对人体内超氧离子的除去方法的探究
对人体内超氧离子的除去方法的探究
超氧离子普遍存在于生物体内，氧化性强，具有一定的细胞毒性。根据研究，随着年龄增长，人体自身去除超氧离子的能力逐渐下降，因而造成人体的衰老。我对抑制人体衰老的方法产生了兴趣，因此选择了此题。本文将主要讨论人体内超氧离子的一些相关背景以及其去除的方法。
一、超氧离子在人体内的作用机理
自1900年，摩西?冈伯格在密歇根大学发现了历史上第一个被发现和证实的自由基——三苯甲基自由基以来，人类对自由基的理解与研究在一天天地发展着。接下来就浅谈一下超氧离子在人体内的作用机理及其危害。
需氧生物细胞中含有特异清除超氧阴离子自由基的酶——SOD。1968年，Mc Cord 和Fridovich发现SOD，在研究它的生物学作用的过程中，发现其对超氧阴离子自由基的清除作用，并由此提出了氧毒性的超氧化物自由基学说，一石激起千层浪。可以说，是SOD 的发现直接导致超氧阴离子自由基氧毒性理论的提出。根据此理论，超氧阴离子自由基本身、超氧阴离子自由基的衍生物等都具有细胞毒性。
就目前看来，超氧阴离子自由基能引起的疾病有：肺气肿、肺型氧中毒、自身免疫性疾病、老年白内障、辐射病等等。
二、去除人体内超氧离子的方法
通过对众多文献的查找，我找到了许多有去除超氧离子的作用的物质，它们大多是通过研究植物体和生物体去除超氧离子机理而发现和提取的，我将这些物质整理如下：（1）超氧化物歧化酶（SOD）去除超氧离子
诞生于1990年的明星产品大宝SOD蜜护肤品正是运用的这一原理，其广告语所称“经常使用大宝SOD蜜，能延缓皮肤衰老”，在理论上，也并不无道理。但是，SOD成分是否真的能被肌肤良好吸收，进而起到延缓衰老的作用，还需进一步的研究。
（2）黄酮类化合物去除超氧离子
人们观察到中草药的抗氧化作用，近年来相关研究逐渐引起重视。天然中草药中有效成分黄酮类化合物有芦丁、槲皮素、柚皮苷、桑色素、粗毛豚草素、橙皮苷等等，对它们清除O2-的研究相对较多，其中前三种清除O2-的能力较强。
（3）稀土元素去除超氧离子
随着稀土这一微量元素肥料在农业生产中的广泛应用，人们对稀土离子抑制超氧阴离子自由基的作用逐渐关注起来。研究发现稀土硝酸盐与超氧化物歧化酶（SOD）具有相似的性质，对肾上腺素自氧化生成的O2-有明显的抑制作用，其中体系中稀土硝酸盐的浓度与其对O2-的抑制率之间有明显的剂量效应关系。
据了解，目前市面上已经出现了以稀土元素为主要成分的面膜，但还未得到广泛的普及。
（4）人参皂苷去除超氧离子
近年来国内外学者纷纷对人参进行一系列研究。其中一项为人参皂苷，实验表明，人参皂苷确实在一定程度上起到清除自由基的作用；另外人参水提液也引起学者们的兴趣。
许多爱美人士都会经常性食用人参相关的产品，来延缓衰老，保持青春，市面上也出现
了许多含人参成分的美容护肤产品，均受到追捧。
（5）余甘果粗提液去除超氧离子
余甘果具有保健作用和药用价值，为进一步开发和充分利用余甘果的价值，科学家们进一步研究余甘果是否含有清除O2-的酶类物质。通过临床研究表明，余甘果粗提液能抑制肾上腺素自氧化，且含有能清除O2-物质的活性。
（6）菜籽多酚与Vc去除超氧离子
自2002年以来，对菜籽多酚抗氧化能力的相关研究表明菜籽多酚在体内外清除自由基的能力。研究表明，在化学模拟体系中，菜籽多酚与维生素C均能起到清除自由基的能力，且菜籽多酚、Vc及菜籽多酚与Vc的混合物清除O2-都不呈剂量—效应关系。
经过对市场上商品的研究，我发现，实际上，这些对去除超氧离子的方法的研究大都已经有了广泛的实际应用。但如上所列举的最后两种尚未有成型的产品，可见，科学研究成果与应用成果之间还是存在着很大障碍的，期望科研成就能最终真正地造福人类。
三、总结与展望
超氧离子虽然是生物体内最重要的活性氧，但是超过正常的浓度范围是，它的强氧化性对人体具有较强的毒害作用，它是人类衰老的主要原因。虽然现在的实验研究已经比较成熟，相应的产品也已经得到广发的应用，但目前的去除方法都是集中在如何对抗它的强氧化性，有没有可能从另外的角度去解决这一问题？保留它的氧化性而避免它对细胞膜，对DNA的伤害，让我们能利用它的氧化性。也许关于超氧离子的更多奥秘，还有待我们去发现。
参考文献：
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超氧自由基清除能力测定法-操作图解
超氧自由基（·O2-）的清除能力测定法（连苯三酚自氧 化法） （适用于：SOD及各种抗氧化剂） 操作图解 具体方法 1 溶液配制 1.1 Tris溶液（0.1mol/L）：1.21 gTris（三羟甲基氨基甲烷，M.W. 121.1）+100 mL蒸馏水。 1.2 HCl溶液（0.1mol/L）：取0.1 mL浓盐酸，加蒸馏水稀释到6 mL。 1.3 Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，pH7.4，含1mmol/L Na2EDTA） 40 mL0.1 mol/L Tris溶液+ x mL0.1 mol/L HCl溶液+15.2 mg Na2EDTA，混合，稀释到80 mL。用pH 计测量，pH应为7.4。用棕色瓶保存在冰箱内(最多保存三天) 。（以上为一个样品的用量）用前稍热至室温，再测pH值，符合要求即可。 1.4 60 mmol/L连苯三酚溶液（溶于1 mmol/L盐酸中） 取0.1mol/L HCl溶液（见1.2项）20μL，用蒸馏水稀释到2 mL，得1 mmol/L盐酸溶液（用pH计测量，pH＝2.5-3.0）。再往里加连苯三酚14.6 mg (M。W.126.1 )，即得。（当天有效,以上为1个样品的用量）。 2 测试液 2.1连苯三酚溶液：取2950μL Tris-HCl缓冲液加入到石英比色皿中，再加约50μL连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次A值（325nm），至300秒（5min）时为止。（空白参比：Tris-HCl 缓冲液） ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。由于ΔA值反映了生成·O2的初始浓度，所以，对于同一批实验而言，此时的ΔA值必须相等。此时的ΔA为ΔA0。 3.2 样品溶液：取xμL样品溶液加入到大石英比色皿中，再加（2950-x）μL Tris-HCl缓冲液，再加50μL 连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次（A值，325nm），至300秒时为止。（空白参比：Tris-HCl缓冲液） ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。此时的ΔA为ΔA样。 3 计算公式
人体排毒方法
人体排毒方法 排毒是一种健康的生活方式。体内的毒素越少，人就越健康、越长寿、越不容易有癌症的发生，也越不容易老化。 所有人体不需要的、过剩的、对人体有伤害的、不能顺畅排出体外的东西都统称为毒素。如自由基、宿便、胆固醇、脂肪、尿酸、乳酸、水毒和淤血等内在毒素，阳光、空气、水、饮食、生活环境污染所带来的毒素等外源性毒素。 若胆固醇过高，没有及时排出体外，容易沉积在血管壁上，使血管变窄，导致高血压和动脉硬化等疾病。自由基是人体分布最广泛、最细微的毒素，几乎无处不在。我们在呼吸过程中，98%的氧被消耗，但有2%的氧却转化为氧自由基。现代抗衰老研究表明：自由基是导致人类衰老的罪魁祸首！宿便是人体肠道内一切毒素之源。成年人体内平均有6.5公斤的大便，其中约有2公斤宿便，如果两天以上不大便，将在体内产生36种毒素，成为179种疾病的诱因。宿便是人体肠道毒素根源，被重吸收的毒素会重新侵入身体，降低人体免疫力，甚至长期便秘长痘痘。 影响人体解毒、排毒器官功能的几大因素：宿便、饮食组合不均衡、肥胖、不正确减肥、吸烟、酗酒、服用药物、熬夜。 人体排毒时间表 “我们的身体很神奇，有自己的排毒功能”，早睡觉可以美容就是这个道理。常常晚上很晚才睡觉，疏忽了排毒的时间，影响身体健康。 每天晚上9:00-11:00的时候，是人体淋巴的排毒过程，免疫系统活跃起来，你应该静下心来，听听音乐，使自己尽量的保持安静。这样免疫系统就会很顺利地完成排毒工作，让你的免疫力增加。 晚上11:00-1:00，肝脏开始排毒。你就应该熟睡了，不要熬夜，此时你不睡觉的话，你的肝脏就会因此很累，肯定要受损的，你一定要注意啊。 夜里1:00-3:00，是胆排毒的时间。此时亦应继续熟睡，以便有利于肝胆的排毒。 半夜到凌晨4:00，正是人的脊椎造血时段，必须要熟睡，千万不要熬夜啊！凌晨3:00-5:00，人的肺开始排毒了，平时咳嗽的人，此时就会加重咳嗽。但是，却不应该立即服用止咳药。以免抑制肺部废积物的迅速排出。 到了早晨5:00-7:00，就是人的大肠在排毒的时间了，此时就是你上厕所的最佳时机。假如你没有大便，就说明了你有不正常的地方了，很需要去医院看看了。检查一下究竟是哪里出了毛病。 早晨7:00-9:00，到了人的小肠开始大量吸收营养素的时间了。在这之前，你理应吃早餐。不然，你一天的营养就会匮乏。治疗疾病的人最好6:30之前吃；养生的人可以在7:30前吃。奉劝那些不习惯吃早餐的朋友，务必养成每天吃早餐的好习惯，即便是拖到了9:00以后也要吃的。 看了这个人体功能表，要合理的安排自己的作息时间，保证足够的睡眠，第二天才有充足的精气神去干自己喜欢干的事，才有健康的身体，才会开心快乐！愿大家都有健康的好身体！ 排毒方法 排毒一直被认为是养颜美容、健体强身的有效方法。中医排毒有八种自然的
超氧阴离子清除实验
·O2ˉ自由基清除实验 (1) 实验原理 黄嘌呤氧化酶 黄嘌呤＋H2O+O2尿酸＋H2O2+·O2ˉ 即黄嘌呤氧化酶在有氧条件下催化黄嘌呤转化为尿酸，同时产生超氧阴离子自由基(·O2ˉ)。·O2ˉ与NBT结合后呈蓝色，样品清除能力越大，与NBT结合的·O2ˉ越少，溶液的颜色越浅。 (2)试剂 Xanthine(黄嘌呤): (C5H4N4O2 ), MW=152.1, 6.084mg/100mL(0.4mmol/l) 实际配制：1.216mg/10mL，与NBT等体积混合使用 Xanthine oxidase(黄嘌呤氧化酶)贮液: 1 unit/mL , (溶解酶的溶液要高压灭菌！防止蛋白酶对酶的降解！) 0.05 unit/mL，每次取200uL稀释到4mL(PBS溶解) NBT: (Nitro blue tetrazolium chloride氯化硝基四氮唑蓝), MW=817.65, 黄色19.6236mg/100mL(0.24mmol/l) 实际配制3.925mg/10mL，与Xanthine等体积混合使用 PBS(0.01mol/L,pH=8.0): NaCl 8g, KCl 0.2g, Na2HPO4(无水) 1.44g, KH2PO4 0.24g, 800mL水，用NaOH(1M)调pH到8.0，定容到1000mL。 实际配制500mL。高压灭菌，室温保存。 PBS(0.01mol/L,pH=7.4): 配制同上 Ascorbic acid: MW=176.12 母液为1mg/mL 先两倍逐级稀释5个浓度 实际配制见记录本！ HCl(1M): MW=36.5 310ul/10ml.(36% HCl密度1.18g/ml) 实际配制：800uL浓盐酸+9mL水，于塑料管中4℃保存。 NaOH(1M): MW=40 0.4g/10mL, 存于冰箱 (3) 测定方法 超氧阴离子自由基清除能力的测定参照Bae等人的方法略加改进。样品溶液1-5mg/ml 起始浓度，用于水或50%乙醇溶液。 Bae, S.W., Suh, H.J., 2007. Antioxidant activities of ve different mulberry cultivars in Korea.
祛除体内湿气的一个小方法
1、判断体内有【湿气】的几个表象 1.头发爱出油 2.面部油亮 3.睡觉留口水（湿气饱和自行流出） 4.排便粘稠（不易冲掉）且多便 5.小肚子大 6.耳内湿（耳禅湿） 7.阴部潮湿。 2、【湿】是如何形成的？ 湿气重有内湿和外湿之分。自然界的六气太过时不适合人体正常的适应即为六邪。内湿是体内湿气多因喜食冷饮，贪吃生冷瓜果等寒凉之物，损伤人体阳气所致。在正常情况下，人体对于外界温度、湿度变化有自然调节能力，但有些人因体质、疾病或生活习惯不良，造成体内水分调控系统失衡，水分排不出去，因此影响健康。而外湿即为自然界湿气太胜侵袭人体，由于湿为阴邪易袭阳位其性重浊所以感受湿邪时会有头痛如裹困重等感觉。又因其重浊粘腻往往伴有肢体困重麻木的感觉。另外脾喜燥恶湿，易被湿邪所困出现脾虚生内湿的症状，肌肉酸痛倦怠乏力,纳呆食少，便溏完谷不化口中粘腻等。观其舌苔厚腻，察其脉象濡临床间夹其他征象都表现出湿气重的症状体征。 3、如何在生活中避免湿气 1、房间内的湿气如果很重，建议多保持空气流通，让空气带走湿气。地板湿了，立即拖干，免得湿气滞留。如果外界湿气也很重，可以打开风扇、空调，借助这些电器保持空气的对流。 2、避开生冷：中医认为生冷食物、冰品或凉性蔬果，会让肠胃消化吸收功能停滞，不易无限量食用。如生菜沙拉、西瓜、大白菜、苦瓜等，最好在烹调时加入葱、姜，降低蔬菜寒凉性质。 3、少食甜腻食物：在湿气如此重的环境中别吃伤脾胃的食物。比如，凉拌食品，冷饮。喜欢吃甜食的人也得禁禁口，因为“甜腻化湿”。 4、酒助湿邪，酒精少碰为好。
5、在外洗头时，千万不要用了洗发精后湿头发按摩，这样会使湿气进入头皮（要吹干头发后再按摩）。 6、洗完澡（头）后要充分擦干身体水分； 7、尽量不要住地下室（潮气重），热天也不要直接睡地板。空气中水分会下降且地板重，容易入侵体内造成四肢酸痛。最好睡在与地板有一定距离的床上。 8、潮湿下雨天减少外出。还要避免淋雨和涉水，别让水分湿气包裹你的身体（淋雨后要及时换上干衣服）。 9、不要穿潮湿未干的衣服、盖潮湿的被子，也即被子（垫絮）要经常晒。 10、喝用蛇浸泡的酒（市场有卖） 11、.用艾草：药店有卖的，点燃后在关元穴烤即可 12、.少盐，帮助肾排水 13、适当午睡 14、戒烟戒酒 15、早上吃上三片姜 16、多吃含有燕麦、琼脂、低聚木糖的营养品。 17、饮食清淡适量 肠胃系统攸关营养及水分代谢，最好的方式就是适量、均衡饮食。酒、牛奶、肥甘厚味等油腻食物不易消化，容易造成肠胃闷胀、发炎。甜食油炸品会让身体产生过氧化物，加重发炎反应。中医认为生冷食物、冰品或凉性蔬果，会让肠胃消化吸收功能停滞，不易无限量食用。如生菜沙拉、西瓜、大白菜、苦瓜等，最好在烹调时加入葱、姜，降低蔬菜寒凉性质。 8、避环境的湿 日常生活最好减少暴露在潮湿环境中。尤其对湿气敏感的人，更应留心下列事项：不要直接睡地板。空气中水分会下降且地板湿气重，容易入侵体内造成四肢酸痛。最好睡在与地板有一定距离的床上。潮湿下雨天减少外出。不要穿潮湿未干的衣服，水分摄取要适量 4、如何祛除体内的湿气 1食疗方法
对照穴位图 彻底化解体内毒素
对照穴位图彻底化解体内毒素 彻底扫除“毒素”带来的负面影响 寒冷的冬天正是人体各方面机能开始减弱的时候，要彻底扫除“毒素”带来的负面影响，不妨从简单的穴位按摩开始! 1、合谷穴 体内毒素的沉积，会造成正常生理机能被扰乱，影响新陈代谢的运作。经常按压合谷穴，能够使大肠经脉处组织和器官的疾患减轻或消除，实现排出体内堆积毒素的目的。最重要的是，按压合谷穴简单快捷，不管是在开会还是在坐车都能随时随地给自己来个健康穴疗! 具体位置：位于手背拇指和食指张成45度角时，骨头延长线交点的位置。按压方法：指压时朝小指方向用力，用双手拇指交替按压两手的穴位20次。
2、曲池穴 曲池穴与人体的新陈代谢有密切关联，因为人体日常排泄体内废物都是借助肠道器官，所以经常按压曲池穴，可以帮你在日常繁重的工作闲暇排毒减压。 具体位置：位于手肘内侧弯曲的位置，将手肘内弯时用拇指按压此处凹陷处，能感觉到微微的疼痛。 按压方法：用拇指略微用力按压，以略感疼痛为基准，按住5 秒后松开，双手交替互按3-5分钟。 3、天枢穴 身体正常的循环机能有所改变，“毒素”便会沉积在体内，导致宿便堆积甚至便秘。天枢穴与胃肠道联系紧密，对调节肠腑有明显的双向性疗效，既能止泻，又能通便，长期保养按摩此穴能够确保肠道健康，清
除肠道内常年累积的宿便，让“毒素沉积”造成的面色黯沉、顽固色斑全部say byebye ! 具体位置：脐中旁开2寸。 按摩方法：睡前用双手食指指端同时回环揉动天枢穴50 ～100次，逆时针和顺时针方向各重复一次。 按压方法：两脚分开站立，与肩同宽，以食指、中指的指腹按压天枢穴，在刺激穴位的同时，向前挺出腹部并缓慢吸气，然后上身缓慢向前倾呼气，反复做5次。两腿并拢坐于椅上，按压天枢穴，左腿尽量向上抬，然后收回，换右腿上抬、收回为1次。反复做5次。 治疗腹泻
对人体内超氧离子的除去方法的探究
对人体内超氧离子的除去方法的探究 超氧离子普遍存在于生物体内，氧化性强，具有一定的细胞毒性。根据研究，随着年龄增长，人体自身去除超氧离子的能力逐渐下降，因而造成人体的衰老。我对抑制人体衰老的方法产生了兴趣，因此选择了此题。本文将主要讨论人体内超氧离子的一些相关背景以及其去除的方法。 一、超氧离子在人体内的作用机理 自1900年，摩西?冈伯格在密歇根大学发现了历史上第一个被发现和证实的自由基——三苯甲基自由基以来，人类对自由基的理解与研究在一天天地发展着。接下来就浅谈一下超氧离子在人体内的作用机理及其危害。 需氧生物细胞中含有特异清除超氧阴离子自由基的酶——SOD。1968年，Mc Cord 和Fridovich发现SOD，在研究它的生物学作用的过程中，发现其对超氧阴离子自由基的清除作用，并由此提出了氧毒性的超氧化物自由基学说，一石激起千层浪。可以说，是SOD 的发现直接导致超氧阴离子自由基氧毒性理论的提出。根据此理论，超氧阴离子自由基本身、超氧阴离子自由基的衍生物等都具有细胞毒性。 就目前看来，超氧阴离子自由基能引起的疾病有：肺气肿、肺型氧中毒、自身免疫性疾病、老年白内障、辐射病等等。 二、去除人体内超氧离子的方法 通过对众多文献的查找，我找到了许多有去除超氧离子的作用的物质，它们大多是通过研究植物体和生物体去除超氧离子机理而发现和提取的，我将这些物质整理如下：（1）超氧化物歧化酶（SOD）去除超氧离子 诞生于1990年的明星产品大宝SOD蜜护肤品正是运用的这一原理，其广告语所称“经常使用大宝SOD蜜，能延缓皮肤衰老”，在理论上，也并不无道理。但是，SOD成分是否真的能被肌肤良好吸收，进而起到延缓衰老的作用，还需进一步的研究。 （2）黄酮类化合物去除超氧离子 人们观察到中草药的抗氧化作用，近年来相关研究逐渐引起重视。天然中草药中有效成分黄酮类化合物有芦丁、槲皮素、柚皮苷、桑色素、粗毛豚草素、橙皮苷等等，对它们清除O2-的研究相对较多，其中前三种清除O2-的能力较强。 （3）稀土元素去除超氧离子 随着稀土这一微量元素肥料在农业生产中的广泛应用，人们对稀土离子抑制超氧阴离子自由基的作用逐渐关注起来。研究发现稀土硝酸盐与超氧化物歧化酶（SOD）具有相似的性质，对肾上腺素自氧化生成的O2-有明显的抑制作用，其中体系中稀土硝酸盐的浓度与其对O2-的抑制率之间有明显的剂量效应关系。 据了解，目前市面上已经出现了以稀土元素为主要成分的面膜，但还未得到广泛的普及。 （4）人参皂苷去除超氧离子 近年来国内外学者纷纷对人参进行一系列研究。其中一项为人参皂苷，实验表明，人参皂苷确实在一定程度上起到清除自由基的作用；另外人参水提液也引起学者们的兴趣。 许多爱美人士都会经常性食用人参相关的产品，来延缓衰老，保持青春，市面上也出现
抗氧化实验方法
1还原力的测定 样品2ml加到2ml 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.6）和2ml 1%的铁氰化钾溶液的混合液中。混合物在50℃保温20min，然后在反应混合物中加入2ml 10%的TCA，混合后以3000rpm 离心10min，取上清液2ml与2ml蒸馏水以及0.4ml 0.1%氯化铁在反应试管中反应，10min 后测定其在700nm处的吸光值。吸光值越大表明还原力越强。 注意：建议蛋白浓度以5mg/ml左右变化，例如2.5，5之类变化。但具体情况应根据吸光值大小而定。 0.2mol/L pH6.6的磷酸盐缓冲液的配制见附表。 铁氰化钾溶液应盛装在棕色瓶中。 比色皿的用法：可见光(>400nm)用玻璃比色皿（即没有标字母或者标G的比色皿），紫外光时（<400nm）用石英比色皿（即标Q字比色皿）。 2 DPPH自由基清除活性的测定 将1.5ml样品液添加到1.5ml含0.1 mmol/L DPPH的95％乙醇中，混合，振荡，在 室温下放置30min，然后在波长517nm处检测（Ai）。清除率计算公式为： 空白为1.5 ml 95%的乙醇加入1.5 ml蒸馏水调零。 式中：Ac——对照为1.5 ml DPPH溶液加上1.5 ml蒸馏水在517nm处的吸光值；Aj——1.5ml样品液加上1.5 ml 95%的乙醇在517nm处的吸光值； Ai——1.5ml样品液加上1.5 ml DPPH溶液在517nm处的吸光值； 注意：建议酶解液蛋白浓度以2mg/ml 左右变化，如0.5,1,2,2.5之类变化，但是具体情况应视清除率而定，最终结果应有清除率大于50%和小于50%的情况。 DPPH样品有毒，需戴口罩和手套进行操作。而且DPPH试剂很昂贵，用时注意节约。0.1m mol/L DPPH 乙醇溶液的配制：准确称取0.00395gDPPH，用95%的乙醇溶液溶解并定容到100ml。 3 在卵黄磷脂体系中抗氧化能力的测定 以卵黄脂蛋白为底物的LPO模型反应体系包括:体积比为1:25稀释的卵黄悬液(卵黄用等体积的pH7.45，0.lmol/LPBS配成，使用前磁力搅拌10min)0.2 mL、一定浓度的样品溶液0.lmL、25m moll/LFeSO4溶液0.2mL，用PBS缓冲液补足至2.0mL。对照管除不加样液外其他试剂同前。将上述2种试管同时置37℃恒温水浴锅中保温培养1h。取出后，加入20%TCA0.5mL，静置10 min后，与对照管于3500r/min离心10min，取2.0mL上清液，分别加入质量分数为0.8%硫代巴比妥酸(TBA)溶液1.0mL，加塞于100℃水浴15min，取出冷却。空白管以2.0mLPBS溶液代替，在532nm下测定吸光度，样品对卵黄脂蛋白LPO的抑制率表示为: SA(%)=(Ac一AS)/A C×100 式中:Ac一不加样品的吸光度 As一加入样品的吸光度 注意：卵黄溶液不用时应放置冰箱保存。 酶解液蛋白浓度以5mg/ml左右调整，但具体应视清除率大小而定，对酶解液蛋白浓度
体内湿气重怎样祛除
体内湿气重怎样祛除 如何判断自己身体是否有湿？ 1.头发爱出油 2.面部油亮 3.睡觉留口水（湿气饱和自行流出） 4.排便粘稠（不易冲掉）且多便。 5.小肚子大 6.耳内湿（耳禅湿） 7.阴部潮湿。 湿是如何形成的？ 例如:早晨洗头未干出行，晚上洗头未干睡觉，刮痧拔罐后8小时内洗澡以及习惯性运动后大汗淋漓未消汗后沐浴的以及在浴池内刮痧拔罐的等等。 湿：
有句古话叫：“千寒易除，一湿难去。湿性黏浊，如油入面。”湿与寒在一起叫寒湿，与热在一起叫湿热，与风在一起叫风湿，与暑在一起就是暑湿。湿邪不去，吃再多的补品、药品都如同隔靴搔痒，隔山打牛。生活中很多人患上了脂肪肝、哮喘、高血压、心脑血管等疾病，甚至恶性肿瘤，其实这些病都跟湿邪、痰湿有关。 1800多年前，东汉伟大的医学家张仲景在他的著作《伤寒论》中说：“身大热，反欲得衣者，寒在骨髓。”就是说发烧的人虽然体温很高，身上反而感觉寒冷想多穿衣服，表明体内寒气很重，寒邪都到骨髓了。此时再用抗生素等寒凉药物输液消炎退烧，会把外在的一些寒湿之气直接带进体内。（我们不都是这样做的吗？） 张仲景是《伤寒论》的作者，在他那个时代人们忍饥受冻，疾病以寒邪为主，用热药就可以直接对治。如今随着生活
环境的改变，单纯的伤寒已经很少见了，反而是外寒跟内热交织在一起，形成了湿邪。真正的寒症并不多见，主要是以湿邪为主。湿为阴邪，遏伤阳气，阻碍气机。换句话说，阳虚的时代是湿邪在作祟。 有一个奇怪的现象，就是现在冬天很少见到真正着凉感冒的病人，夏天反而比比皆是。 现代人是生活在一个冬有暖气夏有空调的环境中，对四季的感觉越来越不分明。夏天该出汗的时候因为用空调导致汗液挥发不出来淤积体内；冬天烧暖气，穿件单衣还冒汗，阳气外越，藏不住精气。（冬不藏精，春必病温）人体在这种环境的状态下最容易生病，皮肤开合的功能下降，抵御病邪的能力越来越差了，极容易导致体内湿邪堆积，造成阳气虚衰。湿邪对人体的伤害，比寒邪还要大。-
体内毒素多怎么排毒
体内毒素多怎么排毒 体内毒素过多的症状 1、口臭、口气不清新;呼吸有异味;放屁气味较臭;打嗝、胀气、腹部胀痛、便秘等。这表示肠道已堆积了太多的废物和毒素。 2、常有疲劳感，腰酸背痛，精力不足。容易患感冒或体温过高，爱出汗，手脚潮湿。这时候人体的垃圾和毒素已经堆积过多，对于人体的各个器官和系统都造成了负担，所以人很容易感到疲劳，免疫力也会降低。 3、尿频、尿液颜色浅、尿少、尿刺痛、四肢肿胀。这说明肾脏的功能受到了毒素的影响。 4、入睡困难、多梦、烦躁、头脑昏沉、记忆力下降及易怒、情绪波动大等。这是毒素攻击神经系统的表现。 5、皮肤长色斑、粗糙干燥或油腻、易过敏、起红疹和小疙瘩等。这是毒素对皮肤系统攻击的反应。 6、肥胖。脂肪的堆积是形成肥胖的原因，而毒素过多造成排泄功能受到影响也是导致肥胖的原因之一。 体内毒素多的排毒方法 1、敲打胆经排毒 胆经在下肢的巡行路线是沿股、下肢外侧中线下行至小趾、次趾之间，主要是环跳、风市、中渎、膝阳关四个穴位。按摩敲打胆经，可以舒经通络、活血排毒，血液循环快了，身体就会有
足够的能量来排毒。但需要注意的是，肝胆是表里脏腑，晚上11点后敲胆经容易造成肝脏上火现象。 2、推挤下腹排毒 睡觉之前用双手握拳，从胸正中央往肚脐眼下方顺着推挤，并注意力度适中，推上10到20次，可以有效减少腹部和下半身的脂肪，因为推腹的时候，可以把新鲜气血带到腹部和下半身，有效排除囤积的毒素，帮助经络恢复通畅，起到养生减肥的作用。 3、按摩淋巴排毒 淋巴循环欠佳会影响身体的排毒机能，容易导致毒素积聚体内与水肿问题。淋巴主要集中在股沟和脖子上，睡前用一定的力度按摩淋巴3-5分钟，可以引导身体排出多余毒素和水分，不仅美容养颜，而且还可以加速分解脂肪。 4、泡澡按摩排毒 泡澡的时候可以将存积在皮下组织中的酸性废物冲洗掉，将滞留在体内的二氧化碳和有害物质代谢出来，从而使肌肤变得健康有弹性，洗澡之前用丝瓜络对肌肤进行按摩，能加速血液循环和淋巴液畅通，使体内的毒素迅速被冲洗出去，泡澡的时候在洗澡水中加入浴盐或是迷迭香，茶树或是柠檬精油，会起到很明显的排毒效果。 5、睡前泡泡脚排毒 脚是离心脏最远的位置，对血液回流影响很大，睡觉之前用热水泡泡脚，既有助于消除疲劳，改善睡眠质量，还有助于改善局部血液循环，预防手脚冰凉现象，促进代谢，促使体内毒素顺利排出，起到养生减肥的作用。
自由基清除剂
第五章自由基清除剂 本章要点 1.自由基理论的产生机理及来源 2.自由基对机体活动的影响 3.自由基清除剂的基本概念 随着生命科学的飞速发展，英国人Harman于1956年提出了自由基学说。该学说认为，自由基攻击生命大分子造成组织细胞损伤，是引起机体衰老的根本原因，也是诱发肿瘤等恶性疾病的重要起因，其中的观点被越来越多的实验所证明。 自由基（Free radical）是人体生命活动中各种生化反应的中间代谢产物，具有高度的化学活性，是机体有效的防御系统，若不能维持一定水平则会影响机体的生命活动。但自由基产生过多而不能及时地清除，它就会攻击机体内的生命大分子物质及各种细胞器，造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体的衰老进程并诱发各种疾病。 近年来，国内外对自由基及自由基清除剂的研究十分活跃，在各类食品科学、生命科学及医学书籍上都有许多关于自由基及其清除剂的研究报道，自由基清除剂作为功能性食品的重要原料成分之一，通过人们日常消费的食品来调节人体内自由基的平衡，已受到食品营养学家的广泛重视。 第一节自由基理论 一、自由基的产生机理及来源 自由基又叫游离基，它是由单质或化合物的均裂（Homdytic Fission）而产生的带有未成对电子的原子或基团。它的单电子有强烈的配对倾向，倾向于以各种方式与其他原子基团结合，形成更稳定的结构，因而自由基非常活泼，成为许多反应的活性中间体。 人体内的自由基分为氧自由基和非氧自由基。氧自由基占主导地位，大约占自由基总量的95%。氧自由基包括超氧阴离子（O2－·）、过氧化氢分子（H2O2）、羟自由基（OH·）、氢过氧基（HO2－·）、烷过氧基（ROO·）、烷氧基（RO·）、氮氧自由基（NO·）、过氧亚硝酸盐（ONOO－）、氢过氧化物（ROOH）和单线态氧（1O2）等，它们又统称为活性氧（reactive oxygen species，ROS），都是人体内最为重要的自由基。非氧自由基主要有氢自由基（H·）和有机自由基（R·）等。 （一）自由基的产生 人体细胞在正常的代谢过程中，或者受到外界条件的刺激（如高压氧、高能辐射、抗癌剂、抗菌剂、杀虫剂、麻醉剂等药物，香烟烟雾和光化学空气污染物等作用），都会刺激机体产生活性氧自由基。 人体内酶催化反应是活性氧自由基产生的重要途径。人体细胞内的黄嘌呤氧化酶、髓过氧化物酶和NADPH氧化酶等在进行酶促催化反应时，会诱导产生大量的自由基中间产物。除酶促反应外，生物体内的非酶氧化还原反应，如核黄素、氢醌、亚铁血红素和铁硫蛋白等单电子氧化反应也会产生自由基。外界环境，如电离辐射和光分解等也能刺激机体产生自由基反应，如分子中的共价键均裂后即形成自由基。 自由基反应包含3个阶段，即引发、增长和终止阶段。反应之初，引发阶段占主导地位，反应体系中的新生自由基形成许多链的开端，反应物浓度高。引发后的扩展阶段为反应的主体，若起始有几个引发自
清除氧自由基
1、超氧负离子 黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统产生超氧负离子产生超氧负离子 黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、 清除超氧自由基负离子O2- 徐艳,曲婷婷. 甘草消除氧自由基的体外研究[J]. 食品研究与开发,2006,(8). 2、1.2.2NBT 光还原反应中主要试剂的配制 1.2.2.1 测试缓冲液: 0.026 mol/LMet- 磷酸钠缓冲液具体配制方法: 首先配制0.1 mol/LpH7.8Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液 a 称取Na2HPO4·12H2O( MW=358.14) 3.581 4 g 于100 mL 小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入100 mL容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。 b 称取NaH2PO4·2H2O(MW=156.01)0.780 g 于50 mL小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。 c 量取91.5 mL a 液与8.5 mL b 液混合后, 该液即为0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液。 d 称取L- Met( MW=149.2) 0.194 1 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液定容至刻度。 1.2.2.2 NBT( 氯化硝基四氮唑蓝) 的配制(7.5×10-4mol/L) 称取NBT( MW=817.7) 0.061 3 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解后, 移入100 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。 1.2.2.3 核黄素溶液(2×10-5 mol/L) a.称取EDTA( MW=292) 0.002 92 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。 b.称取核黄素( MW=376.36) 0.073 5 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。合并 a 液和 b 液, 移入100 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度( EDTA0.1 mmol,核黄素2 mmol)。贮于冰箱中, 避光保存, 用时稀释100 倍。 1.2.3 甘草提取物溶液的配制 1.2.3.1 甘草酸溶液的配制 称取甘草酸0.05 g 用少量稀醇(10 %乙醇溶液)溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用稀乙醇定容至刻度, 即为 1 g/ mL 的甘草酸溶液。 1.2.3.2 甘草次酸溶液的配制 称取甘草次酸0.05 g 用少量稀醇(10 %乙醇溶液)溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用稀乙醇定容至刻度,即为 1 g/mL 的甘草次酸溶液。 1.2.3.3 甘草总黄酮组溶液的配制
几个妙招可清除体内五种毒
几个妙招可清除体内五种毒 北京中医医院肿瘤科副主任医师徐咏梅，北京大学人民医院皮肤科主任张建中，北京大学第一医院皮肤科副主任医师杨淑霞。.hzh “要想身体好，排毒不可少”，随着人们保健意识的提高，“排毒”这个词也走进了人们的健康理念中。于是，各种排毒手法也纷纷登场，排毒洗脚仪、排毒足贴、大肠水疗等，一些美容院还开展了“淋巴排毒”项目，即按摩淋巴可将毒素从淋巴引流而出。这些手法真的能排毒吗？答案是否定的。通过简单的物理手段就能将体内毒素驱除纯属无稽之谈，最好的方式是针对身体各个系统的不同毒素进行“自我疗法”，加强身体代谢，就能“百毒不侵”。 清“肠毒”： 规律排便，多吃蔬果由于身体里的毒素最大来源是吃出来的，很多被化学污染的食物，都是通过肠道把毒素吸收到了体内，肠道中的毒素是首先需要清除的。 建议：减少肠道毒素的关键是养成每日规律排便的习惯，可以缩短代谢废物在肠道停留的时间，减少毒素的吸收。同时一定要多吃新鲜蔬果，新鲜蔬菜、蔬果汁中含有丰富的纤维素，能够促进肠道的蠕动，排出体内的代谢物，尤其是要多吃富含纤维的蔬菜水果，能帮助排便。 清“肺毒”：? 主动咳嗽，多深呼吸一个人每天的呼吸能将数千升空气送入肺中，空气中飘浮的细菌、病毒、粉尘等有害物质也随之进入肺中。 建议：减少肺部毒素的最好方式是多呼吸新鲜空气、避免吸入污浊空气。如果身边有人抽烟，一定要避免吸入“二手烟”，并尽量不要长久呆在充满烟尘的地方。遇到沙尘天气，出行别忘了戴个口罩。此外，可以在空气清新的地方或雨后练习深呼吸：放松胃部，用指尖轻轻触及；接着用鼻子平稳地深深吸气，此时指尖可感觉到胃部鼓起，直到整个胃部充满了气体；让气体在胃部停顿4秒钟，再用嘴慢慢呼气。主动咳嗽几声，也能起到清扫肺脏的作用。 清“肾毒”： 充分饮水，清淡饮食肾脏是泌尿系统主力军，也是身体最重要的排毒器官，它可过滤血液中的毒素和蛋白质分解后产生的废料，并通过尿液排出体外。 建议：要减少肾脏中的毒素，科学、充分饮水很重要。水可以稀释毒素浓度，促进肾脏新陈代谢，将更多毒素排出体外。每天喝够两升水，通过水分冲洗体内的毒素，可减轻肾脏的负担，是排毒最简便的方法。平时要注意饮食清淡，以免加重肾脏的负担。此外，尤其不要频繁憋尿，因为尿液中毒素很多，若不及时排出，会被重新吸入血液，危害身体健康。 清“剩毒”： 有氧运动，出汗排毒当其他器官的毒素排出后，别忘了还有一个最大的排毒器官也要好好利用，那就是皮肤，它可以帮其他器官无法解决的毒素排出。让皮肤帮助排毒，最好的方式就是多出汗、多运动。 建议：最简单有效的排毒运动是大步走，在走路时加快速度，尽可能大地摆动和舒展手臂，可刺激淋巴、降低胆固醇和高血压。此外，还有很多其他运动能加快人体新陈代谢，帮助皮肤排毒，如瑜珈、游泳，还有太极拳、五禽戏，但关键是运动一定要出汗。建议每周至少进行一次使身体出汗的有氧运动。 清“心毒”： 调整心态乐观开朗很多人浑身不舒服，还长痘、上火，除了体内器官积聚毒素外，还需从情绪、心理上下手，清理“情绪垃圾”。不愉快的心情、不平和的心态、压力所导致的情绪失常，都能增加体内毒素的蓄积，而且其危害比通过食物、空气摄入的毒素的危害要大得
如何清除体内自由基
如何清除体内自由基 消除体内自由基，应该要了解自由基的来源，从外界到身体内部的代谢一起中和性的描叙不要单方面的讲叙体内各种酶与自由基之间的关系 人体内的自由基有两个来源：其一是来自环境，如环境污染、食品污染、过度的紫外线照射和各种辐射、杀虫剂、室内外废气、吸烟、二手烟、酗酒、工作压力、生活不规律等等，都会直接导致人体内产生过多的自由基（活性氧）；食品添加剂、食用脂肪和熏炸烤肉、某些抗癌药物、安眠药、抗生素、有机物腐烂物、塑料用品制造过程、油漆干燥挥发、石棉粉尘、空气污染、化学致癌物、大气中的臭氧等也都能诱发人体内产生自由基。 其二是来自体内，人体内组织细胞的新陈代谢也会产生自由基，这是人体代谢过程的正常产物，十分活跃又极不稳定，它们会附着于健康细胞之上，再慢慢瓦解健康细胞，而被破坏的细胞则又再转而侵害更多健康的细胞，如此恶性循环从而导致人体的衰老和疾病的发生。另外，组织器官损伤后的缺血一段时间后又突然恢复供血(即重灌流)，如心肌梗塞、脑血栓、外伤、外科手术后，自由基会大量生成。正常人体有一套清除自由基的系统，但这个系统的力量会因人的年龄增长及体质改变而减弱，致使自由基的负面效应大大增强，引起多种疾病发病率的提高。活性氧自由基对人体的损害实际上是一种氧化过程。因此，要降低自由基的损害，就要从抗氧化做起。 听说过抗氧化剂吗？它对人体的健康可是有着密切的关系。既然自由基不仅存在于人体内，也来自于人体外，那么，降低自由基危害的途径也有两条：一是，利用内源性自由基清除系统清除体内多余自由基；二是发掘外源性抗氧化剂——自由基清除剂，阻断自由基对人体的入侵。 大量研究已经证实，人体内本身就具有清除多余自由基的能力，这主要是靠内源性自由基清除系统，它包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等一些酶和维生素C、维生素E、还原型谷胱甘肽、β-胡萝卜素和硒等一些抗氧化剂。酶类物质可以使体内的活性氧自由基变为活性较低的物质，从而削弱它们对肌体的攻击力。酶的防御作用仅限于细胞内，而抗氧化剂有些作用于细胞膜，有些则是在细胞外就可起到防御作用。这些物质就深藏于我们体内，只要保持它们的量和活力它们就会发挥清除多余自由基的能力，使我们体内的自由基保持平衡。 要降低自由基对人体的危害，除了依靠体内自由基清除系统外，还要寻找和发掘外源性自由基清除剂，利用这些物质作为替身，让它们在自由基进入人体之前就先与自由基结合，以阻断外界是自由基的攻击，使人体免受伤害。在自然界中，可以作用于自由基的抗氧化剂范围很广，种类极多。目前，国内外已陆续发现许多有价值的天然抗氧化剂。如β－胡萝卜素（维生素A）、维生素C、维生素E、番茄红素、辅酶q10、等等。此外，我国很多中草药植物中的有效成分都是天然抗氧化剂，例如，银杏黄酮、甘草黄酮等，另外还有巴西菇、灰树花、茯苓、黄芪、丹参、银杏、枸杞、灵芝、人参......。 吃什么可以减少体内自由基 在正常的生命过程中，自由基为维持生命所必需。体内自由基不断产生，也不断地被清除，两者 处于动态平衡之中，使之维持在一个正常的生理水平上。自由基在生物体内具有参与吞噬病原体，参 与前列腺素和凝血酶原的合成、解毒，参与体内部分生化反应和胶原蛋白的合成，调节细胞增殖与分化，参与机体免疫和环核苷酸的生物合成，以及生殖和胚胎发育等重要的生理功能。但是当自由基过 量时，自由基在机体内损伤蛋白质、核酸和生物膜，导致细胞凋亡，并参与许多疾病的发病过程。 由基清除剂即抗氧化剂清除机体自由基，保护机体免受氧化损害中起重要作用。因此，近年来对 自由基清除剂的研究备受关注。多吃点抗氧化剂食物有利于减少体内多余自由基。 方法/步骤 1.全面复方自由基清除剂：葡茶多酚胶囊。适当吃葡茶多酚可以全面清除体内多余自由
超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书 可见分光光度法
第1页，共2页 超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书可见分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。货号:BC1410规格:50T/48S 产品内容: 提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体2mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加8mL蒸馏水充分溶解。试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。试剂四：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。试剂五：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。产品说明: 超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。 AP-TEMED系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO 2－ ，NO 2－ 与对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。自备实验用品及仪器: 天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、1ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。操作步骤:一、样品处理 1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提 取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取 液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。 3.培养液或其它液体：直接检测。 4.粉剂药物可配制成相同浓度，比如1mg/mL。 二、测定操作 空白管对照管测定管 试剂一（μL）404040 试剂二（μL）160160 H2O（μL）260100 充分混匀，25℃反应1min 样品（μL）100 试剂三（μL）200200200 充分混匀，37℃反应30min 试剂四（μL）200200200 试剂五（μL）200200200 充分混匀，37℃显色20min，于1ml玻璃比色皿，以空白管调零，在530nm处测定对照管 和测定管的吸光值，分别记为A对照管和A测定管。 注意：空白管只需测定一次。 三、计算公式 超氧阴离子清除率I%=（A对照管-A测定管）/A对照管×100% 注意事项： 1.试剂一4℃可保存2个月，配制好的试剂二4℃可保存一周，建议实验前配制，并尽快使用。 2.样品处理完后立即进行测定，或者低温保存不超过24小时。 第2页，共2页
清除自由基能力的研究概况
清除自由基能力的研究概况 陶涛 （西南林业大学林学院农学（药用植物）昆明 650224） 摘要：自由基及其诱导的氧化反应是导致生物衰老和某些疾病如癌症、糖尿病、一心血管疾病等的重要因素。乳酸茵作为一种高效、低毒的生物源天然抗氧化荆，正逐步受到食品、制药、化工等领域的广泛关注。就目前国内外常用的乳酸茵抗氧化活性的筛选方法、乳酸茵抗氧化机理的国内外研究进展及未来的发展趋势作一综述。 关键词：自由基；乳酸茵；抗氧化． Study on the scavenging ability of lactic acid bacteria on free radical bstract：Free radical and its inducing oxiditative reaction may CaUSe biological doat and certain diseases such as Cancers，diabetes and the cat- diovascular．The lactic acid baaeria as one ofbiological SOUrCeS oxidation inhibitor is becoming more and more popular in the fields offood．，drug manufacture and chemical industry．This article mainly reviews the screening methods for antioxidative of lactic add bacteria among domestic and foreign countries，the advance of the research progress in lactic add bacteria antioxidative and r∞earch trends in future． 引言 氧化过程可以提供能量．对大多数生物体来说，是维持生命必不可少的一个能量转化过程。但过多的氧化过程会对生物大分子引起损伤．氧化损伤主要是由于自由基和过氧化产物作用于人体而产生的。 自由基(free radicals)27．．称游离基．为人体氧化代谢过程中形成含有一个不成对电子的原子或原子团。人体的自由基主要包括超氧阴离子自由基(o2)、
超氧阴离子自由基荧光探针法检测及其应用研究
网络出版时间：2012-12-19 08:52 网络出版地址：https://www.360docs.net/doc/122153552.html,/kcms/detail/11.2206.TS.20121219.0852.010.html 2012-11-20 超氧阴离子自由基荧光探针法检测及其 应用研究 赵永强1,2，林洪1，李来好2,*，杨贤庆2，郝淑贤2，张牧天3 (1.中国海洋大学食品科学与工程学院，山东青岛 266003； 2.中国水产科学研究院南海水产研究所，农业部水产品加工重点实验室，国家水产品加工技术研发中心，广 东广州 510300； 3. 北京师范大学-香港浸会大学联合国际学院，广东珠海 519085) 摘要：该研究以2-氨基吡啶与吡啶-2-甲醛为原料，经亲核取代反应合成了一种新型荧光探针：2-（2’-吡啶 亚胺甲基）吡啶（2-APC），所得目标产物经熔点测定、元素分析、红外光谱与核磁共振波谱等方法表征确认。 利用2-APC与超氧阴离子自由基（O2·-）发生荧光淬灭反应的原理，建立了一种测定邻苯三酚自氧化体系 产生O2·-的方法，该方法反应体系最佳条件为：反应pH=8.2；反应温度T=40℃；反应时间t=40 min。测 定条件为：λex=295 nm、λem=365nm，狭缝宽度5 nm。邻苯三酚在0.4×10-6~8.0×10-6 mol?L-1浓度范围内 与相对荧光强度呈良好线性关系，线性回归方程为y=37.567x+55.581，R2=0.9834。应用该方法对L-抗坏 血酸清除O2·-能力进行评价，结果表明L-抗坏血酸清除O2·-的IC50值为0.182 mmol?L-1。 关键词：超氧阴离子自由基；荧光探针；合成；应用 Fluorescence Probe Method for Superoxide Anion Radical Detection and its Application Study ZHAO Yong-qiang 1,2，LIN Hong1，LI Lai-hao2,*，YANG Xian-qing2，HAO Shu-xian2，ZHANG Mu-tian (1. College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao 266003, P.R.China； 2.Key Laboratory of Aquatic Product Processing, Ministry of Agriculture, National R&D Center for Aquatic Product Processing, South China Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Science, Guangzhou 510300, P.R.China； Beijing Normal University-Hong Kong Baptist University United International College, Zhuhai 519085, P.R.China) Abstract：A novel fluorescence probe 2-APC was synthesized by 2-aminopyridine and 2-pyridinecarbaldehyde based on nucleophilic substitution reaction in this study. The reaction product was characterization by melting test, elemental analysis, infrared spectrum and 1HNMR. A fluorescence probe method for superoxide anion radical detection was established. The optimum conditions of this reaction system were as follows, pH, temperature and time of reaction system was 8.2,40 oC and 40 min respectively. The conditions of fluorimetric determination were as follows, λex=295 nm, λem=365nm and the slit width was 5 nm. In the range from 0.4×10-6 M to 8.0×10-6 M, relative fluorescence intensity (y) and pyrogallol concentration (x) were shown a good linear relationship, y=37.567x+55.581，R2=0.9834. Superoxide anion radical (O2·-) scavenging activity of L-ascorbic acid was evaluated using the above mentioned method, the results showed that the IC50of L-ascorbic was 0.182×10-3mol?L-1. Key words：superoxide anion radical, fluorescence probe, synthesis, application 中图分类号：O657.34 文献标识码：A 文章编号： 活性氧是需氧生物细胞进行正常代谢的产物，生物体生命代谢过程中通过非酶反应与酶反应不断产生各种活性氧自由基，如超氧阴离子自由基（superoxide anion radical, O2·-）、过氧化氢（hydrogen peroxide, 收稿日期：2012 基金项目：国家科技支撑计划项目(2012BAD28B00)；国家现代农业产业技术体系(CARS-49)；国家海洋局海 洋公益性行业科研专项(201005020；2013418018)；茂名市科技计划项目(2011A01002) 作者简介：赵永强(1985—)，男，博士研究生，研究方向为水产品加工及贮藏工程。E-mail：zhaoyq1122@https://www.360docs.net/doc/122153552.html, *通信作者：李来好(1963—)，男，研究员，博士，研究方向为水产品加工与质量安全。E-mail：laihaoli@https://www.360docs.net/doc/122153552.html,