抗人球蛋白试验

抗人球蛋白实验

抗人球蛋白实验
概述
抗人球蛋白实验（AGT）又称Coombs试验，是不完全抗体的一种很好方法。抗人球蛋白是用人血清免疫家兔，产生的抗人球蛋白抗体，即抗人球蛋白血清。可检测体内致敏的RBC(直接抗人球蛋白实验)和体外致敏的RBC(间接抗人球蛋白试验)。
实验原理
直接抗人球蛋白试验是用抗球蛋白试剂直接和待检RBC进行反应，目的是检测RBC上是否存在免疫球蛋白，该试验是免疫血液学最长用的试验之一。大多免疫抗体为IgG类，分子量小,与RBC 相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称为不完全抗体。但在抗-IgG（抗人球蛋白抗体）参与下，通过抗人球蛋白的桥连作用，可使RBC与相应抗体（IgG）反应出现肉眼可见的凝集。
仪器及用具：小试管、吸管、离心机、 37℃水浴箱、显微镜、冰箱等。
试剂
（1）抗球蛋白试剂。抗球蛋白试剂通常有三种：多特异性抗球蛋白试剂（简称：多抗，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用）、单特异性抗-IgG 试剂（简称：抗-IgG）和单特异性抗-C3 试剂（简称：抗- C3）。多抗包括了抗IgG和抗- C3两种成分，在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要单抗-IgG和抗C3进一步分析。
（2）以1000rpm离心试管，轻轻混合，观察结果。
结果判定
如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检 RBC凝集者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
质量控制
（1）未洗涤的RBC或悬浮血浆中细胞及用酶处理过的RBC不能用于检测。（2）所有结果应在检测结束时立即判断，并熟练掌握其判断标准，结果观察过迟、重悬浮过度均可产生假阴性。（3）离心时间和速度应根据阳性对照反应程度适当调整，不适的离心和温育都会产生假阴性。

coombs试验

coombs试验Coombs试验是一种常用的实验方法，用于检测患者体内是否存在免疫相关的血液疾病或自身免疫性溶血性贫血等疾病。

本文将介绍Coombs试验的原理、操作步骤、临床应用以及一些注意事项。

一、Coombs试验的原理Coombs试验又称抗人球蛋白试验，是利用抗人球蛋白抗体检测患者体内抗体的一种常用方法。

它能够检测出两种类型的抗体，分别为直接抗人球蛋白试验（直接Coombs试验）和间接抗人球蛋白试验（间接Coombs试验）。

直接Coombs试验是用于检测患者体内是否存在结合在红细胞表面的抗体。

在这个实验中，我们需要将受试者的红细胞与免疫球蛋白（一种能与红细胞表面抗原结合的抗体）结合在一起。

如果在试验中添加抗人球蛋白抗体后，观察到红细胞发生凝集或沉淀，就说明该患者体内存在结合在红细胞上的抗体。

间接Coombs试验则是检测患者体内是否存在循环抗体。

在这个试验中，我们需要将受试者血清中的抗体与已知Rh阳性红细胞结合，然后再加入抗人球蛋白抗体。

如果出现了凝集或沉淀现象，就说明该患者体内存在循环抗体。

二、Coombs试验的操作步骤1. 收集样本：从患者的血液中收集适量的样本，常常采用静脉穿刺的方式进行。

2. 准备试剂：将抗人球蛋白抗体和适当的缓冲液溶解并稀释。

3. 进行试验：- 直接Coombs试验：将受试者的红细胞和抗人球蛋白抗体混合，轻轻摇晃试管，观察是否出现凝集或沉淀。

- 间接Coombs试验：将受试者的血清与已知Rh阳性红细胞混合，加入抗人球蛋白抗体，轻轻摇晃试管，观察是否出现凝集或沉淀。

4. 结果分析：根据实验结果判断患者是否存在抗体，以及抗体类型。

三、Coombs试验的临床应用Coombs试验广泛应用于各种免疫相关的血液疾病的诊断和监测中，包括自身免疫性溶血性贫血、输血反应、新生儿溶血病等。

自身免疫性溶血性贫血是Coombs试验最重要的临床应用之一。

该疾病是由于患者自身产生抗红细胞抗体，导致红细胞受损，进而引起溶血性贫血。

《抗人球蛋白试验》课件

监测治疗效果和复发
抗人球蛋白试验在监测治疗效果中的应用
抗人球蛋白试验在预测复发风险中的应用
抗人球蛋白试验在评估治疗效果和复发风险中的局限性
抗人球蛋白试验在临床实践中的应用案例
抗人球蛋白试验的注意事项
试验前的准备
确保试验环境清洁、无菌准备试验所需的试剂和仪器确保试验人员具备相应的专业知识和技能确保试验对象符合试验要求，并签署知情同意书
抗人球蛋白试验的发展趋势和展望
抗人球蛋白试验的进展
抗人球蛋白试验的发展历程抗人球蛋白试验的应用领域抗人球蛋白试验的技术进步抗人球蛋白试验的未来发展趋势
抗人球蛋白试验的未来发展方向
应用领域：拓展到更多疾病诊断和治疗领域
标准化：建立统一的检测方法和标准，提高检测结果的
可比性
技术进步：提高检测灵敏度和准确性，降低检测成本
抗人球蛋白试验的优缺点
优点：操作简单，结果准确，可用于检测多种疾病
缺点：需要专业人员操作，成本较高，可能存在假阳性
和假阴性结果
抗人球蛋白试验的应用
诊断自身免疫性疾病
抗人球蛋白试验：用于检测自身免疫性疾病的抗体
自身免疫性疾病：免疫系统攻击自身组织或器官的疾病
应用：抗人球蛋白试验可以帮助诊断多种自身免疫性疾病
应用：用于诊断和治疗多种疾病，如系统性红斑狼疮、
类风湿性关节炎等
目的：检测人体内是否存在抗人球蛋白抗体
重要性：有助于医生制定更准确的治疗方案，提高患者
的生活质量
抗人球蛋白试验的方法
直接抗人球蛋白试验
原理：通过检测血清中抗人球蛋白抗体的含量，来判断是否感染了某些疾病步骤：取患者血清，加入抗人球蛋白抗体，观察反应结果结果判断：如果出现凝集反应，说明患者感染了某些疾病注意事项：试验过程中要避免污染，保证结果的准确性

抗人球蛋白试验原理

抗人球蛋白试验原理
抗人球蛋白试验是一种常用的实验方法，用于检测血清中的抗
人球蛋白抗体水平。

该试验原理基于抗原与抗体的特异性结合，通
过测定血清中的抗人球蛋白抗体水平，可以评估机体的免疫状态，
对于临床诊断和疾病监测具有重要意义。

首先，进行抗人球蛋白试验需要准备好相应的试剂和标本。

试
剂包括抗原、抗体、底物和显色剂等，而标本则是患者的血清样本。

在实验操作前，需要将试剂和标本按照要求进行准备和稀释，确保
实验的准确性和可靠性。

接下来，将稀释后的血清标本和抗原共同孵育，使抗原与抗体
发生特异性结合。

在孵育的过程中，抗体与抗原结合形成免疫复合物，这一过程是实验的关键步骤。

经过充分孵育后，将未结合的抗
体和抗原洗去，以消除非特异性结合的干扰因素。

然后，将底物加入反应体系中，底物与酶标记的二抗结合，形
成底物-酶标记的二抗-抗体-抗原免疫复合物。

接着，加入显色剂，
底物受酶作用产生显色反应，生成可测量的产物，其光密度与抗体
水平成正比。

通过测定产物的光密度，可以间接反映出血清中抗人
球蛋白抗体的水平。

最后，根据产物的光密度值，结合标准曲线进行定量分析，得
出血清中抗人球蛋白抗体的浓度。

根据浓度值，可以评估机体的免
疫状态，诊断疾病的发展和变化，指导临床治疗和预后判断。

总的来说，抗人球蛋白试验原理基于抗原与抗体的特异性结合，通过测定血清中的抗体水平，间接反映出机体的免疫状态。

该方法
操作简便，结果可靠，对于临床诊断和疾病监测具有重要意义，是
一种常用的免疫学实验方法。

抗人球蛋白试验名词解释

抗人球蛋白试验名词解释抗人球蛋白试验，这名字一听就让人觉得很专业，但其实它背后隐藏的故事可有意思了。

这项试验主要用来检查我们身体里是否有抗人球蛋白，简单说就是看看咱们的免疫系统是不是在“闹脾气”。

想象一下，如果你身体里有些小家伙，不太喜欢人家进来，那就可能会出现一些问题。

这种情况就像是家里来了不速之客，你的免疫系统就像是家里的大保镖，准备上阵把他们赶走。

说到抗人球蛋白试验，得先来个背景介绍。

这试验最早是用来检测Rh血型的。

不知道大家有没有听过Rh阴性和阳性，有点像是血液的身份标签。

你要是Rh阴性，怀孕的时候可得多留意，这就像是一个隐形的风险。

想象一下，孕妈肚子里有个小宝宝，万一宝宝的血型和妈的不一样，这可就麻烦了。

抗人球蛋白试验就像是给妈妈做的一次安全检查，看看是否会对宝宝造成影响。

听起来很严肃，但其实就是为了确保妈妈和宝宝能平安无事。

再说说这试验是怎么做的。

你得去医院，医护人员会抽一点血，简单得就像打个小针一样，没啥好怕的。

血抽完之后，实验室的小伙伴们就开始忙碌了。

他们会把血液放到特定的试剂里，看看有没有抗体出现。

要是抗体阳性，那就意味着免疫系统在“闹脾气”，可能会对胎儿造成威胁。

这个结果就像是给你发的“注意信号”，提醒你注意身体，别让不该来的小家伙上了你的船。

不过，别担心，如果结果是阴性，那就是大大的安心了！就像是过关斩将，一路畅通无阻。

那时候，你只需继续享受怀孕的快乐，顺其自然就好。

可如果结果是阳性，医生会给你一些建议，可能需要进一步检查，甚至可能要考虑一些治疗措施。

别急，这些都是为了确保宝宝的安全，医生就像是守护者，时时刻刻为你和宝宝的健康把关。

说到这里，有些朋友可能会想，为什么我们身体里会有抗人球蛋白呢？这其实跟我们的免疫系统有关，免疫系统是个复杂的大家伙，时不时就会对外界的“入侵者”作出反应。

这种反应是过度的，就像是一个小孩儿在看到陌生人时特别紧张，结果把所有人都当成了“坏人”。

这时候，身体里的抗人球蛋白就可能出现了，开始对抗那些本不该对抗的东西。

抗人球蛋白实验步骤

抗人球蛋白实验步骤
抗人球蛋白实验是一种常用的免疫学实验方法，以下是一种常见的实验步骤：
1. 准备实验材料：包括待检样本、抗人球蛋白抗体、标记有荧光物质的二抗、缓冲液和试管等。

2. 样本处理：待检样本（如血清、尿液等）需要进行预处理，例如离心等操作，以提取样本中的球蛋白。

3. 制备工作液：根据实验要求和所使用的抗体种类，配制合适的缓冲液。

4. 样本和标准品的加样：将待检样本和不同浓度的标准品加入试管中。

5. 加入抗体：向每个试管中加入特异性的抗人球蛋白抗体，与样本中的球蛋白结合形成免疫复合物。

6. 反应：将试管放置在适当的温度和时间下，使抗体与球蛋白反应。

7. 洗涤：用适当的缓冲液洗涤掉未结合的抗体和其他杂质。

8. 加入二抗：加入标记有荧光物质的二抗，与抗人球蛋白抗体结合。

9. 再次洗涤：用缓冲液洗涤去除未结合的二抗。

10. 测定：使用荧光分析仪等设备进行测定，检测样本中荧光强度的变化。

11. 数据分析：根据测定结果，计算出样品中球蛋白的浓度。

以上是抗人球蛋白实验的一般步骤，不同实验目的和实验方法可能会有所不同，具体操作的详细步骤应根据具体实验方案进行。

实验7 直接抗人球蛋白实验

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解决方案：试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
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受检标本
红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀） 1000g 离心3min 分离上层血浆
2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间（1000g离心1min）
（注意操作轻柔，防溶血！）
3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
• 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗 IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。
• 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈阴性反应。
• 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳性。
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实验重点掌握： • 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备用
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未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
• 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
• 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g离心 15s，观察凝集，记录结果。
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结果判定

coombs试验的名词解释

coombs试验的名词解释Coombs试验：红细胞免疫学的关键技术引言：红细胞免疫学是研究与红细胞免疫反应相关的科学领域，其中Coombs试验作为一种重要的实验性技术，被广泛应用于临床血液学和免疫学领域。

本文将对Coombs试验的原理、分类、临床应用以及局限性等方面进行阐述。

一、Coombs试验的原理Coombs试验，又称抗人球蛋白试验，是一种通过检测体内是否存在抗体与红细胞表面抗原结合的方法。

它以兔抗人球蛋白血清（抗凝血清IgG或IgM）为试剂，通过特异性免疫反应实现对凝固红细胞进行识别和检测。

Coombs试验能够辅助诊断多种血液免疫相关疾病，如自身免疫性溶血性贫血、血小板减少性紫癜等。

二、Coombs试验的分类Coombs试验可分为直接抗人球蛋白试验（直接Coombs试验）和间接抗人球蛋白试验（间接Coombs试验），其基本原理和应用略有不同。

1. 直接Coombs试验：直接Coombs试验是通过检查患者的红细胞表面是否存在已结合由抗体携带的补体成分，从而判断溶血性贫血的机制。

这种试验适用于单纯性自身免疫性溶血性贫血、输血反应和新生儿溶血病等疾病的诊断。

2. 间接Coombs试验：间接Coombs试验主要用于检测患者血清中是否存在抗红细胞抗体。

它的操作步骤相对复杂，包括先将患者血清与试验红细胞混合反应，然后加入抗人球蛋白血清观察结果。

此试验可用于溶血性疾病的诊断和输血前血型和交叉配血的预测。

三、Coombs试验的临床应用Coombs试验在临床血液学和免疫学领域具有广泛的应用价值。

1. 自身免疫性溶血性贫血的诊断：通过直接Coombs试验，医生可以确定患者是否存在红细胞被自身抗体损伤而导致溶血性贫血。

此外，通过间接Coombs试验，可以检测出患者体内是否存在抗红细胞抗体，从而指导临床治疗。

2. 输血前血型和交叉配血：通过间接Coombs试验，医生可以在进行输血前，检测受血者体内是否存在抗受血者抗体，为准确进行血型鉴定和交叉配血提供重要参考。

抗人球蛋白试验，又称Coombs’的重要依据。

【参考值】正常人直接与间接试验均为阴性，Coombs’试验阴性有时并不能排除AIHA。

【临床意义】直接试验是检查被检红细胞上有无不完全抗体，间接试验是检查血清中游离的不完全抗体。

直接Coombs’试验较间接试验对AIHA更有诊断价值。

用特异性单价抗血清可将AIHA 分为三型：IgG／C3阳性，占67％；单独IgG性，占20％；单独C3性，占13％；阳性结果本试验阳性结果主要见于下列几种情况：1.自身免疫性贫血，（IgG）型引起的溶血性贫血，本试验直接反应常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳性。

2.型：直接反应阳性，间接反应阴性，以上二型如以正常红细胞先与有关药物于37℃培育后再加病人血清、间接反应均为阳性。

③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体通常为IgM，偶有IgG 型者，直接反应为阳性，间接反应阴性，但如用IgG抗血清做试剂则结果大部分均为阴性，但如培育时加入新鲜正常人血清（供应补体）则结果为阳性。

37℃下进行）由于本病红细胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗IgG或抗IgM抗血清做试验时，则结果阴性，如以抗补体的抗血清做试验则直接反应阳性。

4.新生儿同种免疫溶血病，因Rh血型不合所致溶血病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合引起的溶血病，结果常为阴性或弱阳性。

5.红细胞血型不合引起的输血反应，ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏以前，直接反应阳性，Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾妊娠胎儿为Rh阳性者，间接反应阳性，如无上述接触，第一次输血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变为阳性。

6.SLE铅中毒、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等，病人直接反应亦可阳性，阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性发作后用抗补体血清做试验直接反应常为阳性。

直接抗人球蛋白试验原理

直接抗人球蛋白试验原理抗人球蛋白是直接抗人球蛋白试验中的重要试剂。

抗人球蛋白是由兔、羊等动物免疫人类IgG和/或IgM制备而成。

在制备过程中，先将兔、羊等动物注射人类IgG和/或IgM，使其产生抗体。

然后将动物的血清收集，离心去除血细胞和血浆，得到抗人球蛋白。

2. 直接抗人球蛋白试验的步骤（1）取被测血液样本。

在抗凝管中加入适量的抗凝剂（EDTA、肝素等），轻轻颠倒管子使其混匀。

（2）离心。

将抗凝管中的血液样本离心，离心后将上清液倒入离心管中。

（3）洗涤红细胞。

将离心管中的红细胞沉淀洗涤4-5次，去除血浆和细胞碎片。

（4）加入抗人球蛋白。

将抗人球蛋白加入洗涤后的红细胞中，使其与红细胞表面的抗体结合。

（5）离心。

将含有抗人球蛋白的红细胞离心，去除上清液。

（6）检测结合情况。

加入适量的辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗兔IgG抗体，使其与抗人球蛋白结合。

HRP标记的抗兔IgG抗体能与抗人球蛋白结合的红细胞表面的IgG和/或IgM结合，形成颜色反应。

（7）检测结果。

颜色反应的程度与红细胞表面的抗体和补体结合的程度成正比，可通过比较样品与对照的颜色反应程度来判断是否存在抗体和补体结合于红细胞表面。

3. 结果的解释直接抗人球蛋白试验结果可分为阳性和阴性两种。

阳性结果表示被测血液中存在抗体和/或补体结合于红细胞表面，可能是自身免疫性溶血性贫血、新生儿溶血病等疾病的表现。

阴性结果表示被测血液中不存在抗体和/或补体结合于红细胞表面。

4. 注意事项（1）抗人球蛋白试验前应检查被测血液中是否存在抗凝剂，如存在应及时更换。

（2）洗涤红细胞时应注意避免过度洗涤，以免破坏红细胞膜。

（3）HRP标记的抗兔IgG抗体应保存在4℃以下，避免受热、受光、受冻等影响。

（4）进行抗人球蛋白试验时应严格遵守实验室安全操作规程，避免对人身安全造成威胁。

总之，直接抗人球蛋白试验是一种常用的检测血液中抗体和补体结合于红细胞表面的试验，可用于诊断自身免疫性溶血性贫血、新生儿溶血病等疾病。

Coombs试验

Coombs试验Coombs试验，又称抗球蛋白试验，是一种用于检测体内自身免疫性溶血性贫血的实验方法。

本试验以Coombs试验的发现者、英国医生Coombs的名字命名。

Coombs试验通常用于诊断各种溶血性贫血的类型，包括自身免疫性溶血性贫血、血型不合溶血性贫血等。

背景自身免疫性溶血性贫血是一种由免疫系统错误地攻击自身红细胞导致的疾病。

在自身免疫性溶血性贫血患者的体内，免疫系统产生抗体，特异性地结合在红细胞表面抗原上，导致红细胞被破坏，引起贫血。

Coombs试验可以检测这些自身抗体的存在。

实验方法Coombs试验包括直接抗人球蛋白试验和间接抗人球蛋白试验两种。

在直接抗人球蛋白试验中，将待测血清与人球蛋白混合，然后加入抗人球蛋白抗体，在显微镜下观察是否有红细胞凝集现象。

如果有红细胞凝集发生，说明血清中含有对红细胞的自身抗体。

而在间接抗人球蛋白试验中，先将待测血清与健康人红细胞混合反应，然后再进行直接抗人球蛋白试验的操作，以检测体液内是否有自身抗体。

应用Coombs试验在临床上有重要的应用价值。

通过该试验，医生可以确定患者是否患有溶血性贫血，并进一步了解溶血性贫血的类型。

根据Coombs试验的结果，医生可以制定相应的治疗方案，例如使用激素抑制免疫系统、输血治疗等。

此外，Coombs试验还被用于特定药物引起的溶血性贫血的诊断。

结语Coombs试验是一项重要的实验方法，可以帮助医生诊断溶血性贫血及其类型，为患者的治疗提供指导。

通过深入了解Coombs试验的原理和应用，医护人员可以更好地应对溶血性贫血等相关疾病，提升患者的生活质量。

抗人球蛋白实验

抗人球蛋白实验，又称Coombs’实验，是诊断(AIHA)的重要依据。

【参考值】正常人直接与间接实验均为阴性，Coombs’实验阴性有时并非能排除AIHA。

【临床意义】直接实验是检查被检红细胞上有无不完全抗体，间接实验是检查血清中游离的不完全抗体。

直接Coombs’实验较间接实验对AIHA更有诊断价值。

用特异性单价抗血清可将AIHA分为三型：IgG／C3阳性，占67％；单独IgG性，占20％；单独C3性，占13％；阳性结果本实验阳性结果主要见于下列几种情形：1.自身免疫性贫血，（IgG）型引发的溶血性贫血，本实验直接反映常呈强阳性，间接反映大多阴性，但亦可阳性。

2.药物诱发的①型：直接及间接反映均阳性。

②青霉素型：直接反映阳性，间接反映阴性，以上二型如以正常红细胞先与有关药物于37℃培育后再加病人血清、间接反映均为阳性。

③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体一般为IgM，偶有IgG型者，直接反映为阳性，间接反映阴性，但如用IgG抗血清做试剂则结果大部份均为阴性，但如培育时加入新鲜正常人血清（供给补体）则结果为阳性。

3.综合征直接反映阳性，间接反映阴性（实验需在37℃下进行）由于本病红细胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，若是用抗IgG或抗IgM抗血清做实验时，则结果阴性，如以抗补体的抗血清做实验则直接反映阳性。

4.新生儿同种免疫溶血病，因Rh血型不合所致溶血病，直接及间接反映均强阳性，持续数周、换血输血后数天内可变成阴性，由于“ABO”血型不合引发的溶血病，结果常为阴性或弱阳性。

5.红细胞血型不合引发的输血反映，ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏以前，直接反映阳性，Rh阴性者如过去不曾同意过Rh阳性者的血或曾怀胎胎儿为Rh阳性者，间接反映阳性，如无上述接触，第一次输血后（Rh阳性的血），数天之内间接反映也会变成阳性。

6.其它在、SLE、恶性淋巴瘤、、癌肿、铅中毒、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等，病人直接反映亦可阳性，阵发性酷寒性血红蛋白尿症患者中，急性发作后用抗补体血清做实验直接反映常为阳性。

【名称】抗人球蛋白试验

【名称】抗人球蛋白试验【英文名】anti-human globulin test【别名】Coombs试验【概述】抗人球蛋白试验又称Coombs试验，是检查不完全抗体的一种很好的方法。

将抗人球蛋白血清加入已致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白(即使其致敏的不完全抗体)与抗人球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集。

抗人球蛋白血清除了可以测定红细胞上IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测补体组分(C、C)。

【原理】凝集反应。

【试剂】(1)直接抗人球蛋白试验：①抗人球蛋白血清(广谱及单价)。

②5%受检者红细胞。

③5%IgG致敏红细胞。

(2)间接抗人球蛋白试验：①抗人球蛋白血清(广谱及单价)。

②受检血清(或已知抗体的血清)。

③5%已知抗原的红细胞悬液(或5%受检红细胞悬液)。

④不完全抗D血清。

⑤AB型血清。

⑥5%D阳性红细胞悬液。

【操作方法】(1)直接抗人球蛋白试验：①在标记好的10或12×60mm试管内加1滴5%受检者红细胞生理盐水悬液。

再用生理盐水洗涤3～4次。

末次洗涤后，将上清液全部倾出，尽量吸干，立即加入1～2滴最适广谱抗人球蛋白血清，混匀。

②以1000r/min离心15s，借助光镜检查。

从试管底部松动红细胞，轻轻地摇动试管直到松动所有的细胞，然后反复轻轻地倾斜试管，直到呈现均匀的细胞或者凝集物为止。

③若为阴性，再加1滴5%IgG致敏的红细胞，以1000r/min离心15s。

如凝集，表明原先的阴性结果是正确的。

如不凝集，则不是先前的洗涤不充分，就是抗人球蛋白试剂失效之故。

这是一个很重要的对照。

④直接抗人球蛋白试验判断为阳性者，应继续用单特异性的抗人球蛋白血清试验，以便确定红细胞是被IgG致敏，还是受补体致敏。

单价特异性抗人球蛋白血清的使用方法与广谱抗人球蛋白血清相同。

(2)间接抗人球蛋白试验：①在标记好的10(12)×70mm试管内加3滴患者血清，再加5%红细胞悬液1滴，另外将2滴不完全抗D血清加入阳性对照管中2滴AB型血清加入阴性对照中，分别加入5%阳性红细胞悬液1滴，混合后，放37℃水浴1h。

coombs

Coombs试验
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Coombs试验即抗人球蛋白试验，是检测血液中温反应性抗体的一种方法，也是诊断自身免疫性溶血性贫血的重要指标。温抗体中50％以上由IgG介导，其次为IgM，IgA和C3d等，因此本试验应分选各种单克隆抗体同时测定。Coombs试验分为直接试验(直接反应)和间接试验(间接反应)：直接试验的目的是检查红细胞表面的不完全抗体；间接试验的目的是检查血清中存在游离的不完全抗体。
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1945年，英国免疫学家Coombs等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验，故称之，亦即抗人球蛋白试验。这是诊断免疫溶血性贫血的主要方法。最早和现在常用的抗人球蛋白试剂是广谱抗血清，即抗IgG+抗补体。国外研究发现，如采用特异的抗IgG、IgM或抗补体的试剂，红细胞表面的抗体是IgG和补体约占40%，单纯IgG占35%，单纯补体占10%，极少数病例是IgA或IgM。补体几乎都是C 3 b，即未激活的C 3 。 Coombs直接试验：将洗涤过的红细胞2%混悬液加入Coombs试剂，混和后离心一分钟促进凝集。如果肉眼或显微镜下能见到红细胞凝集，即为阳性，说明红细胞表面有不完全抗体或补体。阳性结果可见于自体免疫溶血性贫血、输血反应、某些药物或疾病引起的免疫溶血性贫血。 Coombs间接试验：先将受试的血清加入等量5%适当的正常红细胞(Rh阳性的O型红细胞)，在37℃温育30～ 60分钟，以促使血清中的半抗体结合于红细胞上(致敏)，将红细胞充分洗涤，以后同直接试验。如果红细胞发生凝集而正常对照(未经与受检血清温育的正常红细胞)不凝集，即为阳性，表明受试的血清中存在不完全抗体。
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抗人球蛋白实验原理

抗人球蛋白实验原理引言：抗人球蛋白实验是一种常用的免疫学技术，用于检测抗体与特定抗原之间的相互作用。

该实验原理基于抗体与抗原的特异性结合，通过测量抗体与抗原结合的程度来评估免疫反应的强度。

本文将详细介绍抗人球蛋白实验的原理和步骤。

一、实验原理：抗人球蛋白实验是一种免疫沉淀实验，通过测量抗体与抗原结合后形成的免疫复合物的沉淀，来检测抗体与抗原之间的特异性结合。

抗人球蛋白实验的原理如下：1. 抗体制备：首先需要获得特异性抗体，可以通过免疫动物（如小鼠）注射人球蛋白，刺激其产生抗人球蛋白的抗体。

经过一系列处理和纯化步骤后，得到纯化的抗人球蛋白抗体。

2. 抗原标记：将待测抗原标记上适当的标记物，常用的标记物有放射性同位素、酶、荧光染料等。

标记抗原的目的是为了便于检测和测量。

3. 反应体系组装：将标记的抗原与抗人球蛋白抗体混合，形成抗原-抗体复合物。

该复合物具有特异性，只有抗体与抗原匹配才能结合。

4. 免疫沉淀：将反应体系加入沉淀剂，使抗原-抗体复合物沉淀下来。

通过离心将复合物沉淀到底部。

5. 沉淀洗涤：将沉淀后的复合物用洗涤液洗涤，以去除非特异性的结合物，提高检测的特异性。

6. 沉淀溶解：用适当的溶解液将沉淀复合物溶解，使其释放出标记物。

7. 测量标记物：根据标记物的性质和测量方法，选择适当的仪器和方法进行测量。

常用的测量方法有放射计数、酶标测定法、荧光测定法等。

二、实验步骤：抗人球蛋白实验的具体步骤如下：1. 制备抗体：选择适当的免疫动物（如小鼠），按照一定的免疫方案注射人球蛋白，刺激其产生抗人球蛋白的抗体。

2. 抗原标记：将待测抗原标记上适当的标记物，常用的方法有放射性同位素标记、酶标记、荧光标记等。

3. 反应体系组装：将标记的抗原与抗人球蛋白抗体混合，形成抗原-抗体复合物。

4. 免疫沉淀：将反应体系加入沉淀剂，使抗原-抗体复合物沉淀下来。

5. 沉淀洗涤：用洗涤液洗涤沉淀复合物，去除非特异性结合物。

实验7 直接抗人球蛋白实验

——直接抗人球蛋白试验阳性
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致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
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4
抗球蛋白试剂通常有三种： • 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗-
C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 • 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG • 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 • 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
• 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
• 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g离心 15s，观察凝集，记录结果。
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结果判定
进一步分析。
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直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断直接抗人球蛋白试验操作
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直接抗人球蛋白试验难点：难以获取致敏红细胞标本？
解决方案：试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
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受检标本
红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀） 1000g 离心3min 分离上层血浆
2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间（1000g离心1min）
（注意操作轻柔，防溶血！）
3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）

抗人球蛋白试验(直接法)

抗人球蛋白试验（直接法）简介抗人球蛋白试验（直接法）是一种常见的免疫学实验方法，用于检测机体内特定抗体（抗人球蛋白抗体）的水平和活性。

通过这一试验可以评估机体对人球蛋白的免疫反应情况，是许多研究和临床诊断工作中重要的实验手段之一。

实验原理抗人球蛋白试验（直接法）基于抗原-抗体相互作用的原理。

人球蛋白是一种外源蛋白，当人体受到人球蛋白的免疫刺激后，机体会产生抗人球蛋白抗体。

通过将待测血清与标准人球蛋白溶液混合反应，通过测定溶液中抗体与抗原结合的程度，进而评价该血清中抗人球蛋白抗体的水平。

实验步骤1.准备试剂：标准人球蛋白溶液、待测血清、辅助试剂等。

2.取等量的标准人球蛋白溶液和待测血清，混合均匀。

3.将混合溶液孵育一段时间，促使抗体与抗原结合。

4.添加特定试剂，使未结合的物质沉淀或产生其他特定反应。

5.通过光密度仪或其他检测仪器测定光密度值，计算出抗体水平。

实验结果分析实验结果以光密度值或其他测量指标呈现，一般抗体水平较高的样本对应较高的光密度值。

通过比较待测样本的结果与标准曲线或对照组的结果，可以判断该样本中抗人球蛋白抗体的水平及活性。

应用领域抗人球蛋白试验（直接法）在免疫学研究、临床诊断以及药物疗效评价等领域有着广泛的应用。

例如，在自身免疫性疾病的诊断中，该试验可帮助医生评估患者的免疫系统功能状态；在药物疗效评价方面，可用于监测药物对患者免疫功能的影响。

结论抗人球蛋白试验（直接法）是一种重要的实验技术，可以用于评估机体对人球蛋白的免疫反应水平。

通过本实验，我们可以深入了解机体免疫系统的功能状态，为研究和临床诊断提供有力的支持。

抗人球蛋白试验

抗人球蛋白试验1．原理:直接抗人球蛋白试验是检查体内致敏红细胞的方法，用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏。

如新生儿溶血病（胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏）溶血性输血反映（输入的不相合红细胞被受血者不完全抗体致敏）自身免疫性溶血性贫血（患者红细胞被自身抗体致敏）以及药物诱导产生的自身抗体（由甲基多巴药物，青霉素等所致）。

2．标本收集：取新鲜抗凝血（肝素抗凝）2ml ，颠倒混匀，立即送检。

3．存放：收到标本后，立即送检4．运输：送标本时避免振摇。

5．标本拒收的标准：标本不能有溶血现象发生，姓名、床号不符。

6．实验材料：6．1 试剂：抗人球蛋白血清（广谱及单价）6．2 用不完全抗D致敏5% Rho(D)阳性红细胞盐水悬液共阳性对照用。

操作如下：取3人O 型红细胞混合，生理盐水洗涤3次，取压积红细胞加等量抗D血清，置37℃水浴致敏1小时，取出后离心去除上清液再用盐水配成5%红细胞悬液。

6．3 正常人5% D阳性红细胞悬液(未致敏),供阳性对照用。

6．4 载玻片，吸头。

7．操作步骤:7．1 取收检者红细胞，以生理盐水洗涤3次，配成5% 红细胞盐水悬液。

7．2 上述5% 受检者红细胞悬液1滴置于玻片上，加抗人球蛋白血清1滴混匀。

7．3 阳性对照：加不完全抗D 血清致敏的5% D 阳性红细胞悬液1滴，加抗人球蛋白血清1滴混匀。

7．4 阴性对照：正常人5% D 阳性红细胞悬液1滴加抗人球蛋白血清1滴，混匀。

8．检验结果的判断与分析：如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检红细胞凝集者直接抗人球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。

9．质量控制：做阴、阳性对照，不用过期试剂。

10．注意事项：10．1标本采取后应立即进行试验,延迟或中途停止可使抗体从细胞上丢失。

10．2受检红细胞一定要用盐水洗涤3次,除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白,以防止假阴性结果。

10．3 最好对阴性结果进行核实，即在试管中加1滴IgG致敏红细胞，如果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白血清确实被消耗。