植物组培外植体消毒详解精选文档
最新植物组培外植体消毒详解
精品文档植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
(1)常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75% 酒精杀菌效果最好，95% 或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+ 可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2] ，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭精品文档这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
最新植物组培外植体消毒详解
植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
（2）消毒方法①茎尖、茎段及叶片等的消毒消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。
植物组织培养消毒方法
植物组织培养消毒方法
植物组织培养是一种重要的生物技术，可以用于植物繁殖、基因转化等方面。
在进行植物组织培养时，消毒是非常重要的一步，可以有效地避免外源性污染，保证培养物的纯度和质量。
下面是植物组织培养消毒的方法：
1. 表面消毒法
表面消毒法是最常用的植物组织培养消毒方法之一。
首先，将植物材料用水冲洗干净，去除表面的泥沙和杂质。
然后，将植物材料放入含有70%乙醇的烧杯中，用力摇晃，使其充分接触乙醇。
接着，将植物材料转移到含有10%次氯酸钠的烧杯中，同样用力摇晃，使其充分接触次氯酸钠。
最后，将植物材料转移到含有无菌水的烧杯中，反复冲洗数次，去除次氯酸钠的残留物。
2. 氯气消毒法
氯气消毒法是一种高效的植物组织培养消毒方法。
首先，将植物材料放入密闭的容器中，加入适量的水，然后向容器中通入氯气，使其充分接触植物材料。
通气时间一般为30分钟至1小时。
接着，将容器打开，用无菌水反复冲洗植物材料，去除氯气的残留物。
3. 紫外线消毒法
紫外线消毒法是一种无化学残留的植物组织培养消毒方法。
首先，将植物材料放入无菌室中，然后将紫外线灯照射在植物材料上，照射时间一般为30分钟至1小时。
紫外线能够破坏细菌、病毒等微生物的DNA，从而达到消毒的效果。
但是，紫外线消毒法对于一些耐药菌和孢子并不十分有效。
以上是植物组织培养消毒的三种常用方法，不同的消毒方法适用于不同的植物材料和实验要求。
在进行植物组织培养时，应选择合适的消毒方法，并严格按照操作规程进行操作，以保证培养物的纯度和质量。
植物组培外植体消毒详解（共5篇）
植物组培外植体消毒详解（共5篇）第一篇：植物组培外植体消毒详解植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
植物表面消毒
植物组织培养外植体选择及其消毒★外植体选择的原则：1、必须含有活细胞。
2、幼嫩组织所含活跃分裂的细胞比例高。
3、母珠必须健康并且无任何腐烂或生病的迹象。
4、母珠必须活跃生长并且不会立即进入休眠。
★外植体的确定选择：1、茎尖（植物组织培养中应用最多，繁殖率高，不易发生遗传变异，但取材有限）；2、茎段（采用嫩茎的切段促进腋芽萌发，取材容易）；3、叶（幼嫩叶片组织通过愈伤组织或不定芽分化产生植株，取材容易，操作方便，但易发生变异）；4、花球和花蕾；5、种子、根、块根、块茎、花瓣等。
★消毒的原则：消毒剂与外植体应接触足够长的时间以除去外植体表面的微生物，但应尽量减少对外植体细胞的破坏。
★消毒方法：冲洗植物材料除去泥土等大的颗粒→浸入70-75％乙醇，有利于植物表面的浸湿→用消毒剂，如：5-20％NaClO溶液（加1滴表面活性剂）表面消毒5-10min→用无菌水冲洗至少3遍→与消毒剂接触过的切面在转移到无菌培养基前应切去，因为消毒剂会杀死外露的细胞从而影响营养吸收→切取外植体，通常为10mm的茎段和直径10mm的叶片部分（太大激素作用减弱，太小则不易成活）。
★消毒注意事项：1、表面消毒剂对植物组织是有害的，应正确选择消毒剂的浓度和处理时间，以减少组织的死亡。
2、在表面消毒后，必须用无菌水漂洗材料3次以上以除去残留杀菌剂。
3、与消毒剂接触过的切面在转移到无菌基质前需将其切除，因为消毒剂会阻碍植物细胞对基质中营养物质的吸收。
4、若外植体污染严重则应先用流水漂洗1小时以上或先种子培养得到无菌种苗，然后用其各个部分建立组织培养。
5、消毒剂用HgCl2效果最好（使用时间在3－8min），但对人的危害最大，用后要用水冲洗至少5次。
植物外植体消毒、接种及愈伤组织(芽)诱导
常用消毒剂的区别：
植物细胞工程原理与技术实验
仪器、器具、试剂等：
超净工作台、养基、无菌水、镊子、培养皿、大烧杯、一块脱脂棉、酒 精灯、喷壶、火柴、2%次氯酸钠、75%乙醇、95%乙醇,无菌滤纸等
植物细胞工程原理与技术实验
操作步骤：
1 培养基、用具灭菌（实验一已完成） 2 将所用物品放出超净台中（除实验材料外），打开超净工作台的紫外灯，照射
实验二 植物外植体消毒、接种及愈伤组织（芽）诱导
• 实验目的： • 通过亲自操作掌握外植体接种的无菌操作技术。 • 领会无菌培养对实验材料消毒、接种的要求。 • 学习观察记载的方法。
植物细胞工程原理与技术实验
实验原理：
外植体消毒：外植体接种前要保证外植体处于无菌状态，因此，对于带菌的植物 材料，要进行植物外植体表面消毒。消毒既要使材料表面细菌除去，又要保证植 物材料的活性，这是取得组织培养成功的最基本的前提和重要保证。 接种：已消毒的外植体经无菌操作，接到培养基上，这一过程叫做接种。
愈伤组织诱导：根据植物细胞的全能性，即分化细胞保留着全部的基因组，具有生 长发育所需的全部遗传信息，具有在适宜条件下发育成完整个体的潜能。
外植体在合适的培养基上，通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构的 功能的细胞团------愈伤组织。
影响外植体形成愈伤组织和愈伤组织分化的重要因素是植物生长调节剂。
实验中的注意事项 ：
75%乙醇30s
植物细胞工程原理与技术实验
实验中的注意事项 ：
次氯酸钠10min
旋转
无菌水洗4-5次
取出成熟胚
打开培养基
植物细胞工程原理与技术实验
接种
封口并标记
观察记录：
植物叶片外植体的处理方法
植物叶片外植体的处理方法
植物叶片外植体的处理方法是指将植物的叶片作为外植体进行培养和繁殖的技术方法。
以下是一种常用的外植体处理方法：
1. 叶片的选择：选择健康、无病虫害和损伤的叶片作为外植体，通常选择中部或基部偏下的叶片，利于进行组织培养。
2. 表面消毒：将采集好的叶片放入含有漂白粉或酒精的消毒液中，进行表面消毒。
消毒时间和浓度需根据具体植物种类来确定。
3. 切割叶片：用无菌手术刀将表面消毒好的叶片切割成适当大小的外植体，每个外植体应保留一个叶脉。
4. 培养基接种：将切割好的外植体置于含有适当激素和营养物质的培养基上进行接种，接种时需注意无菌操作，避免细菌和霉菌污染。
5. 培养条件控制：对接种好的外植体进行培养，控制适当的光照、温度、湿度和培养基pH值等条件，不同植物种类对培养
条件的要求也不同。
6. 外植体延长：外植体经过一段时间的培养后，可以在培养基上产生新的根、茎或叶，使外植体逐渐发育壮大。
7. 移栽：外植体生长到一定程度后，可以将其移栽到适宜的生长环境中，如土壤中继续生长。
需要注意的是，外植体处理方法的具体步骤可能会因植物种类、培养目的和实验设计等因素而有所不同，所以最好根据具体情况做出相应的调整和改进。
植物组织培养实务--外植体的选择与消毒
植物组织培养实务--外植体的选择与消毒1、外植体的选择外植体是指植物组织培养中的各种接种材料。
从理论上讲，植物细胞都具有全能性，能够再生新植株，任何器官、任何组织、单个细胞和原生质体都可以作为外植体。
但实际上，不同品种、不同器官之间的分化能力有巨大差异，培养的难易程度不同。
为保证植物组织培养获得成功，选择合适的外植体是非常重要的。
（1）选择优良的种质及母株无论是离体培养繁殖种苗，还是进行生物技术研究，培养材料的选择都要从主要的植物入手，选取性状优良的种质、特殊的基因型和生长健壮的无病虫害植株。
尤其是进行离体快繁，只有选取优良的种质和基因型，离体快繁出来的种苗才有意义，才能转化成商品；生长健壮无病虫害的植株及器官或组织代谢旺盛，再生能力强，培养后容易成功。
（2）选择适当的时期组织培养选择材料时，要注意植物的生长季节和生长发育阶段，对大多数植物而言，应在其开始生长或生长旺季采样，此时材料内源激素含量高，容易分化，不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高。
若在生长末期或已进入休眠期时采样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应。
花药培养应在花粉发育到单核靠边期取材，这时比较容易形成愈伤组织。
百合在春夏季采集的鳞茎、片，在不加生长素的培养基中，可自由地生长、分化；而其他季节则不能。
叶子花的腋芽培养，如果在1月至翌年2月间采集，则腋芽萌发非常迟缓；而在3-8月间采集，萌发的数目多，萌发速度快。
（3）选取适宜的大小培养材料的大小根据植物种类、器官和目的来确定。
通常情况下，快速繁殖时叶片、花瓣等面积为5mm2，其他培养材料的大小为0.5~1.0cm。
如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。
材料太大，不易彻底消毒，污染率高；材料太小，多形成愈伤组织，甚至难以成活。
（4）外植体来源要丰富为了建立一个高效而稳定的植物组织离体培养体系，往往需要反复实验，并要求实验结果具有可重复性。
因此，就需要外植体材料丰富并容易获得。
（5）外植体要易于消毒在选择外植体时，应尽量选择带杂菌少的器官或组织，降低初代培养时的污染率。
植物组培外植体消毒详解
植物组培外植体消毒详解Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
植物组织培养：第4章 外植体的选择、灭菌及培养
防细菌滤膜的网孔的直径为0.45μm以下，当溶液 通过滤膜后，细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直 径而被阻。
在需要过滤灭菌的液体量大时，常使用抽滤装置； 液量小时，可用注射器。使用前对其高压灭菌，将滤 膜装在注射器的靠针管处，将待过滤的液体装入注射 器，推压注射器活塞杆，溶液压出滤膜，从针管压出 的溶液就是无菌溶液。
由于在消毒后的环境里和物品上没有活着的微生物， 所以通过严格消毒灭菌的操作空间(接种室、超净台、 等)和使用的器皿，以及操作者的衣着和手都不带任何 活着的微生物。在这样的条件下进行的操作，就叫做无 菌操作。
一 常用的灭菌方法 物理方法
化学方法
湿热灭菌(常压或高压蒸煮) 干热灭菌(烘烧和灼烧) 射线处理(紫外线、超声波、微波) 过滤除菌 大量无菌水冲洗
3. 叶片：由于叶片的来源最有保证，因而许多植物的组 织培养以叶片为起始培养物，如，玫瑰、海棠、矮牵 牛和豆瓣绿等许多植物。
4.子叶或下胚轴：对一些培养较困难的植物，则往往可 以通过其子叶或下胚轴来建立其组织培养体系。 若有可能，最好对培养较困难的植物各部位的诱导及 分化能力进行比较，从中筛选出最佳外植体。
甲醛(福尔马林)
过氧化氢 高锰酸钾 来苏儿 漂白粉 次氯酸钠 升汞(氯化汞) 酒精
（一）物理方法灭菌
1.湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）—培养基灭菌
培养基在制备后的24h内完成灭菌工序。高压灭菌 的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢， 压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度 也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。 在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐 热的芽孢。
植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌
植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌一、目的要求1、通过实验，培养学生良好的卫生观念，确立组织培养的无菌意识。
2、掌握组织培养室的消毒及灭菌方法。
3、掌握培养用具的干热灭菌的一般操作技术。
二、仪器与用具1、用具：喷雾器、工作服、口罩、手套等。
2、药品：2%新洁尔灭，高锰酸钾，甲醛，70%酒精。
三、方法步骤（一）植物组织培养室的灭菌1、地面、墙壁和工作台的灭菌：用2%新洁尔灭喷雾。
（1）配方：取新洁尔灭原液20ml，加水980ml，配成2%新洁尔灭溶液。
（2）方法：将配好的2%新洁尔灭溶液倒入喷雾器内，进行均匀喷雾。
（3）注意事项：①墙壁、角落、地面喷雾要均匀，不要遗漏；②注意安全，在喷房顶时，要特别小心，防止药液雾滴掉入眼睛。
2、无菌室和培养室的灭菌：用甲醛和高锰酸钾熏蒸，1年中熏蒸1-2次。
（1）配方：每立方米空间用甲醛10ml加高锰酸钾5g的配比液熏蒸。
（2）方法：首先房子要密封。
然后在房子中间放一口缸或大烧杯，将称好的高锰酸钾放入缸内，再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入缸内，完毕，人迅速离开，并关上门，密封3天。
（3）注意事项：①操作前要戴好口罩及手套；②倒入甲醛时要小心，因为甲醛遇到高锰酸钾会迅速沸腾，并产生大量烟雾。
操作时人要迅速避开烟雾；③3天后，打开房间，搬走费液缸；一周后，方可进入操作。
3、在已经熏蒸过的房间内，用70%酒精纱布擦洗培养架、工作台。
4、用紫外灯照射20—30min。
5、使用前，再用70%酒精喷雾，使空间灰尘落下。
（二）培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）（1）洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。
自然晾干或烘箱干燥。
（2）包扎：用牛皮纸、报纸、纱布或锡箔纸把玻璃器皿和金属器械分别包扎好。
（3）装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水（水要淹没电热丝）。
（切忌干烧！）（4）装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶、装蒸馏水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金属器械等。
请介绍初代培养时,外植体灭菌的一般操作流程
请介绍初代培养时,外植体灭菌的一般操作流程植物组织培养技术是一种重要的生物技术，它可以利用植物体内的细胞分裂和分化的特性，实现对植物的无性繁殖、基因转化和育种等方面的研究和应用。
在进行植物组织培养时，为了避免外源微生物的污染和干扰，需要对外植体进行灭菌处理。
下面将介绍初代培养时外植体灭菌的一般操作流程。
一、外植体的选择和处理在进行组织培养前，需要从植物体中选取适合的外植体。
通常选择的外植体包括叶片、茎段、根尖等。
外植体的选择应该注意到其发育状态、大小、形态等因素。
同时，在选择外植体的过程中，需要注意对其进行清洗和表皮去除的处理，以保证灭菌的效果。
二、灭菌方法的选择在进行外植体灭菌时，需要选择适合的灭菌方法。
常用的灭菌方法包括化学灭菌和物理灭菌两种。
化学灭菌主要是通过使用消毒剂，如酒精、过氧化氢、次氯酸钠等，来杀灭外植体表面的微生物。
物理灭菌主要是通过高温、紫外线、电离辐射等方式来灭菌。
在选择灭菌方法时，需要考虑到其对外植体的影响，以及灭菌效果等因素。
三、灭菌操作流程1. 准备消毒液：根据选择的灭菌方法，准备相应的消毒液。
如果是化学灭菌，可使用70%的酒精或0.1%的次氯酸钠溶液；如果是物理灭菌，可使用高压蒸汽或紫外线灭菌设备。
2. 外植体的处理：将选好的外植体进行清洗和表皮去除的处理，以去除表面的微生物和杂质。
3. 外植体的浸泡：将处理好的外植体放入消毒液中浸泡，时间一般为5-10分钟。
4. 消毒液的去除：将浸泡好的外植体取出，用无菌的纸巾将其表面的消毒液吸干。
5. 外植体的干燥：将去除消毒液的外植体放在无菌的工作台上，用吸水纸或干燥器将其表面的水分吸干。
6. 灭菌：将处理好的外植体放入灭菌器中进行灭菌。
灭菌时间和温度根据灭菌方法和外植体的特性而定，通常为20-30分钟。
7. 储存：将灭菌好的外植体放在无菌的保存袋中，储存在无菌的环境中，以待后续的组织培养操作。
四、注意事项在进行外植体灭菌时，需要注意以下事项：1. 消毒液的选择和浓度应该适当，避免对外植体产生不良影响。
简述外植体消毒的一般步骤
简述外植体消毒的一般步骤外植体消毒是一项非常重要的步骤，它能够保证外植体在植入过程中的安全性和生物相容性。
在外植体操作中，消毒程序的正确执行可以减少感染的风险，并提供一个理想的环境来促进愈合和整合。
下面是一般的外植体消毒步骤：第一步：准备工作在进行外植体消毒之前，首先要准备所有必要的工具和消毒剂。
工具包括外植体引导针、外植体引导模板、外植体钻头等。
消毒剂可以使用酒精、碘酒或含氯消毒液。
第二步：清洁工具在进行消毒之前，必须确保所有工具和设备都是清洁的。
可以用去菌刷或者清洁剂将工具进行清洗，以去除残留的血液、唾液和细菌等。
第三步：保证无菌操作为保证无菌操作，必须穿戴无菌手套和洁净实验服。
同时，确保工作台面干净，并使用消毒液擦拭。
第四步：消毒外植体在进行消毒之前，需要将外植体从原包装中取出，并将其置于无菌的容器中。
然后，使用适当的消毒剂将外植体进行浸泡。
消毒剂的种类和浸泡时间取决于外植体的材料和厂家的建议。
第五步：清洗外植体在消毒的过程中，外植体可能残留一些消毒剂。
为了去除这些残留物，需要将外植体用无菌生理盐水进行彻底的冲洗。
第六步：储存外植体一旦外植体经过消毒和清洗，就可以将其用无菌盒子或包装进行储存，以防止再次受到污染。
同时，标记每个外植体的型号和日期，以便追踪外植体的使用情况。
第七步：临床操作在外植体植入时，需要遵循严格的无菌操作规范。
医生必须穿戴干净的手套，将外植体直接植入预定的位置。
在植入之前，可以使用适当的锥形钻头进行预钻。
第八步：术后护理植入外植体后，术后护理也非常重要。
医生会提供一些口腔护理产品和建议，以帮助患者恢复和维护口腔的卫生。
总结起来，外植体消毒是一项非常重要的步骤，它能够保证外植体的安全性和生物相容性。
在进行消毒之前，必须做好准备工作，清洁工具和保证无菌操作。
然后，将外植体进行消毒和清洗，并妥善储存。
在临床操作中，要遵循无菌操作规范。
术后护理也非常重要。
通过正确的外植体消毒步骤，可以减少感染的风险，并提供一个良好的环境来促进愈合和整合。
附录4植物组织培养中外植物表面的消毒-苏教版选修1生物技术实践教案
附录4：植物组织培养中外植物表面的消毒1. 背景外植物表面的杂菌、病毒等微生物对于植物组织培养非常不利，它们会繁殖并感染外植物，造成组织失去生长能力，从而导致培养失败。
所以在植物组织培养过程中，对于外植物表面进行消毒是必不可少的环节。
2. 消毒步骤2.1 选择适宜的消毒剂消毒剂的选择至关重要，不同的消毒剂对于不同的微生物有不同的消毒效果。
但总的原则是：选择高效广谱的消毒剂，并严格按照说明书使用。
•原液消毒剂常用的有石灰作为消毒剂，石灰的作用是增加培养环境的碱度，增加微生物的灭菌率。
•75%酒精酒精具有快速杀灭菌的作用，对于大部分的微生物有效。
•过氧化氢过氧化氢是一种氧化性消毒剂，可以对细菌、病毒等具有破坏作用。
常用浓度为0.5%。
2.2 材料准备一些常见的材料包括：•消毒液：按照说明书配制消毒液；•安全剪刀和镊子：用于在消毒盘中拿取（转移）外植物；•换酒精棉或棉签：用于在操作过程中对镊子、剪刀等工具进行消毒。
2.3 操作步骤•步骤1：将待消毒的组织（或植株）用干净的剪刀切割成小块，接下来严格实行消毒操作；•步骤2：取出消毒液，倒入消毒盘中准备使用；•步骤3：将需要消毒的部分逐一刀除，镊子夹取，浸泡消毒液内约5min，或按要求局部消毒；•步骤4：消毒后再挑开，洗2~3遍净草,放入干净培养瓶中即可。
3. 注意事项为了确保消毒的效果，需要注意以下几点：•操作前必须认真阅读消毒剂说明书，按说明书的要求配制消毒液；•操作时要佩戴手套，避免消毒剂对皮肤造成损害；•注意安全，要将消毒液、手套等放在固定的地方，以免造成不必要的伤害；•操作时保证环境清洁，避免再次感染。
4. 结束语对于植物组织培养实验，消毒步骤是必不可少的环节，正确地进行消毒可以最大限度地避免微生物对于实验结果的影响。
希望通过这个附录，对大家关于植物组织培养中的消毒有更深入的了解。
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植物组培外植体消毒详
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植物组培外植体消毒详解
外植体的消毒
植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂
常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果
①酒精
酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞
又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠
次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉
漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢
也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭
这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
（2）消毒方法
①茎尖、茎段及叶片等的消毒
消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。
对于一些表面不光滑或长有绒毛的材料，可用洗涤剂清洗，必要时用毛刷充分刷洗，硬质材料可用刀刮。
消毒时在超净台上操作，先用70%酒精浸泡10~30s，以无菌水冲洗2~3次，然后按材料的老、嫩和枝条的坚实程度，分别采用2%次氯酸钠浸泡10~15min
或用%升汞浸5~10min。
消毒时要不断搅动，使植物材料与消毒剂充分地接触。
若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴Tween-20，最后用无菌水冲洗3~5次。
②果实及种子的消毒
先用自来水冲洗10~20min，再用酒精迅速漂洗一下。
果实用2%次氯酸钠浸10min，后用无菌水冲洗2~3次。
种子则先用10%次氯酸钠浸泡20~30min，难以消毒的可用%升汞消毒5~10min。
对于种皮太硬的种子，也可预先去掉种皮，再用4%次氯酸钠浸泡8~10min。
③花药的消毒
用于组织培养的花药多未成熟，其外面有花萼、花瓣或颖片保护，处于无菌状态。
消毒时将整个花蕾或幼穗用70%酒精浸泡数秒钟，然后用无菌水冲洗2~3次，再在漂白粉中浸泡10min，最后用无菌水冲洗2~3次。
④根及底下部器官的消毒
由于这类材料生长于土壤中，表面带菌量大，消毒较为困难。
可先用自来水冲洗，软毛刷刷洗，用刀切去损伤及污染严重部位，再用酒精漂洗后，置于%升汞中浸5~10min或2%次氯酸钠中浸10~15min，最后用无菌水冲洗3次。
在操作时要根据材料的大小、幼嫩、质地等差异做出判断后，再选择适宜的消毒剂种类、浓度和消毒时间，切不可生搬硬套。
消毒的最佳效果应以最大限度地杀死材料上的微生物，而又对材料的损伤最小为好。