琼脂糖凝胶的制备上课讲义
实验三琼脂糖凝胶电泳ppt课件
3、充分凝固后小心垂直向上拔出梳子，以保证点样孔完好。将凝胶置入电 泳槽中，加0.5TBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2 mm。
（二）点样
用微量取液器（P20）吸取质粒DNA样品2 l于点样板小孔中，再加入8 l TE及1 l的载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔，蓝色样品混合物将沉 入点样孔下部。同时点5 l MarkerⅢ作为分子量标准。
5、必须保证琼脂糖充分完全熔解，否则，会造成电泳图像模糊不清。 6、电泳槽中缓冲液使用次数过多，缓冲能力下降。特别是TAE缓冲液，
一般用2-3次就要更换，TBE缓冲液则可使用10次左右。 7、为了节约成本，没有跑过DNA的凝胶部分可切下来重复利用，但反复
熔化会降低分辨效率，建议时向哪一极移动？ 2、什么是迁移率？影响迁移率的因素有哪些？什么是分辨率？
分辨率与凝胶浓度的关系？ 3、DNA荧光染料的发光原理？ 4、质粒DNA存在哪些构型？其迁移率有何差异？ 5、loading buffer成分是什么？各成分有何作用？
注意：如何判断单酶切是否完全？ 如何判断双酶切是否完全？
质粒DNA三种构型：环状超螺旋、开环和线性。 质粒电泳三条带：超螺旋、开环和复制中间体（即2个没有复制完全的质粒 连在了一起）。 同一种酶切后电泳谱带的规律：从高分子量到低分子量条带亮度逐渐减弱 由于DNA Marker与酶切产物所含成分不同，因此迁移率不一定相同！
不同波长的紫外光
短波紫外光：254nm 中波紫外光：302nm 长波紫外光：365nm
1、为什么分光光度计测定的浓度很高，但电泳检测浓度却很低？
GoldViewI GoldViewII
DNA的琼脂糖凝胶电泳分析ppt课件
❖ 如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘 效应 ，中间电场比较均匀 ；
❖ 做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致；
❖ 加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电 ห้องสมุดไป่ตู้孔内 ；
❖ 电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后，再调 高电压。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
琼脂糖凝胶 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 浓度（％）
可分辨的线
10~ 7~ 6~ 4~ 3~
性DNA大小 60~5 20~1 0.8 0.7 0.4 0.2 0.1 范围（kb）
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
❖ 2、 50×TAE电泳缓冲液：称取242gTris碱 （即三羟甲基氨基甲烷， Tris为弱碱，在室 温（25℃）下，它的pKa为8.1；根据缓冲理 论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到 9.2之间。Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一 般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得 该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于 Tris的pKa的影响 ）， ，加H2O800ml，待 完全溶解后，加57.1ml冰乙酸， 100ml0.5mol/LEDAT（pH8.0），用H2O定 容至1000ml。临用前用H2O稀释成1×TAE 电泳缓冲液。
琼脂糖凝胶
琼脂糖凝胶什么是琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶是一种由琼脂素制成的凝胶状物质，具有较好的凝胶性能。
它是一种常见的实验室试剂，广泛用于分离、纯化和分析生物大分子如蛋白质、核酸和多糖等。
琼脂糖凝胶的制备方法材料•琼脂素（Agarose）•缓冲溶液步骤1.准备含有适量琼脂素的缓冲溶液，通常使用Tris缓冲溶液或磷酸盐缓冲溶液。
2.将缓冲溶液中的琼脂素加热至溶解，可以使用烧杯和加热板完成这一步骤。
3.琼脂素完全溶解后，将溶液倒入矩形或圆形的琼脂糖凝胶模具中。
4.等待琼脂糖凝胶冷却和凝胶化。
凝胶的结构可以通过调整琼脂素的浓度和凝胶化温度来进行控制，常见的琼脂糖凝胶浓度为0.5%-2.0%。
琼脂糖凝胶的应用琼脂糖凝胶在生物科学领域有广泛的应用，主要包括以下几个方面：1. 蛋白质凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种常见的蛋白质分离技术。
凝胶中的孔隙结构可以根据蛋白质分子的大小、形状和电荷特性，实现对蛋白质的分离和纯化。
通过电泳电场的作用，蛋白质分子会迁移至电泳胶中，形成一系列条带，可以根据条带的位置和宽度来判断样品中蛋白质的相对含量和纯度。
2. 核酸凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳也被广泛应用于核酸分析和分离。
琼脂糖凝胶可以在电场中对核酸进行分子大小分离，并可通过DNA染料或放射性标记物对核酸进行可视化。
这种技术可以用于DNA片段的分离、纯化和定量分析，也可以用于RNA的分离和检测等。
3. 蛋白-核酸相互作用研究琼脂糖凝胶亦可用于研究蛋白与核酸之间的相互作用。
通过在琼脂糖凝胶中添加核酸和蛋白质样品，可以观察它们之间的相互作用。
这种方法可以用于研究蛋白与DNA或RNA之间的结合，还可以用于筛选与特定核酸序列结合的蛋白。
4. 免疫固定电泳琼脂糖凝胶亦可用于免疫固定电泳，用于研究蛋白质的抗原性质。
在这种方法中，将抗原与琼脂糖凝胶混合，使其固定在凝胶孔隙中，然后通过电泳将抗原从凝胶中迁移出来。
迁移过程中，抗原与抗体之间的特异性结合会引起凝胶中条带的出现，可以用于确定蛋白质的抗原性质。
琼脂糖凝胶制备方法
琼脂糖凝胶制备方法嘿，朋友们！今天咱就来唠唠琼脂糖凝胶制备这档子事儿。
你可别小瞧这琼脂糖凝胶，它在好多实验里那可是大功臣呢！就好像是一个魔法盒子，能把各种分子按照我们的意愿分离开来。
首先呢，得准备好材料。
琼脂糖，这可是主角儿，就像做饭得有米一样。
还有电泳缓冲液，这就好比是给主角搭戏的配角，少了它可不行。
然后就是动手操作啦！先把琼脂糖称好重量，小心翼翼地放到锥形瓶里。
哎呀，这时候可不能马虎，多一点少一点都会影响效果的。
接着，加入适量的电泳缓冲液，就像给主角泡个舒服的澡。
之后呢，把锥形瓶放到微波炉里加热。
嘿，这就像是给它们来个高温桑拿，让琼脂糖彻底融化。
加热的时候可得盯着点，别加热过头了，不然可就糟糕啦！等琼脂糖完全融化后，稍微晾凉一会儿，可别烫着自己的手呀。
接着，就是把融化的琼脂糖溶液倒进模具里啦。
这就像是给蛋糕倒面糊一样，得均匀倒进去，不能一边厚一边薄的。
倒完后，让它自然冷却凝固，这时候就耐心等等吧，就像等花儿开放一样。
等凝胶凝固好了，就可以把它从模具里取出来啦。
哇，这时候看着自己亲手做的琼脂糖凝胶，是不是很有成就感呢？在这个过程中，每一步都很关键呀！就像盖房子，一块砖没砌好可能房子就不牢固。
咱做琼脂糖凝胶也是一样，每一个细节都得注意到。
要是有一步出了差错，那可能整个实验就没法顺利进行啦。
你说这琼脂糖凝胶制备是不是很有意思？虽然过程不复杂，但是需要我们的细心和耐心呀。
想想看，通过我们的努力，做出了一块完美的琼脂糖凝胶，能为实验提供有力的支持，这感觉多棒呀！所以呀，大家别害怕尝试，大胆地去做，就一定能成功的。
就像那句话说的，世上无难事，只怕有心人嘛！加油哦，朋友们！让我们一起在琼脂糖凝胶制备的道路上越走越远，为科学实验贡献我们的力量！。
实验二-琼脂糖凝胶电泳实验讲课教案
实验二-琼脂糖凝胶电泳实验实验二琼脂糖凝胶电泳实验【实验目的】（1）学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；（2）掌握使用水平式电泳仪的方法；（3）学习在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳的方法。
【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法。
核酸是两性电解质，其等电点为pH2-2.5，在常规的电泳缓冲液中（pH约8.5），核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。
核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时，具有电荷效应和分子筛效应，但主要为分子筛效应。
因此，核酸分子的迁移率由下列几种因素决定：（1）DNA的分子大小。
线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中移动，因而迁移得越慢。
（2）DNA分子的构象。
当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。
相同分子量的线状、开环和超螺旋质粒DNA在琼脂糖凝胶中移动的速度是不一样的，超螺旋DNA移动得最快，而开环状DNA移动最慢。
如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时，可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收，用同一种限制性内切酶分别水解，然后电泳，如在凝胶上出现相同的DNA图谱，则为同一种DNA。
（3）电源电压。
在低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。
但是随着电场强度的增加，不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，片段越大，因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大，因此电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。
要使大于2kb 的DNA 片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。
（4）离子强度影响。
电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。
在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶），电导率最小，DNA几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。
PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳讲义(工艺实验)
t-PA基因的PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳实验讲义一、实验目的1.掌握PCR反应的原理和方法；2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离和鉴定DNA的原理和方法。
二、实验原理PCR原理: 首先使双链DNA在反应液中热变性而分开成单链, 然后在低温下与两个引物进行退火。
使引物与单链DNA配对结合, 再在中温下利用TaqDNA聚合酶的聚合活性及热稳定性进行聚合反应。
每经过一次变性, 退火, 延伸三个步骤为一个循环, 通过三个不同温度的重复循环, 在经过约30次后, 所扩增的特定DNA序列的数量可增至10000000倍, 由于一轮扩增的产物又充当下一轮扩增的模板, 所以在这周而复始的过程中每完成一个循环, 就基本上使目的DNA物增加一倍。
变性（denaturation）: 双链DNA在92－96℃变性成单链DNA。
退火（annealing）: 引物在45-72℃与模板的互补区域相结合。
延伸（extension）: 在72℃条件下DNA聚合酶将dNTP连续加到引物的3’-OH端, DNA 链的延伸方向为5’-3’。
DNA琼脂糖凝胶电泳原理：DNA分子在碱性环境中带负电荷, 外加电场用下, 向正极泳动。
不同的DNA片段由于其由荷、分子量大小及构型的不同, 在电泳时的泳动速率就不同, 从而可以区分出不同的区带, 电泳后经溴乙锭（EB）染色；在波长254nm紫外光照射下, DNA呈现橙红色荧光。
琼脂糖凝胶电泳所需 DNA样品量仅为 0.5-0.1μg, 溴乙锭检测 DNA, 灵敏度很高, 10mg 或更少的DNA即可检出。
三、实验仪器超净工作台、回转式恒温调连摇瓶机、培养箱、冰箱、深冷冰箱（-70℃）、冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、紫外凝胶成像系统、紫外分光光度计、恒温水浴锅、移液器、微波炉。
四、实验药品蛋白陈、酵母粉、氯化钠、琼脂、氯仿、异戊醇、异丙醇、琼脂糖、饱和酚、氯化苄、CTAB.臭酚蓝、醋酸钠、DL2000Marker、TaqDNA聚合酶、Pfu酶、Dntp、Tris、HCl、Tris-HCl、葡萄糖、NaOH、乙醇、乙酸钾、冰乙酸、蔗糖、ddH2O、EB.EDTA.SDS、引物。
琼脂糖凝胶电泳西安医学院基础医学实验教学中心讲学课件
DNA
DNA Marker
DNA
溴化乙锭
染料：溴化乙啶（EB），它可嵌入堆积的碱基对之间，在紫外灯下 发荧光，检测DNA的下限可达1-10ng。注意：EB是强诱变剂！
DNA
四 实验步骤
1、稀释缓冲液的制备：用蒸馏水将5TBE缓冲液配制成0.5TBE稀释缓冲 液.
2、胶液的制备：称取0.4g琼脂糖，置于200ml 三角烧瓶中，进入50ml的 0.5TBE稀释缓冲液，放入微波炉或电炉加热至琼脂糖全部熔化，取 出 混 匀 。 在 冷 却 至 50~600C 的 琼 脂 糖 胶 液 中 加 入 EB 溶 液 至 终 浓 度 为 0.5g/ml, 混匀。小心地倒入电泳槽中至一定高度。待胶液完全凝固 后拔出梳子。然后向槽内加0.5TBE稀释缓冲液至液面刚好没过胶板 表面。
2.尽早查X线和CT 以明确骨折及类 型。
3.排尿、导尿病人自行排尿，尿液无 血，泌尿系损伤可能性不大。如尿血 可能泌尿系损伤，尿道口流血，表示 尿道损伤，若病人不能排尿，进行导 尿，导尿管顺利插入，尿道损伤可能 性不大。插入导尿管后如导出血尿提 示膀胱以上损伤，导不出尿时，行膀 胱注水试验，阳性意味着膀胱损伤。
琼脂糖凝胶电泳西安医学院基 础医学实验教学中心
DNA
一 实验目的
➢ 学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法 ➢ 鉴定质粒PUC19酶切结果 ➢ 检测PCR的结果
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
电泳缓冲液
DNA
凝胶上样缓冲液 （loading buffer）
在0.5X TBE 缓冲液中，溴酚兰相当于 300bpDNA, 二甲苯氰FF 相当于 4000bp DNA。
3.皮肤护理
Байду номын сангаас向患者讲解皮肤护理的重要性，防止 受压部位发生褥疮。应建立皮肤翻身 卡，每2h用50%红花酒精按摩皮肤受 压处及骨隆突处，或用棉球、气圈垫 骨隆突处。保持床单位的清洁平整、 无渣屑，大小便后要用温水擦洗。教 会患者及家属增强预防知识。
1%琼脂糖凝胶的配制
1%琼脂糖凝胶的配制
琼脂糖凝胶是一种由琼脂糖和其他添加剂组成的凝胶，常用于生物学实验中的凝胶电泳等分离技术。
1%琼脂糖凝胶是一种较为常见的浓度，其配制方法如下：
材料与仪器：
- 琼脂糖
- 缓冲液（如TAE或TBE缓冲液）
- 水
- 量筒
- 烧杯
- 搅拌棒
- 电泳槽
- 电泳电源
步骤：
1. 将所需琼脂糖称量并加入烧杯中。
按照1%的浓度，需加入1克琼脂糖。
2. 加入所需缓冲液并充分搅拌，在室温下静置15分钟左右，让琼脂糖充分溶解。
3. 将溶液加热至沸腾，持续搅拌，直至琼脂糖完全溶解。
4. 将溶液冷却至约50℃左右，再加入适量的水调节体积，使其达到所需体积。
一般来说，配制1%琼脂糖凝胶时，需要配制100毫升。
5. 充分搅拌使溶液均匀，然后倒入电泳槽中。
在溶液凝固前，用搅拌棒将表面的气泡排除。
6. 等待凝胶完全固化，即可进行凝胶电泳实验。
注意事项：
1. 在配制过程中，应注意卫生和安全。
避免口吐琼脂糖溶液，避免溶液溅入眼睛等敏感部位。
2. 在加热过程中，应注意溶液是否沸腾过于激烈，避免烫伤或将溶液溅出烧杯。
3. 在调节体积时，应注意准确测量加水量，避免导致浓度错误。
4. 在倒入电泳槽前，应确保凝胶槽干净，避免杂质或细菌污染。
总结：
1%琼脂糖凝胶是一种常见的实验用品，其配制方法简单易行。
在配制过程中，应注意卫生和安全，避免误操作导致事故。
配制完成后，应确保凝胶槽干净，避免影响实验结果。
琼脂糖凝胶的制备上课讲义
琼脂糖凝胶的制备琼脂糖凝胶的制备一、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80％）及琼脂胶（agaropectin）组成。
琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。
因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下。
1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。
2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大（约占98％~99％），近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。
3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。
4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。
制成干膜可长期保存。
目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。
将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，由于建立了超微量技术，0.1ug蛋白质就可检出。
琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。
由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。
二、DNA的琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。
1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系① DNA分子的大小在凝胶中，DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。
但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。
此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。
生物学实验 琼脂糖凝胶的制备
实验二琼脂糖凝胶的制备一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。
本实验学习DNA琼脂糖凝胶的制备方法二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA核酸分子是两性解离分子，pH3.5是碱基上的氨基解离，而三个磷酸基团中只有一个磷酸解离，所以分子带正电，在电场中向负极泳动；而pH8.0-8.3时，碱基几乎不解离，而磷酸基团解离，所以核酸分子带负电，在电场中向正极泳动。
不同的核酸分子的电荷密度大致相同，因此对泳动速度影响不大。
在中性或碱性时，单链DNA与等长的双链DNA的泳动率大致相同。
影响核酸分子泳动率的因素主要是：1、样品的物理性状即分子的大小、电荷数、颗粒形状和空间构型。
一般而言，电荷密度愈大，泳动率越大。
但是不同核酸分子的电荷密度大致相同，所以对泳动率的影响不明显。
对线形分子来说，分子量的常用对数与泳动率成反比，用此标准样品电泳并测定其泳动率，然后进行DNA 分子长度（bp）的负对数——泳动距离作标准曲线图，可以用于测定未知分子的长度大小。
DNA分子的空间构型对泳动率的影响很大，比如质粒分子，泳动率的大小顺序为：cDNA＞IDNA＞ocDNA 但是由于琼脂糖浓度、电场强度、离子强度和溴化乙锭等的影响，会出现相反的情况。
实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳课件
1
二 实验原理
DNA在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。 核酸为两性分子，在pH3.5时，整个分子带正电； pH8左右时，整个分子带负电。 在碱性环境下，核酸分子之糖-磷酸骨架中的磷酸基团是呈离子化状态的，把这些 核酸分子放置在电场当中，它们就会向正电极的方向迁移。由于糖-磷酸骨架在结构 上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的 速度向正电极方向迁移。在一定的电场强度下，DNA分子的这种迁移速度，亦即电 泳的迁移率，取决于核酸分子本身的大小和构型。DNA分子的迁移速度与相对分子 质量的对数值成反比关系，可以近似用于估算分子的大小。 可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA分子。共价闭环超螺旋DNA＞直 线DNA＞开环的双链环状DNA。
分离DNA片段的大小范围（bp） 50 000~1 000 20 000~1 000 6 000~300 1 000~100 500~25 50~1
4
琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为0.2~50kb之间
DNA分子的大小、琼脂糖凝胶的浓度、DNA的构象、所加电压、电场方向、嵌 入染料的存在、电泳缓冲液的组成。
Байду номын сангаас
点样—— 样品10μl，与4μl溴酚兰混匀
电泳—— 60v， 大约50-60min
观察和拍照——254nm紫外灯下观察
8
四 实验结果
4 泳道 maker 1 泳道 质粒DNA 2、3、5、6泳道 酶切产物
12 3 4 5 6
质粒
酶切 片段
五 注意事项
EB是一种诱变剂，操作时必须戴塑料或乳胶手套!!!
琼脂糖凝胶成胶的原理
琼脂糖凝胶成胶的原理琼脂糖凝胶是一种水溶性的多糖，由于其特殊的物理性质而被广泛应用于生物学实验和制药工业中。
琼脂糖凝胶的成胶原理与其分子结构有关，主要包括琼脂糖的高分子量、支链以及琼脂糖与水的相互作用等因素。
琼脂糖的高分子量是琼脂糖凝胶成胶的关键因素之一。
通常情况下，琼脂糖的分子量较高，其中每个分子链上含有大量的单糖单元。
这些单糖单元之间通过共价键或非共价键相连，形成了一个复杂的网络结构。
当琼脂糖溶解在水中时，分子链会不断地扩展和交叉，形成一个大的分子网络。
这个网络结构能够捕获水分子，并通过水分子间的氢键与之相连，从而形成胶体凝胶的结构。
此外，琼脂糖的支链也对成胶起到了重要的作用。
支链的引入可以增加凝胶的稳定性和强度。
琼脂糖凝胶通常是通过在琼脂糖分子上引入支链，来调节凝胶的特性。
支链的引入会增加琼脂糖分子的体积，使得分子间的相互作用增强，从而增加凝胶的坚固性。
除了分子结构，琼脂糖与水的相互作用也对凝胶的形成起到了重要的作用。
琼脂糖是一种亲水性高的多糖，在水中溶解时，会与水分子形成氢键和范德华力等多种相互作用。
这些相互作用能够使琼脂糖分子在水中形成稳定的结构，从而形成凝胶。
琼脂糖凝胶的形成过程可以分为两个阶段：溶胶到凝胶的过渡和持续的凝胶形成。
在溶胶到凝胶的过渡阶段，琼脂糖分子在水中随着温度的升高或浓度的增加，开始逐渐聚集形成小颗粒。
这些小颗粒通过相互作用逐渐增大并形成三维网络结构，形成了凝胶阶段。
这个过程可以通过琼脂糖溶液的流变学性质来观察到，当琼脂糖溶液的黏度发生明显变化时，可以说明凝胶的形成已经开始。
在持续的凝胶形成阶段，琼脂糖分子继续聚集和形成网络结构，凝胶的稳定性和强度逐渐增加。
这个过程主要由分子间的相互作用和水分子的参与来推动。
分子间的相互作用可以通过琼脂糖之间的共价键、氢键等相互作用来实现，而水分子则通过与琼脂糖形成氢键来参与凝胶的形成。
总之，琼脂糖凝胶成胶的原理主要包括琼脂糖分子的高分子量、支链以及琼脂糖与水的相互作用等因素。
琼脂糖凝胶的配制
琼脂糖凝胶的配制
琼脂糖游胶的配制是分子实验室比较基本的操作，因此上确地操作对整个实验来讲很有必要，大体流程如下:称量、熔胶、倒胶、拔梳。
1、称量我们通常所说的0.8%，1%的胶都是指的质量体积分数，即所称取的琼脂糖粉的质量克比所加的TBE缓冲液的体积毫升即胶
的浓度，缓冲液的体积根据胶板的大小而定，如小胶板0.8%的胶需要琼脂粉0.104克，TBE13毫升。
2、熔胶将所称量的琼脂粉与TBE在锥形瓶中混合，在微波炉内反复加热2到3次至琼脂粉溶解并无气泡。
3、倒胶干净的胶槽内摆好梳子，往胶内滴加1uL左右核酸染料，混匀，待冷却至不烫手，轻轻倒入胶板内。
4、拔梳待大约20分钟后，轻轻拨掉梳子若不好拔，可以滴加适量的TBE缓中液。
DNA琼脂糖凝胶电泳制备全过程图解ppt课件
铺胶
11
凝胶凝固后取出梳子
12
加缓冲液
13
准备样品
14
点样
15
电泳
16
注意观察溴酚蓝染液的迁移
17
紫外灯下观察电泳结果
18
照相
19
4
主要实验器材
电泳仪
缓冲液 琼脂糖
凝胶槽
梳子
电泳构
6
操作步骤
琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB 凝胶板的制备：加梳子，倒胶 样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝 加样：加样端为负极（黑） 电泳：5V/cm 观察：紫外灯下观察，照相
7
溶胶
8
准备胶槽
9
凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml
DNA琼脂糖凝胶电泳
1
实验原理
琼脂糖为链状多糖 →绳状琼脂糖束→大网孔型
凝胶 ——分离、鉴定、纯化DNA 影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构
象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成 缓冲液pH>DNA Pi，DNA带负电荷，迁移率与
分子量对数成反比 DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA>线
状DNA>开环DNA
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不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围
琼脂糖浓度（%） 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0
分离范围（kb） 5-60 1-20 0.8-10 0.5-7 0.4-6 0.2-4 0.1-3
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琼脂糖凝胶中DNA的观察
溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下 红色荧光
琼脂糖凝胶的配制和DNA回收教学文案
琼脂糖凝胶的配制和D N A回收配1%的琼脂糖凝胶称量琼脂糖0.3g，倒入锥形瓶中，再用量筒量取30ml TAE，混到一起，放入微波炉中煮沸两次，直到看不到颗粒为止（每次大约三分钟），取出后冷却至60℃左右后加入Gold view（万分之一），同时将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上，安好挡板，放好梳子。
吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘，任其凝固，在距离底板0.5～1.0mm 的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔，将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中，使胶液缓慢地展开，直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。
凝胶的厚度在3～5mm之间，检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡。
冷却好后拔梳子（30min左右），将板放入电泳槽里，倒入TAE溶液（1X），在冰箱中拿Loading buffer和两个maker（1kb和D100），将Loading buffer吸到PE手套上（吸取量随意用枪点一下即可）和样品混匀，向凝胶中加样，两侧的孔里加Maker，通电120V跑胶，红为正，黑为负（DNA带负电，所以往红色正极处跑），放到紫外盒上看结果，同时将亮带部分切下来放入1.5ml的已经称完重量的EP管中（若忘了称重量，按照0.9计算），再次称重计算胶的重量，接下来按照DNA回收试剂盒操作步骤回收DNA，测浓度。
普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 柱平衡步骤：向吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl平衡液BL，12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）2. 将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。
3. 向胶块中加入等倍体积溶液PN（如果凝胶重为0.1 g，其体积可视为100 μl，则加入100 μlPN溶液），50℃水浴放置，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
琼脂糖凝胶制胶板
琼脂糖凝胶制胶板胶板是一种在生物实验中常用的实验工具，用于检测和分离生物样品中的目标物质。
而琼脂糖凝胶板则是常用的胶板类型之一，其制备过程简单，使用方便，广泛应用于生物学、生化学以及分子生物学等领域。
琼脂糖凝胶板的制备过程如下：材料准备：准备好制备琼脂糖凝胶板所需的材料，包括琼脂糖、缓冲液、染料等。
制备胶液：将适量的琼脂糖加入到缓冲液中，加热搅拌溶解，直至完全溶解。
然后，加入染料，使得胶液呈现出所需的颜色。
制备胶板：将制备好的胶液倒入胶板模具中，待胶液凝固后，即可得到琼脂糖凝胶板。
根据需要，可以将胶板切割成不同尺寸的小块，便于具体实验操作。
琼脂糖凝胶板的应用主要包括以下几个方面：1. 蛋白质分离与鉴定：琼脂糖凝胶板可以用于蛋白质的分离与鉴定。
通过电泳将待分离的蛋白质样品施加电场作用，使得蛋白质在琼脂糖胶板中迁移，根据迁移距离和颜色变化等特征，可以对蛋白质进行分离和鉴定。
2. DNA片段分离与检测：琼脂糖凝胶板也可以用于DNA片段的分离与检测。
通过电泳将待分离的DNA样品施加电场作用，使得DNA片段在琼脂糖胶板中迁移，根据迁移距离和颜色变化等特征，可以对DNA片段进行分离和检测。
3. 基因突变检测：琼脂糖凝胶板还可以用于基因突变的检测。
通过将待检测的DNA样品与特定的引物进行PCR扩增，然后将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，可以观察到突变样品与野生型样品在琼脂糖凝胶板上的迁移差异，从而判断是否存在基因突变。
4. 蛋白质-核酸相互作用研究：琼脂糖凝胶板还可以用于研究蛋白质与核酸之间的相互作用。
通过将待研究的蛋白质样品与核酸样品共同加入琼脂糖凝胶板孔中，然后进行电泳分析，可以观察到蛋白质与核酸的结合情况，从而研究其相互作用机制。
总结起来，琼脂糖凝胶板作为一种常用的实验工具，具有制备简便、使用方便等特点，并且在生物学、生化学、分子生物学等领域有着广泛的应用。
通过琼脂糖凝胶板，我们可以进行蛋白质分离与鉴定、DNA片段分离与检测、基因突变检测以及蛋白质-核酸相互作用研究等实验操作，为科学研究和生物技术应用提供了重要的实验基础。
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琼脂糖凝胶的制备
琼脂糖凝胶的制备
一、琼脂糖凝胶的特点
天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80％）及琼脂胶（agaropectin）组成。
琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。
因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下。
1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。
2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大（约占98％~99％），近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。
3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。
4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。
制成干膜可长期保存。
目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。
将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，由于建立了超微量技术，0.1ug蛋白质就可检出。
琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。
由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。
二、DNA的琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。
1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系
① DNA分子的大小在凝胶中，DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。
但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。
此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。
②琼脂脂糖的浓度如下表所示，不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
表琼脂糖浓度与DNA分离范围
⑤电泳
琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表明，在低浓度、低电压下，分离效果较好。
在低电压条件下，线性DNA分子的电泳迁移率与所用的电压呈正比。
但是，在电场强度增加时，较大的DNA片段迁移率的增加相对较小。
因此随着电压的增高，电泳分辨率反而下降，为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不宜高于5V/cm。
电泳系统的温度对于DNA在琼脂糖凝胶中的电泳行为没有显著的影响。
通常在室温下进行电泳，只有当凝胶浓度低于0.5％时，为增加凝胶硬度，可在4℃进行电泳。
⑥染色和拍照
常用荧光染料溴乙锭（EB）染色，在紫外光下观察DNA条带，用紫外分析仪拍照，或用凝胶成像系统输出照片，并进行有关的数据分析。