要使用力过大。
琼脂糖凝胶
琼脂糖凝胶什么是琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶是一种由琼脂素制成的凝胶状物质，具有较好的凝胶性能。
它是一种常见的实验室试剂，广泛用于分离、纯化和分析生物大分子如蛋白质、核酸和多糖等。
琼脂糖凝胶的制备方法材料•琼脂素（Agarose）•缓冲溶液步骤1.准备含有适量琼脂素的缓冲溶液，通常使用Tris缓冲溶液或磷酸盐缓冲溶液。
2.将缓冲溶液中的琼脂素加热至溶解，可以使用烧杯和加热板完成这一步骤。
3.琼脂素完全溶解后，将溶液倒入矩形或圆形的琼脂糖凝胶模具中。
4.等待琼脂糖凝胶冷却和凝胶化。
凝胶的结构可以通过调整琼脂素的浓度和凝胶化温度来进行控制，常见的琼脂糖凝胶浓度为0.5%-2.0%。
琼脂糖凝胶的应用琼脂糖凝胶在生物科学领域有广泛的应用，主要包括以下几个方面：1. 蛋白质凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种常见的蛋白质分离技术。
凝胶中的孔隙结构可以根据蛋白质分子的大小、形状和电荷特性，实现对蛋白质的分离和纯化。
通过电泳电场的作用，蛋白质分子会迁移至电泳胶中，形成一系列条带，可以根据条带的位置和宽度来判断样品中蛋白质的相对含量和纯度。
2. 核酸凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳也被广泛应用于核酸分析和分离。
琼脂糖凝胶可以在电场中对核酸进行分子大小分离，并可通过DNA染料或放射性标记物对核酸进行可视化。
这种技术可以用于DNA片段的分离、纯化和定量分析，也可以用于RNA的分离和检测等。
3. 蛋白-核酸相互作用研究琼脂糖凝胶亦可用于研究蛋白与核酸之间的相互作用。
通过在琼脂糖凝胶中添加核酸和蛋白质样品，可以观察它们之间的相互作用。
这种方法可以用于研究蛋白与DNA或RNA之间的结合，还可以用于筛选与特定核酸序列结合的蛋白。
4. 免疫固定电泳琼脂糖凝胶亦可用于免疫固定电泳，用于研究蛋白质的抗原性质。
在这种方法中，将抗原与琼脂糖凝胶混合，使其固定在凝胶孔隙中，然后通过电泳将抗原从凝胶中迁移出来。
迁移过程中，抗原与抗体之间的特异性结合会引起凝胶中条带的出现，可以用于确定蛋白质的抗原性质。
琼脂糖凝胶 dna 回收试剂盒说明书
琼脂糖凝胶货号：D1200规格：50T/100T保存：常温干燥保存，复检期为一年。
试剂盒内容：产品说明：本试剂盒采用可以高效、专一结合的DNA硅基质材料和独特的缓冲液系统，从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。
可回收100bp-10kb大小的片段，回收率大于80%（小于100bp和大于100kb的DNA片段回收率为30-50%）。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等试验。
注意事项：在使用本试剂盒前请阅读此注意事项。
1.电泳前最好更换成新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2.如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
3.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
4.回收小于100bp和大于100kb的DNA片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。
5.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。
6.如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:（使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
）1、琼脂糖凝胶电泳后，将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入干净的离心管中，称取重量。
2、向胶块中加入3倍体积溶胶液（如果凝胶重为0.1g，其体积可视为100ul,则加入300ul溶胶液），50-55℃水浴放置10min，期间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
注意：溶胶时，如果溶胶液变为红色（正常情况下为淡黄色），可向含有DNA的胶溶液中加入10-30ul 3M醋酸钠（pH5.2）将胶溶液调为淡黄色，否则将会影响DNA与吸附柱的结合，影响回收效率。
3、将上一步所得溶液加入一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。
琼脂糖凝胶的主要性能指标
注意事项：
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制胶和加样过程中要防治气泡的产生。 紫外光对人眼有害，观察时加盖玻璃罩，观察时间不宜太长。 EB具有强诱变性，可致癌。必须戴手套操作，严格注意防护。 加样时，Tip头不宜插入样品孔太深，也不要穿破胶孔壁，否则样品渗漏或DNA 带型不整齐。 配胶和灌电泳槽需使用同一批缓冲液。因为pH 或离子强度很小的差别也会在凝 胶前部造成紊乱，影响DNA 片段的泳动。 梳板的选用 一般每个制胶模具均配有多个齿型不同的梳板，梳齿宽厚，形成的点 样容积较大，用于DNA 片段回收实验等；相反，梳齿窄而薄，形成的点样容积就 较小，用于PCR产物、酶切产物鉴定等。一般来说，上样量小时尽量选择薄的梳 板制胶，此时电泳条带致密清晰，便于结果分析。 凝胶一定要加热熔解完全，均匀，可以对着光亮的地方看看清澈不清澈 ； 一般情况下，梳子越薄而长，条带越好看 ； 上样量不宜过多，会造成条带的相互挤压； 如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘效应 ，中间电场比较均匀 ； 做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致； 加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电泳孔内 ； 电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后，再调高电压。
电泳缓冲液
电泳缓冲液是指在进行电泳时所使用的缓冲溶液，用以稳定体系 酸碱度。常见的核酸电泳缓冲液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。
作用 ：
①缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负 极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应，负极发生的是还原反 应，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有 较强的缓冲能力，使溶液两极的pH保持基本不变。 ②电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分 子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的钠离子 ，钠离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使 胶发热甚至熔化。 ③电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯 合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活DNA酶，此外还可防止镁离子与核酸 生成沉淀。
琼脂糖凝胶的配制和DNA回收教学文案
琼脂糖凝胶的配制和D N A回收配1%的琼脂糖凝胶称量琼脂糖0.3g，倒入锥形瓶中，再用量筒量取30ml TAE，混到一起，放入微波炉中煮沸两次，直到看不到颗粒为止（每次大约三分钟），取出后冷却至60℃左右后加入Gold view（万分之一），同时将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上，安好挡板，放好梳子。
吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘，任其凝固，在距离底板0.5～1.0mm 的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔，将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中，使胶液缓慢地展开，直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。
凝胶的厚度在3～5mm之间，检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡。
冷却好后拔梳子（30min左右），将板放入电泳槽里，倒入TAE溶液（1X），在冰箱中拿Loading buffer和两个maker（1kb和D100），将Loading buffer吸到PE手套上（吸取量随意用枪点一下即可）和样品混匀，向凝胶中加样，两侧的孔里加Maker，通电120V跑胶，红为正，黑为负（DNA带负电，所以往红色正极处跑），放到紫外盒上看结果，同时将亮带部分切下来放入1.5ml的已经称完重量的EP管中（若忘了称重量，按照0.9计算），再次称重计算胶的重量，接下来按照DNA回收试剂盒操作步骤回收DNA，测浓度。
普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 柱平衡步骤：向吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl平衡液BL，12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）2. 将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。
3. 向胶块中加入等倍体积溶液PN（如果凝胶重为0.1 g，其体积可视为100 μl，则加入100 μlPN溶液），50℃水浴放置，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
1%琼脂糖凝胶的配制
1%琼脂糖凝胶的配制
琼脂糖凝胶是一种由琼脂糖和其他添加剂组成的凝胶，常用于生物学实验中的凝胶电泳等分离技术。
1%琼脂糖凝胶是一种较为常见的浓度，其配制方法如下：
材料与仪器：
- 琼脂糖
- 缓冲液（如TAE或TBE缓冲液）
- 水
- 量筒
- 烧杯
- 搅拌棒
- 电泳槽
- 电泳电源
步骤：
1. 将所需琼脂糖称量并加入烧杯中。
按照1%的浓度，需加入1克琼脂糖。
2. 加入所需缓冲液并充分搅拌，在室温下静置15分钟左右，让琼脂糖充分溶解。
3. 将溶液加热至沸腾，持续搅拌，直至琼脂糖完全溶解。
4. 将溶液冷却至约50℃左右，再加入适量的水调节体积，使其达到所需体积。
一般来说，配制1%琼脂糖凝胶时，需要配制100毫升。
5. 充分搅拌使溶液均匀，然后倒入电泳槽中。
在溶液凝固前，用搅拌棒将表面的气泡排除。
6. 等待凝胶完全固化，即可进行凝胶电泳实验。
注意事项：
1. 在配制过程中，应注意卫生和安全。
避免口吐琼脂糖溶液，避免溶液溅入眼睛等敏感部位。
2. 在加热过程中，应注意溶液是否沸腾过于激烈，避免烫伤或将溶液溅出烧杯。
3. 在调节体积时，应注意准确测量加水量，避免导致浓度错误。
4. 在倒入电泳槽前，应确保凝胶槽干净，避免杂质或细菌污染。
总结：
1%琼脂糖凝胶是一种常见的实验用品，其配制方法简单易行。
在配制过程中，应注意卫生和安全，避免误操作导致事故。
配制完成后，应确保凝胶槽干净，避免影响实验结果。
q强阴离子交换琼脂糖凝胶介质
q强阴离子交换琼脂糖凝胶介质强阴离子交换琼脂糖凝胶介质是一种常用于分离、纯化以及固相萃取等领域的材料。
它由琼脂糖作为基质，通过其含有的具有强阴离子交换能力的功能基团，能够有效地与样品中的带正电荷的离子或分子发生作用，实现样品的分离和纯化。
琼脂糖是一种从海藻中提取得到的多糖，具有良好的生物相容性和可溶性。
其特点是在水中形成胶体，能够形成凝胶，并具有一定的流变性能。
这些特性使琼脂糖成为一种理想的基质材料，能够用于制备凝胶介质，如琼脂糖凝胶。
强阴离子交换琼脂糖凝胶介质通过在琼脂糖分子中引入具有阴离子交换功能的基团，如酸基或硫酸基等，实现与样品中带正电荷的离子或分子的吸附和分离。
当样品经过强阴离子交换琼脂糖凝胶介质时，带正电荷的组分会被固定在凝胶中，而不带电荷或带负电荷的组分则可以通过凝胶的孔隙流出。
强阴离子交换琼脂糖凝胶介质的制备方法通常包括以下步骤：1.选择合适的琼脂糖材料：根据需要选择适合的琼脂糖材料，并将其粉碎或磨碎成适当的颗粒大小。
2.功能基团引入：将具有阴离子交换功能的基团引入琼脂糖分子中。
这可以通过化学修饰或交联改性的方法实现。
常用的功能基团包括硫酸、磷酸等。
3.凝胶制备：将经过功能基团引入的琼脂糖材料与适宜的缓冲液或溶剂混合，并通过适当的加热、搅拌等操作形成凝胶。
4.凝胶固化：将凝胶样品放置在适当的温度和时间下进行固化，使凝胶具有一定的稳定性和强度。
5.凝胶再生：在凝胶制备完成后，通常需要对其进行再生处理，以去除未固化的功能基团或其他杂质。
强阴离子交换琼脂糖凝胶介质的应用广泛，包括以下几个方面：1.生化分离与纯化：强阴离子交换琼脂糖凝胶介质能够将蛋白质、酶、激素等分子根据其带电性质进行分离和纯化，广泛应用于生物化学和生物工程领域。
2.药物分离与纯化：强阴离子交换琼脂糖凝胶介质广泛应用于药物的分离和纯化过程中，可以有效去除药物中的离子、离子复合物和其他杂质，提高药物的纯度和质量。
3.环境分析与监测：强阴离子交换琼脂糖凝胶介质可用于环境样品中金属离子、重金属离子以及其他污染物的分离和富集，用于环境分析与监测。
琼脂糖凝胶电泳标准操作流程
琼脂糖凝胶电泳标准操作流程琼脂糖凝胶电泳操作标准流程一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。
本铜人阵学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，此关为能力考核，通关成功后，代表具备操作琼脂糖电泳的能力。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA影响核酸分子泳动率的因素主要还是：1、DNA分子大小；2、琼脂糖浓度；3、DNA构想；4、所用的电压；5、琼脂糖种类；6、电泳缓冲液核酸电泳中常用的染色剂是溴化乙锭（ethidium bromide EB）。
溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入核酸双链的配对碱基之间。
在紫外线照射BE-DNA 复合物时，出现不同的效应。
254nm的紫外线照射时，灵敏度最高，但对DNA损伤严重；360nm紫外线照射时，虽然灵敏度较低，但对DNA 损伤小，所以适合对DNA样品的观察和回收等操作。
300nm紫外线照射的灵敏度较高，且对DNA损伤不是很大，所以也比较适用。
三、材料、试剂及器具1、材料不同大小的基因组片段；2、试剂Hind III digest DNA Marker（分子量标准）(TaKaRa)；D2000(TianGen)；BIOWESTAGAROSE（西班牙琼脂糖）；加样缓冲液（6x）：溴酚黄；电泳缓冲液（1×TAE）；溴化乙锭（EB）；3、仪器及器具（1）移液器、吸头、锥形瓶（2）电泳系统：电泳仪、水平电泳槽、托盘、胶托、梳子等。
长的琼脂糖凝胶电泳胶_解释说明以及概述
长的琼脂糖凝胶电泳胶解释说明以及概述1. 引言1.1 概述琼脂糖凝胶电泳胶是一种常用于生物分子分离与分析的技术手段，广泛应用于分子生物学、遗传学等领域。
它通过利用琼脂糖凝胶的孔隙结构和负电性使得不同大小、电荷和形状的生物分子能够在电场中经过迁移并被分离。
长的琼脂糖凝胶电泳胶是一类具有较长孔隙长度的琼脂糖凝胶，可以用于更大大小范围内的生物分子分离。
1.2 文章结构本文将从引言、长的琼脂糖凝胶电泳胶的解释说明与特性用途、制备方法、分类和种类等方面进行论述，并探讨琼脂糖凝胶电泳过程及原理解析，最后得出结论。
1.3 目的本文旨在全面介绍长的琼脂糖凝胶电泳胶，在读者了解其定义、特性和制备方法后，进一步了解其分类和种类，并深入探讨琼脂糖凝胶电泳的工作原理和操作技巧，以期为相关领域的研究人员提供参考和指导。
同时，通过对结果与数据分析方法的讨论，帮助读者更好地解读琼脂糖凝胶电泳的实验结果，并发挥其在生物分子分离与研究中的重要作用。
2. 长的琼脂糖凝胶电泳胶2.1 解释说明长的琼脂糖凝胶电泳胶是一种用于核酸和蛋白质分离与纯化的常见实验材料。
它由琼脂糖、缓冲液和其他添加剂组成，通过调整其成分和浓度可以满足不同实验需求。
2.2 特性和用途长的琼脂糖凝胶电泳胶具有以下特性：- 网络结构稀疏：能够容纳大分子量样品进入凝胶网络；- 多孔性：形成三维空间的通道，便于核酸或蛋白质在电场下迁移；- 凝固速度慢：便于样品加载及扩散；- 耐高温：可以耐受升温至80℃以上。
基于这些特性，长的琼脂糖凝胶电泳胶广泛应用于生物学、医学和遗传学领域。
其主要用途包括：- DNA分析：如DNA片段测序、DNA限制性酶切位点检测等；- RNA分析：如RNA表达谱分析、病毒RNA检测等；- 蛋白质分离与鉴定：如蛋白质多样性研究、酶活性检测等。
2.3 制备方法长的琼脂糖凝胶电泳胶的制备方法可概括为以下步骤：1. 准备缓冲液：根据实验需要选择适当的缓冲液，如Tris-Acetate-EDTA（TAE）缓冲液或Tris-Borate-EDTA（TBE）缓冲液。
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Q-琼脂糖凝胶 FF
产品说明书
Q-琼脂糖凝胶 FF 是将三甲胺基烷基季铵基团键合在高流速琼脂糖微球上形成的一种强阴离子交换介质。
广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
1. 外观
本品呈白色，球状、无嗅、无味。
2. 理化指标 项 目
指 标
离子交换基团 -CH 2N +(CH 3)3
离子交换类型 强阴离子，可交换离子Cl -基 质
6% 交联琼脂糖**
蛋白质吸附容量 120mgHSA/ml 介质
总离子交换量 0.18-0.25mmol/ml 介质
形状 球形
粒径 45~165μm
流 速 400~700 cm/h* 最大流速750 cm/h
工作温度 4~40 ℃
耐热 pH7水中120℃30min
耐压 0.3MPa
pH 值稳定性 1~14 (短时间，在位清洗)；2~12(长时间)
pH 工作范围 2~12
化学稳定性 在以下液体中稳定：所有常用的水相缓冲液；1mol/L
氢氧化钠；8mol/L 尿素；6mol/L 盐酸胍；70% 乙醇
*检测条件： 层析柱10mm×300mm *柱床高15cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl
3. pH 滴定曲线：
4． 包装 产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小” 等内容。
5．运输
运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。
6．贮存
产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。
不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。
7.注意事项
本产品避免与氧化剂接触；避免在pH值< 4时长时间暴露(一周,20℃)。
8.保质期：暂定5年。
9.应用
本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
下面简要介绍介质的使用过程。
9.1 装柱
⑴让所有的材料和试剂达到室温。
配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
⑵根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
匀浆作脱气处理。
⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
⑷用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。
打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
⑸打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。
用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
9.2平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
平衡液是低浓度的缓冲溶液，如Tris 、PBS等。
9.3上样
⑴样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。
盐浓度太大的样品处理后再配。
⑵一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产
品。
⑶介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。
盐浓度小，介质对样品组分吸附较牢。
用Q琼脂糖介质时，推荐的pH值是大于目标产品等电点1个单位。
9.4洗脱
Q琼脂糖介质可用增大盐浓度或减小pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。
9.5再生
一般用高盐浓度的缓冲液（含1~2mol/L NaCl）洗或减小pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白时的平衡液洗到平衡，可再次使用。
若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
9.6 在位清洗
⑴对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
⑵对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。
⑶对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。
9.7注意
在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。
9.8 去热源
用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。
或用以下方法步骤去除：
⑴2倍柱体积的70%乙醇
⑵2倍柱体积50mM Tris-Hcl pH7.5
⑶1倍柱体积4M尿素
⑷3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl
以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制
9.9 消毒
用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。
9.10灭菌
置介质于高压灭菌锅中120℃下30分钟。