HE染色步骤-使用

免疫组织化学及HE染色实验步骤

免疫组织化学及HE染色实验步骤免疫组织化学和HE（Hematoxylin and Eosin）染色是常用的组织学研究技术。

免疫组织化学用于检测组织中特定抗原的表达，可以帮助研究者了解细胞和组织的功能和性质。

HE染色则是常用的常规组织染色方法，用于观察组织的形态学特征。

下面将分别介绍免疫组织化学和HE染色的实验步骤。

1.获取组织标本：首先，需要获取要研究的组织标本，可以是活体组织或固定的组织。

固定的组织标本一般使用10%缓冲福尔马林进行固定。

2.制备标本切片：将标本切割成适合光镜观察的薄片。

切片厚度一般为3-5微米。

3.去蜡：将蜡包埋组织切片放入蜡溶液中，加热脱蜡，使组织切片恢复水化。

4.抗原修复处理：将切片放入抗原修复液中，通过高温或酶解方法进行抗原修复处理，使细胞或组织中的抗原保持完整。

修复液的选择和具体实验要求有关。

5.阻断非特异性结合：将切片浸入阻断液中，阻断非特异性结合位点，减少假阳性结果。

6.一抗孵育：将合适浓度的一抗溶液加到切片上，使其孵育一段时间。

根据要检测抗原的性质选择合适的一抗。

7.二抗孵育和信号增强：将与一抗结合的二抗溶液加到切片上，同时可以加入信号增强剂，提高检测灵敏度。

8.反应显色：将切片加入显色液中，使阳性细胞或组织部分显示出颜色反应。

常用的显色方法有原位杂交、过氧化物酶法和碱性磷酸酶法等。

9.脱水和封片：经过显色后，将切片在酒精中进行脱水处理，然后用透明介质嵌片，并保护封片，以便于观察。

HE染色的实验步骤如下：1.获取组织标本：同样，首先需要获取组织标本，可以是活体组织或固定的组织。

2.制备标本切片：将标本切割成适合光镜观察的薄片。

切片厚度一般为3-5微米。

3.去蜡和水化：将蜡包埋组织切片放入蜡溶液中，加热脱蜡，然后用醇和水进行水化，使组织切片恢复水化。

4.酸性染料处理：将标本切片放入染色液中，使用血红素作为酸性染料，将细胞核染成蓝色。

5.碱性染料处理：将标本切片放入染色液中，使用溴化钡和噻唑蓝作为碱性染料，将细胞质和胞浆染成红色。

HE染色及组化步骤

组织固定及HE染色步骤
1、固定：刚取的新鲜组织块经福尔马林溶液固定48小时（一般固定2天）
2、用镶子取出放到大的蜡盒上，用刀片切成1*0.5厘米的小块，用小白蜡盒包上，放入80%
的乙醇中过夜
3、脱水：第二天早上8点，把蜡盒依次放入95% I的乙醇中（3h）— 95%II的乙醇中（3h）
—100% I的乙醇中（3h）— 100%II的乙醇中（过夜）
4、透明：第二天早8点从100%11的乙醇中取出小蜡盒放到二甲苯1、二甲苯II中各30 分钟
5、浸蜡：放入蜡缸中I、II、IIL中各浸泡30分钟
6、包埋
7、切片
8、烤片
HE染色
二甲苯 I （30min）—二甲苯II （30min）一100% I 的乙醇中（lOmin）一 100%II 的乙醇中（lOmin） 95%的乙醇中（5min）— 90%的乙醇中（5min）— 80%的乙醇中（5min）—自来水缸中浸泡5min —苏木精染核5min —水洗一1%的盐酸酒精分化一水洗一弱氨水返蓝一水洗一镜下观察一伊红染质（15min）—水稍洗一80%的乙醇、95%的乙醇I、95% 的乙醇II中各过一下即可一100% I的乙醇中（5min）— 100%II的乙醇中（lOmin）—二甲苯I （lOmin）一二甲苯II （lOmin）一中性树胶封片
免疫组化步骤
切片常规脱蜡至水洗预处理（热修复或酶消化）阻断3%的H202 PBS洗封闭加一抗（鼠或兔抗人） PBS洗加二抗（生物素标记IgG鼠或兔））PBS洗加三抗（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）PBS洗DAB（AEC或BCIP/NBT）显色水洗复染核水洗弱氨水返兰水洗脱水透明封片。

he染色分化、反蓝的步骤

he染色分化、反蓝的步骤
HE染色分化、反蓝的步骤如下：
1. 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ
10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-95%酒精5min-90%酒精
5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。

2. 苏木素染细胞核：切片入Harris苏木素染3-8min，自来水洗，1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，0.6%氨水返蓝，流水冲洗。

3. 伊红染细胞质：切片入伊红染液中染色1-3min。

4. 脱水封片：将切片依次放入95%酒精Ⅰ5min -95%酒精Ⅱ5min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min，二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。

具体的染色步骤和时间可能会因组织类型、染色方法和实验室条件等因素而有所不同，建议在进行染色实验前仔细阅读相关实验指导或咨询专业人士。

HE染色方法与步骤吐血

HE染色试剂配置A：~1%的伊红酒精溶液：称取伊红~1g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状;以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可100毫升溶解;B：苏木素染液配方：配制3000ml,可按比列减少苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,最后加入冰醋酸和碘酸钠;C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可;染色流程1二甲苯Ⅰ15min2二甲苯Ⅱ15min3二甲苯：无水乙醇=1:12min4100%乙醇Ⅰ5min5100%乙醇Ⅱ5min680%乙醇5min7蒸馏水5min8苏木精液染色5min9流水稍洗去苏木精液1-3s101%盐酸乙醇1-3s11稍水洗10-30s12蒸馏水过洗1-2s13%伊红液染色1-3min14蒸馏水稍洗1-2s1580%乙醇稍洗1-2s1695%乙醇Ⅰ2-3s1795%乙醇Ⅱ3-5s18无水乙醇5-10min19石炭酸二甲苯5-10min20二甲苯Ⅰ2min21二甲苯Ⅱ2min22二甲苯Ⅲ2min23中性树胶封固注：①第11、12步可省去,13步冲水时间需延长至20-30min;②第21步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇;冷冻切片HE染色步骤：1冰冻切片固定10～30s2稍水洗1～2s3苏木精液染色60℃30～60s4流水洗去苏木精液5～10s51%盐酸乙醇1～3s6稍水洗1～2s7促蓝液返蓝5～10s8流水冲洗15～30s9%曙红液染色30～60s10蒸馏水稍洗1～2s1180%乙醇1～2s1295%乙醇1～2s13无水乙醇1～2s14石炭酸二甲苯2～3s15二甲苯Ⅰ2～3s16二甲苯Ⅱ2～3s17中性树胶封固;注：第14步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇;染色结果：细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色;4．12切片脱水透明切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖;如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色;切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水;石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去;染色评定标准：1切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕；2染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观;4 染色结果编辑细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色;细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色;胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色;着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变;例如,很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染;胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深;Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一;试剂：Regaud 氏苏木精：苏木精1g,95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml;将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用;Masson丽春红酸性复红液：丽春红,酸性复红,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml; %冰醋酸水溶液：冰醋酸 ml,蒸馏水100 ml;1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g,蒸馏水100 ml;苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g,蒸馏水98 ml,冰醋酸2 ml;1%光绿水溶液：光绿 1g,蒸馏水100 ml;Masson三色法步骤1．石蜡切片脱蜡至水;2．铬化处理或去汞盐沉淀甲醛固定的组织此步可略;3．依次自来水和蒸馏水洗;4．用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min;5．充分水洗,如过染可盐酸酒精分化;6．蒸馏水洗;7．用Masson 丽春红酸性复红液5-10min;8．以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻;9． 1%磷钼酸水溶液分化3-5min;10. 不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min;11．以%冰醋酸水溶液浸洗片刻;12．95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固;结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色如光绿液染色为绿色,胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色;体会与说明：1．控制好染色步骤;2．组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间; 3．%冰醋酸水溶液洗,可使色调清晰鲜艳;4．磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制, 肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可;天狼猩红染色试剂配制1天狼星红饱和苦昧酸液 O．5％天狼星红10ml,苦味酸饱和液90ml;2天青石蓝液天青石蓝B1．25g．铁明矾1．25g,蒸馏水250ml;溶解煮沸、待冷却过滤加入甘油30ml,然后再加入浓盐酸0．5ml;染色步骤1中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水;2人大青石蓝液染5一lOmin;3蒸馏水洗3次;4天狼星红饱和苦昧酸浓染15-30min5无水乙醇直接分化与脱水;Devil二甲苯透明,中性树胶封固;注意事项1细胞核里染色可以用Harris苏木素染色液谈染;2染色封固后的切片,须及时用偏光显微镜进行观察和照相已保持鲜艳的色彩注：在偏光显微镜下可以观察到四种类型的胶原纤维;l型胶原纤维：紧密排列,显示很强的双折光性,呈黄色或红色的纤维oll型胶原纤维：显示弱的双折光,呈多种色彩的疏松网状分布;皿型胶原纤维：显示弱的双折光,呈绿色的细纤维;lv型胶原纤维：显示弱的双折光的基膜,呈淡黄色;免疫组化步骤ABC法1;4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液4℃中过夜;蜡块制作;切片,贴片;清洗5min×3后；2;加入配好的%的过氧化氢甲醇溶液甲醇80ml＋ 100ml＋30%过氧化氢30min,以消除内源性过氧化物酶的影响,清洗5min×3；3;加入配好的% Triton X10030% Triton X100＋ 100ml30min,以增加细胞的通透性,清洗5min×3；4;加入用血清稀释液牛血清白蛋白＋ 100ml＋叠氮纳稀释的一抗,4℃存放24-48h；吸去抗体,洗5min×3；5;加入稀释的的二抗,室温孵育2h;洗5min×3；6;加入ABC复合物之类的抗体,室温孵育2h,洗5min×3；蒸馏水迅速冲三次；7;加入显色液,进行免疫组织化学显色,时间一般不超过30min,可不时在显微镜下进行观察,待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液,用蒸馏水迅速冲三次后加入终止反应；8;梯度酒精脱水之后,封片,拍照;免疫组化SP法步骤：SPstreptavidin-perosidase法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法.按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等;按染色步骤可分为直接法又称一步法和间接法二步、三步或多步法；按结合方式可分为抗原—抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶PAP法和亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物ABC法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法等,其中SP法是最常使用的方法;一般的sp法步骤啊,具体如下：1.烤片,68℃,20分钟,2. 常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min3.阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min,PBS冲洗3X5min；4. 抗原修复:置枸橼酸缓冲液PH 中用煮沸95℃,15－20min,自然冷却20min 以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5min;5. 正常羊血清工作液封闭,37℃10 min,倾去勿洗.6. 滴加一抗4℃冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5min用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照；滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS 冲洗3X5min;8. DAB/ H2O2反应染色,自来水充分冲洗后,苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片;免疫组化Elivision二步法：1石蜡切片置于67℃烘箱中,烘片2小时,脱蜡至水,用的PBS冲洗三次,每次3分钟3×3’;2取一定量pH=柠檬酸盐缓冲液,加入微波盒中,微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档微波处理10分钟,取出微波盒流水自然泠却,从缓冲液中取出玻片,先用蒸馏水冲洗两次,之后用PBS冲洗2×3’;注：不是所有的抗体都需要微波修复的,视具体情况而定3每张切片加1滴3% H2O2,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性;PBS冲洗3×3’;4除去PBS液,每张切片加1滴相应的第一抗体相应稀释倍数,室温下孵育2小时;5PBS冲洗3×5’;除去PBS液,每张切片加1滴聚合物增强剂试剂A,室温下孵育20分钟;PBS冲洗3×3’;6除去PBS液,每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物试剂B,室温下孵育30分钟;PBS冲洗3×5’7除去PBS液,每张切片加1滴新鲜配制的DAB液,显微镜下观察5分钟;8苏木素复染,%HCl分化,自来水冲洗,蓝化,切片经梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封固,晾干后观察;注：即用型第二代免疫组化Elivision plus广谱试剂盒,购自福州脉新生物技术开发有限公司;包括：生物素化抗兔二抗、亲和素Reagent A、生物素－辣根过氧化物酶Reagent B、二氨基联苯胺DAB脱钙剂的配置10%EDTA的配置：1加热水浴锅到65℃2称取NaOH11g加到900mlddH2O中3再加入EDTA-Na2100g至水中；4水浴加热,搅拌至透明溶解5加入Na2HPO46g,NaH2PO4,NaCl9g;蒸馏水定容至1000ml 6调节pH值至~,室温或4度保存。

HE染色步骤

HE染色步骤1．将于60℃烤箱中的烤片取出后立即放入二甲苯Ⅰ（透明）中15min，若切片已放置已久，则在浸二甲苯之前需将切片在60℃烤箱中烤2h以上；2．将切片于二甲苯Ⅱ15min，应观察到组织切片呈透明状，否则继续浸于二甲苯中；3．切片浸于1/2酒精+1/2二甲苯5min；4．将切片从二甲苯中取出稍甩掉二甲苯，于梯度乙醇中脱去二甲苯：无水乙醇Ⅰ5min→无水乙醇Ⅱ5min →95%酒精5 min→90%酒精5min→80%酒精5min→70%酒精5min；5．切片从70%酒精取出后稍冲洗：浸洗于蒸馏水Ⅰ5min →蒸馏水Ⅱ5min；6．蒸馏水浸洗后稍甩干水分用苏木精染色约15min；7．苏木精染色后用自来水冲洗(稍洗)；8．冲洗后用1%盐酸酒精（99毫升70%酒精+1毫升浓HCl）镜检分化，操作时可以按先浸10S后用自来水稍冲洗，吸水纸吸掉水珠后镜检，若观察到细胞质部分染色很浅而核仍较深则自来水冲洗约15分钟（时间可为几分钟至1小时不等，以充分洗掉HCl），否则分化不全时则继续学浸于盐酸酒精中至20S、30S等直至达到满意染色。

9．冲洗后判断染色，浸入1%氨水酒精（99毫升70%酒精+1毫升浓氨水）迅速（约几s至半分钟不等，不同的组织情况不同，需进行摸索）取出用蒸馏水冲洗后于蒸馏水Ⅰ(3min) →蒸馏水Ⅱ(3min)；10．甩干水分，1%伊红(水溶性伊红Y 1g溶于100毫升85%酒精)染色约3min，若着色困难可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色；11．70%酒精稍冲洗切片将伊红洗掉，之后则梯度乙醇浸洗（脱水作用）：70%酒精(1 min) →80%酒精(1min) →90%酒精(3min) →95%酒精(2min) （此段时间应尽量缩短，因伊红易在95%酒精中脱色）→无水酒精Ⅰ(5min) →无水酒精Ⅱ(5min) ；12．1/2二甲苯+1/2酒精(5min) →二甲苯Ⅰ(5min) →二甲苯Ⅱ(15min)；13．将染色完成的切片取出，确保二甲苯未干燥，迅速用移液枪吸取树胶滴在组织上，盖上盖玻片，待凝固后观察结果。

HE染色步骤[推荐]

HE染色步骤[推荐]
染色是加入染料将细胞或组织着色的过程。

HE染色是指使用
血红蛋白染成红色，细胞核染成蓝色的染色方法。

HE染色步骤如下：
1. 取制好的玻片（细胞或组织已固定在玻片上），用甲醇或乙醇进行脱水，使细胞或组织变得透明。

2. 将玻片放入染料盒中，加入苏丹三液（血红蛋白染料）浸泡。

时间通常为5-10分钟。

洗净玻片以去除多余的染料。

3. 将玻片放入氧化性酸液中（酸性洗涤液或稍微含有酒精的酸性水溶液），将苏丹三液中的铁离子还原成溶于水的亚铁离子。

时间通常为1-2分钟。

4. 接下来，将玻片放入碱性染色液中（含有甲苯重组溶液和酸性洗涤液的甲苯重组溶液），染色液中的亚铁离子被氧化成沉淀（血红蛋白）。

5. 最后，将玻片漂洗并脱水，然后用透明介质将玻片封闭，使其防止氧化。

通过HE染色，可以使细胞核染成蓝色，血红蛋白染成红色，
从而在显微镜下清晰地观察细胞或组织的结构和特征。

这是一种常用的组织学染色方法。

HE染色步骤

HE染色液的配制：Harris苏木素：甲液苏木素0.9克100%酒精10 ml乙液铵（或钾）明矾20 克蒸馏水200ml然后加入氧化汞0.5克甲液加乙液加热煮沸后离开火焰缓缓加入氧化汞，玻棒搅拌，然后烧杯于冷水速冷，第二天过滤（夜），临用前加几滴醋酸（100ml加入0.25克）对核着色效果更好。

伊红1%：1g溶于10ml蒸馏水，溶解后逐滴加冰醋酸，边滴边搅拌，至糊状时，再加数毫升蒸馏水，继续逐滴加冰醋酸至沉淀不再增加时过滤，滤纸放入温箱（50-60）过夜，烘干物用100 毫升85%酒精溶解。

1.切片：将切片刀磨好，装到机上，将预定使用的刀部位移至蜡块下方，刀的倾斜角为30度，调整切片机厚度为6um，右手摇片扒，左手持一毛笔拖住蜡带，随切片机的转动轻轻把蜡带拉开，用毛笔拖住蜡带，挑断后顺序放在纸上。

（切片时，放入-20度冰箱中冻一下再切，效果比较好）2.摊片：41-42度，将预先切开的蜡片摊于水面上，使蜡片受热自然张开浮在水面上，也可用细针帮助张开皱褶，用经过APES处理过的载玻片伸入水中把蜡片移至玻片上，拨正位置。

注：2%APES前期处理载玻片的方法第一缸：4ml APES + 196 ml丙酮，配成2%的APES液，1.5-2 min第二缸：200ml丙酮（I）2min，震荡第三缸：200ml丙酮（II）2min，震荡第四缸：200ml蒸馏水（I）5min第五缸：200ml蒸馏水（II）5min自然风干，备用3.烘片：8h4.HE染色步骤二甲苯脱蜡(1)(2)5～10min(冬天10～20min)→100％酒精1 min→95％酒精1 min→85％酒精1 min→70％酒精1 min→50％酒精1 min→蒸馏水1–3 min(苏木精时水擦干)→苏木精染色1–2 min→自来水冲洗3–5 min(酚化分化3–5 min)→蒸馏水洗3–10min →70％酒精1–2 min→85％酒精2min→伊红20s→95％酒精→100％酒精(1)(2) 1～2min→二甲苯(1)(2)5～10min→封片。

HE染色方法与步骤吐血整理

HE染色方法与步骤吐血整理染色是一种常见的实验技术，用于观察和分析生物样品中的细胞或组织结构。

HE染色是一种常用的组织和细胞染色方法，它能够同时染色细胞核和细胞质，因此得名HE（hematoxylin and eosin）染色。

下面是HE染色的步骤：1.染色前的准备工作：-选择合适的组织样品，通常是已固定和包埋的组织切片。

-准备好需要使用的试剂和设备，包括显微镜玻片、切片刀、染色盘、醇和蜡解剂、染色液和显微镜。

-将切片从包埋蜡中去蜡，并通过浸泡在蜡解剂中来溶解蜡质。

2.组织切片的处理：-将组织切片通过水洗涤，去除蜡解剂和剩余的蜡质。

-将切片通过不同浓度的醇溶液进行脱水处理，使得切片逐渐转移到无水状态。

-将脱水处理后的切片通过透明质量更好的试剂（如亚硫酸氢钠或甘油）进行透明处理，以利于细胞的观察。

3.组织切片的染色：-首先进行碱性染色，即将切片浸泡在染色盘中的伊洛酮溶液中，伊洛酮是一种天然的染色物质，能够与细胞核结构中的DNA结合，使细胞核染色为暗蓝色。

-然后进行酸性染色，即将切片浸泡在染色盘中的苏木精溶液中，苏木精是一种带正电荷的染色物质，能够与细胞质结构中的负电荷部分结合，使细胞质染色为粉红色。

4.组织切片的脱水和封片：-将染色后的切片通过不同浓度的醇溶液进行脱水处理，使得切片从水状态逐渐转移到无水状态。

-将切片在醇溶液中固定一段时间，然后转移到透明的试剂（如苏木精和二甲苯混合溶液）中进行浸泡。

- 最后将切片取出，放在显微镜玻片上，滴入固定剂（如Canada Balsam）并加盖玻片，使切片固定在玻片上。

5.显微镜观察和分析：-使用显微镜观察染色后的组织切片，并通过不同增大倍数的镜头进行详细观察。

-根据观察到的细胞和组织结构，进行分析和研究，并将观察结果记录下来。

需要注意的是，HE染色是一种简单、快速且广泛应用的染色方法，但在不同类型的组织和细胞中可能会有不同的染色效果。

因此，在进行HE染色时，需要根据具体实验要求和样品的特点，进行相应的优化和调整。

HE染色步骤

石蜡切片制作步骤
一、取材组织块的大小一般为 0.5x0.5x0.2 厘米，或者 1x1x3 厘米，1.5x1.5.0.5 厘米，最厚不超过 0.5 厘米。二、固定一般固定 12-24 小时，小块组织 4-16 小时即可。（如：小鼠卵巢用多聚甲醛固定 12 小时即可）固定剂（多聚甲醛）用量：固定组织时，固定剂一般为组织体积的 10-15 倍，容器勿太小。且固定剂应避免阳光。三、脱水 70%酒精 1 小时 ↓ 85%酒精 1 小时 ↓ 95%酒精 1 小时 ↓ 100%酒精（1） 30 分钟 ↓ 100%酒精（2） 1 小时 ↓ 100%酒精（3） 30 分钟同浓度酒精应该准备两份以备脱水不完全 1 脱水在有盖子的瓶内进行 2 组织在更换高一级酒精时，可先用吸水纸吸干以免带入水分 3 纯酒精有水分可加入无水硫酸铜去除水分四、透明 1/2 纯酒精+1/2 二甲苯混合液 ↓ 二甲苯 ↓ 二甲苯五、透蜡使用石蜡熔点为 70℃，温箱温度调到 64℃ 1/2 二甲苯+1/2 石蜡混合液 30 分钟 ↓ 纯蜡 1 小时 ↓ 纯蜡 1 小时六、包埋用 L 型金属框包埋。 30 分钟 30 分钟分钟二甲苯 7 分钟 100%酒精 1 分钟 100%酒精 1 分钟 95%酒精 2 分钟 85%酒精 2 分钟 70%酒精 2 分钟 50%酒精 2 分钟蒸馏水 2 分钟苏木精 20 秒自来水冲洗 4 分钟蒸馏水 6 分钟 50%酒精 2 分钟 70%酒精 7 分钟 85%酒精 2 分钟伊红染色 20 秒 95%酒精 2 分钟 100%酒精 2 分钟二甲苯 4 分钟二甲苯 4 分钟中性树脂封片
Harris 苏木素：甲液苏木素 0.9 克 100﹪酒精 10ml 乙液铵（或钾）明矾 20 克蒸馏水 200ml 然后加入氧化汞 0.5 克甲液加乙液加热煮沸后离开火焰缓缓加入氧化汞。玻棒搅拌，然后烧杯于冷水速冷，第二天过滤，临用前加几滴醋酸（100ml 加入 0.25 克）对核着色效果更好。伊红： 1g 溶于 10ml 蒸馏水，溶解后逐滴加冰醋酸，边滴边搅拌，至糊状时，再加数毫升蒸馏水，继续逐滴加冰醋酸至沉淀不再增加时过滤，滤纸放入温箱（50-60）过夜，烘干物用 100 毫升 85﹪酒精溶解。

HE染色法

(二)Mager氏苏木素液:
苏木素 1克
碘酸钠 0.2克
钾明矾 50克
水合氯醛 50克
蒸馏水 1000ml
柠檬酸 1克
将苏木素及碘酸钠用蒸馏水加温溶解,呈樱桃红色,再加入钾矾, 使溶液变为兰紫色,煮沸5min后,再加入水合氯醛搅拌,此时液体变为红紫色,溶解完后加入柠檬酸,取下冷却,滤过后即可使用。此液能长久保存。
(三)Harris氏苏木素液:
苏木素 0.9克铵明矾(或钾)20克
甲液无水酒精 10ml 乙液蒸馏水 200ml
一氧化汞 0.5～1克
甲、乙两液分别溶解,然后两液混合,加热熬沸,再加入一氧化汞, 以玻棒搅至溶液呈深紫色,置于凉水中急速冷却,静置一夜后,滤过密封保存。用前若加入少许5%冰醋酸,则染色效果更好。此液经2～3个月后,着色力减退,故宜少配。
(3)入苏木素染液,1%盐酸分化,水洗兰化;
(4)入0.5～1%酸性复红液5～30min,水洗至红色不退;
(5)蒸馏水洗30秒钟以上,入买洛里氏染色液20min,流水冲洗2～5min;
Devil入95%酒精分化,入无水酒精脱水,二甲苯透明,封固。
结果:胶元纤维, 网状纤维呈深红色、粘液、淀粉样物呈淡兰色,纤维素、肌纤维、胶质纤维酸性颗粒呈红色.红细胞、髓鞘呈红色,细胞核呈兰色。
3.移入90%酒精中(二瓶),约2min。
4.移入80%酒精中(二瓶),约2min。
5.移入70%酒精中,约2min。
6.移入水中,洗去酒精,约2～3min。
7.移入蒸馏水中,约2min。
(二)染色:
1.移入苏木素中,浸染8～15min,一般以稍深染为宜。
2.移入水中,洗去苏木素和浮色,约1～2min。

HE染色操作流程

HE染色操作流程HE染色（Hematoxylin and Eosin Staining）是一种常用的组织学染色方法，用于观察和诊断组织学切片。

HE染色通过染色剂HE染料的组合，使细胞核染成紫色，胞质染成粉红色，从而揭示组织的结构与形态。

HE染色的操作流程一般包括标本处理、脱水、透明化、分解蜡和染色五个步骤。

下面将详细介绍每个步骤的具体操作。

1.标本处理：首先，将切割好的组织标本放入10%中性缓冲福尔马林进行固定，一般固定时间为24-48小时。

固定后，将组织标本转移到70%乙醇中进行离子交换，使组织中的水分逐渐去除。

2.脱水：将固定的组织标本依次转移到浓度逐渐提高的乙醇溶液中，如80%乙醇、95%乙醇和绝对乙醇，每个乙醇浓度保持15-30分钟。

这个过程称为脱水，目的是逐渐去除组织中的水分，使组织内的乙醇浓度逐渐升高。

3.透明化：将脱水后的组织标本依次转移到透明剂中，如苯并三氮唑、次氯酸、二氯甲烷等。

每种透明剂浓度和时间要根据实验需求进行调整，这个步骤的目标是使组织中的乙醇慢慢溶解，透明度增强。

4.分解蜡：将透明后的组织标本转移到蜡纸中，加热到60-65°C的融点，使固定的组织标本逐渐融化。

蜡纸是由石蜡和植物油混合而成，有助于固定和保护组织的形态。

5.染色：将脱蜡的组织标本依次转移到碱性染料（如血红素）溶液中，染10-15分钟，然后洗净；接着将组织标本转移到酸性染料（如紫杉醇）溶液中，染5-10分钟，然后洗净。

紫杉醇染料使细胞核染色成紫色，血红素染料使细胞胞质染色成粉红色。

最后用安全过滤垫将组织标本封装在玻片上，去除水分，然后用覆盖玻片进行固定。

冰冻切片HE染色顺序

冰冻切片H E染色顺序 SANY GROUP system office room 【SANYUA16H-冰冻切片H E染色步骤一、操作方法及步骤：①取材，未能固定的组织取材，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，最好为24×24×2mm。

②取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。

小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。

③将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。

④调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10u m间。

二、冰冻切片时的注意事项：①防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。

有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。

因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。

②多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。

③放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，所谓“砍柴看柴势”，切片也是如此，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。

④组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在未达到固定前，更不能使用。

临床快速冰冻切片，不须要预先固定，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。

如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。

这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水份也可渗入到组织中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织中，形成了冰晶。

⑤当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。

另者，调高冰冻点。

HE染色操作常规流程

HE染色操作常规流程1.实验前准备：1.1收集待染色的样本（如组织切片、细胞涂片等），确保样本保存完整和无污染。

1.2准备好所需的染色试剂：包括有水洗试剂（如去离子水）、染色试剂（如伊红、伊红酒精和亚甲蓝）、染色剂工作液（如伊红酒精和亚甲蓝溶液）等。

2.试片处理：2.1将组织切片或细胞涂片分别放入热腺管或玻璃片上。

2.2连续经过苯酚甲酸苯酯脱脂、乙醇梯度洗脱等步骤，去除样本中的脂肪和碱性物质，以减少后续染色的干扰。

2.3用去离子水洗涤样本，使其充分湿润，除去残存的试剂。

3.染色操作：3.1把处理好的样本放入腺管或玻璃片，倒入伊红酒精溶液中，用大约15-30分钟染色，使细胞和组织成为红色。

3.2轻轻用清水漂洗试品，去掉多余染色液。

3.3加入亚甲蓝液，使样本转为蓝色，使细胞核染色成深蓝色，时间为1-2分钟。

3.4再次用清水将试品漂洗干净。

4.固定和封片：4.1用醋酸纤维素或氯仿等溶剂固定染色后的试片，使试样中的颜色得以固定。

4.2在试片上加一滴封片剂（如封片胶）。

4.3将盖玻片缓慢地放在试片上，使封片剂均匀地覆盖整个样本。

4.4将封片剂封住，使细胞和组织样本能够在显微镜下观察。

5.显微镜观察：5.1将染色好的试片放在显微镜下，调整镜头，适当调节光线强度和聚焦位置，以便观察样本的细节。

5.2观察细胞和组织的形态、染色强度和细胞核的染色情况，并进行必要的记录和照片拍摄。

以上就是HE染色操作的常规流程。

通过此流程，我们可以对细胞和组织样本进行染色，从而得到对染色体分辨和鉴定的结果。

这一技术使我们能够更好地了解细胞和组织样本中的结构和功能，对于生物学和遗传学的研究具有重要意义。

HE染色步骤：
事先准备好盖玻片
1.脱蜡：脱蜡二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10min
2.覆水：100%（Ⅰ、Ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5min，自来水冲洗5min×3
3.苏木精染色5min（根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间），流水冲洗。

4.5%乙酸分化1min，流水冲洗。

（用吸管滴加乙酸，布满玻片上的组织即可，分化后颜色
变浅了一些，成为蓝色）
5.返蓝：返蓝液（实验室没有，也可不用）
6.伊红染色1min（根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间），流水冲洗。

7.脱水：70%、80%、90%、100%酒精各10s，二甲苯1min（可以在通风橱自然晾干再封
片，约5min左右）
8.滴上中性树胶，封片。

（用吸管滴上一滴即可，尽量少滴，但压片后要将组织全部覆盖
完，避免中间有气泡）。

病理HE染色流程

病理HE染色流程HE染色流程主要分为固定、脱水、清理、浸透、染色、脱色、洗涤和封片几个步骤。

下面将详细介绍每个步骤的操作。

1.固定：将取得的组织标本放入含有10%中性缓冲福尔马林中固定。

固定过程中，福尔马林可与细胞内的蛋白质发生共价结合，固定细胞组织。

2.脱水：将已固定的组织标本放入连续浓度逐渐增高的乙醇溶液（通常为70%、85%和95%乙醇）中脱水，以去除组织中的水分。

每种乙醇中的时间一般为1-2小时。

3.清理：将乙醇脱水后的组织标本放入清理剂（如苯、半乳索甘和二甲苯等）中浸泡，以溶解并除去脂类物质。

清理的时间一般为2个小时。

4.浸透：将清理后的组织标本放入浸透剂（如苯乳、半乳索甘和二甲苯等）中浸泡。

浸透剂可与标本中的清理剂互溶，并在选择性的清理脂质的同时，逐渐溶解脱水的细胞质内部结构。

浸透的时间一般为2个小时。

5.染色：将浸透后的组织标本放入酸性染料和碱性染料的混合物中浸泡。

酸性染料主要染色细胞核，如黑苦味酸铁染料；碱性染料主要染色胞质，如伊红染料。

染色的时间一般为5-15分钟。

6.脱色：将染色后的组织标本放入脱色剂（如乙醇和苯）中浸泡，以去除多余的染色剂。

脱色的时间一般为1-2分钟。

7.洗涤：将脱色后的组织标本用水流洗涤，以除去余留在标本上的脱色剂和染色剂。

8.封片：将洗涤后的组织标本放入玻璃干拭片中，用透明石蜡和玻璃片封住，以保护标本并便于观察。

以上是病理HE染色的主要步骤和操作方法。

HE染色可以清晰地显示出细胞核和胞浆的形态结构，帮助病理学家对组织样本进行诊断和评估。

虽然HE染色流程简单，但操作时需要细心和耐心，以确保染色结果的准确性和可靠性。

HE染色实验步骤

HE染色实验步骤HE染色是一种常用的细胞染色方法，用于染色细胞核和胞质。

以下是HE染色实验的详细步骤：1.组织样本的固定：将组织样本（如组织切片）固定在玻片上，以使其保持形态和结构。

常见的固定剂有甲醛、乙醇等。

将切片置于固定剂中浸泡一段时间，通常为24小时。

2.脱水：将固定的组织样本进行脱水处理，以去除其中的水分。

脱水过程常采用不同浓度的乙醇溶液，从低浓度到高浓度逐渐浸泡，通常为70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇和绝对乙醇。

每个乙醇浓度的浸泡时间可以根据需要调整，但通常为2-3分钟。

3.渗透：为了使切片更容易与染料接触并吸收，需要对其进行渗透处理。

常见的渗透剂是亚麻酸，通常在乙醇浓度为90%时进行处理。

将切片放入亚麻酸中浸泡2-3分钟。

4.包埋：将渗透处理后的组织切片逐步置于熔蜡中，使其被包裹在蜡中。

可用化学品如戊二醛蜡、乙蜡等作为包埋材料。

首先，将切片置于低熔点蜡中，如55-60℃的乙蜡，浸泡30分钟至1小时。

然后，将切片置于高熔点蜡中，如60-65℃的戊二醛蜡，浸泡1小时至数小时。

5.包块切割：将包埋的组织块放在切片机中，用刀片切成薄片。

通常切片厚度为4-5μm。

切好的切片将浮在热水中，并从切片机上取出。

6.切片贴片：使用刷子将切片轻轻移至玻片上。

刷子应先浸泡在水中，然后轻轻刷过切片以避免切片损坏。

7.焙烧：将装有切片的玻片放在干燥器中，或将其放在烘箱中进行干燥。

干燥温度和时间可根据需要进行调整，通常为60-70℃，2-3小时。

8. 染色：使用Harris液体染料进行染色。

HE染色中的染料包括酸性染料苏丹Ⅰ（hematoxylin）和碱性染料伊红（eosin），也称为碱性苏丹染料。

将组织样本浸入苏丹Ⅰ染料中，时间为2-5分钟。

然后将其转移到酸性水中漂洗30秒至1分钟，以去除多余的苏丹Ⅰ染料。

接下来，将样本浸入伊红染料中，时间为1-2分钟。

最后，将样本漂洗并在流水下冲洗。

9.脱色：如果染色后的切片颜色过浓，需要进行脱色处理。

he染色步骤及注意事项

he染色步骤及注意事项一、组织固定1.组织取材后应立即进行固定，以防止组织自溶。

常用的固定剂有甲醛、乙醇等。

2.固定时应将组织放入适当的容器中，加入足够的固定剂，确保组织充分浸泡。

3.固定时间根据组织类型和大小而定，一般为数小时至数十小时。

二、切片制备1.固定后的组织需进行脱水、透明和浸蜡等处理，然后进行切片。

2.切片厚度应根据组织类型和染色需求而定，一般为3-5微米。

3.切片应平整、均匀，无皱褶、气泡等缺陷。

三、pH值调节1.在进行HE染色前，需将切片用pH值约为7.2-7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗。

2.pH值调节有助于染色过程中组织的着色和分色。

四、控制分色时间1.HE染色过程中，分色时间对染色效果影响较大。

应严格控制分色时间，确保切片染色均匀、清晰。

2.分色时间过长可能导致切片颜色过深，过短则可能使切片颜色过浅。

五、彻底脱去酒精1.在染色过程中需使用酒精进行脱水，因此染色结束后需用无水乙醇彻底脱去切片中的酒精。

2.脱去酒精有助于提高切片的透明度和染色效果。

六、保持切片湿润1.在整个染色过程中，应保持切片湿润，以防止切片干燥和收缩。

2.可以使用甘油等保湿剂来保持切片湿润。

七、封片注意事项1.染色结束后，需用中性树胶等封片剂将切片封固。

2.封片时应避免气泡和溢胶，以保证切片平整和美观。

八、洗涤步骤1.在染色过程中，需用流水将切片上的染液冲洗干净。

2.洗涤时应彻底，以防止残留染液对切片产生影响。

九、避免空气暴露1.在染色过程中，应尽量避免切片暴露在空气中，以防止氧化和褪色。

2.可以使用湿盒或塑料薄膜等将切片包裹，以减少空气接触。

十、保持切片的湿润1.在储存和运输过程中，应保持切片湿润，以防止其干燥和收缩。

2.可以使用甘油等保湿剂来保持切片湿润。

同时，应避免阳光直射和高温环境，以防止切片褪色和变质。

HE染色的步骤及方法

HE染色的步骤及方法HE染色（hematoxylin and eosin staining）是一种广泛应用于组织学研究与临床病理学中的常规染色方法，用于显示组织和细胞的形态结构、特征和组织的组织学构造。

HE染色的主要步骤包括固定、脱水、透明、浸染、洗涤、脱色、洗涤、著色、酸洗、洗涤和封片等。

下面将详细介绍每个步骤的具体方法。

1.固定：将待染的组织标本放入含有4%至10%的缓冲醛（如10%的中性缓冲醛）中固定。

固定的时间一般为24至48小时，具体时间根据组织的大小和种类而定。

2.脱水：在固定后，将组织标本转移到带有不同浓度的乙醇溶液中进行脱水。

脱水的目的是逐渐将水分从组织中溶解掉，以便更好地进行后续处理。

常用的乙醇浓度为70%、80%、95%、绝对乙醇和绝对乙醇。

3.透明：将脱水的组织标本转移到透明剂中，如苯酚、甘油等。

透明的目的是去除残留的乙醇，并将标本与石蜡相容，以便进行后续处理。

4.浸染：将透明的组织标本转移到硬化的石蜡中，通过加热使其温度达到融点，使组织与石蜡充分浸透。

通常情况下，标本需要浸染多次以确保充分浸透。

5.洗涤：将浸染好的组织放入清洁的容器中，用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除未浸透的石蜡。

6. 脱色：将洗净的组织标本放入xylene或但醇溶液中进行脱色，以去除标本中的石蜡。

脱色时间视标本的大小和种类而定，通常为30分钟至1小时。

7.再洗：将脱色的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的脱色剂。

8. 著色：将洗净的组织标本置于染色剂中进行著色。

HE染色中，常用的染色剂为血红和嗜酸性染料安伊汀（Eosin）。

组织标本一般需在血红染色剂中浸泡2至5分钟，然后脱水，再在安伊汀染色剂中浸泡2至5分钟。

也可根据需要调整具体的染色时间。

9.酸洗：将著色好的组织标本用弱酸性缓冲液进行酸洗，以去除过量的染色剂。

酸洗时间一般为几秒钟至几分钟。

10.再次洗涤：将经酸洗的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的酸洗液。

HE染色步骤

1、用颈椎脱臼法处死小鼠，75%的酒精浸泡2-3分钟，减少毛发所造成的污染。

2、将小鼠移入超净工作台内，无菌条件下，以仰卧位固定在解剖盘上。

3、用眼科镊子夹起腹股沟中线处皮肤，用眼科剪做一横切口。

用镊子捏住切口两端的皮肤朝着小鼠的尾部和头部纵向撕开皮肤，暴露腹腔膜壁，用乙醇消毒。

4、切开腹腔壁膜，用镊子夹住脾脏，并用剪子剪去与其相连的组织。

HE染色石蜡切片制作的基本过程作者：未知来源：生物秀时间：2007-12-71、取材与固定：从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。

2、脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。

再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。

3、浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。

待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。

冷却凝固成块即成。

包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。

4、切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。

切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。

5、脱蜡染色：常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。

苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。

伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。

染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。

HE染色过程是：①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。