叶黄素测定结果对比修改版

20120330叶黄素测定对比

叶黄素是饲料的非营养性添加剂，它有突出的生理着色作用。能用在家禽，水产动物和鸟的蛋黄、皮肤、羽毛以及肉的着色上，并有提高禽畜的免疫力的作用。中心实验室测定饲料中叶黄素含量的方法是使用有机溶剂提取叶黄素后，使用分光光度计测定提取液的吸光度，通过比色法计算得到叶黄素的含量。

分析的简洁步骤如下:称取试样3克左右于100mL干燥棕色容量瓶中，精确到0.1mg，加入30mL有正己烷、无水乙醇、甲苯、丙酮配成的混合溶剂和2mL40%氢氧化钾乙醇溶液，在56℃水浴20分钟，冷清后30ml正己烷，再用10%硫酸钠溶液定容，摇匀后放在暗处定容1小时；移取上清液5mL于50mL棕色容量瓶中，用正己烷定容，在474nm比色计算。

不同实验室检测结果对比如下：

从以上数据可以看出，此次对比测定结果是在允许误差范围内的。虽然如此，差值也体现了部分问题的存在。首先，差值有高也有低，不是同一相对偏高或者相对偏低，很可能是由于测定人操作稳定性造成的；其次，测定方法也会造成结果偏差，测定过程中使用的有机溶剂均是易挥发的液体，在操作过程在（56℃水浴20分钟）中随机挥

发的体积是不确定的，此外，加入30mL正己烷，没有标明是精确加入，造成计算时会有偏差；为什么会造成计算偏差呢？原因在于在定容时，加入30mL正己烷后，用10%硫酸钠溶液定容的，我们都知道抽提剂+正己烷，其中正己烷、甲苯等溶剂是不溶于硫酸钠的，加入硫酸钠（作用是除去醇溶性杂质）后抽提剂+正己烷就与硫酸钠分层，抽提剂+正己烷在上层，硫酸钠在下层，最后我们是从抽提剂+正己烷中抽取5毫升再用正己烷定容至50毫升后测定吸光度的。所以我们

说在56℃水浴20分钟，冷清后30ml正己烷，这时加入正己烷的量

很关键，加多了吸光度会偏低，加少了吸光度会偏高。

而且，我们用的是分光光度法测量的，分光光度法有一个缺陷就是准确度不高，也就是说对474nm波长下有吸收的物质不一定是叶

黄素还有别的黄色物质。再次，叶黄素对光很敏感，测定的整个过程都应该在避光条件下操作为好。这样可能是造成差值逐渐减小的原因。