琼脂糖凝胶的配制和DNA回收
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问题
原因：洗脱液中含有乙醇
建议：洗脱前，确保柱子中乙醇已无残留乙醇。
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问来自 1、未回收到DNA片段或回收效率很低
A、原因：胶块未完全溶解
建议：为加快凝胶的溶解，应将凝胶置于55度水浴中溶解，期间不断上下颠倒，待确定凝胶完全溶解后再进行后续操作。每100 mg凝胶应加入100uL溶胶液，如果胶块过大，应将胶块切成小块，以便于凝胶溶解。
D、原因：洗脱缓冲液不合适
建议：洗脱液的pH值在7.0~8.5时，洗脱效率最高，洗脱液pH超出此范围，将会显著影响收获率，请使用试剂盒配套的Elution Buffer（pH 8.5，10mM Tris-HCl），或者使用使用pH值在此范围的ddH2O。
E、原因：洗脱缓冲液未加到离心柱中间
建议：因为在洗脱时使用较少的洗脱缓冲液，洗脱缓冲液应加在中间位置，并室温放置1~2分钟，然后再离心洗脱。另外，采用65度预热的洗脱Buffer将显著提高回收效率。
F、原因：起始回收量太少
建议：如果起始回收量很好的样品，应富集，最好使用不少于1ug的样品。对于PCR产物，应事先电泳检测产量，在进行回收操作。
2、电泳时，产物漂出点样孔
原因：洗脱时，柱子中残留乙醇
建议：在进行洗脱前，如果柱子上残留乙醇，将会影响洗脱效率，在洗脱前应再次离心，或者空气中放置几分钟，再进行洗脱。
B、原因：加入溶胶液过少
建议：对于PCR产物，或者酶切产物，应加入2倍体积的溶胶液。对于凝胶回收，每100 mg凝胶应加入不少于100uL溶胶液。对小于200bp的片段应加入5倍体积的溶胶液。
C、原因：DNA Wash Buffer 中未加入无水乙醇
凝胶dna回收实验报告
凝胶dna回收实验报告1. 理解DNA凝胶电泳的原理和方法；2. 学习DNA凝胶回收的方法和步骤。
实验材料：1. DNA凝胶电泳仪；2. DNA样品；3. DNA凝胶；4. DNA染料。
实验步骤：1. 准备DNA样品：从细菌或真核生物中提取DNA并纯化。
2. 制备DNA凝胶：根据DNA样品大小选择合适的琼脂糖浓度和电泳缓冲液，将琼脂糖溶解于电泳缓冲液中，加热溶解后，在凝固前加入DNA样品，并将其转移到电泳槽中。
3. 进行DNA凝胶电泳：将DNA凝胶置于电泳仪中，接通电源，设定适当的电流和电压，进行电泳分离。
根据不同的目的和需求，可以选择不同的电泳方法，如平行电泳或垂直电泳。
4. 理解DNA凝胶图谱：观察DNA在凝胶中的迁移情况，根据分离程度和片段大小推断DNA的特性和组成。
5. 染色：使用DNA染料将凝胶中的DNA染色，以便观察和记录。
6. 回收DNA：使用切割刀将感兴趣的DNA片段从凝胶中割下，转移到离心管中。
7. 纯化和测定：使用DNA纯化试剂盒或其他方法纯化回收的DNA，并通过测序或其他技术确认其准确性和纯度。
实验结果：1. DNA凝胶图谱：根据分离情况和染色结果，可以观察到DNA片段的迁移情况和大小分布。
2. 回收的DNA样品：经过回收和纯化后，获得从凝胶中割下的DNA片段。
实验讨论：1. 实验中电泳条件的选择对于DNA凝胶分离的效果和准确性至关重要。
2. 切割凝胶时需要注意避免外源性DNA污染和片段交叉污染。
3. 回收的DNA样品需要经过纯化和测定，以确保其准确性和纯度。
实验结论：1. 通过凝胶DNA回收实验，我们可以将感兴趣的DNA片段从凝胶中割下，并进行后续的纯化和分析。
2. DNA凝胶电泳是一种常用的DNA分离和分析方法，可以用于研究DNA的大小、构成和数量。
3. 正确选择电泳条件，合理操作和纯化步骤，能够获得准确和高质量的回收DNA样品。
实验改进：1. 优化电泳条件，提高凝胶分离效果。
实验七 琼脂糖凝胶中dna片段的回收
实验七琼脂糖凝胶中DNA片段的回收一．原理从琼脂糖凝胶中回收DNA片段．可得到大小一致的DNA片段。
有多种方法可用于琼脂糖凝胶中DNA片段的回收。
例如低融点琼脂糖法、洗脱法等。
本实验方法是先使凝胶被NaI溶解，然后DNA与玻璃粉结合，再从玻璃粉中洗脱出DNA片段。
二．方法1．在琼脂糖凝胶小电泳分离DNA片段，当DNA片段完全分开后，停止电泳。
2．在长波长紫外灯下观察凝胶，切下含所需的琼脂糖部分。
将胶放人预称重的微离心管中。
3．称含凝胶的离心管重量，每0.1g凝胶加200μl NaI溶液。
4．于50℃温育微离心管，每5min颠倒几次离心管混匀离心管，直到琼脂糖完全融解。
5. 每μg DNA加入5μl玻璃粉悬液。
轻轻颠倒使之混匀，于冰上放置10min，使DNA结合在玻璃粉上。
6．于室温离心5秒，收集结合有DNA的玻璃粉。
7．倒掉上清。
加700μl -20℃预冷的清洗缓冲液，轻轻地抽吸，使玻璃粉重悬浮。
冰上放置5min。
8．重复第6与7步两次，于室温离心10秒，使玻璃粉沉淀下来。
倒掉上清，重复离心，小心除去全部残存液体。
9．加入30～50μ1 TE，轻轻吹打使玻璃粉重悬浮。
于50℃温育10min，将DNA洗脱下来。
10．于室温离心l0秒，使玻璃粉沉淀下来。
将上清转移到另一管中。
小心，不要吸人玻璃粉，因为它可抑制许多酶的活性。
三．试剂1.玻璃粉(1)取30g玻璃粉（Sigma 325目二氧化硅）悬于200ml蒸馏水的烧杯中。
搅拌混匀后，静置9min。
(2)将上清转移到离心管中．于6000⨯g离心10min，沉淀玻璃粉。
(3)倒掉上清，将玻璃粉重悬于50ml 25％硝酸中，室温放置过夜。
(4)于6000⨯g沉淀玻璃，用无菌双蒸水洗涤，沉淀玻璃粉4一6次，直到pH值至中性。
(5)用无菌水重悬沉淀，配成10％的浆液。
(6)将此浆液分装成0.1ml一管．贮存于-70℃。
待用的样品呵贮存于-20℃或4⨯。
2．NaI溶液NaI 90.8gNa2SO3 15gddH2O至 100ml3．乙醇清洗液成分为：100mmol／L NaCIlmmol／L DETA，pH8．O10mmol／L Tris—HLc，pH7.550％乙醇四．说明1．本方法琼脂糖凝胶电泳缓冲液只能使用TAE，回收的DNA片段应在0.8～6kb之中。
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理胶回收DNA试剂盒是一种常用的分子生物学实验工具，用于从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的方法。
其原理主要基于琼脂糖凝胶电泳的分离特性和DNA与硅胶膜亲和吸附的原理。
下面将详细介绍胶回收DNA试剂盒的原理和方法。
1.原理：1.1琼脂糖凝胶电泳分离：首先，将DNA样品与琼脂糖混合并加热使其溶解后，将混合物加入琼脂糖凝胶槽中，随后进行电泳。
由于琼脂糖具有分子筛的特性，DNA分子根据大小被分离在凝胶中的不同位置。
1.2硅胶膜吸附：电泳结束后，将琼脂糖凝胶取出，然后将硅胶膜放置在凝胶表面，使其与DNA分子接触。
由于硅胶膜具有强烈的亲和吸附性，它能够有效地吸附DNA分子。
1.3洗脱纯化：在硅胶膜上吸附的DNA分子可以通过洗脱的方式从硅胶膜上释放出来。
一般情况下，通过使用适当的缓冲液可以将DNA洗脱出来，得到纯化的DNA样品。
2.方法：2.1样品制备：将待分离和纯化的DNA样品进行适当的制备处理，如酶切产生的片段、PCR扩增产生的产物等。
根据需要，可以使用酶切缓冲液、PCR停止液等添加剂来优化样品的制备。
2.2琼脂糖电泳：将样品加入琼脂糖凝胶槽中，通过电泳操作进行DNA分离。
根据需要，使用适当的电泳缓冲液和电泳条件来获得所需的分离效果。
2.3硅胶膜吸附：电泳结束后，取出琼脂糖凝胶，将硅胶膜放置在凝胶表面，使其与DNA分子接触。
根据实验要求，可以根据需要对硅胶膜进行预处理，如加热、孵育等。
2.4洗脱纯化：通过使用适当的洗脱缓冲液，将硅胶膜上吸附的DNA 洗脱出来。
通常，洗脱缓冲液中包含盐和其他成分，以提高DNA的纯度和回收率。
2.5最终保存：将洗脱的DNA样品进行适当的保存和处理。
根据实验需求，可以进行浓缩、冻干或直接用于后续实验。
总结：胶回收DNA试剂盒通过利用琼脂糖凝胶电泳分离DNA，并利用硅胶膜的亲和吸附性，实现了从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的目的。
这种方法简便易行，能够在短时间内获得高质量的DNA样品，广泛应用于分子生物学研究和实验室应用中。
琼脂糖凝胶中DNA片段的分离和回收
玻璃奶法
实验原理：
• 玻璃奶(Glassmilk)：无毒、无味、无腐蚀作用的 白色硅颗粒，能专一性结合0.2kb至50kb大小的 DNA（双链、单链、线性、环状或超螺旋），不 结合RNA、蛋白质、寡核苷酸、有机溶剂、去污 剂及其他可能抑制酶活性的有机或无机物。 • DNA与玻璃奶结合原理：在高盐状态下，玻璃奶 周围的负电荷被打破，并允许DNA的磷酸负电荷 与玻璃奶特异性结合。在低盐（H2O/1×TE）时 溶解分离。
DEAE滤膜插片法
• 将DEAE纤维素膜裁成小条活化处理。 • 电泳后在目的条带前切一刀，将比条带略宽的 DEAE纤维素膜插入切口，不留气泡，继续电泳 一会儿，条带上的DNA被膜片截留。 • 取出膜片冲洗后转移到离心管中加缓冲液65度保 温洗脱，直到膜上没有DNA了，将溶液用酚氯仿 抽提沉淀。 • 这个方法不适合做较大的DNA，因为洗脱比较困 难。
DNA 结合率影响因素：
• 盐浓度：
– DNA<100bp:高盐状态下结合率高。 – DNA>100bp:低盐状态下结合率高。
• pH值：
– pH<7.0:结合率高。
应 用：
• 从琼脂糖凝胶中分离纯化DNA片段； • 从DNA反应物中纯化目的DNA片段，如回 收纯化PCR产物、酶切连接反应中的DNA 片段； • 从探针制备反应中去除未标记上的核苷酸 以及小的DNA片段（比如引物）； • DNA浓缩，去盐及去除杂质。
5．涡旋震荡悬浮Ultra-Sep Beads，加入10 µl Ultra-Sep Beads到样品EP管中。50～ 55℃温育10min或时间至完全熔解。在温浴 过程中，每隔2 min震荡EP管悬浮UltraSep Beads。 注意观察胶完全熔解后胶/ Binding Buffer混 合物的pH值。当混合物pH＞8.0则DNA的 产量将会显著减少。如果混合物变为橙色 或红色，则加入5 µl 5M NaAC（pH5.2）以 降低pH值。加入NaAC后混合物的颜色应该 变为淡黄色。
02 琼脂糖凝胶回收DNA片段及检测
琼脂糖凝胶回收DNA片段及检测 琼脂糖凝胶回收DNA片段及检测
一、DNA片段的回收纯化 DNA片段的回收纯化
利用DNA凝胶纯化回收试剂盒（离心柱型） 利用DNA凝胶纯化回收试剂盒（离心柱型） 进行DNA纯化回收。 进行DNA纯化回收。 此试剂盒可用于琼脂糖凝胶DNA回收， 此试剂盒可用于琼脂糖凝胶DNA回收， PCR反应产物纯化回收，酶切产物DNA片 PCR反应产物纯化回收，酶切产物DNA片 段纯化回收，探针标记后纯化回收，DNA 段纯化回收，探针标记后纯化回收，DNA 样品浓缩等。
10. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管 中，在吸附膜的中间部位加40µ 中，在吸附膜的中间部位加40µl洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在65-70℃ EB（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中加热 效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm离 效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm离 心1分钟。
பைடு நூலகம்
灌入水平胶框，插入梳子，自然冷却。 凝胶在室温下放置30min，使其自然凝结， 凝胶在室温下放置30min，使其自然凝结， 小心拔出梳子。 将凝胶放入电泳槽中，向电泳槽中加入电 泳缓冲液，刚好没过凝胶约1mm。 泳缓冲液，刚好没过凝胶约1mm。
2.加样 2.加样
取回收的DNA样品20 取回收的DNA样品20 µl， 加样缓冲液3 加样缓冲液3 µl（6X），混匀，点入琼脂糖 6X），混匀，点入琼脂糖 的样品孔内。 加样DNA 加样DNA marker DL2000 6 µl 。 开始电泳（120V） 开始电泳（120V），当溴酚蓝迁移到距凝 胶下缘2cm时，停止电泳。 胶下缘2cm时，停止电泳。 利用紫外投射仪观察DNA条带。 利用紫外投射仪观察DNA条带。
dna 琼脂糖凝胶回收
dna 琼脂糖凝胶回收琼脂糖凝胶回收是分子生物学领域中常见的实验技术，它能够有效地提取DNA，是DNA分析的重要一步。
在本文中，我们将详细介绍琼脂糖凝胶回收的整个过程，并提供一些实用的指导。
琼脂糖凝胶回收是一种通过电泳将DNA从琼脂糖凝胶上分离并回收的方法。
首先，在实验开始之前，我们需要制备琼脂糖凝胶，并在其中加入DNA样品。
随后，我们将琼脂糖凝胶与电泳缓冲液一同放置在电泳槽中并施加合适的电压，使DNA样品在琼脂糖凝胶中垂直迁移。
为了使得琼脂糖凝胶回收更加高效，我们需要根据DNA片段的大小调整电泳条件。
一般来说，小分子量的DNA片段迁移速度较快，而大分子量的DNA片段迁移速度较慢。
因此，为了避免DNA片段过度迁移或者导致DNA片段过度聚集，我们需要根据实验需要选择合适的电泳时间和电压。
在DNA片段迁移至所需位置后，我们可以将琼脂糖凝胶从电泳槽中取出。
此时，我们需要注意避免暴露琼脂糖凝胶于紫外线，以免对DNA造成伤害。
在取出琼脂糖凝胶之后，我们需要使用刮胶刀或者专用工具将 DNA 片段从琼脂糖凝胶上切割或刮下。
琼脂糖凝胶回收后的 DNA 片段可以用于各种实验，比如 PCR 扩增、限制性酶切等。
在进行后续实验之前，我们需要将 DNA 片段从琼脂糖凝胶中纯化出来，并去除琼脂糖残留物、电泳缓冲液等杂质。
其中，琼脂糖凝胶纯化技术有多种方法可以选择，例如利用商用纯化试剂盒、硅胶凝胶纯化法等。
总结起来，琼脂糖凝胶回收是一项关键的实验技术，能够高效地提取 DNA 片段。
通过合适的电泳条件和仔细的实验操作，我们可以获得高质量的 DNA样品。
这些 DNA 片段可以被广泛应用于基因克隆、基因组测序等实验中，为我们深入了解生命机制提供了重要的工具。
希望通过本文的介绍，读者们能够更加全面地了解琼脂糖凝胶回收的过程和原理，并在实验操作中获得更好的结果。
琼脂糖凝胶dna回收原理
琼脂糖凝胶dna回收原理
琼脂糖凝胶DNA回收是一种常用的蛋白质和核酸分离纯化技术，其原理如下：
1. 凝胶电泳：首先，将待回收的DNA样品经过凝胶电泳进行
分离。
在凝胶中，DNA分子根据尺寸和电荷迁移速度的差异
被分离开来。
2. 可视化：然后，用染料（如溴化乙锭）染色凝胶，使DNA
分子在紫外光下能够被可视化。
3. 切取DNA：通过使用灭菌的切割器具（如刮刀或剪刀），
将目标DNA条带切取下来。
注意要避免任何可能的污染。
4. 溶胶化：将切取下的DNA条带放入含有高浓度盐（如氯化
铵或碳酸锂）的洗涤缓冲液中，使DNA溶于溶液中。
5. 沉淀：将洗涤缓冲液中的DNA溶液与等体积的冷乙醇混合，形成DNA沉淀物。
6. 离心：将混合物进行离心，使DNA沉淀下来。
7. 溶解：去除上清液，用无菌蒸馏水洗涤DNA沉淀物，然后
用适当的缓冲液溶解DNA沉淀。
8. 储存：将回收的DNA溶液进行储存，以备后续实验使用。
总之，琼脂糖凝胶DNA回收是通过将目标DNA条带从凝胶中切取下来，然后对其进行溶胶化、沉淀、溶解等操作，最终得到纯化的DNA溶液的过程。
琼脂糖凝胶回收纯化DNA标准操作规程
琼脂糖凝胶回收纯化DNA标准操作规程（编号：013）
1、目的及适用范围
该SOP用于分离纯化目的DNA片段。
2、主要仪器及试剂
台式离心机、微量移液器、binding buffer、wash buffer、elution buffer，各试剂均来自胶回收提取试剂盒。
3、实验步骤
3.1 琼脂糖电泳，将特异电泳带用刀切下放入到离心管中，称琼脂糖带的重量；
3.2 按照每100mg加400µL的量加入binding buffer，放入到离心管振荡器中，45℃～55℃温育振荡，直到所有的琼脂糖都溶解（大概要5min）；
3.3 取出纯化柱，将上述溶解液转移至柱中，室温下放置2min，8000rpm 离心1min，弃离心管中的液体，将纯化柱放回离心管中；
3.4 加500µL的wash buffer至柱中，8000rpm 离心1min，弃管中的溶液；
3.5 重复操作4步的操作1次，最后将纯化柱放入EP管中10000rpm离心30s，除去残余的wash buffer；
3.6 将纯化柱放入一个新的离心管。
加30~40µL H2O或者elution buffer至纯化柱膜的中央，在37℃或50℃下放置2min，10000rpm离心1min洗脱DNA，将离心管中的DNA溶液放在-20℃保存。
4、注意事项
若想要不电泳而直接纯化DNA，只需要在第2步中按100µL液量加400µL的binding buffer,其余的步骤不变。
30。
从琼脂糖凝胶中回收DNA
7. 加入DR-1 Buffer的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。 注：当分离小于400bp的DNA片段时， 应在此溶液中再加入终浓度为20%的 异丙醇。 8. 将试剂盒中的Spin Column安置于 Collection Tube上。 9. 将步骤7的溶液转移至Spin Column中， 12,000rpm离心1分钟，弃滤液。 注：如将滤液再加入Spin Column中离 心一次，可以提高DNA回收率。
五、实验结果与讨论
1. 实验结果 2. 讨论
附I： TaKaRa Agrose Gel DNA Purification Kit Ver2.0回收DNA 的操作步骤
1. 使用TAE或TBE缓冲液制作琼脂糖 凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳。 2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼 脂糖凝胶。应注意尽量切除不含目 的DNA部分的凝胶，尽量减少凝胶 体积，提高DNA回收率。 注: 切胶时不要将DNA长时间暴露 于紫外灯下，以防DNA损失。
五、注意事项
切胶时不要将DNA长时间暴露于紫外灯下， 以防DNA损失。 胶块一定要充分融化,否则会严重影响 DNA的回收率。 混合振荡操作不要过于剧烈。 灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60゜C 使用时有利于提高洗脱效率。 DNA需长期保存时，建议使用Elution Buffer。 纯化的DNA用于序列分析时，最好使用灭 菌的双蒸水进行DNA的洗脱。
10.将500µ L的Rinse A加入Spin Column 中， 12,000rpm离心30秒，弃滤液。 11.将700µL的Rinse B加入Spin Column 中，12,000rpm离心30秒，弃滤液。 12.重复步骤11。 13.将Spin Column安置于新的1.5mL的离 心管上，在Spin Column膜的中央处加 入25µ L的灭菌蒸馏水或Elution Buffer， 室温静置1分钟。 注：把灭菌蒸馏 水或Elution Buffer加热至60゜C使用 时有利于提高洗脱效率。 14.12,000rpm离心1分钟洗脱DNA。
琼脂糖凝胶回收实验操作
琼脂糖凝胶回收实验操作及注意事项操作方案1.柱平衡：向吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中）加入500μl平衡液BL，1200r，1min，倒废液，将吸附柱重新放回吸附管中。
2 切胶：配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段。
推荐使用新鲜的TAE电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,旧的电泳缓冲液PH会增加而降低DNA的回收产量;电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA片段切下来.并尽量去除多余的凝胶.注意:DNA在紫外灯下的曝光的时间不要超过30秒,同时在紫外灯下操作的时候一定要戴保护眼镜.3.加等体积PN，50℃水浴：称取空离心管的重量,切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量,求出凝胶块的重量,近似地确定其体积.一般情况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml;加入等倍凝胶体积的PN把混合物置于50℃水浴中温浴至凝胶完全融化,其间每隔2-3分钟混匀一次;小于300bp的小片段可完全溶胶后再加入1/2胶块体积的异丙醇以提高回收率；胶完全全溶后放置至室温在上柱，室温时结合DNA能力较强。
4.上柱：转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个吸附柱CA2中，,并把柱子装在一个干净的2ml收集管内,室温下放置2min,12000rpm离心1min,弃去液体.一个收集柱最多可容纳700μl的溶液,如果DNA-琼脂糖混合物的体积大于700μl,可先转移700μl溶液至柱子,离心完后,将余下的溶液继续加上柱子上.但是每一个柱子最多可以结合25~30μg DNA.如果预期产量较大,则把样品分别加到合适数目的柱中.5. 将柱子重新套回收集管中,加600μl PW 柱子中;室温下,12000rpm离心1分钟,弃废液;这一步相当关键,不要忽略此步.6.重复步骤57.将空柱子重新套回收集管中,12000rpm离心1min以甩干柱基质残余的液体.这步可以去除柱子基质上残余的乙醇,不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的.8. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,室温放置2min,12000rpm离心1分钟,离心管中的溶液就是纯化的DNA产物,保存于-20度.如果再洗脱一次的话可以把残余的DNA洗脱出来,不过那样的浓度就会较低.DNA的产量及质量:把纯化产物的样品稀释一定的倍数后,分别在260nm和280nm下测其光吸收值,回收得到的DNA的浓度可按以下公式来计算: DNA浓度=光吸收260×50×稀释倍数μg/ml长度大于500bp的片段通常能纯化得到80%的产量. 而50bp~500bp的带则可达到55%~80%的回收率.(光吸收260/光吸收280)的比率是核酸纯度的一个标记.如果此值1.8,则意味着核酸的纯度>90%.另一方面,如果纯化产物的产量较低时,可以用琼脂糖EB电泳估算产物的浓度.。
实验五 琼脂糖凝胶DNA片段回收
入500ul 平衡液BL，12,000 rpm，1min，倒掉收集 管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中，备用。 2）称取空离心管的质量，记为M1。 3）在紫外灯下，将目标DNA片段从琼脂糖凝胶中 切下（尽量切去多余部分），放入1.5ml离心管中， 再次称重，记为M2； 4）计算凝胶质量M=M2-M1，如凝胶重0.1g，其体 积可视为100ul，不足0.1g的按0.1光度法测定DNA的浓度
与纯度？
从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
实验原理
在生物技术试验中，PCR反应获得的目的片段、
酶切后所得特定的DNA序列、分子杂交中所制 备的探针等，经过琼脂糖凝胶电泳后，目的片 段与其他的DNA分开，这就需要有一套方法将 目的DNA从凝胶中分离出来，通过处理后得到 春花的目的DNA，以用于以后分子杂交，重组 子构建，序列分析等。
DNA溶液浓度与纯度的测定
取待测DNA溶液20 ul，加入1980ul ddH2O
（相当于稀释100倍），混匀，在紫外分光 光度计上分别测定A260和A280 计算A260/A280. DNA浓度（ug/ml）=A260×50×稀释倍数 A260/A280显示核酸纯度，应为1.7~1.9。
1min，倒掉收集管中的废液。此步重复一遍。
8）将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm离心2 min，倒
掉收集管中的废液，将吸附柱室温放置，彻底晾干。 （漂洗液中乙醇的残留会影响后续酶切、PCR等实验）
实验步骤
9）将晾干的吸附柱放到一个干净的离心管中，向
吸附柱中间位置悬空滴加 ddH2O 50 ul，室温放置 2 min，12,000 rpm离心2 min； 10）将离心管中的液体重新加回吸附柱中，向吸附 柱中间位置悬空滴加，室温放置2 min，12,000 rpm离心2 min，保留离心管。
琼脂糖凝胶的配制
2.加入Gold View的琼脂样凝胶反复融化可能会对DNA检测的灵敏度产生一定影响，但不明显
3.Gold View在PH 3.6-7.0之间能更好的与核酸结合，因此电泳时最好使用新鲜的电泳缓冲液
4.由于Gold View产生绿色荧光，因此不适合于用一般单色胶卷拍照，可以使用凝胶成像系统保存图像。
5.含有Gold View的凝胶不适合于进行凝胶回收试验。要进行回收试验，请使用EB胶或Super Green I型核酸染色剂。
7.虽然尚未发现Gold View有致癌作用，但由于 Gold View溶液酸性较强，一次对皮肤，眼睛会有一定的刺激，操作时应戴手套。
琼脂糖浓度/％
0.3
0.6
0.7
0.9
1.2
1.5
2.0
线状DNA大小/kb
60－5
20－1
10－0.8
7－0.5
0.4
4－0.2
3－0.1
实验操作步骤：
100ml溶胶液在微波炉中融化，冷却至60℃左右（不烫手）后加入10vl Gold View，轻轻摇匀后倒胶，待胶完全凝固后上样电泳，电泳完毕在紫外灯下观察。
注意事项：
在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。GoldView不仅能染DNA，也可用于染RNA。
1.胶厚度不要超过0.5cm，胶太厚会影响检测灵敏度
琼脂糖凝胶DNA回收
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10、将吸附柱CA2放到一个干净离心管中，向吸附 膜中间位置悬空滴加适量(30ul)洗脱缓冲液EB， 室温放置2min。12000rpm离心2min收集DNA溶液。
11、为了提高DNA回收效率，再将离心管中的30ul 洗脱缓冲液EB加入吸附柱CA2，室温放置2min。 12000rpm离心2min收集DNA溶液。
7、将吸附柱CA2放入收集管中，向吸附柱CA2中加 入,600ul漂洗液PW,放置2min，12000rpm离心1min，倒 掉收集管中的废液，将吸附柱CA2放入收集管中。 8、重复步骤7。
9、将吸附柱CA2放回收集管中，12000rpm离心2min，尽 量除尽漂洗液。将吸附柱CA2开盖置于室温放置数分钟， 彻底地晾干，以防止残留的漂洗液影响后续实验。
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回收前
回收后
琼脂糖凝胶电泳检测
琼脂糖凝胶电泳检测
实验仪器：琼脂糖凝胶电泳系统、紫外反射透射 分析仪、离心机、恒温水浴锅、刀片、镊子
实验试剂：无水乙醇、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 其中琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒包含：吸附柱CA2、 收集管（2ml）、平衡液BL、溶胶液PN、漂洗液PW、 洗脱缓冲液EB，由TIANGEN公司提供。
1、DNA纯化的方法主要有哪些？ 2、试剂盒回收DNA片段回收率低的原因？ 3、DNA片段回收后可用于哪些实验操作？
ห้องสมุดไป่ตู้
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1、使用TAE缓冲液制作1%的琼脂糖凝胶，对 PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。
2、将凝胶放入EB溶液中染色10分钟。 3、取一1.5mL离心管，称取重量M0。取出凝 胶，在紫外光下切取目的条带，装入干净的 离心管中，称取重量M1。计算M1-M0=M。
实验三 从琼脂糖凝胶中回收并纯化DNA
实验三：从琼脂糖凝胶中回收并纯化DNA片段一．实验目的学习经琼脂糖凝胶电泳分离后回收并纯化DNA片段的方法二．实验原理将DNA样品在琼脂糖凝胶电泳后，在紫外灯下切割下含目的DNA 片段的凝胶块；在高盐和促溶剂的作用下，琼脂糖聚合物中糖之间的氢键断裂而迅速溶解，DNA就从胶基质中释放出来并选择性地吸附到球状的硅胶颗料或特定的柱子上；然后用高盐缓冲液洗涤除去残余的琼脂糖，再用含乙醇的缓冲液洗去盐和染料。
最后用TE缓冲液或水将球状硅胶颗粒或柱子上的DNA 洗脱下来。
回收纯化后的DNA可直接用于DNA的连接反应、标记反应、测序反应或DNA的微量注射等研究。
三．实验材料1.水浴锅、离心机、移液器2.PCR扩增的Rv1791基因3.Agarose Gel DNA Purification Kit Ver.2.0 （Taraka）四．实验步骤（1）实验三中的PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳。
（2）在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA 回收率。
切胶时不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
（3）切碎胶块。
胶块切碎后可以减少步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
（4）称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 μl进行计算。
（5）向胶块中加入3倍凝胶体积的胶块融化液DR-I Buffer。
（6）均匀混合后75℃加热融化胶块，此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10min）。
（7）向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
（8）离心柱放入收集管中，将步骤7的溶液转移至离心柱中，12,000 rpm，1min，弃滤液。
如将滤液再加入离心柱中离心一次，可以提高DNA的回收率。
从琼脂糖凝胶中回收DNA
• 琼脂糖凝胶电泳简介 • DNA回收的必要性 • DNA回收的方法 • 从琼脂糖凝胶中回收DNA的步骤 • DNA回收的注意事项
01
琼脂糖凝胶电泳简介
琼脂糖凝胶电泳的原理
琼脂糖凝胶电泳基于DNA分子在电场中的迁移率不同进行分离。DNA分子在电 场中移动的速度与其分子量大小成反比，因此可以通过琼脂糖凝胶将不同大小的 DNA分子分离。
酶解法
利用酶分解琼脂糖凝胶中的琼脂糖， 释放出DNA，然后用适当的方法回 收DNA。
04
从琼脂糖凝胶中回收DNA的步骤
切胶
切胶
使用干净的刀片将含有DNA的琼脂 糖凝胶切成小块，以便后续处理。确 保切下的凝胶块中包含目标DNA条 带。
注意事项
切胶时要避免交叉污染，使用一次性 刀片或对刀片进行消毒。
节约资源
回收DNA可以节约用于合成新凝胶和制备新试剂的资源，从 而降低实验成本。此外，回收的DNA可以重复使用，进一步 减少浪费和环境污染。
03
DNA回收的方法
Байду номын сангаас 传统方法
01
乙醇沉淀法
将切下的凝胶块与缓冲液混合，离心后去除上清液，加入无水乙醇，离
心收集沉淀，干燥后溶解于适量水中。
02
酚-氯仿提取法
THANKS
感谢观看
在琼脂糖凝胶中，DNA分子会受到电场的作用，产生定向移动。由于DNA分子 带负电荷，随着电场强度的增加，DNA分子的移动速度也会增加。
琼脂糖凝胶电泳的应用
分离和鉴定DNA片段
通过琼脂糖凝胶电泳，可以将混合的DNA片段分离成单 一的条带，并对其大小进行鉴定。
分离和纯化PCR产物
PCR产物可以通过琼脂糖凝胶电泳进行分离和纯化，以去 除未扩增的DNA片段和引物等杂质。
实验十一DNA凝胶回收
加Buffer DE-B后混合物颜色变为黄色，充分混匀以保证形成均一的黄色 溶液。
4. 吸取步骤3中的混合液，转移到DNA制备管（置于2 ml（试剂盒内 提供）离心管）中，12,000×g离心 1 min。弃滤液。
一、实验原理
通过一定的方法将琼脂糖凝胶上 需要的目的DNA带回收下来，用 于下游实验。
琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法
1.柱回收试剂盒
是目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中 的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化 填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲 液洗脱。全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接 用于后继实验。这个方法几乎不需要什么技巧就能得到 稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。 但是这个方法不适合用于大片断的回收。
1.在紫外灯下切下含有目的 DNA 的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽 凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量（提前记录 1.5 ml 离 心管重量） ，该重量作为一个凝胶体积（如 100 mg=100 μl 体积） 。
2. 加入 3倍凝胶体积的 Buffer DE-A，混合均匀后于 75°C加 热（低熔点琼脂糖凝胶于 40ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱC加热） ，间断混合（每 23 min） ，直至凝胶块完全熔化（约 6-8 min） 。 * Buffer DE-A为红色溶液。在熔化凝胶的过程中，可以帮 助观察凝胶是否完全熔化。
二、实验目的
1. 从含有目的基因片段凝胶块上回收 DNA。
2.回收目的基因片段为下步连接反应 作准备
从琼脂糖凝胶中快速回收dna片段的新方法
从琼脂糖凝胶中快速回收dna片段的新方法一、背景介绍DNA是生物体内的重要遗传物质，其在分子生物学和生物技术中具有重要的应用价值。
然而，从大量样本中快速回收DNA仍然是一个挑战。
传统的DNA回收方法需要多个步骤和复杂的操作，耗时且效率低下。
因此，研究人员不断探索新的DNA回收方法。
二、琼脂糖凝胶中快速回收DNA片段的新方法1. 实验原理该方法基于琼脂糖凝胶电泳原理，通过利用琼脂糖凝胶电泳过程中产生的电场将DNA片段从琼脂糖凝胶中迅速回收。
2. 实验步骤（1）制备琼脂糖凝胶：按照常规方法制备1%琼脂糖凝胶。
（2）电泳：将含有目标DNA片段的样品加入到琼脂糖凝胶槽中进行电泳分离。
根据所需分离大小选择适当的电压和时间。
（3）切割：使用无菌刀片或者PCR管套等工具在琼脂糖凝胶中切割出目标DNA片段。
（4）回收：将切割下来的琼脂糖凝胶块放入1.5mL离心管中，加入适量的蒸馏水或TE缓冲液，温和振荡或高速离心使DNA片段溶解于溶液中。
（5）纯化：使用常规的柱式纯化或者乙醇沉淀等方法对DNA片段进行纯化。
3. 实验注意事项（1）制备琼脂糖凝胶时要注意琼脂糖的浓度和pH值，否则会影响电泳效果。
（2）电泳时要根据所需分离大小选择适当的电压和时间，避免过度分离或未能分离。
（3）切割琼脂糖凝胶时要注意使用无菌工具，并在无菌条件下操作以避免污染。
（4）回收DNA片段时要温和振荡或高速离心使其溶解于溶液中，避免过度振荡或高速离心导致DNA断裂。
三、实验优点该方法操作简单、快速、高效，可以快速回收目标DNA片段。
同时，该方法不需要使用DNA纯化试剂盒等耗材，成本低廉。
四、实验应用该方法可以广泛应用于DNA分离、酶切、PCR扩增等领域。
特别是在样品数量较大、时间紧迫的情况下，该方法具有明显的优势。
五、实验展望目前，该方法仍存在一些局限性，如只适用于琼脂糖凝胶电泳分离的DNA片段回收。
因此，未来需要进一步研究和改进该方法，以扩展其适用范围和提高其效率。
琼脂糖凝胶的配制和DNA回收
琼脂糖凝胶的配制和DNA回收配1%的琼脂糖凝胶称取0.3g琼脂糖，倒入锥形瓶中，用量筒量30毫升，混合，放入微波炉中煮两次，直到看不到颗粒（每次约3分钟），取出，冷却至约60℃，加入Goldview（万分之一），将有机玻璃的内槽置于水平模具上，安装挡板并放置梳子。
吸收少量琼脂糖溶液以密封胶膜边缘并使其固化。
在距底板0.5~1.0mm处放置梳子，以便在加入琼脂糖后形成一个完美的加样孔。
将剩余的热琼脂糖溶液倒入胶膜中，使胶水缓慢膨胀，直到整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。
凝胶的厚度在3到5毫米之间。
检查梳子底部或齿间是否有气泡。
冷却后，拔出梳子（约30分钟），将平板放入电泳槽中，倒入Tae溶液（1x），并将加载缓冲液和两个制造商（1KB和1KB）放入冰箱d100），将loadingbuffer吸到pe手套上（吸取量随意用枪点一下即可）和样品混匀，向凝胶中加样，两侧的孔里加maker，通电120v跑胶，红为正，黑为负（dna带负电，所以往红色正极处跑），放到紫外盒上看结果，同时将亮带部分切下来放入1.5ml的已经称完重量的ep管中（若忘了称重量，按照0.9计算），再次称重计算胶的重量，接下来按照dna回收试剂盒操作步骤回收dna，测浓度。
普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒操作规程使用前请先在漂洗液pw中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1.柱平衡步骤：向吸附柱Ca2（吸附柱放入收集管）中加入500μL平衡液BL，12000rpm（~13400）×g）离心1min，将收集管中的废液倒出，将吸附柱放回回收集管。
（请使用当天处理的栏目）2.将单一的目的dna条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。
3.向橡胶块中加入等体积的溶液PN（如果凝胶重量为0.1g，则体积可视为100.μl，然后添加100μLPN溶液），放置在50℃的水浴中，其间轻轻上下转动离心管，以确保橡胶块完全溶解。
琼脂糖凝胶回收
琼脂糖凝胶回收是生物技术中的一种重要方法。
它广泛应用于生物学研究，是检测DNA、RNA、蛋白质以及其他大分子的常用技术。
琼脂糖凝胶回收是一种高效、灵敏、简
便的技术，可以从混合物中快速分离微量分子。
琼脂糖凝胶回收首先将琼脂糖溶液在玻片上均匀地聚合，形成一层凝胶。
接下来在凝
胶上加入纯化样品，然后将凝胶放置在特定的电场中，使碱基形成聚集。
根据电荷的大小，样品碱基在凝胶上的移动速度各不相同，从而形成一条碱基链，将纯样品从混合物中分离出来。
琼脂糖凝胶回收是一种廉价、简便的技术，可以以比较低的成本获得高质量的结果。
然而，在琼脂糖凝胶回收过程中，由于聚集的碱基极易变形，人们可能无法获得精确的结果。
因此，需要更多的研究来改善琼脂糖凝胶回收的准确性，以提高研究的可靠性和可重
复性。
总之，琼脂糖凝胶回收是一种重要的生物技术，它可以以较低的成本从混合物中快速
分离微量分子，但是由于准确性的问题，仍有待改进。
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配1%的琼脂糖凝胶
称量琼脂糖0.3g，倒入锥形瓶中，再用量筒量取30ml TAE，混到一起，放入微
波炉中煮沸两次，直到看不到颗粒为止（每次大约三分钟），取出后冷却至60℃左右后加入Gold view（万分之一），同时将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上，安好挡板，放好梳子。
吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘，任其凝固，在
距离底板0.5～1.0mm的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后可以形成完好的加
样孔，将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中，使胶液缓慢地展开，直到在整个
有机玻璃板表面形成均匀的胶层。
凝胶的厚度在3～5mm之间，检查一下梳子
的齿下或齿间是否有气泡。
冷却好后拔梳子（30min左右），将板放入电泳槽里，倒入TAE溶液（1X），在冰箱中拿Loading buffer和两个maker（1kb和
D100），将Loading buffer吸到PE手套上（吸取量随意用枪点一下即可）和样
品混匀，向凝胶中加样，两侧的孔里加Maker，通电120V跑胶，红为正，黑为
负（DNA带负电，所以往红色正极处跑），放到紫外盒上看结果，同时将亮带
部分切下来放入1.5ml的已经称完重量的EP管中（若忘了称重量，按照0.9计算），再次称重计算胶的重量，接下来按照DNA回收试剂盒操作步骤回收DNA，测浓度。
普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒操作步骤
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 柱平衡步骤：向吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl平衡液BL，12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收
集管中。
（请使用当天处理过的柱子）
2. 将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净
的离心管中，称取重量。
3. 向胶块中加入等倍体积溶液PN（如果凝胶重为0.1 g，其体积可视为100 μl，
则加入100 μlPN溶液），50℃水浴放置，其间不断温和地上下翻转离心管，以
确保胶块充分溶解。
如果还有未溶的胶块，可继续放置几分钟或再补加一些溶
胶液，直至胶块完全溶解（若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）。
注意：对于回收<300 bp的小片段可在加入PN完全溶胶后再加入1/2胶块体积的
异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为
吸附柱在室温时结合DNA的能力较强。
4. 将上一步所得溶液加入一个吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中），室温放
置2 min，12,000 rpm (~13,400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附
柱CA2放入收集管中。
注意：吸附柱容积为800 μl，若样品体积大于800 μl可分批加入。
5. 向吸附柱CA2中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙
醇），12,000 rpm(~13,400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱
CA2放入收集管中。
注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW加入后静置2-5 min再离心。
6. 重复操作步骤5。
7. 将吸附柱CA2放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min，尽量除尽漂洗液。
将吸附柱CA2置于室温放置数分钟，彻底地晾干，以防止残留的漂洗液
影响下一步的实验。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
8. 将吸附柱CA2放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱
缓冲液EB，室温放置2 min。
12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min收集DNA溶液。
注意：洗脱体积不应小于30 μl，体积过少影响回收效率。
洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。
若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
DNA也可以用缓冲液(10 mM Tris-Cl, pH8.0) 洗脱。
为了提高DNA的
回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2 min，12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min，将DNA溶液收集到离心管中。
DNA浓度及纯度检测
➢回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
➢DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
➢OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。