游离氨基酸的测定实验报告3页

游离氨基酸的测定实验报告3页

实验目的：测定蛋白质水解液中游离氨基酸的含量。

实验原理：蛋白质是由若干个氨基酸通过肽键连接而成，而氨基酸是构成蛋白质的基本单元。游离氨基酸是水解蛋白质后剩余的未发生缩合反应的氨基酸，可以用二硫化二钠与氨基酸发生二级反应，并且具有荧光性质，故可以通过比色法或荧光法测定其含量。

实验步骤：

1.取约1g蛋白质水解液，加入等量的50%三硝酸溶液，使测定溶液呈红棕色。

2.将上述混合溶液蒸干，加入少量蒸馏水，使含盐量达到适宜比例。

3.将上述溶液通过20μ滤器滤过，在滤液中加入0.1%的二硫化二钠溶液。

4.加入等量的1.5N盐酸，使 pH 值降至2左右。

5.将上述混合液振荡30秒，静置10分钟，测定荧光强度或比色度。

实验结果：测量得到游离氨基酸的含量为x mg/L。

实验分析：游离氨基酸在酸性条件下可以与二硫化二钠反应生成荧光物质，故可以用荧光法或比色法进行测定。本实验采用的是荧光法，即通过荧光分光光度计测定游离氨基酸的荧光强度，再由标准曲线推算游离氨基酸的含量。需要注意的是，在测定过程中必须确保荧光试剂与游离氨基酸充分反应，否则会导致测定结果偏低。

实验结论：本实验成功测定了蛋白质水解液中游离氨基酸的含量为x mg/L，实验结果具有一定的可靠性和准确性。