生物实验――热原检查法
热原检查法
热原检查法第一篇：热原检查法【关键词】热原检查法细菌内毒素检查法热原热原是微生物的代谢产物，系能引起恒温动物和人体体温异常升高的至热性物质。
当注入人体含有热原的量达0.01微克/千克以上的输液时，即可产生热原反应。
《中华人民共和国药典》同时收载了热原检查法（家兔法）和细菌内毒素检查法(鲎试剂法）对输液进行热原检查。
我们对我院临床使用的哈尔滨三精艾富西药业有限公司生产的10个批次0.9%氯化钠注射液液，进行了两种方法联合应用的尝试，收到了良好效果。
1资料与方法1.1研究对象哈尔滨三精艾富西药业有限公司生产的规格为500 ml0.9%氯化钠注射液，批号为:50307A、50411C、50513A、50716A、50910A、50910C、51008A、51116A、51128C、51215C。
1.2试验材料细菌内毒素国家标准品：批号为20056（100EU/支）,厂家为中国药品生物制品鉴定所。
鲎试剂：批号为0507250（0.25EU/ml），厂家为湛江安度斯生物公司。
健康合格家兔（雌兔无孕），1 ml刻度吸管，5 ml试管，20 ml玻璃注射器，肛温计，250 ℃电热恒温烤箱，漩涡混合器、电热恒温水浴箱。
(见表1) 表10.9%氯化钠注射液检查结果（略）1.3方法与结果将上述10批次哈尔滨三精艾富西药业有限公司的0.9%氯化钠注射液，分别按照《中华人民共和国药典》（2000版）附录规定的热原检查法（家兔法）和细菌内毒素检查法（鲎试剂法）的标准进行检查，结果见表1。
2讨论从以上检查结果不难看出，两种方法对同批次的产品进行检查，结果出现了偏差，通过临床跟踪调查，上述批次产品用于临床均未发生热原反应。
内毒素检查法（鲎试剂法）检查热原可靠性强，且操作简便，成本低，省时，省力，是热原检查的发展方向。
相比之下相对古老的热原检查法（家兔法）就显得操作繁琐，成本高，即费时又费力，家兔容易受周围环境、温度、噪声等干扰而影响检查结果。
解读2020药典热原检查法
说到热原检查，我们先了解几个概念，热原、热原反应、内毒素、实验动物。
热原（p yr o g e n）：指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。
注射液中的热原主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。
致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。
热原反应：临床上在进行静脉滴注大量输液时，由于药液中含有热原，病人在0.5～1h内出现冷颤、高热、出汗、昏晕、呕吐等症状，高热时体温可达40℃，严重者甚至可休克，这种现象称为热原反应。
细菌内毒素：是革兰氏阴性菌的细胞壁成分，当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。
因此，细菌内毒素广泛存在于自然界中。
如自来水中含内毒素的量为1至100E U/m l。
当内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害，但内毒素通过注射等方式进入血液时则会引起不同的疾病。
注射液中如果含有内毒素，就会产生代谢产物，内毒素大量进入血液就会引起发热反应即热原反应。
因此，生物制品类、注射用药剂、化学药品类、放射性药物、抗生素类、疫苗类、透析液等制剂以及医疗器材类（如一次性注射器，植入性生物材料）必须经过细菌内毒素检测试验合格后才能使用。
由于家兔对热原的反应与人基本相似，对热原比较敏感，所以半个世纪以来一直用家兔来检测热原，家兔为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。
鲎试验在某些情况下，比如西药注射液、生理盐水等成分明确的药品，现在大多采用鲎试验来检测，但在一些中药注射剂、血液制品，抗毒素等由于自身特殊性无法通过稀释法消除干扰，还在使用兔法来检测热原，因此鲎试验目前还无法完全取代家兔热原试验。
检查法药典要求一雌兔应无孕，家兔怀孕了会出现腹围会变大，体重也会增大，情绪变得多变，在试验固定台上不容易固定，怀孕后温度波动也会变得不敏感，药物反应小，影响检验结果的准确性。
卫生学检查技术—热原和细菌内毒素检查法
若均为（+），判定供试品不符合规定；
若2支供试品管中1支为(+)，1支为(−)，则另取4支复试，4 支中有1支为(+)即认为不合格。
四、注意事项
1．防止鲎试验用水被污染； 2．开启内毒素标准品和鲎试剂时，要将粘附在安瓿瓶上 的粉末尽可能弹落下去。用砂轮划过安瓿后，要用酒精 棉（最好能用沾异丙醇的无纺布，以避免产生假阳性结 果）擦拭，防止开启时玻璃屑落入安瓿内。开启内毒素 标准品时，要在安瓿曲颈上部，并尽可能保留较长的安 瓿颈，准确加入1.0ml鲎试验用水复溶。
（二）检查方法 即凝胶法和光度测定法。凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集
反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。是中国药典的“仲裁” 方法。
二、仪器和试剂
37±1℃恒温水浴或适宜的恒温器具、超净工作台、漩涡混合器 、内毒素工作标准品、加样器、鲎试剂、鲎试验用水、pH调节剂等 。
鲎试剂
漩涡混合器
加样器
三、测定方法
实验流程
供试品
限值确定
最大有效稀释倍数（MVD）确定
供试品干扰实验
正式实验
结果判断
供试品内毒素检查：凝胶限度试验
编号
A B C D
内毒素浓度／被加入内毒 平行管
素的溶液
数
无／供试品溶液22λ／供试Fra bibliotek溶液2
2λ／检查用水
2
无／检查用水
2
A为供试品溶液；B为供试品阳性对照；C为阳性对照；D为 阴性对照。λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml)。
将试管轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37±1℃的恒温 器中，保温60±2分钟后，将试管取出，缓缓倒转180°，若 管内凝胶不变形，不从管壁脱落为阳性(+)，凝胶不能保持 完整并从管壁脱落为阴性(-)。
热原的检查方法
热原的检查方法
热原是一个广义名称，用于描述产生或传递热量的物体、物质或现象。
在工业、能源和环境等领域中，检查热原的方法对于确保过程的正常运行和预防故障至关重要。
以下是几种常见的热原检查方法：
1. 热传导检测法：这是一种测量热量传递速率的方法。
热传导检测仪通常包括一个发热体和一个温度传感器。
当电流通过发热体时，它会产生热量并传递到周围的物体。
这样就可以测量热量的传递速率以及物体的热导率。
2. 热扫描电镜（SEM）：热SEM利用电子束来扫描样本，并通过观察样本的热反应来检查热原的性能。
可以通过观察样品的温度分布图来确定样品的热特性。
3. 红外线热成像（IRT）：这是一种无接触的检测方法，可以用于观察对象的表面温度分布。
热成像仪使用红外线相机（或传感器）来捕捉物体或物质的表面温度，并将其转换成彩色图像。
这种方法可以用于检测特定区域的温度梯度以及区域的温度变化。
4. 热重量分析（TGA）：这是一种测量样品热性能的方法。
TGA可以测量样品的质量随时间和温度的变化，从而确定样品的热稳定性和分解特性。
5. 示温器法：这种方法通常用于测量液体和气体的表面温度。
温度的变化可以观察到指针的变化和液晶显示屏的变化。
总的来说，选择特定的热原检测方法取决于所需的精度、检测对象的类型、要求的速度和测量条件。
在选择特定的热原检测方法之前，最好先了解不同方法的优缺点。
最终的目标是针对特定的应用选择最适合的检测方法，以确保最准确、快速和可靠的结果。
热原检查法
热原检查法中国鲎成为了国家二级保护动物, 鲎试剂成为了紧俏资源。
作为一个注射剂制药企业的QC, 不得不考虑以后怎么来应对, 除了采用减少鲎试剂的用量外, 可选择重组鲎试剂或采用重组C因子法, 但结果的等效性研究这个拦路虎很难打到。
百无聊赖就翻开了《中国药典检测分析指南》2017年版的热原检查法, 开卷有益, 该版指南对人员检查的基本原理等进行了全面的阐述, 现将学习内容进行总结。
1.热原相关的定义及来源1.1 相关定义热原是注射进入人体或动物体内后, 能导致其体温升高的一类物质的总称。
可以直接导致体温升高的物质称为外源性热原, 由外源性热原引起体内产生的致热物质称为内源性热原。
细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（LPS）。
当细菌死亡或自溶后便会释放内毒素。
LPS是高分子量的脂多糖。
思考: 以上定义解释了注射剂为什么要进行热原检查或细菌内毒素检查。
1.2 热原的致热原理外源性物质进入人体, 作用到单核细胞系统, 刺激其分泌内源性致热原[主要有白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1（IL-1）干扰素（INF）及肿瘤坏死因子（TNF）等]；内源性致热原作用于下丘脑提问调节中枢, 使体温调定点上调, 造成产热增加、散热减少, 导致人体发热。
思考: 干扰素、抗肿瘤药物等是否会影响热原的检查？1.3 外源性热原的来源1.3.1 外源性热原中微生物来源的包括:a) 革兰氏阳性菌细菌成分（脂阿拉伯甘露聚糖、蛋白、热休克蛋白A.脂磷壁酸等）；b) 革兰氏阴性菌细菌成分（脂质A.外膜蛋白、膜孔蛋白、陪伴蛋白等）；c) 革兰氏阴性菌/革兰氏阳性菌细胞壁成分（细胞表面蛋白、菌毛、脂肽、脂蛋白、肽聚糖、胞壁酰二肽等）；d) 革兰氏阴性菌/革兰氏阳性菌细胞外成分（毒素、超抗原等）；e) 非细胞性微生物（活病毒、真菌、酵母、疟原虫等）。
微生物产生的致热物质中, 革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素致热性最强, 其次是革兰氏阳性杆菌, 革兰氏阳性球菌致热作用较弱, 真菌、病毒致热作用更弱, 因此, 细菌内毒素被认为是自然界最强致热原。
热原检查法
热原检查法热原检查法是一种用于检测微生物的方法，它基于微生物在特定温度下产生的热量来进行检测。
该方法被广泛应用于食品、水质、医药等领域，具有灵敏度高、快速、可靠等优点。
下面将从原理、操作步骤、优缺点和应用等方面进行详细介绍。
一、原理热原检查法是通过测量微生物在特定温度下产生的热量来进行检测的。
该方法主要基于微生物代谢活动所产生的热量，利用热电偶或红外线传感器对微生物所产生的热量进行实时监测。
当微生物数量较多时，其代谢活动所产生的热量也会相应增加，从而能够通过仪器显示出来。
二、操作步骤1. 样品制备：将待测样品按规定方法处理后，制备成适宜的试样。
2. 检测设备准备：根据使用说明书正确安装设备，并连接好电源和计算机。
3. 仪器调试：按说明书要求对仪器进行调试，并进行空白测试和标准曲线建立。
4. 样品检测：将制备好的样品加入检测仪器中，按要求设定温度和时间，进行检测。
5. 结果分析：根据仪器显示结果进行分析判断，确定样品中微生物的种类和数量。
三、优缺点优点：1. 灵敏度高：热原检查法对微生物的检测灵敏度高，可以检测到微生物数量较少的样品。
2. 快速：该方法操作简便，可以在短时间内获得检测结果，适用于快速筛查大批量样品。
3. 可靠性强：该方法结果准确可靠，并且不受环境影响。
4. 适用范围广：热原检查法适用于多种类型的样品，包括食品、水质、医药等领域。
缺点：1. 无法区分微生物种类：热原检查法只能确定样品中是否存在微生物以及其数量，并不能区分不同种类的微生物。
2. 对温度要求高：该方法对温度要求较高，在操作过程中需要掌握好温度控制以及时间控制等参数。
3. 不适用于活菌数的计数：由于热原检查法只能检测到微生物代谢产生的热量，因此不适用于活菌数的计数。
四、应用热原检查法广泛应用于食品、水质、医药等领域。
在食品领域中，该方法可以用于检测肉制品、水产品、奶制品等样品中的微生物。
在水质领域中，该方法可以用于检测自来水、污水等样品中的微生物。
热原的检查方法
热原的检查方法热原检查方法是在工业生产过程中常用的一种方法，用于确定设备或系统中存在的热源。
热源是指能够产生热量的物体或系统，常见的热源包括燃烧炉、锅炉、发动机等。
热源检查的目的是为了确保设备或系统的正常运行，以及预防潜在的安全隐患。
一、热源检查的步骤热源检查通常需要遵循以下几个步骤：1. 确定热源：首先需要确定热源的位置和类型。
可以通过查看设备的技术参数或者进行实地勘察来确定热源的具体情况。
2. 检查外观：对于可见的热源，可以通过外观检查来判断其是否存在异常。
例如，观察燃烧炉的火焰是否正常，是否存在漏气的情况。
3. 检测温度：使用温度计等工具对热源进行温度检测。
温度过高或过低都可能是热源存在问题的表现。
4. 检查燃料供应：对于燃烧炉等需要燃料的热源，需要检查燃料供应是否正常，例如燃料是否充足、燃料是否完全燃烧等。
5. 检测排放物：对于烟囱、尾气等排放物进行检测，判断是否存在超标排放的情况。
6. 检查设备运行状态：观察设备的运行状态，包括噪音、振动、漏水等方面，判断设备是否正常工作。
7. 检查安全设施：检查热源周围的安全设施是否完善，例如防护罩、防火墙等。
二、热源检查方法的应用热源检查方法广泛应用于各个行业和领域。
以下是一些常见的应用场景：1. 工业生产：在工业生产过程中，热源是不可或缺的一部分。
通过对热源进行定期检查，可以保证设备的正常运行，提高生产效率。
2. 建筑工程：在建筑工程中，热源检查可以用于检测供暖设备的工作状态，确保居民的生活质量。
3. 能源行业：对于能源行业来说，热源是一种重要的能源形式。
通过对热源进行检查，可以确保能源的有效利用，降低能源浪费。
4. 环境保护：热源排放物的监测和控制是环境保护的重要内容之一。
通过热源检查方法，可以及时发现和解决热源排放问题，减少对环境的污染。
三、热源检查的意义热源检查对于保障设备和系统的正常运行具有重要意义。
以下是热源检查的几个重要意义：1. 安全保障：通过热源检查，可以及时发现和解决存在的安全隐患，保障工作人员和设备的安全。
热原检查法
热原检查法标准操作规程家兔法1.实验材料及用具1.1天平精度0.01mg或0.1 mg供试验称量用精度0.1 mg或1 mg试剂称量用精度10g家兔称量用1.2电热干燥箱，250℃以上，受热均匀。
1.3恒温水浴1.4热原测温仪或肛门体温计，精度0.1℃。
1.5家兔固定盒，盒两侧有通气孔。
1.6实验用具注射器、烧杯、三角瓶、大称量瓶、吸管、移液管、表面皿、玻璃棒、广口试剂瓶、直镊、金属制密封器（均需除热原）、时钟、脱脂棉。
1.7试剂75%乙醇、凡士林或50%甘油、生理盐水、灭菌注射用水（经细菌内毒素检，含细菌毒素低于0.25EU/mI）无热原氯化钠（经250℃30分钟或200℃1小时或180℃2小时加热原）。
2.供试品溶液的制备2.1原料药2.1.1精密称定适量，置烧杯、三角瓶或称量瓶中。
2.1.2按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水或无热原生理盐水，搅拌使溶解。
2.2注射液2.2.1用75%乙醇棉球消毒安瓶颈部。
2.2.2精密量取一定量药液。
2.2.3按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水或无热原生理盐水，混匀。
3实验动物3.1健康无伤害、体重1.7kg以上至4.0kg左右同一来源、同一品系、合格的实验用兔，雌兔应孕，1兔1笼，标兔号。
3.2新兔预选3.2.1新兔经同一饲料饲养7日后，进行预测体温，测温的条件与热原检查要求相同。
3.2.2测量体温时，测温仪探头或肛门温度计插入肛门的深度各兔应相同约6cm，测温时间不得少于1.5分钟。
3.2.3每隔30分钟测温1次，共8次。
3.2.48次体温均在38.0℃～39.6℃（一般多选用38.4～39.4℃）的范围内，且最高最低体温差数不超过0.4℃的家兔，可供3周内实验用。
3.2.5录选新兔编号、登记入兔史记录卡，未被录选家兔，可饲养7日再预测体温1次，如仍不符合要求则淘汰。
兔史记录卡内容应包括日期、体重、性别、供试品名、正常体温、温差结果。
3.3家兔的重复使用3.3.1供试品判定为符合规定的家兔，至少应休息48小时，方可供下一次实验用。
热原检查法
※热原检查法药检文摘日期:2004-8-11热原检查法1绪言热原也称为发热性物质（日本药局方）''英文叫做Pyrogen，即能够引起恒温动物体温异常升高的物质总称。
与注射剂有关的发热性物质研究可追溯到16世纪。
直到18世纪丹麦生理学家panum的研究中断定，“发热物质是一种对热稳定，溶于水，不溶于乙醇，由活的细菌中来的一类物质，而且微量静注后就能引起高热反应”。
1923年，Seibert肯定地证实了所有注射剂的发热原因是通过革兰氏阴性菌所产生的一种可滤过的高热稳定的热原污染结果。
随后Rademaker进一步证实了Seibert的发现，并进一步强调避免细菌污染的重要性。
之后的共同研究确立了使用家兔检测注射剂及水中致热物质的方法。
这个结果导致了官方的重视，20年后，美国药典于1942年USP12）进行了收载''其后，各国药典相继收载，CHP→1953年''BP→1953年''JP→1951年第6版药局方''半个多世纪来，热原检查法在保证注射剂的安全用药方面发挥了重要作用。
2热原与热原反应热原即发热性物质，目前普遍认为是由革兰氏阴性菌所产生的内毒素（脂多糖），广义说，是所有引起恒温动物体温异常升高物质的总称。
除内毒素引起发热外，还包括病毒，干扰素以及其它种种发热物质。
热原反应是指临床输液反应，如果将携带超量热原物质的注射液静脉输入人体，通常在05-2h 内引起机体严重的临床反应。
表现为：机体外周皮肤血管收缩，停止排汗，散热减少，发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐，严重时可出现昏迷、休克、死亡等一系列临床症状，体温通常可上升至40℃左右。
3热原的本质在自然界，热原分布很广，可以说无处不在，无处不有，关于热原本质的研究，目前在世界范围内，主要存在二种观点。
一种观点是：热原的本质就是革兰氏阴性-菌所产生的细菌内毒素，就注射剂来讲，其输液反应主要来源于细菌内毒素。
1142热原检査法
表 2-2 耳 用 制 剂 、鼻 用 制 剂 、库 肤 给 药 制 剂 、 吸入制剂抑菌效力判断标准
A 细菌
B
A 真菌
B
减 少 的 lg 值
2d
7d
14d
28d
2
3
—
NI
—
—
3
NI
—
一
2
NI
—
—
1
NI
注 ：N I : 未 增 加 ，是 指 对 前 一 个 测 定 时 间 ，试 验 菌 增 加 的 数 量 不 超 过 0. 5 lg 。
本试验操作过程应防止内毒素的污染。 细 菌 内 毒 素 的 量 用 内 毒 素 单 位 （E U )表 示 ，1 E U 与 1 个 内 毒 素 国 际 单 位 （I U ) 相 当 。 细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成， 用 于 标 定 、复 核 、仲 裁 鲎 试 剂 灵 敏 度 、标 定 细 菌 内 毒 素 工 作 标 准 品 的 效 价 ，干 扰 试 验 及 检 查 法 中 编 号 B 和 C 溶 液 的 制 备 、凝 胶 法 中 鲎 试 剂 灵 敏 度 复 核 试 验 、光 度 测 定 法 中 标 准 曲 线可靠性试验。 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基 准 标 定 其 效 价 ，用 于 干 扰 试 验 及 检 查 法 中 编 号 B 和 C 溶液 的 制 备 、凝 胶 法 中 鲎 试 剂 灵 敏 度 复 核 试 验 、光 度 测 定 法 中 标 准曲线可靠性试验。 细 菌 内 毒 素 检 查 用 水 应 符 合 灭 菌 注 射 用 水 标 准 ，其内毒 素 含 量 小 于 0_ 015EU/ml( 用 于 凝 胶 法 ）或 0. 005EU/ml(用 于 光 度 测 定 法 ），且 对 内 毒 素 试 验 无 干 扰 作 用 。 试验所用的 器皿需经 处理，以去除可能存在的外源性内 毒 素 。耐 热 器 皿 常 用 干 热 灭 菌 法 （250°C、3 0 分 钟 以 上 ）去 除 ，也 可 采 用 其 他 确 证 不 干 扰 细 菌 内 毒 素 检 査 的 适 宜 方 法 。 若 使 用 塑 料 器 具 ，如 微 孔 板 和 与 微 量 加 样 器 配 套 的 吸 头 等 ， 应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器具。 供 试 品 溶 液 的 制 备 某 些 供 试 品 需 进 行 复 溶 、稀释或在 水 性 溶 液 中 浸 提 制 成 供 试 品 溶 液 。必 要 时 ，可调节被测溶液 ( 或 其 稀 释 液 ）的 p H 值 ，一 般 供 试 品 溶 液 和 鲎 试 剂 混 合 后 溶 液 的 p H 值 在 6 .0 〜 8 .0 的 范 围 内 为 宜 ，可 使 用 适 宜 的 酸 、 碱 溶 液 或 缓 冲 液 调 节 p H 值 。酸或碱 溶 液 须用 细 菌 内 毒 素 检 査 用 水 在 已 去 除 内 毒 素 的 容 器 中 配 制 。缓 冲 液 必 须 经 过 验 证 不含内毒素和干扰因子。 内毒 素 限 值 的 确 定 药 品 、生 物 制 品 的 细 菌 内 毒 素 限 值 (L )一般按以下公式确定：
热原检查法
※热原检查法药检文摘日期:2004-8-11 热原检查法1绪言热原也称为发热性物质（日本药局方）''英文叫做Pyrogen，即能够引起恒温动物体温异常升高的物质总称。
与注射剂有关的发热性物质研究可追溯到16世纪。
直到18世纪丹麦生理学家panum的研究中断定，“发热物质是一种对热稳定，溶于水，不溶于乙醇，由活的细菌中来的一类物质，而且微量静注后就能引起高热反应”。
1923年，Seibert肯定地证实了所有注射剂的发热原因是通过革兰氏阴性菌所产生的一种可滤过的高热稳定的热原污染结果。
随后Rademaker进一步证实了Seibert的发现，并进一步强调避免细菌污染的重要性。
之后的共同研究确立了使用家兔检测注射剂及水中致热物质的方法。
这个结果导致了官方的重视，20年后，美国药典于1942年USP12）进行了收载''其后，各国药典相继收载，CHP→1953年''BP→1953年''JP→1951年第6版药局方''半个多世纪来，热原检查法在保证注射剂的安全用药方面发挥了重要作用。
2热原与热原反应热原即发热性物质，目前普遍认为是由革兰氏阴性菌所产生的内毒素（脂多糖），广义说，是所有引起恒温动物体温异常升高物质的总称。
除内毒素引起发热外，还包括病毒，干扰素以及其它种种发热物质。
热原反应是指临床输液反应，如果将携带超量热原物质的注射液静脉输入人体，通常在05-2h内引起机体严重的临床反应。
表现为：机体外周皮肤血管收缩，停止排汗，散热减少，发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐，严重时可出现昏迷、休克、死亡等一系列临床症状，体温通常可上升至40℃左右。
3热原的本质在自然界，热原分布很广，可以说无处不在，无处不有，关于热原本质的研究，目前在世界范围内，主要存在二种观点。
一种观点是：热原的本质就是革兰氏阴性-菌所产生的细菌内毒素，就注射剂来讲，其输液反应主要来源于细菌内毒素。
热原检查法的检查方法
热原检查法的检查方法
热原检查法？嘿，这可有点意思。
先准备好实验材料，就像要去打一场仗，装备得齐全呀。
然后把样品弄好，小心操作，可不能马虎。
接着进行实验，哇，这就像开启一场神秘之旅。
注意啥呢？操作得规范呀，不然结果能准吗？就像做饭不按菜谱来，能好吃吗？环境也得干净，不然有干扰咋办？
安全不？只要你严格按照步骤来，一般没啥问题。
就像走在平路上，只要小心点就不会摔倒。
稳定性嘛，只要条件控制好，结果就比较可靠。
就像盖房子，基础打好了就不会轻易塌。
啥时候用热原检查法？检查药品、医疗器械的时候呗。
优势可不少呢，能保证产品安全，就像给产品上了一道保险。
我见过人家做热原检查法，那叫一个认真。
结果准确，让人放心。
就像有个超级侦探，把问题都找出来了。
热原检查法很重要，好好用它。
你还等啥呢？赶紧行动吧！。
热原检测实验报告
一、实验目的1. 了解热原的概念及危害。
2. 掌握热原检测的方法和原理。
3. 学会使用热原检测仪进行实验操作。
4. 提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理热原是微生物的代谢产物，具有耐热性，可引起人体发热、寒战、头痛、呕吐等症状。
本实验采用凝胶分散法检测热原，原理为：热原在一定的温度、pH值和离子强度条件下，与凝胶介质中的高分子化合物发生凝集反应，形成肉眼可见的凝胶颗粒，从而检测热原的存在。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 药物样品- 蒸馏水- 生理盐水- 热原标准品- 凝胶分散剂- 凝胶介质2. 实验仪器：- 热原检测仪- 移液器- 电子天平- 烧杯- 恒温水浴箱- 移液管四、实验步骤1. 样品制备：- 将药物样品用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的溶液。
- 将生理盐水配制成一定浓度的溶液。
2. 标准曲线绘制：- 将热原标准品用蒸馏水配制成一系列不同浓度的溶液。
- 将标准溶液分别加入凝胶介质中，在热原检测仪上检测，记录凝胶颗粒形成时间。
- 以凝胶颗粒形成时间为纵坐标，热原浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3. 样品检测：- 将制备好的样品溶液分别加入凝胶介质中，在热原检测仪上检测，记录凝胶颗粒形成时间。
- 将样品检测数据代入标准曲线，计算出样品中的热原含量。
4. 结果分析：- 比较样品检测数据与标准曲线，确定样品中热原的含量是否符合规定。
五、实验结果1. 标准曲线绘制：- 标准曲线线性良好，相关系数R²=0.99。
2. 样品检测：- 样品溶液在热原检测仪上检测，凝胶颗粒形成时间为（XX±X X）min。
3. 结果分析：- 根据标准曲线，样品中热原含量为XX IU/ml，符合规定。
六、实验讨论1. 本实验采用凝胶分散法检测热原，具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点。
2. 在实验过程中，应注意以下几点：- 严格掌握实验操作步骤，避免误差。
- 控制实验条件，确保实验结果的准确性。
热原检查技术
结果判定
4. 出现负值的规定如下：
当家兔升温为负值时，均以0℃计。
注意事项
尽量使用热原测温仪测温，因为其感温探头在整
个测温过程中都置于家兔肛门内，所测体温较正 确，同时也避免了漏检现象。
热原耐热性好，但在180℃3~4h，或200℃
60min，或250℃ 30~45min可彻底破坏热原。 因此耐热物品如玻璃制品、注射器等均可用此法 破坏热原。
检查仪器
热原测温仪
家兔检查法
由于家兔对热原的反应与人基本相似，家兔法为
各国药典规定的检查热原的法定方法。
此法是将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，
在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判 定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
检查结果的准确性和一致性取决于试验动物的状
况、试验室条件和操作的规范性。
3只家兔1只体温升高0.6℃或以上 3只家兔升温均低于0.6℃但升温总和达1.3℃或
以上
结果判定
3. 有下列情况者，判为不符合规定：
在初试3只家兔中，体温升高0.6℃或以上的超过一
只
复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或以上的家兔超
过一只 3.5℃
在初试与复试合并的8只家兔中体温升高总和超过
热原检查技术
定义
热原是指能引起恒温动物和人体体温异常 升高的致热物质。广义上包括细菌性热原、 内源性高分子热原、内源性低分子热原及化 学热原等。药剂中的“热原”通常是指细菌 性热原，是微生物产生的代谢产物。
发热机理
热原→吞噬细胞吞噬→白细胞崩解，释放 内源性致热原→作用于体温调节中枢→产 热增加、散热减少→体温上升
热原实验室内外应保持安静，避免日光直射。
家兔热原检查法原理
家兔热原检查法原理
家兔的体温调节机制是通过调节新陈代谢速率和表皮血流，以维持体
温在一个相对稳定的水平。
正常情况下，家兔的体温在38.5-39.5°C之
间波动。
当家兔感染了热原菌，其体温会出现异常变化，常表现为体温升
高或下降。
热原感染可通过空气飞沫、接触传播、消化道传播、体液传播等途径
进行传播。
当家兔接触感染源时，热原菌会进入家兔体内，并在体内繁殖。
热原菌的繁殖会引发炎症反应，使家兔的新陈代谢加快，导致体温升高。
在进行家兔热原检查时，首先需要选择一批健康的、未曾感染热原的
家兔作为对照组。
然后，从需要检测的动物体内采集样品，如血液、组织
和体液等，将这些样品分别接种到对照组的家兔和待测试的家兔体内。
经
过一定的潜伏期后，对照组的家兔不会出现体温异常变化，而待测试的家
兔则会出现体温上升或下降的情况。
通过记录家兔的体温变化，可以评估感染热原的程度。
通常情况下，
感染程度越轻，体温上升或下降的幅度越小，反之则越大。
同时，家兔的
体温变化会伴随其他症状，如食欲减退、虚弱和异常行为等。
这些症状的
出现也可以作为评估感染程度和疾病严重程度的参考指标。
总之，家兔热原检查法通过观察和记录家兔的体温变化来评估病原体
感染的程度和疾病严重程度。
了解家兔热原检查法的原理有助于我们更好
地理解和应用这一检测方法，为疾病的诊断和防控提供参考依据。
热原检查法
英国药 ≥1.5kg 不限，雌
典
兔应无孕
20-23℃ 变化 ≤3℃
A
8
— 时间 给药 测量次数 选择条件
中国药 3-7天 N
8次
8次体温均在38.0-
典
30min/次 39.6℃之间，且最高与
最低体温相差≤0.4℃，
个体间体温差≤1℃
美国药 7天内 N
8次
体温不超过39.8℃，个
典
30min/次
体间体温差≤1℃
第三节 热原检查法
A
1
热原的定 义
热原（pyrogen）系指能引起恒温动物体温异常升高的致 热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热 原及化学热原等。
这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌 的尸体及其代谢产物。大多数微生物都能产生热原，致热 能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆 菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也 能产生热原。它的化学结构是脂多糖和微量蛋白的复合物
A
3
热源的性质
热原除具有很强的致热性外，还具有下列性质： 耐热性：180℃2小时以上或250℃30min以上才能彻底破坏热 原。因此，玻璃制品如生产过程中所用的容器和注射时使用的 注射器等，均可用高温破坏热原。
水溶性：热原能溶于水，可用大量无热原注射用水冲洗以除去 热原。
不挥发性：热原本身不挥发，但可随水蒸汽雾滴带入蒸馏水中， 故用蒸馏法制备注射用水时，蒸馏水器应有隔离装置。 滤过性：热原体积极小,直径1~50nm,可通过普通滤器进入滤 液中。
A
2
热原与细菌内毒素的 区别
热原物质包括了细菌内毒素，细菌内毒素是众多热 原物质中的一种，也是最主要的一种。
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生物实验――热原检查法
本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
供试用家兔供试用的家兔应健康合格，体重1.7～3.0kg，雌兔应无孕。
预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。
未经使用于热原检查的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；或3周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前3～7日内预测体温，进行挑选。
挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0～39.6℃的范围内，且与最低体温的相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。
用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可供第2次检查用。
如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。
每一家兔的使用次数，用于一般药品的检查，不应超过10次。
试验前的准备在作热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于5℃，实验室的温度应在17～25℃，在试验全部过程中，应注意室温变化不得大于3℃，避免噪音干扰。
家兔在试验前至少1小时开始停止给食并置于适宜的装置中，直至试验完毕。
家兔体温应使用精密度为±0.1℃的测温装置。
测温探头或肛温计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，时间不得少于1分半钟，每隔30分钟测量体
温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。
当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃的范围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃。
试验用的注射器、针头及一切与供试品溶液接触的器皿，应置烘箱中用250℃加热30分钟，也可用其他适宜的方法除去热原。
检查法取适用的家兔3只，测定其正常体温后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至约38℃的供试品溶液，然后每隔30分钟按前法测量其体温1次，共测6次，以6次体温中的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度（℃）。
如3只家兔中有1只体温升高0.6℃或0.6℃以上，或3只家兔体温升高均低于0.6℃，但体温升高的总和达1.4℃或1.4℃以上，应另取5只家兔复试，检查方法同上。
结果判断在初试3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和低于1.4℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的兔数仅有1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或3.5℃以下，均认为供试品的热原检查符合规定。
在初试3只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超过1只；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超过1只；或在初试、复试合并8只家兔的体温升高总和超过3.5℃，均认为供试品的热原检查不符合规定。
当家兔升温为负值时，均以0.℃计。