兽医免疫学08.免疫学实验技术
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(2)试管凝集反应
为一种定量试验,用已知抗原检查血清中有无特异抗体, 并测定其相对含量。
1.取7只洁净小试管于管架,分别加0.5mL生理盐水。
2.在第1管中加1:10稀释血清0.5mL,混合后吸出0.5mL 毫升于第2管,同样混匀后吸出0.5mL于第3管。依次类推,稀 释到第6管,吸0.5mL弃去。第7管不加血清作为对照;
1、直接凝集试验
颗粒抗原与抗体直接结合出现凝集现象叫直接凝集反应。 (1)玻片凝集反应
1.取清洁玻片一张,用接种环分别取诊断血清、诊断血清和生理 盐水于玻片三个位置上。
2.无菌用接种环取待检细菌培养物少许,分别混合于其中第一点 诊断血清和生理盐水上。
3.同法取对照细菌培养物少许,于第二点诊断血清混匀。 4.轻轻摇动玻片,经1-2分钟后肉眼观察,出现乳白色凝集块,即 为阳性反应;仍为均匀的乳浊液,即为阴性反应。
兽医免疫学
第一章 第二章 第三章 第四章 第五章 第六章 第七章 第八章 第九章
绪论 抗原 免疫系统 抗体 非特异性免疫 特异性免疫 变态反应 免疫学实验技术 免疫学防治技术
第八章 免疫学实验技术
免疫学实验技术
是指利用免疫反应特异性的原理,建立的各种检测与分析以 及建立这些技术的各种制备方法。
包括: (1)免疫血清学技术 (2)细胞免疫学技术 (3)免疫学制备技术
2. 抗原抗体结合机理 (1) 可逆性,分子表面结合 (2) 比例适当 (3) 存在二阶段性,即结合 阶段和可见阶段
High Affinity
Ab
Ag
Low Affinity
Ab
Ag
Ag excess
Ab excess
Equivalence – Lattice formation
3. 免疫血清学反应的影响因素
3.用移液管吸取待检抗原,分别加每管0.5mL;
4.同法于第2排各管中加入伤寒O菌液0.5mL。
5.将各管振荡混匀,放37℃水浴箱中2—4小时或37℃ 孵育箱中过夜次日取出观察结果。
2、间接凝集反应 将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的颗粒载体上,然后
与相应的抗体结合,也可出现颗粒载体的凝集现象,称为间接 凝集反应。间接凝集反应比直接凝集反应敏感性为高,可用于 微量抗体或抗原的检查。
若存在共同抗原,则发生交叉反应。
• The ability of an individual Ab combining site to react with more than one antigenic determinant.
• The ability of a population of Ab molecules to react with more than one Ag
间接血凝抗原的制备可用加碱或加热的方法使菌体中的 多糖物质浸出,去除类脂以免干扰红血球的吸附作用。但如 系蛋白质时则用来吸附的红血球需先用鞣酸予以处理。
Patient
1 2 3 4 5 6 7 8
间接血凝试验
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 Pos. Neg.
Titer
64 8
512 <2 32 128 32
4
间接血凝抑制试验
Prior to Test
+
Test
+
+
Patient’s sample
(二)沉淀试验
可溶性抗原与相应抗体混合,在电解质存在下,两者比 例适合,即可有沉淀物出现,叫沉淀反应(Precipitation)。
由于沉淀反应抗原多系胶体溶液。沉淀物主要是由抗体 蛋白所组成。
如沉淀试验等; 如免疫细胞功能鉴定等; 如高免血清制备等。
第一节 免疫血清学技术
抗原与相应抗体在体内和体外均能发生特异性结合,因抗 体主要来自血清,因此在体外进行的抗原抗体反应称为血清学 反应或免疫血清学技术。
一、免疫血清学技术的类型
(1)凝聚性反应:凝集试验和沉淀试验 (2)标记抗体技术:荧光抗体技术、酶标抗体技术、放射
(一)凝集反应
当颗粒性抗原与其相应抗血清混合时,在一定浓度的电解 质环境中,抗原凝集成大小不等的凝集块,叫凝集反应。
凝集反应广泛地应用于疾病的诊断和各种抗原性质的分析。 即可用已知免疫血清来检查未知抗原,亦可用已知抗原检测特 异性抗体。
凝集试验的种类
(1)直接凝集试验: 颗粒性抗原 (2)间接凝集试验: 可溶性抗原 (3)病毒的血凝与血凝抑制试验 (4)乳胶凝集试验
间接血凝试验的分类: (1)正向间接凝集试验 (2)反向间接凝集试验 (3)间接凝集抑制试验
(1)间接血球凝集试验(间接血凝试验)
间接血球凝集试验是根据红血球表面的吸附作用而建立 起来的。将细菌可溶性抗原提出使之吸附于红血球表面,此 时红血球即称为“致敏红血球”。这种致敏的红血球具有细 菌的抗原性,与相应的抗血清相遇可产生凝集现象。
性同位素标记抗体技术、发光标记抗体技术等 (3)有补体参与的反应:如补体结合反应 (4)中和反应:如病毒中和试验、毒素中和试验 (5)免疫复合物散射技术:如激光散射免疫技术 (6)电免疫反应:如免疫传感器技术 (7)免疫转印技术:如Western Blotting
二、免疫血ห้องสมุดไป่ตู้学反应的一般特点
1. 特异性与交叉性 具有高度特异性
• The ability of an individual antibody combining site to react with only one antigenic determinant.
• The ability of a population of antibody molecules to react with only one antigen.
(1) 电解质 (2) 温度 (3) 酸碱度 (4) 振荡 (5) 杂质
三、凝聚性试验
抗原与相应抗体结合形成免疫复合物,在电解质存在下, 免疫复合物相互凝聚形成肉眼可见的凝集小块或沉淀物,以此 判定是否存在相应的抗体或抗原,称为凝聚性试验。
根据参与反应的抗原性质不同,可分为两大类: (1)凝集试验(agglutination test) 主要是颗粒性抗原参与 (2)沉淀试验(precipitation test) 主要是可溶性抗原参与