几种常见葡萄球菌的性状比较
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌1 简述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为葡萄球菌属中的一种，广泛分布于自然界，空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。
本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症和脓毒血症，是人类化脓性感染中重要的病原菌。
本菌抵抗力较强，干燥情况下能生存数月，80℃30min的条件下尚能存活，5%石炭酸或0.1%升汞溶液10～15min才会被杀死。
金黄色葡萄球菌检查按增菌、分离、纯培养、革兰染色、镜检和血浆凝固酶试验等步骤进行。
本法使用于外用药品及一般滴眼剂、眼膏剂的检查。
2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌2）。
3 试液、指示液3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2无菌磷酸盐缓冲液[附录3.1，3.5]。
3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液[附录3.2]。
3.3 革兰染色液[附录2.4，2.10，2.16]。
3.4 无菌枸橼酸纳氯化钠溶液[附录2.7]。
3.5 血浆的制备以无菌注射器吸取灭菌的5%枸橼酸纳的0.9%的氯化钠溶液1ml，用无菌操作采取家兔（或羊、人）血9ml，轻轻混匀数分钟。
待血液不凝固时，徐徐放入灭菌离心管中，及时离心（500r/min离心5min0，分离血浆，用灭菌吸管将血浆转移至灭菌试管中，置冰箱备用。
临用前必须用已知血浆凝固酶试验阳性的金黄色葡萄球菌（如金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]测试，证明血浆合格后，方可用于试验。
3.6 1%酚磺酞指示液[附录4.4]。
4 培养基4.1 营养肉汤培养基[附录5.1]。
4.2 营养琼脂培养基[附录5.2]。
4.3 亚碲酸盐肉汤培养基[附录5.15]。
4.4 卵黄氯化钠琼脂培养基[附录5.16]。
4.5 甘露醇氯化钠琼脂培养基[附录5.17]。
5 对照用菌液取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基中，36℃±1℃培养18～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液，按10倍递增稀释至1:106，加入含10～100cfu的对照菌菌液（一般用量为1:1060.1ml），同时用营养琼脂平板计数。
葡萄球菌
（五）抵抗力
在不形成芽胞的细菌中金黄色葡萄球菌抵 抗力最强
对干燥、热和化学消毒剂有一定的抵抗力 60℃1h或80℃30min才能将其杀死。在2%石炭酸 中15min死亡。 耐盐，在含有10%-15% NaCl的 培养基中仍能繁殖 对某些染料较敏感 如1∶10-20万倍稀释 的龙胆紫溶液能抑制其生长 易产生耐药菌性
初步诊断应符合以下特征：
① 镜检符合葡萄球菌的形态学特征
② 菌落色素为脂溶性金黄色，血平板上有完 全透明的溶血现象 ③ 甘露醇发酵阳性 ④ 血浆凝固酶阳性 ⑤ 耐热核酸酶检测阳性，肠毒素的鉴定，在 专业实验室进行
四、防治原则 无特异性防治 注意个人卫生，及时处理皮肤创伤
加强食品加工或饮食服务工作的管理
5.剥脱性毒素(表皮溶解毒素)
是蛋白质， 能裂解表皮的棘状颗粒层细胞， 引起烫伤样皮肤综合征 (SSSS)。该毒素分 A、B 两种类型。前者耐热 (100℃,20min)，由染色体 基因控制；后者不耐热， 60 ℃ 30min 灭活，由 质粒控制 作用:能裂解表皮的棘状颗粒层细胞使表皮 和真皮脱离
如病人得不到及时治疗，可有20%病人 死亡
④毒素性休克综合征（TSS)
由产生 TSST-1 的金黄色葡萄球菌引起。病人 表现为突然高热、呕吐、腹泻、弥漫性红疹、 瘀斑或多形性皮疹，继有脱皮、低血压、粘膜 病变 (口咽、阴道等)；严重的病人还出现心、 肾衰竭，甚至休克 TSS 过去常见于经期使用受污染或未经消毒 月经塞的妇女，但现亦见于儿童和成人
葡萄球菌
第一节 葡萄球菌属
葡萄球菌属是 G+ 球菌，是化脓菌中最常见 者，广泛分布于自然界，因其常堆聚成葡萄串 状，故名。本属包括30多个种，其中金黄色葡 萄球菌致病性强，分布广泛，可引起许多严重 感染。表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是人体正 常菌群，前者偶尔能引起感染
第九章 葡萄球菌
病例分析
二个小时过去了。突然， 二个小时过去了。突然，一个 士兵开始出现呕吐，继之腹痛、 士兵开始出现呕吐，继之腹痛、腹 泻，其他吃过糖糕的人也陆续出现 同样症状，训练不得不终止。 同样症状，训练不得不终止。
病例分析 食物中毒
● 化学性食物中毒 ● 生物性食物中毒 ● 细菌性食物中毒
细菌性食物中毒
细菌性食物中毒
霍乱弧菌：主要为污染的海产 霍乱弧菌： 蔬菜或共用水源， 品、蔬菜或共用水源，主要临床症 状为严重的上吐下泻，呈米泔样。 状为严重的上吐下泻，呈米泔样。
细菌性食物中毒
副溶血弧菌： 副溶血弧菌：常见的食物主要 为海产品或盐腌制品， 为海产品或盐腌制品，主要临床症 状为发热、腹痛、水样（ 状为发热、腹痛、水样（少数为血 水样）腹泻、呕吐等。 水样）腹泻、呕吐等。
金黄色葡萄球菌
皮肤软组织感染 毛囊炎
金黄色葡萄球菌
疖 痈
金黄色葡萄球菌
蜂窝组织炎、 蜂窝组织炎、伤口化脓 败血症 内脏器官感染：气管炎、肺炎、 内脏器官感染：气管炎、肺炎、 脓胸、中耳炎、脑膜炎等。 脓胸、中耳炎、脑膜炎等。
金黄色葡萄球菌
● 肠毒素：食物中毒、假膜性肠炎 肠毒素：食物中毒、 ● 凝固酶：局部化脓性感染，与周围组 凝固酶：局部化脓性感染，
2、胃肠型食物中毒 潜伏期短， 潜伏期短，临床主要表现为急 性胃肠炎（腹痛、腹泻） 性胃肠炎（腹痛、腹泻）。 常见病菌有：沙门菌、 常见病菌有：沙门菌、霍乱弧 副溶血弧菌、大肠埃希菌、 菌、副溶血弧菌、大肠埃希菌、金 黄色葡萄球菌等 黄色葡萄球菌等。
病例分析
问 题 1、最有可能由什么细菌引起的 食物中毒？为什么？ 食物中毒？为什么？
1、神经型食物中毒（肉毒毒素） 神经型食物中毒（肉毒毒素） 临床主要表现为神经系统症状 如眼肌及咽肌瘫痪） （如眼肌及咽肌瘫痪）。 在国外，以罐头、香肠、 在国外，以罐头、香肠、腊肠 等肉制品为主。在我国， 等肉制品为主。在我国，主要由发 酵豆制品和面制品为主。 酵豆制品和面制品为主。
6种球菌简介
皮曹若
各球菌形态特征
类别 特征
单球菌
细胞沿一个 平面进行分 裂，子细胞 分散而单独 存在
双球菌
细胞沿一个 平面分裂， 子细胞成双 排列
链球菌
细胞沿一个 平面分裂而 第二次细胞 分裂与第一 次分裂面平 行，子细胞 呈链状排列
四联球菌 八叠球菌 葡萄球菌
细胞按两个 互相垂直的 平面分裂， 子细胞呈田 字形排列 细胞按三个 细胞分裂 互相垂直平 无定向，子 面进行分裂， 细胞呈葡萄 子细胞特征 状排列 性叠在一起 呈立方体排 列
代表
尿素微球菌 肺炎双球菌、 肺炎链球菌、 四联小球菌 甲烷八叠球 金黄色葡萄 菌 球菌 脑膜炎双球 乳链球菌 菌
葡萄球菌与链球菌致病特性
特性 致病物质 类别 链球菌 夹馍、黏液层、肽聚糖、 夹馍、粘附素、M蛋白、 磷壁酸、SPA、溶素（α、 肽聚糖、致热外毒素、 β、γ、δ）、表皮溶解毒 链球菌溶素、侵袭性酶 素、杀白细胞素、肠毒 （透明质酸酶、链激酶、 素、毒素休克症毒素、 链道酶）脂磷壁酸、神 凝固酶、透明质酸酶、 经氨酸酶 葡激酶、酯酶、触酶、 DNA酶 各种化脓性感染，败血 症，脓毒血症，食物中 毒，毒性休克综合征， 泌尿系统感染 化脓性感染，中毒性疾 病，超酶反应性疾病 （风湿热）大叶性肺炎， 支气管炎 葡萄球菌
球菌检测特点
• 首先是染色观察 • 触酶试验
• 血浆凝固酶试验
• 显微镜检查、抗原检查和核酸 • 磷酸酶试验 • CAMP试验 • 抗链球菌溶素O抗体检测
链球菌分类
按溶血现象 甲型 α 菌落周围形成一 个1~2mm的草绿色 溶血环，多为机 会链球菌 按抗原结构 乙型 β 丙型 λ、不溶血
菌落周围形成一 不产生溶血，一 个2-4mm宽、界限 般不致病 分明、完全透明 的无色溶血环 A群 B群 D群
葡萄球菌
• 分布广泛 • 引起多种疾病
第1节 葡萄球菌属
一、生物学性状
（一）形态与染色
1、形态： 球形或近似球形,呈葡萄串状排列 2、染色： 革兰染色呈阳性——紫色源自油镜下 模式图 ×1000
第1节 葡萄球菌属
（二）培养特性
1、液体培养基（肉汤）：呈均匀混浊生长 2、普通固体培养基：油状菌落（金黄色、白色、柠檬色） 3、血平板：致病性葡萄球菌菌落周围有完全溶血圈（β溶血） β溶血 金葡菌菌落
3、杀白细胞素（leukocidin）
（1）作用
攻击中性粒细胞和巨噬细胞
运动能力丧失，胞内颗粒排出 细胞死亡
（2）意义：破坏吞噬细胞，增强病菌侵袭力
第1节 葡萄球菌属
4、肠毒素（enterotoxin）
• 特点：外毒素，耐热100℃ 30min、抵 抗消化道蛋白酶的水解作用 • 型别与作用： 血清型 A、B、C1、C2、C3、D、E 、G、 H均可引起急性胃肠炎即食物中毒 • 常污染食物有牛奶、肉类等
第1节 葡萄球菌属
6、毒性休克综合征毒素-1
（toxic shock syndrome toxin 1,TSST-1）
• 曾用名：致热外毒素C、肠毒素F • 引起毒性休克综合征 —— 起病急骤，高 热、低血压、休克、皮疹、多器官损害 • 现在认为，TSS并非仅由 TSST-1 引起，葡 萄球菌肠毒素、溶血素等也可引起TSS • 致病机理: 毒素作为一种超抗原 激活 多个T细胞克隆 大量细胞因子释 放 极强的免疫效应 TSS
第1节 葡萄球菌属
三种葡萄球菌的主要性状
—————————————————————————— 性 状 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 —————————————————————————— 菌落色素 凝固酶 α溶血素 金黄色 + + 白色 -？ 柠檬色 -
葡萄球菌属的生物学性状
病原性球菌主要引起化脓性炎症，故又称为化脓性球菌病原性球菌。
主要包括3个属葡萄球菌属链球菌属、和奈瑟球菌属。
1.形态与染色为革兰染色阳性球菌，直径0.5～1.2μm，成葡萄状排列，无鞭毛，无芽胞，不形成荚膜。
2.分类（1）根据色素、生化反应等不同，葡萄球菌可分为金黄色葡萄球菌（金葡萄）、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌3种。
其中金黄色葡萄球菌多为致病菌，表皮葡萄球菌偶尔致病，腐生葡萄球菌一般不致病。
（2）根据有无凝固酶，也可将葡萄球菌分为凝固酶阳性菌株和凝固酶阴性菌株两大类。
凝固酶阳性的葡萄球菌可被相应的噬菌体裂解，可分为4个噬菌体群。
葡萄球菌肠毒素中毒主要由Ⅲ群菌株引起；Ⅰ群菌株常是医院中严重败血症的流行株；Ⅱ群菌株可产生表皮剥脱毒素。
3.抗原构造以葡萄球菌A蛋白（SPA）较为重要。
SPA是存在于葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白，90%以上的葡萄球菌有此抗原；SPA可与人和动物的IgG的Fc段非特异性结合，采用含SPA的葡萄球菌作为载体，可开展简易快速的协同凝集试验，广泛应用于多种微生物抗原的检出；SPA与IgG结合后的复合物具有抗吞噬、促细胞分裂、损伤血小板和引起超敏反应等多种生物学活性。
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌肠毒素的检测
动物试验 聚合酶链式反应（ PCR） 免疫血清学方法 ➢免疫双扩法(DD）、 ➢反向被动胶乳凝集(RPLA)、 ➢反向被动血凝(RPHA)酶联免疫吸附 ➢固相放射免疫技术(SPRIA)、 ➢免疫印迹技术（Immunobloting) ➢酶联免疫吸附法(ELISA) 生物传感器技术 超抗原技术等。
4.表皮溶解毒素（Epidermolytic toxin）
表皮溶解毒素也称表皮剥脱毒素（Exfoliatin) ，可引起人类或新生小鼠的表皮剥脱性病变、 烫伤样皮肤综合征（剥脱性皮炎），多见于新 生儿、婴幼儿及免疫功能低下者。它主要是由 噬菌体Ⅱ型金葡菌产生的一种蛋白质，分子量 24000，具有抗原性，可被甲醛脱毒成类毒素 。
GB4789.10-2010
血平板的制作
检样 7.5%NaCI肉汤增菌
稀镜肠 释检毒
素
血平板
计数
血平板，Baird-Parker 氏平板，却甫曼氏平板
血平板（分离培养）
涂 片 镜 检
肠 毒 素 试 验
溶 血 情 况
血 浆 凝 固 酶
致 病 性 试 验
初步报告
葡萄球菌检验程序图
报告
➢增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤 或胰蛋白胨肉汤中，37°C培养24小时。
污染的控制
防止金黄色葡萄球菌污染食品 防止带菌人群对各种食物的污染 防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染 对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体 应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后 进行加工生产。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成 低温、通风贮藏食物
肠毒素形成条件
存放温度，在37℃内，温度越高，产毒时间越短 ； 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素； 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定 量淀粉的食物，肠毒素易生成。
葡萄球菌专题知识
葡萄球菌葡萄球菌属（Staphylococcus）是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状，故名。
多数为非致病菌，少数可导致疾病。
葡萄球菌是最常见的化脓性球菌，是医院交叉感染的重要来源，菌体直径约0.8μm，小球形，但在液体培养基的幼期培养中，常常分散，细菌细胞单独存在。
代表种有金黄色葡萄球菌（S-taphyloc occusaureus）（黄色）、白色葡萄球菌（S．albus）（白色）、柠檬色葡萄球菌（S．citreus）（橙色）。
S．aureus是各种脓疡（abscess）的病原菌，S．albus和S．citreus在人的健康体表上为半腐物营养型。
由于在普通肉汁培养基中能很好地发育，所以培养比较简单，但刚从动物体上分离的，对各种氨基酸和生长因子的要求较高，特别是对烟酸、硫胺素的要求更为明显。
在自然界已发现许多介于S．aureus与S．albus中间型的种类。
葡萄球菌是柯赫（R．Koch．1878年）、巴斯德（L．Pasteur，1880年）和奥格斯顿（A．Og-ston，1881年）从浓液中发现的，但通过纯培养并进行详细研究的是F．J．Rosenbach（1884年）。
在生理学上显有许多与大肠杆菌——产气杆菌群（coli-aerog-enes group）、乳酸菌共同的性质，但其毒性非常强，移植于动物血管中可引起动物体各处发生脓疡，而表现出严重的症状以至死亡。
然而与人皮肤脓疡类似的种类不易在动物体上发生，只有极少数的可在类人猿和兔发生类似的症状。
因乳制品和肉类的腐败而出现的中毒，认为多由此类细菌引起，原因是葡萄球菌在增殖过程中可产生肠毒素（enterotoxin）。
这种毒素的生物活性在于能刺激呕吐中枢产生催吐作用。
该细菌是抗菌物质中毒和一般营养不良时成为次级的微生物区系的主要细菌。
从黄色葡萄球菌的细胞壁分离出的蛋白质A可与免疫球蛋白（主要为IgG）进行特异的结合，这是由K．Jensen氏（1 959年）发现的，现已被应用于各种免疫反应。
9-葡萄球菌
（3）烫伤样皮肤综合征
（4）毒性休克综合症
所致疾病
烫伤样皮肤综合征
致病性与免疫性
所致疾病
烫伤样皮肤综合征
所致疾病
毒性休克综合症
致病性
金黄色葡萄球菌的致病物质与所致疾病
致病物质 血浆凝固酶 所致疾病 侵袭性疾病：皮肤局部的化脓性炎 症 各种器官的化脓性感染； 全身的感染和败血症、脓毒血症等； 食物中毒；假膜性肠炎；
3. 简述金黄色葡萄球菌所致的疾病类型。
血浆凝固酶，
能否分解甘露醇，
耐热核酸酶。
防治原则
注意个人卫生和消毒隔离，及时处 理皮肤创伤。
皮肤化脓性感染的人(特别是手部 感染)未愈前不应从事食品加工或饮食 服务工作，以防止就餐人员食物中毒。
治疗应根据药物敏感性试验结果， 选用敏感抗菌药物。
防治原则
医务人员在接触感染者后，手指 要充分消毒再接触其他患者。预防交 叉感染发生。 对反复发作的顽固性疖疮，采用 自身菌苗或用类毒素人工自动免疫疗 法有一定疗效。
一、生物学性状
（一）形态与染色
呈球形；G+，典型排列呈葡萄状； 无鞭毛和芽胞，体外培养一般不形成荚膜 衰老、死亡或被吞噬细胞吞噬易染成G--
生物学性状
光学显微镜油镜
扫描电子显微镜
生物学性状
金黄色葡萄球菌G+
金黄色葡萄球菌电镜图
生物学性状
葡萄球菌
葡萄球菌L型（B）
（扫描电镜，×12000）
一组热稳定的可溶性蛋白，
100℃可耐受30min
抗胃蛋白酶分解；
刺激呕吐中枢，导致以呕吐
为主要症状的食物中毒
致病性
6、表皮剥脱毒素(exfoliatin)：
【精品】第一章葡萄球菌属（Staphylococcus）28
第二篇细菌学各论第一章葡萄球菌属(Staphylococcus)球菌（coccus）：G+：葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、四联球菌、八叠球菌G-：脑膜炎球菌、淋球菌、卡他球菌、干燥耐氏球菌、黄色耐氏球菌其中五种对人类有致病性，称为病原性球菌(pathogenic cocci)；主要引起化脓性炎症，又称化脓性球菌(purulent cocci or pyogenic coccci)。
葡萄球菌属细菌是化脓菌中最常见的，在自然界分布广泛。
本属目前包括32个种和15个亚种。
按产生色素分：1、金黄色葡萄球菌（致病菌）2、白色葡萄球菌（条件致病菌）3、柠檬色葡萄球菌（腐生菌）其中金黄色葡萄球菌是人类的重要病原菌，可引起许多严重感染。
表皮葡萄球菌是重要的条件致病菌，常引起矫形外科或心血管修复术后的感染及年轻妇女尿路感染。
两种葡萄球菌主要性状区别见下表：主要性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌色素金黄色白色血浆凝固酶+（-） -甘露醇发酵 + -溶血性 + -耐热核酸酶活性 + -磷壁酸核糖醇型 + -磷壁酸甘油型 - +蛋白A（SPA） + -致病性强弱或无第一节金黄色葡萄球菌一、生物学性状（一）形态、染色1、G+球形菌、葡萄串状、直径约0.8-1.0微米。
在某些化学药物（如青霉素）作用下可裂解或变为L型。
2、无特殊结构，（少数菌有荚膜样的黏液物质）（二）培养：需氧或兼性厌氧，营养要求不高；在普通培养基上即可生长，在固体培养基上形成S型的菌落（1~2mm），产生金黄色色素，为脂溶性。
在液体培养基中呈浑浊生长。
在血液培养基上可出现透明溶血环，即ß溶血。
（三）生化反应：分解葡+、麦+ 、蔗+ 。
在厌氧条件下也能分解甘露醇，在鉴别致病性方面有一定意义。
（四）抗原结构：1、葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A SPA）SPA是存在于90%以上的金黄色葡萄球菌细胞壁表面的一种蛋白质，为完全抗原。
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
1.形态与染色
形态：呈球形或椭圆形
大小：较大
染色性：革兰染色通常是G+
排列：典型的葡萄球菌排列呈葡萄串状
特殊结构:无鞭毛，无芽胞，少数有荚膜
2.培养特性
营养要求不高
菌落可出现金黄色、白色或柠檬色等色素。
致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，血琼脂平板上，菌落周围形成明显的全透明溶血环（ 溶血）。
在肉汤培养基中，呈现均匀混浊生长。
3.生化反应
能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。
触酶阳性。
(触酶实验。
触酶又称为过氧化氢酶，催化H2O2分解为H2O与O2。
)
致病菌株能分解甘露醇。
4.抗原
葡萄球菌A蛋白
荚膜多糖
多糖抗原
5.三种葡萄球菌的主要性状比较
6.抵抗力
葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强，耐盐性强。
对龙胆紫、青霉素敏感。
由于广泛应用抗生素，耐药菌株增多，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)成为医院内感染最常见的致病菌。
致病物质
酶：凝固酶、纤维蛋白溶酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、脂酶等
毒素：细胞溶素（α、β、γ、δ)、杀白细胞素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1、肠毒素等
其他：粘附素、荚膜、胞壁肽聚糖、SPA等
（1）凝固酶（coagulase）
使加有抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的耐热酶，可作为鉴定致病性葡萄球菌的重要指标。
凝固酶的作用：
保护作用：抵抗吞噬细胞的吞噬。
保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏。
使感染病灶具有局限化、脓汁粘稠和形成血栓等病理特性。
具有免疫原性。
食品中金黄色葡萄球菌检验
食品中金黄色葡萄球菌检验（一）原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。
此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在食品中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。
因此，检验食品中金黄色葡萄球菌有实际意义。
绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热性的DNA 酶。
（二）仪器和设备（1）显微镜（2）培养箱：（36±1）℃（3）离心机（4）灭菌吸管：1mL、10mL（5）灭菌小试管（6）培养皿：皿底直径9cm（7）均质机（8）载玻片（10）酒精灯（11）水浴锅（三）培养基和试剂（1）胰酪胨大豆肉汤培养基成分：胰酪胨（或胰蛋白胨）17g 磷酸氢二钾 2.5g植物蛋白胨（或大豆蛋白胨）3g 葡萄糖 2.5 g氯化钠100g 蒸馏水1000mL 制法：将上述各成分混合，加热时轻轻搅拌使之溶解，分装三角瓶后，于121℃下高压灭菌15min。
最终pH为7.3±0.2。
（2）7.5%的氯化钠肉汤培养基成分：蛋白胨10g 蒸馏水1000mL 牛肉膏3g pH=7.4 氯化钠75g 制法：将上述各成分加热溶解，校正pH，分装于三角瓶中，在121℃下高压灭菌15min。
（3）黄豆粉浸液取黄豆粉5g、氯化钠10g，加入蒸馏水100mL。
置100℃水浴内加热1h，放于冰箱中过夜。
吸取上清液即为黄豆浸液。
（4）牛肉消化汤成分：绞碎牛肉1000g 15%氢氧化钠溶液27mL胰蛋白酶40mL 三氯甲烷1mL氯化钠10g 蒸馏水2000mL 制法：①称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80℃，维持15min。
②加氢氧化钠溶液，pH试纸呈弱碱性，冷至40℃。
《医学微生物学》重点内容总结
医学微生物学》重点内容总结细菌学总论1、微生物的六大特点：体积微小、结构简单、种类繁多、分布广泛、繁殖迅速、容易变异。
2、微生物的种类与分布：①非细胞型微生物最小，无典型的细胞结构，无产生能量的酶系统，只能在活细胞内生长繁殖，核酸类型为DNA或RNA，两者不同时存在，病毒属之。
②原核细胞型微生物原始核呈dsDNA结构，无核膜、核仁，细胞器很不完善，只有核糖体，DNA和RNA同时存在，细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌属之。
③真核细胞型微生物细胞核分化程度高，有核膜和核仁，细胞器完整，真菌属之。
3、细菌的细胞壁：①G+和G-细菌细胞壁的共有组分为肽聚糖，G+细菌的肽聚糖由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥三部分组成，G-细菌的肽聚糖由聚糖骨架和四肽侧链两部分组成。
②G+细菌细胞壁的特殊组分为磷壁酸。
③G-细菌细胞壁的特殊组分为外膜，外膜由脂蛋白、脂质双层和脂多糖三部分组成，脂多糖由脂质A、核心多糖、特异多糖三部分组成，即G-细菌的内毒素。
脂质A是内毒素的毒性和生物学活性的主要组分。
④细菌L型：细胞壁受损的细菌能够生长和分裂者叫细菌L型。
细菌L型的四大特点：高度多形性、高渗、对作用于细胞壁的抗生素不敏感、可恢复到有细胞壁的状态。
4、质粒：18页整个一段5、异染颗粒：胞质颗粒中有一种主要成分是RNA和多偏磷酸盐的颗粒，嗜碱性强，用亚甲蓝染色时着色较深呈紫色，叫异染颗粒或纡回体，常见于白喉棒状杆菌。
6、核质：细菌的遗传物质叫核质或拟核。
7、细菌的特殊结构：（掌握各自的概念及功能，一道10分的论述题）8、微生物学两大经典染色：（一道5分的简答题）①Gram染色：标本固定后，先用碱性染料结晶紫初染，再加碘液媒染，使之生成结晶紫－碘复合物，此时不同细菌均被染成深紫色。
然后用95％乙醇处理，有些细菌被脱色，有些不能。
最后用稀释复红或沙黄复染。
此法可将细菌分为两大类：不被乙醇脱色仍保留紫色者为G+细菌，被乙醇脱色后复染成红色者为G-细菌。
09-1葡萄球菌属
局部化脓性感染的微生物学检查意义不大，但在确定全身性感染病因或选择有效治疗药物上有一定价值。
1标本直接涂片镜检依据病情可采取脓汁、血液、脑脊液、尿液和骨髓穿刺液等。食物中毒取剩余食物、患者呕吐物、粪便等不同标本。取标本涂片，革兰染色后镜检。一般根据细菌形态、排列和染色特性可做出初步诊断。
2分离培养和鉴定将标本接种至血琼脂平板t 37℃孵育18～24小时后挑选可疑菌落行涂片染色镜检。血液标本需经肉汤培养基增菌后，再接种到血琼脂平板。
致病性葡萄球菌的鉴定主要根据：①能产生金黄色色紊；②有溶血性；③凝固酶试验阳性；④耐热核酸酶试验阳性；⑤能分解甘露醇产酸。由于凝固酶阴性菌株有时亦能致病，在最后判定时应结合临床病症。毒素鉴定多采用E【tlsA法。进一步的型别鉴定可以采用细菌核糖体基因分型法(rlb0‘yp_Ilg)、质粒指纹图谱等分型法。
(6)毒性休克综合征毒素1(toxlr shock synd…toxin—1．TSS-1)：引起毒性休'克综合征(TSS)。Tss_r_1是金黄色葡萄球菌分泌的一种外毒素，可引起机体发热、休克及脱屑性皮疹。TSS_r'l能增加机体对内毒素的敏感性，感染产毒菌株后，可引起机体多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综台征。
(2)葡萄球菌溶素(staphylolysln)：致病性葡萄球菌能产生多种抗原性不同的溶素，分为。、D、y、8等，对人类有致病作用的主要是a溶素。a溶素生物学活性广泛，对多种哺乳动物红细胞有溶血作用，对白细胞、血小板、肝细胞、皮肤细胞等有损伤破坏作用。a溶紊为外毒索，抗原性好。其作用机制可能是毒素分子插入细胞膜疏水区，破坏膜的完整陛导致细胞溶解。
(3)根据核酸分析的遗传学分型：随着分子生物学技术的发展，出现了DNA和RNA分析的遗传学分型方法，其特异性比表型分类法高。如DNA脉冲电泳和PcR法分型等方法。目前，依据16s rRNA不同，把葡萄球菌属又分为48个种和亚种。
金黄色葡萄球菌的危害程度评估报告
七、金黄色葡萄球菌的危害程度评估报告一、生物学特性金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，可引起多种严重感染。
金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
2、危害程度分类根据中华人民共和国卫生部制定《人间传染的病原微生物名录》该菌危害程度为第三类。
3、致病性和感染剂量金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶，有报道目前出现越来越多的耐药菌株，MRSA即耐甲氧西林金黄色葡萄球，菌致病性也随着变强4、暴露的潜在后果暴露后可能引起感染，菌量大时可使实验人员出现皮肤软组织感染、全身性感染、呼吸道感染、中毒、肠炎等。
被感染后，成为传染源，可能对周围及环境造成污染，应及时得到治疗和控制。
5、感染途径通过污染食品和水源经口传播，也可通过呼吸道和接触传播。
6、微生物在环境中的稳定性葡萄球菌是无芽胞菌中抵抗力最强者，而干燥可达数月，加热80℃30min 才被杀死。
5％石炭酸，0.1％升汞10～15min死亡。
1:100000～1:200000龙胆紫溶液能抑制其生长。
对磺胺增效剂、青霉素、红霉素等较敏感，但耐药株逐年增多，MRSA即为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
7、浓度和浓缩标本的容量一般样本检测。
医学微生物经典问答题
（1）细菌生长可分为四个时期：迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期。
各期特点：a.迟缓期：细菌进入新环境后的适应阶段，为大量繁殖作准备；对数期：生长迅速；形态、染色性、生理活性典型,因此, 采用此期观察细菌的性状(形态染色、生化反应、药物敏感试验等)；稳定期:由于营养物质消耗,有害代谢产物积聚,pH下降以及需氧菌菌数过密通气不良所致。
细菌的芽胞和外毒素、抗生素等代谢产物在此期产生；衰亡期:形态多样不典型（2）根据DNA片段的来源及交换方式不同，将转移与重组的方式分为：转化、接合、转导、溶原性转换和原生质体融合等。
转化(transformation)：是供体菌裂解游离的DNA片段被受体菌直接摄取，供受体菌获得新的性状。
接合（conjugation）：是细菌通过性菌毛相互连接沟通，将遗传物质（主要是质粒DNA）从供菌转移给受菌。
转导（transduction）：是以噬菌体为载体，将供菌的遗传物质转移到受菌中去，使受菌获得新的性状。
溶原性转换（lysogenic conversion）：是侵入细菌的噬菌体在溶原期可以前噬菌体形式在细菌内与细菌的染色体发生重组，导致细菌的基因型发生改变。
溶原性细菌可因此而获得新的性状（如白喉毒素、致热外毒素、肉毒毒素和α毒素）。
（3）一、细菌耐药性的概念细菌耐药性（drug resistance）亦称抗药性，是指细菌对某抗菌药物（抗生素或消毒剂）的相对抵抗性。
指病原体或肿瘤细胞对反复应用的化学治疗药物敏感性降低或消失的现象。
耐药性的程度用某药物对细菌的最小抑菌浓度（MIC）表示。
临床上有效药物治疗剂量在血清中浓度大于最小抑菌浓度称为敏感，反之称为耐药。
二、细菌耐药性的遗传机制遗传学上把细菌耐药性分为固有耐药性和获得耐药性。
(一)固有耐药（intrinsic resistance）固有耐药性指细菌对某些抗菌药物的天然不敏感。
固有耐药性细菌称为天然耐药性细菌，其耐药基因来自亲代，由细菌染色体基因决定而代代相传的耐药性，存在于其染色体上，具有种属特异性。
金黄色葡萄球菌及其肠毒素
一、金黄色葡萄球菌及其肠毒素葡萄球菌属（Staphylococcus）至少包括有20个种。
其中金黄色葡萄球菌是一种引起人类和动物化脓感染的重要致病菌，也是造成人类食物中毒的常见致病菌之一，可引起许多严重感染。
本菌广泛分布于自然界，如空气、土壤、水及其它环境中。
在人类和动物的皮肤及外界相通的腔道中也存在次菌。
1.病原学特征革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0μm，成对或成短链状排列，或呈葡萄状聚集，无芽孢，无鞭毛（见图6-6）。
图6-6 金黄色葡萄球菌显微形态结构不能运动，一般不形成荚膜，但在少数菌株的外层可见有荚膜样的粘液物质。
需氧或兼性厌氧菌，营养要求不高，于普通培养基上生长良好，37℃孵育24~48h形成直径1~2mm 圆形、隆起、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、边缘整齐的菌落。
在室温下长时间培养产生脂溶性色素，使菌落呈金黄色。
于血液琼脂平板上培养，金黄色葡萄菌菌落周围可形成完全透明溶血环（β溶血）。
在液体培养基中呈混浊生长。
生长温度在6.5-46℃之间，最适温度为30-37℃，能在冰冻环境下生存，能在质量分数为15%NaCl和40%胆汁中生长。
在水分活度为0.87的条件下仍能存活。
分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。
分解甘露醇产酸在鉴定致病性方面有一定意义。
在不形成芽胞的细菌中金黄色葡萄球菌抵抗力最强。
于干燥的脓汁或痰液中可存活2～3个月；加热60℃1h或80℃30min才能将其杀死。
在2%石炭酸中15min或在0.1%升汞中10-15min死亡。
耐盐，在含有10%~15%NaCl的培养基中仍能繁殖。
对某些染料较敏感。
如1︰10-20万倍稀释的龙胆紫溶液能抑制其生长。
对青霉素、金霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感，对链霉素中度敏感，对万古霉素也敏感；但对磺胺、氯霉素敏感性差。
近年来由于抗生素的选择作用，耐药菌株逐年增多，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）已成为医院内感染最常见的致病菌。
葡萄球菌
（二）所致疾病
感染
皮肤化脓性感染
其他器官的化脓性感染 全身感染
感染性疾病
局部感染：病灶局限，脓汁粘稠 全身感染：性肠炎 烫伤样皮肤综合征 毒性休克综合征
疖、痈、毛囊炎、伤口化脓、蜂 窝组织炎等
败血症、脓毒血症
毒素性疾病
食物中毒 烫伤样皮肤综合征
葡萄球菌
一、生物学性状
• （一）形态与染色
–球形,葡萄串状
–革兰染色阳性
–无芽胞，无鞭毛
–致病性葡萄球菌有荚 膜
• （二）培养特性
– 需氧或兼性厌氧
– 营养要求不高 – 肉汤培养基中，呈均 匀混浊生长 – 色素 • 脂溶性色素 –ß 溶血 • 血平板上 • 完全透明溶血环
• （三）生化反应
– 分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气 – 分解甘露醇—鉴定致病性 （四）抗原构造 1 葡萄球菌A蛋白（SPA） –绝大多数金葡菌产生此蛋白 –与IgG的Fc段发生非特异性结合后，Fab段仍可与 特异性抗原结合
为免疫学及实验室诊断试剂（协同凝集试验）
–抗吞噬
2 多糖抗原
分类
根据色素和生化 反应的不同
金黄色葡萄球菌
表皮葡萄球菌
腐生葡萄球菌
（五）分类
主要性状 色素 血浆凝固酶 金葡菌 金黄色 +
三种葡萄球菌比较
表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 白色 主要为柠檬色 -
甘露醇发酵 溶血性 耐热核酸酶活性 SPA 致病性
病原性球菌
球菌是细菌中的一个大类。对人类有致病性 的球菌称病原性球菌主要引起化脓性感染，故又 称为化脓性球菌。
一、葡萄球菌
葡萄球菌为最常见的化脓性球菌，因菌体常 堆聚成葡萄串状而得名 。
根据革兰染色性的不同可分成
金葡菌
4. 肠毒素（enterotoxin）：引起急性胃肠炎（食物中毒）
5. 表皮剥脱毒素（exfoliative toxin）：裂解表皮组织棘状 颗粒层，导致表皮与真皮脱离 6. 毒性休克综合征毒素-1（TSST-1）：引起中毒性休克
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
（二）所致疾病： 1. 侵袭性疾病：化脓性感染
2. 毒素性疾病
（1）食物中毒 （2）烫伤样皮肤综合征 （3）毒性休克综合征 3. 葡萄球菌性肠炎（假膜性肠炎）
Staphylococcal Scalded Skin Syndrome
(三) 免疫性：无牢固免疫力
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
三. 微生物学检查 标本分离培养鉴定 凝固酶试验 甘露醇分解试验 食物中毒检测：动物（6~8周幼猫）试验 四. 防治原则
防止医源性感染。
根据药物敏感试验结果，选用敏感抗生素
（四）抗原结构： 1. 葡萄球菌表面蛋白A（staphylococcal protein A，SPA） SPA是葡萄球菌细胞壁中的一种表面蛋白，可与人类IgG抗 体的 Fc段非特异性结合，增强细菌抗吞噬细胞的吞噬作用 2. 多糖抗原
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
（五）分类依据 1. 色素（pigment）：分为金黄色、表皮及 腐生葡萄球菌 2. 凝固酶（coagulase）：凝固酶阳性与阴性葡萄球菌 （六）抵抗力：强于其它无芽孢菌，易产生耐药性变异
金黄色葡萄球菌
表皮葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
二. 致病性与免疫性
（一）致病物质： 1. 凝固酶（coagulase）：促血浆凝固
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几种常见葡萄球菌的性状比较
葡萄球菌是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。
葡萄球菌在自然界中分布比较广泛，在空气、水、土壤及物体表面均存在，是最常见的化脓性球菌，也是医院交叉感染的重要来源。
金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一种重要的食源性致病菌，是造成人类食物中毒的重要致病菌之一，在历年的食物中毒调查中，该菌占整个细菌性食物中毒的第1位或第2位[1-2]。
金黄色葡萄球菌是食品检测中一个重要的检测项目，但由于葡萄球菌属具有很多共同的特性，在检验工作中难以迅速识别。
本文就日常检验工作中检出的3种葡萄球菌（金黄色葡萄球菌、沃氏葡萄球菌和中间葡萄球菌）的部分生物性状进行比较，旨在为金黄色葡萄球菌的检验工作提供一定的参考。
1 试验菌株
3种菌株均为检验过程中分离的菌株，且经VITEK 2 全自动微生物分析系统鉴定，分别为金黄色葡萄球菌（生化编码分别为050402022761231，可能性为99%）、沃氏葡萄球菌（生化编码分别为000004010060271，可能性为94%）和中间葡萄球菌（生化编码分别为030412147723231，可能性为99%）。
2 试验方法
将3种菌株分别划线接种于营养琼脂、Baird-Parker平板、血平板和科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板上，同时进行革兰氏染色镜检和血浆凝固酶试验。
3 结果
3种菌株部分生物性状结果见下表：
表1 3种菌株的部分生物性状
营养琼脂金黄色菌落白色菌落白色菌落
Baird-Parker平板黑色菌落，圆润，
周围有晕圈
黑色菌落，圆润，
周围有晕圈
黑色菌落，圆润，
周围有晕圈
血平板黄色菌落，圆润，
溶血
灰白色菌落，圆润，
不溶血
白色菌落，圆润，
溶血
革兰氏染色镜检G+，葡萄样球菌G+，葡萄样球菌G+，葡萄样球菌血浆凝固酶试验阳性阴性阴性
科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板紫红色菌落，周围
有晕圈
蓝绿色菌落蓝色菌落
3.1 营养琼脂平板
葡萄球菌对营养要求不高，在营养琼脂平板上生长良好，形成圆形凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、不透明的菌落。
金黄色葡萄球菌在营养琼脂上基本为金黄色菌落，但有时金黄色不是很明显，其余葡萄球菌为白色菌落。
3.2 Baird-Parker平板
金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上为圆形，直径2mm-3mm，颜色呈灰色或黑色，边缘为淡色，周围为一浑浊带，在其外层有一透明圈。
用接种针接触菌落有似奶油至树胶样
的硬度，偶然也会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无浑浊带及透明圈；中间葡萄球菌和沃氏葡萄球菌在Baird-Parker平板上的形态与金黄色葡萄球菌形态基本相似，没有明显的区别。
3.3 血平板
金黄色葡萄球菌在血平板上菌落较大，圆形，光滑突起，湿润，颜色为金黄色，菌落周围有典型的透明溶血圈；中间葡萄球菌在血平板上为白色菌落，菌落周围也有典型的透明溶血圈；而沃氏葡萄球菌在血平板上为灰白色菌落，不溶血。
3.4 科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板
金黄色葡萄球菌在科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板上为紫红色菌落，菌落周围同样具有一圈浑浊带，其他两种菌在该平板上与金黄色葡萄球菌具有明显的颜色区别。
3.5 革兰氏染色镜检
3种葡萄球菌的革兰氏染色镜检结果没有明显差异，均为G+葡萄样球菌。
3.6 血浆凝固酶试验
除金黄色葡萄球菌血浆凝固酶试验为阳性外，其余两种葡萄球菌均为阴性。
4 分析与讨论
金黄色葡萄球菌是重要的食源性致病菌，其菌落具有典型的金黄色特征，但有些却呈现白色菌落，而单纯用血平板和Baird-Parker平板也不能完全将金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌区分开，在检测过程中往往需要再进一步结合生化特征或其他先进的仪器（如VITEK）进行判断，既延长了检验时间，也大大地提高了检测成本。
在实际检测工作中，葡萄球菌的检出率非常高，因此寻找一种选择性较强的培养基非常重要。
本试验将科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基与血平板和Baird-Parker平板结合起来进行金黄色葡萄球菌的初筛，可迅速将金黄色葡萄球菌与其他两种葡萄球菌区分开，大大地提高了检测效率，在实际样品检测过程中将是一种较好的辅助检测方法。
参考文献：。